JPS60125565A - エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法 - Google Patents
エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法Info
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- JPS60125565A JPS60125565A JP23400383A JP23400383A JPS60125565A JP S60125565 A JPS60125565 A JP S60125565A JP 23400383 A JP23400383 A JP 23400383A JP 23400383 A JP23400383 A JP 23400383A JP S60125565 A JPS60125565 A JP S60125565A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、エノラーゼサブユニット量の分別定量法に関
する。更に詳しくは、エノラーゼアイソザイムを構成し
ているサブユニットに対する抗体であって、かつ同時に
、エノラーゼアイソザイムの該サブユニットに由来する
活性を特異的に阻害する性質を有するものを用いる検液
中のエノラーゼサブユニット量の分別定量法に関する。
する。更に詳しくは、エノラーゼアイソザイムを構成し
ているサブユニットに対する抗体であって、かつ同時に
、エノラーゼアイソザイムの該サブユニットに由来する
活性を特異的に阻害する性質を有するものを用いる検液
中のエノラーゼサブユニット量の分別定量法に関する。
エノラーゼ（ＥＣ４，２，１，１１）は、２−ホスホグ
リセリン酸コボスホエノールピルビン酸の反応を触媒す
る酵素で２量体構造を持ち、分子量約４０，０００〜ｓ
ｏ、ｏｏｏの３種類のサブユニット（α。
リセリン酸コボスホエノールピルビン酸の反応を触媒す
る酵素で２量体構造を持ち、分子量約４０，０００〜ｓ
ｏ、ｏｏｏの３種類のサブユニット（α。
β、Ｔ）よりなる異性体αα型、αβ型、ββ型、αγ
型、γＴ型が存在する〔フレンチャーら（Ｌ。
型、γＴ型が存在する〔フレンチャーら（Ｌ。
Ｆｌｅｔｃｈｅｒ ａｔ ａｌ ） 、バイオチミカ・
エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、Δｃｔａ）第４５２巻、２４２〜２５２
頁（１９７６年））。
エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、Δｃｔａ）第４５２巻、２４２〜２５２
頁（１９７６年））。
このうちＴγ型及びαγ型のようなγサブユニットを持
つエノラーゼアイソザイムは神経組織特異的エノラーゼ
（ｎｅｕｒｏｎ−ｓｐｅｃＨｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ＋以
下ＮＳＥと略す。）と呼ばれ、神経細胞体、軸索、シナ
プスに主に存在しており、ββ型及びαβ型のようなβ
サブユニットを持つエノラーゼアイソザイムは筋肉組織
特異的エノラーゼ（ｍｕｓｃｌｅ−ｓｐｅ−ｃｉｆｉｃ
ｅｎｏｌａｓｃ、＋以下ＭＳＥと略す。）と呼ばれ、
骨格筋及び心筋に広く存在している。
つエノラーゼアイソザイムは神経組織特異的エノラーゼ
（ｎｅｕｒｏｎ−ｓｐｅｃＨｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ＋以
下ＮＳＥと略す。）と呼ばれ、神経細胞体、軸索、シナ
プスに主に存在しており、ββ型及びαβ型のようなβ
サブユニットを持つエノラーゼアイソザイムは筋肉組織
特異的エノラーゼ（ｍｕｓｃｌｅ−ｓｐｅ−ｃｉｆｉｃ
ｅｎｏｌａｓｃ、＋以下ＭＳＥと略す。）と呼ばれ、
骨格筋及び心筋に広く存在している。
又、αα型のようなαサブユニットのみからなるαα型
エノラーゼアイソザイムは非神経性エノラーゼ（ｎｏｎ
−ｎｅｕｒｏｎａｌ ｅｎｏｌａｓｅ＋以下ＮＮＥと略
す。）と呼ばれ、全身にわたって広く分布することが明
らかにされている。
エノラーゼアイソザイムは非神経性エノラーゼ（ｎｏｎ
−ｎｅｕｒｏｎａｌ ｅｎｏｌａｓｅ＋以下ＮＮＥと略
す。）と呼ばれ、全身にわたって広く分布することが明
らかにされている。
更に各種エノラーゼアイソザイムの生体中での分布に関
して以下の如き知見も得られている。
して以下の如き知見も得られている。
即ちＮＳＥは、神経組織ではその可溶性蛋白の１％を占
め、又神経内分泌細胞などの神経組織に起源を有する細
胞及びそれから発生する腫瘍細胞中にもＮＳＥが存在す
ることが確認され、これら神経組織の損傷あるいはそれ
ら腫瘍細胞の崩壊によりＮＳＥが体液（血液、脳を髄液
など）に漏出してくることが確認されている。骨格筋及
び心筋に存在するＭＳＥは筋ジストロフィー、急性心筋
梗塞患者の血液中で著しく高くなることが報告され、こ
のことはＭＳＥがこれら筋疾患の血中マーカーとして有
用であることを示唆している。以上のことから体液中の
エノラーゼサブユニットを個々に定量することはそれら
エノラーゼサブユニットの高濃度分布組織の損傷、疾患
及び癌、腫瘍の診断法として有用である。
め、又神経内分泌細胞などの神経組織に起源を有する細
胞及びそれから発生する腫瘍細胞中にもＮＳＥが存在す
ることが確認され、これら神経組織の損傷あるいはそれ
ら腫瘍細胞の崩壊によりＮＳＥが体液（血液、脳を髄液
など）に漏出してくることが確認されている。骨格筋及
び心筋に存在するＭＳＥは筋ジストロフィー、急性心筋
梗塞患者の血液中で著しく高くなることが報告され、こ
のことはＭＳＥがこれら筋疾患の血中マーカーとして有
用であることを示唆している。以上のことから体液中の
エノラーゼサブユニットを個々に定量することはそれら
エノラーゼサブユニットの高濃度分布組織の損傷、疾患
及び癌、腫瘍の診断法として有用である。
従来エノラーゼの測定法としては、２−ホスホグリセリ
ン酸を基質とした生化学的方法が主に行われているが、
この方法では個々のエノラーゼサブユニットの分別定量
は不可能である。又、近年特異抗体を用いたラジオイム
ノアッセイ法（ＲＩＡ〉やエンザイムイムノアソセイ法
（ＥＩＡ）が開発されたが、ＲＩ’Ａ法は放射性同位元
素を使用するため特別な施設、設備を必要とすること、
及び使用するアイソトープの半減期が短く安定性の低い
点が問題であり、ＲＩＡ法では操作が繁雑で難しく、測
定時間も長いという欠点がある。従ってＲＩＡ法、ＲＩ
Ａ法にかわる簡便なエノラーゼサブユニット量の定量法
がめられていた。
ン酸を基質とした生化学的方法が主に行われているが、
この方法では個々のエノラーゼサブユニットの分別定量
は不可能である。又、近年特異抗体を用いたラジオイム
ノアッセイ法（ＲＩＡ〉やエンザイムイムノアソセイ法
（ＥＩＡ）が開発されたが、ＲＩ’Ａ法は放射性同位元
素を使用するため特別な施設、設備を必要とすること、
及び使用するアイソトープの半減期が短く安定性の低い
点が問題であり、ＲＩＡ法では操作が繁雑で難しく、測
定時間も長いという欠点がある。従ってＲＩＡ法、ＲＩ
Ａ法にかわる簡便なエノラーゼサブユニット量の定量法
がめられていた。
そこで本発明者らは、簡便なエノラーゼサブユニット量
の分別定量法をめて鋭意検討した結果、エノラーゼアイ
ソザイムを構成しているサブユニットに対する抗体であ
ると同時に、エノラーゼアイソザイムの該サブユニット
に由来する活性を特異的に阻害する性質を有する抗体の
１種又は２種組み合わせたものをエノラーゼ含有液に作
用せしめてエノラーゼ活性を測定し、作用後における減
少したエノラーゼ活性又は残存エノラーゼ活性より検液
中の個々のエノラーゼサブユニット量が簡単かつ短時間
に分別定量できることを知り、本発明を完成したもので
ある。
の分別定量法をめて鋭意検討した結果、エノラーゼアイ
ソザイムを構成しているサブユニットに対する抗体であ
ると同時に、エノラーゼアイソザイムの該サブユニット
に由来する活性を特異的に阻害する性質を有する抗体の
１種又は２種組み合わせたものをエノラーゼ含有液に作
用せしめてエノラーゼ活性を測定し、作用後における減
少したエノラーゼ活性又は残存エノラーゼ活性より検液
中の個々のエノラーゼサブユニット量が簡単かつ短時間
に分別定量できることを知り、本発明を完成したもので
ある。
エノラーゼの３種のサブユニット（α、β、Ｔ）に対す
る抗体は以下のように調製することができる。まず大脳
よりαα型、ｏｔｉ型、及びｒｒ型エノラーゼを、筋肉
よりββ型及びαβ型エノラーゼを単離精製した。これ
らのエノラーゼアイソザイムはイオン交換クロマト、疎
水結合クロマト、水素結合クロマト、ゲルろ適法、等電
点分画法等を組み合わせた方法により精製することがで
きる。
る抗体は以下のように調製することができる。まず大脳
よりαα型、ｏｔｉ型、及びｒｒ型エノラーゼを、筋肉
よりββ型及びαβ型エノラーゼを単離精製した。これ
らのエノラーゼアイソザイムはイオン交換クロマト、疎
水結合クロマト、水素結合クロマト、ゲルろ適法、等電
点分画法等を組み合わせた方法により精製することがで
きる。
本発明者らはαα型、αγ型及びｒｒ型エノラーゼは脳
からの酸性蛋白の系統的分離法、即ちブチルセファロー
スによる疎水結合クロマト、Ｔｏｙ。
からの酸性蛋白の系統的分離法、即ちブチルセファロー
スによる疎水結合クロマト、Ｔｏｙ。
Ｐｅａｒｌ ＨＷ５５による水素結合クロマト、セファ
ロース６Ｂによるゲルろ過により同時に効率よく精製す
ることができた。ββ型及びαβ型エノラーゼは筋肉か
らＣＭ−セファデックスによるイオン交換クロマト、硫
安分画く４０〜８０％飽和）、ＤＥＡＥ−セファデック
スによるイオン交換クロマト及ヒ再度のＣＭ−セファデ
ックスによるイオン交換クロマトにより精製することが
できた。
ロース６Ｂによるゲルろ過により同時に効率よく精製す
ることができた。ββ型及びαβ型エノラーゼは筋肉か
らＣＭ−セファデックスによるイオン交換クロマト、硫
安分画く４０〜８０％飽和）、ＤＥＡＥ−セファデック
スによるイオン交換クロマト及ヒ再度のＣＭ−セファデ
ックスによるイオン交換クロマトにより精製することが
できた。
α、β、Ｔサブユニットそれぞれに対する多クローン抗
体はまず、調製したαα型、ββ型、ＴＴ型エノラーゼ
をコンプリートフロインドアシュバンドと混合して哺乳
動物に免疫することにより抗αα、抗ββ、抗Ｔγ抗体
を調製した。使用する哺乳動物としてはマウろ、ラット
、ウサギ、モルモット、ヤギ、ウマが可能であるが、本
発明者らは研究に適したウサギを使用した。αα型、β
β型、γγ型エノラーゼを１回につき１■、２週間に１
度、２ケ月間免疫することにより特異的な抗体を作製す
ることができる。
体はまず、調製したαα型、ββ型、ＴＴ型エノラーゼ
をコンプリートフロインドアシュバンドと混合して哺乳
動物に免疫することにより抗αα、抗ββ、抗Ｔγ抗体
を調製した。使用する哺乳動物としてはマウろ、ラット
、ウサギ、モルモット、ヤギ、ウマが可能であるが、本
発明者らは研究に適したウサギを使用した。αα型、β
β型、γγ型エノラーゼを１回につき１■、２週間に１
度、２ケ月間免疫することにより特異的な抗体を作製す
ることができる。
以上の操作によって得られた抗αα、抗ββ、抗γγ抗
体１ｇＧからのα、β、Ｔサブユニットそれぞれに対す
る特異抗体ＩｇＧの調製は次のようにして行うことがで
きる。
体１ｇＧからのα、β、Ｔサブユニットそれぞれに対す
る特異抗体ＩｇＧの調製は次のようにして行うことがで
きる。
抗αサブユニット抗体１ｇＧはαα型エノラーゼを固定
化したセファロース４Ｂカラムに抗αα抗体１ｇＧを流
すことによりカラムに吸着した。
化したセファロース４Ｂカラムに抗αα抗体１ｇＧを流
すことによりカラムに吸着した。
抗βサブユニット抗体１ｇＧはββ型エノラーゼを固定
化したセファロース４Ｂカラムに抗ββ抗体を流すこと
によりカラムに吸着した。抗αサブユニット抗体１ｇＧ
はＴγ型エノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカラ
ムに抗γＴ抗体を流すことによりカラムに吸着した。そ
れぞれのカラムに吸着したα、β、Ｔサブユニットに対
する抗体１ｇＧは、ｐＨ２，５グリシン−ＨＣｌバッフ
ァーによりカラムから溶出することができる。これら得
られた抗体１ｇＧは更にペプシン消化によ’Ｑ Ｆ （
ａｂ’）ｚ画分を得ることができる。
化したセファロース４Ｂカラムに抗ββ抗体を流すこと
によりカラムに吸着した。抗αサブユニット抗体１ｇＧ
はＴγ型エノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカラ
ムに抗γＴ抗体を流すことによりカラムに吸着した。そ
れぞれのカラムに吸着したα、β、Ｔサブユニットに対
する抗体１ｇＧは、ｐＨ２，５グリシン−ＨＣｌバッフ
ァーによりカラムから溶出することができる。これら得
られた抗体１ｇＧは更にペプシン消化によ’Ｑ Ｆ （
ａｂ’）ｚ画分を得ることができる。
α、β、γの３種のサブユニットに対する単クローン抗
体は次のような方法で調製することができる。即ち精製
されたαα型、ββ型、γγ型エノラーゼをコンプリー
トフロインドアシュバンドと混合し、マウスに免疫し抗
体産生が認められたマウスの肺臓細胞とマウスミエロー
マ細胞の融合によりハイブリドーマを得ることができる
。抗体産生ハイブリドーマをスクリーニングによって確
認後、マウス腹腔に移植し、増殖させた後腹水を採取す
る。
体は次のような方法で調製することができる。即ち精製
されたαα型、ββ型、γγ型エノラーゼをコンプリー
トフロインドアシュバンドと混合し、マウスに免疫し抗
体産生が認められたマウスの肺臓細胞とマウスミエロー
マ細胞の融合によりハイブリドーマを得ることができる
。抗体産生ハイブリドーマをスクリーニングによって確
認後、マウス腹腔に移植し、増殖させた後腹水を採取す
る。
単クローン抗体は腹水を硫安分画（５０％飽和）、ＤＥ
ＡＥ−セルロース又はプロティンＡセファロースカラム
クロマトにより高度に純化されたＩｇＧ画分を得ること
ができる。
ＡＥ−セルロース又はプロティンＡセファロースカラム
クロマトにより高度に純化されたＩｇＧ画分を得ること
ができる。
抗体産生ハイブリドーマからのα、β、γサブユニット
に対する特異抗体はハイブリドーマをマウス腹腔に移植
後の腹水を多クローン抗体の場合と同様、ホモダイマー
型のエノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカラムを
用いて調製した。
に対する特異抗体はハイブリドーマをマウス腹腔に移植
後の腹水を多クローン抗体の場合と同様、ホモダイマー
型のエノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカラムを
用いて調製した。
エノラーゼ活性測定系へのこれら抗体の添加はＩ ｇ
Ｇ、Ｆ （ａｂ’）２とどの両分でも有効であった。
Ｇ、Ｆ （ａｂ’）２とどの両分でも有効であった。
抗体を測定系に添加することによるエノラーゼ各サブユ
ニット量のめ方は以下のようにして行った。αサブユニ
ット量は測定系に抗α多クローン抗体又は抗α多クロー
ン抗体を添加した時の抗体により阻害されたエノラーゼ
活性の減少から又は抗β及び抗γ多クローン抗体、抗β
及び抗γ単クローン抗体を測定系に同時に添加した時の
残存活性からめることができた。同様にβサブユニツト
量は抗β多クローン抗体、又は抗α多クローン抗体添加
によるエノラーゼ活性の減少から、あるいは抗α及び抗
γ多クローン抗体、抗α及び抗γ単クローン抗体を同時
に添加した時の残存活性からめることができた。γサブ
ユニット量は抗α多クローン抗体、又は抗α多クローン
抗体添加によるエノラーゼ活性の減少から、あるいは抗
α及び抗β多クローン抗体、抗α及び抗α多クローン抗
体を同時に添加した時の残存活性からめることができた
。
ニット量のめ方は以下のようにして行った。αサブユニ
ット量は測定系に抗α多クローン抗体又は抗α多クロー
ン抗体を添加した時の抗体により阻害されたエノラーゼ
活性の減少から又は抗β及び抗γ多クローン抗体、抗β
及び抗γ単クローン抗体を測定系に同時に添加した時の
残存活性からめることができた。同様にβサブユニツト
量は抗β多クローン抗体、又は抗α多クローン抗体添加
によるエノラーゼ活性の減少から、あるいは抗α及び抗
γ多クローン抗体、抗α及び抗γ単クローン抗体を同時
に添加した時の残存活性からめることができた。γサブ
ユニット量は抗α多クローン抗体、又は抗α多クローン
抗体添加によるエノラーゼ活性の減少から、あるいは抗
α及び抗β多クローン抗体、抗α及び抗α多クローン抗
体を同時に添加した時の残存活性からめることができた
。
エノラーゼの活性は、例えば次の方法により測定するこ
とができる。
とができる。
まず基質である２−ホスホグリセリン酸にエノラーゼを
作用させ生じたホスホエノールピルビン酸とアデノシン
−２−リン酸よりピルビン酸キナーゼの作用によりピル
ビン酸とアデノシン−３−リン酸を生じさせる。
作用させ生じたホスホエノールピルビン酸とアデノシン
−２−リン酸よりピルビン酸キナーゼの作用によりピル
ビン酸とアデノシン−３−リン酸を生じさせる。
上記の反応によって生じたピルビン酸又はＡＴＰは以下
の方法で定量できる。
の方法で定量できる。
ピルビン酸は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド（ＮＡＤＨ）との共存下、乳酸脱水素酵素によりＬ
−乳酸と酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤ＋）に変換し、この際減少したＮＡＤＨ量を３
４０ｎｍの吸光度によりめることができる。又ピルビン
酸オキシダーゼを用いて生成したＨ２Ｏ２をパーオキシ
ダーゼで検出することもできる。
チド（ＮＡＤＨ）との共存下、乳酸脱水素酵素によりＬ
−乳酸と酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤ＋）に変換し、この際減少したＮＡＤＨ量を３
４０ｎｍの吸光度によりめることができる。又ピルビン
酸オキシダーゼを用いて生成したＨ２Ｏ２をパーオキシ
ダーゼで検出することもできる。
ＡＴＰは、ＡＴＰとグルコースからヘキソキナーゼによ
りグルコース−６−リン酸を生成せしめ、続いて生じた
グルコース−６−リン酸と酸化型ニコヂンアミドアデニ
ンジヌクレオヂドリン酸（ＮＡＤＰ＋）からグルコース
−６−リン酸と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）を生成させ、増加したＮ
Ａ Ｄ Ｐ Ｈを３４０ｎｍの吸光度からめることがで
きる。
りグルコース−６−リン酸を生成せしめ、続いて生じた
グルコース−６−リン酸と酸化型ニコヂンアミドアデニ
ンジヌクレオヂドリン酸（ＮＡＤＰ＋）からグルコース
−６−リン酸と還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）を生成させ、増加したＮ
Ａ Ｄ Ｐ Ｈを３４０ｎｍの吸光度からめることがで
きる。
又、ＡＴＰとルシフェリンからルシフェラーゼによりア
デニルルシフェリンとビロリン酸を、続いて生じたアデ
ニルルシフェリンが酸素により酸化された結果化じた螢
光を測定することもできる。
デニルルシフェリンとビロリン酸を、続いて生じたアデ
ニルルシフェリンが酸素により酸化された結果化じた螢
光を測定することもできる。
以上のことから、本発明により測定操作は従来の生化学
的実験法と同様簡単を感度も高く、測定時間も短く、更
に加えてエノラーゼアイソザイムのα、β、γの３種の
サブユニット量が個々に測定できるようになったことは
大きな利点である。
的実験法と同様簡単を感度も高く、測定時間も短く、更
に加えてエノラーゼアイソザイムのα、β、γの３種の
サブユニット量が個々に測定できるようになったことは
大きな利点である。
今までＲＩＡ、ＥＩＡといった繁雑な操作に加え、長時
間を要したエノラーゼアイソザイムのサブユニット量の
測定が簡単に行なえるようになったことは、今後体液中
の個々のサブユニット量を測定することにより、それぞ
れのサブユニットを持つエノラーゼアイソザイムが高濃
度に分布する組織疾患等の早期診断等に大いに役立つも
のと思われる。
間を要したエノラーゼアイソザイムのサブユニット量の
測定が簡単に行なえるようになったことは、今後体液中
の個々のサブユニット量を測定することにより、それぞ
れのサブユニットを持つエノラーゼアイソザイムが高濃
度に分布する組織疾患等の早期診断等に大いに役立つも
のと思われる。
以下に実施例にて詳細に説明する。
実施例１
（１）αα型、αβ型、ββ型、αγ型、γγ型エノラ
ーゼの精製 αα型、αγ型、γγ型エノラーゼは脳からの系統的分
離法に従い、まず脳油出液をブチルセファロースカラム
にアプライした。αα型エノラーゼは未吸着画分として
、αγ型エノラーゼは１００１のＮａＣ１により、ββ
型エノラーゼは２１０ｍＭのＮａＣ１によりカラムから
溶出した。αα型、αγ型、γγ型エノラーゼ画分は続
いて硫安分画、Ｔｏｙ。
ーゼの精製 αα型、αγ型、γγ型エノラーゼは脳からの系統的分
離法に従い、まず脳油出液をブチルセファロースカラム
にアプライした。αα型エノラーゼは未吸着画分として
、αγ型エノラーゼは１００１のＮａＣ１により、ββ
型エノラーゼは２１０ｍＭのＮａＣ１によりカラムから
溶出した。αα型、αγ型、γγ型エノラーゼ画分は続
いて硫安分画、Ｔｏｙ。
Ｐｅａｒｌ ＨＷ ５５カラムによる水素結合クロマト
、セファロース６Ｂによるゲルろ過によりそれぞれ電気
泳動的に単一な標品として得ることができた。
、セファロース６Ｂによるゲルろ過によりそれぞれ電気
泳動的に単一な標品として得ることができた。
脳３００ｇよりαα型エノラーゼ１５■、αγ型エノラ
ーゼ１０■、ＴＴ型エノラーゼ８■を得ることができた
。αβ型、ββ型エノラーゼは筋肉抽出液をＣＭ−セフ
ァデックスカラムにアプライし、吸着したαβ型、ββ
型エノラーゼをＮａＣ１を用いたグラジェント溶出によ
りカラムから溶出した。
ーゼ１０■、ＴＴ型エノラーゼ８■を得ることができた
。αβ型、ββ型エノラーゼは筋肉抽出液をＣＭ−セフ
ァデックスカラムにアプライし、吸着したαβ型、ββ
型エノラーゼをＮａＣ１を用いたグラジェント溶出によ
りカラムから溶出した。
αβ型、ββ型エノラーゼ画分は引き続いてＤＥＡＥ−
セファデックスカラム、更に再度ＣＭ−セファデックス
カラムを用いたイオン交換クロマトにより電気泳動的に
単一な標品として得ることができた。筋肉２００ｇより
αβ型エノラーゼ１２■、ββ型エノラーゼ３２■を得
ることができた。
セファデックスカラム、更に再度ＣＭ−セファデックス
カラムを用いたイオン交換クロマトにより電気泳動的に
単一な標品として得ることができた。筋肉２００ｇより
αβ型エノラーゼ１２■、ββ型エノラーゼ３２■を得
ることができた。
αα型、ββ型、γγ型エノラーゼの比活性（Ｕ／ｎｗ
）はそれぞれ８４．８６．８０であることから、α、β
、γそれぞれのサブユニットの比活性も８４．８６．８
０とした。尚、１単位は１分間に１μｍｏｌｅの２−ホ
スホグリセリン酸をホスホエノールピルビン酸に変換す
るのに必要な酵素量である。
）はそれぞれ８４．８６．８０であることから、α、β
、γそれぞれのサブユニットの比活性も８４．８６．８
０とした。尚、１単位は１分間に１μｍｏｌｅの２−ホ
スホグリセリン酸をホスホエノールピルビン酸に変換す
るのに必要な酵素量である。
（２）多クローン及び単クローン抗体の鋼製得られたα
α型、ββ型、γγ型エノラーゼアイソザイムを用いて
以下のように行った。
α型、ββ型、γγ型エノラーゼアイソザイムを用いて
以下のように行った。
多クローン抗体はαα型、ββ型、γγ型エノラーゼア
イソザイムを１回につき１■ずつコンプリートフロイン
ドアシュバンドと混合してウサギに免疫した。免疫は２
週間に１度ずつｉｉ・い、採血後８両型した血清を用い
たオフクロニー法にて抗体の産生を確認した。血清から
の抗体の精製は血清を硫安分画（５０％飽和）し、引き
続いてＤＥＡＥ−セルロースカラムによりＩｇＧ画分を
得た。又ＩｇＧ画分をペプシン消化することにより Ｐ
（ａｂ’）２両分を得た。得られた抗αα抗体１ｇＧ
、抗ββ抗体１’ｇＧあるいは抗γγ抗体１ｇＧがらの
α、β、γ−サブユニットそれぞれに対する特異抗体Ｉ
ｇＧの鋼製は次のようにして行った。
イソザイムを１回につき１■ずつコンプリートフロイン
ドアシュバンドと混合してウサギに免疫した。免疫は２
週間に１度ずつｉｉ・い、採血後８両型した血清を用い
たオフクロニー法にて抗体の産生を確認した。血清から
の抗体の精製は血清を硫安分画（５０％飽和）し、引き
続いてＤＥＡＥ−セルロースカラムによりＩｇＧ画分を
得た。又ＩｇＧ画分をペプシン消化することにより Ｐ
（ａｂ’）２両分を得た。得られた抗αα抗体１ｇＧ
、抗ββ抗体１’ｇＧあるいは抗γγ抗体１ｇＧがらの
α、β、γ−サブユニットそれぞれに対する特異抗体Ｉ
ｇＧの鋼製は次のようにして行った。
抗αサブユニット抗体１ｇＧはαα型エノラーゼを固定
化したヤラア。Ｌｘ４Ｂヵウェ４．抗。６抗体１ｇＧを
流した。抗αサブユニット抗体はカラムに吸着し、ｐＨ
２，５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶出し
た。抗βサブユニット抗体ＩｇＧはββ型エノラーゼを
固定化したセファロース４Ｂカラムに抗ββ抗体１ｇＧ
を流した。抗βサブユニット抗体はカラムに吸着し、ｐ
）１２．５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶
出した。
化したヤラア。Ｌｘ４Ｂヵウェ４．抗。６抗体１ｇＧを
流した。抗αサブユニット抗体はカラムに吸着し、ｐＨ
２，５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶出し
た。抗βサブユニット抗体ＩｇＧはββ型エノラーゼを
固定化したセファロース４Ｂカラムに抗ββ抗体１ｇＧ
を流した。抗βサブユニット抗体はカラムに吸着し、ｐ
）１２．５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶
出した。
抗γサブユニット抗体１ｇＧはγγ型エノラーゼを固定
化したセファロース４Ｂカラムに抗γγ抗体１ｇＧを流
した。抗γサブユニット抗体はカラムに吸着り、、ｐＨ
１２，５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶出
した。このようにして得られたα、β、Ｔサブユニット
それぞれに対する抗体は他のサブユニットのホモダイマ
ーよりなるエノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカ
ラムには吸着されなかった。抗αα、抗ββ、抗γＴ抗
血清１００−よりα、β、γサブユニットに対する抗体
ＩｇＧをそれぞれ１８ｍｇ、１２■、２３■収得した。
化したセファロース４Ｂカラムに抗γγ抗体１ｇＧを流
した。抗γサブユニット抗体はカラムに吸着り、、ｐＨ
１２，５グリシン−ＨＣｌバッファーでカラムから溶出
した。このようにして得られたα、β、Ｔサブユニット
それぞれに対する抗体は他のサブユニットのホモダイマ
ーよりなるエノラーゼを固定化したセファロース４Ｂカ
ラムには吸着されなかった。抗αα、抗ββ、抗γＴ抗
血清１００−よりα、β、γサブユニットに対する抗体
ＩｇＧをそれぞれ１８ｍｇ、１２■、２３■収得した。
α、β、γサブユニットそれぞれに対する単クローン抗
体の調製は、（１１で得られたαα型、ββ型又はＴγ
型エノラーゼをコンプリートフロインドアシュバンドと
混合し、マウスに免疫し、抗体産生が認められたマウス
の肺臓細胞とマウスミエローマ細胞の融合によりハイブ
リドーマを得た。
体の調製は、（１１で得られたαα型、ββ型又はＴγ
型エノラーゼをコンプリートフロインドアシュバンドと
混合し、マウスに免疫し、抗体産生が認められたマウス
の肺臓細胞とマウスミエローマ細胞の融合によりハイブ
リドーマを得た。
抗体産生ハイブリドーマを培養し、約１０７個の細胞を
マウスの腹腔内に移植後、腹水を採取した。
マウスの腹腔内に移植後、腹水を採取した。
Ｂ 水ヲＷＥ 安分画、続いてＤＥＡＥ−セルロースカ
ラムによりＩｇＧ画分を得た。ＩｇＧのサブユニット特
異性はホモダイマー型エノラーゼを固定化したセファロ
ース４Ｂカラムへの吸着性で調べ、吸着したＩｇＧはｐ
Ｈ２，５グリシン−ＨＣｌバッファーにてカラムから溶
出した。腹水２０ｍ（！よりα、β、Ｔサブユニットに
対する単クローン抗体１ｇＧをそれぞれ２６■、３３■
、２１■収得した。
ラムによりＩｇＧ画分を得た。ＩｇＧのサブユニット特
異性はホモダイマー型エノラーゼを固定化したセファロ
ース４Ｂカラムへの吸着性で調べ、吸着したＩｇＧはｐ
Ｈ２，５グリシン−ＨＣｌバッファーにてカラムから溶
出した。腹水２０ｍ（！よりα、β、Ｔサブユニットに
対する単クローン抗体１ｇＧをそれぞれ２６■、３３■
、２１■収得した。
（３）抗α多クローン又は抗Ｔ単クローン抗体を用いて
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトαα型エノラ
ーゼ（８０ｍｔｌ／ｐｇ＞ 、ヒトαγ型エノラーゼ（
８２ｍＵ／ ｐｇ ） 、ヒトαα型エノラーゼ（８４
ｍ１ｌ／ ｐｇ ）及びヒトββ型エノラーゼ（８６ｍ
［ｌ／ｒＪｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに
５０４のＯ，１Ｍ ）リエタノールアミンバソファー（
ｐＨ７，６）に抗α多クローン抗体ＩｇＧ又は抗Ｔ単ク
ローン抗体１ｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトα
α型エノラーゼアイソザイム、ヒトαγ型エノラーゼア
イソザイム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒ
トββ型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトαα型エノラ
ーゼ（８０ｍｔｌ／ｐｇ＞ 、ヒトαγ型エノラーゼ（
８２ｍＵ／ ｐｇ ） 、ヒトαα型エノラーゼ（８４
ｍ１ｌ／ ｐｇ ）及びヒトββ型エノラーゼ（８６ｍ
［ｌ／ｒＪｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに
５０４のＯ，１Ｍ ）リエタノールアミンバソファー（
ｐＨ７，６）に抗α多クローン抗体ＩｇＧ又は抗Ｔ単ク
ローン抗体１ｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトα
α型エノラーゼアイソザイム、ヒトαγ型エノラーゼア
イソザイム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒ
トββ型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。
その結果を第１図（Ａ）〜第３図（Ｂ）に示す。
即ち抗α多クローン抗体２０／ｊｇ又は抗α多クローン
抗体２ Ｆｊｇの添加は、ヒトααエノラーゼアイソザ
イム活性を完全に阻害し、ヒトαγ型エノラーゼアイソ
ザイム活性の５０％を阻害するがヒトαα型及びヒトβ
β型エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった
。
抗体２ Ｆｊｇの添加は、ヒトααエノラーゼアイソザ
イム活性を完全に阻害し、ヒトαγ型エノラーゼアイソ
ザイム活性の５０％を阻害するがヒトαα型及びヒトβ
β型エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった
。
（４）抗α多クローン又は抗α型クローン抗体を用いて
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトαα型エノラ
ーゼ（８４ｍｕ／ｌｊｇ ） 、ヒトαγ型エノラーゼ
（８２ｓ＋Ｕ／ Ｐｇ ） 、ヒトγＴ型エノラーゼ（
８０ｍＵ／ ｌｊｇ ）及びヒトββ型エノラーゼ（８
６ｍｕ／ｐｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに
５０−のＯ，１Ｍ ）リエタノールアミンバッファー（
ｐＨ７，６）に抗α多クローン抗体１ｇＧ又は抗α型ク
ローン抗体ＩｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトα
α型エノラーゼアイソザイム、ヒトαγ型エノラーゼア
イソザイム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒ
トββ型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトαα型エノラ
ーゼ（８４ｍｕ／ｌｊｇ ） 、ヒトαγ型エノラーゼ
（８２ｓ＋Ｕ／ Ｐｇ ） 、ヒトγＴ型エノラーゼ（
８０ｍＵ／ ｌｊｇ ）及びヒトββ型エノラーゼ（８
６ｍｕ／ｐｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに
５０−のＯ，１Ｍ ）リエタノールアミンバッファー（
ｐＨ７，６）に抗α多クローン抗体１ｇＧ又は抗α型ク
ローン抗体ＩｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトα
α型エノラーゼアイソザイム、ヒトαγ型エノラーゼア
イソザイム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒ
トββ型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。
その結果を第４図（Ａ）〜第６図（Ｂ）に示す。
即ち抗α多クローン抗体２５１１ｇ又は抗α型クローン
抗体２．５ｐｇの添加は、ヒトααエノラーゼアイソザ
イム活性を完全に阻害し、ヒトαγ型エノラーゼアイソ
ザイム活性を５０％阻害するが、ヒトＴγ型及びヒトβ
β型エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった
。
抗体２．５ｐｇの添加は、ヒトααエノラーゼアイソザ
イム活性を完全に阻害し、ヒトαγ型エノラーゼアイソ
ザイム活性を５０％阻害するが、ヒトＴγ型及びヒトβ
β型エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった
。
（５）抗β多クローン又は抗α多クローン抗体を用いて
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトββ型エノラ
ーゼ（８６ｍＵ／ｐｇ） 、ヒトαβ型エノラーゼ（８
５ｍＵ／ Ｐｇ ） 、ヒトγＴ型エノラーゼ（８０＋
＋Ｕ／ ｐｇ ）及びヒトαα型エノラーゼ（８４ｍｕ
／ｐｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに５０ｐ
１の０．１Ｍ）リエタノールアミンバッファ−（ｐＨ７
．６）に抗α多クローン抗体ＩｇＧ又は抗α多クローン
抗体１ｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトαα型エ
ノラーゼアイソザイム、ヒトαβ型エノラーゼアイソザ
イム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒトαα
型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。その結
果を第７図（Ａ）〜第９図（Ｂ）に示す。
の各種エノラーゼアイソザイムの阻害ヒトββ型エノラ
ーゼ（８６ｍＵ／ｐｇ） 、ヒトαβ型エノラーゼ（８
５ｍＵ／ Ｐｇ ） 、ヒトγＴ型エノラーゼ（８０＋
＋Ｕ／ ｐｇ ）及びヒトαα型エノラーゼ（８４ｍｕ
／ｐｇ）のそれぞれのエノラーゼアイソザイムに５０ｐ
１の０．１Ｍ）リエタノールアミンバッファ−（ｐＨ７
．６）に抗α多クローン抗体ＩｇＧ又は抗α多クローン
抗体１ｇＧを濃度を変えて添加した場合のヒトαα型エ
ノラーゼアイソザイム、ヒトαβ型エノラーゼアイソザ
イム、ヒトαα型エノラーゼアイソザイム及びヒトαα
型エノラーゼアイソザイムの残存活性を調べた。その結
果を第７図（Ａ）〜第９図（Ｂ）に示す。
即ち抗β多クローン抗体２０Ｐｇ又は抗α多クローン抗
体２ＰＨの添加によりヒトββエノラーゼアイソザイム
活性を完全に阻害し、ヒトαβ型エノラーゼアイソザイ
ム活性を５０％阻害するが、ヒトγγ型及びヒトαα型
エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった。
体２ＰＨの添加によりヒトββエノラーゼアイソザイム
活性を完全に阻害し、ヒトαβ型エノラーゼアイソザイ
ム活性を５０％阻害するが、ヒトγγ型及びヒトαα型
エノラーゼアイソザイム活性を全く阻害しなかった。
（６）αサブユニットの定量
エノラーゼ活性（６，２４ｍＵ／ ｍｌ ）を含む正常
血清１００ｇに（２）で得られた抗α多クローン抗体１
ｇＧを１０／Ｉｇ又は単クローン抗体ＩｇＧをｌｐｇ添
加し、作用させてエノラーゼ活性を測定したところ、０
．９４ｍＵ／ｍｌ！であった。
血清１００ｇに（２）で得られた抗α多クローン抗体１
ｇＧを１０／Ｉｇ又は単クローン抗体ＩｇＧをｌｐｇ添
加し、作用させてエノラーゼ活性を測定したところ、０
．９４ｍＵ／ｍｌ！であった。
減少したエノラーゼ活性は５．３ｍｔｌ／−であった。
この減少したエノラーゼ活性はαα型エノラーゼアイソ
ザイム及びαγ型エノラーゼアイソザイムのαサブユニ
ットに由来する活性を示すものであり、αサブユニット
の比活性８４Ｕ／■で５．３ｍｔｌ／ｍｅを除すること
によりαサブユニット量は６３ｎｇ／−であった。
ザイム及びαγ型エノラーゼアイソザイムのαサブユニ
ットに由来する活性を示すものであり、αサブユニット
の比活性８４Ｕ／■で５．３ｍｔｌ／ｍｅを除すること
によりαサブユニット量は６３ｎｇ／−であった。
実施例２
エノラーゼ活性（６，２４ｍ口／ｍで）を含む正常血清
１００度に実施例１の（２）で得られた抗β多クローン
抗体１０ｐｇ又は単クローン抗体１７ｊｇ及び抗γ多ク
ローン抗体１０ｐｓｇ又は抗γ単クローン抗体１７１ｇ
を同時に添加し、作用させた後エノラーゼ活性を測定し
たところ、５．３ｍＵ／−となった。このエノラーゼ活
性はαα型エノラーゼアイソザイム及びαγ型エノラー
ゼアイソザイムのαサブユニットに由来する活性であり
、これよりめられるαザブユニット量は６３ｎｇ／ｍβ
であった。
１００度に実施例１の（２）で得られた抗β多クローン
抗体１０ｐｇ又は単クローン抗体１７ｊｇ及び抗γ多ク
ローン抗体１０ｐｓｇ又は抗γ単クローン抗体１７１ｇ
を同時に添加し、作用させた後エノラーゼ活性を測定し
たところ、５．３ｍＵ／−となった。このエノラーゼ活
性はαα型エノラーゼアイソザイム及びαγ型エノラー
ゼアイソザイムのαサブユニットに由来する活性であり
、これよりめられるαザブユニット量は６３ｎｇ／ｍβ
であった。
実施例３
エノラーゼ（２８，８ｍｌ／ ｍｌ ）を含む肺小細胞
癌患者血清１００ｐ１に実施例１の（２）に準じて得ら
れた抗γ多クローン抗体Ｉ ｇ Ｇ ｌｈｇ又は抗γ単
クローン抗体１ ｇ Ｇ １ ｐｇを添加し、作用させ
た後エノラーゼ活性を測定したところ、１８．１ｍＵ／
−であった。
癌患者血清１００ｐ１に実施例１の（２）に準じて得ら
れた抗γ多クローン抗体Ｉ ｇ Ｇ ｌｈｇ又は抗γ単
クローン抗体１ ｇ Ｇ １ ｐｇを添加し、作用させ
た後エノラーゼ活性を測定したところ、１８．１ｍＵ／
−であった。
抗体を作用させる前と作用させた後のエノラーゼ活性の
差、即ち活性阻害は１０．７ｍＵ／−であり、この阻害
されたエノラーゼ活性はＴγ型エノラーゼアイソザイム
及びαγ型エノラーゼアイソザイムのγサブユニットに
由来する活性であり、この活性よりめたγ型サブユニッ
ト量は１３４ｎｇ／−であった。
差、即ち活性阻害は１０．７ｍＵ／−であり、この阻害
されたエノラーゼ活性はＴγ型エノラーゼアイソザイム
及びαγ型エノラーゼアイソザイムのγサブユニットに
由来する活性であり、この活性よりめたγ型サブユニッ
ト量は１３４ｎｇ／−であった。
実施例４
血清サンプル１０検体（正常３、肺小細胞癌５、筋ジス
トロフィー２）を用いてそれぞれの検体中のα、β、γ
それぞれのサブユニット量を測定し、ＥＩＡ法によりめ
た値と比較した。即ちα、β、Ｔサブユニ・７ト量はそ
れぞれ血清Ｌｏｏｍに抗α、抗β、抗α多クローン抗体
をそれぞれ１ ｐｇ添加し、作用させた後のエノラーゼ
活性の減少をめた。
トロフィー２）を用いてそれぞれの検体中のα、β、γ
それぞれのサブユニット量を測定し、ＥＩＡ法によりめ
た値と比較した。即ちα、β、Ｔサブユニ・７ト量はそ
れぞれ血清Ｌｏｏｍに抗α、抗β、抗α多クローン抗体
をそれぞれ１ ｐｇ添加し、作用させた後のエノラーゼ
活性の減少をめた。
ＥＩＡ法は抗体を不溶化したポリスチレンの固相とβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼでラベルした抗体により抗原を測
定するサンドインチ法を行った。即ちαサブユニットの
測定は抗α多クローン抗体を不溶化したポリスチレンの
固相とβ−Ｄ−ガラクトシダーゼでラベルした抗α多ク
ローン抗体によるサンドインチ法を行った。βサブユニ
ットの場合は抗β多クローン抗体を、γサブユニットの
場合は抗α多クローン抗体を使用した。両法によってめ
た検体中のα、β、γサブユニット量を表−１に示した
。
Ｄ−ガラクトシダーゼでラベルした抗体により抗原を測
定するサンドインチ法を行った。即ちαサブユニットの
測定は抗α多クローン抗体を不溶化したポリスチレンの
固相とβ−Ｄ−ガラクトシダーゼでラベルした抗α多ク
ローン抗体によるサンドインチ法を行った。βサブユニ
ットの場合は抗β多クローン抗体を、γサブユニットの
場合は抗α多クローン抗体を使用した。両法によってめ
た検体中のα、β、γサブユニット量を表−１に示した
。
両法の結果は良く一致し、肺小細胞癌患者の血清では明
らかにγサブユニット量が多くなること、又筋ジストロ
フイー患者の血清ではβサブユニツト量が多くなること
が認められた。
らかにγサブユニット量が多くなること、又筋ジストロ
フイー患者の血清ではβサブユニツト量が多くなること
が認められた。
（以下余白）
第１図（Ａ）及び第１図（Ｂ）はヒトγγ型エノラーゼ
アイソザイムに対する抗γ多クローン抗体又は抗α多ク
ローン抗体のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第２
図（Ａ）及び第２図（Ｂ）はヒトαα型エノラーゼアイ
ソザイムに対する抗γ多クローン抗体又は抗γ単クロー
ン抗体のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第３図（
Ａ）及び第３図（Ｂ）はヒトαα型及びヒトββ型エノ
ラーゼアイソザイムに対して抗γ多クローン抗体又は抗
γ単クローン抗体のいずれもエノラーゼ活性阻害のない
ことを示す図であり、第４図（Ａ）及び第４図（Ｂ）は
ヒトαα型エノラーゼアイソザイムに対する抗α多クロ
ーン抗体又は抗γ単クローン抗体のエノラーゼ活性阻害
を示す図であり、第５図（Ａ）及び第５図（Ｂ）はヒト
αα型エノラーゼアイソザイムに対する抗α多クローン
抗体又は抗α型クローン抗体のエノラーゼ活性阻害を示
す図であり、第６図（Ａ）及び第６図（Ｂ）はヒトγγ
型及びヒトββ型エノラーゼアイソザイムに対して抗α
多クローン抗体又は抗α型クローン抗体のいずれもエノ
ラーゼ活性阻害のないことを示す図であり、第７図（Ａ
）及び第７図（Ｂ）はヒトββ型エノラーゼアイソザイ
ムに対する抗β多クローン抗体又は抗β単クローン抗体
のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第８図（Ａ）及
び第８図（Ｂ）はヒトαβ型エノラーゼアイソザイムに
対する抗β多クローン抗体又は抗β単クローン抗体のエ
ノラーゼ活性阻害を示す図であり、第９図（Ａ）及び第
９図（Ｂ）はヒトαα型及びヒトγγ型エノラーゼアイ
ソザイムに対して抗β多クローン抗体又は抗β単クロー
ン抗体のいずれもエノラーゼ活性阻害のないことを示す
図である。 ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗Ｔ多クロ一ン抗体ｔｇｃ （ｕ’ｇ）１図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗ＹＨＬクロ一ン抗体ｒｇｃ （ｕｇｌｏ ５０ １０
０ １５０ ２００ 抗工多クロ一ン抗体１ｇＣ，（μｇ） 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗工単クロ一ン抗体ｔｇｃ（μｇ） ０ ５０、 １００ １５０ ２００ 抗工多クロ一ン抗体ｔｇｃ （μｇ） ３ 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗工単クロ一ン抗体ＴｇＧ （ｕｇ） 抗α多クローン抗体ｒｇｃ （ｐｇ） ４ 図 （Ｂ） ０ ５、 １０ １５ ２０ 抗α単クロ一ン担体ｒｇｃ （＋＋ｇ）０ ５０ １０
０ １５０ ２００ 抗α多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ５ 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗α屯クロ一ン抗体ｚｇｃ （ｐｇ） 抗α多クローン担体１ｇｃ （ｐｇ） 図 ＣＢ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗α屯クロ一ン抗体ｔｇｃ （ｐｇ） ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ７図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗β車クロ一ン抗体ｒｇＧ （ｐｇ） ０ ５０ ’１００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ８図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗β米クロ一ン抗体ＴｇＧ（μｇ） ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ（μｇ） ９ 図 （Ｂ） 抗β単クローン担体■ｇＧ（μｇ）
アイソザイムに対する抗γ多クローン抗体又は抗α多ク
ローン抗体のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第２
図（Ａ）及び第２図（Ｂ）はヒトαα型エノラーゼアイ
ソザイムに対する抗γ多クローン抗体又は抗γ単クロー
ン抗体のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第３図（
Ａ）及び第３図（Ｂ）はヒトαα型及びヒトββ型エノ
ラーゼアイソザイムに対して抗γ多クローン抗体又は抗
γ単クローン抗体のいずれもエノラーゼ活性阻害のない
ことを示す図であり、第４図（Ａ）及び第４図（Ｂ）は
ヒトαα型エノラーゼアイソザイムに対する抗α多クロ
ーン抗体又は抗γ単クローン抗体のエノラーゼ活性阻害
を示す図であり、第５図（Ａ）及び第５図（Ｂ）はヒト
αα型エノラーゼアイソザイムに対する抗α多クローン
抗体又は抗α型クローン抗体のエノラーゼ活性阻害を示
す図であり、第６図（Ａ）及び第６図（Ｂ）はヒトγγ
型及びヒトββ型エノラーゼアイソザイムに対して抗α
多クローン抗体又は抗α型クローン抗体のいずれもエノ
ラーゼ活性阻害のないことを示す図であり、第７図（Ａ
）及び第７図（Ｂ）はヒトββ型エノラーゼアイソザイ
ムに対する抗β多クローン抗体又は抗β単クローン抗体
のエノラーゼ活性阻害を示す図であり、第８図（Ａ）及
び第８図（Ｂ）はヒトαβ型エノラーゼアイソザイムに
対する抗β多クローン抗体又は抗β単クローン抗体のエ
ノラーゼ活性阻害を示す図であり、第９図（Ａ）及び第
９図（Ｂ）はヒトαα型及びヒトγγ型エノラーゼアイ
ソザイムに対して抗β多クローン抗体又は抗β単クロー
ン抗体のいずれもエノラーゼ活性阻害のないことを示す
図である。 ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗Ｔ多クロ一ン抗体ｔｇｃ （ｕ’ｇ）１図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗ＹＨＬクロ一ン抗体ｒｇｃ （ｕｇｌｏ ５０ １０
０ １５０ ２００ 抗工多クロ一ン抗体１ｇＣ，（μｇ） 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗工単クロ一ン抗体ｔｇｃ（μｇ） ０ ５０、 １００ １５０ ２００ 抗工多クロ一ン抗体ｔｇｃ （μｇ） ３ 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗工単クロ一ン抗体ＴｇＧ （ｕｇ） 抗α多クローン抗体ｒｇｃ （ｐｇ） ４ 図 （Ｂ） ０ ５、 １０ １５ ２０ 抗α単クロ一ン担体ｒｇｃ （＋＋ｇ）０ ５０ １０
０ １５０ ２００ 抗α多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ５ 図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗α屯クロ一ン抗体ｚｇｃ （ｐｇ） 抗α多クローン担体１ｇｃ （ｐｇ） 図 ＣＢ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗α屯クロ一ン抗体ｔｇｃ （ｐｇ） ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ７図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗β車クロ一ン抗体ｒｇＧ （ｐｇ） ０ ５０ ’１００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ （μｇ） ８図 （Ｂ） ０ ５ １０ １５ ２０ 抗β米クロ一ン抗体ＴｇＧ（μｇ） ０ ５０ １００ １５０ ２００ 抗β多クロ一ン抗体ｒｇｃ（μｇ） ９ 図 （Ｂ） 抗β単クローン担体■ｇＧ（μｇ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ エノラーゼアイソザイムを構成しているサブユニッ
トに対する抗体であり、かつ同時にエノラーゼアイソザ
イムの該サブユニ・ノドに由来する活性を特異的に阻害
する性質を有するものの１種又は２種組み合わせたもの
を、エノラーゼ含有検液に添加した後、減少したエノラ
ーゼ活性より添加した抗体の抗原である特定のエノラー
ゼサブユニット量をめるか又は残存するエノラーゼ活性
より添加した抗体の抗原である特定のエノラーゼサブユ
ニット以外のエノラーゼサブユニット量をめることを特
徴とするエノラーゼサブユニット量の分別定量法。 ２ エノラーゼアイソザイムを構成しているサブユニ・
７トに対する抗体であり、かつ同時にエノラーゼアイソ
ザイムの該サブユニ・ノドに由来する活性を特異的に阻
害するものが単クローン抗体であることを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載のエノラーゼサブユニット量の
分別定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23400383A JPS60125565A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23400383A JPS60125565A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60125565A true JPS60125565A (ja) | 1985-07-04 |
Family
ID=16964029
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23400383A Pending JPS60125565A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | エノラ−ゼサブユニット量の分別定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60125565A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02181654A (ja) * | 1989-01-06 | 1990-07-16 | Green Cross Corp:The | 抗酵素抗体価の測定方法 |
| WO1991019981A1 (en) * | 1990-06-21 | 1991-12-26 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | REAGENT FOR DETERMINING (1←3)-β-D-GLUCAN |
| WO1992003736A1 (en) * | 1990-08-22 | 1992-03-05 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Assaying agent for endotoxin |
| US5605806A (en) * | 1990-08-22 | 1997-02-25 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Reagent for assaying endotoxin |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5257887A (en) * | 1975-11-03 | 1977-05-12 | Merck Patent Gmbh | Reagent for measurements of creatine kinase mbbactivity and method of the measurements |
| JPS55120797A (en) * | 1979-03-02 | 1980-09-17 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for measuring creatinekinase mb |
-
1983
- 1983-12-12 JP JP23400383A patent/JPS60125565A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5257887A (en) * | 1975-11-03 | 1977-05-12 | Merck Patent Gmbh | Reagent for measurements of creatine kinase mbbactivity and method of the measurements |
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| WO1991019981A1 (en) * | 1990-06-21 | 1991-12-26 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | REAGENT FOR DETERMINING (1←3)-β-D-GLUCAN |
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| US5605806A (en) * | 1990-08-22 | 1997-02-25 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Reagent for assaying endotoxin |
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