SU1213975A3 - Диагностикум дл количественного определени стероидного гормона в биологических жидкост х организма человека - Google Patents
Диагностикум дл количественного определени стероидного гормона в биологических жидкост х организма человека Download PDFInfo
- Publication number
- SU1213975A3 SU1213975A3 SU782629447A SU2629447A SU1213975A3 SU 1213975 A3 SU1213975 A3 SU 1213975A3 SU 782629447 A SU782629447 A SU 782629447A SU 2629447 A SU2629447 A SU 2629447A SU 1213975 A3 SU1213975 A3 SU 1213975A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- conjugate
- steroid
- latex particles
- serum albumin
- added
- Prior art date
Links
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 title claims abstract description 4
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 title 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims abstract description 41
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims abstract description 41
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 40
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 7
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 6
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 6
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims description 2
- 229920003048 styrene butadiene rubber Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002174 Styrene-butadiene Substances 0.000 claims 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims 1
- MTAZNLWOLGHBHU-UHFFFAOYSA-N butadiene-styrene rubber Chemical compound C=CC=C.C=CC1=CC=CC=C1 MTAZNLWOLGHBHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 239000011115 styrene butadiene Substances 0.000 claims 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 8
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 abstract description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 abstract 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 29
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 18
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 10
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 7
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 3
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 3
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000693911 Equus caballus Albumin Proteins 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- HHZQLQREDATOBM-CODXZCKSSA-M Hydrocortisone Sodium Succinate Chemical compound [Na+].O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 HHZQLQREDATOBM-CODXZCKSSA-M 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000005062 Polybutadiene Substances 0.000 description 1
- 108091006629 SLC13A2 Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 231100000937 derived no effect level Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920002857 polybutadiene Polymers 0.000 description 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- NIKZPECGCSUSBV-HMAFJQTKSA-N testosterone 17-glucosiduronic acid Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(CCC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NIKZPECGCSUSBV-HMAFJQTKSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Изобретение относитс к медицине, в частности иммунологии.
Цель изобретени - повьшение чувствительности целевого продукта,
Пример 1. В качестве.стероида могут быть использованы следующие вещества: фолликул рный гормон (эстроген ) J гормон желтого тела (прогестерон ), мужской половой гормон (17- кетостеронд) адренокортикальньй гормон (17-гидроксиксртикостероид) и стероид, который может представл ть собой большое число метаболитов перечисленных стерои,цных гормонов.
Из сьюорйточньк альбуминов могут быть использованы любые очищенные сьшороточные альбумины - бычий сьгоо- роточный альбумин (в S А), конский альбумин (Е S А)S овечий сывороточный альбумин (S S А), кроличий сывороточный альбумин (RSA)s сывороточ- нь5й альбумин человека (ПЗА) .
Среди этих веществ наиболее предпочтительными вл ютс BSA и RSA. Из числа латексных частиц могут быть использованы полистирольные латексные частицы, полибутадиеновые латексные частицы, стирол-бутадиеновые сополимерные латексные частицы. Размер частиц может лежать в днапа- зоне О,, 234-0, 721 мкм,
10 моль стероид-глюкуронида, стероид полусукцинат8. или стероид- 10-карбоксиметш1оксима на t моль сывороточного альбумина раствор ют в динетилформамнде. К этому раствору добавл ют такое же количество молей три-н-бутиламина, что и стероидного гормона, в качестве вспомогательного активатора5 и смесь перемексивают, К полученному раствору добавл ют такое же количество молей изобз тилклор формната, что и стерот-щного гормона, в качестве активатора, и смесь перемешивают о
Полученный раствор обозначагот как жидкость А.
Получение жидкости В.
Сывороточный альбумин раствор ют в деионизированной воде. Довод т рН t H.ijacTBopoM NaOH до SsO-IOjO К полученным нескольким раствора добавл ют различные количества диметилформамида и готов т 9 образцов жидкости В, в которых содержатс различные количества RSA. Коли- чес тво диметилформамида, содержащегос ,в каждой из порций жи.цкости В,139752
устанавливают таким образом, чтобы обидее количество диметилформамида, содержащегос в жидкост х А и В, было равно количеству деионизиро- 5 ванной воды в жидкости В. Получение конъюгата. Каждую из жидкост.ей А по капл м добавл ют к каждой из жидкостей В в течение полутора часов при перемешивании,
0 в эти растворы добавл ют 1 н.раствор NaOH и рН устанавливают 8,0-10,0, после чего каждый из растворов дополнительно перемешивают в течение 3 ч и в результате получают 9 об43 разцов эстриол-1б к- -глюкуронид- К8А--конъюгатных растворов,
Каждьи из этих растворов подвергают диализу против дистиллированной воды, В диализированные раство20 ры добавл ют ацетон в количестве, равном 2 ч, ацетона на 1 ч. раствора , и после перемешивани добавл ют 1 н,раствор НС1 дл осаждени конъюгата . Осажденный конъюгат в каждом
2S из растворов отдел ют центрифугированием в течение 5 мин при скорости вращени 10000 об/мин. К каждому из отделенных конъюгатов добавл ют деионизированную воду и после уста30 новлени рН равным 8,0 с помощью 1 н. NaOH, каждый из этих растворов диализируют против дистиллированной воды дл удалени ацетона, В результате получают 9 видов конъюгатов,
3«; имеющих различные числа св зывани стероида. Получение конъюгата провод т при низкой тектературе (). i ,
Сенсибилизаци латексных частиц. Суспензию латексиых частиц гото в т промьюанием и/или разбавлением латексных частиц подход щим буферным раствором (рН 7э2-8,6) и стеро ид-сывороточный альб тдановый конъюгат добавл ют в нужной концентрации
в эту суспензию. Смесь выдерживаюгг при 37 С в течение 2 ч при переме- Бмвании дл пол чени суспензии сенсибилизированных латексных частиц. Полученную суспензию центрифугируют
0 н осадок отдел ют, затем прог-аывают буферным раствором. Центрифугирование и проь зюание повтор ют несколь ко раз. Осадок повторно суспендирзг- ют в буферном растворе дл получе™
55 }ш суспензии латексных частиц, сенсибилизированных конъюгатом. Количество конъюгата, используемое дл сенсибилизации латексных частиц.
3
составл ет 1,8-7,2 мг на 100 мг ла- тексных частиц, при этом количество конъюгата, используемое дл сенсибилизации латексных частиц, зависит от размера частиц (дл сенсибилизации частиц размером 0,234 мкм и 0,721 мкм исполь,зуют соответственно 72 мг и 18 мг на 1 ч. латексных частиц).
Получение антител.
Получают стероид-сывороточный альбуминный конъюгат по реакции стерода в таком состо нии, которое он имеет в жидкой среде живого организма или в экскретированной жидкости, или стероида, обладающего иммунологической кросс-реакционноспособнос- тью по отношению к сывороточному альбумину, и затем полуконъюгат ввод т, например, путем инъекции млкопитающему , сыворотка которого отличаетс от сыворотки, используемой дл получени конъюгата. Получают сыворотку.
П р и м е р 2. Жидкость А готов растворением 50 мг эстриол-16- oi-гл куронида в 10 мл диметилформамида, при перемешивании добавл ют 26 мл три-н-бутиламина и затем 14 мл изо- бутил хлорформиата.
2,33 г RSA раствор ют в 6 мл деионизированной воды, содержащей 1,0 мл NaOH, после чего добавл ют 50 мл диметилформамида. Получают жидкость В.
К жидкости в по капл м добавл ют жидкость А и смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем добавл ют 1,0 мл 1 и.раствора NaOH и перемеишвание продолжают еще в течение 3,5 ч. После диализировани раствора деионизированной водой на 1 ч. раствора добавл ют 2 ч. ацетона и гомогенный раствор НС1 дл осаждени синтези- рованного эстриол-16(х;-глюкуронид- RSA-конъюгата. Полученный осадок отдел ют центрифугированием при скорости вращени 10000 об/мин в течение 5 мин.
К отделенному осадку добавл ют деионизированную воду, устанавливают рН 8 с помощью 1 н. раствора NaOH и провод т диализ деионизированной водой дл удалени ацетона. Получают 1,78 г конъюгата (выход 75%). Процесс провод т при 6 С. Число св зывани эстриол-1бЛ-глюку- ронида, измеренное методом УФ-абсор39754
ции и методом динитрофенилировани , равно 2,2 и 1,9 соответственно. 76 мг конъюгата раствор ют в 400 мл 40 мМ вероналового буферу
5 (содержащего 150 мМ NaCI, рН 7,8), добавл ют 10 мл суспензии (концентраци 10%) полистирольных латексных частиц размером 0,234 мкм и полученную смесь вьщерживают в течение
to 2 ч при 37°С дл сенсибилизировани . Сенсибилизированную латексную суспензию подвергают центрифугированию при скорости вращени 4000 об/мин в течение 20 мин, полученный осадок сус15 пендируют в 200 мл вероналового буфера и дважды центрифугируют в тех же режимах. Полученный осадок повторно суспендируют в 50 мл буфера и затем добавл ют азид натри до концент20 рации 0,1%. Получают 50 мл суспензии (плотность 2%)латексных частиц,сенсибилизированных эстриол-16ы-глюку- ронид-RSA.
В результате смешивани на пред-25 метном стеюте 0,1 мл полученной суспензии сенсибилизированных латексных частиц и О,1 МП разбавленного раствора антиэстриол-16р|;-глюкуронид-В5А, (разбавл ют до получени титра, рав30 ного 0,04 нмоль эстриол-16й.-глюку- ронид-экв./мл) в течение 1-2 мин наблюдают агглютинацию. Однако в том случае, когда антитела разбавл ют до получени титра, равного 0,02 нмоль эстриол-16оС-глюкуронид- экв./мл, агглютинации не наблюдает- с и титр латексного реагента, полученный в этом примере определен как 0,04 нмоль эстриол-16сс-глюкуронид- экв./мл.
ПримерЗ. Использу дегидро- эпиандростерон (ДНЕЛ) и BSA, получают 8 образцов конъюгатов, имеющих различные числа св зывани стероидов , лежащие в интервале 0,5-18,3.
5 0,75 г ДНЕА и 0,69 г о-карбокси- метилгидроксиламингидрохлорида раствор ют в 20 мл этилового спирта. Полученную смесь подщелачивают путем добавлени 2 мл 6,4 М раствора сук50 цинат натри . Раствор нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч и добавл ют до конечной концентрации 5%.
После промывани полученного
55 раствора эфиром, водньй слой подкисл ют концентрированной НС1 и отдел ют осадок, который перекристалли- зовывают из этанола. Получают
5
51
0,6 г ДНЕА-17-(0-карбоксиметил)- оксима (ДНЕА-СМО).
К 1 мл 10%-ной суспензии латекс- ных частиц размером 0,721 мкм добав л ют 4 МП 20 мМ фосфатного буферного раствора рН 7,2, содержащего 150 мМ NaCI. После тщательного перемешивани раствор центрифугируют со скоростью 4000 обУмин в течение 20 мин. Полученный осадок суспендируют в 5 мл того же буфера, суспензию центрифугируют при тех же режимах и отдел ют осадок.
Антисыворотку получают от кроликов , иммунизированных конъюгатом ДНЕА-CMO-ESA.
Конъюгат получают следующим образом .
Жидкость А получают добавлением 0,5 г ДНЕА-СМО в 100 МП диметилфор- мамида, после чего при перемешивании добавл ют 0,33 мп три-н-бутил- амина и 0,18 мл изобутилхлорформната. 18,0 г BSA добавл ют к 600 мл деио- низированной воды, после чего добав- л ют 500 мл диметилформамида, в результате чего получают жидкость В,
К этой жидкости по капл м добавл ют предварительно полученную жидкость А и после перемешивани в те- чение 1,5 ч рН смеси устанавливают равным 9,0 с помощью 1 н. раствора NaOH и перемешивание продолжают в течение 3,5 ч. Полученный раствор диализуют водопроводной водой и за- тем на 1 ч, раствора добавл ют 2 ч, ацетона. После этого в раствор добавл ют гомогенно перемешанный 1 н. раствор НС1 дл осаждени синтезированного конъюгата и полученный раст- вор подвергают центрифугированию со скоростью вращени 5000 об./мин в течение 20 мин. К отделенному осадку добавл ют деионизированную воду и после установлени рН раствора, рав- ным 8 с помощью 1 н, раствора NaOH, полученный раствор диализуют водопроводной водой дл удалени ацетона. Получают 13,0 г ДНЕА-CMO-BSA конъюгата (выход около 70%). Число св - зывани стероида (ДНЕА-СМО) такого конъюгата, измеренное методом ди- нитрофенилирова1ш , равно 4,1.
68 мг полученного конъюгата раствор ют в 100 мл 100 мМ глицинового буферного раствора (содержащего 130 мМ NaCI и 0,1% азида натри , рН 8,2) добавл ют 10 мл суспензии
75-6
(концентраци 10%) полистирольных латексных частиц, затем полученную смесь диализуют буферным раствором при комнатной температуре в течение 5 дней дл сенсибилизации. Полученную таким образом сенсибилизированную латексную суспензию подвергают центрифугированию при скорости вращени 4000 об,/мин в течение 20 мин и после суспендировани осадка в 200 мл указанного буферного раствор эту суспензию центрифугируют и промывают указанным буферным раствором при тех же услови х. Осадок повторно суспендируют в 50 мл того же буфера . Получают 50 мл суспензии (концентраци 2%) сенсибилизированных ДНЕА-CMO-BSA латексных частиц.
В результате смешивани на предметном стекле 0,05 мл и нмоль/м ДНЕА с 0,05 мл разбавленной антисыворотки и последующего добавлени О,1 мл полученной суспензии сенсибилизированных латексных частиц даже после 10 мин не наблюдают агглютинации . В том случае, когда 0,1 мл суспензии сенсибилизированных латексных частиц добавл ют к смеси, состо щей из 0,05 мл 0,02 нмоль/мл ДНЕА и 0,05 мл указанной разбавленной антисьшоротки в течение 2-3 мин наблюдают агглютинацию.Титр латекс- ного реагента, полученного в этом примере, прин т как 0,05 нмоль ДНЕА экв./мл.
П р и м е р 4. Жидкость А готов т растворением 1,1 г тестостерон- 17-глюкуронида в 200 мл диметилформамида , к полученному раствору при перемешивании последовательно добавл ют 0,52 МП три-н-бутиламина и затем 0,28 мл изобутилхлорформиата.
Жидкость В получают растворением 46,6 г RSA в 1,2 л деионизированной воды и после установлени рН равным 9,0 с помощью 1 н. раствора NaOH добавл ют 1,0л диметилформамида. Аналогично примеру 3 получают около 39,0 г тестостерон-17-глюкуронид- RSACT-17-G-RSA). Выход около 82%. Число св зывани стероида T-17-G в этом конъюгате, измеренное методом УФ-абсорбции и методом динитрофени- лировани , равно 2,3 и 2,1 соответственно .
Затем к 100 мл суспензии (концентраци 10%) полистирольных латексных частиц, имекщих размер частиц 0,721 мкм, добавл ют 400 нп 20 мМ фосфорно-кислого буферного раствора, содержащего 150 мМ NaC1 (рН 7,2), после чего суспензию центрифугируют при скорости вращени 4000 О&/МИН в течение 20 мин. Полученный таким обдазом осадок суспендируют в 500 мл буферного раствора И- затем после центрифугировани это суспензии отдел ют осадок. К отделеному осадку добавл ют 500 мл буферного раствора, содержащего 180 мг ранее полученного конъюгата. После вьщерживани полученной суспензии в течение 2 ч при ее центрифугируют , затем промывают дважды буферным раствором, процесс центрифугировани повтор ют. Полученньй осадок повторно суспендируют в 500 м буферного раствора и добавл ют азид натри до конечной концентрации 0,1%. В результате получают 500 мл суспензии (концентраци 2%) латекс- ных частиц, сенсибилизированных T-17-G-RSA.
Получают антитела T-17-G-RSA и затем сьшоротку разбавл ют буферным раствором до получени титра, равного 0,05 нмоль T-17-G экв./мл. На предметном стекле 0,1 мл разбавленной антисыворотки смешивают с О,1 м полученной суспензии латексных частиц и в течение 1-2 ьдан наблюдают агглютинацию. Однако, когда антитела разбавл ют до получени титра, равного 0,02 нмоль T-17-G -экв./мл в течение 5 мин агглютинации не наблюдаетс . Таким образом титр ла- тексного реагента, полученный в это примере, прин т равным О,05 нмоль T-17-G-экв./мл.
Пример 5. Жидкость А готов т добавлением некоторого количества молей натрий гидрокортизон- 21-полусукцината к такому же числу молей концентрированной сол ной кислоты, после чего полученную смес концентрируют и промывают водой. Процессы концентрировани и промывк повтор ют несколько раз и затем вещество полностью высушивают 0,5 г полученного сухого вещества раствор ют в 100 мл диметилформамида,после чего при перемешивании последовательно добавл ют 0,26 мл три-н- бутиламина и О,.14 мл изобутилхлор- формиата.
Тем временем готов т жидкость В путем растворени 17,6 г HSA в 600 мл деионизированной воды и рН устанавливают равным 9,0 с помощью 1 и. .раствора NaOH и добавл ют 500 мл диметилформамида . Затем таким же способом, что и в примере 3, получают 13,6 г гидрокортизон-21-полусукцинат-HSA (HC-21-HS-HSA), выход около 75%.
Число св зьюани стероида (HC-21-HS) в таком конъюгате, измеренное методом динитрофенилировани , дает значение , равное 3,0.
Затем 200 мл 40 мМ вероналового буферного раствора, содержащего 150 мМ NaCI (рН 7,8), добавл ют к , 50 МП суспензии (концентраци 10% полистирольных латексных частиц), имек цей размер частиц 0,721 мкм, и полученную таким образом суспензию центрифугируют при скорости вращени 4000 О6./МИН в течение 20 мин. Отделенный осадок суспендируют в 250 мл,
буферного раствора и затем центрифугируют при указанных услови х и полученный осадок собирают. Затем к собранному осадку добавл ют 250 мл буферного раствора, содержащего 88 мг ранее полученного конъюгата, и полу
ченную суспензию выдерживают при 37 С в течение 2 ч, после чего ее
центрифугируют дл отделени осадка. Полученный осадок повторно суспендируют в 250 мл буферного раствора и
центрифугируют, все эти процессы
повтор ют еще раз. Полученньй осадок повторно суспендируют в 250 мл буферного раствора и затем добавл ют .азид натри до конечной концентрации 0,1%.
Получают 250 мл суспензии (концентраци 2%) латексных частиц, сенсибилизированных HC-21-HS-HSA.
Затем 0,05 мл 0,1 моль гидрокорти- зона смешивают с 0,05 мл разбавленных антител и разбавл ют буферным раствором до получени титра, равного 0,1 моль HC-21-HS экв./мп, на предметном стекле с этим раствором смеши- вают О,1 мл ранее полученной суспензии сенсибилизированных частиц. Даже через 10 мин не наблюдают агглютинации . Однако, когда 0,05 мл 0,05 нмоль/мл гидрокортизона и 0,05 мл указанного разбавленного антитела смешивают друг с другом и затем на предметное стекло добавл ют О,1 мл указанной суспензии сенсиби9121397510
лизированных латексных частиц агглю- Чувствительность к обнаружению
тинацию наблкщают в тече(ше 2-3 мин.дл реагента, содержащего эстриолТитр латексного реагента в этом при-16с Сг-глюкуронид, составл ет 0,8мере прин т равным 0,05 нмоль1,5 нмоль/мп, чувствительность изHC-21-HS - экв./мл.5 вестного реагента 2,5 нмоль/мл.
Claims (1)
- ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕРОИДНОГО ГОРМОНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА, содержащий латексные частицы и конъюгат сывороточного альбумина с гормоном, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности целевого продукта, в качестве сывороточного альбумина он содержит альбумин быка, лошади, овцы, кролика или человека, в качестве гормона он содержит эстроген, прогестерон, андроген, 17-оксикортикостерон или их метаболиты, в качестве латексных частиц он содержит частицы полистирола или сополимера стирол-бутадиена размером 0,234-0,721 мкм при следующем количественном соотношении ингредиентов, β мг: SЛатексные частицы 100Конъюгат сывороточного альбумина с гормоном 1,8-7,2 при этом в конъюгате на 1 моль сывороточного альбумина приходится 0,57 моль гормона.SU .... 1213975
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52072775A JPS5819222B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | ステロイド−血清アルブミン複合体感作ラテックス粒子の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1213975A3 true SU1213975A3 (ru) | 1986-02-23 |
Family
ID=13499080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU782629447A SU1213975A3 (ru) | 1977-06-21 | 1978-06-21 | Диагностикум дл количественного определени стероидного гормона в биологических жидкост х организма человека |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4226847A (ru) |
| JP (1) | JPS5819222B2 (ru) |
| AU (1) | AU522306B2 (ru) |
| CA (1) | CA1107196A (ru) |
| DE (1) | DE2827250C2 (ru) |
| DK (1) | DK151400C (ru) |
| FR (1) | FR2395507A1 (ru) |
| GB (1) | GB2001992B (ru) |
| NL (1) | NL7806681A (ru) |
| SE (1) | SE445149B (ru) |
| SU (1) | SU1213975A3 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4331657A (en) * | 1980-02-06 | 1982-05-25 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization | Fecundity of domestic livestock |
| NZ196126A (en) * | 1980-02-07 | 1985-05-31 | Commw Scient Ind Res Org | Increasing ovulation rate in female cattle |
| US4340564A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-20 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoadsorptive surface coating for solid-phase immunosubstrate and solid-phase immunosubstrate |
| JPS589068A (ja) * | 1981-07-10 | 1983-01-19 | Eiken Kagaku Kk | エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法 |
| US4792527A (en) * | 1981-07-17 | 1988-12-20 | Toray Industries, Inc. | Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor |
| US4738932A (en) * | 1985-12-03 | 1988-04-19 | Advanced Polymer Systems, Inc. | Reaginic test for syphilis |
| EP0287745B1 (en) * | 1987-04-22 | 1991-11-13 | Schiapparelli Biosystems, Inc. | Method for the determination of albumin in biological fluids |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL125235C (ru) * | 1965-04-15 | |||
| JPS5226644B2 (ru) * | 1972-05-30 | 1977-07-15 | ||
| JPS5513306B2 (ru) * | 1973-11-29 | 1980-04-08 | ||
| JPS5434818B2 (ru) * | 1974-03-14 | 1979-10-29 | ||
| BE821053A (fr) * | 1974-08-01 | 1975-04-14 | Produit pour diagnostic par determination immunochimique | |
| JPS51112513A (en) * | 1975-03-25 | 1976-10-05 | Asahi Chem Ind Co Ltd | A method for determination of dha.sulfate |
-
1977
- 1977-06-21 JP JP52072775A patent/JPS5819222B2/ja not_active Expired
-
1978
- 1978-06-08 AU AU36945/78A patent/AU522306B2/en not_active Expired
- 1978-06-12 CA CA305,252A patent/CA1107196A/en not_active Expired
- 1978-06-16 SE SE7806961A patent/SE445149B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-06-20 GB GB7827369A patent/GB2001992B/en not_active Expired
- 1978-06-20 DK DK277178A patent/DK151400C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-06-20 US US05/917,254 patent/US4226847A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-06-21 SU SU782629447A patent/SU1213975A3/ru active
- 1978-06-21 NL NL7806681A patent/NL7806681A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-06-21 DE DE2827250A patent/DE2827250C2/de not_active Expired
- 1978-06-21 FR FR7818613A patent/FR2395507A1/fr active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| За вка JP № 48-49918 (открыта патентна публикаци ), сер. 2(4), сб. № 20(34), 1973. За вка JP № 50-123819 (открыта патентна публикаци ), сер. 2(4), сб. № 42(143), 1975. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2001992A (en) | 1979-02-14 |
| SE7806961L (sv) | 1978-12-21 |
| FR2395507A1 (fr) | 1979-01-19 |
| JPS548715A (en) | 1979-01-23 |
| CA1107196A (en) | 1981-08-18 |
| GB2001992B (en) | 1982-03-24 |
| FR2395507B1 (ru) | 1984-10-26 |
| US4226847A (en) | 1980-10-07 |
| DK151400B (da) | 1987-11-30 |
| SE445149B (sv) | 1986-06-02 |
| DK151400C (da) | 1988-05-16 |
| DE2827250C2 (de) | 1986-03-06 |
| DE2827250A1 (de) | 1979-01-04 |
| AU522306B2 (en) | 1982-05-27 |
| DK277178A (da) | 1978-12-22 |
| AU3694578A (en) | 1979-12-13 |
| JPS5819222B2 (ja) | 1983-04-16 |
| NL7806681A (nl) | 1978-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1184489A (en) | Covalently bonded high refractive index particle reagents and their use in light scattering immunoassays | |
| US7488608B2 (en) | Reduction of non-specific binding in assays | |
| JPH0521186B2 (ru) | ||
| EP0668504A1 (en) | Quaternary ammonium immunogenic conjugates and immunoassay reagent | |
| JPH0235943B2 (ru) | ||
| US5397695A (en) | Attachment of compounds to polymeric particles using carbamoylonium compounds and a kit containing same | |
| ES2544236T3 (es) | Reducción de unión no específica en ensayos | |
| SU1213975A3 (ru) | Диагностикум дл количественного определени стероидного гормона в биологических жидкост х организма человека | |
| US5401636A (en) | Enhanced sensitivity agglutination assays multivalent ligands | |
| US4180556A (en) | Pretreatment method for carcinoembryonic antigen assay | |
| EP0323692B1 (en) | Water-insoluble reagent, elements containing same and methods of use | |
| JP3413415B2 (ja) | イムノアッセイ試薬およびそれを用いたイムノアッセイ法 | |
| US5177023A (en) | Water-insoluble reagent elements containing same and methods of use | |
| US4501692A (en) | Charge effects in enzyme immunoassays | |
| EP0308235B1 (en) | Attachment of compounds to polymeric particles using carbamoylonium compounds | |
| EP0411711B1 (en) | Attachment of compounds to polymeric particles using dication ethers and a kit containing same | |
| JPH04203967A (ja) | 微量成分の迅速測定方法 | |
| JPH0727763A (ja) | １α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３に対する抗体及びその用途 | |
| JPS60111158A (ja) | 特異結合検定用試薬 | |
| JPH0220067B2 (ru) | ||
| JPS62138502A (ja) | 重合体粒子 | |
| JPS6329248A (ja) | 固相分離による診断免疫試験方法 | |
| JPS61100660A (ja) | 免疫学的ハプテン測定試薬 | |
| JPH0359382B2 (ru) | ||
| CN113777298A (zh) | 一种快速检测甘胆酸的胶乳增强免疫抑制法试剂盒、制备方法及检测方法 |