SU1454851A1 - Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину Download PDFInfo
- Publication number
- SU1454851A1 SU1454851A1 SU874263697A SU4263697A SU1454851A1 SU 1454851 A1 SU1454851 A1 SU 1454851A1 SU 874263697 A SU874263697 A SU 874263697A SU 4263697 A SU4263697 A SU 4263697A SU 1454851 A1 SU1454851 A1 SU 1454851A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- cells
- hybrid
- monoclonal antibodies
- laminin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано в диагностике опухолевых заболеваний. Целью изобретени вл етс получение штамма гибридных культивируемых клеток животньк-Rattus norvegicus, продуцирующего моноклональные антитела (МКА) к нативному ламинину, работающие в радиоиммунологическом тесте. Штамм получают гибридизацией сплено- ; цитов крысы, иммунизированной клетками мышиной тератобласТОМЫ, с клетками миеломы X63-Ag8.653. Продукци МКА на 5-й день культивировани составл ет 5-10 мкг/мл. МКА относ тс к классу IgGi-(H). Они специфически взаимодействуют с гликопротеидом базальных мембран ламинином (двум его цеп ми мол.м. 200 и 350-400 кД). Штамм культивируют на среде Игла в модификации Дульбекко с 20% змбриональной тел чьей сьшоротки, модальное число хромосом в клетках штамма 81. с SS С/)
Description
1
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано в диагностике онкологических заболеваний . .
Цель изобретени - получение штам- 5 ма гибридньпс культивируемых клеток животных Rattus norvegicus, продуцирующего моноклональные антитела (МКА) к нативному ламинину, работающие в радиоиммунологическом тесте.
Штамм получают следующим образом. - В качестве антигена используют монослойную культуру клеток мьшиной тератобластомы ТБ 3, суспендированную в забуференном физрастворе (ЗФР) с помощью м гкой резинки. Схема иммунизации: крысы линии Фишер получают . - 4 внутрибрюшинные инъекции по 2-3
«liO клеток кажда , перва - в равном объеме полного адъюванта Фрейн- да, последующие - в равном объеме не- .полного адъюванта. После первой инъекции следующую провод т через 3 недели , остальные - через 10-дневные интервалы. Последн инъекци - внутривенно , в переднюю камеру глаза, без адъюванта, в объеме 0,2 мл (5- иммунизаци ).Гибридизацию провод т на 4 день после 5-й иммунизации. Дл зтого клетки селезенки иммунных крыс (10) гибридизуют с ЗхЮ клеток мышиной миеломы X63-Ag 8.653 с помощью. 50%-ного раствора полиэтиленгликол с мол. массой 1500. Культивирование гибридных клеток ведут в 96-луночньгх Платах на предварительно посаженных
ОП
00 01
31454851
перитонеальных макрофагах мьгаш (5-8 (
иЮ клеток на лунку). Питательна среда: среда Игла в модификации Дуль- бекко (ДМЕМ) с 20% эмбриональной те- л чвей сыворотки или 10% эмбриональной т ел чьей сыворотки и 10% лошадиной сыворотки, I мМ пирувата, 10 М гипоксантина, 4) аминоптерина
Характеристика полеэного продукта. МКА относитс к классу 1вО(Г|(Н).
Специфичность - гликопротевд ба- эальных мембран ламинин. Антитела реагируют с ткан ми мыши, кролика, хом ка, человека. Метод оценки сохранени специфичности: иммунофлуорес- ценци (окрашиваютс базальные мемi n|iWCV «en 1 nno у . Т о /ЬД. 1ЧГ1Л«« « ... ч.,. .- . -
и 1, тимвдина, 100 ед/мл гент- ю бР на срезах) и радиоиммунопрециг
амицина. Гибридомы клонируют 2 раэа, высева на с макрофагами по 1 клетке. Отбор клонов осуществл ют иммунофлуоресцентным окрашиванием культур клеток ТВ 3 и криостатных срезов почки мыши. Иэ 7,00 проверенных лунок с гибрндомами культуральна Лидкость (ЮК) одной из них реагирует в иммунофлуо есце нции с куль турами ТБ 3 (фибрилл рное свечение) и ба-. эальними {ембранами почки мьппи, хом ка , кролика и человека, а в радиоим- мунопреципитационном тесте - с цельм ламинином (мол. массы 4рркП; + 200 кД). Полученный клон вывод т в массовую культуру и обозначают ЛАМ. Штамм хранитс в Специализированной коллекции перевиваемых соматических клеток позвоночных Всесоюзной коллекции клеточных культур (институт цитологии АН СССР) под номером ; ВСКК (II) f 125D и характеризуетс следующими признаками.
Культуральные признаки. Среда культивировани - среда Игла в модификации Дульбекко (ДМЕМ) -с 20% эмбриональной тел чьей сыворотки (или 10% эмбриональной тел чьей сыворотки и 10% лошадиной сьторотки), 1 мМ глутамина:, 100 ед. гентамицина в i мл. Клетки выращивают при И 5% углекислоты в атмосфере - Дл выращивани штамма можно исполь 3OBfitb стекл нную ипи пластиковую посуду. Во флакон объемом 25 см в 5 мл среды засевают 2-5x10 клеток ЛАМ. Пассаж - 1 раз в 4-5 дней той же дозой клеток. Вез подсчета клеток 1:3. Культивирование in vivo. Так как гибрвдома получен при сли нии клеток крысы и .мыши, культивирование in vivo в обычных животных невозможно.
Кариологические признаки. Модальпитаци : антитела св зывают с розой с пришитыми иммуноглобулинами кролика или козы против иммуноглобулинов крысы, инкубируют с меченным 15 аминокислотами или l лизатом мышиной те ратобластомы ТБ-24 или мьш1И- ной опухоли EHS, преципитат подвергают электрофорезу в присутствии доде- цилсульфата натри (в градиентном 20 полиакриламидном геле 5-15%), выьу- шейньй гель подвергают авторадиографии . Положительна реакци про вл етс присутствием на автографах двух меченых полос, соответствующих цеп м 25 ламинина 20Р и 350-400 кД.
Контаминаци . Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды.
30 Криоконсервирование. Клетки штамма ресуспендируют в эмбриональной те- ль чей сыворотке, содержащей 10% ди- метилсульфоксида, в концентрации х10 кл. в 1 мл, раэливают в стерильные пластиковые ампулы при 4 С и замораживают в жидком азоте по программе со снижением температуры на 1 с/мин с последующим переносом в жидкий азот. Размораживание: 1 мин 40 при . Клетки развод т в 5-10 мл пол- -ной среды, центрнфугируют при комнатной температуре 5 мин при 1000 об/мин, сливаиот среду, заливают 2 мл свежей среды и перенос т в 2 лункй 24-луноч- ной ппага с предварительно посаженными перйтойеальными макрофагами мы- Щ1(25-40 1 о клеток на лунку) . Жиз- не(гпособность клеток по включению трипанового синего составл ет 50-90%. П р й м е р 1. Кусочки почки, полученной от ев еже забито и мьш1и или от 16-20-недельного эмбриона человека при выкидыше, помещают в 7%-ный раствор желатина на ЗФР и немедленно
35
SO
нов число хромосом-81. Продуктивность. 55 штамма. Секреци моноклональных анти- хран т при -70 С. Срезы толщиной т1л на 5 день культивировани в I мл5 мкм готов т на криотоме. Фиксируют
мкг. Стабильна продукци МКА. ,5 мин в 10%-ном формалине и
сохран етс до 30 пассажей in vitro,пдательно отмьшают в ЗФР. Далее ста
Характеристика полеэного продукта. МКА относитс к классу 1вО(Г|(Н).
Специфичность - гликопротевд ба- эальных мембран ламинин. Антитела реагируют с ткан ми мыши, кролика, хом ка, человека. Метод оценки сохранени специфичности: иммунофлуорес- ценци (окрашиваютс базальные мем« « .. ч.,. .- . -
бР на срезах) и радиоиммунопрециг
бР на срезах) и радиоиммунопрециг
питаци : антитела св зывают с розой с пришитыми иммуноглобулинами кролика или козы против иммуноглобулинов крысы, инкубируют с меченным 5 аминокислотами или l лизатом мышиной те ратобластомы ТБ-24 или мьш1И- ной опухоли EHS, преципитат подвергают электрофорезу в присутствии доде- цилсульфата натри (в градиентном 0 полиакриламидном геле 5-15%), выьу- шейньй гель подвергают авторадиографии . Положительна реакци про вл етс присутствием на автографах двух меченых полос, соответствующих цеп м 5 ламинина 20Р и 350-400 кД.
Контаминаци . Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды.
0 Криоконсервирование. Клетки штамма ресуспендируют в эмбриональной те- ль чей сыворотке, содержащей 10% ди- метилсульфоксида, в концентрации х10 кл. в 1 мл, раэливают в стерильные пластиковые ампулы при 4 С и замораживают в жидком азоте по программе со снижением температуры на 1 с/мин с последующим переносом в жидкий азот. Размораживание: 1 мин 0 при . Клетки развод т в 5-10 мл пол- -ной среды, центрнфугируют при комнатной температуре 5 мин при 1000 об/мин, сливаиот среду, заливают 2 мл свежей среды и перенос т в 2 лункй 24-луноч- ной ппага с предварительно посаженными перйтойеальными макрофагами мы- Щ1(25-40 1 о клеток на лунку) . Жиз- не(гпособность клеток по включению трипанового синего составл ет 50-90%. П р й м е р 1. Кусочки почки, полученной от ев еже забито и мьш1и или от 16-20-недельного эмбриона человека при выкидыше, помещают в 7%-ный раствор желатина на ЗФР и немедленно
5
SO
55 хран т при -70 С. Срезы толщиной 5 мкм готов т на криотоме. Фиксируют
1454851
патии молочной желеэы человека. Кусочек ткани молочной желеэы, удаленный при биопсии, заливают в желатин и за мораживак1т не позднее 1 ч после операции . Далее материал обрабатывают, как указано в примере i. На срезе отмечают положительную реакцию с ба- зальными мембранами пролифератов. Эпителиальные и стромальные клетки не окрашены. Следовательно, ламинин содержитс только в составе базальнь мембран. Непрерывный характер окраши вани базальных . мембран указывает на
в т реакцию непр мой иммунофлуорес- ценции при комнатной температуре. Перва инкубаци 1 ч - КЖ клеток штамма ЛАМ. После отмывки в ЗФР вто- ра инкубаци - кроличь антисьшорот- ка к иммуноглобулинам крысы, меченна флуоресцеинизотиоцианатом в раз- ведении 1:20 после предварительного истощени .сьгеоротки печеночным порош- ю ком мьшш. Инкубаци 1 ч, затем отмывка в ЗФР. Срезы заключают в глицерин на ЗФР (1:1). Контроль - перва инкубаци с ЗФР вместо МКА.;.
Препарат исследуют в микроскопе is доброкачественную природу опухоли с флуоресцентной приставкой, отмечают свечение базальных мембран почки. При этом в клубочках почки мьши гло- мерул рные базальные мембраны слабо окрашены, в клубочках почки человека - нет. Клетки канальцев, эндотелий сосудов, строма не. окрашены, следовательно , иё содержат ламинина.
Таким образом, полученные МКА специ---.
фически вы вл ют гликопротеид базаль-25 клеток животных Rattus.norvegicus Lx мембран ламинин и не взаимодействуют ВСКК (II) № 125D, используемый дл , с-другими белками клетки. получени моноклональных антител .
Прим е р 2. Иммунолокализаци . гликопротевду базалЬных мембран ла ламинина в фиброзно-кистозноймасто- минину.
20
Приведенный пример подтверждает возможность использовани полученных МКА дл диагностики опухолевых забо леваний человека.
Форм
у л а и 3 о б р е т е
ки
Штамм гибридных культивируемых
патии молочной желеэы человека. Кусочек ткани молочной желеэы, удаленный при биопсии, заливают в желатин и за- мораживак1т не позднее 1 ч после операции . Далее материал обрабатывают, как указано в примере i. На срезе отмечают положительную реакцию с ба- зальными мембранами пролифератов. Эпителиальные и стромальные клетки не окрашены. Следовательно, ламинин содержитс только в составе базальньк мембран. Непрерывный характер окрашивани базальных . мембран указывает на
доброкачественную природу опухоли
Приведенный пример подтверждает возможность использовани полученных МКА дл диагностики опухолевых заболеваний человека.
доброкачественную природу опухоли
Форм
у л а и 3 о б р е т е
ки
рокачественную природу опухоли
--.
Штамм гибридных культивируемых
,Составитель М. Серова
Редактор Н. Киштулинец Техред М.ХрданичКорректоре. Шекмар
Заказ 7411/30
Тираж 500
ВНИИПИ Государственного кo итeтa по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-ЗЗ, Раушска наб., д. 4/5
Подписное
Claims (1)
- Формула из обретенияШтамм гибридных культивируемых клеток животных Rattus. norvegicus ВСКК (II) № 125D, используемый для получения моноклональных антител к . гликопротеиду базальных мембран ламинину.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874263697A SU1454851A1 (ru) | 1987-06-18 | 1987-06-18 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874263697A SU1454851A1 (ru) | 1987-06-18 | 1987-06-18 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1454851A1 true SU1454851A1 (ru) | 1989-01-30 |
Family
ID=21311536
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU874263697A SU1454851A1 (ru) | 1987-06-18 | 1987-06-18 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1454851A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0696597A3 (de) * | 1994-08-11 | 2002-04-17 | Hoechst Aktiengesellschaft | Monoklonale Antikörper zur selektiven immunologischen Bestimmung von hochmolekularen, intakten Lamininformen in Körperflüssigkeiten |
-
1987
- 1987-06-18 SU SU874263697A patent/SU1454851A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Lab. Invest, 1984, v. 51, p. 88. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0696597A3 (de) * | 1994-08-11 | 2002-04-17 | Hoechst Aktiengesellschaft | Monoklonale Antikörper zur selektiven immunologischen Bestimmung von hochmolekularen, intakten Lamininformen in Körperflüssigkeiten |
EP1942116A1 (de) * | 1994-08-11 | 2008-07-09 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Monoklonale Antikörper zur selektiven immunologischen Bestimmung von hochmolekularen, intakten Lamininformen in Körperflüssigkeiten |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1173379A (en) | Cell lines | |
DE60132475T2 (de) | Neue tumorassoziierte marker | |
CN103698536B (zh) | 肿瘤蛋白p185检测试剂盒 | |
SU1454851A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS,используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран ламинину | |
Orlik et al. | Modifications of hybridoma technology which improve the yield of monoclonal antibody producing cells | |
SU1458385A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных RаттUS NoRVeGIcUS, используемый дл получени моноклональных антител к гликопротеиду базальных мембран энтактину | |
JPH0717679B2 (ja) | 乳ガン細胞表面抗原に特異的なモノクロ−ナル抗体 | |
Dieckmann-Schuppert et al. | Echinococcus multilocularis: in vitro secretion of antigen by hybridomas from metacestode germinal cells and murine tumor cells | |
SU1433979A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к кератину N17 человека | |
SU1638160A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L-продуцент моноклональных антител против общего антигена клеток острого лимфобластного лейкоза | |
SU1389284A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к дифференцировочному антигену В-лимфоцитов человека | |
SU1395668A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS дл получени моноклональных антител к щелочной фосфатазе из кишечника теленка | |
RU2542381C2 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ mus musculus α-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ГРАНУЛОЦИТАРНОМУ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕМУ ФАКТОРУ (GCSF) ЧЕЛОВЕКА | |
SU1705343A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к дифференцировочному антигену @ -лимфоцитов человека | |
SU1402617A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
SU1726511A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к общим антигенным детерминантам инсулина человека и свиньи | |
RU2652885C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus α - продуцент моноклональных антител, специфичных к раково-тестикулярному антигену человека GAGE | |
SU1416509A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
SU1414870A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS ,используемый дл получени моноклональных антител к Са @ -АТФазе саркоплазматического ретикулума сердца собаки | |
SU1446156A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к гемагглютинину вируса гриппа А /Краснодар/ 101/59(Н @ N @ ) | |
SU1712410A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS - продуцент моноклонального антитела к антигену @ -клеток поджелудочной железы с мол.м. 64 КД | |
SU1497214A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклональных антител к Са @ /MG @ - зависимой эндонуклеазе клеточных дер лимфоцитов селезенки человека | |
SU1541253A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к поверхностному антигену возбудител тул ремии голарктической расы | |
SU1413132A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к митохондриальной креатинфосфокиназе человека | |
SU1445183A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к МYсовастеRIUм воVIS (BCG) |