SU1192620A3

SU1192620A3 - Способ получени 1-нитро-9-оксиалкиламиноакридинов или их хлоргидратов

Info

Publication number: SU1192620A3
Application number: SU813270449A
Authority: SU
Inventors: Высоцка-Скжэльа Барбара; Льэдуховски Анджэй; Радзиковски Чэслав
Original assignee: Политехника Гданьска (Инопредприятие)
Priority date: 1980-04-23
Filing date: 1981-04-14
Publication date: 1985-11-15
Also published as: JPS56166176A; HU182322B; EP0038572A1; EP0038572B1; PL126407B1; SU1168557A1; DE3162752D1; PL223740A1

Abstract

1, Способ получени 1-нитро-9-оксиалкиламиноакридинов общей формуN02 МН-СН(СН2)лОН лы где при R - Н, п 1, 2 или 3; при R - CgHy, п 1, или их хлоргидратов, о т л и ч а ю щ и и с тем, что раствор 1- -нитро-9-феноксиакридина в феноле об рабатывают оксиалкиламином или его хлоргидратом при их .соотношении . после чего нагревают до 60-100 С, полученную смесь охлаждшот и выливают в избыток непол рного органического растворител , выпавший осадок о.т- фильтровьшают и кристаллизуют из безводного пол рного органического растворител или их смеси с последующим S выделением целевого продукта в свободном виде или в виде хлоргидрата. W 2. Способ по п. 1, отличающийс тем, что в качестве непол рных органических растворителей используют этиловый эфир или бензол а S в качестве пол рных растворителей при-j мен ют метанол, этанол или их смесь.

Description

3

Вьшавший оранжевый осадок вьжрйс- таллизовьшалс из метанола с добавкой эфира. Получен хлоргидрат 1 нитро-9 (1-гидроксибутило)аминакридина с т,пл. с разложением. Выход 90%.

Хроматографический анализ.

На нейтральной окиси алюмини (фирмы Мерк) по системе бензол:ацетон:метанол (3:1:1) Rf 0,65.

На силикагеле (фирмы Мерк) по системе бутанол:уксусна кислота вода (4:1:1) Rf - 0,50.

Вычислено, %: С 58,67; Н 5,21; N 12,08.

Найдено, %: С 58,69; Н 5,20; N 12,16.

Группа соединений согласно кзоб ретению обладает противоопухолевой активностью, котора вл етс подобной , а в большинстве тестов даже более высокой по сравнению с известным соединени ми этой группы. Кроме того предлагаемые соединени не про вл ют рвотных .свойств, а также не вли ют на периферическую кровь.

Противоопухолевые свойства рассматриваемой группы соединений, а именно 1-нитро 9-гидроксиалкиламиноакридинов , многократно исследовались описаиньми тестами in vitro и in viv

Метод in vitro.

Торможение прорастани сем н сердечника - тест роста.

На чашке Петри диаметром 80 мм помещают по возможности равномерно ЗО- 25 сем н сердечника на двух сло х промокательной бумаги. Затем на чаовк . наливают 30 мл раствора исследуемого соединени с концентрацией 1 мг/мл, а на контрольные чашки - дистиллированную воду. Чашки инкубируют в течение суток при 20-30°С, после чего измер ют длину ростков.

Эффект торможени выражаетс в процентах уменьшени средней длины исследуемых ростков по сравнению с контрольными.

Процент торможени прорастани сем н сердечника дл рассматриваемой группы соединений 87-94%.

Метод Ми мура (раковые клетки Эрлиха).

Метод заключаетс в определении торможени активности дегидрогеноз раковых клеток Эрлиха (5x10 в мл) исследуемыми соединени ми, мерилом

2620

чего вл етс диаметр зоны невосстановленного окислительно-восстановительного красител (ресазурина), образовавшийс вокруг цилиндра с I%5 ным раствором исследуемого соединени после п тичасовой инкубации при 87С.

Соединени , дл которых зона торможени составл ет не менее 20 мм, О считаютс активными.

Рассматриваемые соединени вы вл ют исключительно высокую активность в этом тесте, причем она составл ет в среднем 31-33 мм. 5 Тканева культура (лини KB),

Исследовани проводились по методу тканевой культуры, разработанному Иглем и Фоули, модифицированному Смитом и его сотрудниками. 0 Опыт проводилс на опухолевых клетках человеческого происхождени с так называемой лииии КБ с использованием питательной среды Игла с добавкой 10%-ной тел чьей сыворотки. 5 Тесты производились в пробирках, прививаемых 4 мл взвеси f40-80 тыс. клеток), что равнозначно с 40-80 мг клеточного белка.

Рост культуры определ лс приросд 1том клеточного белка; Это определение проводилось фотометрически с использованием реактива Фолина-Сикаль- тана методом, разработанным О мой и Др.

Одновременно с привитием пробирок клетками добавл лось 0,9 мл водного раствора исследуемого соединени таким образом, чтобы концентраци составл ла: 100; 10; 1; 0,1; 0,01; 0,001; и 0,0001 мг/мл питательной среды. Пробирки инкубировались при 37°С. По истечении 72 ч определ лс прирост клеточного белка в пробирках , в которые добавл лс препарат, а также в контрольных пробирках.

Кажда концентраци исследовалась параллельно по двум пробам.

Определ лись такие концентрации вещества, которых обеспечиваетс 0 то{жожение прироста клеточного белка на 50% - LD 5д ипи EDj .

Процент торможега рассчитывалс

по формуле:

5 Остаточное количество клеточного белка цо контролю - концевое количество белка клеточного в тесте

% торможени 100 Остаточное количество клеточного белка по контролю - начальное количество клеточного белка по контролю. В соответствии с общеприн тыми нормами активными считаютс такие соединени , в которых 1 ц м/мл, Соединени I тестировались этим методом несколько раз. Например, ED 5Q дл одного препарата этой группы,с кодовым символом С-857, т.е. 1-нитро-9--гидроксиэтиламинакрИ дина, составл ет О,0007рг/мл, Метод in vivo. Торможение роста мьшиной сарко-; мы Крокера (Sa-t80). Дл опытов примен лись мьши в возрасте около 3 мес. весом около 25 г. Их прививали срезом опухоли (За-180) и делили на группы: одну контрольную - 18 штук и две до четырех групп леченных по восемь штук кажда . Исследуемые соединени в соответствуюпщх дозах вводились в брюшину после предварительного определени максимально переносимой дозы (MID). В качестве оценки противоопухолевого действи исследуемых соединений , принималась процентна разница -между средними весами опухолей контрольных мышей и мышей, получающих препарат, с учетом пр этом токсических эффектов исследуемого соединени . Оценка токсичности охватывает потерю веса леченных животных по сравнению с контролем, число павших животных с контролем, а также микроскопические гистопатологические иссл довани . Активными считаютс такие соединени , которые по крайней мере дважды тормозили рост опухолей более 40%, не вызыва при этом ни падежа животных(2 штук), ни средних потерь веса(4 г). Исследовани in vivo в этом тест рассматриваемой группы соединений . проводились многократно. Так, например , дл препарата с кодовым символо С-857, т.е. 1-нитро-9-гидроксиэтиламинакридина , установлено торможение роста саркомы Sa-lBO в зависимости о следующей дозы: при дозах 0,2-0,8 мг /кг процент торможени составл л соответственно 44-86. Подобным образом дл препарата, обозначенного символо С-934, т.е. 1-нитро-9-гидроксибутиламинакриди а, при дозах 0,2-0,4 процент : торможени составл л 45-60. Фармакологические исследовани . Проводились исследовани токсичности острой и кумул тивной, а также основных фармакологических свойств в следующих тестах: остра токсичность и определение максимально переносимой дозы; кумул тивна токсич- . ность; вли ние на систему кровообращени ; вли ние на гладкие мышцы; вли ние на центральную нервную систему; иммуносупрессивное действие. Остра токсичность (LD fp ) и максимальна переносима доза (MTD) определ лись на крысах Wiater, кроликах (обоего пола) и на мышах Albino Swiss (самки). . Соединени вводились в брюшину (у всех трех видов животных) и в желудок (у крыс и кроликов). Продолжительность наблюдени составл ла 48 ч. В табл. 1 приведены следующие значени LD 50 и MTD при введении соединени С-857. Таблица 1 Мьшь 23,4 15 Крыса 9,2 7,5 69,1 30 Кролик 11,4 7,5 69,0 20 . Кумул тивна токсичность. Опыт проводилс на нескольких группах крыс (iio 20 шт.) , которым исследуемое соединение вводилось в течение 14 14 дней в дозах, представл ющих собой 1/100 . Затем животные умерщвл лись , после чего производилась микроскопическа оценка мышечных органов и брюшной полости. Следует полагать, что исследуемый препарат кумулируетс в минимальной степени - смертельность животных, получавших лекарство, по сравнению с контролем составила около 5%. Не наблюдались также ни потер веса животных, ни изменени в их внешнем виде и поведении. 7 Исследование, касающеес вли ни на систему кровообращени и гладкие мьщ1цы, проводилось на крысах, которым вводилось соединение С-857 в до зах от 0,01 до 20 мг/кг. Препарат не вызывал заметных изменений иссле дуемых сердечно-сосудистых параметров , т.е. не вли л на артериальное давление, на частоту де тельности сердца, не моделировал кривой ЭКГ и не вли л на частоту и амплитуду дыхани . Лишь в самой высокой дозе (20 мг/кг) препарат вы вл л слабое спазмолитическое действие на кишку и мочевой пузырь крысы in situ. Препарат не вы вл л заметного и направленного действи на центральную нервную систему. В дозах 1/20- 1/2 LDjQ он не вы вл л болеутол юще го и антиконвульсивного действи и .с щественного торможени подвижности, но наблюдалось незначительное вли ние на гексобарбиталовый наркоз. 08 Препарат лишь после многократного введени в дозах около 1/5-1/It) LDj-Q вы вл л иммуносупрессивное действие, про вл ющеес в тестах: контактна сенсибилизаци пикрилхлориду, местна клеточна реакци типа трансплантат против реципиента, а также миожет ственное воспаление суставов. Исследование подострой токсичности препарата С-857 проводилось на кроликах , которым в брюшину впрыскивалс препарат в дозе 1/120 U)Q. После 21 дн было установлено незначительное снижение абсолютного ве- са селезенки и печени, а также рост числа лейкоцитов. Остальнь1е гематологические определени не отличались от опр1еделений, выполненных у нормальных животных. В табл. 2 представлен сопоставительный анализ биологических исследований , Ледакрина с соединени ми 1 при внутрижелудочным введении препарата. Таблица 2

Claims

1, Способ получения 1-нитро-9- —оксиалкиламиноакридинов общей формулы

NO2 NH- СН(СН₂)_п0Н

где при R - Η, η = 1, 2 или з; при R - С₂Н_?, η = 1, или их хлоргидратов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что раствор 1—

-нитро-9-феноксиакридина в феноле обрабатывают оксиалкиламином или его хлоргидратом при их .соотношении 1:1,

О * после чего нагревают до 60—100 С, полученную смесь охлаждают и выливают в избыток неполярного органического растворителя, выпавший осадок отфильтровывают и кристаллизуют из без водного полярного органического раст ворителя или их смеси с последующим выделением целевого продукта в сво бодном виде или в виде хлоргидрата

2. Способ по π. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве не полярных органических растворителей используют этиловый эфир или бензол_?а в качестве полярных растворителей при меняют метанол, этанол или их смесь.