SK4662001A3 - Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway - Google Patents
Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway Download PDFInfo
- Publication number
- SK4662001A3 SK4662001A3 SK466-2001A SK4662001A SK4662001A3 SK 4662001 A3 SK4662001 A3 SK 4662001A3 SK 4662001 A SK4662001 A SK 4662001A SK 4662001 A3 SK4662001 A3 SK 4662001A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- beta
- receptor
- agent
- ligand
- cells
- Prior art date
Links
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 title claims description 12
- 102000003959 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 title claims description 11
- 230000035939 shock Effects 0.000 title abstract description 17
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 title abstract description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 title abstract 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 title description 4
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims abstract description 56
- 230000005860 defense response to virus Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 33
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 30
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 30
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 28
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 28
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 28
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 claims description 7
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 7
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 claims description 6
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 claims description 6
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 102000018170 Lymphotoxin beta Receptor Human genes 0.000 claims 5
- 108010091221 Lymphotoxin beta Receptor Proteins 0.000 claims 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 24
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 45
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 34
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 12
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 11
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 241000150288 Sin Nombre orthohantavirus Species 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 101000764294 Homo sapiens Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 3
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 3
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 3
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanehydrazide Chemical compound C1=CC(CCCC(=O)NN)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000801228 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102100026894 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 2
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000005033 mesothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-5-ethoxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000764535 Homo sapiens Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 229940123038 Integrin antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000003194 amino acid receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940000986 dextran 110 Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 102000018823 fas Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010052621 fas Receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 210000000285 follicular dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 231100000405 induce cancer Toxicity 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229940076372 protein antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/16—Central respiratory analeptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
- C07K16/242—Lymphotoxin [LT]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Description
Použitie činidla, ktoré blokuje väzbu lymfotoxínu-beta na jeho receptor, na výrobu protivírusového lieku
Toto je prihláška, ktorá čiastočne pokračuje z doterajšej prihlášky USA č. 60/103 662 podanej 9. októbra 1988. Celý obsah predtým podanej patentovej prihlášky je zahrnutý formou odkazu v predkladanej prihláške.
Oblasť techniky
Tento vynález sa všeobecne týka spôsobu indukcie protivírusovej odpovede jedinca. Tento vynález poskytuje hlavne spôsoby liečenia systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti jedinca vyvolaných vírusmi. Spôsob zahŕňa podávanie určitých prípravkov blokujúcich lymfotoxín beta.
Doterajší stav techniky
Niektoré vírusy, vrátane Sin Nombre (SNV), Ebola, Marburg, Lassa a Dengue, spôsobujú akútne ochorenia s mnohými z nasledujúcich symptómov: rýchle prepuknutie choroby, horúčka, systémový šok a respiračná nedostatočnosť (Lacy et al., 1997, Dv. Ped. Inf. Dis., 12, 21). Väčšina týchto novo objavujúcich sa vírusov, s výnimkou SNV, bola po prvý krát identifikovaná v posledných desaťročiach. Po rokoch po ich objave sa tieto patogény znovu objavili pri vzplanutí celosvetových epidémií. Od júna 1998 sa na juhozápade USA vyskytlo 183 potvrdených prípadov SNV, kauzatívneho agensu hantavírusového syndrómu pľúcneho šoku, ktorý bol zapríčinený nárastom populácie škrečka dlhochvostého. Iba v 55 % týchto prípadov pacienti infekciu prežili (Centers for Disease ·· · ·· ·· ·· • · · · ··· ··· • · · · · ··· · · • · · 9 · ·· ··· · • · · ···· ·· ·· ··· ·· ·· ·· «
Control and Prevention, NMWR. 47, 1998). Doteraz je iba málo známe o patognéze týchto vírusov a o tom, ako účinne liečiť tisíce pacientov každoročne infikovaných na celom svete, ktorí ochorejú systémovým šokom vyvolaným vírusmi a respiračnou nedostatočnosťou.
Preto je potrebné nájsť nové spôsoby liečby vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti jedinca.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález rieši uvedený problém tým, že poskytuje farmaceutické prípravky vhodné na liečbu vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti u jedinca.
Použitie a prípravky podlá tohto vynálezu čiastočne využívajú zistenie, že určité prípravky, tu definované ako prípravky blokujúce lymfotoxín beta (LT-B), môžu byť použité pri liečbe vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti jedinca.
V jednej podobe je prípravok blokujúci receptor LT-B prípravok blokujúcim receptor lymfotoxínu beta (LT-B-R). Vo výhodnejšej podobe je LT-B-R protilátka proti receptoru lymfotoxínu-B alebo rozpustný receptor lymfotxínu-B. V najvýhodnejšej podobe je prípravok blokujúci LT-B-R rekombinantný fúzny proteín LT-B-R, ktorý obsahuje extracelulárnu väzbovú doménu ligandu LT-B-R fúzovanú s konštantnou doménou ťažkého reťazca imunoglobulínu.
Uvedené a ďalšie ciele, charakteristiky, aspekty a výhody predkladaného vynálezu, ako aj samotný vynález, budú plne pochopené z nasledujúceho opisu výhodných foriem.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok č. 1 znázorňuje, že infekcia myší NZB klonom 13 LCMV ·· · ·· ·· • · ·· · · · • · · · · ··· ·· • · · ·· ··· ·· ·· má za následok ich úmrtnosť. Krivka úmrtnosti myší NZB infikovaných
LCM-13 (n = 14) a vírusové titre rôznych tkanív LCMV-13 (n = 7) šesť dní po infekcii.
Obrázok č. 2 znázorňuje histologický profil infekcie LCM-13 u myší NZB. (A) normálne pľúca (ΙΟΟχ, H+E) (B) intersticiálna pneumotída s infiltrátmi mononukleárnych buniek a hrubnutie alveolárnych stien v pľúcach, 5 dní po infekcii (lOOx, H+E) (C) Lymfoidná deplécia, bunková nekróza a obliterácie folikulárnej architektúry v slezine (25x, H+E) (D) väčšie zväčšenie znázorňujúce bunkovú nekrózu a karyorektické zvyšky v slezine (158x, H+E) (E) LCMV-13 pozitívne endotelové bunky (šípky) a makrofágy (biele šípky) v pľúcach (lOOx, IHC) (F) LCMV-13 pozitívne mezotelové bunky (šípky), mezotelové bunky (hlavičky šípok) a makrofágy (biele šípky) v slezine (50x, IHC) (H) LCMV-13 pozitívne Kupfferove bunky a sínusoidné lemujúce bunky v pečeni (lOOx, IHC).
Obrázok č. 3 ukazuje, že blokáda LTbetaR signálnych dráh výrazne zlepšuje prežitie myší NZB infikovaných klonom 13. Sú tu uvedené krivky úmrtnosti pre myši NZB infikované klonom 13 ošetrené tak ako je opísané. Myšiam NZB bolo podané 2,5 x 106 pfu Cl 13 i.v., potom nasledovali dve i.p. injekcie obsahujúce 250 pg protilátky TN3-19.12 v PBS bez endotoxínu (pozri odkaz S) v dňoch 1 a 4 po infekcii. Kontrolným myšiam boli podané proteíny TNFR555-Ig a LTbetaR-Ig v dni 0 a 3 po infekcii, i.p., v množstve 200 pg. Kontrolným myšiam bola podaná ľudská protilátka používaná pri syntéze týchto fúzovaných proteínov (AY1943-29) v tých istých dňoch v rovnakom množstve. Myši, ktoré dostávali iba LTbetaR-Ig boli ošetrené rovnako, okrem toho, že sa vynechali injekcie TNFR55-Ig. Dáta sa zbierali z niekoľkých pokusov, samotný anti-TNF (TN319.12), n = 16 pre samotný LTbetaR-Ig, n = 10 pre trojité ošetrovanú skupinu, n = 22 pre samotný LTbetaR-Ig, n = 10 pre skupinu s LTbetaR-Ig + TNFR55-Ig, n = 5 pre skupinu ošetrenú anti4 • · ·· • ·
·· • · · • · ··
TNF a TNFR55-Ig, n = 6 pre samotný anti-TNF (TN3-19.12) a n = 25 pre kontroly).
Obrázok č. 4 ukazuje, že blokáda LTbetaR dráhy má za následok zníženie funkcie CD8 buniek. Splenocyty z myší v rôzne ošetrených skupinách sa odobrali v deň 6 po injekcii a zafarbili s Ld tetramérom obsahujúcim NP118 9-mér peptid, ako už bolo opísané. Dané hodnoty sú upravené podlá nešpecifického farbenia pozadia. Aby sa monitorovala produkcia interferónu gama ako reakcie na rovnaký peptid, boli bunky inkubované 5 hodín pri 37 °C v prítomnosti NNP118 v konečnej koncentrácii 0,1 pg/ml a IL-2. Hodnoty tu uvedené sú upravené podľa hodnôt pozadia bez peptidu. Splentocyty sa zlúčili od troch myší ošetrených kontrolným ľudským Ig, rovnako aj spenocyty od dvoch myší s LTbetaR-Ig (LT beta č. 2/3). Všetky ďalšie výsledky sú od jednotlivých myší.
Obrázok č. 5 ukazuje, že deplécia CD8+ T buniek, nie CD4+ T buniek, odvracia letálne účinky infekcie LSMV-13 na myši NZB. Myši boli ošetrené tak, ako je opisné pri dplécii bunkových populácií in vivo. Pre každú z ošetrených skupín (n = 4) je uvedená krivka úmrtnosti.
Definície
Na jasnejší a presnejší opis predmetu vynálezu sú uvedené nasledujúce definície špecifických termínov použitých v opise vynálezu a v patentových nárokoch.
Lymfotoxín-beta (LT-beta) patrí medzi ligandy rodiny TNF, kam patria aj ďalšie ligandy ako napr. ligandy receptorov Fas, CD27, CD30, CD40, OX-40 a 4-1BB (Smith et al., Celí 76, 959-62, 1994). Signálna dráha zahŕňajúca niekolko členov rodiny TNF, vrátane TNF, LT-alfa, LT-beta a Fas, môže indukovať odumieranie rakovinových buniek nekrózou alebo apoptózou (tzv. programovanou smrťou bunky).
·· · ·· ·· ·· ···· ··· ··· • · · · ··· · · • · · · · · · · · · • · · ······ ·· ··· ·· ·· ·· ·
U buniek, ktoré nie sú tumorogénne, TNF a mnohé ďalšie interakcie ligand-receptor patriace do rodiny TNF ovplyvňujú vývoj imunitného systému a reakciu na rôzne imunitné podnety.
Lymfotoxín-beta (nazývaný tiež p33) bol identifikovaný na povrchu T lymfocytov, T bunkových línií, B bunkových línií a lymfokínom aktivovaných zabíjačských buniek (LAK, lymphokineactivated killer cells). LT-beta je predmetom súčasne prejednávaných medzinárodných patentových prihlášok PCT/US91/04588 publikovanej 9. januára 1992 ako WO 92/00329, a PCT/US93/11669, publikovanej 23. júna 1994 ako WO 94/13808, ktoré sú formou odkazu súčasťou predkladanej prihlášky.
LT-beta receptor (LT-beta-R,), člen receptorovej rodiny TNF, sa špecificky viaže na povrchové LT ligandy. LT-beta-R viaže LT heteromérne komplexy (hlavne LT-alfal/beta2 a LT-alfa2/betal), ale neviaže TNF alebo LT-alfa (Crowe t al., Science 264, 707-10, 1994). Signalizácia sprostredkovaná LT-beta-R hrá úlohu pri vývoji periférnych lymfoidných orgánov a humorálnej imunitnej reakcii.
mRNA pre LT-beta-R s vyskytuje v ľudskej slezine, týmuse a ďalších hlavných orgánoch. Profil expresie LT-beta-R je podobný ako profil expresie publikovaný pre p55-TNF-R, s výnimkou toho, že LTbetaR nie je na T bunkách periférnej krvi a bunkách T bunkových línií.
Termín činidlo blokujúce LT-beta označuje také činidlo, ktoré zoslabuje väzbu ligandu na LT-beta, zhlukovanie LT-beta na bunkovom povrchu alebo signálnu dráhu LT-beta, alebo ktorá spôsobí zmenu v tom, ako je signál LT-beta interpretovaný v bunke. K príkladom činidiel blokujúcich LT-beta patrí anti-LT-beta, rozpustné molekuly LT-beta-R-Fc a protilátky anti-LT-alfa/beta a anti-LT-beta-R. Výhodné protilátky nereagujú krížovo so ·· · ·· ·· ·· • · ·· ··· ··· • · · · · ··· · · •J ······«·· • · · ······ ·· ··· ·· ·· ·· · sekretovanou formou LT-alfa.
Termín činidlo blokujúce LT-beta-receptor označuje také činidlo, ktoré naruší väzbu ligandu k LT-beta-R, zhlukovnie LTbeta-R na bunkovom povrchu alebo signalizáciu LT-beta-R, alebo ktoré ovplyvní to, ako je signál LT-beta-R interpretovaný v bunke. Príkladom činidla blokujúceho LT-beta-R sú rozpustné molekuly LTbeta-R-Fc a protilátky anti-LT-beta-R. Vhodné protilátky nereagujú krížovo so sekretovanou formou LT-alfa.
Termín protilátka anti-LT-beta receptor opisuje akúkoľvek protilátku, ktorá sa špecificky viaže k aspoň jednému epitopu receptoru LT-beta.
Termín protilátka anti-LT opisuje akúkoľvek protilátku, ktorá sa špecificky viaže k aspoň jednému epitopu LT-alfa, LT-beta alebo komplexu LT-alfa/beta.
Termín LT ligand označuje heteromérny komplex LT alebo jeho derivát, ktorý sa špecifcky viaže na receptor LT-beta
Termín signálna dráha LT-beta-R alebo stručne signalizácia LT-beta-R označuje molekulárne reakcie spojené s celou metabolickou dráhou prenosu signálu LT-beta-R a ďalšie molekulárne reakcie, ktoré na ňu navázujú.
Termín väzbová doména pre LT-beta-R ligand opisuje časť alebo časti LT-beta-R, ktorá(é) sa zúčastňujú špecifického rozpoznávania a interakcie s LT ligandom.
Termíny LT-alfa/beta heteromérny komplex a LT heteromérny komplex opisujú stabilné spojenie aspoň jednej podjednotky LT-alfa jednej lebo viacerých podjednotiek LT-beta, vrátane rozpustných, mutovaných, zmenených a chimérnych foriem jednej alebo viacerých podjednotiek. Podjednotky sa spojujú elektrostatickými, van der
Ί ·· · ·· ·· • · ·· · · · • · · · · ··· ·· • · · • · ·· ··· ·· ·· ·· ·
Waalsovými alebo kovalentnými interakciami. Heteromérny komplex LTalfa/beta2 má zvýhodnené aspoň dve priľahlé podjednotky LT-beta a nemá priľahlú podjednotku LT-alfa. Keď heteromérny komplex LTalfa/beta slúži ako činidlo aktivujúce LT-beta-R v teste bunkového rastu, je komplex výhodne rozpustný a má stechiometriu LTalfal/beta2.
Rozpustné heteromérne komplexy LT-alfa/beta nemajú transmembránovú doménu, môžu byť sekretované vhodnou hostiteľskou bunkou, ktorá bola upravená metódami génového inžinierstva tak, aby exprimovala podjednotky LT-alfa a/alebo LT-beta (Crowe et al., J. Immunol. Methods 168: 79-89, 1994).
Termíny povrchový komplex LT-alfa/beta2 a povrchový LT komplex označujú komplex, ktorý obsahuje podjednotky LT-alfa a podjednotky LT-beta viazané na membránu, vrátane mutovaných, pozmenených a chimérických foriem jednej alebo viacerých podjednotiek, pričom tento komplex je viazaný na povrchu bunky. Povrchový LT ligand znamená povrchový LT komplex alebo jeho derivát, ktorý sa špecificky viaže na receptor LT-beta.
Termín účinné množstvo označuje množstvo, ktoré je dostatočné k tomu, aby sa dosiahol prospešný alebo požadovaný klinický účinok. Účinné množstvo môže byť podané prostredníctvom jedného alebo viacerých dávok. V zmysle predkladaného vynálezu, účinné množstvo činidla, ktoré blokuje väzbu lymfotoxínu beta na jeho receptor, je také množstvo činidla, ktoré je dostatočné k tomu, aby zmiernilo, stabilizovalo, alebo spomalilo vývoj vírusovej reakcie. Konkrétne, ktoré je dostatočné na to, aby zmiernilo, stabilizovalo alebo spomalilo vývoj vírusom indukovaného systémového šoku a respiračnú nedostatočnosť. Detekcia a meranie týchto indikátorov účinnosti sú pre odborníkov známe.
Termín jedinec označuje stavovca, hlavne príslušníka niektorého druhu cicavcov, a taktiež zahŕňa domáce zvieratá, zvieratá chovné pre šport a primáty, vrátane človeka (pričom tento výber nie je limitovaný).
·· · ·· ·· • · ·· · · · • · · · · ··· ·· • · · • · ·· ··· ·· Φ· ·· ···
Funkčný aminokyselina, aminokyselina, ekvivalent aminokyselinového zvyšku je: I.
ktorá má rovnaké reaktívne vlastnosti ako ktorá bola nahradená funkčným ekvivalentom, II.
aminokyselina antagonistu podía vynálezu, aminokyselina ktorá má podobné vlastnosti ako aminokyselina, ktorá bola nahradená funkčným ekvivalentom, III. molekula iná ako aminokyselina, ktorá má podobné vlastnosti ako aminokyselinový zvyšok, ktorý bol nahradený funkčným ekvivalentom.
Prvý polynukleotid kódujúci proteínového antagonistu podía vynálezu je funkčný ekvivalent v porovnaní s druhým polynukleotidom kódujúcim antagonistický proteín, ak spĺňa aspoň jednu z nasledujúcich podmienok:
a) Funkčný ekvivalent je prvý polynukleotid, ktorý hybridizuje s druhým polynukleotidom za štandardných hybridizačných podmienok a/alebo ide o degenerovanú sekvenciu vzhľadom na sekvenciu prvého polynukleotidu. Prednostne kóduje mutovaný proteín, ktorý má aktivitu proteínového antagonistu integrínu.
b) Funkčný ekvivalent je prvý polynukleotid, ktorý kóduje expresiu aminokyselinovej sekvencie kódovanej druhým polynukleotidom.
LT-beta blokujúce činidlá podľa vynálezu zahŕňajú, avšak nie sú obmedzené iba na, činidlá tu uvedené a ich funkčné ekvivalenty. Termín funkčné ekivalenty podía vynálezu teda znamená LT-beta blokujúce činidlo alebo polynukleotid kódujúci LTbeta blokujúce činidlo, ktoré má rovnaké alebo vylepšené účinky na
| ·· | • | • · | ·· | ·· | |
| • | • | ·· | • · | • | • · |
| • | • | • | • · | ··· | • · |
| • | • | • | • · | • · | • · |
| • · | ··· | • · | ·· | ·· |
príjemcu ako LT-beta blokujúce činidlo, ktorého ekvivalentom. Odborníkovi je proteín je možné pripraviť (rekombinantné DNA), napr.
zrejmé, že funkčne technikami génového je funkčným ekvivalentný inžinierstva sa exprimuje funkčne preto zahŕňa tak, že ekvivalentná DNA. Predkladaný vynález blokujúce činidlo kódované prirodzene sa vyskytujúcou DNA rovnako ako DNA, ktorá sa prirodzene nevyskytuje a ktorá kóduje rovnaký proteín, ako je kódovaný prirodzene sa vyskytujúcou DNA. Vzhľadom na degeneráciu nukleotidových kódujúcich sekvencii môžu byť použité aj iné sekvencie kódujúce LT-beta blokujúce činidlo. K takýmto sekvenciám patria časti alebo celé sekvencie, ktoré sú zmenené substitúciou rôznych kodónov, ktoré v ' rámci sekvencie kódujú rovnakú aminokyselinu, čo je tzv. tichá zámena. Takéto zmenené sekvencie sú považované za ekvivalenty uvedených sekvencii. Tak napr. aminokyselina Phe (P) je kódovaná dvoma rôznymi kodónmi, TTC alebo TTT, aminokyselina Tyr (Y) je kódovná buď TAC alebo TAT a aminokyselín His (H) je kódovaná buď CAC alebo CAT. Naproti tomu aminokyselina Trp (W) je kódovaná iba jediným kodónom, a to TGG. Odborníkovi je preto jasné, že pre danú sekvenciu DNA kódujúcu určitý integrín existuje mnoho degenerovaných sekvencii, ktoré ho taktiež kódujú. Tieto degeneratívne sekvencie taktiež spadajú do predkladaného vynálezu.
Termín fúzia alebo fúzny proteín označuje kolineárne kovalentné spojenie dvoch alebo viacerých proteínov alebo ich fragmentov prostredníctvom ich individuálnych peptidových reťazcov, najvhodnejšie prostredníctvom génovej expresie polynukleotidovej molekuly kódujúcej tieto proteíny. Je vhodné ak sú proteíny alebo ich fragmenty z rôznych zdrojov, tento typ fúznych proteínov je potom nazývaný chimérickou molekulou. Je vhodné ak sú fúzne proteíny chimérickými molekulami, ktoré obsahujú LT-beta blokujúce činidlo alebo jeho fragment kovalentne spojený s druhou zložkou,
LT-beta
| ·· · • · ·· • · · | ·· • · • · | ·· • ··· | ·· • · • · | • · |
| ·· ··· | • · | ·· | ·· | • · |
ktorá je odlišná od LT-beta blokujúceho činidla. Je vhodné ak fúzne proteíny podľa vynálezu obsahujú časť intaktných protilátok, ktoré si uchovávajú antigén-väzbovú špecificitu, napr. fragmenty typu Fab, Fab’, F(ab')2 a F(v), a monoméry alebo diméry zostavené z jedného ľahkého a jedného ťažkého reťazca a podobne.
Najvhodnejšie fúzne proteíny sú chimérické, obsahujúce zložku tvorenú LT-beta blokujúcim činidlom fúzovanú alebo inak spojenú s celým alebo časťou kĺbového a konštantného úseku imunoglobulínového ľahkého reťazca, ťažkého reťazca alebo oboch. Vynález sa teda týka molekuly, ktorá obsahuje:
1. zložku tvorenú LT-beta blokujúcim činidlom
2. druhý peptid, napr. taký, ktorý zvyšuje rozpustnosť alebo biologický polčas in vivo zložky LT-beta blokujúceho činidla, napr. ako člen superrodiny imunoglobulínov alebo jeho fragment alebo časť, napr. fragment IgG, napr. konštantný úsek ťažkého reťazca ľudského gGl, napr. CH2, H3 kĺbový úsek. Špecificky LT-beta alebo LT-beta-R/Ig fúzia je proteín obsahujúci biologicky aktívne LTbeta blokujúce činidlo podľa vynálezu (napr. rozpustný LT-beta-R, alebo jeho biologicky aktívny fragment naviazaný k N-koncu imunoglobulínového reťazca, kde bol N-koniec imunoglobulínového reťazca nahradený LT-beta blokujúcim činidlom. Druhom LT-beta alebo LT-beta-R/Ig fúzie je LT-beta-R/Fc fúzia, čo je proteín obsahujúci LT-beta-R podía vynálezu viazaný na aspoň časť konštantnej domény imunoglobulínu. Výhodná Fc fúzia obsahuje LT-beta blokujúce činidlo podía vynálezu viazané na fragment protilátky obsahujúci C-koncovú doménu ťažkého imunoglobulínového reťazca.
Termín štandardné hybridizačné podmienky označuje také podmienky koncentrácie soli a teploty, ktoré sú v podstate ekvivalentné podmienkam 0,5x SSC až 5x SSC a teplota 65 °C, ako pre
| ·· | • • t • | • · • · : z | ·· • ··· | ·· • · · • · | |
| • 9 | • 9 | ||||
| • | • | • | • · | • · | • 9 |
| ·· | • · · | • · | ·· | 99 9 |
hybridizáciu tak aj pre následné premývanie. Termín štanardné hybridizačné podmienky používaný v predkladanom predpise je teda operačná definícia a zahŕňa určité rozpätia hybridizačných podmienok. Podmienky s vyššou stringenciou ako napr. hybridizácia v pufri pre skríning plakov (0,2 % polyvinylpyrrolidon, 0,2 % Ficoll 400, 0,2 % hovädzí sérový albumín, 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), IM NaCl, 0,1 % hydrogenfosforečnan sodný, 1 % SDS s 10 % dextránsulfátom a 100 pg/ml denaturovanej sonifikovanej DNA zo spermatu lososa pri 65 °C počas 12 až 20 hodín, nasledované premývaním v 75 mM NaCl/7,5 mM citrát sodný (0,5x SSC)/1 % SDS pri 65 ’C. Podmienky s nižšou stringenciou sú napr. podmienky hybridizácie v pufri pre skríning plakov s 10 % dextránsulfátom a 110 pg/ml denaturovanej sonifikovanej DNA zo spermatu lososa pri 55 °C počas 12 až 20 hodín, nasledované premývaním v 300 mM NaCl/30 mM citrát sodný (2x SSC)/1 % SDS pri 55 °C (pozri napr. Current Protocols in Moleculr Biology, John Willey and Sons, Inc., New York, 6.3.1 - 6.3.6, 1989).
Terapeutický prípravok v predkladanom opise je definovaný tak, že obsahuje proteíny podľa vynálezu a ďalšie biologicky kompatibilné prísady. Terapeutický prípravok podlá vynálezu obsahuje excipienty ako napr. voda, minerály a nosiče ako sú napr. proteíny.
Opis výhodných foriem
Predkladaný vynález je čiastočne založený na objave, že prípravok blokujúci LT-beta môže indukovať protivírusovú odpoveď jedinca. Bolo zistené, že ošetrenie jedinca infikovaného vírusom môže značne zvýšiť jeho prežívanie. Špecificky bolo ukázané, že ošetrenie myší NZB infikovaných LCMV-13 prípravkom blokujúcim LTbeta, ako je napríklad LT-beta-R-Ig fúzny proteín, zvýšilo ich prežívanie na 73 %.
·· • · ·· • · * ·· ·· • · · • · ·· ·
Súčasná liečba vírusov Ebola, Dengue, SNV a ďalších vírusov tu uvedených je uskutočňovaná formou prevencie prostredníctvom školenia o prenose chorôb. Pre tieto vysoko patogénne vírusy neexistujú vakcíny. Bol použitý ribavirin, analóg guanidínu, ako generický protivírusový liek pri niektorých z týchto infekcií s reprodukovateľným úspechom doloženým iba v liečbe horúčky vyvolanej vírusom Lassa, keď bol použitý na začiatku ochorenia (Lacy, M.D. a Smego, R.A., Adv. Ped. Inf. Dis., 12, 21, 1997). Dáta pôvodcov ukazujú, že patologické zmeny spojené s týmito vírusmi môžu byť čiastočne sprostredkované imunitou. Blokáda LT systému by mohla vysoko zvýšiť šancu na prežitie prostredníctvom prechodného zníženia počtu CD8 T buniek špecifických pre vírus a zníženie ich funkčnosti. Pre liečbu niekolkých ochorení už prebiehajú klinické testy, ktoré používajú niekoľko prostriedkov blokovania dráhy TNFalfa. (Pass, H.I., Mew, D., et al., Chest surg. Clin. N. Amer., 5, 73, 1995). Pôvodcovia veria, že liečba LT-beta-R-Ig by sa mala zobrať do úvahy pri ďalšom testovaní na zvieracích modeloch pre eventuálne použitie v klinických testoch s ľuďmi zahŕňajúcich pacientov s akútnymi, rýchlo postupujúcimi vírusovými infekciami, zahrňujúcimi šok a/alebo respiračnú nedostatočnosť.
Prípravky blokujúce LT-beta
V jednej forme tohto vynálezu obsahuje prípravok blokujúci LTbeta protilátku (Ab) namierenú proti LT-beta, ktorá inhibuje signalizáciu LT-beta. Výhodné je použiť protilátku anti-LT-beta monoklonálnu protilátku (mAb). Inhibičná anti-LT-beta protilátka a ďalšie LT-beta blokujúce prípravky môžu byť identifikované použitím metód skríningu, ktoré detegujú schopnosť jedného alebo viacerých prípravkov viazať sa na LT ligand alebo inhibujú účinky LT-beta signalizácie na bunky.
V ďalšej forme tohto vynálezu prípravok blokujúci LT-beta ·· · ·· ·· ·· ···· · · · · · · • · · · · ··· · · obsahuje prípravok blokujúci receptor LT-beta (LT-beta-R). Vo výhodnej forme, prípravok blokujúci LT-beta-R je protilátka (Ab) namierená proti LT-beta-R, ktorá inhibuje signalizáciu LT-beta-R. Je výhodné, ak je protilátka anti-LT-beta-R monoklonálna protilátka (mAb). Jedna takáto inhibičná monoklonálna protilátka anti-LT-betaR je BDA8 mAb. Inhibičný anti-LT-beta-R Ab a ďalšie prípravky blokujúce LT-beta-R môžu byť identifikované použitím metód skríningu, ktoré detegujú schopnosť jedného alebo viacerých prípravkov viazať sa buď k LT-beta-R alebo LT ligandu alebo inhibujú účinky LT-beta-R signalizácie bunky.
Jedna metóda skríningu využíva cyto.toxické účinky LT-beta-R signalizácie na nádorové bunky nesúce LT-beta-R. Nádorové bunky sú vystavené jednému alebo viacerým prípravkom aktivujúcim LT-beta-R, na indukciu signalizácie LT-beta-R. Prípravky aktivujúce LT-beta-R zahŕňajú LT-alfa/beta2 heteromérny komplex (výhodný je rozpustný LT-alfal/beta2) v prítomnosti IFN-gama alebo aktivujúci anti-LTbeta-R Ab (pozri ďalej, tiež opísané v súčasne prejednávanej prihláške USA č. 08/378 968 tých istých prihlasovateľov).
Protilátky a ďalšie prípravky, ktoré môžu blokovať signalizáciu LT-beta-R, sú vyberané na základe ich schopnosti inhibovať cytotoxický účinok signalizácie LT-beta-R na nádorové bunky v nasledujúcom teste:
1) nádorové bunky, ako napríklad bunky HT29, sú kultivované tri až štyri dni v radoch jamiek pre tkanivové kultúry obsahujúce médium a aspoň jeden prípravok aktivujúci LT-beta-R v prítomnosti rádového riedenia testovaného prípravku alebo bez neho,
2) k zmesi nádorových buniek sa pridá vitálne farbivo, ktoré odráža funkciu mitochondrií, ako napríklad MTT, a nechá sa reagovať niekolko hodín,
| ·· | • | • · | ·· | ·· |
| • · | ·· | • | • · | • · · |
| • · | • | • | • ··· | • · |
| ·· | ··· | • · | ·· | ·· · |
3) optická denzita zmesi v každej jamke je kvantifikovaná pri vlnovej dĺžke 550 nm (OD550). OD550 je proporcionálne k počtu nádorových buniek zostávajúcich za prítomnosti prípravku aktivujúceho LT-beta-R a testu prípravku blokujúceho LT-beta-R v každej jamke. Prípravok alebo kombinácie prípravkov, ktoré môžu znížiť cytotoxicitu nádorovej bunky aktivovanú LT-beta-R o aspoň 20 % v tomto testu, je prípravok blokujúci LT-beta-R v rozsahu tohto vynálezu.
Každý prípravok alebo kombinácia prípravkov, ktoré aktivujú signalizáciu LT-beta-R môže byť použitá v uvedenom teste k identifikácii prípravkov blokujúcich · LT-beta-R. Prípravky aktivujúce LT-beta-R, ktoré indukujú signalizáciu LT-beta-R (ako napríklad aktivujúci anti-LT-a-R mAb) môžu byť vybrané na základe ich schopností, samotných alebo v kombinácii s ďalšími prípravkami, potenciovať cytotoxicitu nádorových buniek použitím testu s už opísanými nádorovými bunkami.
Ďalší spôsob selekcie prípravku blokujúceho LT-beta-R je monitorovanie schopností predpokladaného prípravku priamo interferovať s väzbou LT-ligand-receptor. Prípravok alebo kombinácie prípravkov, ktoré môžu blokovať väzbu ligand-receptor o aspoň 20%, je prípravok blokujúci LT-beta-R v rozsahu tohto vynálezu.
Na uskutočňovanie kompetitívnych testov s predpokladanými prípravkami blokujúcimi LT-beta-R môže byť použitý každý z celého radu testov, ktoré meria silu väzby ligand-receptor. Sila väzby medzi receptorom a ligandom môže byť meraná použitím enzymatického imunctestu (ELISA) alebo rádioimunotestu (RIA). Špecifická väzba môže byť tiež meraná prostredníctvom fluorescenčné značených komplexov protilátka-antigén a uskutočňovaním analýzy triedenia buniek fluorescenčné značených (FACS) alebo uskutočňovaním ďalších
| ·· • · • · | • ·· • | ·· | ·· • ··· | ·· • · · • · | |
| • • | • • | ||||
| • · | • | • | • | • · | • · |
| ·· | ··· | ·· | ·· | ·· · |
takých imunodetekčných metód, ktoré sú všetko technikami v odbore známymi.
Väzbová interakcia ligand-receptor môže byť tiež meraná prístrojom BIAcore™ (Pharmacia Biosensor), ktorý využíva detekciu plazmónovou rezonanciou (Zhou et al., Biochemistry, 32, 8193-98, 1993, Faegerstram a OOShanessy, Súrface plasmon resonance detection in affinity technologies, in Handbook of Affinity Chromatography, 229-52, Marcel Dekker, Inc., New York, 1993).
Technológie BIAcore™ umožňuje naviazať receptor na povrch zlata a naliať cez neho ligand. Detekcia plazmónovou rezonanciou dáva priamu kvantifikáciu množstva hmoty naviazanej na povrch v reálnom čase. Táto technika poskytuje rýchlostné konštanty v obidvoch smeroch reakcie, a teda môže byť priamo určená disociačná konštanta ligand-receptor a afinitná konštanta v prítomnosti a neprítomnosti predpokladaného prípravku blokujúceho LT-beta-R.
Každou touto alebo ďalšími technikami na meranie interakcií receptor-ligand môže blokujúceho LT-beta-R, prípravkami, byť vyhodnotená schopnosť prípravku samotného alebo v kombinácii s ďalšími inhibovať väzbu povrchových alebo rozpustných LT ligandov na povrchové alebo rozpustné molekuly LT-beta-R. Tieto testy môžu byť tiež použité na testovanie prípravkov blokujúcich LT-beta-R alebo derivátov týchto prípravkov (napr. fúzie, chiméry, mutanty a chemicky zmenené formy), samotných alebo v kombinácii, na optimalizáciu schopností takto zmenených prípravkov blokovať aktiváciu LT-beta-R.
Prípravky blokujúce LT-beta-R v jednej forme tohto vynálezu obsahujú rozpustné molekuly receptoru LT-beta3. Sekvencie extracelulárnej časti ľudského LT-beta-R, ktorá kóduje väzbovú doménu ligandu, je znázornená na obrázku č. 1 patentu USA č. 5 925
| ·· • · • · | • ·· • | ·· • · • · | ·· • ··· | ·· • · · • · |
| ·· | ··· | ·· | ·· | ·· · |
351, tu zahrnutého formou odkazu. Použitím informácie o sekvencii z obrázku č. 1 patentu USA č. 5 925 351 a technikami rekombinantnej DNA, v odbore známymi, môžu byť klonované funkčné fragmenty kódujúce väzbovú doménu ligandu LT-beta-R do vektoru a exprimované v príslušnom hostiteľovi, aby produkovali rozpustné molekuly LTbeta-R. Rozpustné molekuly LT-beta-R, ktoré môžu kompetovať s natívnymi receptorami LT-beta o väzbu LT ligandu podľa testov tu opísaných, sú vyberané ako prípravky blokujúce LT-beta-R.
Rozpustný receptor LT-beta obsahujúci aminokyselinové sekvencie vybrané zo sekvencii ukázaných na obrázku č. 1 patentu USA č. 5 925 351 môžu byť pripojené k- jednej alebo viacerým heterológnym proteínovým doménam (fúzna doména), aby zvýšili in vivo stabilitu receptorového fúzneho proteinu, alebo modulovali jeho biologickú aktivitu alebo lokalizáciu. Výhodne sú na konštrukciu receptorových fúznych proteínov používané stabilné plazmatické proteíny, ktoré majú typický biologický polčas v krvnom obehu viac ako 20 hodín. Tieto plazmatické proteíny bez obmedzenia zahŕňajú: imunoglobulíny, sérový albumín, lipoproteíny, apolipoproteíny a transferín. Sekvencie, ktoré môžu zamerať rozpustnú molekulu LT-beta-R ku konkrétnej bunke alebo typu tkaniva, môžu byť tiež pripojené k väzbovej doméne ligandu LT-beta-R, aby vznikol špecificky lokalizovaný rozpustný LT-beta-R fúzny protein. Celá alebo funkčná časť LT-beta-R extracelulárnej oblasti (obrázok č. 1 z patentu USA č. 5 925 351) obsahujúci väzbovú doménu ligandu LTbeta-R môže byť fúzovaná ku konštantnej oblasti imunoglobulínu, ako Fc doména ľudského ťažkého reťazca IgGI (Browning et al., J. Immunol., 154, 33-46, 1995). Rozpustné fúzne proteíny receptoru-IgG sú bežné imunologické reagencie a metódy ich konštrukcie sú v odbore známe (pozri napr. patent USA č. 5 225 538). Funkčná väzbová doména ligandu LT-beta-R môže byť fúzovaná s Fc doménou imunoglobulínu (Ig) pochádzajúceho z triedy alebo podtriedy ·· · ·· ·· ·· • · ·· ··· ··· • · · · · ··· I · • · · · · ·· ··· · • · · ···· ·· ·· ··· ·· ·· ·· · (Immunology, vyd., 1993). Kaskáda enzýmov imunoglobulínu inej ako IgGl. Fc domény protilátok patriacich do rôznych Ig tried alebo podtried môžu aktivovať odlišné sekundárne efektorové funkcie·. Aktivácia nastáva, keď je Fc doména naviazaná analogickým Fc receptorom. Sekundárne efektorové funkcie zahrňujú schopnosť aktivovať komplementový systém, prestúpiť placentu a viazať rôzne mikrobiálne proteíny. Vlastnosti rôznych tried a podtried imunoglobulínov sú opísané v Roitt et al
4.8, Mosby-Year Book Európe Ltd., 3 komplementu môže byť aktivovaná Fc doménami na antigén naviazanými IgGI, IgG3 a IgM protilátkami. Fc doména IgG2 sa zdá byť menej účinnou a Fc domény IgG4, IgA, IgD a IgE sú pri aktiváci komplementu neúčinné. Môže sa teda vybrať Fc doména na základe toho, či sú jej pridružené sekundárne efektorové funkcie žiaduce pre konkrétnu imunitnú odpoveď alebo ochorenie liečené fúznym proteínom LT-beta-R-Fc. Keby bolo výhodné poškodiť alebo usmrtiť cielovú bunku nesúcu ligand LT, môže sa na vytvorenie fúzneho proteínu LT-beta-R-Fc vybrať obzvlášť aktívna Fc doména (IgGI). Alebo, keby bolo potrebné zacieliť fúziu LT-beta-R-Fc na bunku bez spustenia komplementového systému, môže byť vybraná inaktívna Fc doména IgG4.
Mutácie Fc domén, ktoré znižujú alebo eliminujú väzbu k Fc receptorom a aktiváciu komplementu už boli opísané (S. Morrison, Annu. Rev. Immunol., 10, 239-65, 1992). Na optimalizáciu aktivity Fc domény použitej na konštrukciu fúzneho proteínu LT-beta-R-Fc, môžu byť použité tieto alebo iné mutácie, samotné alebo v kombinácii.
Produkcia rozpustného ľudského fúzneho proteínu LT-beta-R obsahujúceho väzbové sekveneie ligandu fúzované k Fc doméne ľudského imunoglobulínu (hLT-beta-R-Fc) je opísaná v príklade č. 1 patentu USA č. 5 925 351, tu zahrnutého formou odkazu. Jedna línia CHO vytvorená podľa príkladu č. 1, ktorá sekretuje hLT-beta-R-Fc,
| 99 • • | • • | • 99 • | • 9 | 99 9 999 | 99 9 9 9 9 9 | |
| 9 9 | 9 9 | |||||
| • | • | • | 9 | 9 | 9 9 | 9 9 |
| ·· | ··· | 99 | 99 | 9· 9 |
bola nazvaná hLT beta;R-hGl CHO#14. Vzorka tejto línie bola uložená 21. júla 1995 v Americkej zbierke mikroorganizmov (American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, MD) v súlade s ustanoveniami Budapeštianskej zmluvy a bolo mu priradené ATCC prístupové číslo CRL 11965.
Tvorba rozpustnej myšacej fúznej molekuly LT-beta-R (mLT-betaR-Fc) je opísaná v príklade č. 2 patentu USA č. 5 925 351, tu zahrnutého formou odkazu. Línia CHO vytvorená podlá príkladu č. 2 patentu USA č. 5 925 351, ktorá sekretuje mLT-beta-R-Fc, bola nazvaná mLT beta;R-hGl CHO#1.3.BB. Vzorka tejto línie bola uložená 21. júla 1995 v Americkej zbierke mikroorganizmov (American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, MD) v súlade s ustanoveniami Budapeštianskej zmluvy a bolo jej priradené ATCC prístupové číslo CRL 11964.
Odlišné aminokyselinové zvyšky tvoriace styčný bod fúzneho proteínu receptor-Ig môžu meniť štruktúru, stabilitu a výslednú biologickú aktivitu rozpustného fúzneho proteínu LT-beta-receptor. K C-koncovej časti vybraného fragmentu LT-beta-R môže byť pridaná jedna alebo viac aminokyselín, aby sa modifikoval styčný bod vybranou fúznou doménou.
N-koncová oblasť fúzneho proteínu LT-beta-R môže byť tiež obmenená zmenou pozície, v ktorej je vybraný DNA fragment LT-beta-R štiepený na svojom 5' konci na inzerciu do rekombinantného expresného vektora. Stabilita a aktivita každého fúzneho proteínu LT-beta-R môže byť testovaná a optimalizovaná použitím rutinných pokusov a testov pre selekciu prípravkov blokujúcich LT-beta-R tu opísaných.
Použitím sekvencii väzbovej domény ligandu LT-beta-R v extracelulárnej doméne znázornenej na obrázku č. 1 môžu byť tiež
• ·· ·· ·· · konštruované varianty aminokyselinových sekvencii na modifikáciu afinity rozpustného receptoru LT-beta alebo fúzneho proteínu pre LT ligand. Rozpustné LT-beta-R molekuly tohto vynálezu môžu súťažiť o väzbu povrchového LT Ugandu s endogénnymi LT-beta receptormi bunkového povrchu. Predpokladá sa, že každá rozpustná molekula obsahujúca väzbovú doménu LY-T-beta-R Ugandu, ktorá môže súťažiť o väzbu LT ligandu, je prípravok blokujúci LT-beta-R, ktorý spadá do oblasti predkladaného vynálezu.
V ďalšej forme tohto vynálezu, protilátky namierené proti ľudskému LT-beta liečbe stavov, ktoré vystavujú jedincov, vrátane človeka, riziku vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti. Protilátky anti-LT-beta-R podľa tohto vynálezu môžu byť polyklonálne alebo monoklonálne (mAb) a môžu byť modifikováné tak, aby sa optimalizovala ich schopnosť blokovať signalizáciu LT-beta-R, ich biologická dostupnosť in vivo, ich stabilitu alebo ďalšie požadované vlastnosti.
Polyklonálne protilátkové séra namierené proti ľudskému receptoru LT-beta sú pripravované použitím obvyklých techník podávaním subkutánnych injekcií zvieratám, ako sú napríklad kozy, králiky, laboratórne potkany, škrečky alebo myši. Tieto injekcie obsahujú fúzny proteín ľudský LT-beta receptor-Fc (príklad 1 patentu USA č. 5 925 351) v kompletnom Freundovom adjuvans, a potom nasleduje pripomínacia intraperitoneálna alebo subkutánna injekcia s nekompletným Freundovým adjuvans. Skríning polyklonálnych antisér, ktoré obsahujú požadované protilátky namierené proti receptoru LT-beta, je uskutočňovaný pomocou obvyklých imunologických postupov.
Myšacie monoklonálne protilátky (mAb) namierené proti fúznemu proteínu ľudský LT-beta-R-Fc sú pripravované tak, ako je opísané v patente USA č. 5 925 351, príklad č. 5. Hybridómová bunková línia ·· * · • · • · ·· ·»· ·· ·· ·· • · · · · · • · ··· · I • · · · · · · • · · ♦ * · (BD.A8.AB9), ktorá produkuje myšaciu anti-Iudskú LT-beta-R mAb BDA8, bola uložená 12. januára 1995 v Americkej zbierke mikroorganizmov (American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 2C110-2209) podlá Budapeštianskej zmluvy a bolo jej priradené ATCC prístupové číslo HB11798.
Rôzne formy anti-LT-beta-R protilátok môžu byť taktiež vytvárané použitím štandardných techník rekombinantnej DNA (Winter a Milstein, Náture, 349, 293-99, 1991) . Napríklad môžu byť konštruované chimérické protilátky, v ktorých je väzbová doména antigénu zvieracej protilátky spojená s ľudskou konštantnou doménou (napr. Cabilly et al., patent USA č. 4 816 567, Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-55, 1984). Chimérické protilátky znižujú pozorované imunogénne odpovede vyvolané zvieracími protilátkami, keď sú použité pri klinickej liečbe ľudí. Okrem toho môžu byť syntetizované rekombinantné humanizované protilátky, ktoré rozpoznávajú LT-beta-R. Humanizované protilátky sú chiméry obsahujúce väčšinou ľudské IgG sekvencie, do ktorých boli vložené oblasti zodpovedné za špecifickú väzbu antigénu (pozri napr. WO 94/04679). Zvieratá sú imunizované požadovaným antigénom, sú izolované zodpovedajúce protilátky a je odstránená časť sekvencii variabilnej oblasti zodpovedných za špecifickú väzbu antigénu. Väzbové oblasti antigénu pochádzajúce zo zvieraťa sú potom klonované do príslušnej pozície ľudských protilátkových génov, v ktorých boli odstránené oblasti viažuce antigén.
minimalizujú použitie heterológnych v ľudských protilátkách a je menej
Humanizované protilátky (mezidruhových) sekvencii pravdepodobné, že vyvolajú imunitnú odpoveď u liečeného pacienta.
Konštrukcia rôznych tried rekombinantných anti-LT-beta-R protilátok môže byť tiež uskutočnená vytváraním chimerických alebo humanizovaných protilátok obsahujúcich anti-LT-beta-R variabilné ··
·· ·· • · · • · · • · domény a ľudské konštantné domény (CHl, CH2, CH3) izolované z odlišných tried imunoglobulínov. Napríklad anti-LT-beta-R IgM protilátky so zvýšenou valenciou miesta viažuceho antigén sa môžu rekombinantne produkovať klonovaním väzbového miesta antigénu do vektorov nesúcich konštantnú oblasť ľudského reťazca mu (Arulanandam et al., J. Exp. Med., 177, 1439-50, 1993, Lane et al., Eur. J. Immunol., 22, 2573-78, 1993, Traunecker et al., Náture, 339, 68-70, 1989). Okrem toho môžu byť použité štandardné techniky rekombinantnej DNA na alteráciu väzbovej afinity rekombinantných protilátok s ich antigénmi pomocou zmeny aminokyselinových zvyškov v blízkosti miest viažucich antigén. Afinita pre väzbu antigénu humanizovanej protilátky môže byť zvýšená mutagenézou na základe molekulového modelovania (Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 10029-33, 1989, WO 94/04679).
Môže byť potrebné zvýšiť alebo znížiť afinitu anti-LT-a-R Ab pre LT-beta-R v závislosti na type cieľového tkaniva alebo predpokladanej konkrétnej liečebnej schéme. Napríklad môže byť výhodné liečiť pacienta konštantnými hladinami anti-LT-beta-R Ab zo zníženou schopnosťou signalizovať prostredníctvom dráhy LT-beta pri semi-profylaktickom liečení. Podobne, inhibičné anti-LT-beta-R Ab zo zvýšenou afinitou pre LT-beta-R môže byť výhodné pri krátkodobej liečbe.
Očakáva sa, že testovaním ďalších protilátok namierených proti ľudskému receptoru LT-beta môžu byť identifikované ďalšie anti-LTbeta-R protilátky, ktoré pôsobia ako prípravky blokujúce LT-beta-R u ľudí, na liečbu stavov, ktoré vystavujú jedinca, vrátane človeka riziku vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti, pri použití rutinných pokusov a testov tu opísaných.
Ďalšia výhodná forma tohto vynálezu zahŕňa prípravky, ktoré obsahujú protilátky namierené proti LT ligandu, ktoré pôsobia ako ·· · ·· ·· ·· ···· ··· ··· • · · · · ··· · · ··· ·· ·· ·· ··· prípravky blokujúce LT-beta-R. Ako už tu bolo opísané pre anti-LTbeta-R Ab, anti-LT ligand protilátky, ktoré pôsobia ako prípravky blokujúce LT-beta-R, môžu byť polyklonálne alebo monoklonálne, a môžu byť modifikované podlá rutinných postupov tak, aby sa modulovali ich vlastností pre väzbu antigénu a ich imunogenicita. Anti-LT protilátky podlá tohto vynálezu môžu byť vytvorené buď proti jednej alebo dvom LT podjednotkám individuálne, vrátane rozpustných, mutovaných alterovaných a chimérických foriem LT podjednotky. Ak sú ako antigén použité LT podjednotky, sú to výhodne podjednotky LT-beta. Ak sú použité podjednotky LT-alfa, preferuje sa, že výsledné anti-LT-alfa protilátky viažu povrchový LT ligand a nereagujú skrížené so sekretovanou LT-alfa či nemodulujú aktivitu TNF-R (podlá testov z príkladu č. 3 patentu USA č. 5 925 351).
Alternatívne môžu byť vytvorené protilátky namierené proti homomérnemu (LT-beta) alebo heteromérnemu (LT-alfa/beta2) komplexu obsahujúcemu jednu alebo viac LT podjednotiek a môže byť uskutočnený skríning ich aktivity ako prípravkov blokujúcich LTbeta-R. Výhodne sú ako antigén použité komplexy LT-alfal/beta2. Ako už bolo uvedené, preferuje sa, že výsledné anti-LT-alfal/beta2 protilátky viažu povrchový LT ligand bez väzby na sekretovaný LTalfa a bez ovplyvnenia TNF-R aktivity.
Produkcia polyklonálnych anti-ludských LT-alfa protilátok je opísaná v súčasne prejednávanej prihláške od tých istých pôvodcov (WO 94/13808). Boli tiež opísané monoklonálne anti-LT-alfa a antiLT-beta protilátky (Browning et al., J. Immunol., 54, 33-46, 1995). Myšacie anti-ludské LT-beta mAb boli pripravené tak, ako je opísané v príklade č. 6 patentu USA č. 5 925 351. Hybridómová bunková línia (B9.C9.1), ktorá produkuje myšaciu anti-ludskú LT-beta-R mAb B9 bola uložená 21. júla 1995 v Americkej zbierke mikroorganizmov (American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University ·· ··· ·· ·· ··
Boulevard, Manassas, VA 20110-2209) podľa Budapeštianskej zmluvy a bolo jej priradené ATCC prístupové číslo 11962.
Monoklonálne anti-myšacie LT-alfa/beta2 protilátky boli pripravené tak, ako je opísané v príklade č. 7 patentu USA č. 5 925 351. Hybridómová bunková línia (BB.F6.1), ktorá produkuje škrečací anti-myšací LT-alfa/beta2 mAb BB.F6 bola uložená 21. júla 1995 v Americkej zbierke mikroorganizmov (American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209) podľa Budapeštianskej zmluvy a bolo jej priradené ATCC prístupové číslo MB11963.
Test s triedením fluorescenčné značených buniek (FACS) bol vyvinutý na skríning protilátok namierených proti LT podjednotkám a LT komplexom, ktoré môžu pôsobiť ako prípravky blokujúce LT-beta-R, ako je opísané v príkladoch č. 6 a č. 7 patentu USA č. 5 925 351. V tomto teste je pridaný rozpustný ľudský LT-beta-R-Fc fúzny proteín k 11-23 bunkám aktivovaným PMA, ktoré exprimujú povrchové LT komplexy (Browning et al., J. Immunol., 154, 33-46, 1995), v prítomnosti stúpajúceho množstva testovanej protilátky. Protilátka, ktorá môže inhibovať interakciu LT-beta-R-ligand o aspoň 20 %, je vybraná ako prípravok blokujúci LT-beta-R.
Použitie skôr komplexu LT-alfa/beta než LT podjednotky ako antigénu na imunizáciu zvieraťa môže viesť k účinnejšej imunizácii alebo môže mať za následok protilátky, ktoré majú väčšiu afinitu na povrchový LT ligand. Je možné, že pri imunizácii s komplexom LTalfa/beta2 môžu byť izolované protilátky, ktoré rozpoznávajú aminokyselinové zvyšky na obidvoch podjednotkách, LT-alfa a LT-beta (napr. zvyšky, ktoré tvoria zárez v molekule LT-alfa/beta2). Očakáva sa, že testovaním protilátok namierených proti heteromérnym komplexom ľudského LT-alfa/beta2 môžu byť pri použití rutinných pokusov a testov tu opísaných identifikované ďalšie anti-LT • 4 ·· · ·· ·· • · ·· · ·· • · t · · ··· ·· ··· ·· ·· protilátky, ktoré pôsobia ako prípravky blokujúce LT-beta-R.
Podávanie
Opísané prípravky sú podávané v účinnej dávke pri liečbe vírusového systémového šoku a respiračnej nedostatočnosti jedinca. Určenie výhodnej farmaceutickej formulácie a terapeuticky účinného režimu dávok u danej aplikácie je v rozsahu znalostí odborníka, ktorý vezme do úvahy napríklad stav a hmotnosť pacienta, rozsah požadovanej liečby a toleranciu pacienta k liečbe. Očakáva sa, že dávky približne 1 mg/kg rozpustného LT-beta-R budú vhodným východzím bodom pre optimalizáciu liečebných dávok.
Terapeuticky účinná dávka môže byť tiež stanovená uskutočnením in vitro pokusov, ktoré merajú koncentráciu prípravku blokujúceho LT-beta-R požadovanú na pokrytie cielových buniek (LT-beta-R alebo LT ligand-pozitívnych buniek v závislosti na blokujúcom prípravku) počas 1 až 14 dní. Na monitorovanie reakcie pokrývania buniek môžu byť použité tu opísané testy väzby receptor-ligand. LT-beta-R alebo LT-ligand-pozitívne bunky môžu byť separované od populácií aktivovaných lymfocytov použitím FACS. Na základe výsledkov týchto in vitro väzbových testov môže byť vybrané rozmedzie vhodnej koncentrácie prípravku blokujúceho LT-beta-R na testovanie na zvieratách podlá tu opísaných testov.
Podávanie rozpustných molekúl LT-beta-R, anti-LT ligandu a protilátok anti-LT-beta-R podlá tohto vynálezu, samotných alebo v kombinácii, vrátane izolovaných a purifikovaných foriem protilátok alebo komplexov, ich solí alebo ich farmaceutický prijatelných uskutočniť podávania derivátov, sa môže prijímaného spôsobu použitím akéhokoľvek obvykle prípravkov, ktoré prejavujú imunosupresívnu aktivitu.
Farmaceutické prípravky používané pri týchto liečbách môžu byť ·· · ·· ·· ·· ···· ··· ··· · e · · ··· · · ·· ··· ·· ·· ·· · tiež v celom rade foriem. Tie zahŕňajú napríklad pevné, polotuhé a tekuté dávkové formy, ako napríklad tablety, pilulky, prášky, tekuté roztoky alebo suspenzie, čapíky a roztoky pre injekcie a infúzie. Výhodná forma závisí na požadovanom spôsobe podávania a terapeutickej aplikácie.
Spôsoby podávania môžu zahŕňať podávanie perorálne, parenterálne, subkutánne, intravenózne, podávanie do lézií alebo topické podávanie. Rozpustné molekuly LT-beta-R, anti-LT ligandu a anti-LT-beta-R Ab podía tohto vynálezu môžu byť napríklad umiestnené do sterilných, izotonických formulácií s kofaktormi, ktoré stimulujú vychytávanie alebo stabilitu, alebo bez týchto kofaktorov. Formulácie sú výhodne tekuté alebo môžu byť vo forme lyofilizovaného prášku. Napríklad rozpustné molekuly LT-beta-R, anti-LT ligandu a anti-LT-beta-R Ab podlá tohto vynálezu môžu byť nariedené formulačným pufrom obsahujúcom 5,0 mg/ml monohydrátu kyseliny citrónovej, 2,7 mg/ml citrátu trojsodného, 41 mg/ml manitu, 1 mg/ml glycínu a 1 mg/ml polysorbátu 20. Tento roztok môže byť lyofilizovaný, uskladnený pri chlade a rekonštituovaný pred podávaním sterilnou vodou pre injekcie (USP).
Prípravky výhodne zahŕňajú aj obvyklé farmaceutický prijatelné v odbore známe nosiče (pozri napríklad Remington's Pharmaceutical Sciences, 16. vyd., 1980, Mac Publishing Company). Tieto farmaceutický prijateľné nosiče môžu zahŕňať ďalšie medicínske prípravky, nosiče, genetické nosiče, adjuvans, excipienty apod., ako napríklad ľudský sérový albumín alebo prípravky plazmy. Prípravky sú výhodne vo forme jednotkovej dávky a sú obvykle podávané raz alebo viac krát denne.
Farmaceutické prípravky podlá tohto vynálezu môžu byť podávané aj s použitím mikrosfér, lipozómov, ďalších mikropartikulárnych podávacích systémov alebo prípravkov s predĺženým (riadeným) ·· ·· · ·· ·· ·· • · ·· · · · · · • · · 9 9 999 9 · • t · · · ·· ··· · ··· ······ ·· 999 99 99 99 999 uvoľňovaním umiestnených v postihnutom tkanive, blízko neho alebo inak v kontakte s postihnutým tkanivom alebo v krvnom obehu. Vhodné príklady nosičov s predĺženým uvoľňovaním zahŕňajú semipermeabilné polymérové matrice vo forme tvarovaných predmetov, ako sú napríklad čipky alebo mikrotobolky. Implantovatelné alebo mikrotobolkové matrice s predĺženým uvoľňovaním zahŕňajú polylaktidy (patent USA č. 3 773 319, EP 58 481), kopolyméry kyseliny L-glutamovej a ethylL-glutamátu (Sidman et al., Biopolymers, 22, 547-56, 1985), poly(2hydroxyethyl-methakrylát) alebo ethylenvinylacetát (Langer et al.,
J. Biomed. Mater. Res., 15, 167-277, 1981, Langer, Chem. Tech., 12, 98-105, 1982).
Lipozómy obsahujúce rozpustné molekuly LT-beta-R, anti-LT ligand a anti-LT-beta-R Abs podľa tohto vynálezu, samotné alebo v kombinácii, môžu byť pripravené známymi metódami (pozri, napr. DE 3 218 121, Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 3688-92, 1985, Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4030-34, 1980, patent Spojených Štátov č. 4 485 045 a 4 544 545) . Lipozómy sú zvyčajne malého (približne 200-800 Á) unilamelárneho typu, v ktorom je obsah lipidov väčší než približne 30 mol % cholesterolu. Podiel cholesterolu je vybraný tak, aby kontroloval optimálnu rýchlosť uvoľňovania rozpustnej molekuly LT-beta-R, anti-LT ligandu a antiLT-beta-R Abs.
Rozpustné molekuly LT-beta-R, anti-LT ligand a anti-LT-beta-R Ab podľa tohto vynálezu môžu byť tiež pripojené k lipozómom obsahujúcim iné prípravky blokujúce LT-beta-R, imunosupresívne prípravky alebo cytokíny pre moduláciu blokujúcu aktivitu LT-betaR. Pripojenie molekúl LT-beta-R, anti-LT ligandu a antiLT-beta-R Ab k lipozómom sa môže uskutočniť každým známym zosieťovacím činidlom, ako sú napríklad heterobifunkčné zosieťovacie činidlá, ktoré sú široko používané na pripojovanie toxínov alebo chemoterapeutických prípravkov k protilátkam na cielené podávanie. Konjugácie k ·· · ·· ·· · ···· · · · · ·
I · · · · ··· · · • · · ·· ·· ··· · ·· · ···· · · ·· ··· ·· ·· ·· lipozómom sa môžu uskutočňovať aj použitím zosieťovacieho činidla zameraného na sacharidy hydrazidu 4-(4-maleimidofenyl)butyrovej kyseliny (MPBH) (Duzgunes et al., J. Celí. Biochem., Abst. Suppl. 16E 77, 1992) .
Prípravky blokujúce LT-beta-R podľa tohto vynálezu môžu byť modifikované tak, aby sa dosiahla požadovaná hladina signalizácie LT-beta-R v závislosti na stave, poruche alebo liečenom ochorení. Predpokladá sa, že absolútna úroveň signalizácie LT-beta-R môže byť jemne dolaďovaná manipuláciou koncentrácie a afinity prípravkov blokujúcich LT-beta-R k ich príslušným molekulovým cieľom. Napríklad v jednej forme tohto vynálezu sú pacientovi podávané prípravky obsahujúce rozpustné molekuly LT-beta-R. Rozpustný receptor LT-beta môže účinne kompetovať s receptormi LT-beta bunkového povrchu o väzbu povrchových LT ligandov. Schopnosť kompetovať s povrchovými LT ligandami závisí na relatívnych koncentráciách rozpustných a povrchových molekúl LT-beta-R a na ich relatívnych afinitách na väzbu ligandu.
Rozpustné molekuly LT-beta-R nesúce mutácie, ktoré zvyšujú alebo znižujú väzbovú afinitu mutantnej rozpustnej molekuly LTbeta-R a povrchového LT-ligandu, môžu byť pripravené štandardnými metódami génového inžinierstva (rekombinantné DNA), ktoré sú odborníkom známe. Veľký počet molekúl s miestne cielenými alebo náhodnými mutáciami sa môže testovať na ich schopnosť pôsobiť ako LT-beta-R blokujúce činidlo rutinnými experimentami a metódami tu opísanými. Podobne v inej forme vynálezu protilátky namierené buď to proti LT-beta receptoru alebo jednej alebo viacerým podjednotkám LT-ligandu pôsobia ako LT-beta blokujúce činidlá. Schopnosť týchto protilátok blokovať signalizáciu LT-beta receptoru môže byť modifikovaná mutáciami, chemickou modifikáciou alebo inými metódami, ktoré menia účinnú koncentráciu alebo aktivitu protilátky podávanej subjektu.
• · • · · · · · · ·· · • · ·· ·· • · · • · ··· • · · ·· ··· • · · · · ·· ··
Použitie
Všeobecne možno povedať, že LT-beta blokujúce činidlo podlá tohto vynálezu je užitočné na indukciu antivirusovej reakcie u jedinca, a to tým, že sa jedincovi podá účinné množstvo LT-beta blokujúceho činidla a farmaceutický prijateľný nosič. Vírusová reakcia, ktorú možno takto liečiť, môže byť spôsobená ľubovoľným známym vírusom, hlavne (avšak výpočet nie je omedzujúci) SNV (Sin Nombre vírus), Ebola, Marburg, Lassa a Dengue.
Ekvivalenty
Predkladaný vynález môže byť realizovaný v rade špecifických foriem zachovaní vynálezcovskej myšlienky alebo nutných charakteristík vynálezu. Nasledujúce špecifické formy vynálezu je preto nutné považovať za ilustračné príklady, ktoré predkladaný vynález nijak neobmedzujú. Predmet vynálezu je preto definovaný pripojenými nárokmi, nie však opisom, a všetky modifikácie, ktoré významom spadajú do rozsahu ekvivalentov nárokovaného riešenia sú tiež predmetom vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Nádorový nekrotický faktor (TNFa) hrá kľúčovú úlohu v sprostredkovaní akútnej šokovej reakcie pri infekcii vírusmi alebo inými imunogénmi (K.C.F. Sheehan, N.H. Ruddle, a R. D. Schreiber., J. Immunol., 142, 3884 (1989); G.W.H. Wong a D.V. Goeddel Náture 323, 819 (1986); B.Beutler, I.W. Milsark, A. Cerami, Science 229, 869 (1985); F. Mackay, P.R. Bourdon, D.A. Griffiths, et al. J. Immunol. 159, 3299 (1997); P.D. Crowe, T.L. VanArsdale, B.N. Walter, et al. Science 264, 707 (1994)). Pri epizódach horúčky Dengue zahŕňajúcich šok sú hladiny TNFa v sére pacientov zvýšené •· t ·· ·· ·· ···· ··· · · · • t · · · ··· · · • · · · · · · · ·· ··· ·· ·· ·· rovnako ako hladiny rozpustného TNFR-75 (D. Hober, et al., J. Trop. Med. Hyg., 48, 324 ( 1993); D.B. Bethell, K. Flobbe, C.X.T. Phuong, et al., J. Infect. Dis., 177, 778 (1998)).
Pôvodcovia merali hladiny TNF-alfa v sére myší infikovaných variantom lymfocytárneho vírusu choriomeningitídy, LCMV kloň 13 (LCMV- 13) (HH, II). Zistilo sa, že hladiny TNFa-alfa v sére týchto myší boli práve tesne nad detekčným limitom použitého testu až do 4. dňa po infekcii (hladiny TNFa v sére boli merané ELISA testom firmy Genzyme Corporation, katalóg, č. 80-2802-00). 5. a 6. deň po infekcii, keď ochorenie dosahuje vrchol, sa hladiny TNF-alfa v sére zvýšili 3 až 6 x nad normálne hladiny (dáta neuvedené). Preto sa rozhodlo blokovať funkciu TNFa použitím monoklonálnej protilátky TN3-19.12, o ktorej je známe, že viaže obidva sekretované TNF-alfa, čím znižuje hladinu u myší, ako bolo overené ELISA testom (K.C.F. Sheehan, N.H. Ruddle, a R.D. Schreiber., J. Immunol., 142, 3884 (1989) G.W.H. Wong a D.V. Goeddel Náture 323, 819 (1986); B. Beutler, I.W. Milsark, A. Cerami, Science 229, 869 (1985); F. Mackay, P.R. Bourdon, D.A. Griffiths, et al. J. Immunol. 159. 3299 (1997); P.D. Crowe, T.L. VanArsdale, B.N. Walter, et al. Science 264, 707 (1994); D. Hober, et al., J. Trop. Med. Hyg., 48, 324 (1993); D.B. Bethell, K. Flobbe, C.X.T. Phuong, et al., J. Infect. Dis., 177, 778 (1998)). Sérové hladiny TNF-alfa v sére boli merané ELISA testom firmy Genzyme Corporation, katalóg, č. 80-2802-00) . Myši NZB dostali intravenóznu (i.v.) dávku 2,5 x 106 pfu vírusu Cl 13 nasledovanú doma i.p. injekciami s 250 pg protilátky TN319.12 v PBS celkom bez endotoxínov (pozri odkaz na S) 1. deň a takisto 4. deň po infekcii. Kontrolné myši dostali v rovnaký deň injekcie rovnakého objemu PBS bez protilátky. Toto liečenie (anti-TNF) malo iba malý vplyv na prežívanie myší (pozri obr. č. 3) . Lymfotoxín alfa (LT-alfa), známy tiež ako TNF-beta, napriek tomu že zdieľa identické receptory a veľa biologických účinkov s TNF-alfa, nie je ·· • · • ··· : i • « ·· · rozpoznávaný touto protilátkou (F. Mackay, P.R. Bourdon, D.A. Griffiths, et al. J. Immunol. 159, 3299 (1997). Je možné, že na zvýšenie miery prežívania by bolo potrebné zacieliť ako TNF-alfa tak aj LT-alfa. Na testovnie tejto hypotézy sa použila vyššie uvedená monoklonálna protilátka TN3-19.12 a receptorový fúzny proteín, v ktorom bola extracelulárna doména receptoru TNF p55 fúzovaná s doménami CH2 a CH3 ľudského imunoglobulínu IgGl (TNFRSSIg)(W.R. Force, B.N. Walter, C. Hession, et. al., J. Immunol., 155, 5280 (1995); G.T. Miller, P.S. Hochman, W.
178, 211 (1993); J.L. Browning, I. Dougas,
Immunol., 154:33 (1995). Myši boli liečené ako bolo opísané v odkaze R. V trikrát liečenej skupine boli proteíny TNFR55-Ig a LTbeta-R-Ig podané i.p. 0. a 3. deň po infekcii v dávke 200 pg.
Kontrolné myši dostali dávku ľudskej protilátky použitej pri syntéze uvedených fúznych proteínov (AY 1943-29) ten istý deň a v rovnakom množstve. Myši, ktoré dostali samotný LT-beta-R-Ig boli liečené rovnako, až na to, že injekcia TNFRS5-Ig bola vynechaná. Ani toto liečenie významne nezvýšilo mieru prežívania NZB myší infikovaných LCMV-13 (pozri skupiny anti-TNF a TNFR55-Ig).
Meier, et. al., JEM., A. Ngam-ek, et al., J.
Membránová forma lymfotoxínu, heteromér LT-alfa a LT-beta nerozpoznáva TNFR-75 alebo TNFR-55, ale viaže sa na tretí receptor LT-beta-R (15). Na ďalšie použitie bol preto vybraný fúzny proteín obsahujúci extracelulárnu doménu LT-beta-R tiež naviazanú na domény CH2 a CH3 ľudského IgGl (LT-beta R-Ig). Liečenie myší použitím monoklonálnych protilátok anti-TNF-alfa, TNFR55Ig a LT-beta-R-Ig (trojité liečenie) alebo TNFR55-Ig a LT-betaR-Ig viedlo k dramatickému zvýšeniu prežívania o 80 % a 70 %, v uvedenom poradí. Naproti tomu iba 20 % myší liečených monoklonálnou protilátkou anti-TNF-alfa a TNFR55Ig prežívalo infekciu. V súčasnosti bol identifikovaný druhý ligand pre LT-beta-R nazývaný LIGHT (D.N. Mauri, R. Ebner, R.T. Montgomery, et al. Immunity 8, 21 (1998);
·· · e· ·· ·· ···· ··· · · · • · * :: :**· ·: i «· · · · · · · · ·· ··· ·· ·· ·· ·
R.I. Montgomery, M.S. Warner, B. Lum, et al. Celí 87, 427 (1996)). Ukázalo sa, že LIGHT sa viaže na mediátor vstupu infekcie herpetickým vírusom (HVEM), čo je transmembránový proteín typu I s výraznou homológiou s členmi rodiny TNF, ktoré sú exprimované na aktivovaných CD4 a CD8 T bunkách (D.N. Mauri, R. Ebner, R.I. Montgomery, et al. Immunity 8, 21 (1998); R.I. Montgomery, M.S.
Warner, B. Lum, et al. Celí 87, 427 (1996)). Na základe tu uvedených výsledkov možno odvodiť, že prevencia signalizácie LTbeta-R a potenciálne HVEM naviazaním LT-beta2/alfal a LIGHT prostredníctvom LT-beta-R-Ig bolo pravdepodobne zodpovedné za väčšinu pozorovaného účinku v skupine podrobenej trojitému liečeniu.
Táto hypotéza bola potvrdená liečením myší NZB infikovaných LCMV-13 samotným fúznym proteínom LT-beta-R-Ig. Miera prežívania myší v tejto skupine (73 %) bola vysoká takmer ako v skupine podrobenej trojitému liečeniu (obr. č. 3). Tieto údaje tak v svojom súhrne po prvý krát demonštrovali, že signálna dráha LTbeta-R a/alebo HVEM sa podieľa na priebehu akútneho letálneho ochorenia, ktorej súčasťou je systémový šok a respiračná nedostatočnosť.
V snahe určiť mechanizmus prežívania, na ktorom je založené liečenie blokovaním LT-beta, uskutočnili sa súčasne farbenie CD8/tetramér na NP118 špecifické T bunky, dominantný epitop NZB LD systému, a intracelulárne farbenie na tvorbu interferónu gama splenocytmi stimulovanými peptidom NP118 na vzorkách z myší NZB infikovaných LCMV-13, ktoré boli liečené kontrolnou protilátkou, samotným LT-beta-R-Ig alebo trojitým liečením. Obr. č. 4 ukazuje zníženie počtu CD8 T buniek špecifických na NP118, pričom najväčší účinok je vidieť pri myšiach podrobených trojitému liečeniu. Pri myšiach liečených kontrolnou protilátkou iba 10 % pozitívnych na tetraméry aktívne produkovalo interferón gama. Výskyt anergických T ·· ·· • · · • · ···
• · · · ·· ··
buniek v priebehu infekcie LCMV-13 bol dokumentovaný už skôr a je pravdepodobne vyvolaný vysokou hladinou vírusového antigénu u myší (obr. č. 1) . U myší liečených LT-beta-R-Ig nielen že klesol počet buniek špecifických pre NP118, ale taktiež bolo znížené percento buniek produkujúcich interferón gama. Tento efekt bol dokonca ešte výraznejší u myší podrobených trojitému liečeniu. Je preto pravdepodobné, že CD8 kompartment je zdrojom letálnej reakcie NZB na infekciu LCMV-13. Známa skutočnosť, že aktivované bunky CD8 reprezentujú LT-beta2/alfal, je v súlade s touto hypotézou (Y. Abe, A. Horiuchi, Y. Osuka, et al., Lymph. Ctyok. Res., 11, I 15 (1992); C.F. Ware, P.D. Crowe, M.H. Grayson, et al., J. Immunol., 149, 3881 (1992); J.L. Browning, A. Ngam-ek, P. Lawcon, et al., Celí, 72, 847 (1993)). Po potvrdení vyšie uvedenej hypotézy boli NZB myši odstránené CD8 alebo CD4 pozitívne T bunky in vivo (samci myší NZB dostali i.v. dávku 2,5 x 106 pfu LCMV-13 a potom dve i.p. injekcie po 500 μΐ protilátky oproti T bunkám. Monoklonálna protilátka Lyt2.43 sa použila na odstránenie CD8+ T buniek a protilátka GK1.5 (Ml) sa použila na odstránenie CD4+ T buniek. Obidve spomenuté protilátky boli pripravené precipitáciou síranom amónnym zo supernatantu hybridómov a dialýzou oproti PBS. Analýza FACS bola použitá pri niekolkých myšiach na potvrdenie odstránenia T buniek. Odstránenie CD4 T buniek nezvýšilo prežívanie. Naproti tomu odstránenie CD8 T buniek viedlo k 100 % prežívaniu pri absencii príznakov ochorenia podobne ako u myší liečených LT-beta-R-Ig (obr. č. 5). Pretože vírusové titre v niektorých tkanivách myší s odstránenými CD8 bunkami boli vyššie ako u liečených, je pravdepodobné, že príčinou smrti bola skôr toxická imunitná reakcia sprostredkovaná CD8 T bunkami, než deštrukcia tkanív vírusovou infekciou.
U myší NZB infikovaných vysokou intravenóznou dávkou LCMV-13 sa často vyvíja akútne, rýchlo postupujúce ochorenie, ktoré má rad ·· · ·· ·· ·· ···· ··· · · · • t · · · ··· · · • · · ·· ·· · · · · • · · ···· ·· ·· ··· ·· ·· ·· · spoločných znakov s vírusovými infekciami ako je Ebola, Marburg, Lassa, Dengue a Sin Nombre. Letalita týchto ochorení je závislá na prítomnosti CD8+ T buniek, o ktorých je známe, že keď sú aktivované, exprimujú TNF-alfa, LT-alfa a LT-beta. Napriek tomu, že je to povzbudivé zistenie, liečenie vírusovej infekcie odstránením CD8+ T buniek nemožno odporúčať. Takéto liečenie by viedlo k tomu, že pacienti by potom boli náchylní k iným oportúnnym infekciám. Okrem toho, keďže vymiznutie vírusu je nepravdepodobné v prítomnosti cytotoxických T buniek, existuje značné riziko tolerancie vírusu pacientom po novom vytvorení CD8+ kompartmentu.
Ukázalo sa, že blokovanie signálnej dráhy LT-beta-R/HVEM podávaním LT-beta-R-Ig predstavuje účinné liečenie, ktoré je svojou povahou dočasné, a ktoré dovoľuje rýchly návrat homeostázy po ukončení (Mackay a Browning, nepublikované). Takto liečené prežívajúce myši eliminovali nakoniec vírus v testovaných tkanivách (dáta neuvedené) a už ďalej neprejavovali známky ochorenia.
Tieto údaje po prvýkrát ukázali, že LT-beta-R signalizácia hrá dôležitú úlohu v antivírusovej reakcii a funkcii CD8 T buniek. Lymfotoxínový systém je tesne spojený s organizáciou lymfoidnej architektúry najpravdepodobnejšie prostredníctvom kontroly expresie niekoľkých chemokínov, ktoré riadia organizáciu T a B buniek (Chaplin et al. Curr. opin. Immunol. 10, 289 (1998), J. Cyster, v tlači). Zrelý funkčný stav folikulárnych dendritických buniek je udržiavaný konštantnou signalizáciou B buniek a tieto bunky miznú do jedného dňa po potlačení LT-beta-R signalizácie. Tieto bunky sú kritické pre prezentáciu antigénu kompartmentu T a B buniek.
Opodstatnenou špekuláciou teda je, že nejaký aspekt prezentácie antigénu CD8 bunkám alebo správne umiestnenie týchto buniek v chemokínovom gradiente v priebehu dozrievania sú narušené pri zablokovaní LT-beta-R signalizácie. Predchádzajúce štúdie ·· ·· • · · • · ···
·· ·· • · ·· · • · · · ·· ·· • · · • · • · • · funkcie LT boli zamerané predovšetkým na biológiu B buniek a ich zapojenie pri funkcii T buniek sa nepredpokladalo. Každý LT má ďalšie funkcie a aj tieto údaje odrážajú úlohu nového ligandu LIGHT. Akú úlohu hrajú HVEM a LIGHT v rozvoji tu opísaných ochorení zatial ostáva nejasné.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY ·· • · · • · ·· • · · • · • ·· ·· ·· ·· ·1. Použitie činidla, ktoré blokuje väzbu lymfotoxínu-beta na jeho receptor, na výrobu lieku na indukciu protivírusovej reakcie u jedinca, pričom liek obsahuje účinné množstvo činidla a farmaceutický prijateľný nosič.
- 2. Použitie podía nároku 1, kde činidlom je činidlo blokujúce LTbeta-R.
- 3. Použitie podľa nároku 2, kde činidlom je protilátka proti receptoru lymfotoxínu-beta alebo rozpustný receptor lymfotoxínubeta
- 4. Použitie podľa nároku 3, kde činidlom je fúzny protein lymfotoxín-beta-receptor/Ig.
- 5. Použitie podía nároku 1, kde činidlom je rozpustný lymfotoxínbeta alebo protilátka proti lymfotoxínu-beta.
- 6. Použitie činidla, ktoré blokuje signálnu dráhu receptora lymfotoxínu-beta a/alebo HVEM, na výrobu lieku na indukciu protivírusovej reakcie jedinca, pričom liek obsahuje účinné množstvo činidla.
- 7. Použitie podlá ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, pričom jedinec bol infikovaný vírusom Sin Nombre, Ebola, Marburg, Lassa aleboDengue.
·· · ·· ·· ·· • • ·· • • • • • • • • • • • ··· • • • • • • • • • · • • ·· ··· ·· ·· ·· • - 8. Použitie podľa nároku 7, kde činidlom je fúzny proteín lymfotoxín-beta-receptor/Ig.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10366298P | 1998-10-09 | 1998-10-09 | |
| PCT/US1999/023477 WO2000021558A1 (en) | 1998-10-09 | 1999-10-08 | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK4662001A3 true SK4662001A3 (en) | 2001-11-06 |
Family
ID=22296372
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK466-2001A SK4662001A3 (en) | 1998-10-09 | 1999-10-08 | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20020001585A1 (sk) |
| EP (1) | EP1119370B1 (sk) |
| JP (2) | JP4713738B2 (sk) |
| KR (1) | KR100888832B1 (sk) |
| CN (1) | CN1200733C (sk) |
| AT (1) | ATE329618T1 (sk) |
| AU (1) | AU777492C (sk) |
| BR (1) | BR9915025A (sk) |
| CA (1) | CA2344049C (sk) |
| CY (1) | CY1105059T1 (sk) |
| CZ (1) | CZ20011272A3 (sk) |
| DE (1) | DE69931944T2 (sk) |
| DK (1) | DK1119370T3 (sk) |
| EA (1) | EA006703B1 (sk) |
| EE (1) | EE04661B1 (sk) |
| ES (1) | ES2267294T3 (sk) |
| HU (1) | HUP0103773A3 (sk) |
| IL (2) | IL142284A0 (sk) |
| IS (1) | IS2514B (sk) |
| NO (1) | NO326905B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ510560A (sk) |
| PL (1) | PL195264B1 (sk) |
| PT (1) | PT1119370E (sk) |
| SG (1) | SG121778A1 (sk) |
| SK (1) | SK4662001A3 (sk) |
| TR (1) | TR200100974T2 (sk) |
| WO (1) | WO2000021558A1 (sk) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5925351A (en) | 1995-07-21 | 1999-07-20 | Biogen, Inc. | Soluble lymphotoxin-β receptors and anti-lymphotoxin receptor and ligand antibodies as therapeutic agents for the treatment of immunological disease |
| US6998108B1 (en) | 1997-07-07 | 2006-02-14 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Antibodies to p30 polypeptides and methods making and using same |
| US7118742B2 (en) | 1997-07-07 | 2006-10-10 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Ligand for herpes simplex virus entry mediator and methods of use |
| US7060667B1 (en) * | 1998-01-30 | 2006-06-13 | Biogen Idec Ma, Inc. | Treatment of follicular lymphomas using inhibitors of the LT pathway |
| SG121778A1 (en) * | 1998-10-09 | 2006-05-26 | Univ Emory | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway |
| TR200504220T2 (tr) * | 1998-12-17 | 2007-04-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Aktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimeAktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimerik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştrik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştırılması için bir yöntem.ırılması için bir yöntem. |
| WO2001079496A2 (en) * | 2000-03-13 | 2001-10-25 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Ligand for herpes simplex virus entry mediator and methods of use |
| ES2352742T3 (es) * | 2000-04-12 | 2011-02-22 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Ligando para el mediador de entrada del virus del herpes simple y procedimientos de utilización. |
| US7700097B2 (en) * | 2003-06-27 | 2010-04-20 | Biogen Idec Ma Inc. | Purification and preferential synthesis of binding molecules |
| CN1980957A (zh) * | 2004-03-23 | 2007-06-13 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 受体偶联剂及其治疗用途 |
| WO2006074399A2 (en) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Multispecific binding molecules comprising connecting peptides |
| EP2311481A3 (en) * | 2006-10-20 | 2013-10-16 | Biogen Idec MA Inc. | Treatment of demyelinating disorders with soluble lymphotoxin-beta-receptor |
| US8338376B2 (en) * | 2006-10-20 | 2012-12-25 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions comprising variant LT-B-R-IG fusion proteins |
| US20090136427A1 (en) * | 2007-09-18 | 2009-05-28 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | LIGHT Inhibitors For Asthma, Lung and Airway Inflammation, Respiratory, Interstitial, Pulmonary and Fibrotic Disease Treatment |
| CN106591446A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-04-26 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 细胞通路调控分子在作为药物靶点及诊断ebov感染中的应用 |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3773919A (en) * | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
| IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
| US4485045A (en) * | 1981-07-06 | 1984-11-27 | Research Corporation | Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes |
| DE3218121A1 (de) | 1982-05-14 | 1983-11-17 | Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München | Arzneimittel zur tumorbehandlung |
| US4816567A (en) * | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4544545A (en) * | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
| US5225538A (en) * | 1989-02-23 | 1993-07-06 | Genentech, Inc. | Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins |
| US7030080B2 (en) * | 1990-06-27 | 2006-04-18 | Biogen, Inc. | Lymphotoxin-β, lymphotoxin-β complexes, pharmaceutical preparations and therapeutic uses thereof |
| CA2086264C (en) * | 1990-06-27 | 2002-12-24 | Jeffrey L. Browning | Surface complexed lymphotoxin |
| US5795964A (en) * | 1990-06-27 | 1998-08-18 | Biogen, Inc. | Lymphotoxin-beta and lymphotoxin-beta complexes |
| WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| CA2150249A1 (en) | 1992-12-04 | 1994-06-23 | Jeffrey Browning | Lymphotoxin-.beta., lymphotoxin-.beta. complexes, pharmaceutical preparations and therapeutic uses thereof |
| US6312691B1 (en) * | 1996-01-26 | 2001-11-06 | Jeffrey L. Browning | Lymphotoxin-α/β complexes and anti-lympotoxin-β receptor antibodies as anti-tumor agents |
| CN1589902A (zh) | 1995-01-26 | 2005-03-09 | 拜奥根有限公司 | 抗－LT－β－R抗体在制备药用组合物中的应用 |
| US5925351A (en) * | 1995-07-21 | 1999-07-20 | Biogen, Inc. | Soluble lymphotoxin-β receptors and anti-lymphotoxin receptor and ligand antibodies as therapeutic agents for the treatment of immunological disease |
| US6291207B1 (en) * | 1995-07-28 | 2001-09-18 | Northwestern University | Herpes virus entry receptor protein |
| US7255854B1 (en) * | 1996-10-25 | 2007-08-14 | Biogen, Inc. | Use of lymphotoxin-β receptor blocking agents for the treatment of antibody mediated immunological diseases |
| AU726357B2 (en) * | 1996-10-25 | 2000-11-02 | Biogen Idec Ma Inc. | Soluble lymphotoxin-beta receptors, anti-lymphotoxin receptor antibodies, and anti-lymphotoxin ligand antibodies as therapeutic agents for the treatment of immunological diseases |
| GB9622660D0 (en) * | 1996-10-31 | 1997-01-08 | Biocine Spa | Immunogenic detoxified mutant toxin |
| US7060667B1 (en) * | 1998-01-30 | 2006-06-13 | Biogen Idec Ma, Inc. | Treatment of follicular lymphomas using inhibitors of the LT pathway |
| SG121778A1 (en) * | 1998-10-09 | 2006-05-26 | Univ Emory | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway |
| TR200504220T2 (tr) * | 1998-12-17 | 2007-04-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Aktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimeAktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimerik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştrik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştırılması için bir yöntem.ırılması için bir yöntem. |
| JP2005532051A (ja) * | 2002-07-01 | 2005-10-27 | バイオジェン， インコーポレイテッド | ヒト化抗リンホトキシンβレセプター抗体 |
-
1999
- 1999-10-08 SG SG200303599A patent/SG121778A1/en unknown
- 1999-10-08 DE DE69931944T patent/DE69931944T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 WO PCT/US1999/023477 patent/WO2000021558A1/en active IP Right Grant
- 1999-10-08 CZ CZ20011272A patent/CZ20011272A3/cs unknown
- 1999-10-08 IL IL14228499A patent/IL142284A0/xx unknown
- 1999-10-08 PL PL99347177A patent/PL195264B1/pl unknown
- 1999-10-08 PT PT99950270T patent/PT1119370E/pt unknown
- 1999-10-08 JP JP2000575531A patent/JP4713738B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-08 HU HU0103773A patent/HUP0103773A3/hu unknown
- 1999-10-08 BR BR9915025-5A patent/BR9915025A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-10-08 TR TR2001/00974T patent/TR200100974T2/xx unknown
- 1999-10-08 AU AU62964/99A patent/AU777492C/en not_active Ceased
- 1999-10-08 ES ES99950270T patent/ES2267294T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 CA CA002344049A patent/CA2344049C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-08 DK DK99950270T patent/DK1119370T3/da active
- 1999-10-08 AT AT99950270T patent/ATE329618T1/de active
- 1999-10-08 EA EA200100430A patent/EA006703B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-10-08 CN CNB998119555A patent/CN1200733C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-08 NZ NZ510560A patent/NZ510560A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-08 EP EP99950270A patent/EP1119370B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-08 SK SK466-2001A patent/SK4662001A3/sk unknown
- 1999-10-08 KR KR1020017004493A patent/KR100888832B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-10-08 EE EEP200100211A patent/EE04661B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-09 IS IS5882A patent/IS2514B/is unknown
- 2001-03-27 IL IL142284A patent/IL142284A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-04-06 NO NO20011757A patent/NO326905B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-04-09 US US09/829,031 patent/US20020001585A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-04-21 US US10/829,720 patent/US7452530B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-06-26 CY CY20061100872T patent/CY1105059T1/el unknown
-
2008
- 2008-10-08 US US12/247,374 patent/US20090087403A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-02-19 JP JP2010035451A patent/JP2010155852A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20090087403A1 (en) | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway | |
| US20200095305A1 (en) | Methods of modulating immune responses using bcma polypeptide | |
| PL186911B1 (pl) | Zastosowania LT-beta-R-Fc oraz białka fuzyjnego LT-beta-R | |
| JP2007169296A (ja) | 抗腫瘍因子としてのリンフォトキシン−α／β複合体および抗リンフォトキシン−βレセプター抗体 | |
| KR100584704B1 (ko) | 면역 질환을 치료하기 위한 치료제로서의 가용성 림포톡신-베타 수용체, 항림포톡신 수용체 항체 및 항림포톡신 리간드 항체 | |
| ES2226152T3 (es) | Terapia de bloqueo de cd154 para el sindrome inhibidor de proteina terapeutica. | |
| US6015559A (en) | Fas antagonists | |
| JP2003528030A (ja) | アポトーシス誘導分子ｉｉ | |
| EP0689600B1 (en) | Process to induce the death of tumor cells | |
| MXPA01003605A (en) | Reversal of viral-induced systemic shock and respiratory distress by blockade of the lymphotoxin beta pathway |