SU1336941A3 - Способ определени креатинкиназы МВ в сыворотке крови - Google Patents
Способ определени креатинкиназы МВ в сыворотке крови Download PDFInfo
- Publication number
- SU1336941A3 SU1336941A3 SU802891744A SU2891744A SU1336941A3 SU 1336941 A3 SU1336941 A3 SU 1336941A3 SU 802891744 A SU802891744 A SU 802891744A SU 2891744 A SU2891744 A SU 2891744A SU 1336941 A3 SU1336941 A3 SU 1336941A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- group
- creatine kinase
- igg
- fragments
- determining
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/50—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving creatine phosphokinase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к способу определени активности креатинфосфо- киназы МБ (СК-МВ) в сыворотке. Цель изобретени - повышение точности определени креатинкиназы MB в сьшоротке крови. Дл этого определ ют СК-МВ иммунологическим исключением группы М и измерением группы В по известным методам дл определени креатинкиназы . Исключают Группы М в реакционной смеси из антител против группы М, добавл ют одновалентные фрагменты, полученные протеолитичес- ким расщеплением при восстанавливающих услови х.Фрагменты тормоз т не только природными антителами, которые принадлежат к IgG-фракции или к j-глобулинам и имеют молекул рную массу 130.000-210.000, но и FAB-фраг- ментами, образующимис в результате . протеолитического расщеплени , из фракции IgG или -глобулина антисыворотки к креатинкиназе ММ, при этом их предварительно обрабатывают ацет- амидом йода. 1 табл. (О СО
Description
1I
Изобретение относитс к способу определени активности креатинфос- фокиназы МБ, называемой СК-МВ, в сьшоротке.
Целью изобретени вл етс повышение точности определени креатин- киназы MB в сьшоротке крови.
Способ осуществл етс следующим образом.
Способ определени .креатинкиназы МБ в сьшоротке осуществл етс иммунологическим исключением группы М и измерением группы В по известным методам дл определени креатинкина- зы. Дл исключени группы М в реакционной смеси из антител против группы М добавл ют одновалентные фрагменты , полученные протеолитическим расщеплением при восстанавливающих услови х .
Ферменты тормоз тс не только природными антителами, которые принадлежат к IgG-фракции или к -глобулинам и имеют молекул рную массу около 130.000-210,000, но и FAB-фрагмента- ми, образующимис в результате проте олитического расщеплени .
Пример. Получение IgG-фракции .
Сьгооротка овец, которые подвергнуты иммунизации СК-ММ (мьшечный тип фермента) человека, смешивают с кристаллическим сульфатом аммони при 0-4°С и рН 7 к 1,8 М, После центрифугировани осадок раствор ют в 0,1 М ТРIS/0,15 М NaCl - буферном растворе, рН 8, и подвергают диализу относительно избыточного количества 10 мМ фосфатного буферного раствора , рН 7,1. Еще раз осветленный центрифугированием диализат нанос т на колонку, котора заполнена ДЕАЕ- целлюлозой. Содержащий протеины поток и элюат, который получсьетс с I5 мМ фосфата /1 О мМ NaC1 - буферного раствора, рН 7,1, соедин ютс и содержат более 95% чистой IgG.
Расщепление папаином.
IgG инкубируют при восстанавливающих услови х (I о мМ цистеина ) с 1,5% папаина (мас.% в пересчете на количество lgG-протеина) при рН 7,5 свьше 5 ч при 37 С..В конце фазы инкубации воздействие фермента прекращаетс избытком ацетамида иода и дл алкилировани свободных SH-групп провод т 2 ч инкубацию при рН 7,5 при комнатной температуре.
0
5
5
0
5
0
5
0
5
Стабилизированна смесь расщеплени содержит FAB-фрагменты, F, -фрагменты и 10% нерасщепленной IgG. Быход иммунореакционной способности составл ет более 75%.
Очистка FAB-фрагментов.
После концентрации до 30 мг/мл ультрафильтрованием смесь расщеплени раздел ют методом гель-хроматографии . FAB-фрагменты элюируют как последний протеиновый пик, хорошо отделенный от IgG и F - фрагментов. FAB-фракци после концентрировани ультрафильтрованием может примен тьс непосредственно дл торможени СК-ММ или СК-МВ (мозговой тип). Торможение СК-МБ (гибридный тип) составл ет в рамках предела погрешности 50%. Торможение СК-ММ составл ет 99-100%.
П р и М е р 2. Получение фракции -глобулина нз плазмы овцы.
Цитратную плазму овец, которые подвергались иммунизации с СК-ММ в течение 4-6 мес цев, разбавл ют 25 мМ хлористого кальци и став т приблизительно на 2 ч при комнатноР температуре дл коагул ции. После механического дроблени коагул та разбавл ют 1 объемом физиологического NaC1-раствора и смешивают дл адсорбции липопротеина с 2% силикатного коагул нта (аэрозил).
Центрифугированием получаетс прозрачный верхний слой. Из верхнего сло при 0-4°С и при рН 7 осаждаетс при помощи 1,8 М сульфата аммони фракции - -глобулина и собираетс центрифугированием. Диализом относительно 50 мМ ТРIS/0,1 М NaCl- буферного раствора, рН 7,5, и концентрацией ультрафильтрованием получают пригодный дл расщеплени ферментами препарат антител.
Расщепление папаином.
Работают по 1 , но проводитс некотора модификаци дл фракции -у-глобулина. 1,5% папаина относ тс в 1 г протеина фракции -глобулина, а врем инкубации составл ет 20 ч при 25°С. Остальные услови одинаковы.
Очистка FAB-фракции.
Алкилированна смесь расщеплени подвергаетс диализу относительно физиологического раствора хлористого натри , затем смешиваетс с 25 мМ сульфата цинка. В результате этого
осаждаютс остатки нерасщепленных IgG и FJ.-фрагментов и отдел ютс центрифугированием. Остающиес FAB-фрагменты после диализа и концентрации готовы дл применени в СК-МВ-тесте. Выход составл ет более 80% тормоз щей активности дл СК- ММ-изофермента в пересчете на исходную плазму. СК-МВ тормозитс на 50% независимо от величины торможени дл нерасщепленных антител.
В таблице показаны результаты, полученные с различными сьшоротками.
Предлагаемый способ позвол ет по сравнению с известным, в котором тормоз СК-ММ полностью и СК-МВ на 60-90%, получать одновалентные фрагменты (FAB-фрагменты), которые тормоз т .СК-ММ, а СК-МВ тормоз т в рамках предела погрешности только до 50%. В результате становитс возможным примен ть полученные от соответствующих подопытных животных(овцы, кролика , курицы и т.п.) антисьюоротки дл определени СК-МВ, не выдел предварительно св занными с затратаРедактор И.Шулла
Составитель Г.Крюкова Техред Л.Сердюкова Корректор В.Бут га
Заказ 4057/59 Тираж 594Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раущска наб., д.4/5
Производственно-полиграфическое предпри тие, г.Ужгород, ул. Проектна , 4
.
1336941
ми аналитическими методами т.ех антисывороток , которые тормоз т СК-МВ приблизительно более чем на 53%. Возможно расщепл ть сьгооротки без предществующего определени их тормоз щих свойств протеолитическим путем при восстанавливающих услови х и исключать затем специфически с 10 фрагментами расщеплени группу М СК независимо от того, имеютс ли в мьщ1ечном ферменте СК-ММ или в гибридном ферменте СК-МВ.
Claims (1)
15Формулаизобретени
Способ определени креатинкиназы MB в сьшоротке крови путем обработки ее антителами к креатинкиназе ММ, отличающийс тем, что, с целью повьщ1ени точности определени , в качестве антител используют одновалентные фрагменты F-AB, вьще- л емые из фракции IgG или у-глобулина антисьторотки к креатинкиназе ММ, при этом их предварительно обрабатывают ацетамидом йода.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2908053A DE2908053C2 (de) | 1979-03-02 | 1979-03-02 | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Creatinkinase MB |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1336941A3 true SU1336941A3 (ru) | 1987-09-07 |
Family
ID=6064229
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU802891744A SU1336941A3 (ru) | 1979-03-02 | 1980-02-29 | Способ определени креатинкиназы МВ в сыворотке крови |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4330620A (ru) |
| EP (1) | EP0015508B1 (ru) |
| JP (1) | JPS5820274B2 (ru) |
| AR (1) | AR219440A1 (ru) |
| AT (1) | ATE263T1 (ru) |
| AU (1) | AU515930B2 (ru) |
| CA (1) | CA1160942A (ru) |
| CS (1) | CS226407B2 (ru) |
| DD (1) | DD149421A5 (ru) |
| DE (2) | DE2908053C2 (ru) |
| DK (1) | DK154459C (ru) |
| ES (1) | ES488774A1 (ru) |
| FI (1) | FI72145C (ru) |
| HU (1) | HU181684B (ru) |
| IE (1) | IE49158B1 (ru) |
| SU (1) | SU1336941A3 (ru) |
| YU (1) | YU42965B (ru) |
| ZA (1) | ZA801158B (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4614712A (en) * | 1983-02-25 | 1986-09-30 | The Upjohn Company | Immunoassays with luciferase labeled ligands or receptors |
| CA1260828A (en) * | 1983-07-04 | 1989-09-26 | Masakazu Iwai | Therapeutic and prophylactic agent for gastrointestinal ulcers |
| JPS60125565A (ja) * | 1983-12-12 | 1985-07-04 | Amano Pharmaceut Co Ltd | エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法 |
| US4810639A (en) * | 1985-12-20 | 1989-03-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoassay for CK-MB using bound and soluble antibodies |
| JPS63131065A (ja) * | 1986-11-20 | 1988-06-03 | Yatoron:Kk | 抗体の精製法とアイソザイムの測定法及び試薬 |
| CN110133265B (zh) * | 2019-06-10 | 2022-03-15 | 天津市宝坻区人民医院 | 血清中肌酸激酶试剂盒及测定方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2128670B2 (de) * | 1971-06-09 | 1977-06-30 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Immunologische isoenzym-bestimmungsmethode |
| US4001088A (en) * | 1974-08-02 | 1977-01-04 | Antonik Alan S | Method for the determination of creatine phosphokinase enzyme |
| DE2548963C3 (de) * | 1975-11-03 | 1982-03-11 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und Mittel zur Bestimmung der Aktivität von Creatinkinase-MB |
| DE2548962C2 (de) * | 1975-11-03 | 1985-11-21 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Antikörper gegen die Untereinheit M von Creatinkinase-Isoenzymen |
| JPS5344622A (en) * | 1976-09-30 | 1978-04-21 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
| DE2828658C3 (de) * | 1978-06-29 | 1981-10-22 | Lkb-Produkter Ab, Stockholm | Verfahren zur photometrischen Bestimmung der Untereinheit B der Creatinkinase und Reagens hierfür |
-
1979
- 1979-03-02 DE DE2908053A patent/DE2908053C2/de not_active Expired
-
1980
- 1980-02-05 IE IE221/80A patent/IE49158B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-11 CS CS80907A patent/CS226407B2/cs unknown
- 1980-02-13 AU AU55496/80A patent/AU515930B2/en not_active Expired
- 1980-02-14 DK DK063680A patent/DK154459C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-02-20 ES ES488774A patent/ES488774A1/es not_active Expired
- 1980-02-26 AR AR280091A patent/AR219440A1/es active
- 1980-02-27 FI FI800577A patent/FI72145C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-02-27 CA CA000346572A patent/CA1160942A/en not_active Expired
- 1980-02-27 DD DD80219298A patent/DD149421A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-28 AT AT80100995T patent/ATE263T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-28 DE DE8080100995T patent/DE3060050D1/de not_active Expired
- 1980-02-28 EP EP80100995A patent/EP0015508B1/de not_active Expired
- 1980-02-28 YU YU542/80A patent/YU42965B/xx unknown
- 1980-02-28 US US06/125,318 patent/US4330620A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-02-29 SU SU802891744A patent/SU1336941A3/ru active
- 1980-02-29 JP JP55024219A patent/JPS5820274B2/ja not_active Expired
- 1980-02-29 HU HU80475A patent/HU181684B/hu unknown
- 1980-02-29 ZA ZA00801158A patent/ZA801158B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU515930B2 (en) | 1981-05-07 |
| IE800221L (en) | 1980-09-02 |
| ES488774A1 (es) | 1980-09-16 |
| JPS55120797A (en) | 1980-09-17 |
| AU5549680A (en) | 1981-03-12 |
| IE49158B1 (en) | 1985-08-07 |
| US4330620A (en) | 1982-05-18 |
| EP0015508B1 (de) | 1981-09-30 |
| FI72145B (fi) | 1986-12-31 |
| YU54280A (en) | 1984-10-31 |
| DK63680A (da) | 1980-09-03 |
| YU42965B (en) | 1989-02-28 |
| HU181684B (en) | 1983-11-28 |
| ZA801158B (en) | 1981-03-25 |
| DK154459B (da) | 1988-11-14 |
| FI72145C (fi) | 1987-04-13 |
| DE2908053C2 (de) | 1982-08-19 |
| CS226407B2 (en) | 1984-03-19 |
| JPS5820274B2 (ja) | 1983-04-22 |
| DE2908053A1 (de) | 1980-09-11 |
| DD149421A5 (de) | 1981-07-08 |
| DE3060050D1 (en) | 1981-12-10 |
| CA1160942A (en) | 1984-01-24 |
| DK154459C (da) | 1989-05-22 |
| EP0015508A1 (de) | 1980-09-17 |
| AR219440A1 (es) | 1980-08-15 |
| FI800577A (fi) | 1980-09-03 |
| ATE263T1 (de) | 1981-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jockers-Wretou et al. | Quantitation of creatine kinase isoenzymes in human tissues and sera by an immunological method | |
| Oertel et al. | Production of a specific antiserum to rat brain glutamic acid decar☐ ylase by injection of an antigen-antibody complex | |
| Rudikoff et al. | Crystals of phosphorylcholine-binding Fab-fragments from mouse myeloma proteins: preparation and x-ray analysis | |
| Fechheimer et al. | Phosphorylation of lymphocyte myosin catalyzed in vitro and in intact cells. | |
| US4012285A (en) | Analysis of isoenzyme patterns | |
| US4366242A (en) | Method and agent for the immunological determination of enzymes | |
| Väänänen et al. | Purification and localization of human carbonic anhydrase: III. Typing of skeletal muscle fibers in paraffin embedded sections | |
| US4334018A (en) | Process and reagent for the determination of prothrombin | |
| SU1336941A3 (ru) | Способ определени креатинкиназы МВ в сыворотке крови | |
| CA1176561A (en) | Immunochemical assay for an enzyme | |
| EP0142634A1 (en) | Method and reagent for use in the assay of PIVKA-II | |
| Sakamoto et al. | Mouse bone collagenase: purification of the enzyme by heparin-substituted Sepharose 4B affinity chromatography and preparation of specific antibody to the enzyme | |
| Schrohenloher | The degradation of human γ-globulin by trypsin | |
| Bray et al. | Argininosuccinase from bovine kidney: comparison of catalytic, physical, and chemical properties with the enzyme from bovine liver | |
| EP0190711B1 (en) | Monoclonal antibodies to tissue plasminogen activator derived from human normal cells | |
| Kumpulainen et al. | Immunohistochemical demonstration of carbonic anhydrase | |
| Kahn et al. | Pyruvate kinase isozymes in man: II. L type and erythrocyte-type isozymes. Electrofocusing and immunologic studies | |
| Penn et al. | Myosin from normal and dystrophic human muscle: Immunochemical and electrophoretic studies | |
| Thorpe et al. | Studies on papain produced subunits of human γG-globulins—I: Physicochemical and immunochemical properties of γG-globulin Fc-fragments | |
| JPS58183098A (ja) | アイソザイム分別定量法 | |
| Cummings et al. | Atypical γ1A-globulin with the electrophoretic properties of an α2-globulin occurring in multiple myeloma | |
| Morin | Creatine kinase isoenzyme--antibody reactions in immuno-inhibition and immunonephelometry. | |
| Suld et al. | Immunological Studies on Guinea Pig Serum and Liver l-Asparaginases: PURIFICATION OF l-ASPARAGINASES BY ANTIBODY PRECIPITATION | |
| Goldmann et al. | γ-Glutamyltranspeptidase activity in newborn rat kidney brush border | |
| US5177020A (en) | Method for the immunological determination of heparan sulfate-proteoglycan and process for the preparation and purification of heparan sulfate-proteoglycan suitable for this purpose from tissues containing basal membrane |