SK6452000A3 - Feed additive containing d-pantothenic acid and/or its salts and method for their preparation - Google Patents
Feed additive containing d-pantothenic acid and/or its salts and method for their preparation Download PDFInfo
- Publication number
- SK6452000A3 SK6452000A3 SK645-2000A SK6452000A SK6452000A3 SK 6452000 A3 SK6452000 A3 SK 6452000A3 SK 6452000 A SK6452000 A SK 6452000A SK 6452000 A3 SK6452000 A3 SK 6452000A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- pantothenic acid
- fermentation
- salts
- animal feed
- spray
- Prior art date
Links
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 169
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 22
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 title claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 86
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 86
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 31
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 9
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 48
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 claims description 46
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 claims description 21
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims description 14
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 13
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 11
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 9
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 9
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- -1 Llysine Chemical compound 0.000 claims description 5
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 238000005469 granulation Methods 0.000 claims description 4
- 230000003179 granulation Effects 0.000 claims description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 claims description 2
- 150000005325 alkali earth metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 claims 1
- 235000005939 calcium D-pantothenic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011680 calcium D-pantothenic acid Substances 0.000 claims 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 claims 1
- 150000001674 calcium compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 150000002440 hydroxy compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 claims 1
- 235000006085 Vigna mungo var mungo Nutrition 0.000 description 29
- 240000005616 Vigna mungo var. mungo Species 0.000 description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 description 20
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 12
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 8
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 7
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 6
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 5
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 3
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- SERHXTVXHNVDKA-SCSAIBSYSA-N (3s)-3-hydroxy-4,4-dimethyloxolan-2-one Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@H]1O SERHXTVXHNVDKA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013411 master cell bank Methods 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 101150081585 panB gene Proteins 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 2
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 2
- GQTHJBOWLPZUOI-FJXQXJEOSA-M sodium D-pantothenate Chemical compound [Na+].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O GQTHJBOWLPZUOI-FJXQXJEOSA-M 0.000 description 2
- 235000019188 sodium D-pantothenate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011756 sodium D-pantothenate Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrate Chemical compound O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O SPFMQWBKVUQXJV-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- OTOIIPJYVQJATP-SCSAIBSYSA-N (2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@H](O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N (R)-pantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N (R)-pantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@@H]1O SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PKVVTUWHANFMQC-UHFFFAOYSA-N 2-dehydropantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(=O)C(O)=O PKVVTUWHANFMQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 108010039636 3-isopropylmalate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C(=O)C(O)=O QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010054404 Adenylyl-sulfate kinase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101100028493 Haloferax volcanii (strain ATCC 29605 / DSM 3757 / JCM 8879 / NBRC 14742 / NCIMB 2012 / VKM B-1768 / DS2) pan2 gene Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N Isopropylaldehyde Chemical compound CC(C)C=O AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 208000025174 PANDAS Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000021155 Paediatric autoimmune neuropsychiatric disorders associated with streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 241001524178 Paenarthrobacter ureafaciens Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 description 1
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 102100039024 Sphingosine kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000272 alkali metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000287 alkaline earth metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910003480 inorganic solid Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 101150019254 panC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150076071 panD gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001522 polyglycol ester Polymers 0.000 description 1
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/24—Compounds of alkaline earth metals, e.g. magnesium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Krmivové prísady obsahujúce kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli a spôsob ich výroby
Oblasť techniky
Vynález sa týka krmivovej prísady pre zvieratá na báze fermentačnej zápary, ktorá obsahuje kyselinu D-pantoténovú a/alebo jednu z jej solí a spôsobu výroby tejto prísady.
Doterajší stav techniky
Kyselina pantoténová sa celosvetovo vyrába v množstve rádovo niekoľko tisíc ton za rok. Veľká časť vyrobenej kyseliny pantoténovej sa využíva na výživu úžitkových zvierat, ako je hydina a ošípané. Jej spotreba sa zvyšuje.
Kyselina pantoténová sa môže vyrábať chemickou syntézou alebo biotechnologický fermentáciou vhodných mikroorganizmov vo vhodných živných roztokoch. Pri chemickej syntéze je dôležitým prekurzorom D,L-pantolaktón. Vyrába sa viacstupňovým spôsobom z formaldehydu, izobutylaldehydu a kyanidu, v ďalších krokoch spôsobu sa delí racemická zmes, D-pantolaktón sa kondenzuje s β-alaninom a tak získa sa kyselina D-pantoténová.
Typickou obchodnou formu je vápenatá soľ kyseliny Dpantoténovej. Vápenatá soľ racemickej zmesi kyseliny D,Lpantoténovej je taktiež bežná.
Výhoda fermentačnej výroby pomocou mikroorganizmov spočíva v priamej tvorbe žiaducej stereoizomérnej formy, a to D-formy, ktorá neobsahuje kyselinu L-pantoténovú.
Kyselinu D-pantoténovú môžu za vhodných fermentačných podmienok produkovať rôzne druhy baktérii, ako napríklad Escherichia coli, Arthrobacter ureafaciens, Corynebacterium erythrogenes, Brevibacterium ammoniagenes a taktiež kvasinky, ako napríklad Debaromyces castellii, ako sa ukazuje v EP-A-0 493 060, EP-A-0 590 857 a WO 97/10340. Osobitne vhodnými sú tam opísané deriváty Escherichia coli IFO3547, ako napríklad kmene FV5069/pFV31 alebo FV5069/pFV202.
Pri fermentačnej výrobe kyseliny D-pantoténovej, ako sa opisuje v EP-A-0 493 060, EP-A-0 590 857 a WO 97/10340, sa mikroorganizmus schopný produkcie kyseliny D-pantoténovej kultivuje vo vhodnom živnom médiu a vytvorená kyselina Dpantoténová sa následne nákladným spôsobom izoluje, čistí a získava ako vápenatá soľ.
Vhodné živné médiá obsahujú zdroj uhlíka, ako je napríklad glukóza alebo hydrolyzát škrobovej múčky alebo sacharóza alebo melasa, prekurzory, ako je napríklad β-alanín, kyselina D,L-pantoová alebo D,L-pantolaktón, zdroj dusíka, ako napríklad síran amónny, zdroj fosforu, ako je napríklad fosforečnan draselný a ďalšie soli, stopové prvky a vitamíny a poprípade komplexné prísady médií, ako napríklad kvasnicový extrakt. Mikroorganizmy sa potom v tomto médiu inkubujú pri vhodnej hodnote pH za príslušného prevzdušňovania a miešania, pričom vylučujú kyselinu D-pantoténovú.
Podľa súčasného stavu techniky, ktorý je opísaný vo
WO96/33283 a EP-A-0 590857, sa vápenatá soľ kyseliny
D-pantoténovej získava nákladnou izoláciou a čistením z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú. Po prvom oddelení biomasy filtráciou alebo odstredením sa uskutočňuje ďalšie spracovanie filtrátu čistením aktívnym uhlím alebo stĺpcovou chromatografiou. Po reakcii takto získaných roztokov s hydroxidom vápenatým sa dá vykryštalizovať žiadaná vápenatá soľ.
Podľa WO 96/33283 sa filtrát odfarbí aktívnym uhlím v prvej kolóne. Pomocou koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej sa hodnota pH nastaví na 3,0 a potom sa kvapalina vyčistí kontinuálne cez ďalšie dve kolóny naplnené aktívnym uhlím. Elúcia kyseliny D-pantoténovej sa uskutočňuje metylalkoholom. Po následnej neutralizácii práškom Ca(OH)2 sa získa roztok, z ktorého sa získa kryštalizáciou pri 5 °C D-pantotenát vápenatý.
Pri metóde opísanej v EP-A-0 590 857 sa filtrát čistí najskôr pomocou katexových a anexových stĺpcov. Elúcia sa uskutočňuje kyselinou chlorovodíkovou. Eluovaná frakcia sa potom neutralizuje pomocou Ca(OH)2, zmieša s aktívnym uhlím a odfiltruje. Získaný filtrát sa potom extrahuje v nízkomolekulovom alkohole (metanol, etanol, izopropylalkohol) a D-pantotenát vápenatý sa získa kryštalizáciou.
Opísaným spôsobom vyrobený D-pantotenát vápenatý sa používa ako prísada v krmivách na výživu zvierat.
Podľa stavu techniky sa soli kyseliny D-pantoténovej a kyseliny D,L-pantoténovej vyrábajú reakciou kyselín, vyrobených chemickou syntézou alebo fermentáciou, so žiadanými roztokmi solí.
Úloha vynálezu spočíva v poskytnutí nových foriem prípravkov kyseliny D-pantoténovej a jej solí ako krmivových prísad.
Ďalej je úlohou vynálezu poskytnúť spôsob výroby, ktorý je hospodárnejší a výkonnejší ako súčasné známe spôsoby.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je krmivová prísada pre zvieratá na báze fermentačnej zápary, ktorá sa vyznačuje tým, že
a) obsahuje kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli, najmä soli s alkalickými kovmi alebo kovmi alkalických zemín,
b) obsahuje biomasu vytvorenú počas fermentácie v množstve 0 až 100 % a
c) obsahuje aspoň prevažnú časť ďalších rozpustených zložiek fermentačnej zápary a
d) existuje v tuhej forme, najmä jemnozrnná alebo granulovaná a sypká.
Prísady existujú všeobecne podľa požiadavky ako sušené rozprašovaním alebo lyofilozované, jemnozrnné prášky schopné tečenia, ale aj v granulovanej forme, ktoré môžu obsahovať rozdielne podiely biomasy. Sypná hustota je najmä približne 500 kg/m3. Prísady sú stabilné pri skladovaní.
Ak sa oddelí biomasa, odstránia sa prirodzene aj ďalšie, napríklad anorganické tuhé látky. Okrem toho obsahuje prísada podľa vynálezu aspoň prevažnú časť látok, ktoré boli rozpustené vo fermentačnej zápare, ďalej sa vytvorili alebo pridali, pokiaľ sa vhodným spôsobom neoddelili.
K týmto látkam môžu patriť organické vedľajšie produkty, ktoré okrem kyseliny D-pantoténovej tvoria a vylučujú mikroorganizmy použité pri fermentácii. K nim patria L-aminokyseliny vybrané zo súboru zahŕňajúceho L-metionin, L-lyzin, L-valín, L-treonin, L-alanin a L-tryptofán, najmä L-valin. Ďalej k nim patria organické kyseliny, ktoré majú jednu až tri karboxylové skupiny, ako napríklad kyselina octová, kyselina mliečna, kyselina citrónová, kyselina jablčná alebo kyselina fumarová. Napokon k nim patria aj zle využiteľné cukry, ako napríklad trehalóza. Tieto zlúčeniny sú poprípade žiadané, keď zlepšujú hodnotu prísady.
K týmto látkam patria ďalej zvyšky použitých využiteľných cukrov, napríklad glukózy alebo sacharózy.
Ďalším predmetom vynálezu je spôsob výroby krmivovej prísady obsahujúcej kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli, ktorý sa vyznačuje tým, že sa
a) fermentáciou vyrobí zápara obsahujúca všeobecne sodnú, draselnú, amónnu, horečnatú alebo vápenatú soľ obsiahnutej kyseliny D-pantoténovej,
b) z tejto sa poprípade úplne alebo čiastočne oddelí biomasa,
c) takto získaný roztok, poprípade zápara sa zmieša s hydroxidom alebo oxidom kovu alkalických zemín alebo alkalického kovu najmä v stechiometrických množstvách vzhľadom na kyselinu D-pantoténovú a
d) takto získaná zmes sa suší, suší rozprašovaním, granuluje rozprašovaním alebo granuluje.
Ďalším predmetom vynálezu je spôsob výroby krmivových prísad pre zvieratá s obsahom kyseliny D-pantoténovej a/alebo jej sodnej, draselnej, amónnej, horečnatej alebo vápenatej soli v rozsahu približne 20 až 80 % hmotnostných (sušina) z fermentačných zápar, vyznačujúci sa týmito krokmi
a) prednostne odstránením vody z fermentačnej zápary (skoncentrovanie),
b) poprípade odstránením biomasy, vytvorenej počas fermentácie, v množstve 0 až 100 %,
c) pridaním jednej alebo viacerých uvedených zlúčenín k fermentačným záparám získaným podía
a) a b), pričom množstvo pridaných zlúčenín je odmerané tak, aby ich celková koncentrácia v krmivovej prísade pre zvieratá bola v rozsahu približne 20 až 80 % hmotnostných, najmä 50 až 80 % hmotnostných a
d) sušením fermentačnej zápary získanej podľa c), aby sa získala krmivová prísada pre zvieratá v žiadanej práškovej alebo granulátovej forme.
Na spôsob podía vynálezu sú vhodné fermentačné zápary, ktoré sa získavajú použitím mikroorganizmov vhodných na produkciu kyseliny D-pantoténovej a obsahujú kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli.
Pri mikroorganizmoch sa môže jednať o plesne alebo kvasinky, napríklad Debaromyces castellii alebo grampozitívne baktérie, napríklad rodu Corynebacterium, alebo o gramnegatívne baktérie, napríklad čelade Enterobacteriaceae. Pri čeladi Enterobacteriaceae je treba menovať najmä rod Escherichia s druhom Escherichia coli. V rámci druhu Escherichia coli je potrebné uviesť takzvané kmene K-12, ako napríklad kmene MG1655 alebo W3110 (Neidhard et al.: Escherichia coli and Salmonella. Cellular and Molecular Biology
Ί (ASM Press, Washington D. C.)) alebo kmeň Escherichia coli divého typu IFO3547 (Inštitút pre fermentáciu, Osaka, Japonsko) a od nich odvodené mutanty. Medzi kmeňmi vyprodukovanými z IFO3547 vynikajú zasa FV5069/pFV31 (EP-A-0 590 857) a FV5069/pFV202 (WO 97/10340). Pri rode Corynebacterium treba uviesť najmä druh Corynebacterium glutamicum.
Vyššie opísané mikroorganizmy sa môžu na účely produkcie kyseliny D-pantoténovej kultivovať kontinuálne alebo diskontinuálne spôsobom batch (vsádzková kultivácia) alebo spôsobom fed batch (prítokový systém) alebo spôsobom repeated fed batch (opakovaný prítokový systém). Zhrnutie známych kultivačných metód sa opisuje v učebnici od Chmiela (Bioprozesstechnik 1. Einfuhrung in die Bioverfahrenstechnik (Gustáv Fischer Verlag, Stuttgart, 1991)) alebo v učebnici od Storhasa (Bioreaktoren und periphere Einrichtungen (Viewegh Verlag, Braunschweig/Wiesbaden, 1994)).
Kultivačné médium, ktoré sa má použiť, musí vhodným spôsobom vyhovovať nárokom daných mikroorganizmov. Opisy kultivačných médií rôznych mikroorganizmov sa nachádzajú v príručke „Manual of Methods for Generál Bacteriology od Američan Society for Bacteriology (Washington D.C., USA, 1981). Ako zdroje uhlíka sa môžu použiť cukry a sacharidy, ako je napríklad glukóza, sacharóza, laktóza, fruktóza, maltóza, melasa, škrob a celulóza; oleje a tuky, ako napríklad sójový olej, slnečnicový olej, podzemnicový olej a kokosový olej, mastné kyseliny, ako je kyselina palmitová, kyselina stearová, kyselina linolová; alkoholy, ako je napríklad glycerol a etanol; a organické kyseliny, ako je napríklad kyselina octová. Tieto látky sa môžu používať ako jednotlivé zložky alebo ako zmes. Ako zdroje dusíka sa môžu používať organické zlúčeniny obsahujúce dusík, napríklad peptóny, kvasnicový extrakt, mäsový extrakt, sladový extrakt, máčacia voda, sójová múka a močovina, alebo anorganické zlúčeniny, ako je napríklad síran amónny, chlorid amónny, fosforečnan amónny, uhličitan amónny a dusičnan amónny. Zdroje dusíka sa môžu používať jednotlivo alebo ako zmes. Ako zdroje fosforu sa môže používať dihydrogenfosforečnan draselný alebo hydrogenfosforečnan draselný alebo príslušné soli obsahujúce sodík. Kultivačné médium musí ďalej obsahovať soli kovov, ako napríklad síran horečnatý alebo síran železa, ktoré sú potrebné pre rast. Napokon sa môžu dodatočne k vyššie uvedeným látkam používať esenciálne rastové látky, ako sú aminokyseliny a vitamíny. Ku kultivačnému médiu sa môžu okrem toho pridávať vhodné prekurzory kyseliny D-pantoténovej, ako napríklad aspartát, β-alanín, ketoizovalerát, kyselina ketopantoová alebo kyselina pantoová a poprípade ich soli. Uvedené zložky sa môžu ku kultúre pridávať vo forme jednorazovej vsádzky alebo sa môžu vhodným spôsobom pridávať počas kultivácie.
Na kontrolu pH kultúry sa prednostne používa amoniak alebo amoniaková voda. Iné zásadité zlúčeniny, ako je hydroxid sodný alebo hydroxid draselný, sú taktiež vhodné. Ak sú potrebné kyslé zlúčeniny, používa sa vhodným spôsobom kyselina fosforečná alebo kyselina sírová. Na kontrolu tvorby peny sa môžu používať odpeňovadlá, ako napríklad polyglykolestery mastných kyselín. Na udržiavanie stability plazmidov sa môžu k médiu poprípade pridávať vhodné selektívne pôsobiace látky, napríklad antibiotiká. Aby sa udržiavali aeróbne podmienky, zavádza sa do kultúry kyslík alebo zmesi plynov obsahujúce kyslík, napríklad vzduch. Teplota kultúry je obvykle približne 20 °C až 45 ’C a najmä približne 25 °C až 40 °C. Kultúra sa udržiava tak dlho, kým sa nevytvorí maximum kyseliny D-pantoténovej. Tento cieľ sa obvykle dosiahne za 10 hodín až 160 hodín.
Takto získané fermentačné zápary majú zvyčajne 7,5 až 25 % hmotnostných sušiny a obsahujú kyselinu D-pantoténovú v koncentrácii vyššej ako 0 až do 20 % hmotnostných. Obzvlášť výhodné sú také fermentačné spôsoby, pri ktorých sa po ukončení fermentácie v sušine nachádza 2 až 20 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej. Výhodné je okrem toho aj to, keď sa fermentácia aspoň na konci, výhodne však aspoň počas 30 % trvania fermentácie, vedie spôsobom obmedzujúcim cukry. To znamená, že v priebehu tohto času sa koncentrácia využiteľného cukru vo fermentačnom médiu udržiava na hodnote väčšej alebo rovnej 0 až 3 g/1, poprípade klesá na túto hodnotu.
Vo variante výroby prísad podľa vynálezu zahŕňajúcom amónne ióny sa fermentačné zápary obsahujúce kyselinu D-pantoténovú poprípade najskôr úplne alebo čiastočne zbavujú biomasy známymi separačnými metódami, ako je napríklad odstreďovanie, filtrácia, dekantácia alebo ich kombinácia. Podľa vynálezu je však možné biomasu úplne ponechať vo fermentačnej zápare. Následne sa táto fermentačná zápara všeobecne zmieša s 0,8 až 1,2, najmä 0,95 až 1,1 ekvivalentu oxidu alebo hydroxidu alkalického kovu alebo kovu alkalických zemín, najmä NaOH, KOH, Ca(OH)2 alebo MgO, vzhľadom na kyselinu D-pantoténovú. Pri nízkych koncentráciách kyseliny D-pantoténovej môže byť výhodné použiť aj výrazne väčšie množstvá oxidov alebo hydroxidov, napríklad v rozsahu 1,2 až 4 ekvivalentov. Týmto spôsobom získaná suspenzia sa všeobecne pred sušením skoncentruje na maximálne 60 % hmotnostných sušiny. Podobne je možné fermentačnú záparu najskôr skoncentrovať a potom pridať oxidy alebo hyd roxidy. Získaný koncentrát sa potom získa v bežnej sušiarni alebo napríklad pomocou filmovej odparky so stekajúcim filmom alebo tenkovrstvovej odparky alebo rozprašovacej sušiarne alebo rozprašovacieho granulátora alebo lyofilizátora ako sypký, voľne tečúci, jemnozrnný prášok alebo granulát. Granulácia sa môže uskutočňovať aj v nadväznosti na sušenie, napríklad vo forme nadstavbovej granulácie.
Vynálezcovia ďalej našli novú metódu výroby práškov obsahujúcich amónnu, draselnú, sodnú, horečnatú alebo vápenatú soľ kyseliny D-pantoténovej alebo foriem prípravkov, ktoré ich obsahujú, rýchlym a lacným spôsobom. Na tento účel sa fermentačná zápara obsahujúca kyselinu D-pantoténovú, vyrobená použitím príslušných hydroxyzlúčenín, poprípade najskôr známymi separačnými metódami, ako napríklad odstreďovaním, filtráciou, dekantáciou alebo ich kombináciou, úplne alebo čiastočne zbaví biomasy. Podľa vynálezu je však možné aj úplne ponechať biomasu vo fermentačnej zápare. Následne sa poprípade predbežne spracovaná zápara zahustí alebo vysuší známymi metódami, napríklad pomocou rotačnej odparky alebo tenkovrstvovej odparky alebo odparky so stekajúcim filmom. Poprípade skoncentrovaná zápara sa potom spracuje sušením rozprašovaním, granuláciou rozprašovaním alebo inými spôsobmi na sypký, voľne tečúci, jemnozrnný prášok alebo granulát.
Nové krmivové prísady pre zvieratá podľa vynálezu obsahujú všeobecne 20 až 80 % hmotnostných, najmä 30 až 75 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej a/alebo jej solí vzhľadom na celkové množstvo. Doplnkovo všeobecne obsahujú anorganické zložky v množstve 2,5 až 25 % hmotnostných a poprípade organické vedľajšie produkty v množstve väčšom ako 0 až do 30 % hmotnostných. Podiel suchej biomasy je 0 až 35 % hmotnostných. Obsah vody je prednostne menší alebo rovný 5 % hmotnostným. Požadovaný obsah kyseliny D-pantoténovej a/alebo jednej alebo viacerých uvedených solí sa poprípade dosahuje pridaním príslušných zlúčenín k produktom vyrobeným fermentáciou. Žiadané zlúčeniny sa prednostne pridávajú k zmesi pred sušením alebo sušením rozprašovaním, najmä po skoncentrovaní, vo forme roztokov alebo suchých látok. Takto získaný produkt sa používa ako krmivová prísada.
Koncentrácia kyseliny D-pantoténovej sa môže stanoviť známym spôsobom (Velisek; Chromatographic Science 60, 515560 (1992)).
Predložený vynález sa v nasledujúcom texte bližšie vysvetľuje na základe príkladov uskutočnenia. Na tento účel sa uskutočnili pokusy s kmeňom Escherichia coli 5069/pFV31 produkujúcim kyselinu D-pantoténovú, ktorý je ako FERM-BP 4395 podľa budapeštianskej zmluvy uložený vo Fermentation Research Inštitúte, Agency of Industrial Science and Technology v 1-1-3, Higashi, Tsukubashi, Ibaraki (Japonsko).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Príprava fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu D-pantoténovú
1. Výroba inokula
Vzorka Escherichia coli FV5069/pFV31 sa naniesla na agar LBG, ktorý bol doplnený 50 gg ampicilínu na ml. Táto kultúra na agarovej platni sa inkubovala 17 hodín pri 37 °C a potom sa uskladnila v chladničke pri +4 °C. Vybrané jednotlivé kolónie sa následne rozmnožovali v bujóne LBG. Bujón
LBG má toto zloženie: 10 g/1 peptónu, 5 g/1 kvasnicového extraktu, 5 g/1 NaCl a 1 g/1 glukózy. Agar LBG obsahuje • prídavné 12 g/1 agaru. Predbežne pripravené prípravky sa môžu dostať od firmy Gibco/BRL (Paisley, Škótsko, Velká Británia) ako LB Broth Base alebo LB-agar. Po pridaní 1 g/1 glukózy sa potom získajú uvedené médiá. Kultúry s objemom 10 ml, ktoré sa nachádzali v 100mi Erlenmeyerových bankách, sa inkubovali 16 hodín pri 37 °C a 180 ot./min v inkubátore ESR od firmy Kííhner AG (Birsfelden, Švajčiarsko) . Potom sa bunková suspenzia odstreďovala v centrifúge od firmy Beckmann (Hannover, Nemecko) 15 minút pri 4000 ot./min. Bunková peleta sa resuspendovala v 10 ml média LBG, ktoré bolo doplnené 20 % glycerolu, a naplnila v 10 alikvótoch na 1 ml za sterilných podmienok a zmrazila pri -70 °C. Tieto kultúry sa použili ako „master-bunková banka (master celí bank).
Na vytvorenie pracovnej bunkovej banky (working celí bank) sa médium LBG, ktoré bolo doplnené 50 pg/ml ampicilínu, rozdelilo na 10ml časti do 100mi Erlenmeyerových baniek a potom sa naočkovalo 100 μΐ vyššie opísanej „master-bunkovej banky. Inkubácia sa uskutočňovala 16 hodín pri 37 °C a 180 ot./min v inkubátore ESR od firmy Kuhner AG (Brisfelden, Švajčiarsko). Po inkubácii sa určila optická hustota (OD) suspenzie kultúry pomocou fotometra LP2W od firmy Dr. Lange (Berlín, Nemecko) pri meracej vlnovej dĺžke 660 nm. Mala hodnotu 3,5. Následne sa suspenzia buniek naplnila do sterilných 30ml polyetylénových rúrok od firmy Greiner (Frickenhausen, Nemecko) za sterilných podmienok a odstreďovala pri 2500 ot./min 15 minút v centrifúge typu J-6B od firmy Beckmann (Hannover, Nemecko). Oddelená biomasa sa resuspendovala v 10 ml média LBG, ktoré bolo doplnené 20 % glycero13 lu. Nato sa suspenzia buniek naplnila v 500μ1 častiach do 1 ml sterilných od firmy Nalgene (New York, USA) za sterilných podmienok a zmrazila pri -70 °C. Týmto spôsobom vyrobené konzervy sa použili ako pracovná bunková banka (working celí bank).
2. Príprava fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu Dpantoténovú
Na prípravu fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu Dpantoténovú sa pracovná bunková banka najskôr rozmnožovala v kultúre v pretrepávanej banke a táto sa použila na naočkovanie predfermentora. Kultúra predfermentora sa použila na naočkovanie produkčného fermentora.
Na kultúru v pretrepávanej banke sa použilo médium SKA. Médium SKA sa pripravilo nasledovným spôsobom. V kadičke s objemom 1 1 sa odvážilo 7,0 g (NHJžSO^, 0,5 g KH2PO4, 1,0 g K2HPO4, 0,.5 g MgSO4.7H2O, 0,01 g MnSO4.H2O, 0,01 g ZnSO4.7H2O , 0,005 g Fe2(SO4)3 a 20 g máčacej vody, ktorá bola predtým nastavená na pH 6,8 pomocou 25% roztoku amoniaku, a potom sa pridalo 875 ml destilovanej vody. Tento roztok solí obsahujúci máčaciu vodu sa 20 minút sterilizoval v autokláve pri 121 °C. Ďalej sa filtráciou sterilizoval roztok obsahujúci 125 g destilovanej vody, 28,7 g glukózy a 0,002 g tiamínu.HCl. Odvážilo sa 10 g CaCO3 v 100mi banke a sterilizovalo v autokláve pri 123 °C 20 minút. Spojením obidvoch vyššie uvedených zložiek s roztokom obsahujúcim máčaciu vodu sa získalo médium SKA.
Toto médium SKA sa rozdelilo na časti s objemom 12,5 ml do 100mi Erlenmeyerových baniek a potom sa naočkovalo 0,5 ml suspenzie buniek. Ako suspenzia buniek sa použila konzerva pracovnej kultúry buniek zriedená sterilným fyziologickým roztokom chloridu sodného 1:100. Inkubácia sa uskutočňovala 20 hodín pri 32 °C a 150 ot./min v inkubátore RC-l-TK od firmy Infors (Bottmingen, Švajčiarsko). Optická hustota stanovená pri meracej vlnovej dĺžke 660 nm v nadväznosti na to mala hodnotu 12,5.
0,5 ml tejto kultúry v pretrepávanej banke sa zriedilo
4,5 ml fyziologického roztoku chloridu sodného a 0,7 ml z nej sa použilo na naočkovanie 1300 ml kultivačného média, ktoré sa nachádzalo v 21 laboratórnom fermentore typu Biostat® MD od firmy Braun Diessel Biotech GmbH (Melsungen, Nemecko).
Kultivačné médium sa pripravilo nasledovným spôsobom. Roztok skladajúci sa z 9,81 g (NH4)2SO4, 0,7 g KH2PO4, 1,402 g K2HPO4, 0,70 g MgSO4.7H2O, 0,014 g MnSO4.H2O, 0,014 g Fe2(SO4)3 a 28,04 g máčacej vody v 1300 ml vody z vodovodu sa nastavil na pH 6,5 pomocou 25% roztoku amoniaku a 20 minút sa sterilizoval v autokláve pri 121 °C. K tejto máčacej vode obsahujúcej roztok solí sa za sterilných podmienok pridal oddelene sterilné filtrovaný roztok, ktorý obsahoval v 100 g destilovanej vody 40,62 g glukózy a 0,0042 g tiamínu.HCl.
Fermentácia sa uskutočňovala 16 hodín pri 37 °C a za prevzdušňovania 1 vvm. Rozpustený kyslík sa udržiaval na 20 % a pri pH 6,5. Ako korekčný prostriedok pH sa použil 25% roztok amoniaku. Optická hustota mala hodnotu 13,1. 90 ml tejto kultúry sa použilo na naočkovanie 1144 ml rastového média na hlavnú fermentáciu v 21 laboratórnom fermentore typu Biostat® MD.
Rastové médium sa pripravilo nasledovne. Roztok skladajúci sa zo 14,14 g (ΝΗ4)23Ο4, 0, 744 g KH2PO4, 1,0 g K2HPO4, 0,83 g MgSO4.7H2O, 0,0124 g MnSO4.H2O, 18,87 g βalaninu, 0,74 Struktolu J647 a 49,72 g máčacej vody v 1144 ml vody z vodovodu sa nastavil na pH 6,5 pomocou 25% roztoku amoniaku a 20 minút sa sterilizoval v autokláve pri 121 °C. K tejto máčacej vode obsahujúcej roztok solí sa za sterilných podmienok pridal oddelene sterilné filtrovaný roztok, ktorý obsahoval v 100 ml destilovanej vody 35,92 g glukózy a 0,002 g tiamínu.HCl.
Fermentácia sa uskutočňovala 40 hodín pri 37 °C.
V rastovej fáze bolo pH 6,5 a prevzdušňovanie 1 vvm.
V produkčnej fáze bolo pH 6,0 a prevzdušňovanie 1,5 vvm. Rozpustený kyslík sa v obidvoch fázach udržiaval pod 2 %. Ako korekčný prostriedok pH sa použil 25% roztok amoniaku. Počas fermentácie sa produkčné médium 1 a produkčné médium 2 stupňovito vyživovalo. Máčacia voda sa počas kultivácie pridala jednorazovo. Produkčné médium obsahuje v 584 ml vody z vodovodu 465,29 g glukózy a 0,0261 d tiamínu.HCl, ktoré sa sterilné filtrovali. Produkčné médium 2 obsahuje 37,5 g βalanínu v 140 ml vody z vodovodu, ktorá sa sterilizovala v autokláve 20 minút pri 121^. Po fermentačnom čase 7,5 hodiny až do konca kultivácie sa produkčné médium 1 stupňovité vyživovalo. Po 10,5 hodiny kultivácie sa za sterilných podmienok pridalo dodatočne 49,5 g máčacej vody, ktorá bola rozpustená v 100 ml vody z vodovodu a sterilizovaná 20 minút pri 121 °C v autokláve. Po fermentačnom čase 12,5 hodiny až do ukončenia kultivácie sa produkčné médium 2 vyživovalo dávkovacou rýchlosťou 3,5 g/h. Po 41 hodinách kultivácie sa vo fermentačnej zápare zistila koncentrácia kyseliny pantoténovej 6,1 % hmotnostných.
Obsah kyseliny D-pantoténovej sa stanovil zariadením HPLC (vysokoúčinná kvapalinová chromatografia) typu M321 od firmy Knauer (Berlín, Nemecko) pomocou detekcie RI (index lomu) použitím Hypersil APS2 Aminophase s veľkosťou zŕn 5 μπι.
Príklad 2
Pri fermentačnom pokuse, ktorý sa uskutočnil za rovnakých podmienok, ako sa opisuje v príklade 1, sa mohla po 43 hodinách kultivácie dokázať vo fermentačnej zápare koncentrácia kyseliny pantoténovej 5,4 % hmotnostných. Koncentrácia L-valínu bola 8 g/1.
Príklad 3
Príprava D-pantotenátu vápenatého
Z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú, ktorá sa vyrobila spôsobmi podľa príkladov 1 a 2, a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej, sa najskôr oddelila biomasa. Za týmto účelom sa 1 1 vyššie uvedenej fermentačnej zápary odstreďoval 20 minút pri 4 000 ot./min v laboratórnej centrifúge typu Biofuge-Stratos od firmy Heraeus (Dusseldorf, Nemecko) a su^pernatant z odstreďovania sa potom ďalej čistil cross-flow ultrafiltráciou s polymérovou membránou 30kD v zariadení UF od firmy ICT GmbH (Bad Homburg, Nemecko).
Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 10,1 g tuhého Ca(OH)2 (96%; firma MERCK, Darmstadt, Nemecko). Hodnota pH potom bola približne 10,3. Takto spracovaná zápara sa potom za vákua pri 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) na podiel kvapaliny približne 50 % zo suchého podielu. Takto zahustená zápara sa potom sušila rozprašovaním na získanie vápenatej soli kyseliny D-pantoténovej. Na to sa použila laboratórna rozprašovacia sušiareň typu Buchi-190 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) pri vstupnej teplote 107 °C, výstupnej teplote 85 °C, tlakovom rozdieli -4000 Pa a rýchlosti prúdenia vzduchu 600 1/h.
Takto vyrobený produkt obsahujúci D-pantotenát vápenatý mal obsah kyseliny D-pantoténovej 68,5 % hmotnostných, bol sypký a mal sypnú hustotu 460 mg/ml. Po čase skladovania 5 mesiacov bol obsah kyseliny D-pantoténovej 67,6 % hmotnostných.
Príklad 4
Príprava D-pantotenátu sodného
Z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú, ktorá sa pripravila spôsobmi podlá príkladov 1 a 2, a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej, sa najskôr oddelila biomasa. Za týmto účelom sa 1 1 vyššie uvedenej fermentačnej zápary odstreďoval a ultrafiltroval tak, ako sa opisuje v príklade 3.
Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 10,6 g NaOH (99%; firma MERCK). Hodnota pH potom bola približne 10. Takto spracovaná zápara sa potom za vákua pri 50 až 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) na podiel kvapaliny približne 50 % zo suchého podielu. Takto zahustená zápara sa potom lyofilizovala na získanie sodnej soli kyseliny D-pantoténovej v lyofilizátore typu LYOVAC GT 2 od firmy Leybold (Kolín, Nemecko).
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát sodný mal obsah kyseliny D-pantoténovej 63,8 % hmotnostných a bol sypký. Po čase skladovania 5 mesiacov bol obsah kyseliny Dpantoténovej 63,0 % hmotnostných.
Príklad 5
Príprava D-pantotenátu horečnatého
Z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú, ktorá sa pripravila spôsobom podľa príkladov 1 a 2, a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej, sa najskôr oddelila biomasa. Za týmto účelom sa 1 1 vyššie uvedenej fermentačnej zápary odstreďoval a ultrafiltroval tak, ako sa opisuje v príklade 2.
Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 5,4 g tuhého MgO (97%; firma MERCK). Hodnota pH potom bola približne 9 až 10. Takto spracovaná zápara sa potom za vákua pri 50 až 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH na podiel kvapaliny približne 50 % zo suchého podielu. Takto zahustená zápara sa potom lyofilizovala na získanie horečnatej soli kyseliny Dpantoténovej v lyofilizátore typu LYOVAC GT 2 od firmy Leybold.
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát horečnatý mal obsah kyseliny D-pantoténovej 64,7 % hmotnostných a bol sypký. Po čase skladovania 5 mesiacov bol obsah kyseliny D-pantoténovej 64,4 % hmotnostných.
Príklad 6
Príprava D-pantotenátu draselného
Z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú, ktorá sa pripravila spôsobom podľa príkladov 1 a 2, a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténove j , sa najskôr oddelila biomasa. Za týmto účelom sa 1 1 vyššie uvedenej fermentačnej zápary odstred'oval a ultrafiltroval tak, ako sa opisuje v príklade 2.
Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 17,4 g KOH (85%; firma MERCK). Hodnota pH potom bola približne 10 až
11. Takto spracovaná zápara sa potom za vákua pri 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Bííchi-Labortechnik GmbH na podiel kvapaliny približne 50 % zo suchého podielu. Takto zahustená zápara sa potom lyofilizovala na získanie draselnej soli kyseliny D-pantoténovej v lyofilizátore typu LYOVAC GT 2 od firmy Leybold.
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát draselný mal obsah kyseliny D-pantoténovej 63,5 % hmotnostných a bol sypký. Po čase skladovania 5 mesiacov bol obsah kyseliny D-pantoténovej 62,9 % hmotnostných.
Príklad 7
Príprava D-pantotenátu amónneho
Z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú, ktorá sa pripravila spôsobom podľa príkladov 1 a 2 a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej, sa najskôr oddelila biomasa. Za týmto účelom sa 1 1 vyššie uvedenej fermentačnej zápary odstreďoval a ultrafiltroval tak, ako sa opisuje v príklade 2.
Takto spracovaná zápara sa potom za vákua pri 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH na podiel kvapaliny približne 50 % zo suchého podielu. Takto zahustená zápara sa potom lyofilizovala na získanie amónnej soli kyseliny D-pantoténovej v lyofilizátore typu LYOVAC GT 2 od firmy Leybold.
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát amónny mal obsah kyseliny D-pantoténovej 66,8 % hmotnostných a bol sypký.
Príklad 8
Príprava D-pantotenátu vápenatého z fermentačnej zápary obsahujúcej biomasu
Fermentačná zápara obsahujúca kyselinu pantoténovú, ktorá sa pripravila spôsobmi podľa príkladov 1 a 2, a ktorá obsahovala približne 6,1 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej, sa najskôr za vákua pri 60 °C zahustila v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) objem 1,0 1 na podiel kvapaliny približne 30 % zo suchého podielu. Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 10,1 g tuhého Ca(OH)2 (96%; firma MERCK, Darmstadt, Nemecko). Hodnota pH potom bola približne
10. Takto spracovaná a zahustená zápara obsahujúca biomasu sa potom na získanie vápenatej soli kyseliny D-pantoténovej sušila rozprašovaním. Na to sa použila laboratórna rozprašovacia sušiareň typu Buchi-190 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) pri vstupnej teplote 107 °C, výstupnej teplote 85 °C, tlakovom rozdieli -4000 Pa a rýchlosti prúdenia vzduchu 600 1/h.
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát vápenatý mal obsah kyseliny D-pantoténovej 49,8 % hmotnostných, bol sypký a a mal sypnú hustotu 480 mg/ml. Obsah biomasy bol približne 30 % hmotnostných.
Príklad 9
Príprava produktu obsahujúceho D-pantotenát vápenatý a biomasu Corynebacterium glutamicum
1. Príprava kmeňa Corynebacterium glutamicum produkujúceho kyselinu pantoténovú
V patentovom spise US-A-5,188,948 sa opisuje kmeň Brevibacterium lactofermentum FERM BP-1763 produkujúci Lvalín. Z DE 19855313.7 je známy plazmid pND-DBC2 (obrázok
1), ktorý nesie gény panB, panC a pnaD Corynebacterium glutamicum. Plazmid je uložený v Nemeckej zbierke mikroorganizmov a bunkových kultúr (Braunschweig, Nemecko) vo forme kmeňa ATCC13032/pND-DBC2 ako DSM 12437. Transformáciou kmeňa FERM BP-1763 plazmidom pND-DBC2 vznikol kmeň FERM BP1763/pND-DBC2 produkujúci kyselinu pantoténovú.
2. Príprava fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú
Vzorka Brevibacterium lactofermentum FERM ΒΡ-1763/pNDDBC2 sa rozotrie na agar HHK.
Agar HHK sa skladá z mozgovo-srdcového agaru, ktorý sa získal od firmy Merck KgaA (Darmstadt, Nemecko) a doplnil kanamycínom. Zloženie agaru HHK je uvedené v tabuľke 8a.
Táto kultúra z agarovej platne sa 17 hodín inkubovala pri 37 °C a potom uchovávala v chladničke pri +4 °C. Vybrané jednotlivé kolónie sa následne ďalej rozmnožovali na tom istom médiu. Pomocou očka sa bunkový materiál jedného klonu odobral z agaru HHK a preniesol do 100 ml bujónu HHK, ktorý sa nachádzal v pretrepávanej banke s celkovým objemom 1 000 ml.
Bujón HHK sa skladá z mozgovo-srdcového média, ktoré získalo od firmy Merck KgaA (Darmstadt, Nemecko) a doplnilo glukózou a kanamycínom. Zloženie bujónu HHK je uvedené v tabuľke 8b.
Tabuľka 8a: Agar HHK
| Látka | Množstvo na liter |
| Mozgovo-srdcový agar | 52,0 g |
| Kanamycín | 25 mg |
Tabuľka 8b: Bujón HHK
| Látka | Množstvo na liter |
| Mozgovo-srdcové médium | 37,0 g |
| Kanamycín | 25 mg |
| Glukóza | 20,0 g |
Vsádzka sa 22 hodín inkubovala pri 30 °C a 150 ot./min. Po ukončení kultivácie sa pomocou fotometra pri vlnovej dĺžke 660 nm (OD 660) namerala optická hustota 6,1. Táto kultúra kmeňa FERM BP-1763/pND-DBC2 sa použila na naočkovanie produkčného fermentora.
Na fermentáciu sa použilo médium SK-71 uvedené v tabuľke 8c. Všetky zložky média SK-71 sa predložili priamo zodpovedajúc pracovným koncentráciám vo fermentore a sterilizovali in situ.
Tabuľka 8c: Médium SK-1
| Zlúčenina | Množstvo na liter |
| Hydrát glukózy | 110,0000 g |
| Cornsteep Liquor (CSL) | 5,0000 g |
| β-Alanín | 5,0000 g |
| Kyselina nikotínová | 0,0050 g |
| L-Izoleucín | 0,1500 g |
| Homoserín | 0,1500 g |
| (NH4)2SO4 | 25,0000 g |
| kh2po4 | 0,1000 g |
| MgSO4.7H2O | 1,0000 g |
| FeSO4.7H2O | 0,0100 g |
| MnSO4.H2O | 0,0050 g |
| CaCl2.2H2O | 0,0100 g |
| Tiamín.HC1 | 0,0002 g |
| D-(+)-Biotín | 0,0003 g |
| Struktol | 0,60 g |
Ako fermentor sa použili miešacie reaktory s objemom 10 1 od firmy B. Braun (BBI, Nemecko, Melsungen, Modeli Biostat E/ED).
Na inokuláciu 1 950 g fermentačného média SK-71 sa použilo 100 ml vyššie opísanej predkultúry z pretrepávanej banky v bujóne HHK.
• Vsádzka sa kultivovala počas celého trvania fermentácie pri teplote 30 °C, objemovo špecifickom prevzdušňovaní 0,75 • vvm, miešaní 800 až’ 1 700 ot./min závislom od spotreby kyslíka a pH 7,0 a parciálnom tlaku kyslíka 20 % nasýtenia vzduchu. Kultúra sa celkom 49 hodín kultivovala za vyššie uvedených podmienok až do dosiahnutia optickej hustoty 26,2 pri 660 nm (OD660 nm). Ako korekčný prostriedok na reguláciu hodnoty pH sa použil vodný roztok amoniaku (25 % hmotnosť/objem)).
Následne sa stanovila optická hustota (OD) pomocou digitálneho fotometra typu LP1W od firmy Dr. Bruno Lange GmbH (Berlín, Nemecko) pri meracej vlnovej dĺžke 660 nm a koncentrácia vytvorenej kyseliny D-pantoténovej pomocou HPLC(Hypersil APS 2 5 pm, 250x5 mm, detekcia RI).
V konečnej fermentačnej vzorke sa po 49 hodinách namerala koncentrácia kyseliny D-pantoténovej približne 0,2 g/l.
‘ 3. Príprava produktu obsahujúceho kyselinu pantoténovú
Podľa spôsobu z príkladu 9.2 sa pripravila fermentačná zápara obsahujúca kyselinu D-pantoténovú s obsahom približne 0,02 % hmotnostných kyseliny D-pantoténovej. 1,4 1 tejto fermentačnej zápary sa najskôr za vákua zahustilo pri 60 °C v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-120 od firmy BuchiLabortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) na záparu s obsahom suchého podielu približne 15 %.
Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 27,1 g tuhého Ca(0H)2 (96%; firma MERCK, Darmstadt, Nemecko). Hodnota pH potom bola približne 10,0. Takto spracovaná a zahustená zápara obsahujúca biomasu sa potom zmiešala s 37,7 g D-pantotenátu vápenatého (viac ako 98%, Euro OTC Pharma GmbH, Kameň, Nemecko). Na nasledujúce sušenie rozprašovaním sa použila laboratórna rozprašovacia sušiareň typu Buchi-190 od firmy Bííchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) pri vstupnej teplote 107 °C, výstupnej teplote 85 °C, tlakovom rozdieli -4000 Pa a rýchlosti prúdenia vzduchu 600 1/h.
Takto vytvorený produkt obsahujúci D-pantotenát vápenatý mal obsah kyseliny D-pantoténovej približne 35 % hmotnostných, bol sypký a mal sypnú hustotu 600 mg/ml. Podiel biomasy C. glutamicum bol približne 3,5 % hmotnostného.
Príklad 10
Príprava produktu obsahujúceho D-pantotenát vápenatý a biomasu Saccharomyces cerevisiae
1. Príprava kmeňa Saccharomyces cerevisiae produkujúceho kyselinu pantoténovú
Amplifikácia čítacieho rastra YHR063c:
Vychádzajúc z nukleotidovej sekvencie čítacieho rastra YHR063c Saccharomyces cerevisiae (prírastkové číslo U00061 National Center for Biotechnology, Bethesda, MD, USA) sa syntetizovali nasledovné PCR-primery (MWG-Biotech, Ebersberg, Nemecko). Začiatok, poprípade koniec čítacieho rastra je označený bodkou (.):
• OJD539 (5' EcoRI-NotI ŠTART):
5'- GCG CGA ATT CAG ATC CGC GGC CGC AAA GAG GAG AAA TTA ACT.ATG ACT GCA CCA CAC AGA AG -3' • OJD540 (3' Spel-PstI STOP):
5'- CGC GAC TAG TCT GCA G.TC AGT CCT TTC TCC AGT CAC-3'
Ako templát slúžila genómová DNA kmeňa JD242 S. cerevisiae, ktorá sa izolovala podlá metódy od C. Guthrieho a G. R. Finka (Guide to yeast genetics and molecular biology, Methods in Enzymology, zv. 194, Academic Press, San Diego, CA, 1991). Tento kmeň je haploidným segregantom diploidného kmeňa SC288C (Winston et al., Yeast 11, 53 a ďalej, (1995)), ktorého genóm sa sekvencoval (Goffeau et al., Science 274, str. 546, (1996)). Tetradenová analýza sa uskutočňovala podlá metódy C. Guthrieho a G. R. Finka (Guide to yeast genetics and molecular biology, Methods in Enzymology, zv. 194, Academic Press, San Diego, CA, 1991). Kmeň JD242 je auxotrofný pre leucín (alela leu2Al) a uracil (alela ura352). Fragment DNA s velkosťou približne 1,2 kB sa mohol amplifikovať použitím kitu „High Fidelity Expand Polymerase od firmy Roche (Mannheim) 28 cyklami PCR za podmienok uvedených výrobcom. Velkosť sa stanovila elektroforetickým delením v 0,8% agarózovom géli.
2. Konštrukcia pJD-YHR063c:
Na expresiu čítacieho rastra YHR063c v S. cerevisiae sa vložil PCR-amplifikát do kyvadlového vektora pJDCEX2 E. coli
- S. cerevisiae (obrázok 2 a Dohmen at al., 1995, Journal of
Biological Chemistry 270, 18099-18109).
Produkt PCR sa najskôr restringoval pomocou EcoRI a Spel (AGS, Heidelberg, Nemecko). Následne sa zmiešal s pJDCEX2DNA, ktorá bola spracovaná EcoRI a Xbal (AGS, Heidelberg, Nemecko), a ligoval s T4-DNA-ligázou (Roche, Mannheim, Nemecko). Ligačná násada sa transformovala do kmeňa XLl-Blue E. coli (Bullock et al., 1987, Biotechniques 5, 376). Transformant sa získal selekciou na agare LB, ktorý obsahoval 150 μς/ιπΐ ampicilínu (Sigma, Diesenhofen, Nemecko) . Plazmidová DNA z klonov rezistentných na ampicilín sa preparovala alkalickou lýzou (Sambrook et al.: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Izolovaná plazmidová DNA sa potom skúmala reštrikciou pomocou Nôti a PstI a následným delením v 0,8% agarózovom géli. Plazmid so žiadanou štrukúrou dostal názov pJD-YHR063c (obrázok 3).
Príprava kmeňa JD242/pJD-YHR063c:
Kmeň JD242 S. cerevisiae sa transformoval plazmidom pJDYHR063c podľa metódy od Dohmena et al. (Dohmen et al,, Yeast 7, 691 (1991)). Selekcia transformantov sa uskutočňovala na minimálnom médiu SD bez leucínu s 1,8% agaru (viď tabuľka 9a a 9b) .
Tabuľka 9a: Minimálne médium SD
| Zlúčenina | Množstvo na liter |
| (NH4)2SO4 | 5 g |
| kh2po4 | 1 g |
| MgSO4.7H2O | 0,5 g |
| NaCl | 0,1 g |
| CaCl2 | 0,1 g |
| H3BO3 | 500 gg |
| CuSO4 | 40 gg |
| KI | 100 gg |
| FeCl3.6H2O | 200 gg |
| MnSO4. H20 | 400 gg |
| Na2Mo04.2H2O | 400 gg |
| ZnSO4.7H2O | 200 gg |
| Biotin | 2 gg |
| Kyselina folová | 2 gg |
| Inozitol | 2 mg |
| Niacin | 400 gg |
| Kyselina p-aminobenzoová | 200 gg |
| Pyridoxinhydrochlorid | 400 gg |
| Riboflavín | 200 gg |
| Tiamínhydrochlorid | 400 gg |
Tabuľka 9b: Minimálne médium SD
| Prísady | Množstvo na liter |
| Glukóza | 20 g |
| Uracil | 40 mg |
| CuSO4 | 24 mg |
| -Leu DO suplement | 650 mg |
| Ketopantoát | 100 mg |
| β-Alanín | 100 mg |
2. Príprava fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu pantoténovú
Na prípravu fermentačnej zápary obsahujúcej D-pantotenát sa najskôr naniesla jednotlivá kolónia kmeňa S. cerevisiae JD242/pJD-YHR063c na agarovú platňu s minimálnym médiom SD a inkubovala 3 dni pri 30 °C. Na prípravu tejto prvej predkultúry v pretrepávanej banke sa bunky následne prepláchli 5 ml minimálneho média SD. Pomocou 2,5 ml suspenzie buniek sa potom naočkovala pretrepávaná banka (celkový objem 500 ml) s 50 ml minimálneho média SD (tabuľka 9a a 9b) a kultivovala pri 30 °C a 130 ot./min v inkubátore RC-l-TK od firmy Infors AG (Bottmingen, Švajčiarsko) 6 hodín, až kým sa nemohla odmerať optická hustota 1,9 pri vlnovej dĺžke 660 nm (OD660). Druhá predkultúra sa vložila do 1000mi banky s priehradkami v 150 ml minimálneho média SD (tabuľka 9a a 9b) a naočkovala 50 ml vyššie opísanej predkultúry. Inkubácia sa uskutočňovala pri 30 °C a 80 ot./min 20 hodín, až kým optická hustota nedosiahla hodnotu približne 3,8 pri vlnovej dĺžke 660 nm (OD 660). Hlavná fermentácia na produkciu kyseliny pantoténovej sa uskutočňovala v banke s guľatým dnom s celkovým objemom 6000 ml v 1 500 ml minimálneho média SD (tabuľka 9 a a 9b). Na to sa banka s guľatým dnom naočkovala 90 ml predkultúry 2 a následne sa pri 30 °C a 60 ot./min inkubovala 30 hodín.
Optická hustota (OD) sa odmerala digitálnym foťometrom typu LP1W od firmy Dr. Bruno Lange GmbH (Berlín, Nemecko) pri meracej vlnovej dĺžke 660 nm. Stanovenie koncentrácie vytvorenej kyseliny D-pantoténovej sa uskutočňovalo pomocou kmeňa Lactobacillus plantarum ATCC® 8014 podľa údajov príručky „DIFCO MANUAL firmy DIFCO (Michigan, USA;, 10th Edition, 1100-1102 (1984)).
Optická hustota (OD660) bola približne 4 a obsah kyseliny D-pantoténovej približne 1 mg/1.
3. Príprava produktu obsahujúceho kyselinu pantoténovú
Fermentačná zápara obsahujúca kyselinu pantoténovú s obsahom približne 1 mg/ml kyseliny D-pantoténovej sa pripravila spôsobom podľa príkladu 10.2. Objem 6,0 1 sa najskôr za vákua pri 60°C zahustil v rotačnej odparke typu Rotavapor RE-151 od firmy Buchi-Labortechnik GmbH (Konstanz, Nemecko) na záparu s približne 16 % suchého podielu. Potom sa za miešania s prestávkami pridávalo 15,9 g tuhého Ca(OH)2 (96%; firma MERCK, Darmstadt, Nemecko). Hodnota pH potom bola približne 9,2. Takto spracovaná a zahustená zápara obsahujúca biomasu sa potom zmiešala s 28,4 g D-pantotenátu vápenatého (viac ako 98 %, Euro OTC Pharma GmbH, Kameň, Nemecko). Zápara sa potom lyofilizovala v lyofilizátore typu LYOVAC GT 2 od firmy Leybold (Kolín, Nemecko).
Takto pripravený produkt obsahujúci D-pantotenát vápenatý mal obsah kyseliny D-pantoténovej 26,5 % hmotnostných, bol sypký a mal sypnú hustotu 450 mg/ml. Podiel biomasy S. cerevisiae bol približne 6,8 % hmot-nostných.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Priložené sú nasledovné obrázky:
Obrázok 1: Mapa plazmidu pND-DBC2
Obrázok 2: Mapa plazmidu pJDCEX2
Obrázok 3: Mapa plazmidu pJD-YHR063c
Skratky použité na obrázkoch majú nasledovný význam:
| K obrázku | 1: |
| rrnBTlT2: | Transkripčný terminátor génu rrnB |
| Ptac: | tac-promótor |
| panB: | kódujúca oblasť génu panB |
| panC: | kódujúca oblasť génu panC |
| panD: | kódujúca oblasť génu panD |
| rep-C.g.: | oblasť DNA na replikáciu v C.glutamicum |
| oriV-E.c. | : počiatok pre vegetatívny transfer v E. Coli |
| kan: | gén rezistencie na kanamycín |
| BglII: | miesto strihu reštrikčného enzýmu BglII |
| Clal: | miesto strihu reštrikčného enzýmu Clal |
| Ncol: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Ncol |
| Nrul: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Nrul |
| Pvul: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Pvul |
| Sací: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Sací |
| Sali: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Sali |
| Scal: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Scal |
| Sphl: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Sphl |
| Xhol: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Xhol |
K obrázku 2 a 3:
LEU2: gén beta-izopropylmalátdehydrogenázy
Sa echa romyces cerevisiae
| 2μ: | sekvencie endogénneho plazmidu 2μ Saccharomyces cerevisiae |
| ApR: | gén beta-laktamázy |
| P-CUP1: | promótor génu CUP1 Saccharomyces cerevisiae (metalotionein) |
| T-CYC1: | terminátor génu CYC1 (cytochróm C) Saccharomyces cerevisiae |
| SD: | Shineho-Dalgarnova sekvencia |
3¼
| EcoRI: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | EcoRI |
| Nôti: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Nôti |
| Spel: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Spel |
| Xbal: | miesto | strihu | reštrikčného | enzýmu | Xbal |
Claims (14)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Krmivové prísady pre zvieratá obsahujúce kyselinu Dpantoténovú a/alebo jej soli na báze fermentačnej zápary, vyznačujúce sa tým, žea) obsahujú kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli,b) obsahujú biomasu, vytvorenú počas fermentácie mikroorganizmov produkujúcich kyselinu D-pantoténovú, v množstve 0 až 100 % ac) obsahujú aspoň prevažnú časť ďalších zložiek fermentačnej zápary ad) existujú v tuhej, jemnozrnnej alebo granulovanej sypkej forme.
- 2. Krmivové prísady pre zvieratá podlá nároku ^vyznačujúce sa tým, že obsahujú jednu alebo viac solí vybraných zo súboru zahŕňajúceho sodnú, draselnú, amónnu, horečnatú alebo vápenatú sol kyseliny D-pantoténovej.
- 3. Krmivové prísady pre zvieratá podlá nároku 1 alebo2, vyznačujúce sa tým, že obsahujú kyselinu D-pantoténovú a/alebo jednu z jej solí v množstve väčšom ako 0, najmä 20 až 80 % hmotnostných (sušina).
- 4. Krmivové prísady pre zvieratá podlá nároku ^vyznačujúce sa tým, že existujú vo forme sušenej rozprašovaním alebo granulovanej rozprašovaním.
- 5. Krmivové prísady pre zvieratá podlá jedného alebo viacerých z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúce sa t ý m , že prídavné obsahujú jednu alebo viac L-aminokyselín vybraných zo súboru zahŕňajúceho L-metionín, Llyzín, L-valín, L-treonín, L-alanín a L-tryptofán.
- 6. Spôsob výroby krmivových prísad obsahujúcich kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli podľa nárokov 1 až 5 z fermentačných zápar, vyznačujúci sa tým, že saa) z fermentačnej zápary obsahujúcej kyselinu Dpantoténovú a/alebo jej soli poprípade úplne alebo čiastočne oddelí biomasa a/alebo časť ďalších zložiek,b) takto získaný roztok, poprípade zápara sa zmieša í hydroxidom alebo oxidom kovu alkalických zemín alebo alkalického kovu ac) takto získaná zmes sa suší alebo suší rozprašovaním, granuluje rozprašovaním alebo granuluje.
- 7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že sa pridáva oxid alebo hydroxid vybraný zo súboru zahŕňajúceho sodné, draselné, amónne, horečnaté a vápenaté zlúčeniny, v stechiometrickom pomere 0,8 až 1,2, najmä 0,95 až 1,1 vzhľadom na kyselinu D-pantoténovú.
- 8. Spôsob výroby krmivových prísad obsahujúcich kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej sodnú, draselnú, amónnu, horečnatú alebo vápenatú soľ podľa nárokov 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že saa) z fermentačnej zápary získanej použitím žiadaných hydroxyzlúčenín obsahujúcej Dpantotenát poprípade úplne alebo čiastočne oddelí biomasa a/alebo časť zložiek,b) takto získaná zmes sa skoncentruje najmä odstránením vody ac) krmivová prísada obsahujúca príslušný pantotenát sa získa v tuhej forme sušením, sušením rozprašovaním alebo granuláciou rozprašovaním.
- 9. Spôsob výroby krmivových prísad pre zvieratá s obsahom kyseliny D-pantoténovej a/alebo jej sodnej, draselnej, amónnej, horečnatej alebo vápenatej soli v rozsahu približne 20 až 80 % hmotnostných (sušina) z fermentačných zápar, vyznačujúci sa týmito krokmia) prednostne odstránením vody z fermentačnej zápary (skoncentrovanie),b) poprípade odstránením biomasy, vytvorenej počas fermentácie, v množstve 0 až 100 %,c) pridaním jednej alebo viacerých uvedených zlúčenín k fermentačným záparám získaným podľaa) a b), pričom množstvo pridaných zlúčenín je odmerané tak, aby ich celková koncentrácia v krmivovej prísade pre zvieratá bola v rozsahu približne 20 až 80 % hmotnostných, ad) sušením fermentačnej zápary získanej podľa c), aby sa získala krmivová prísada pre zvieratá v žiadanej práškovej alebo granulátovej forme.
- 10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že sa fermentačná zápara pred alebo po prednostne uskutočnenom skoncentrovaní zmieša s oxidom alebo hydroxidom uvedených alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín.
- 11. Spôsob podľa nárokov 6 až 9, vyznačujúci sa t ý m , že sa pri fermentácii používajú plesne alebo kvasinky.
- 12. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že sa k poprípade skoncentrovanej fermentačnej zápare pridá jedna alebo viac L-aminokyselín vybraných zo súboru zahŕňajúceho L-lyzín, L-valín, L-alanín, L-treonín a L-tryptofán.
- 13. Spôsob podľa nárokov 6 až 11, vyznačuj úci sa t ý m , že sa pri fermentácii používajú baktérie rodu Corynebacterium.
- 14. Spôsob podľa nárokov 6 až 11, vyznačuj úci sa t ý m , že sa pri fermentácii používajú baktérie čeľade Enterobacteriaceae.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19920507 | 1999-05-05 | ||
| DE10016321A DE10016321A1 (de) | 1999-05-05 | 2000-03-31 | D-Pantothensäure und/oder deren Salze enthaltende Futtermittel-Additive und Verfahren zu deren Herstellung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK6452000A3 true SK6452000A3 (en) | 2001-03-12 |
| SK283900B6 SK283900B6 (sk) | 2004-04-06 |
Family
ID=26005147
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK645-2000A SK283900B6 (sk) | 1999-05-05 | 2000-05-02 | Krmivové prísady obsahujúce kyselinu D-pantoténovú a/alebo jej soli a spôsob ich výroby |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1050219B1 (sk) |
| JP (1) | JP2000325024A (sk) |
| KR (1) | KR20010029688A (sk) |
| CN (1) | CN1276981A (sk) |
| AT (1) | ATE227938T1 (sk) |
| BR (1) | BR0002297A (sk) |
| DK (1) | DK1050219T3 (sk) |
| ES (1) | ES2188442T3 (sk) |
| HU (1) | HUP0001772A3 (sk) |
| ID (1) | ID25885A (sk) |
| IL (1) | IL135956A (sk) |
| MX (1) | MXPA00004310A (sk) |
| PT (1) | PT1050219E (sk) |
| RU (1) | RU2245628C2 (sk) |
| SK (1) | SK283900B6 (sk) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10032349A1 (de) | 2000-07-04 | 2002-01-17 | Degussa | Rieselfähige D-Pantothensäure und/oder deren Salze enthaltende Futtermittel-Additive und Verfahren zu deren Herstellung |
| CA2422817A1 (en) * | 2000-09-20 | 2003-03-19 | Basf Aktiengesellschaft | Animal feed supplement containing d-pantothenic acid and/or its salts, improved method for the production thereof, and its use |
| DE10106461A1 (de) | 2001-02-13 | 2002-08-14 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| DE10106459A1 (de) * | 2001-02-13 | 2002-08-14 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| DE10106460A1 (de) * | 2001-02-13 | 2002-08-14 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| DE10108223A1 (de) | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| DE10108225A1 (de) * | 2001-02-21 | 2002-10-10 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salze als Zusatz zu Tierfuttermitteln |
| CZ20032244A3 (cs) * | 2001-02-21 | 2003-11-12 | Basf Aktiengesellschaft | Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv |
| PL364087A1 (en) * | 2001-02-21 | 2004-12-13 | Basf Aktiengesellschaft | Method for the production of d-pantothenic acid and/or salts thereof as adjunct for animal feedstuffs |
| US6623944B2 (en) | 2001-03-14 | 2003-09-23 | Degussa Ag | Process for preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
| DE10128780A1 (de) * | 2001-06-13 | 2002-12-19 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen |
| EP1672073A1 (en) * | 2001-07-07 | 2006-06-21 | Degussa AG | Process for the preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
| US7338792B2 (en) | 2001-07-07 | 2008-03-04 | Degussa Ag | Process for the preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof |
| EP1564284A1 (en) | 2004-02-11 | 2005-08-17 | Urea Casale S.A. | A culture medium for the production of filamentary fungi |
| JP4849806B2 (ja) * | 2005-02-08 | 2012-01-11 | 日本水産株式会社 | 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
| US8241868B2 (en) | 2005-02-08 | 2012-08-14 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Production of polyunsaturated fatty acids using cell treatment method |
| WO2015073770A1 (en) * | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Archer Daniels Midland Company | Methods of feeding animals fermentation cell mass |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB598177A (en) * | 1943-08-26 | 1948-02-12 | Commercial Solvents Corp | Improvements in or relating to process for the production of pantothenic acid |
| GB784434A (en) * | 1954-04-30 | 1957-10-09 | Merck & Co Inc | Stabilization of feedstuff supplements |
| JPS61204176A (ja) * | 1985-03-06 | 1986-09-10 | Kuraray Co Ltd | Ｄ−（−）−パントラクトンの製造方法 |
| EP0493060A3 (en) * | 1990-12-25 | 1993-04-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production method of d-pantothenic acid and plasmids and microorganisms thereof |
| EP0822989B1 (en) * | 1995-04-21 | 2001-03-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Process for producing calcium d-pantothenate |
| US5932457A (en) * | 1995-09-13 | 1999-08-03 | Takeda Chemical Industries, Ltd | Process for producing D-pantoic acid and D-pantothenic acid or salts thereof |
| KR20000024835A (ko) * | 1998-10-02 | 2000-05-06 | 민경우 | 키토산 올리고당이 함유된 사료첨가용 영양제조성물 |
-
2000
- 2000-04-26 PT PT00108826T patent/PT1050219E/pt unknown
- 2000-04-26 ES ES00108826T patent/ES2188442T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-26 AT AT00108826T patent/ATE227938T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-04-26 EP EP00108826A patent/EP1050219B1/de not_active Revoked
- 2000-04-26 DK DK00108826T patent/DK1050219T3/da active
- 2000-05-01 JP JP2000132558A patent/JP2000325024A/ja active Pending
- 2000-05-02 SK SK645-2000A patent/SK283900B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-05-03 MX MXPA00004310A patent/MXPA00004310A/es unknown
- 2000-05-03 IL IL13595600A patent/IL135956A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-05-04 HU HU0001772A patent/HUP0001772A3/hu unknown
- 2000-05-04 RU RU2000110889/13A patent/RU2245628C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-05-04 ID IDP20000370A patent/ID25885A/id unknown
- 2000-05-04 KR KR1020000023984A patent/KR20010029688A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-05-05 BR BR0002297-7A patent/BR0002297A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-05-08 CN CN00106198A patent/CN1276981A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2188442T3 (es) | 2003-07-01 |
| ATE227938T1 (de) | 2002-12-15 |
| RU2245628C2 (ru) | 2005-02-10 |
| EP1050219A1 (de) | 2000-11-08 |
| DK1050219T3 (da) | 2003-03-17 |
| HU0001772D0 (en) | 2000-07-28 |
| BR0002297A (pt) | 2001-05-22 |
| ID25885A (id) | 2000-11-09 |
| CN1276981A (zh) | 2000-12-20 |
| PT1050219E (pt) | 2003-04-30 |
| KR20010029688A (ko) | 2001-04-06 |
| JP2000325024A (ja) | 2000-11-28 |
| EP1050219B1 (de) | 2002-11-20 |
| SK283900B6 (sk) | 2004-04-06 |
| IL135956A0 (en) | 2001-05-20 |
| MXPA00004310A (es) | 2004-10-28 |
| HUP0001772A2 (hu) | 2001-12-28 |
| HUP0001772A3 (en) | 2002-03-28 |
| IL135956A (en) | 2003-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6238714B1 (en) | Feedstuff additive which contains D-pantothenic acid and/or its salts and a process for the preparation thereof | |
| SK6452000A3 (en) | Feed additive containing d-pantothenic acid and/or its salts and method for their preparation | |
| JP5966016B2 (ja) | Ｌ−アミノ酸及びリボフラビンを同時に生産する微生物及びそれを用いたｌ−アミノ酸及びリボフラビンの生産方法 | |
| RU2271120C2 (ru) | Содержащая лизин добавка к кормам для животных и способ ее получения | |
| US6319528B1 (en) | Feedstuff additive which contains D-pantothenic acid and/or its salts and a process for the preparation thereof | |
| US6582939B1 (en) | Process for the preparation of alkaline earth salts of D-pantothenic acid | |
| DE60206622T2 (de) | Verfahren zur herstellung von d-pantothensäure und/oder deren salzen | |
| US20040050335A1 (en) | Animal feed supplement containing d-pantothenic acid and/or its salts, improved method for the production thereof, and its use | |
| EP1296566B1 (en) | Pourable feed additives containing d-pantothenic acid and/or salts thereof, and process for their preparation | |
| CZ20001546A3 (cs) | Krmivové přísady obsahující D-pantotenovou kyselinu a/nebo její soli a způsob její výroby | |
| EP1430139B1 (en) | Process for the preparation of d-pantothenic acid and/or its salts | |
| DE60208015T2 (de) | Verfahren zur fermentativen herstellung von d-pantothensäure und/oder deren salzen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Assignment and transfer of rights |
Owner name: DEGUSSA GMBH, DUESSELDORF, DE Free format text: FORMER OWNER: DEGUSSA AG, DUESSELDORF, DE Effective date: 20100701 |
|
| TC4A | Change of owner's name |
Owner name: EVONIK DEGUSSA GMBH, DUESSELDORF, DE Effective date: 20100701 |
|
| TE4A | Change of owner's address |
Owner name: EVONIK DEGUSSA GMBH, ESSEN, DE Effective date: 20100701 |
|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20180502 |