SK4272000A3 - The use of dolastatin-15 derivative in the treatment and prevention of rheumatoid arthritis - Google Patents

The use of dolastatin-15 derivative in the treatment and prevention of rheumatoid arthritis Download PDF

Info

Publication number
SK4272000A3
SK4272000A3 SK427-2000A SK4272000A SK4272000A3 SK 4272000 A3 SK4272000 A3 SK 4272000A3 SK 4272000 A SK4272000 A SK 4272000A SK 4272000 A3 SK4272000 A3 SK 4272000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
prolyl
tert
carbonyl
val
formula
Prior art date
Application number
SK427-2000A
Other languages
English (en)
Inventor
Teresa Barlozzari
Subhashis Banerjee
Andreas Haupt
Original Assignee
Basf Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Ag filed Critical Basf Ag
Publication of SK4272000A3 publication Critical patent/SK4272000A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka použitia derivátov dolastatinu-15 na prípravu liečiva na liečenie alebo profylaxiu reumatoidnej artritídy u cicavcov.
Doterajší stav techniky
Reumatoidná artritída sa všeobecne považuje za autoimunitnú chorobu, o ktorej sa predpokladá, že je spojená s aktivitou autoreaktívnych lymfocytov T (pozrite napr. Harris, E. D., Jr., The New England Journal of Medicíne, 322: 12771289 (1990)). Napriek pokrokom v liečbe ostáva reumatoidná artritída vážnym zdravotným problémom. Hoci je artritída zriedka smrteľná, je významnou príčinou morbidity, výpadkov z pracovného procesu, straty produktivity a zníženia kvality života. Reumatoidná artritída spôsobuje vážnu bolesť a stratu pohyblivosti kĺbov a môže sťažiť vykonávanie aj tých najjednoduchších úkonov.
Medzi aktuálne spôsoby a režimy liečby reumatoidnej artritídy patrí podávanie nesteroidných protlzápalových liečiv ako kyselina acetylsalicylová (aspirín), ibuprofen, naproxen a iné podobné prostriedky, zlúčeniny zlata, penicilamín, metotrexát, cytotoxické prostriedky (napr. azotrioprín), 4aminochinolínové prostriedky a imunomodulátory. Sú však potrebné nové liečby reumatoidnej artritídy, ktoré dokážu potlačiť alebo priniesť zlepšenie symptómov ako zápal, opuch, abnormálna neovaskularizácia, erózia kosti alebo erózia chrupavky. Taký zlepšený spôsob liečby by sa mal pokiaľ možno dať kombinovať s inými spôsobmi liečby, mal by účinkovať rýchlo, aby spôsobil regresiu alebo stabilizáciu symptómov, a mal by byť dobre tolerovaný. Taký liečebný režim by mal byť pokiaľ možno užitočný pri profylaxii u citlivých jedincov.
Podstata vynálezu
Tento vynález sa týka použitia derivátov dolastatinu-15 na prípravu liečiva na liečenie alebo profylaxiu reumatoidnej artritídy u cicavcov, napríklad u človeka. Deriváty dolastatinu-15 podľa predloženého vynálezu sú zlúčeniny vzorca I:
R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)r(G)u-K (I)
Vzorec I je podrobne opísaný nižšie. Niektoré príklady zlúčenín vzorca I sú tu špecificky uvedené. Zlúčeniny vzorca I môžu byť napríklad tie, v ktorých R1 a R2 sú oba metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u sú 0; A je valyf, izoleucyl alebo 2-terc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 1-izoleucyl alebo 2terc-butylglycyl; D je tiazolidinylkarbonyl, 3,4-dehydroprolyl alebo prolyl; E je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, hydroxyprolyl alebo 3,4-dehydroprolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-Re, kde R5 je vodík alebo Ci-C4-alkoxy a R6 je jednoväzbový radikál, napríklad (1)- alebo (2)-adamantyl; (Chfejv-fenyl s v = 1; a,α-dimetylbenzyl; lineárna alebo rozvetvená C1-C12 hydroxyalkylová skupina, napríklad -C(CH3)2-CH2-CHrOH, tiež označovaná ako 3-hydroxy-1,1-dimetylpropyl; C3-C10 cykloalkyl, napríklad bicyklo[3,3,0]okta-1-yl, 1-metylcyklopentyl alebo
1-metylcyklohexyl; alebo lineárny alebo rozvetvený C1-C12 alkyl, napríklad
-C(CH3)3 označovaný aj ako ferc-butyl;
-C(CH3)2-CH2-CH3 označovaný aj ako 1,1-dimetylpropyl;
-CH(CH3)(CH2-CH3)2 označovaný aj ako 1-metyl-1-etylpropyl;
-CH(CH3)-C(CH3)3 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-metyl-2,2-dimetylpropyl;
-CH(C2H5)-CH(CH3)2 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-etyl-2-metylpropyl;
-CH[CH(CH3)2]-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1-izopropyl-2-metyl-propyl;
alebo
-C(CH3)2-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,1-dimetyl-2-metylpropyl;
-CH(CH3)2 označovaný aj ako izopropyl;
-CH(CH3)CH2CH3l sek-butyl [(S) alebo (R)]; alebo
-CH(CH3)CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,2-dimetylpropyl.
Na liečenie reumatoidnej artritídy u cicavcov, napríklad u človeka, sa podľa vynálezu používa jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 tu opísaných. Podáva sa jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 samotných alebo vo farmakologicky prijateľnom nosiči v terapeuticky účinnom množstve na liečbu reumatoidnej artritídy u cicavca majúceho reumatoidnú artritídu alebo citlivého na ňu.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa podáva jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 v kombinácii s jednou alebo viacerými antiartritickými liečivami cicavcovi majúcemu reumatoidnú artritídu alebo citlivému na ňu.
V rámci špecifického uskutočnenia sa podávajú dva alebo viacero derivátov dolastatinu-15 samotné alebo v kombinácii s jednou alebo viacerými antiartritickými liečivami cicavcovi majúcemu reumatoidnú artritídu alebo citlivému na ňu. Podanie dvoch alebo viacerých derivátov dolastatinu-15 alebo podanie derivátov dolastatinu-15 v kombinácii s jedným alebo viacerými antiartritickými liečivami zlepšuje liečbu reumatoidnej artritídy. Napríklad kombinácia poskytuje väčšie potlačenie alebo menej vedľajších účinkov a/alebo môže umožniť podávanie nižšej dávky známeho antiartrítického liečiva, pričom sa dosiahne rovnaký účinok ako pri vyššej dávke. Týmto ďalším antiartritickým liečivom môže byť okrem iného jedno alebo viacero z nasledujúcich: (1) nesteroidný protizápalový prostriedok, napríklad kyselina acetylsalicylová (aspirín), ibuprofen alebo naproxen; (2) organický derivát zlata, napríklad tiomaiát sodíka a zlata, aurotioglukóza alebo auranofin; (3) D-penicilamín; (4) 4-aminochinolínový prostriedok, napríklad hydroxychlorochin; (5) azatioprín; (6) metotrexát; (7) cyklosporín; (8) inhibítor angiogenézy, napríklad AGM-1470 (Ingber, a kol., Náture 348, (1990) 555); (9) monoklonálne protilátky pre lymfocyty T; (10) monoklonálne protilátky pre adhézne molekuly; (11) monoklonálne protilátky pre cytokíny a rastové faktory; (12) receptor faktora nádorovej nekrózy - Tumor Necrosis Factor Receptor (TNFR)-lgG; (13) antagonisti receptora IL-1; a (14) ICE inhibítory.
Opísané sú aj farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 vzorca I buď samotné alebo v kombinácii s jedným alebo viacerými antiartritickými liečivami. Farmaceutická kompozícia môže voliteľne obsahovať farmaceutický prijateľný nosič, riedidlo alebo zlúčeninu, ktorá pomáha pri spracovaní, napríklad spojivá, plnivá a konzervačné látky.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Na obrázku 1 sú zlúčeniny i-xvii ako príklady na deriváty dolastatinu-15 so štruktúrou vzorca i.
Obrázok 2 je graf zobrazujúci stredné artritické skóre ako funkciu počtu dní po imunizácii kolagénom typu II pre myši liečené fyziologickým roztokom (kontrola), dexametazonom (štandardná terapia) a zlúčeninou ii z obrázka 1. Liečba začala na deň 26 po imunizácii a bola ukončená na deň 35 po imunizácii.
Obrázok 3 je graf zobrazujúci stredné artritické skóre ako funkciu počtu dní po imunizácii kolagénom typu II pre myši liečené vehikulom (kontrola), dexametazonom (štandardná terapia) a zlúčeninou ii z obrázka 1. Liečba začala na deň 48 po imunizácii a trvala 21 dní.
Obrázok 4 je graf zobrazujúci stupeň synovitídy a poškodenia chrupavky podľa určenia histopatologickou analýzou pre myši liečené vehikulom, dexamethazonom (štandardná terapia) a zlúčeninou ii z obrázka 1. Myši boli liečené počnúc 48. dňom po imunizácii kolagénom typu II a liečba trvala 21 dní. Nekropsia bola vykonaná na deň 71 po imunizácii.
Podrobný opis vynálezu
Predložený vynález sa týka použitia derivátov dolastatinu-15 na prípravu liečiva na liečenie alebo profylaxiu reumatoidnej artritídy u cicavcov. Deriváty dolastatinu-15 podľa vynálezu sú zlúčeniny so štruktúrou zobrazenou vzorcom I, ktorý je podrobnejšie opísaný ďalej. Zlúčenina sa podáva v terapeuticky účinnom množstve. V tu používanom význame sa termín “terapeuticky účinné množstvo” vzťahuje na množstvo dostatočné na vyvolanie požadovanej biologickej odozvy. V tomto vynáleze je požadovanou biologickou odozvou na liečbu potlačenie reumatoidnej artritídy. V tu používanom význame termín potlačenie zahŕňa čokoľvek alebo všetko z nasledujúcich: (1) zlepšenie existujúcich symptómov; (2) prevencia alebo spomalenie progresie symptómov; (3) prevencia alebo oneskorenie nástupu alebo výskytu choroby u vnímavého subjektu, t.j. profylaxia. Medzi symptómy typicky spojené s reumatoidnou artritídou patri okrem iného zápal, opuch, abnormálna neovaskularizáda, erózia kosti a erózia chrupavky. Jeden alebo viacero týchto symptómov sa potlačí, keď sa podá terapeuticky účinné množstvo derivátu dolastatinu-15 vzorca I.
Zlúčeniny vzorca I
Z Dolabella auricularia, morského zajaca žijúceho v Indickom oceáne, bolo izolovaných niekoľko krátkych peptidov s významnou aktivitou vo funkcii inhibítorov rastu buniek (Bai a kol., Biochem. Pharmacology, 40:1859-1864 (1990); Beckwith a kol., J. Natl. Cancer Inst, 85: 483-488 (1993) a tam citované odkazy). Patria medzi ne dolastatiny 1 až 10 (patent USA č. 4,816,444 vydaný pre Pettit a kol.) a dolastatin 15 (európska patentová prihláška č. 398558). Dolastatin 15 napríklad výrazne inhibuje rast bunkovej línie lymfatickej leukémie P388 z National Cancer Inštitúte, čo je silný prediktor účinnosti proti rôznym typom ľudských zhubných nádorov. Táto zlúčenina je však v morskom zajacovi prítomná iba v stopových množstvách a ťažko sa izoluje, jej syntéza je drahá a má slabú rozpustnosť vo vode.
Zlúčeniny vzorca I sú derivátmi dolastatinu-15. Prekvapujúco sa zistilo, že zlúčeniny vzorca I sú užitočné pri liečbe reumatoidnej artritídy. Deriváty dolastatinu-15 vzorca I, ktoré sa používajú podľa predloženého vynálezu, možno syntetizovať podľa popisu uvedeného tu a v súvisiacej súbežne vybavovanej prihláške U.S.S.N. 08/472,453 podanej 7 júna 1995, ktorej zistenia sa týmto zahŕňajú do tejto prihlášky.
5a
Deriváty dolastatinu-15 vzorca I vo všeobecnosti pozostávajú z Laminokyselín, ale môžu obsahovať aj jednu alebo viacero D-aminokyselín, ako je opísané v súvisiacej súbežne vybavovanej prihláške U.S.S.N. 08/472,453 podanej
7. júna 1995. Zlúčeniny vzorca I sa môžu vyskytovať aj ako soli s fyziologicky kompatibilnými kyselinami, medzi ktoré patrí okrem iných kyselina chlorovodíková, kyselina citrónová, kyselina vínna, kyselina mliečna, kyselina fosforečná, kyselina metánsulfónová, kyselina octová, kyselina mravčia, kyselina maleínová, kyselina fumárová, kyselina jablčná, kyselina jantárová, kyselina malónová, kyselina sírová, kyselina L-glutámová, kyselina L-asparágová, kyselina pyrohroznová, kyselina sÍková, kyselina benzoová, kyselina glukurónová, kyselina Sľa'Oľová, kysciiiia askorbová a acetylglycín.
Na účely predloženého vynálezu bude termín jednoväzbový rndikáľ znamenať elektricky neutrálny molekulový fragment schopný vytvoriť jednu kovalentnú väzbu s druhým neutrálnym molekulovým fragmentom. Medzi jednoväzbové radikály patrí atóm vodíka, alkyl (napr. metyl, etyl, propyl a tetebutyl), cykloalkyl, hydroxyalkyl, adamantyl, atómy halogénov (napr. iľuór, chlór a bróm), aryl (napr. fenyl, benzyl a naftyl) a alkoxy (napr. metoxy a otoxy). Dva jednoväzbové radikály na susedných atómoch viazaných sigma viŕzbou môžu liož tvoriť pí väzbu medzi týmito susednými atómami. Dva jednoväzbové radikály môžu tiež byť navzájom spojené, napríklad polymetylénovou jednotkou, čím ce vyivorí cyklická štruktúra. Napríklad jednotka -N(R)R’, kde R aj R’ sú jednoväzbové radikály, môže spolu s atómom dusíka vytvoriť heterocyklický kruh. Okrom ícho dva jednoväzbové radikály viazané na ten istý atóm môžu tiež tvoriť dvojväzbevý radikál, napríklad alkylidénovú skupinu, napríklad proyplidónovú skupinu. ?.!cbo atóm kyslíka.
Špecifickejšie pre zlúčeniny vzorca I:
R1 je alkyl, napríklad C1-C3; cykloalkyl, napríklad cyklopropyl; r.ikylsulfonyl, napríklad CpCg; íluóralkyl, napríklad fluóretyl, difluórctyl, íiuérLopicp'/l; aminosulfonyl, ktorý môže byť substituovaný alkylom, napríklad mety lem;
R2 je vodík; alkyl, napríklad C1-C3; fluóralkyl, napríklad fiuórev/l, difluóreíyl, fluórizopropyl; cykloalkyl, napríklad cyklopropyl;
R1-N-R2 môžu byť spolu pyrolidino alebo pipei idirio;
A je valyl, izoleucyl, leucyl, alo-izoleucyl, 2,2-o'ímelylglycyl, 2-syklopropylglycyl, 2-cyklopentylglycvl, 3-tem-butylalanyl, 2-fom-buty!g!ycyl, 2-cykhh&xylalanyl, 2-etylglycyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl alebo norvalyl;
B je N-alkyl-valyl, -norvalyl, -leucyl, -izoleucyl, -2-ŕerc-butyiglycyl, -3ŕerc-butylalanyl, -2-etyIglycyl, -2-cyklopropylglycyl, -2-cyklopentylglycyl, norleucyl alebo -2-cyklohexy (glycyl, kde Ν-clkyl je s výhodou N-mstyl alebo Ľ-· tyl;
D je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl, 3-metylprolyl, 4-metylprolyl, 5-metylprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3,3-ďirneiylprolyl, 4,4-difluórprolyl, oxazolidín-4-kai bonyl alebo tiazolidín-4-karbonyl;
E je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-'.'luórpro!yl, 3-metylprolyl, 4-metylprolyl, 5-mctylprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3,3-dimeíylprolyl, 4,4-difluórprolyl, oxazolidín-4-karbonyl alebo tiazolidín-4-kaibonyl;
F a G sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nasíidujúcich: prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, 1-aminopenlyl-1-karbonyl, valyl, 2-terc-buiylglycyl, izoleucyl, leucyl, 3-cykloľiexylaíanyl, fenyluhnyl, Nmetylfenylalanyl, tetrahydrosiochinolyl-2-hisíidyl, 1-amino:ndyl-1-kar bonyl, 3pyridylalanyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopenLylglycyl, tiypíofenyl, glycyl, 2,2-dimelylglycyl alanyl, β-alanyl a 3-nafly!alanyl;
X je vodík, alkyl (napríklad CrCJ, cykloalkyl (n^príklrd C3-C7), -Cí bcyklohexyl alebo arylalkyl (napríklad benzyl alebo fenotvl);
s, t a u sú nezávisle 0 alebo 1; a
K je hydroxy, alkoxy (napríklad Ci-C4), fenoxy, benzyloxy alebo substituovaná alebo nesubsliíuovaná aminoskupina.
Okrem toho môžu byť zlúčeniny vzorca I prítomné ako soli s fyziologicky tolerovanými kyselinami.
Do jednej podtriedy zlúčenín podľa tohto vynálezu patria zlúčeniny vzorca I,
9 kde R -N-R je pyrolidinyl alebo piperidinyl.
Do ďalšej podtriedy zlúčenín tohto vynálezu patria zlúčeniny vzorca I, kde je aminoskupina vzorca Rs-H-Re, kde:
R5 je vodík alebo hydroxy alebo C1.7 alkoxy alebo benzyloxy alebo fenyloxy alebo lineárny alebo rozvetvený CM2 hydroxyalkyl, napríklad 3-hydroxy1,1-dimeíylpropyl, alebo lineárny alebo rozvetvený C1.7 alkyl ('Cc:ý iňôžo byť substituovaný jedným alebo viacerými atómami fluóru), alebo C3.10 cykloalkyl, napríklad bicyklo[3,3,0]okta-1-yl, 1-metylcyklopenlyl alebo 1-metylcylcohexyl; alebo benzyl (ktorý môže byť substituovaný až troma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, C1.7 alkylsulfonyl, Cm alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogén, Cmalkyl, kyano, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr alebo COONH2);
Rb je vodík alebo lineárny alebo rozvetvený Cm2 alkyl (ktorý môže byť substituovaný jedným alebo viacerými atómami fluóru), alebo lineárny alebo rozvetvený Cm2 hydroxyalkyl, napríklad 3-hydroxy-1,1-dimelylpropyl, alebo C3.10cykloalkyl, napríklad bicyklo[3,3,0]okta-1-yl alebo 1-melylcyklopentyl alebo 1metylcyklohexyl; alebo -(CH2)v-C3-7-cykloalkyl (v = 0,1, 2 alebo 3), alebo norcfcrJryl alebo norpseudoefedryl alebo chinolyl alebo pyrazyl alebo -CHrbenzirnirInzolyl alebo (l)-adamantyl alebo (2)-adamanlyl-, -CH2-adamantyl alebo nlfá-mety! benzyl alebo alfa-dimetylbenzyl alebo -(CH2)v-fenyl (v = 0, 1,2 alebo 3; ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môže byť nezávisle CF3, r.iiro, C,./ alkylsulfonyl, Cm alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogén, CM-alfcyl, ktorý môže b/cnť cyklický systém, kyano, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr r! bo COONH2) alebo -(CH^m-n&ftyl (m = 0 alebo 1); alebo -(CH2)w<benzhyt!i yl (wn, 1 alebo 2); alebo bifenyl alebo pikolyl alebo benzoíiazolyl alebo bei i? oizu’j..-_vlyt alebo benzopyrazolyl alebo benzoxazolyl alebo -(CH2)m-fluorenyl (m - o elebo ’i); alebo pyrimidyl alebo -(CHz)m-indanyl (m = 0 alebo 1); alebo -(CH2CH2G)rC! b (y 0, 1, 2, 3, 4 alebo 5), alebo -(CH2CH2O)y-CH2CH3 (y = 0, 1, 2, 3, 4 alebo 5 ), rLbo NH-C6H5 (ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými rnôžo byť nezávisle CF3, nitro, C1.7 alkylsulfonyl, Cm alkoxy, halogén, Cw alkyl, ktorý môže tvoriť cyklický systém, kyano, hydroxy, COOMe, COOEt, COOiFľ elebo COOWH2), alebo -NCH3-C6H5 alebo -NH-CH2-C5H5 alebo -NCH3-CH2-Cí,H;5 alebo 5-člen:iý heteroaryl, ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môže byť nezávisle CF3, nitro, tiomeíyl, tioetyl, C3 G-cykloalkyl, -Cl b-OOOEí, C::.
alkylénová skupina tvoriaca bicyklický systém s heteracyklom, fenyl; alebo -CHR75-členný heteroaryl (ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môže byť nezávisle CF3, nitro, kyano, halogén, COOMe, COOEt, COOiFr, CCr!!-!z, CM-alkyl, CM-alkoxy, fenyl, benzyl, naftyl alebo Ci.7-alkylsulfonyl [R7 = vodík, lineárny alebo rozvetvený C1.5 alkyl, benzyl; alebo R7 a R5 spolu tvoria skupinu (Cbfeb- alebo -(CFbM·
Do tejto podtriedy patria zlúčeniny vzorca I, kde s, t a u sú nezávisle 0 alebo 1; R1, R2 a X je nižší alkyl, A je nižšia alkylaminokyselina, B je nižšia aikylaminokyselina N-alkylovaná nižším alkylom; D, E, F, G a K majú vyššie uvedený význam. Vzhľadom na vyššie uvedené možno nasledujúcimi vzorcami II, lll a IV znázorniť tri skupiny takých zlúčenín:
R1R N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-G-K
R1 R2N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-K ,1.-,2.,
II
III
IV
R1R N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-X
-CHR7-5-členný heteroaryl môže byť napríklad zastúpený jedným z nasledujúcich zvyškov:
CH?
I
COOEt
''Cl'b ''CHz ^ch2 ^CH?
S N S^N S^N 1
M. M ...
COOMe
COOBzl
CONHBzl
COWH2
CHZ
Á
CH3
XH2
J
S^N
M
CH? 1 '
S^N ‘C U,
CON(CH3)2
H3C^ ^COOEt H3C
Cl Ί ‘3
CH(CH3)2
CH(CH3)2
CONHZ
CH(CH3)2
COI\’(CH3)2
-NR5CHR7-5-členný heteroaryl môže byť napríklad zastúpený nasledujúcimi •t zvyškami:
WV00* <N>YNy-C00CH3 <Ν>-γΝ^ΟΟΟΒζΙ
5-členný heteroaryl môže byť napríklsd zastúpený nasledujúcimi z'-yukoini:
COOCK3
.CQOĽt
EtOOC CH3
EtOOC CK3
N. .CH,
cr .CH,
ΎΖ .CF3 '3
N
S- í
CCOEt
N
CH,
V ďalšej podtriede zlúčenín tohto vynálezu môže R5-N-R6 spolu tvoriť štruktúry vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich:
Do ďalšej podtriedy zlúčenín tohto vynálezu patria napríklad zlúčeniny vzorca I, kde s, t a u sú 1 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy alebo benzyloxy.
Do ďalšej podtriedy zlúčenín tohto vynálezu patria napríklad zlúčeniny vzorca I, kde s a t je 1, u je 0 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy alebo benzyloxy.
Do ďalšej podtriedy zlúčenín tohlo vynálezu patria napríklad zlúčeniny vzorca I, kde s je 1, t a u je 0 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy alebo benzyloxy.
V konkrétnych uskutočneniach je zlúčeninou vzorca I zlúčenina, v ktorej R1 a R2 je metyl alebo etyl; X je izopropyl, se/í-butyl alebo ŕe/c-butyl; s je 1; t n u je 0; A je valyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butyíglycyl; B je N-metylvalyl, 1-izo!eucyl alebo -2ferc-buiylglycyl; D je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydropiOÍyl; F je prolyl, tiazolidinyM-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R*.
V ďalšom uskutočnení je derivátom dolastatinu-15 zlúčenina vzorca I, v ktorej R1 a R2 je metyl alebo etyl; X je izopropyl, seA-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; B je N’-metylvsIyl, 1-izoleueyl alebo 2-ŕe/u-butylglycyl; D je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca R5-N-RB, kde R5 je vodík alebo CrC4 alkoxy a R6 je lineárny alebo rozvetvený C^-Ciz alkyl alebo lineárny alebo rozvetvený CrCi2 hydroxyalkyl predstavovaný napríklad nasledujúcimi jednoväzbovými radikálmi:
-C(CH3)2-CH9-CH2-OH označovaný aj ako 3-hydroxy-1,1-dimetylpropyl; -C(CH3)3 označovaný aj ako ŕerc-butyl;
’C(CH3)2-CH^-CH3 označovaný aj ako 1 J-dimatylpropyl; -CH(CHs)(CH2-CH3)2 označovaný aj ako 1-metyl-1-etylpropy|; -CH(CH3)-C(CH3)3 označovaný aj ako (R)- alebo (R)-1-meíyl-2.2-dimetylpropyl;
-CH(C2H5)-CH(CH3)2 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-eíyl-2-tnGiylpropyl; -CH[CH(CH3)2]-CH(CH3)2 označovaný aj ako l-izopropyl-2-mtíiyl propyl;
alebo
-C(CH3)2-CHÍCH3)2 označovaný . :i ako 1,1-dirnetyl-2-!ii3Íylpropy!; -CH(CH3)2 označovaný aj ako i? cpiepyí;
-CH(CH3)CH2CH3, seA'-bulyl, (S) slabo (S);
-CH(CH3)CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,2-dimetylprop',
V ďalšom uskutočnení je deriv.átoin dclaalsíinu-IS podľa vynálezu zlúčenina vzorca I, v ktorej R1 a R2 je rnoiyl slabo etyl; X jc izopropyl, sc/<-butyl alebo ŕarc-butyl; s je 1; l a u je 0; A je valyl, izoleucyl alebo 2-ŕo/c-buíylglycyl; B jc N-metylvalyl, izoleucyl alebo 2-íerc-butylglycyl; O je prolyl, tiazolidiny'l·- 1-karbonyl, 3,4-dehydroprolyl; E je prclyl, liazolidinyl-4-kaijonyl, homoprolyl, 3,4-dahyďroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca R5-M-R6, kde R5 je vodík alebo C1-C4 alkoxy a R3 je jodnoväzbový ladikél, napríklad C3-Cir cykloalicyl (napr. cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl alebo 1-melylcyklopcntyi alebo 116 metylcyklohexyl alebo bicyklo[3,3,0]okta-1-yl); a (1)- alebo (2)-adamantyl; (CH2)vfenyl s v = 1 alebo α,α-dimetylbenzyl.
V ďalšom uskutočnení je derivátom dolastatinu-15 podľa vynálezu zlúčenina vzorca I, v ktorej R1 a R2 je metyl; X je izopropyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl; B je N-metylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca R5-N-R6, kde R5 je vodík a R6 je ŕero-butyl. Táto zlúčenina zodpovedá zlúčenine ii na obrázku 1. Výsledky použitia zlúčeniny ii vzorca I sú opísané v príkladoch 3 a 4 a graficky znázornené na obrázkoch 2,3 a 4.
Derivát dolastatinu-15 podľa predloženého vynálezu možno voliteľne podávať vo farmaceutický prijateľnom nosiči. Farmaceutický prijateľné nosiče sú známe odborníkom v danej oblasti techniky. Voľba nosiča bude určená čiastočne konkrétnou zlúčeninou vzorca I ako aj konkrétnym spôsobom použitým na podanie derivátu dolastatinu-15.
Sú opísané aj farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 vzorca I buď samotné alebo v kombinácii s jedným alebo viacerými antiartritickými liečivami, napríklad tými, ktoré sú tu uvedené. Farmaceutická kompozícia môže voliteľne obsahovať farmaceutický prijateľný nosič, riedidlo alebo zlúčeninu, ktorá pomáha pri spracovaní, napríklad spojivá, plnivá a konzervačné látky.
Na účely tohto vynálezu možno frázy “spôsob liečby reumatoidnej artritídy a “potlačenie reumatoidnej artritídy” používať zameniteľné. V tu používanom význame termín “potlačenie zahŕňa čokoľvek alebo všetko z nasledujúceho: (1) zlepšenie existujúcich symptómov; (2) prevencia alebo spomalenie progresie symptómov; (3) prevencia alebo oneskorenie nástupu alebo výskytu choroby u vnímavého subjektu, t.j. profylaxia.
Podľa predloženého vynálezu sa podáva terapeuticky účinné množstvo jednej alebo viacerých zlúčenín vzorca I. Zlúčeniny vzorca I možno podávať samotné alebo s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom vhodným na požadovanú cestu podania. Podanie môže byť akýmkoľvek spôsobom, ktorý je konvenčný pre farmaceutické prostriedky vrátane orálnych a parenterálnych prostriedkov, napríklad subkutánne, intravenózne, intramuskulárne, intraperitoneálne, nazáine alebo rektálne. Také farmaceutické kompozície môžu obsahovať aj iné terapeuticky aktívne zložky.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa podáva jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 buď samotných alebo v kombinácii s jednou alebo viacerými antiartritickými liečivami cicavcovi majúcemu reumatoidnú artritídu alebo citlivému na ňu. Podanie jedného alebo viacerých derivátov dolastatinu-15 v kombinácii s jedným alebo viacerými antiartritickými liečivami zlepšuje liečbu reumatoidnej artritídy. Napríklad kombinácia poskytuje väčšie potlačenie alebo menej vedľajších účinkov a/aiebo môže umožniť podávanie nižšej dávky známeho antiartritického liečiva, pričom sa dosiahne rovnaký účinok. Týmto ďalším antiartritickým liečivom môže byť okrem iného: (1) nesteroidný protizápalový prostriedok, napríklad kyselina acetylsalicylová (aspirín), ibuprofen alebo naproxen; (2) organický derivát zlata, napríklad tiomalát sodíka a zlata, aurotioglukóza alebo auranofin; (3) Dpeniciiamín; (4) 4-aminochinolínový prostriedok, napríklad hydroxychlorochin; (5) azatioprín; (6) metotrexát; (7) cyklosporín; (8) inhibítor angiogenézy, napríklad AGM-1470 (Ingber, a kol., Náture 348, (1990) 555); (9) monoklonálne protilátky pre lymfocyty T; (10) monoklonálne protilátky pre adhézne molekuly; (11) monoklonálne protilátky pre cytokíny a rastové faktory; (12) receptor faktora nádorovej nekrózy - Tumor Necrosis Factor Receptor (TNFR)-lgG; (13) antagonisti receptora IL-1; a ICE inhibítory.
V rámci špecifického uskutočnenia sa podávajú aspoň dva alebo viacero derivátov dolastatinu-15 buď samotné alebo v kombinácii s jednou alebo viacerými antiartritickými liečivami cicavcovi majúcemu reumatoidnú artritídu alebo citlivému na ňu.
Lieková forma na podávanie cicavcovi, napríklad človeku, obsahuje terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny vzorca I tu opísanej. Dávkovanie možno určiť empiricky pomocou známych metód a bude závisieť od faktorov ako biologická aktivita, mechanizmus účinku a profil toxicity konkrétnych použitých zlúčenín; spôsob podania; vek, zdravotný stav a telesná hmotnosť príjemcu; povaha, trvanie a rozsah symptómov; frekvencia liečby; podávanie iných terapií; a požadovaný účinok.
Typická denná dávka zlúčenín vzorca I bude od asi 1 do asi 100 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti pri orálnom podávaní a od asi 1 do asi 100 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti pri parenterálnom podávaní.
Deriváty dolastatinu-15 podľa predloženého vynálezu možno podávať v konvenčných tuhých alebo kvapalných farmaceutických liekových formách, napríklad nepoťahované alebo poťahované tablety, kapsule, práčky, granula, supozitóriá alebo roztoky. Tieto sa vyrábajú konvenčným spôsobom. Účinné látky možno na tento účel spracovať s konvenčnými farmaceutickými pomocnými látkami ako napríklad tabletové spojivá, plnivá, konzervačné prostriedky, tabletové dezintegrátory, regulátory toku, plastifikátory, zmáčadlá, disperzanty, amulgátory, rozpúšťadlá, prostriedky spomaľujúce uvoľňovanie, antioxidanly a/alebo výlučná plyny (pozrite H. Siicker a kol.: Pharmazeulische Technológie, fhL.iľta-Vorls’.g, Stuttgart, 1978). Takto získané liekové formy obyčajne obsahujú od aui 1 do ani 90 % hmotnostných účinnej látky.
Ak sa podáva viac ako jeden derivát dolastatinu-15, možno ich podávať v tom istom čase (simultánne) alebo v rôznych časoch (sekvenčne) za predpokladu, že sa podávajú v takom poradí a v inte.vstoch vhodných na vyvolanie požadovaného terapeutického účinku. Ak sa podávajú dva alebo viacero derivátov dolastatinu-15 súčasne, možno ich podávať oddelene (ako jednotlivé deriváty) alebo vo fyzickej kombinácii (ako zmes alebo kombináciu). To isté platí, aj keď sa podáva jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 s jedným alebo viacerými antiartritickými liečivami. Možno ich podávať simultánne alebo sekvenčne a jednotlivo alebo ako kombináciu alebo zmes. Sú opísané aj farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 alebo jeden alebo viacero derivátov dolastatinu-15 a jedno alebo viacero antiartritických liečiv.
Zlúčeniny vzorca I sú podrobne opísané vyššie. V konkrétnom uskutočnení vynálezu sa používa derivát dolastatinu-15 vzorca I, v ktorom R1 a R2 je metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo terc-butyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl, izoleucyl alebo 2-ferc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 1-izoleucyl alebo 2-tercbutylglycyl; D je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6.
V ďalšom uskutočnení vynálezu sa používa derivát dolastatinu-15 vzorca I, v ktorom R1 a R2 je metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo terc-butyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl, izoleucyl alebo 2-terc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 1izoleucyl alebo 2- terc-butylglycyl; D je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4dehydroprolyl; E je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6, kde R5 je vodík alebo C1-C4 alkoxy a R6 je lineárny alebo rozvetvený C1-C12 alkyl alebo lineárny alebo rozvetvený CrC12 hydroxyalkyl predstavovaný napríklad nasledujúcimi jednoväzbovými radikálmi:
-C(CH3)2-CH2-CH2-OH označovaný aj ako 3-hydroxy-1,1-dimetylpropyl;
-C(CH3)3 označovaný aj ako terc-butyl;
-C(CH3)2-CH2-CH3 označovaný aj ako 1,1-dimetylpropyl;
-CH(CH3)(CH2-CH3)2 označovaný aj ako 1-metyl-1-etylpropyl;
-CH(CH3)-C(CH3)3 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-metyl-2,2-dimetylpropyl;
-CH(C2H5)-CH(CH3)2 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-etyl-2-metylpropyl;
-CH[CH(CH3)2]-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1-izopropyl-2-metyl-propyl;
alebo
-C(CH3)2-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,1-dimetyl-2-metylpropyl;
-CH(CH3)2 označovaný aj ako izopropyl;
-CH(CH3)CH2CH3 označovaný aj ako sek-butyl, (S)- alebo (R)-;
-CH(CH3)CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,2-dimetylpropyl.
V ďalšom uskutočnení vynálezu sa používa zlúčenina vzorca I, v ktorej R1 a R2 je metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo terc-butyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl, izoleucyi alebo 2-ferc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 1-izoleucyl alebo 2terc-butylglycyl; D je prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, tiazolidinyI-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca R5-N-Re, kde R5 je vodík alebo C1-C4 alkoxy a R6 je jednoväzbový radikál, napríklad C3-Cw cykloalkyl (napr. cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, 1-metylcyklopentyl, 1-metylcyklohexyl alebo bicyklo[3,3,0]okta-1-yl); a (1)- alebo (2)-adamantyl; (CH2)v-fenyl s v = 1 alebo α,α-dimetylbenzyl.
V ďalšom uskutočnení vynálezu sa používa derivát dolastatinu-15 vzorca I, v ktorom R1 a R2 je metyl; X je izopropyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl; B je Nmetylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca R5-NR8, kde R5 je vodík a R6 je ferc-butyl. Táto zlúčenina zodpovedá zlúčenine ii na obrázku 1. Použitie zlúčeniny ii pri liečbe reumatoidnej artritídy je opísané v príkladoch 3 a 4 a výsledky sú znázornené na obrázkoch 2,3 a 4.
Syntetické metódy
Zlúčeniny vzorca I možno pripraviť známymi spôsobmi syntézy peptidov, napríklad tými, ktoré sú opísané tu a v patentovej prihláške USA č. 08/470,453 podanej 7. júna 1995, ktorá sa týmto zahŕňa odkazom. Peptidy možno zložiť sekvenčne z jednotlivých aminokyselín alebo prepojením malých peptidových fragmentov. Pri sekvenčnom skladaní sa peptidový reťazec predlžuje postupne začínajúc C-koncom pridávaním po jednej aminokyseline v každom kroku. Pri spájaní fragmentov možno spojiť fragmenty rôznych dĺžok a fragmenty možno získať sekvenčným spájaním z aminokyselín alebo spájaním fragmentov ešte kratších peptidov.
Pri sekvenčnom spájaní aj spájaní fragmentov je potrebné spojiť jednotky vytvorením amidového prepojenia, čo možno dosiahnuť radom enzymatických a chemických metód. Tu opísané spôsoby vytvárania peptidických amidových vi->:iob sú vhodné aj na vytváranie nepeptidických amidových väzieb.
Chemické metódy na vytváranie amidovej väzby sú podrobne opísané v štandardnej referenčnej literatúre o peptidovej chémii, medzi inými Mulier, Methoden der organischen Chemie zv. XV/2, 1-364, Thieme Verlag, Stuttgait, (1974); Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 31-34 a 71-82, Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984); Bodanszky a kol., Peptide Synthesis, 85128, John Wiley & Sons, New York, (1976); Practice of Peptide Synthesis, M. Bodansky, A. Bodansky, Springer-Verlag, 1994 a iné štandardné práce v peptidovej chémii. Medzi výhodné metódy patrí azidová metóda, metóda symetrických a zmiešaných anhydridov, použitie in situ generovaných alebo vopred vytvorených aktívnych esterov, použitie uretánom chránených Mkarboxyanhydridov aminokyselín a vytváranie amidovej väzby pomocou spájacích činidiel, napríklad dicyklohexylkarbodiimid (DCC), diizopropylkaibodiinrd (CIC), 1etoxykarbonyl-2-etoxy-1,2-dihydrochinolín (EEDQ), pivaloylchlorid, 1-etyl-3-(3dimetylaminopropyljkarbodiimid hydrochlorid (EDCI), anhydrid kyseliny npropánfosforitej (PPA), N,N-bis(2-oxo-oxazolidinyl)amidofosforylcliloľid (ΠΟΡ-Ci), bróm-tris(pyrolidino)fosfóniumhexafluórfosfát (PyBrop), difenylfosforyl azid (DPPA), Castrove činidlo (BOP, PyBop), O-benzoträazolyl-N.N.í'ľ.M’-tetraniGíyluróniové soli (HBTU), O-azabenzotriazolyl-N.N.N'.N’-tetrametyliiróniová soli (TATU), dietylfosforylkyanid (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxytioféndioxíd (Steglichovo činidlo; HOTDO) a 1,ľ-karbonyldiimidazol (CDI). Spájacie činidlá možno použiť samotné alebo v kombinácii s prísadami, napríklad N.N-dimetyl-4-aminopyridín (DMAP), N-hydroxybenzotriazol (HOBt), N-hydroxybenzotriazín (HOOBt), N-hydroxysukcínimid (HOSu) alebo 2-hydroxypyridín.
Hoci použitie chrániacich skupín vo všeobecnosti nie je pri enzymatickej peptidovej syntéze nevyhnutné, reverzibilná ochrana reaktívnych skupín nezúčastňujúcich sa na vytváraní amidovej väzby je pri oboch rsaktantoch v chemickej syntéze potrebná. Pri chemickej syntéze peptidov sa väčšinou používajú tri konvenčné techniky chrániacich skupín: benzyloxykarbonylová (Z), tbutoxykarbonylová (Boe) a 9-fluorenylmctoxykarbonylová (Fi.ioc) technika. V každom prípade je uvedená chrániaca skupina na α-aminoskupine jednotky predlžujúcej reťazec. Podrobný prehľad aminokyselinových chrániacich skupín je uvedený v Míiller, Methoden·der organischen Chemie Vol. XV/I, s. 20-906, Thieme Verlag, Stuttgart (1974).
Jednotky používané na zostavenie peptidového reťazca možno nechať reagovať v roztoku, v suspenzii alebo spôsobom podobným metóde, ktorú opísal Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85 (1963) 2149. Pri jednom spôsobe sa pepíidy spájajú sekvenčne alebo fragmentovým spájaním pomocou techniky chrániacich skupín Z, Boe alebo Frnoc, pričom jeden alebo viacero reaktantov pri Merrifieldovcj technike je viazaných na nerozpustný polymérny nosič (ďalej nazývaný aj živica). Toto väčšinou predstavuje spájanie peptidu sekvenčne na polymérnom nosiči pomocou techniky chrániacich skupín Boe alebo Frnoc, pričom rastúci peptic’ový reťazec je kovalentne viazaný na C konci na časiice nerozpustnej živice. Tento postup umožňuje odstraňovanie reaoenlov a vedľajších produktov íiluŕ.rJou, čím sa odstraňuje potreba rekryštalizácie intermediátov.
Chránené aminokyseliny môžu byť naviazané na akýkoľvek vhodný polymér, ktoiý musí byť nerozpustný v použitých rozpúšťadlách a musí mať stabilnú fyzikálnu formu, ktorá umožňuje Filtráciu. Tonto polymér musí obsahovať funkčnú skupinu, na ktorú možno kovalentne naviazať prvú chránenú aminokyselinu. Na tento účel je vhodný celý rad polymérov, napríklad celulóza, poíyvinylalkohol, polymetakrylát, sulfónovaný polystyrén, chlórmetyiovaný síyréri/divinylbenzénový kopolymér (Merrifieldova živica), 4-metylberizhydrylamínová živica (MBHA živica), fenylacetamidometylová živica (Pam živica), p-benzyloxybenzylalkoholová živica, benzhydryl-amíncvá živica (BHA živica), 4-(hydroxymetyl)benzoyloxymetylová živica, živica podľa Breipohl a kol. (Tetrahedron Letters 28 (1987) 565; dodáva BACHEM), 4-(2,4-dimetoxyfsnylaminometyl)fenoxylová živica (dodáva Novabiochem) alebo o-chlórtritytová živica (dodáva Biohellas).
Medzi rozpúšťadlá vhodné na peptidovú syntézu patria akékoľvek rozpúšťadlá, ktoré sú inertné za reakčných podmienok, napríklad voda, N.Ndirnoty'formhmid (DMF), dimetylsulfoxid (Div,SO), acetonitril, dichío,ϊ.':<Λγπ (iJ.?.i/), 1,4-dioxán, tetrahydrofurán (THF), N-metyl-2-pyrolidón (NMP) a zmesi týchto rozpúšťadiel.
• Peptidovú syntézu na polymérnom nosiči možno uskutočniť vo vhodnom inertnom organickom rozpúšťadle, v ktorom sú rozpustné použité východiskové aminokyselinové deriváty. Osobitne vhodnými rozpúšťadlami sú napríklad DMF, DCM, NMP, acetonitril, DMSO a ich zmesi vzhľadom na svoje vlastnosti napučiavania živíc.
Po syntéze sa peptid odstráni (bežne sa hovorí o odštiepení) z polymérneho nosiča. Podmienky, za ktorých sa uskutočňuje toto odštiepenie, sú známe v oblasti peptidovej syntézy a čiastočne závisia od typu použitej živice.
Najbežnejšie používané reakcie štiepenia sa katalyzujú kyselinou alebo pnládiom, pričom kyselinou kaíalyzované reakcie sa uskutočňujú napríklad v kvapalnom bezvodom fluorovodíku, bezvodsj kyseline trifiuórmetánsulfónovej, zriedenej alebo koncentrovanej kyseline trifluóroctovoj a v zmesiach kyseliny octovej, dichlórmetánu a trifluórelanolu. Reakcie kaíalyzované paládicm ιτγ.γ*πω uskutočniť v THF alebo zmesiach THF-DCM za prítomnosti slabej bázy, napríklad niú'folínu. Za týchto podmienok sa odštiepia aj niektoré chrániace skupiny.
Pred niektorými derivslizačnými reakciami môže byť potrebné f.j čiastočné odstránenie chrániacich skupín z peptidu. Napríklad peptidy diaikylovanó ria Nkonci možno pripraviť buď pripojením príslušnej Ν,Ν-dialkylaminokysoliny na peptid v roztoku alebo na polymérnom nosiči redukčnou alkyláciou na živicu viazaného peptidu v zmesi DMF a 1 % kyseliny octovej pomocou NaCNBHa a vhodného aldehydu alebo hydrogenáciou peptidu v roztoku za prítomnosti aldehydu alebo ketónu a Pd na uhlíku.
Rôzne aminokyseliny nevyskytujúce sa v prírode ako aj rôzne neaminokyselinové zoskupenia tu uvedené možno získať z komerčných zdrojov alebo syntetizovať z komerčne dostupných východiskových látok pomocou metód známych v danej oblasti techniky. Napíklad aminokyselinové stavebné jednotky so skupinami R1 a R2 možno pripraviť podľa E. Wuensch, Houben Weyl, Methoden der organische Chemie, zv. XV/I, str. 306, Thieme Verlag, Stuttgart (1974) a tam citovaná literatúra. Peptidy s gama alebo delta-laktámovými mostíkmi možno pripraviť zabudovaním vhodných laktámom premostených dipeptidových jednotiek (R. Freidinger; J. Org. Chem. (1982) 104-109) do peptidového reťazca. Peptidy s dipeptidovými stavebnými jednotkami obsahujúcimi tiazol, oxazol, tiazolin alebo oxazolín možno pripraviť zabudovaním vhodných dipeptidických jednotiek (P. Jouin a koľ, Tetrahedron Letters (1992), str. 2087-2810; P. Wipf a kol., Tetrahedron Letters (1992), str. 907-910; W. R. Tully, J. Med. Chem. (1991), str. 2060-2065; U. Schmidt a kol., Synthesis (1987), str. 233-236) do peptidového reťazca.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Nasledujúce postupy majú ilustrovať metódy vhodné na prípravu zlúčenín vzorca I.
Keď sa to hodí, aminokyseliny sú vyjadrované skratkami pomocou známeho trojpísmenového kódu. Ďalšie použité významy sú: Me2Val = N,Ndimetylvalín, MeVal = N-metylvalín, TFA = kyselina trifluóroctová, Ac = kyselina octová, Bu = butyl, Et = etyl, Me = metyl, Bzl = benzyl, Nal = 3-naftylalanín, Cha =
3-cyklohexylalanín, Npg = neopentyl glycín, Abu = 2-amino butyryl, Dab = 2,4diaminobutyryl, iPr = izopropyl
Všeobecné syntetické postupy
I. Zlúčeniny vzorca I podľa predloženého vynálezu sa buď syntetizujú klasickou roztokovou syntézou pomocou štandardnej Z- a Boc-metodiky opísanej vyššie, alebo štandardnými metódami syntézy na tuhej fáze na plne automatickom syntetizátore modelu 431A dodanom spoločnosťou APPLIED BIOSYSTEMS. Prístroj používa rôzne syntetické cykly pre techniky chrániacich skupín Boe a Fmoc.
V prípade syntézy v tuhej fáze sa Ν,Ν-dialkyl-penta- alebo hexapeptidové kyseliny uvoľňujú z tuhého nosiča a ďalej sa spájajú s príslušnými C-koncovými amínmi v roztoku. ΒΟΡ-Cl a PyBrop sa používali ako reagenty na pripájanie aminokyseliny po N-metylaminokyselinách. Reakčná časy sa zodpovedajúcim spôsobom predĺžili. Pri redukčnej alkylácii N-konca sa odstránila chrúni;:ce :'!;up!rik z peptidu na živici z N-konca a potom sa peptid nechal reagovať s trojnásobným molárnym nadbytkom aldehydu alebo ketónu v zmesi DMF a 1 % kyseliny octovej s prídavkom 3 ekvivalentov NaCNBH3. Po skončení reakcie (negatívny Kaiserov test) sa živica premyla niekoľkokrát vodou, izopropanolom, DMF a dichlórmetánom.
Pri syntéze v roztoku je na pripojenie aminokyseliny po Nmetylaminokyselinách najvýhodnejšie použitie Boc-chránených aminokyselinových NCAs (N-karboxyanhydridov N-ŕerc-butyloxykarbonylaminokyselín), Z-chránených aminokyselinových NCAs (N-karboxyanhydridov N-benzyloxyknrbonyíaminokyselín) alebo použitie pívaloylchloridu ako kondenzačného činidla. Redukčná alkylácia N-konca sa môže uskutočniť napríklad reakciou peptidov s odstránenou chrániacou skupinou z N-konca alebo aminokyselín s príslušnými aldehydmi alebo ketónmi pomocou NaCNBH3 alebo vodíka a Pd/C.
a) Syntetický cyklus pre techniku chrániacej skupiny Bcc:
1.30 % kyselina trifluóroctová v DCM 1x3 min
2. 50 % kyselina trifluóroctová v DCM 1x1 min
3. premytie pomocou DCM
4. 5 % diizopropyletylamín v DCM 5x1 min
5. 5 % diizopropyletylamín v NMP 1x1 min
6. premytie pomocou NMP 5 x 1 min
7. Pridanie aktivovanej chránenej aminokyseliny (DCC a 1 ekvivalent HOBt v NMP/DCM); spájanie peptidu (1. časť) 1 x 30 min
8. Pridávanie DMSO do reakčnej zmesi, kým neobsahuje 20 % objemových DMSO; spájanie peptidu (2. časť) 1 x 16 min
9. Pridanie 3,8 ekvivalentov diizopropyletylamínu do reakčnej zmesi; spájanie peptidu (3. časť) 1 x 7 min
10. premytie pomocou DCM 3 x 1 min
11. Ak je konverzia neúplná, opakovanie spájania (späť na 6)
12.10 % acetanliydrid, 5 % diizcpropyletylamín v DC.Vi I:: 2 min
13.10 % acetanhydrid v DCM 1x4 min
14. premytie pomocou DCM 4x1 min
15. Späť na 1.
ΒΟΡ-Cl a PyBrop sa používali ako reagenty na pripájanie aminokyseliny po N-metylaminokyselinách. Reakčné časy sa zodpovedajúcim spôsobom predĺžili. V roztokovej syntéze je použitie buď Boc-chránených aminokyselinových NCA (Nŕerc-butyloxykarbonyl-aminokyselinových-N-karboxy-anhydridov) alebo Zchránených aminokyselinových NCA pre tento typ spájania najvýhodnejšia.
B) Syntetický cyklus pre techniku chrániacej skupiny Fmoc:
1. premytie pomocou DMF 1x1 min
2. 20 % piperidín v DMF 1x4 min
3.20 % piperidín v DMF 1x16 min
4. premytie pomocou DMF 5x1 min
5. Pridanie aktivovanej chránenej aminokyseliny (akliv/.cia pomocou 1 ekvivalentu TBTU a 5 ekvivalentov DIPEA v DMF); spájanie pepíiJu 1 x 6 í min
6. premytie pomocou DMF 3 x 1 min
7. Ak je konverzia neúplná, opakovanie spájania (späť na 5)
8. 10 % acetanhydrid v DMF 1x8 min
9. premytie pomocou DMF 3 x 1 min
10. Späť na 2.
ΒΟΡ-Cl a PyBrop sa používali ako reagenty na pripájanie aminokyseliny po N-metylaminokyselinách. Reakčné časy sa zodpovedajúcim spôsobom predĺžili.
II. Redukčná alkylácia N konca
Z N-konca systému peptidu na živici pripraveného vyššie v lo alebo Ib sa odstránila chrániaca skupina (kroky 2-4 v Ib alebo 1-6 v la) a uskutočnila so reakcia s trojnásobným molárnym nadbytkom aldehydu alebo ketónu v DMF/1 % kyseline octovej s prídavkom 3 ekvivalentov NaCNGH3. Po skončení reakcie (negatívny Kaiserov test) sa živica premyla niekoľkokrát vodou, izcpropanolom, DMF a dichlormetánom.
III. Spracovanie systémov peptid-živica získaných v (a a II
Systém peptid-živica sa vysušil za zníženého tlaku a preniesol sa do reakčnej nádoby aparatúry TEFLON HF (dodáva PENINSULA). Po pridaní vychytávača, napríklad anizolu (1 ml/g živice), a v prípade peptidov obsahujúcich tryptofán aj tiolu na odstránenie indolického formylu, napríklad etánditiolu (0,5 ml/g živice), nasledovala kondenzácia vo fluorovodíku (10 ml/g živice) za chladenia kvapalným N2. Zmes sa nechala ohriať na 0 °C a miešala sa pri tejto teplote 45 minút. Fluorovodík sa potom odstránil za zníženého tlaku a zvyšok sa premyl etylacetátom, aby sa odslránil ostávajúci vychytávač. Peptid sa extrahoval 30 % kyselinou octovou a prefiltroval sa a filtrát sa lyofilizoval.
IV. Spracovanie systémov peptid-živica získaných v lb a II
Systém peptid-živica sa vysušil za zníženého tlaku a poÍorn sa podrobil jednému z nasledujúcich postupov štiepenia v závislosti od kompozície aminokyselín (Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melbomne 1935).
Podmienky štiepenia:
TFA Vychytávač Reakčný čas
95% 5 % vody 1.5 h
95% 5 % etándiolu/anizolu (1:3) 1,5 h
Suspenzia peptidu na živici vo vhodnej zmesi TFA sa miešala pri teplote miestnosti uvedený čas a potom sa živica odfiltrovala a premyla TFA a DCM. Filtrát a premývacie roztoky sa nakoncentrovali a peptid sa vyzrážal pridaním dietyléteru. Po ochladení v ľadovom kúpeli sa zrazenina odfiltrovala, rozpustila v 30 % kyseline octovej a lyofilizovala.
V. Keď sa používa o-chlórtritylová živica (dodáva Biohellas), suspenzia peptidu na živici v zmesi kyseliny octovej, trifluóretanolu a dichlórmetánu (1:1:3) sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu. Živica sa potom odsaje a dôkladne sa premyje štiepiacim roztokom. Spojené filtráty sa nakoncentrujú vo vákuu a pridá sa k nim voda. Vyzrážaná tuhá látka sa oddelí filtráciou alebo centrifugovaním, premyje sa dletyléterom a vysuší sa za zníženého tlaku.
VI. Čistenie a charakterizácia peptidov
Čistenie sa uskutočnilo gélovou chromatografiou (SEPHADEX G-10, G15/10% HOAc, SEPHADEX LH2O/MeOH), strednotlaková chrerr.<£tografia (stacionárna fáza: HD-SIL C-18, 20-45 mikrónov, 100 Angstromov; mobilná fáza: gradient s A = 0,1 % TFA/MeOH, B = 0,1 % TFA/voda) alebo preparatívna HPLC (stacionárna fáza: Waters Delta-Pak C-18,15 mikrónov, 100 Angstromov; mobilná fáza: gradient s A = 0,1 % TFA/MeOH, B = 0,1 % TFA/voda).
Čistota výsledných produktov sa určila analytickou HPLC (stacionárna fáza: 100 2,1 mm VYDAC C-18, 51, 300 Angstromov; mobilná fáza: gradient ao.stcniirilvoda, tlmené pomocou 0,1 % TFA, 40 °C).
Charakterizácia sa uskutočnila pomocou analýzy aminokyselín a hmotnostnou spektroskopiou bombardovaním rýchlymi atómami.
Špecifické syntetické postupy
Príklad 1A: N,N-dimetyl-Val-Val-N-metyl-Val-Pro-ProVal-Phe-N!H2
1,98 g živice Fmoc-RINK (substitúcia 0,46 mmol/g), čo zodpovedá veľkosti dávky 0,84 mmol, sa nechalo reagovať ako v Ib s 1,26 mmol každého z nasledujúcich:
Fmoc-Phe-OH
Fmoc-Val-OH
Fmoc-Pro-OH
Fmoc-Pro-OH
Fmoc-N-metyl-Val-OH
Fmoc-Val-OH
Fmoc-Val-OH
Aminokyselina nasledujúca za N-metylaminokyselinou sa pripojila pomocou PyBrop ako spájacieho činidla. Po skončení iteratívnych syntetických cyklov sa peptid na živici podrobil odstráneniu chrániacej skupiny z N konca (kroky 2 - 4 v Ib) a nechal sa ďalej reagovať s vodným roztokom formaldehydu ako v II a potom sa vysušil za zníženého tlaku. Získaná živica sa podrobila štiepeniu TFA ako v IV. Surový produkt (590 mg) sa vyčistil gélovou filtráciou (SEPHADEX-LH-20). Výťažok bol 295 mg.
Príklad 1A:
Príklad 1 možno uskutočniť aj pomocou klasickej roztokovej metódy. Syntéza N,N-dimetyl-Val-Val-N-metyl-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH2 a jeho súvisiacich intermediátov je opísaná v nasledujúcom odseku.
a) -MeVal-Pro-OMe
66,25 g (250 mmol) Z-MeVal-OH sa rozpustilo v 250 ml suchého dichlórmetánu. Po pridaní 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu sa reakčná zmes ochladila na -25 °C a pridalo sa 32,37 ml (262,5 mmol) pivaloylchloridu. Po 2,5 hodine miešania sa do reakčnej zmesi pridalo 41,89 g (250 mmol) H-Pro-OMe-HCI v 250 ml dichlórmetánu neutralizovaného pomocou 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu pri 0 °C. Miešanie pokračovalo 2 hodiny pri -25 °C a cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedila dichlórmetánom a dôkladne ss premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCI. Organická fáza sa vysušila nad bezvodým síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha. Zvyšok (91,24 g) sa miešal cez noc s petroléterom a prefiltroval sa. Získalo sa 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48,9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 490 ml metanolu. Po pridaní 10,9 ml (130 mmol) koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a 2,43 g 10 % paládia na uhlíku sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtráciou a odparením dosucha sa získalo 36,43 g produktu.
c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
18,1 g (65 mmol) H-MeVal-Pro-OMe, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-Nkarboxyanhydridu a 22,8 ml (130 mmol) diizopropyletylamínu sa miešalo v 110 ml DMF pri 40 °C 2 dni. Po odparení DMF sa pridal dichlórmetán a organická fáza sa premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl. Organická fáza sa vysušila nad bezvodým síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha. Produkt (29,3 g) sa získal vo forme viskózneho oleja.
d) H-Val-MeVal-Pro-OMe
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 230 ml metanolu. Po pridaní 1,15 g 10% paládia na uhlíku sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtráciou a odparením dosucha sa získalo 21,96 g produktu.
e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 g (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61 mmol) H-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 610 ml dichlórmetánu a ochladilo sa na 0 CC. Po pridaní 8,16 ml (73,2 mmol) N-metylrnoríolínu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) EDCI sa reakčná zmes miešala cez noc pri teplote miestnosti, zriedila sa dichlórmetánom a dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 31,96 g produktu.
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31,96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 250 ml metanolu. Pridalo sa 102,6 ml 1N roztoku LiOH a zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Po pridaní 500 ml vody sa vodná fáza premyli- trikmi etylacetátom. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 30,62 g požadovaného produktu vo forme bielej tuhej látky.
g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-N H2 g (43,3 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 15,59 g (43,3 mmol) H-ProVal-Phe-NH2 sa suspendovalo v 430 ml suchého dichlórmetánu. Po ochladení na 0°C sa pridalo 5,81 ml (52 mmol) N-metylmorfolínu, 1,97 g (15 mmol) HOBt a 8,33 g (43,3 mmol) EDCI a reakčná zmes sa miešala coz noc pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlá sa odparili, zvyšok sa rozpustil v 640 ml dichlórmetánu a dôkladne sa premyl nasýteným vodným roztokom NaHCCb (4 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCI. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 33,04 g produktu. Surový produkt sa chromatografoval na silikagélovej kolóne zmesou 20 % MeOH/hexánu. Získalo sa 18,32 g požadovaného produktu.
h) N,N-dimetyl-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2
18,32 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2 sa rozpustilo v SO ml metanolu. Pod dusíkovou atmosférou sa pridalo 0,4 g 10 % paládia na uhlíku a reakčná zmes sa hydrogenovala pri teplote miestnosti 4 hodiny. Po pridaní 6,22 ml (81,24 mmol) 37% vodného roztoku formaldehydu hydrogenácia pokračovala 5 hodín. Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získalo 15,6 g surového produktu. Ďalšie vyčistenie sa dosiahlo rozpustením peptidu vo vode, upravením pH na 2 a extrakciou vodnej fázy trikrát etylacetátom. pH vodnej fázy sa upravilo na 8-9 a roztok sa extrahoval štyrikrát etylacetátom. Organická fáza sa premyla vodou a vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 11,3 g vyčisteného produktu vo forme bieleho prášku. Zlúčenina bola charakterizovaná hmotnostnou spektrometriou bombardovaním rýchlymi atómami ([M+Hf = 797).
Príklad 2A: N,N-dimetyl-Val-Val-NMe-Val-Pro-{1-[tiazol-(2)-yl]-2-fenyl}-etylamid
4,11 g Fmoc-Pro-p-alkoxybenzyl-alkoholovej živica (substitúcia 0,73 mmol/g), čo zodpovedá veľkosti dávky 3 mmol, sa nechalo reagovať ako v lb s 4,5 mmol každého z nasledujúcich:
Fmoc-N-MeVal-OH
Fmoc-Val-OH
Fmoc-Val-OH
Aminokyselina nasledujúca po N-metylaminokyseline sa v tomto prípade nechala reagovať s dvojitým spájaním pomocou PyBrop alebo Βορ-Cl so zvýšenými reakčnými časmi. Po skončení syntézy sa peptid na živici podrobil odstráneniu chrániacej skupiny z N konca (kroky 2 - 4 v lb) a nechal sa ďalej reagovať s vodným roztokom formaldehydu ako v II a potom sa vysušil za zníženého tlaku. Takto získaná živica sa podrobila štiepeniu TFA ako v IV. Surový produkt (750 mg) sa použil priamo v ďalšom spájaní. 100 mg tejto zlúčeniny sa nechalo reagovať so 45 mg (S)-2-[1-amino-2-fenyletyl]tiazolu a 230 mg PyBop s prídavkom 192 mikrolitrov DIPEA v DMF pri teplote miestnosti počas 2 dní. Reakčná zmes sa vyčistila gélovou chiomatografiou (SEPHADEX l.H-20, metanol) a frakcie produktu sa spojili. Získalo sa 83 mg produktu.
Príklad 1B
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
a) Z-MeVal-Pro-OMe
66,25 g (250 mmol) Z-MeVal-OH sa rozpustilo v 250 ml suchého dichlórmetánu. Po pridaní 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu sa reakčná zmes ochladila na -25 °C a pridalo sa 32,27 ml (262,5 mmol) pivaloylchloridu. Po 2,5 hodine miešania sa do reakčnej zmesi pridalo 41,89 g (250 mmol) H-Pro-Ome * HCI v 250 ml dichlórmetánu neutralizovaného pomocou 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu pri 0 °C. Miešanie pokračovalo 2 hodiny pri -25 °C a cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedila dichlormetánom «a dôkladná sa premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl. Organická fáza sa vysušila nad bezvodým síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha. Zvyšok (81,24 g) sa miešal cez noc s petroléterom a prefiltroval sa. Získalo sa 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48,9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 490 ml metanolu. Po pridaní 10,9 ml (130 mmol) koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a 2,43 g 10 % paládia na uhlíku sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtráciou a odparením dosucha sa získalo 36,43 g produktu.
c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
18,1 g (65 mmol) H-MeVaí-Pro-OMe, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-Nkarboxyanhydridu a 22,8 ml (130 mmol) diizopropyletylamínu sa miešalo v 110 ml DMF pri 40 “C 2 dni. Po odparení DMF sa pridal dichlórmetán a organická fáza sa premyla nasýteným vodným roztokom NaHCCh (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl. Organická fáza sa vysušila nad bezvodým síranom sodným a odparila sa dosucha. Produkt (29,3 g) sa získal vo forme viskózneho oleja.
d) H-Val-MeVal-Pro-OMe
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 230 rnl metanolu. Po pridaní 1,15 g 10% paládia na uhlíku sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtráciou a odparením dosucha sa získalo 21,96 g produktu.
e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 g (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61 mmol) H-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 610 ml dichlórmetánu a ochladilo sa na 0 “C. Po pridaní 8,16 ml (73,2 mmol) N-metylmorfolínu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) F.DCI sa reakčná zmes miešala cez noc pri teplote miestnosti, zriedila sa dichlórmetánom a dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 31,96 g produktu.
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31.96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 250 ml metaňolu. Pridalo sa 102,6 ml 1N roztoku LiOH a zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Po pridaní 500 ml vody sa vodná fáza premyla trikrát etylacetátom, jej pH sa upravilo na 2 pri 0 °C a potom sa trikrát extrahovala etylacetátom. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 30,62 g požadovaného produktu vo forme bielej tuhej látky.
g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,664 g (3,35 mmol) H-ProNHCH(CH3)2 sa rozpustili v 34 ml suchého dichlórmetánu. Po ochladení na 0 °C sa pridalo 1,35 ml (12,1 mmol) N-metylmorfolínu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakčná zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Pridalo sa 80 ml dichlórmetánu a organická fáza sa dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCl (1 x). Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 1,96 rj produktu, ktorý sa použil v nasledujúcej reakcii bez ďalšieho čistenia.
Me2VaI-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
1.96 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 sa rozpustilo v 11 ml metaňolu. Pod dusíkovou atmosférou sa pridalo 0,054 g 10 % paládia na uhlíku a reakčná zmes sa hydrogenovala pri teplote miestnosti 4 hodiny. Po pridaní 0,86 ml (11,24 mmol) 37% vodného roztoku formaldehydu a 0,281 g 10% Pd/C hydrogenácia pokračovala 5 hodín. Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získalo 2,77 g surového produktu. Ďalšie vyčistenie sa dosiahlo rozpustením peptidu vo vode, upravením pH na 2 a extrakciou vodnej fázy trikrát etylacetátom. pH vodnej fázy sa upravilo na 8-9 a roztok sa extrahoval štyrikrát dichlórmetánom. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa, čím sa získalo 1,37 g čistého produktu vo forme bielej peny. Zlúčenina sa ďalej čistila pomocou strednotlakovej kvapalinovej chromatografis (10-50 % A za 10 min.; 50-90 % A za 320 min.). Frakcie obsahujúce produkt sa skombinovali, lyofilizovali, znova rozpustili vo vode a pH sa upravilo na 9 pomocou 1 N LiOH. Po extrakcii dichlórmetánom sa organická fáza vysušila nad bezvodým síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha. Lyofilizáciou sa získalo 500 mg čistého produktu, ktorý bol charakterizovaný hmotnostnou spektrometriou bombardovaním rýchlymi atómami ([M+Hj* = 593).
Príklad 2B
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3
Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,692 g (3,35 mmol) H-ProNHC(CH3)3 sa rozpustili v 34 ml suchého dichlórmetánu. Po ochladení na 0 °C sa pridalo 1,35 ml (12,1 mmol) N-metylmorfolínu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakčná zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Pridalo sa 80 ml dichlórmetánu a organická fáza sa dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3 x), vodou (1 x), 5 % kyselinou citrónovou (3 x) a nasýteným roztokom NaCI (1 x). Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, prefiltrovala a odparila sa dosucha, čím sa získalo 1,8 g produktu, ktorý sa použil v nasledujúcej reakcii bez ďalšieho čistenia.
b) Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NKC(CH3)3
1,8 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3 sa rozpustilo v 10 ml metanolu. Pod dusíkovou atmosférou sa pridalo 0,045 g 10 % paládia na uhlíku a reakčná zmes sa hydrogenovala pri teplote miestnosti 4 hodiny. Po pridaní 0,86 ml (11,24 mmol) 37 % vodného roztoku formaldehydu a 0,252 g 10 % Pd/C hydrogenácia pokračovala 5 hodín. Filtráciou a odparením rozpúšťadla sa získalo 1,82 g surového produktu. Zlúčenina sa ďalej čistila pomocou strednotlakovej kvapalinovej chromatografie (10-50% A za 10 min.; 50-90% A za 320 min.).
Frakcie obsahujúce produkt sa skombinovali, lyofilizovali, znova rozpustili vo vode a pH sa upravilo na 9 pomocou 1 N LiOH. Po extrakcii dichlórmetánom sa organická fáza vysušila nad bezvodým síranom sodným a odparila sa dosucha. Lyofilizáciou sa získalo 547 mg čistého produktu, ktorý bol charakterizovaný hmotnostnou spektrometriou bombardovaním rýchlymi atómami ([M+H]+ = 607).
Hodnotenie biologickej aktivity
In vivo metodológia
Derivát dolastatinu-15 vzorca I označený ako zlúčenina ii na obrázku 1 sa testoval pomocou štandardného zvieracieho modelu pre reumatoidnú artritídu známeho ako kolagénom indukovaná artritída (CIA - Collagen Induced Arthritis) (pozrite napr. Banerjee a kol., The Journal of Immunology 142: 2237-2243 (1989)). CIA je užitočný zvierací model reumatoidnej artritídy, ktorý slúži ako in vivo systém na skúmanie etiológií zápalovej synovitídy a na výskum potenciálne nových terapeutických intervencií. V tomto vynáleze možno použiť aj iné vhodné modely. Napríklad artritídu potkanov indukovanú pomocou adjuvans (Adjuvant Induced Arthritis in Rats) (pozrite napr. Ward a kol., Arthritis Rheum. (1962) 5:557-564).
Kolagénom indukovaná artritída u myší sa indukuje iníradermálnou injekciou kuracieho kolagénu typu II emulgovaného v úplnom Fieundovom adjuvans s nástupom symptómov väčšinou okolo dňa 26 po imunizácii.
Vo všeobecnosti je vhodný akýkoľvek režim dávkovania, ktorý poskytuje prijateľnú úroveň potlačenia reumatoidnej artritídy. Akýkoľvek prijateľný spôsob podania liečiva možno určiť pomocou techník známych odborníkom v danej oblasti. Okrem toho deriváty dolastatinu-15 vzorca I možno podávať v kombinácii s inými liečivami, o ktorých je známe, že sú užitočné pri liečbe reumatoidnej artritídy, ako bolo opísané vyššie.
Príklad 3: kolagénom indukovaná artritída - profylaktický model
Vo všetkých experimentoch sa použili myši DBA-1, čo je kmeň myší vnímavých na kolagénom indukovanú artritídu (pozrite napr. The FASEB, 2: 2950 (1988)). Myši boli imunizované intradermálne v deň 0 pomocou 100 gg kuracieho kolagénu typu II v úplnom Freundovom adjuvans.
Vyhodnocovali sa tri liečené skupiny, ktoré pozostávali zo zvierat liečených fyziologickým roztokom (kontrola), zvierat liečených dexametazonom (štandardná terapia) a zvierat liečených zlúčeninou ii. Liečba začala pre všetky skupiny na deň 26 po imunizácii bezprostredne pred nástupom symptómov a skončila na deň 35 po imunizácii. Dexametazon sa podával injekčné v dávke 5 mg/kg/deň, zlúčenina ii sa podávala orálne cez gastrickú sondu v dávke 50 mg/kg/deň s použitím fyziologického roztoku ako vehikula a fyziologický roztok sa podával orálne raz denne ako kontrola.
Stredné artritické skóre:
Stupeň závažnosti artritídy sa zaznamenával denným pozorovaním každej labky. Na kvantifikáciu úrovne erytému, opuchu, deformácie a nepohyblivosíi kĺbu sa používala celočíselná stupnica 0 - 5, kde 0 = normál a 5 = maximum. Suma všetkých štyroch labiek predstavuje stredné artritické skóre, pričom skóre 20 je maximum. Výsledky sú graficky znázornené na obrázku 2.
Výsledky ukazujú, že žiadne zo zvierat liečených zlúčeninou ii nemalo príznaky reumatoidnej artritídy do 6 dní po skončení liečby. Zvieratá liečené dexametazonom však vykazovali príznaky reumatoidnej artritídy okamžite po skončení liečby.
Príklad 4: kolagénom indukovaná artritída - terapeutický model
Vo všetkých experimentoch sa použili myši DBA-1. Myši boli imunizované intradermálne v deň 0 pomocou 100 gg kuracieho kolagénu typu II. Nástup symptómov sa objavil okolo dna 35 po imunizácii
Vyhodnocovali sa tri liečené skupiny, ktoré pozostávali zo zvierat liečených vehikulom (kontrola), zvierat liečených dexametazonom (štandardná terapia) a zvierat liečených zlúčeninou ii. Liečba začala pre všetky skupiny na deň 43 po imunizácii, kedy artritické skóre všetkých zvierat dosiahlo 3-4. Stredné artritické skóre myší v troch skupinách boli na začiatku liečby rovnaké. Zvieratá sa liečili 21 dní. Dexametazon sa podával injekčné v dávke 5 mg/kg/deň, zlúčenina ii sa podávala orálne cez gastrickú sondu v dávke 50 mg/kg/deň s použitím fyziologického roztoku ako vehikula a vehikulum samotné sa podávalo nazogastrickou sondou (0,25 ml) ako kontrola.
Stredné artritické skóre:
Stupeň závažnosti artritídy sa zaznamenával denným určovaním skóre každej labky. Na kvantifikáciu úrovne erytému, opuchu, deformácie a nepohyblivosti kibu sa používala celočíselná stupnica 0-5, kde 0 = normál a 5 = maximum. Suma všetkých štyroch labiek predstavuje stredné artritické skóre, pričom skóre 20 je maximum. Výsledky sú graficky znázornené na obrázku 3.
Výsledky ukazujú, že zvieratá liečené zlúčeninou ii vykazovali signifikantné zníženie stredného artritického skóre v porovnaní s kontrolou (hodnota P nižšia ako 0,01-0,05, podľa Mann-Whitney testu).
Histopatologické výsledky:
Na piatich myšiach z každej liečebnej skupiny sa uskutočnila nekropsia na deň 71 po imunizácii a na kĺboch zo všetkých štyroch labiek každej myši sa vykonala histopatológia. Synoviálny zápal a poškodenie chrupavky postihnutých kĺbov sa vyhodnotili na stupnici od 0 do 3. Výsledky sú uvedené na obrázku 4. Liečba zlúčeninou ii a dexametazonom signifikantné potlačila synovitídu a postihnutie chrupavky v porovnaní so zvieratami liečenými vehikulom.
Príklad 5: artritída indukovaná pomocou adjuvans u potkanov - profylaktický model
Samce potkanov Lewis boli imunizované intradermálne na deň 0 pomocou
1,2 mg tepelne umŕtvených M. Tuberculosis v neúplnom Freundovom adjuvans. Liečebné skupiny (10 zvierat/skupinu) pozostávali zo zvierat liečených fyziologickým roztokom (kontrola), zvierat liečených metotrexátom (štandardná terapia) 1 mg/kg/deň a troch skupín liečených zlúčeninou ii v dávkach 10, 5 a 2,5 mg/kg/deň. Liečba začala na deň imunizácie (deň 0) a pokračovala každý druhý deň s celkovým počtom podaní 12. Všetky látky sa podávali orálne cez gastrickú sondu. Zvieratá sa vyhodnocovali v dňoch 12, 16, 19 a 23 určením stredných artritických skóre spôsobom podobným ako v príkladoch 3 a 4. Na deň 23 sa experiment ukončil a výsledky ukázali, že zlúčenina ii zabránila nástupu artritických príznakov (zapálené labky a údy) spôsobom závislým od dávky. Teda žiadne zo zvierat liečených 10 mg/kg zlúčeniny ii nevykazovalo príznaky choroby (0/10), zatiaľ čo 2/10 zvierat a 7/10 zvierat vykazovalo príznaky choroby pri dávkach 5 mg a 2,5 mg. V kontrolnej skupine 7/10 zvierat vykazovalo príznaky choroby. Metotrexát zabránil artritíde podľa očakávania.
Nasledujúce zlúčeniny boli pripravené a možno ich pripraviť podľa príkladov:
3. Xaa Val Xab Pro Xac
4. Xaa Val Xab Pro Xad
5. Xaa Val Xab Pro Xae
6. Xaa Val Xab Pro Xaf
7. Xaa Val Xab Pro Xag
8. Xaa Val Xab Pro Xah
9. Xaa Val Xab Pro Xai
10. Xaa Val Xab Pro Xak
11. Xaa Val Xab Pro Xal
12. Xaa Val Xab Pro Xam
13. Xaa Val Xab Pro Xan
14. Xaa Val Xab Pro Xao
15. Xaa Val Xab Pro Xap
16. Xaa Val Xab Pro Xag
17. Xaa Val Xab Pro Xar
18. Xaa Val Xab Pro Xas
19. Xaa Val Xab Pro Xat
20. Xaa Val Xab Pro Xau
21. Xaa Val Xab Pro Xav
22. Xaa Val Xab Pro Xaw
23. Xaa Val Xab Pro Xax
24. Xaa Val Xab Pro Xay
25. Xaa Val Xab Pro Xaz
26. Xaa Val Xab Pro Xba
27. Xaa Val Xab Pro Xbb
28. Xaa Val Xbc Pro Xay
29. Xaa Val Xab Pro Xbd
30. Xaa Val Xab Pro Xbe
31. Xaa Val Xab Pro Xbf
32. Xaa Val Xab Pro Xbg
33. Xaa Val Xab Pro Xbh
34. Xaa Val Xab Pro Xbi
35. Xaa Val Xab Pro Xbk
36. Xaa Val Xab Pro Xbl
37. Xaa Val Xab Pro Xbm
38. Xaa Val Xab Pro Xbn
39. Xaa Val Xab Pro Xbo
40. Xaa Val Xab Pro Xbp
41. Xaa Val Xab Pro Xbq
42. Xaa Val Xab Pro Xbr
43. Xaa Val Xab Pro Xbs
44. Xaa Val Xab Pro Xbt
45. Xaa Val Xab Pro Xbu
46. Xaa Val Xab Pro Xbv
47. Xaa Val Xab Pro Xbw
48. Xaa Val Xab Pro Xbx
49. Xaa Val Xab Pro Xby
50. Xaa Val Xab Pro Xbz
51. Xaa Val Xab Pro Xca
52. Xaa Val Xab Pro Xcb
53. Xaa Val Xab Pro Xcc
54. Xaa Val Xab Pro Xcd
55. Xaa Val Xab Pro Xce
56. Xaa Val Xab Pro Xcf
57. Xaa Xdf Xab Pro Xay
58. Xaa Val Xab Pro Xch
59. Xaa Val Xab Pro Xci
60. Xaa Val Xab Pro Xck
61. Xaa Val Xab Pro Xci
62. Xaa Val Xab Pro Xcm
63. Xaa Val Xab Pro Xcn
64. Xaa Val Xab Pro Xco
65. Xaa Val Xab Pro Xcp
66. Xaa Val Xab Pro Xcq
67. Xaa Val Xab Pro Xcr
68. Xaa Val Xab Pro Xcs
69. Xaa Val Xab Pro Xct
70. Xaa Val Xab Pro Xcu
71. Xcw Val Xab Pro Xcv
72. Xcx Val Xab Pro Xcv
73. Xaa Val Xab Pro Pro Xcy
74. Xaa Val Xab Pro Pro Xcz
75.
76.
77.
78.
79.
80. 81. 82.
83.
84.
85.
86.
87.
88.
89.
90.
91.
92.
93.
94.
95.
96.
97.
98.
99. 100 101 102,
103,
104,
105
106
107,
108,
109,
110, 111, 112.
113.
114.
115,
116,
117,
118.
119.
120.
Xaa Val Xda Pro Xcv Xaa Xdb Xab Pro Xcv Xdc Val Xab Pro Xcv Xaa lle Xab Pro Xcv Xdd Val Xab Pro Xcv Xde Val Xab Pro Xcv Xaa Xdt Xab Pro Xcv Xaa Val Xab Pro Xcg Xaa Val Xab Pro Pro Xdg Xaa Val Xab Pro Pro Xdh Xaa Val Xab Pro Pro Xdi Xaa Val Xab Pro Pro Xdk Xaa Val Xdl Pro Xcv Xde Val Xab Pro Xay Xaa Val Xdl Pro Xay Xaa Val Xab Pro Xdm Xaa Val Xab Pro Xdn Xaa Val Xab Pxo Xdo Xaa Val Xab Pro Xdp Xaa Val Xab Pro Xdq Xaa Val Xab Pro Pro Xdr Xaa Val Xab Pro Xds Xaa Val Xbc Pro Xcv Xaa lle Xab Pro Xay Xcw Val Xab Pro Xay Xaa Val Xbc Pro Xal Xaa Val Xdl Pro Xal Xaa XdfXab Pro Xal Xaa lle Xab Pro Xal Xdd Val Xab Pro Xal Xde Val Xab Pro Xal Xcx Val Xab Pro Xcy Xcw Val Xab Pro Xal Xcx Val Xab Pro Xal Xcw Val Xab Pro Xav Xcx Val Xab Pro Xav Xcw Val Xab Pro Xaw Xcx Val Xab Pro Xaw Xab Val Xab Pro Xay Xab Val Xab Pro Xcv Xab Val Xab Pro Xal Xab Val Xab Pro Xam Xab Val Xab Pro Xan Xab Val Xab Pro Xao Xab Val Xab Pro Xav Xab Val Xab Pro Xaw
121. XabValXab ProXat
122. Xab Val Xab Pro Xau
123. Xab Val Xab Pro Xbf
124. Xab Val Xab Pro Xbm
125. Xab Val Xab Pro Xbn
126. Xab Val Xab Pro Xbo
127. Xab Val Xab Pro Xch
128. Xaa Val Xab Pro Xdt
129. Xaa Val Xab Pro Xdu
130. Xaa Val Xab Pro Xdv
131. Xaa Val Xab Pro Xdw
132. Xaa Val Xab ProXdx
133. Xaa Val Xab Pro Xdy
134. Xaa Val Xab Pro Xdz
135. Xaa Val Xab Pro Xea
136. Xaa Val Xab Pro Xeb
137. Xaa Val Xab Pro Xec
138. Xaa Val Xab ProXed
139. Xaa Val Xab Pro Xef
140. Xaa Val Xab Pro Xeg
141. Xaa Val Xab Pro Xeh
142. Xaa Val Xab Pro Xei
143. Xaa Val Xab ProXek
144. Xaa Val Xab Pro Xel
145. Xaa Val Xab Pro Xem
146. Xaa Val Xab Pro Xen
147. Xaa Val Xab Pro Xeo
148. Xaa Val Xab Pro Xep
149. Xaa Val Xab Pro Xeq
150. Xaa Val Xab Pro Xer
151. Xaa Val Xab Pro Xcq
152. Xaa Val Xab Pro Pro Val Phe
153. Xaa Val Xab Pro Xet Val Phe NH2
154. Xaa Val Xer Pro Pro Val Phe NH2
155. Xaa Val Xbc Pro Pro Val Phe NH2
156. Xaa lle Xab Pro Pro Val Phe NH2
157. Xaa Leu Xab Pro Pro Val Phe NH2
158. Xde Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
159. Xdd Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
160. Xes Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
161. Xeu Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
162. Xaa Val Xab Pro Pro Phe Phe NH2
163. Xaa Val Xab Pro Pro Val NH2
164. Xaa Val Xab Pro Xev
165. Xaa Val Xab Pro Pro NH2
166. Xaa Val Xab Pro Pro
167. Xaa Val Xab Pro Xew
168. Xaa Val Xab Xex
169. Xdd Val Xab Pro Pro NH2
170. Xaa Xdf Xab Pro Pro NH2
171. Xaa Val Xab Pro Xey
172. Xaa Val Xab Pro Xez
173. Xfa Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
174. Xaa Val Xab Pro Pro Xfb
175. Xaa Val Xab Pro Xfc
176. Xaa Val Xab Pro Xfd
177. Xaa Val Xab Pro Xfe
178. Xaa Val Xab ProXff
179. Xaa Val Xab Pro Xfg
180. Xaa Val Xab Pro Xfh
181. Xaa Val Xab ProXfi
182. Xaa Val Xab ProXíj
183. Xaa Val Xdl Pro Pro NH2
184. Xaa Val Xfk Pro Pro NH2
185. Xaa Val Xfl Pro Xfh
186. Xaa Val Xfk Pro Xfh
187. XcxValXab Pro Xfh
188. Xaa Val Xab Pro Pro Xdf Phe NH2
189. Xaa Val Xab Pro Pro Leu Phe NHZ
190. Xaa Val Xab Pro Pro lle Phe NH2
Príklady pre charakterizáciu pomocou hmotnostnej spektrometrie syntetizovaných nových zlúčenín sú uvedené nižšie:
Príklad Analýza hmotnostnou spektrometriou bombardovaním rýchlymi atómami
3.
4.
5.
6.
7.
8. 11 12,
15, 16 17. 18 19,
565
579
593
607
621
635
607
607
621
649
635
635
635
635
621
20. 621
21. 635
22. 635
25. 633
26. 647
27. 661
31. 623
32. 671
33. 667
34. 681
35. 655
36. 655
37. 669
38. 621
39. 635
41. 649
42. 621
43. 633
44. 667
45. 607
46. 647
47. 668
48. 655
49. 669
50. 685
51. 629
52. 625
53. 721
55. 579
58. 623
61. 597
62. 621
63. 609
64. 625
65. 635
66. 591
67. 715
68. 685
69. 685
70. 591
71. 607
72. 621
74. 706
75. 579
76. 579
77. 579
78. 607
79. 607
80. 607
81. 607
82. 637
83. 692
84. 706
85. 706
86. 706
87. 607
90. 635
92. 659
93. 617
94. 636
95. 678
128. 671
131. 625
139. 625
151. 637
152. 798
153. 810
154. 812
155. 812
156. 812
157. 812
258. 812
159. 811
160. 825
161. 881
162. 845
163. 649
164. 737
165. 550
166. 551
167. 731
168. 550
169. 566
170. 566
171. 635
172. 704
173. 853
174. 740
175. 619
176. 845
177. 649
178. 691
179. 717
180. 641
181. 579
182. 595
183. 566
184. 566
185. 669
186. 656
187. 669
188. 811
189. 812
190. 812
Xaa:
Xab:
Xac:
Symboly použité pri popise zlúčenín vzorca I majú nasledujúce významy: N.N-Dimetylvalín
N-Metylvalín
Xad:
Xae:
Xaf:
O
Ο
Xao:
Xap:
Xaq:
Xar:
Xas:
Xat:
O ČH3
Ο
Ο
Ο
Ο
Xcu:
Xcv:
Xcw:
Xcx:
Xcy:
N,N-dietylvalín
Xcz:
Xda:
Xdb:
Xdc:
Xde:
Xdf:
2-aminobutyroyl
N.N-Dimetyl-2-ferc-butylglycín
N.N-Dimetylizoleucín
2-ŕe/u-butylglycín
Xdg:
h3c. .ch3
NH 1 N^ir r ,NH CH3
O CH,
Xdh:
CH3 h3c\L-ch3 'x^NH^CHs o ch3
Xdi:
ch3
Xdk:
o ch3 ch3 h3c
NH .CH3 'Ν γ Y 3 o ch3
Xdl:
Xdm:
Xdn:
Ο
Xeg:
Xeh:
Xei:
Xek:
Xel:
Xem:
Xen:
V
Xeo:
Xep:
Xeq:
e
Xer:
Xes:
N-Acetyl-N-metylvalín
Xet:
Xeu:
Xev:
Xew:
Xex:
Xey:
Xez:
Xfa:
Xfb:
kyselina pipekolínová
Ν,Ν-Dibutylvalín
N.N-dipropylvalín
Xfl:
N-Metyl-3-ferc-butylvalín
Ekvivalenty
Odborníci v oblasti budú vidieť alebo budú schopní po rutinnom experimentovaní realizovať mnoho ekvivalentov špecifických uskutočnení tu opísaného vynálezu. Také ekvivalenty sú zahrnuté v rozsahu nasledujúcich nárokov.

Claims (11)

1. Použitie derivátu dolastatinu-15 vzorca I:
R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)r(G)u-K (I) kde:
R1 je alkyl, cykloalkyl, alkylsulfonyl, fluóralkyl alebo aminosulfonyl;
R2 je vodík, alkyl, fluóralkyl alebo cykloalkyl;
R1-N-R2môžu byť spolu pyrolidino alebo piperidino;
A je valyl, izoleucyl, leucyl, alo-izoleucyl, 2,2-dimetylglycyl, 2cyklopropylglycyl, 2-cyklopentylglycyl, 3-terc-butylalanyl, 2-terc-butylglycyl, 3cyklohexylalanyl, 2-etylglycyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl alebo norvalyl;
B je N-alkyl-valyl, -norvalyl, -leucyl, -izoleucyl, -2-terc-butylglycyl, -3terc-butylalanyl, -2-etylglycyl, -2-cyklopropylglycyl, -2-cyklopentylglycyl, norleucyl alebo -2-cyklohexylglycyl;
D je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl,
3-metylprolyl, 4-metylprolyl, 5-metylprolyl, azetidín-2-karbonyl, 3,3-dimetylprolyl, 4,4-difluórprolyl, oxazolidín-4-karbonyl alebo tiazolidín-4-karbonyl;
E je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluórprolyl,
3-metylprolyl, 4-metylprolyl, 5-metylprolyl, azetídín-2-karbonyl, 3,3-dimetylprolyl, 4,4-difluórprolyl, oxazolidín-4-karbonyl alebo tiazolidín-4-karbonyl;
F a G sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, 1-aminopentyl-1karbonyl, valyl, 2-terc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 3-cyklohexylalanyl, fenylalanyl, N-metylfenylalanyl, tetrahydrosiochinolyl-2-histidyl, 1-aminoindyl1-karbonyl, 3-pyridylalanyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, tryptofanyl, glycyl, 2,2-dimetylglycyl alanyl, β-alanyl a 3-naftylalanyl;
X je vodík, alkyl, cykloalkyl, -CHrcyklohexyl alebo arylalkyl; s, t a u sú nezávisle 0 alebo 1; a
K je hydroxy, alkoxy, fenoxy, benzyloxy alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina;
a jeho soli s fyziologicky tolerovanými kyselinami na prípravu liečiva na liečenie alebo profylaxiu reumatoídnej artritídy u cicavcov.
2. Použitie podľa nároku 1, kde cicavcom je človek.
3. Použitie podľa nároku 2, kde pre zlúčeninu vzorca I je K substituovaná aminoskupina vzorca R5-N-R6, kde:
R5 je vodík alebo hydroxy alebo C1.7 alkoxy alebo benzyloxy alebo fenyloxy alebo lineárny alebo rozvetvený Ci-ralkyl (ktorý môže byť substituovaný jedným alebo viacerými atómami fluóru) alebo lineárny alebo rozvetvený Ci_i2 hydroxyalkyl alebo C3-w-cykloalkyl alebo benzyl (ktorý môže byť substituovaný až troma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, C1.7 alkylsulfonyl, Cm alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogén, C^-alkyl, kyano, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr alebo COONH2);
R6 je vodík, lineárny alebo rozvetvený C1-12 alkyl (ktorý môže byť substituovaný jedným alebo viacerými atómami fluóru) alebo lineárny alebo rozvetvený Cri2 hydroxyalkyl alebo C3.i0-cykloalkyl alebo -(CH2)v-C3-7cykloalkyl (v = 0,1,2 alebo 3) alebo norefedryl alebo norpseudoefedryl alebo chinolyl alebo pyrazyl alebo -CH2-benzimidazolyl alebo (l)-adamantyl alebo (2)-adamantyl alebo -CH2-adamantyl alebo alfa-metyl-benzyl alebo alfadimetylbenzyl alebo -(CH2)vfenyl (v = 0, 1, 2 alebo 3; ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, C1-7 alkylsulfonyl, CM alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogén, CMalkyl, ktorý môže tvoriť cyklický systém, kyano, hydroxy, N(CH3)2l COOMe, COOEt, COOiPr alebo COONH2) alebo -(CH2)m-naftyl (m = 0 alebo 1); alebo -(CH2V benzhydryl (w = 0,1, alebo 2); alebo bifenyl alebo pikolyl alebo benzotiazolyl alebo benzoizotiazolyl alebo benzopyrazolyl alebo benzoxazolyl alebo (CH2)m-fluorenyl (m = 0 alebo 1); alebo pyrimidyl alebo -(CH2)m-indanyl (m = 0 alebo 1); alebo -(CH2CH2O)y-CH3 (y = 0, 1, 2, 3, 4 alebo 5), alebo (CH2CH2O)y-CH2CH3 (y = 0,1,2,3,4 alebo 5) alebo NHCeHs (ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, C1.7 alkylsulfonyl, Cm alkoxy, halogén, Cm alkyl, ktorý môže tvoriť cyklický systém, kyano, hydroxy, COOMe, COOEt, COOiPr alebo COONH2) alebo NCH3-C6H5 alebo -NH-CH2-C6H5 alebo -NCH3-CH2-C6H5 alebo 5-členný heteroaryl (ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, tiometyl, tioetyl, CM-cykloalkyl, -CH2COOEt, CM-alkylénová skupina tvoriaca bicyklický systém s heterocyklom) alebo fenyl alebo -CHR7-5-členný heteroaryl (ktorý môže byť substituovaný až dvoma substituentmi, ktorými môžu byť nezávisle CF3, nitro, kyano, halogén, COOMe, COOEt, COOiPr, CONH2, CM-alkyl, CM-alkoxy, fenyl, benzyl, naftyl alebo Ci.7-alkylsulfonyl [R7 = vodík, lineárny alebo rozvetvený C1.5 alkyl, benzyl; alebo R7 a R5 spolu tvoria skupinu -(CH2)3- alebo -(CH2)4-).
4. Použitie podľa nároku 3, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u sú 0; A je valyl, 2-etylglycyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 2etylglycyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; D je prolyl, 4- fluórprolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluór-prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxy-prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6, kde R5 je vodík alebo Cr C4 alkoxy a R6 je lineárny alebo rozvetvený Ci-Ci2 alkyl vybraný zo skupiny jednoväzbových radikálov pozostávajúcej z nasledujúcich:
-C(CH3)3 označovaný aj ako ŕerc-butyl;
-CÍCH^r-CI-b-CH:} označovaný aj ako 1,1-dimetylpropyl;
-CHĺCHsXCHrCH^ označovaný aj ako 1-metyl-1-etylpropyl;
-CH(CH3)-C(CH3)3 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-metyl-2,2-dimetylpropyl;
-CH(C2H5)-CH(CH3)2 označovaný aj ako (S)- alebo (R)-1-etyl-2-metylpropyl; -CH[CH(CH3)2]-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1-izopropyl-2-metyl-propyl; alebo
-C(CH3)2-CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,1-dimetyl-2-metylpropyl;
-CH(CH3)2 označovaný aj ako izopropyl;
-CH(CH3)CH2CH3 označovaný aj ako sek-butyl, (S)- alebo (R)-; -CH(CH3)CH(CH3)2 označovaný aj ako 1,2-dimetylpropyl.
5. Použitie podľa nároku 4, kde jednoväzbovým radikálom je -C(CH3)3 označovaný aj ako ŕerc-butyl.
6. Použitie podľa nároku 3, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u sú 0; A je valyl, 2-etylglycyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 2etylglycyl, 1-izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; D je prolyl, 4- fluórprolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluór-prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxy-prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6, kde R5 je vodík alebo CiC4 alkoxy a R8 je vybraný zo skupiny jednoväzbových radikálov pozostávajúcej z nasledujúcich: (CH2)v-fenyl (kde v je 1) a α,α-dimetylbenzyl.
7. Použitie podľa nároku 3, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u sú 0; A je valyl, 2-etylglycyl, izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 2etylglycyl, 1-izoleucyl alebo 2-ŕerc-butylglycyl; D je prolyl, 4- fluórprolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluór-prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxy-prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6, kde R5 je vodík alebo C-r C4 alkoxy a R6 je lineárny alebo rozvetvený C1-C12 hydroxyalkyl.
8. Použitie podľa nároku 7, kde R6 je 3-hydroxy-1,1 -dimetylpropyl.
9. Použitie podľa nároku 3, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl alebo etyl; X je izopropyl, sek-butyl alebo ŕerc-butyl; s je 1; t a u sú 0; A je valyl, 2-etylglycyl, izoleucyl alebo 2-terc-butylglycyl; B je N-metylvalyl, 2• etylglycyl, izoleucyl alebo 2-terc-butylglycyl; D je prolyl, 4- fluórprolyl, , tiazolidinyl-4-karbonyl alebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluór-prolyl, tiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl alebo hydroxy-prolyl; a K je substituovaná aminoskupina vzorca Rs-N-R6, kde R5 je vodík alebo Cr C4 alkoxy a R6 je C3.10 cykloalkyl vybraný zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: (l)-adamantyl, (2)-adamantyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, 1-metylcyklopentyl, 1-metylcyklohexyl a [3,3,0]okta-1-yl.
10. Použitie podľa nároku 4, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl; X je izopropyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl; B je N-metylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; R3 je vodík a R6 je terc-butyl.
11. Použitie podľa nároku 3, kde pre zlúčeninu vzorca I R1 a R2 sú jednotlivo metyl; X je izopropyl; s je 1; t a u je 0; A je valyl; B je N-metylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; R5 je benzyl a R6 je vodík.
SK427-2000A 1997-10-06 1998-09-24 The use of dolastatin-15 derivative in the treatment and prevention of rheumatoid arthritis SK4272000A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/944,479 US6015790A (en) 1997-10-06 1997-10-06 Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
PCT/US1998/019841 WO1999017792A1 (en) 1997-10-06 1998-09-24 Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK4272000A3 true SK4272000A3 (en) 2001-02-12

Family

ID=25481479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK427-2000A SK4272000A3 (en) 1997-10-06 1998-09-24 The use of dolastatin-15 derivative in the treatment and prevention of rheumatoid arthritis

Country Status (24)

Country Link
US (1) US6015790A (sk)
EP (1) EP1021200B1 (sk)
JP (1) JP2001518515A (sk)
KR (1) KR20010081900A (sk)
CN (1) CN1278734A (sk)
AR (1) AR017298A1 (sk)
AT (1) ATE212855T1 (sk)
AU (2) AU748465B2 (sk)
BG (1) BG104292A (sk)
BR (1) BR9812875A (sk)
CA (1) CA2305688A1 (sk)
DE (1) DE69803792D1 (sk)
DK (1) DK1021200T3 (sk)
ES (1) ES2173626T3 (sk)
HR (1) HRP20000265A2 (sk)
HU (1) HUP0101715A3 (sk)
IL (1) IL135167A0 (sk)
NO (1) NO20001758L (sk)
PL (1) PL339731A1 (sk)
PT (1) PT1021200E (sk)
SK (1) SK4272000A3 (sk)
TR (1) TR200000903T2 (sk)
WO (2) WO1999017792A1 (sk)
ZA (1) ZA989036B (sk)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
KR100261114B1 (ko) * 1998-01-24 2000-07-01 박종헌 히스톤을 함유하는 류마티스 관절염 치료제 조성물
EP1214087A1 (en) * 1999-09-14 2002-06-19 Pfizer Products Inc. Combination treatment with il-1ra and compounds that inhibit il-1 processing and release
WO2001041789A1 (fr) * 1999-12-07 2001-06-14 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament contre les rhumatismes contenant un derive tetrapeptidique en tant qu'ingredient actif
CN1240681C (zh) * 1999-12-24 2006-02-08 霍夫曼-拉罗奇有限公司 作为组织蛋白酶k抑制剂的腈衍生物
WO2008083729A1 (en) * 2007-01-09 2008-07-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Radiolabelling via fluorination of aziridines
EP2443136A4 (en) 2009-06-18 2013-01-09 Strongbone Ab NOVEL PEPTIDE DERIVATIVES FOR TREATMENT, PREVENTION OR MITIGATION OF AFFECTION ASSOCIATED WITH BONE LOSS OR LOW BONE DENSITY OR INHIBITING DIFFERENTIATION AND STIMULATION OF OSTEOCLASTS
BR112015016580A2 (pt) * 2013-01-11 2017-07-11 Fujifilm Corp composto heterocíclico contendo nitrogênio ou sal deste
KR102372512B1 (ko) * 2017-11-20 2022-03-10 가톨릭대학교 산학협력단 폴리감마글루탐산 및 메토트렉세이트를 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 조성물
CN115281149A (zh) * 2021-05-12 2022-11-04 四川大学华西医院 一种临床前类风湿关节炎(Pre-RA)小鼠模型

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
DK0934950T3 (da) * 1991-08-09 2002-07-29 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Tetrapeptidderivat
US5831002A (en) * 1992-05-20 1998-11-03 Basf Aktiengesellschaft Antitumor peptides
ATE196296T1 (de) * 1992-12-16 2000-09-15 Basf Ag Dolastatin analog
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5583153A (en) * 1994-10-06 1996-12-10 Regents Of The University Of California Use of taxol in the treatment of rheumatoid arthritis

Also Published As

Publication number Publication date
BR9812875A (pt) 2000-08-08
WO1999017792A1 (en) 1999-04-15
CA2305688A1 (en) 1999-04-15
HUP0101715A3 (en) 2001-12-28
ZA989036B (en) 2000-04-05
EP1021200A1 (en) 2000-07-26
ES2173626T3 (es) 2002-10-16
AU9502498A (en) 1999-04-27
AR017298A1 (es) 2001-09-05
HUP0101715A2 (hu) 2001-11-28
NO20001758D0 (no) 2000-04-05
JP2001518515A (ja) 2001-10-16
ATE212855T1 (de) 2002-02-15
AU9592698A (en) 1999-04-27
NO20001758L (no) 2000-06-05
EP1021200B1 (en) 2002-02-06
PL339731A1 (en) 2001-01-02
AU748465B2 (en) 2002-06-06
HRP20000265A2 (en) 2000-12-31
TR200000903T2 (tr) 2001-07-23
KR20010081900A (ko) 2001-08-29
BG104292A (en) 2000-12-29
US6015790A (en) 2000-01-18
PT1021200E (pt) 2002-07-31
IL135167A0 (en) 2001-05-20
CN1278734A (zh) 2001-01-03
DE69803792D1 (de) 2002-03-21
WO1999017709A2 (en) 1999-04-15
DK1021200T3 (da) 2002-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU679479B2 (en) Dolostatin analog
RU2195462C2 (ru) Производные доластатина 15
AU669710B2 (en) Derivatives of dolastatin
EP0832104A1 (en) Novel dolastatin derivatives, their preparation and use
SK4272000A3 (en) The use of dolastatin-15 derivative in the treatment and prevention of rheumatoid arthritis
EP0981358B1 (en) Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
SK76798A3 (en) Antineoplastic peptides
CZ20001211A3 (cs) Prostředky pro léčení revmatoidní artritidy
US20010009901A1 (en) Antineoplastic peptides
MXPA00003289A (en) Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis