KR20010081900A

KR20010081900A - 류마티스양 관절염을 치료하는 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20010081900A
Application number: KR1020007003706A
Authority: KR
Inventors: 테레사 발로짜리; 수브하쉬스 바너지; 안드레아스 하우프트
Original assignee: 스타르크, 카르크; 바스프 악티엔게젤샤프트
Priority date: 1997-10-06
Filing date: 1998-09-24
Publication date: 2001-08-29
Also published as: BR9812875A; WO1999017792A1; CA2305688A1; HUP0101715A3; ZA989036B; EP1021200A1; ES2173626T3; AU9502498A; SK4272000A3; AR017298A1; HUP0101715A2; NO20001758D0; JP2001518515A; ATE212855T1; AU9592698A; NO20001758L; EP1021200B1; PL339731A1; AU748465B2; HRP20000265A2

Abstract

본 발명은 환자에게서 류마티스양 관절염을 치료하는 조성물 및 방법에 관한 것이며, 하나 이상의 화학식(I)의 화합물이 단독으로 또는 하나 이상의 항관절염 약제와 조합하여 류마티스양 관절염을 억제시킨다.

Description

류마티스양 관절염을 치료하는 방법 및 조성물 {METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING RHEUMATOID ARTHRITIS}

배경기술

류마티스양 관절염은 일반적으로 자가반응성 T 세포의 활성도와 관련된 자가면역 질환이다 [참조: Harris, E.D., Jr., The New England Journal of Medicine, 322: 1277-1289 (1990)]. 치료 부분의 발전에도 불구하고, 류마티스양 관절염은 심각한 건강 문제로 남아있다. 관절염으로 인해 죽는 일은 드물지만, 관절염은 질병률, 작업 시간의 손실, 생산성 저하 및 수명 단축의 주요 원인이다. 류마티스양 관절염은 관절 이동의 감소 및 심각한 고통을 일으키며, 간단한 작업 조차도 어렵게 할 수 있다.

류마티스양 관절염에 대한 기존의 치료 방법 및 섭생법은 비스테로이드계 항염증 약물, 예컨대 아세틸살리실산(아스피린), 이부프로펜, 나프록센 및 기타 상기 제제, 금 화합물, 페니실아민, 메토트렉세이트, 세포독성제 (예를 들어, 아조트리오프린), 4-아미노퀴놀린 제제, 및 면역 조정제의 투여를 포함한다. 염증, 종창, 비정상 신혈관 형성, 골 미란 또는 연골성 미란과 같은 증상을 억제시키거나 개선시킬 수 있는 류마티스양 관절염의 개선된 치료가 요구되고 있다. 바람직하게, 상기의 개선된 치료 방법은 다른 치료 방법과 조합될 수 있어야 하며, 증상을 억제 또는 안정화시키도록 빠르게 조작되어야 하며, 내성이 양호해야 한다. 바람직하게, 상기 치료 섭생법은 또한 민감한 개개인에게서의 예방에 유용하여야 한다.

발명의 요약

본 발명은 돌라스타틴-15 유도체, 이들의 제조물 및 이들을 포유류, 예를 들어 사람에게서 류마티스양 관절염의 치료에 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 돌라스타틴-15 유도체는 하기 화학식(I)의 화합물이다:

R¹R²N-CHX-CO-A-B-D-(E)_s-(F)_t-(G)_u-K (I)

화학식(I)은 하기에서 상세하게 기재된다. 화학식(I)의 화합물의 일부 예는 본원에 구체적으로 제시되어 있다. 예를 들어, 화학식(I)의 화합물은 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s는 1이고; t 및 u는 각각 0 이고; A는 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B는 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D는 티아졸리디닐-4-카르보닐, 3,4-데히드로프롤릴(dehydroprolyl) 또는 프롤릴이고; E는 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴 또는 3,4-데히드로프롤릴이며; K는 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 1가 라디칼, 예컨대 (1)- 또는 (2)-아다만틸; (CH₂)v-페닐(v=1); α,α-디메틸벤질; C₁-C₁₂선형 또는 분지된 히드록시알킬기, 예컨대 C(CH₃)₂-CH₂-CH₂-OH(또한, 3-히드록시-1,1-디메틸프로필로서 언급된다); C₃-C₁₀시클로알킬기, 예컨대 비시클로[3.3.0]옥타-1-일, 1-메틸시클로펜틸 또는 1-메틸시클로헥실; 또는 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 알킬기, 예컨대 -C(CH₃)₃(또한, 3차-부틸로서 언급된다);(또한, 1,1-디메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-메틸-1-에틸프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-메틸-2,2-디메틸-프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-에틸-2-메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-이소프로필-2-메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₂-CH(CH₃)₂(또한, 1,1-디메틸-2-메틸프로필로서 언급된다); CH(CH₃)₂(또한, 이소프로필로서 언급된다); -CH(CH₃)CH₂CH₃, 2차-부틸 [(S) 또는 (R)]; 또는 -CH(CH₃)CH(CH₃)₂(또한, 1,2-디메틸프로필로서 언급된다)이다)을 갖는 치환된 아미노 부분인 화합물일 수 있다.

본 발명은 또한 포유류, 예를 들어 사람에게서 류마티스양 관절염을 치료하는 방법에 관한 것이며, 이 방법에서 본원에 기술된 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체가 사용된다. 본 발명의 방법에서, 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체는 류마티스양 관절염이 있거나 걸리기 쉬운 포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하기 위해 치료학적 유효량으로, 단독으로 또는 약리학적으로 허용되는 담체와 함께 투여된다.

본 발명의 또 다른 일면에서, 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체는 하나 이상의 다른 항관절염 약제와 함께 류마티스양 관절염이 있거나 걸리기 쉬운 포유류에게 투여된다.

특정 구체예에서, 2개 이상의 돌라스타틴-15 유도체는 하나 이상의 다른 항관절염 약제와 함께 류마티스양 관절염이 있거나 걸리기 쉬운 포유류에게 투여된다. 2개 이상의 돌라스타틴-15 유도체의 투여 또는 돌라스타틴 유도체(들)와 하나 이상의 다른 항관절염 약제의 조합 투여는 류마티스양 관절염의 치료를 개선시킨다. 예를 들어, 조합 투여는 부작용을 억제하거나 거의 없게 하고/거나, 공지된 항관절염 약제를 낮은 투여량으로 투여하여 높은 투여량으로 얻게 되는 동일한 효과를 얻게 할 수 있다. 다른 항관절염 약제는 하기 제제 중 하나 이상일 수 있으나, 이에 국한되지는 않는다: (1) 아세틸살리실산(아스프린), 이부프로펜 또는 나프록센과 같은 비스테로이드계 항염증 제제; (2) 금 나트륨 티오말레이트, 오로티오글루코오스 또는 오라노핀; (3) D-펜실아민; (4) 히드록시클로로퀸과 같은 4-아미노퀴놀린 제제; (5) 아자티오프린; (6) 메토트렉세이트; (7) 시클로스포린; (8) AGM-1470(Ingber, et al., Nature 348, (1990) 555)와 같은 맥관형성 억제제; (9) T 세포에 대한 단클론성 항체; (10) 유착 분자에 대한 단클론성 항체; (11) 시토킨 및 성장 인자에 대한 단클론성 항체; (12) 종양 괴사 인자 수용체(Tumor Necrosis Factor Receptor: TNFR) - IgG); (13) IL-1 수용체 길항제; 및 (14) ICE 억제제.

또한, 본 발명은 화학식(I)의 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체를 단독으로 또는 하나 이상의 다른 항관절염 약제와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 임의로 액제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 공정을 돕는 화합물, 예를 들어 결합제, 충전제 및 보존제를 포함할 수 있다.

도면의 간단한 설명

도 1은 화학식(I)의 구조를 갖는 돌라스타틴-15 유도체의 예로서 화합물 i-xvii를 도시하고 있다.

도 2는 식염수(대조군), 덱사메타손(표준 치료) 및 도 1의 화합물 ii로 처리한 마우스에 대해서, 유형 II의 콜라겐으로 면역화후에 경과일에 대한 함수로서 평균 관절염 스코어를 도시한 그래프이다. 치료는 면역후 26일째에 시작하였으며 면역후 35일째에 마쳤다.

도 3은 비이클(대조군), 덱사메타손(표준 치료) 및 도 1의 화합물 ii로 처리한 마우스에 대해서, 유형 II의 콜라겐으로 면역화후에 경과일에 대한 함수로서 평균 관절염 스코어를 도시한 그래프이다. 치료는 면역후 48일째에 시작하였으며 21일 동안 지속하였다.

도 4는 비이클, 덱사메타손(표준 치료) 및 도 1의 화합물 ii로 처리한 마우스에 대한 조직병리학적 분석에 의해 결정되는 연골 손상 및 활막염의 정도를 도시한 그래프이다. 마우스는 면역후 48일째에 유형 II의 콜라겐으로 치료하기 시작하였으며, 치료는 21일 동안 지속하였다. 부검은 면역후 71일째에 수행하였다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 포유류의 류마티스양 관절염의 치료에 유용한 돌라스타틴-15 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 돌라스타틴-15 유도체는 하기에 추가로 기술되는 바와 같이 화학식9I)에 도시된 구조를 갖는 화합물이다. 이 화합물은 치료학적 유효량으로 투여된다. 본원에서 사용되는 용어 "치료학적 유효량"은 원하는 생물학적반응을 유도하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명에서, 치료의 원하는 생물학적 반응은 류마티스양 관절염의 억제이다. 본원에서 사용되는 용어 "억제"는 하기의 일부 또는 전부를 포함한다: (1) 기존 증상의 완화; (2) 증상 전개의 억제 또는 둔화; (3) 영향받기 쉬운 환자에게서 질환의 발단 또는 발생의 방해 또는 지연, 즉 예방. 보편적으로 류마티스양 관절염과 관련된 증상은 염증, 종창, 비정상 신혈관 형성, 골 미란 또는 연골성 미란을 포함하지만, 이에 국한되지는 않는다. 이러한 증상 중 한 가지 이상은 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 치료학적 유효량으로 투여하는 경우에 억제된다.

화학식(I)의 화합물

세포 성장의 억제제로서 상당한 활성도를 갖는 수많은 짧은 펩티드는 인도양 산토끼의 돌라벨라 귀(Indian Ocean sea hare Dolabella auricularia)로부터 단리된다 [참조: Bai, et al., Biochem. Pharmacology, 40: 1859-1864 (1990); Beckwith et al., J. Natl. Cancer Inst., 85:483-488 (1993) 및 본원에 인용된 참고문헌]. 이들 펩티디는 돌라스타틴 1-10 [페티트(Pettit) 등의 미국 특허 제 4,816,444호] 및 돌라스타틴-15 [유럽 특허 출원 제 398558호]를 포함한다. 예를 들어, 돌라스타틴-15는 내쇼날 캔서 인스티튜트(National Cancer Institute)의 P388 림프구 백혈병 세포계의 성장을 현저하게 억제하며, 다양한 유형의 사람의 악성 종양에 대한 효능의 강한 예측인자이다. 그러나, 이 화합물은 인도양 산토끼에 단지 미량으로만 존재하며, 단리시키기 어렵고, 합성시키기에는 비용이 많이 들고, 수용해도가 불량하다.

화학식(I)의 화합물은 돌라스타틴-15의 유도체이다. 놀랍게도, 화학식(I)의 화합물이 류마티스양 관절염의 치료 방법에 유용한 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 방법에서 사용되는 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체는 본원 및 관련된 공동 계류중인 출원 U.S.S.N. 08/472,453호(1995.6.7)에 기술된 바와 같이 합성될 수 있으며, 그 기술은 본원에서 전반적으로 인용되고 있다.

화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체는 일반적으로 L-아미노산을 포함하지만, 또한 관련된 공동 계류중인 출원 U.S.S.N. 08/472,453호(1995.6.7)에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 D-아미노산을 함유할 수 있다. 화학식(I)의 화합물은 또한 생리학적으로 양립가능한 산과의 염으로서 존재할 수 있으며, 상기 산으로는 염산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 인산, 메탄술폰산, 아세트산, 포름산, 말레산, 푸마르산, 말산, 숙신산, 말론산, 황산, L-글루탐산, L-아스파르트산, 피루브산, 무크산, 벤조산, 글루쿠론산, 옥살산, 아스코르브산 및 아세틸글리신이 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다.

본 발명의 목적상, 용어 "1가 라디칼"은 제 2 중성 분자 단편과 함께 하나의 공유 결합을 형성할 수 있는 전기적으로 중성인 분자 단편을 의미하는 것이다. 1가 라디칼로는 수소 원자, 알킬기(예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필 및 3차 부틸기), 시클로알킬기, 히드록시 알킬기, 아다만틸기, 할로겐 원자(예를 들어, 불소, 염소 및 브롬 원자), 아릴기(예를 들어, 페닐, 벤질 및 나프틸기) 및 알콕시기(예를 들어, 메톡시 및 에톡시기)가 포함된다. 이웃하는 시그마 결합된 원자상의 2개의 1가 라디칼은 또한 이웃하는 원자와 파이 결합을 형성할 수 있다. 2개의 1가 라디칼이 또한 예를 들어, 고리 구조를 형성하는 폴리메틸렌 단위에 의해 함께 결합될 수 있다. 예를 들어, 단위 -N(R)R'(여기에서, R 및 R'는 1가 라디칼이다)는 질소 원자와 함께 헤테로고리형 링을 형성한다. 또한, 동일한 원자에 결합된 2개의 1가 라디칼은 알킬리덴기, 예를 들어 프로필리덴기, 또는 산소 원자와 같은 2가 라디칼을 형성할 수 있다.

더욱 구체적으로, 화학식(I)의 화합물에 있어서,

R¹은 알킬, 예컨대 C₁-C₃; 시클로알킬, 예컨대 시클로프로필; 알킬술포닐, 예컨대 C₁-C₃; 플루오로알킬, 예컨대 플루오로에틸, 디플루오로에틸, 플루오로이소프로필; 알킬, 예컨대 메틸에 의해 치환될 수 있는 아미노술포닐이고;

R²는 수소; 알킬, 예컨대 C₁-C₃; 플루오로알킬, 예컨대 플루오로에틸, 디플루오로에틸, 플루오로이소프로필; 시클로알킬, 예컨대 시클로프로필이고;

R¹-N-R²는 함께 피롤리디노 또는 피페리디노 잔기일 수 있고;

A는 발릴, 이소루실, 루실, 알로-이소루실, 2,2-디메틸글리실, 2-시클로프로필글리실, 2-시클로펜틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, 2-3차-부틸글리실, 3-시클로헥실알라닐, 2-에틸글리실, 2-시클로헥실글리실, 노르루실 또는 노르발릴 잔기이고;

B는 N-알킬-발릴, -노르발릴, -루실, -이소루실, -2-3차-부틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, -2-에틸글리실, -2-시클로프로필글리실, -2-시클로펜틸글리실, -노르루실 또는 -2-시클로헥실글리실 잔기이며, 여기에서 N-알킬은 바람직하게는 N-메틸또는 N-에틸이고;

D는 프로필, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

E는 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플로오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

F 및 G는 독립적으로 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 1-아미노펜틸-1-카르보닐, 발릴, 2-3차-부틸글리실, 이소루실, 루실, 3-시클로헥실알라닐, 페닐알라닐, N-메틸페닐알라닐, 테트라히드로이소퀴놀릴-2-히스티딜, 1-아미노인딜-1-카르보닐, 3-피리딜알라닐, 2-시클로헥실글리실, 노르루실, 노르발릴, 네오펜틸글리실, 트리오토파닐, 글리실, 2,2-디메틸글리실 알라닐, β-알라닐 및 3-나프틸알라닐 잔기이고;

X는 수소, 알킬(예컨대 C₁-C₅), 시클로알킬(예컨대 C₃-C₇), -CH₂-시클로헥실 또는 아릴알킬(예컨대 벤질 또는 펜에틸)이고;

s, t 및 u는 독립적으로 0 또는 1 이며;

K는 히드록시, 알콕시(예컨대 C₁-C₄), 페녹시, 벤질옥시 또는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분이다.

또한, 화학식(I)의 화합물은 생리학적으로 내성인 산과의 염으로서 존재할 수 있다.

본 발명의 한 가지 부류의 화합물은 R¹-N-R²가 피롤리디닐 또는 피페리디닐 잔기인 화학식(I)의 화합물을 포함한다.

본 발명의 또 다른 부류의 화합물은 K가 화학식 R⁵-N-R⁶의 아미노산 부분인 화학식(I)의 화합물을 포함하며, 상기에서,

R⁵는 수소, 히드록시, 또는 C_1-7알콕시, 벤질옥시, 페닐옥시, C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬, 예컨대 3-히드록시-1,1-디메틸프로필, C_1-12선형 또는 분지된 알킬(하나 이상의 불소 원자로 치환될 수 있다), 또는 C_3-10-시클로알킬, 예컨대 비시클로[3.3.0]옥타-1일, 1-메틸시클로펜틸 또는 1-메틸시클로헥실; 또는 벤질(3개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다)이고;

R⁶는 수소, C_1-12선형 또는 분지된 알킬(하나 이상의 플루오로 원자로 치환될 수 있다), 또는 C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬, 예컨대 3-히드록시-1,1-디메틸프로필, C_3-10-시클로알킬, 예컨대 비시클로[3.3.0]옥타-1-일, 1-메틸시클로펜틸 또는 1-메틸시클로헥실; -(CH₂)_v-C_3-7-시클로알킬(v=0, 1, 2 또는 3), 노르에페드릴, 노르슈도에페드릴, 퀴놀릴, 피라질, -CH₂-벤즈이미다졸릴, (1)-아다만틸, (2)-아다만틸, -CH₂-아다만틸, 알파-메틸-벤질, 알파-디메틸벤질, -(CH₂)_v-페닐(v=0, 1, 2 또는 3; 2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, 고리 시스템을 형성할 수 있는 C_1-4-알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), 또는 -(CH₂)_m-나프틸(m=0 또는 1); -(CH₂)_w-벤즈히드릴(w=0, 1 또는 2); 비페닐, 피콜릴, 벤조티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조피라졸릴, 벤즈옥사졸릴 또는 -(CH₂)_m-플루오레닐(m=0 또는 1); 피리미딜 또는 -(CH₂)_m-인다졸(m=0 또는 1); -(CH₂CH₂O)_y-CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), (CH₂CH₂O)_y-CH₂CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), NH-C₆H₅(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), -NCH₃-C₆H₅, -NH-CH₂-C₆H₅, -NCH₃-CH₂-C₆H₅또는 5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 티오메틸, 티오에틸, C_3-6시클로알킬, -CH₂-COOEt, 헤테로 고리와 함께 이중 고리 시스템을 형성하는 C_3-4알킬렌기이다), 페닐, 또는 -CHR⁷-5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 시아노, 할로겐, COOMe, COOEt, COOiPr, CONH₂, C_1-4-알킬, C_1-4-알콕시, 페닐, 벤질, 나프틸, 또는 C_1-7-알킬술포닐일 수 있으며, 상기에서 R⁷은 수소, 선형 또는 분지된 C_1-5알킬, 벤질이거나; R⁷및 R⁵는 함께 -(CH₂)₃- 또는 -(CH₂)₄- 기를 형성할 수 있다)이다.

상기 부류의 화합물은 s, t 및 u가 독립적으로 0 또는 1 이고; R¹, R²및 X가 저급 알킬이고, A가 저급 알킬 아미노산이고, B가 N-저급알킬화된 저급 알킬 아미노산이며; D, E, F, G 및 K는 이전에 정의된 바와 같은 화학식(I)의 화합물을 포함한다. 상기 기술과 관련하여, 상기 화합물의 3 세트는 하기 화학식(II), (III) 및 (IV)에 의해 도시될 수 있다:

-CHR⁷-5원 헤테로아릴의 예가 하기 잔기 중 하나로 표현될 수 있다:

-NR⁵CHR⁷-5원 헤테로아릴의 예가 하기 잔기 중 하나로 표현될 수 있다:

5원 헤테로아릴의 예가 하기 잔기 중 하나로 표현될 수 있다:

본 발명의 또 다른 부류의 화합물에서, R⁵-N-R⁶은 함께 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 구조를 형성할 수 있다:

본 발명의 또 다른 부류의 화합물의 예로는 s, t 및 u가 1 이고, K가 히드록시, 알콕시, 페녹시 또는 벤질옥시 부분인 화학식(I)의 화합물이 포함된다.

본 발명의 또 다른 부류의 화합물의 예로는 s 및 t가 1 이고, u가 0 이며, K가 히드록시, 알콕시, 페녹시 또는 벤질옥시 부분인 화학식(I)의 화합물이 포함된다.

본 발명의 또 다른 부류의 화합물의 예로는 s가 1 이고, t 및 u가 0 이며, K는 히드록시, 알콕시, 페녹시 또는 벤질옥시 부분인 화합물이 포함된다.

특정 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s는 1 이고; t 및 u는 각각 0 이고; A는 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B는 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D는 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E는 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K는 화학식 R⁵-N-R⁶을 갖는 치환되거나 치환되지않은 아미노 부분인 화합물이다.

추가 구체예에서, 돌라스타틴-15 유도체는 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s는 1 이고; t 및 u는 각각 0 이고; A가 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E가 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄알콕시이며, R⁶은 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 알킬기 또는 하기 1가 라디칼로 표현되는 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 히드록시알킬기이다: C(CH₃)₂-CH₂-CH₂-OH(또한, 3-히드록시-1,1-디메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₃(또한, 3차-부틸로서 언급된다);(또한, 1,1-디메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-메틸-1-에틸프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-메틸-2,2-디메틸-프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-에틸-2-메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-이소프로필-2-메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₂-CH(CH₃)₂(또한, 1,1-디메틸-2-메틸프로필로서 언급된다); CH(CH₃)₂(또한, 이소프로필로서 언급된다); -CH(CH₃)CH₂CH₃(또한, 2차-부틸, (S)- 또는 (R)- 로서 언급된다); 또는 -CH(CH₃)CH(CH₃)₂(또한, 1,2-디메틸프로필로서 언급된다)]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화합물이다.

또 다른 구체예에서, 돌라스타틴-15 유도체는 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s는 1 이고; t 및 u는 각각 0 이고; A가 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E가 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄알콕시이며, R⁶은 C₃-C₁₀시클로알킬기(예를 들어, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-메틸시클로펜틸, 1-메틸시클로헥실 또는 비시클로[3.3.0]옥타-1- 일); (1)- 또는 (2)-아다만틸기; (CH₂)_v-페닐(v=1) 또는 α,α-디메틸벤질과 같은 1가 라디칼이다]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화학식(I)의 화합물이다.

또 다른 구체예에서, 돌라스타틴-15 유도체는 R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s는 1 이고; t 및 u는 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소이며, R⁶은 3차 부틸기이다]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화학식(I)의 화합물이다. 화학식(I)의 화합물 ii의 사용 결과는 실시예 3 및 4에 기술되어 있으며, 도 2, 3 및 4에 그래프로 도시되어 있다.

본 발명의 돌라스타틴-15 유도체는 임의로 약제학적으로 허용되는 담체중에서 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 당업자들에게 널리 공지되어 있다. 담체의 선택은 화학식(I)의 특정 화합물 뿐만 아니라, 돌라스타틴-15 유도체를 투여하는데 사용되는 특정 방법에 의해 부분적으로 결정될 것이다.

또한, 본 발명은 하나 이상의 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 단독으로 또는 하나 이상의 다른 항관절염 약제, 예컨대 본원에 기술된 것과 조합하여 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 임의로 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 공정을 돕는 화합물, 예를 들어 결합제, 충전제 및 보존제를 포함할 수 있다.

또 다른 일면에서, 본 발명은 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 사용하여 포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하는 방법을 포함한다. 본 발명의 목적상, 표현 "류마티스양 관절염의 치료 방법" 및 "류마티스양 관절염의 억제"는 번갈아 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "억제"는 하기의 일부 또는 전부를 포함한다: (1) 기존 증상의 완화; (2) 증상 전개의 억제 또는 둔화; (3) 영향받기 쉬운 환자에게서 질환의 발단 또는 발생의 방해 또는 지연, 즉 예방.

본 발명의 치료 방법은 하나 이상의 화학식(I)의 화합물을 치료학적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다. 화학식(I)의 화합물은 단독으로, 또는 원하는 투여 방식에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 경구 및 비경구 수단, 예컨대 피하, 정맥내, 근내, 복막내, 비내 또는 직장내 수단을 포함하는, 제약 분야에 통상적인 수단에 의해 수행될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 또한 다른 치료학적 활성 성분들을 함유할 수 있다.

본 발명의 또 다른 일면에서, 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체는 류마티스양 관절염이 있거나 걸리기 쉬운 포유류에게 단독으로 또는 약리학적으로 허용되는 담체와 함께 투여된다. 하나 이상의 다른 항관절염 약제와 조합된 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체(들)의 투여는 류마티스양 관절염의 치료를 개선시킨다. 예를 들어, 조합 투여는 부작용을 억제하거나 거의 없게 하고/거나, 공지된 항관절염 약제를 낮은 투여량으로 투여하여 높은 투여량으로 얻게 되는 동일한 효과를 얻게 할 수 있다. 다른 항관절염 약제는 하기 제제 중 하나 이상일 수 있으나, 이에 국한되지는 않는다: (1) 아세틸살리실산(아스프린), 이부프로펜 또는 나프록센과 같은 비스테로이드계 항염증 제제; (2) 금 나트륨 티오말레이트, 오로티오글루코오스 또는 오라노핀; (3) D-펜실아민; (4) 히드록시클로로퀸과 같은 4-아미노퀴놀린 제제; (5) 아자티오프린; (6) 메토트렉세이트; (7) 시클로스포린; (8) AGM-1470(Ingber, et al., Nature 348, (1990) 555)와 같은 맥관형성 억제제; (9) T 세포에 대한 단클론성 항체; (10) 유착 분자에 대한 단클론성 항체; (11) 시토킨 및 성장 인자에 대한 단클론성 항체; (12) 종양 괴사 인자 수용체(Tumor Necrosis Factor Receptor: TNFR) - IgG); (13) IL-1 수용체 길항제; 및 (14) ICE 억제제.

특정 구체예에서, 2개 이상의 돌라스타틴-15 유도체가 류마티스양 관절염이 있거나 걸리기 쉬운 포유류에게 단독으로 또는 약리학적으로 허용되는 담체와 함께 투여된다.

사람과 같은 포유류에게 투여되는 투여량은 본원에 기술된 바와 같이, 화학식(I)의 화합물의 치료학적 유효량을 포함한다. 투여량은 공지된 방법에 따라 실험적으로 결정될 수 있으며, 생물학적 활성, 작용 메카니즘, 사용되는 특정 화합물의 독성 프로필; 투여 방식; 수용자의 연령, 건강 상태 및 체중; 증상의 정도 및 지속 기간; 치료 횟수; 다른 치료제의 투여; 및 원하는 효과와 같은 인자에 따라 좌우될 것이다.

화학식(I)의 화합물의 보편적인 하루 투여량은 경구 투여에 의해 체중 1kg 당 약 1 내지 약 100mg, 비경구 투여에 의해서 체중 1kg 당 약 1 내지 약 100mg 일 것이다.

본 발명의 돌라스타틴-15 유도체는 통상적인 고체 또는 액체의 약제 형태, 예를 들어 코팅되지 않거나 (막)코팅된 정제, 캡슐, 분말, 과립, 좌약 또는 용액으로 투여될 수 있다. 이들 유도체는 통상적인 방식으로 생성된다. 활성 물질은 본 발명의 목적을 위해서, 통상적인 약제 보조제, 예컨대 정제 결합제, 충전제, 보존제, 정제 분해제, 흐름 조절제, 가소제, 습윤제, 분산제, 에멀션화제, 용매, 지효성 조성물, 항산화제 및/또는 추진제와 함께 처리될 수 있다 [참조: H. Suecker et al.: Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978]. 이러한 방식으로 수득되는 투여 형태는 보편적으로 약 1 내지 약 90 중량%의 활성 물질을 함유한다.

하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체가 투여되는 경우에, 이 유도체들은 한번에(동시에) 또는 여러 회수로(순차적으로) 투여될 수 있으며, 원하는 치료학적 효과를 달성하기에 적당한 순서 및 간격으로 투여된다. 2개 이상의 돌라스타틴-15 유도체가 동시에 투여되는 경우, 이들 유도체는 분리적으로(개개의 유도체로서) 또는 물리적 배합으로(혼합물 또는 배합물로서) 제공될 수 있다. 동시에 투여되는 경우는 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체가 하나 이상의 다른 항관절염 약제와 함께 투여되는 경우이다. 이들은 동시에 또는 순차적으로 및 개별적으로 또는 배합물이나 혼합물로서 투여될 수 있다. 본 발명은 또한 하나 이상의 돌라스타틴-15 유도체 및 하나 이상의 다른 항관절염 약제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

화학식(I)의 화합물은 상기에 상세하게 기술되어 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법은 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1 이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E가 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶을 갖는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분인 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 사용한다.

추가 구체예에서, 본 발명의 방법은 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1 이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E가 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄알콕시이며, R⁶은 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 알킬기 또는 하기 1가 라디칼로 표현되는 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 히드록시알킬기이다: C(CH₃)₂-CH₂-CH₂-OH(또한, 3-히드록시-1,1-디메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₃(또한, 3차-부틸로서 언급된다);(또한, 1,1-디메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-메틸-1-에틸프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-메틸-2,2-디메틸-프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-에틸-2-메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-이소프로필-2-메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₂-CH(CH₃)₂(또한, 1,1-디메틸-2-메틸프로필로서 언급된다); CH(CH₃)₂(또한, 이소프로필로서 언급된다); -CH(CH₃)CH₂CH₃(또한, 2차-부틸, (S)- 또는 (R)- 로서 언급된다); 또는 -CH(CH₃)CH(CH₃)₂(또한, 1,2-디메틸프로필로서 언급된다)]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 사용한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1 이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프로필이고; E가 프롤릴, 티아졸리닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄알콕시이며, R⁶은 C₃-C₁₀시클로알킬기(예를 들어, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-메틸시클로펜틸, 1-메틸시클로헥실 또는 비시클로[3.3.0]옥타-1- 일); (1)- 또는 (2)-아다만틸기; (CH₂)_v-페닐(v=1) 또는 α,α-디메틸벤질과 같은 1가 라디칼이다]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화학식(I)의 화합물을 사용한다.

추가 구체예에서, 본 발명의 방법은 R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s가 1 이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶[여기에서, R⁵는 수소이며, R⁶은 3차 부틸기이다]을 갖는 치환된 아미노 부분인 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 사용한다. 이 화합물은 도 1에 도시된 화합물 ii에 상응한다. 류마티스양 관절염의 치료에서 화합물 ii의 사용은 실시예 3 및 4에 기술되어 있으며, 그 결과는 도 2, 3 및 4에 제시되어 있다.

합성 방법

화학식(I)의 화합물은 본원 및 미국 특허 출원 우선권 제 08/470,453호(1995년 6월 7일 출원)에 기술된 방법과 같은 공지된 펩티드 합성 방법에 의해 제조될 수 있으며, 그 기술은 본원에 참고문헌으로서 인용되고 있다. 펩티드는 개개의 아미노산으로부터 또는 적합한 짧은 펩티드 단편을 결합시킴으로써 어셈블링될 수 있다. 순차적인 어셈블리에서, 펩티드 사슬은 C 말단에서 출발하여, 단계당 하나의 아미노산으로 점차적으로 연장된다. 단편 커플링에서, 상이한 길이의 단편은 함께 결합될 수 있고, 단편은 또한 여전히 짧은 펩티드의 단편 커플링 또는 아미노산으로부터의 순차적 어셈블링에 의해 수득될 수 있다.

순차적 어셈블리 및 단편 커플링 모두에 있어서, 아미드 결합을 형성함으로써 단위를 결합시키는 것이 필요하며, 아미드 결합은 다양한 효소 및 화학적 방법을 통해 수행될 수 있다. 펩티드성 아미드 결합의 형성에 대해서 본원에 기술된 방법은 또한 비펩티드성 아미드 결합의 형성에 적합하다.

아미드 결합을 형성시키기 위한 화학적 방법은 하기 문헌을 포함하여, 펩티드 화학에 대한 표준 문헌에 상세하게 기술되어 있다 [참고문헌: Mueller,Methoden der organischen ChemieVol. XV/2, 1-364, Thieme Verlag, Stuttgart, (1974); Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis, 31-34 and 71-82, Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984); Bodanszky et al.,PeptideSynthesis, 85-128, John Wiley & Sons, New York, (1976); Practice of Peptide Synthesis, M. Bodansky, A. Bodansky, Springer-Verlag, 1994 및 펩티드 화학분야에서의 다른 표준 문헌]. 바람직한 방법으로는 아지드 방법, 대칭 및 혼합된 무수물 방법, 현장 생성되거나 예비 형성된 활성 에스테르를 사용하는 방법, 아미노산의 우레탄 보호된 N-카르복시 무수물을 사용하는 방법 및 커플링제, 예컨대 디시클로헥실카르보디이미드(DCC), 디이소프로필카르보이미드(DIC), 1-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린(EEDQ), 피발로일 클로라이드, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(EDCI), n-프로판-포스폰산 무수물(PPA), N,N-비스(2-옥소-3-옥사조릴디닐)아미도 포스포릴 클로라이드(BOP-Cl), 브로모-트리스-피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBrop), 디페닐포스포릴 아지드 (DPPA), 카스트로 시약(BOP, PyBop), O-벤조트리아졸릴-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 염(HBTU), O-아자벤조트리아졸릴-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 염(TATU), 디에틸포스포릴 시아나이드(DEPCN), 2,5-디페닐-2,3-디히드로-3-옥소-4-히드록시티오펜 디옥사이드(슈테글리히 시약; HOTDO) 및 1,1-카르보닐디이미다졸(CDI)를 사용하여 아미드 결합을 형성하는 방법이 포함된다. 커플링제는 단독으로 사용되거나 , N,N-디메틸-4-아미노피리딘(DMAP), N-히드록시-벤조트리아졸 (HOBt), N-히드록시벤조트리아진(HOOBt), N-히드록시숙신이미드(HOSu) 또는 2-히드록시피리딘과 같은 첨가제와 함께 사용될 수 있다.

보호기의 사용이 효소 펩티드 합성에서 일반적으로 필요하지 않을지라도, 아미드 결합의 형성과 관련되지 않은 반응기의 가역성 보호는 화학적 합성에서 2가지반응물 모두에 대해서 필요하다. 화학적 펩티드 합성에 보편적으로 사용되는 통상적인 보호기 기술은 벤질옥시카르보닐(Z), t-부톡시카르보닐(Boc) 및 9-플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc) 기술이다. 각각의 경우에서 확인된 것은 사슬 연장 단위의 α-아미노기상의 보호기이다. 아미노산 보호기의 상세한 검토는 하기 참고문헌에 제공되어 있다 [참고문헌: Mueller,Methoden der organischen ChemieVol. XV/1, pp 20-906, Thieme Verlag, Stuttgart (1974)].

펩티드 사슬을 어셈블링하는데 사용되는 단위는 용액중에서, 현탁액중에서 또는 문헌[Merrifield in J. Amer. Chem. Soc. 85 (1963) 2149]에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 반응할 수 있다. 한 가지 방법에서, 펩티드는 불용성 중합성 지지체(또한, 이하에서 수지라고 한다)에 결합되는 메리필드 기술에서, Z, Boc 또는 Fmoc 보호기 기술을 사용하여 반응물 중 하나와 커플링되는 단편에 의해 또는 순차적으로 어셈블링된다. 이는 보편적으로 중합성 지지체상에서 Boc 또는 Fmoc 보호기 기술을 사용하여, C 말단에서 불용성 수지 입자에 공유적으로 결합되는 성장 펩티드 사슬로 펩티드를 순차적으로 어셈블링시키는 것을 수반한다. 이 공정은 중간 생성물을 재결정화를 필요없게 하는, 여과에 의한 반응물 및 부산물의 제거를 허용한다.

보호된 아미노기는 어떠한 적합한 중합체에나 결합될 수 있으며, 사용된 용매중에서 불용성이어야 하고 여과를 허용하는 안정한 물리적 형태를 가져야 한다. 중합체는 보호된 제 1 아미노산이 공유적으로 부착될 수 있는 작용기를 함유하여야 한다. 이러한 목적에, 다양한 중합체, 예를 들어 셀룰로오스, 폴리비닐 알코올,폴리메타크릴레이트, 술폰화된 폴리스티렌, 클로로메틸화된 스티렌/디비닐벤젠 공중합체(메리필드 수지), 4-메틸벤즈히드릴아민 수지(MBHA-수지), 페닐아세트아미도메틸 수지(팜 수지), p-벤질옥시-벤질-알코올-수지, 벤즈히드릴-아민-수지(BHA-수지), 4-(히드록시메틸)-벤조일-옥시메틸-수지, 브라이폴(Breipohl) 등의 수지 [Tetrahedron Letters 28 (1987) 565; 바켐(BACHEM) 공급], 4-(2,4-디메톡시페닐아미노메틸)페녹시 수지[노바바이오켐(Novabiochem) 공급] 또는 o-클로로트리틸-수지 [바이오헬라스(Biohellas) 공급]가 적합하다.

펩티드 합성에 적합한 용매로는 반응 조건하에서 불활성인 용매, 예를 들어 물, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸 술폭사이드(DMSO), 아세토니트릴, 디클로로메탄(DCM), 1,4-디옥산, 테트라히드로푸란(THF), N-메틸-2-피롤리돈(NMP) 및 이들 용매의 혼합물이 포함된다.

중합성 지지체상에서의 펩티드 합성은 사용된 아미노산 유도체 및 출발 물질이 용해될 수 있는 적합한 불활성 유기 용매중에서 수행될 수 있다. 특히 유용한 용매로는 예를 들어, 수지의 팽윤성으로 인해, DMF, DCM, NMP, 아세토니트릴, DMSO 및 이들의 혼합물을 들 수 있다.

합성 후에, 펩티드는 중합성 지지체로부터 제거(통상적으로는 분리라고 한다)된다. 이러한 분리가 수행되는 조건은 펩티드 합성 분야에 널리 공지되어 있으며, 부분적으로 사용되는 수지의 유형에 좌우된다. 가장 일반적으로 사용되는 분리 반응은 산 또는 팔라듐 촉매화된 반응이며, 산 촉매화된 분리 반응은 액체 무수 플루오르화수소, 무수 트리플루오로메탄술폰산, 희석 또는 농축된 트리플루오로아세트산, 및 아세트산/디클로로메탄/트리플루오로에탄올 혼합물중에서 수행된다. 팔라듐 촉매화된 분리는 모르폴린과 같은 약 염기의 존재하에 THF 또는 THF-DCM-혼합물중에서 수행될 수 있다. 일부 보호기는 또한 이들 조건하에서 분리된다.

펩티드의 부분적 탈보호는 또한 일부 유도체화 반응 이전에 필요할 수 있다. 예를 들어, N-말단에서 디알킬화된 펩티드는 용액중에서 또는 중합성 지지체상에서 적당한 N,N-디알킬아미노산을 결합시키거나, NaCNBH₃및 적당한 알데히드를 이용하여 DMF/1% 아세트산중의 수지 결합된 펩티드를 환원적으로 알킬화시키거나, 알데히드 또는 케톤 및 Pd/C의 존재하에서 용액중의 펩티드를 수소화시킴으로써 제조될 수 있다.

본원에 기술된 다양한 비아미노산 부분 뿐만 아니라, 다양한 비천연 아미노산이 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 시판되는 물질로부터 합성되거나 상업적인 공급원으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, R¹및 R²부분을 갖는 아미노산 형성 블록이 문헌[E. Wuensch, Huben Weyl,Methoden der organischen ChemieVol. XV/1, p.306, Thieme Verlag, Stuttgart (1974)] 및 이에 인용된 문헌에 따라 제조될 수 있다. 감마 또는 델타 락탐 다리를 갖는 펩티드는 적당한 락탐 다리화된 디펩티드 단위(R. Freidinger; J. Org. Chem. (1982) 104-109)를 펩티드 사슬내로 혼입시킴으로써 제조될 수 있다. 티아졸, 옥사졸, 티아졸린 또는 옥사졸린을 함유하는 디펩티드 형성 블록을 갖는 펩티드는 적당한 디펩티드 단위(P. Jouil et al., Tetrahedron Letters (1992), pp. 2087-2810; P. Wipf et al., TetrahedronLetters (1992), pp. 907-910; W. R. Tully, J. Med. Chem. (1991), p 2060-2065; U. Schmidt et al., Synthesis (1987), pp 233-236)를 펩티드 사슬내로 혼입함으로써 제조될 수 있다.

하기의 공정들은 화학식(I)의 화합물의 제조에 유용한 방법들을 예시하고자 하는 것이다. 적절한 경우, 아미노산은 공지된 3가지 문자 코드를 사용하여 축약된다. 사용되는 다른 의미들은 다음과 같다: Me₂Val=N,N-디메틸발린, MeVal=N-메틸발린, TFA=트리플루오로아세트산, Ac=아세트산, Bu=부틸, Et=에틸, Me=메틸, Bzl=벤질, Nal=3-나프틸알라닌, Cha=3-시클로헥실알라닌, Npg=네오펜틸 글리신, Abu=2-아미노부티릴, Dab=2,4-디아미노부티릴, iPr=이소프로필.

일반적인 합성 공정

I. 본 발명의 화학식(I)의 화합물은 앞서 기술된 표준 Z- 및 Boc-방법을 사용하는 보편적인 용액 합성법 또는 어플라이드 바이오시스템(APPLIED BIOSYSTEMS)에 의해 공급된 완전히 자동화된 모델 431A 합성기상에서의 표준 고체상 합성법에 의해 합성된다. 상기 장치는 Boc 및 Fmoc 보호기 기술에 대해서 상이한 합성 사이클을 이용한다.

고체상 합성의 경우에, N,N-디알킬펜타펩티드산 또는 N,N-디알킬헥사펩티드산은 고체 지지체로부터 유리되고 용액중의 상응하는 C 말단 아민으로 추가 커플링된다. BOP-Cl 및 PyBrop을 N-메틸아미노산 다음의 아미노산의 커플링을 위한 시약으로서 사용하였다. 반응 시간은 상당히 증가하였다. N 말단의 환원적 알킬화를위해서, 펩티드 수지를 N 말단에서 탈보호시킨 다음, 3 당량의 NaCNBH₃를 첨가한, DMF/1% 아세트산중의 3배 몰 초과의 알데히드 또는 케톤과 반응시켰다. 반응을 완성시킨 후에(음성적 카이저(Kaiser) 시험), 수지를 물, 이소프로판올, DMF 및 디클로로메탄으로 여러번 세척하였다.

용액 합성에서, 축합제로서 Boc 보호된 아미노산 NCA (N-3차-부틸옥시카르보닐-아미노산-N-카르복시-무수물), Z 보호된 아미노산 NCA (N-벤질옥시카르보닐)-아미노산-N-카르복시-무수물) 또는 피발로일클로라이드의 사용이 N-메틸아미노산 다음의 아미노산을 커플링하는데 있어서 가장 유용하다. 예를 들어, N 말단의 환원적 알킬화는 NaCNBH₃또는 수소, Pd/C N 을 사용하여 말단적으로 보호된 펩티드 또는 아미노산을 상응하는 알데히드 또는 케톤과 반응시킴으로써 달성될 수 있다.

a) Boc 보호기 기술에 대한 합성 사이클:

1. DCM중의 30% 트리플루오로아세트산2. DCM중의 50% 트리플루오로아세트산3. DCM 세척4. DCM중의 5% 디이소프로필에틸아민5. NMP중의 5% 디이소프로필에틸아민6. NMP 세척7. 사전활성화된 아미노산의 첨가 (NMP/DCM 중의 1당량의 HOBt 및 DCC);펩티드 커플링 (제 1 부)8. DMSO를 20 부피% 함유할때까지 반응 혼합물에 DMSO를 첨가펩티드 커플링 (제 2 부)9. 반응 혼합물에 3.8 당량의 디이소프로필에틸아민의 첨가펩티드 커플링 (제 3 부)10. DCM 세척11. 전환이 불완전한 경우, 커플링을 반복(다시 단계 6 으로 돌아감)12. DCM중의 10% 아세트산 무수물, 5% 디이소프로필에틸아민13. DCM중의 10% 아세트산 무수물14. DCM 세척15. 다시 1 로 돌아감

1×3 분1×1 분5×1 분1×1 분5×1 분1×30 분1×16 분1×7 분3×1 분1×2 분1×4 분4×1 분

BOP-Cl 및 PyBrop를 N-메틸아미노산 다음의 아미노산을 커플링하기 위한 시약으로서 사용하였다. 반응 시간이 상당히 증가하였다. 용액 합성에서, Boc 보호된 아미노산 NCA (N-3차-부틸옥시카르보닐-아미노산-N-카르복시-무수물) 또는 Z 보호된 아미노산 NCA의 사용이 상기 유형의 커플링에 가장 유용하다.

b) Fmoc 보호기 기술에 대한 합성 사이클:

1. DMF 세척2. DMF중의 20% 피페리딘3. DMF중의 20% 피페리딘4. DMF 세척5. 사전활성화된 아미노산의 첨가 (DMF 중의 5당량의 DIPEA 및 1당량의 TBTU에 의한 활성화);펩티드 커플링6. DMF 세척7. 전환이 불완전한 경우, 커플링을 반복(다시 단계 5 로 돌아감)8. DCM중의 10% 아세트산 무수물9. DCM 세척10. 다시 2 로 돌아감

1×1 분1×4 분1×16 분5×1 분1×61 분3×1 분1×8 분3×1 분

BOP-Cl 및 PyBrop를 N-메틸아미노산 다음의 아미노산을 커플링하기 위한 시약으로서 사용하였다. 반응 시간이 상당히 증가하였다.

II. N 말단의 환원적 알킬화

상기 I의 a) 및 b) 에서 제조된 펩티드 수지를 N 말단에서 탈보호시킨(Ib에서의 단계 2 내지 4 또는 Ia에서의 단계 1 내지 6) 다음, 3 당량의 NaCNBH₃를 첨가한, DMF/1% 아세트산중의 3배 몰 초과의 알데히드 또는 케톤과 반응시켰다. 반응을 완성시킨 후에(음성적 카이저 시험), 수지를 물, 이소프로판올, DMF 및 디클로로메탄으로 여러번 세척하였다.

III. Ia 및 II에서 수득된 펩티드 수지의 처리

펩티드 수지를 감압하에서 건조시키고 테플론(TEFLON) HF 장치[페닌술라 (PENINSULA)사에서 공급]의 반응 용기에 옮겼다. 스캐빈저, 예를 들어 아니솔(수지 1g당 1ml) 및, 트립토판 함유 펩티드의 경우에는 인돌성 포르밀기를 제거하기 위한 티올, 예를 들어 에탄디티올(수지 1g 당 0.5ml)을 첨가한 후, 액체 N₂로 냉각시키면서 플루오르화수소(수지 1g 당 10ml)중에서 축합시켰다. 혼합물을 0℃로 가온시키고, 이 온도에서 45분 동안 교반시켰다. 그 다음, 플루오르화수소를 감압하에서 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트로 세척하여 잔여 스캐빈저를 제거하였다. 펩티드를 30% 아세트산으로 추출하고, 여과하고, 여과물을 동결건조시켰다.

IV. Ib 및 II에서 수득된 펩티드 수지의 처리

펩티드 수지를 감압하에서 건조시킨 다음, 아미노산 조성에 따라, 하기 분리 공정 중 하나를 수행하였다 [참조: Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melbourne 1985].

분리 조건:

	TFA	스캐빈저	반응 시간
1	95%	5% 물	1.5 시간
2	95%	5% 에탄티올/아니솔 91:3)	1.5 시간

적합한 TFA 혼합물중의 펩티드 수지의 현탁액을 실온에서 주어진 시간 동안에 교반시킨 다음, 수지를 여과하고, TFA 및 DCM으로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 농축시키고, 디에틸 에테르를 첨가하여 펩티드를 침전시켰다. 얼음욕에서 냉각시킨 후에, 침전물을 여과하고, 30% 아세트산중에 취하고, 동결건조시켰다.

V. o-클로로트리틸 수지[바이오헬라스(Biohella)사에서 공급]를 사용하는 경우, 아세트산/트리플루오로에탄올/디클로로메탄(1:1:3) 혼합물중의 펩티드 수지의 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 다음, 수지를 흡입 여과시키고 분리 용액으로 철저하게 세척하였다. 조합된 여과물을 진공하에 농축시키고 물로 처리하였다. 침전된 고체를 여과 또는 원심분리에 의해 분리하고, 디에틸 에테르로 세척하고 감압하에서 건조시켰다.

VI. 펩티드의 정제 및 특징화

겔 크로마토그래피(SEPHADEX G-10, G-15/10% HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH), 중간 압력 크로마토그래피(정지상: HD-SIL C-18, 20-45 미크론, 100 옹스트롬; 이동상: A=0.1% TFA/MeOH, B=0.1% TFA/물을 갖는 구배) 또는 제조용 HPLC(정지상: 물 Delta-Pak C-18, 15 미크론, 100 옹스트롬; 이동상: A=0.1% TFA/MeOH, B=0.1% TFA/물을 갖는 구배)로 정제를 수행하였다.

생성된 생성물의 순도를 분석용 HPLC(정지상: 100, 2.1mm VYDAC C-18, 51, 300 옹스트롬; 이동상: 아세틸로니트릴-물 구배, 0.1% TFA로 완충됨, 40℃)로 결정하였다.

아미노산 분석 및 급속 원자 충격 질량 분광학으로 특징화하였다.

구체적인 합성 방법

실시예 1A: N,N-디메틸-Val-Val-N-메틸-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH₂

상기 Ib에서와 같이, 0.84mmol의 배치 크기에 상응하는 Fmoc-RINK-수지(치환 0.46mmol/g) 1.98g을 1.26mmol의 하기 물질 각각과 반응시켰다:

N-메틸 아미노산 다음의 아미노산을 커플링제로서 PyBrop을 이용하여 커플링시켰다. 반복되는 합성 사이클을 완성시킨 후에, 펩티드 수지를 N 말단에서 탈보호시키고(Ib에서 단계 2 내지 4), II에서와 같이 포름알데히드 수용액과 추가 반응시킨 다음, 감압하에 건조시켰다. 생성된 수지를 IV에서와 같이 TFA 분리 공정으로 처리하였다. 미정제 생성물(590mg)을 겔 여과(SEPHADEX-LH-20)로 정제하였다. 수득량은 295mg 이었다.

실시예 1A:

실시예 1을 보편적인 용액상 방법을 통해 제조할 수 있다. N,N-디메틸-Val-Val-N-메틸-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH₂및 이것의 관련된 중간체의 합성법을 하기에 기술하였다.

a) Z-MeVal-Pro-OMe

Z-MeVal-OH 66.25g(250mmol)을 건조 디클로로메탄 250ml중에 용해시켰다. 트리에틸아민 36.41ml(262.5mmol)의 첨가 후에, 반응 혼합물을 -25℃로 냉각시키고, 피발로일 클로라이드 32.37ml(262.5mmol)을 첨가하였다. 2.5시간 동안 교반시킨 후에, 0℃에서 트리에틸아민 36.41ml(262.5mmol)로 중화시킨, 디클로로메탄250ml 중의 H-Pro-OMe-HCl 41.89g(250mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켰다. 잔여물(91.24g)을 밤새 석유 에테르와 함께 교반시키고, 여과하였다. 생성물 62.3g을 수득하였다.

b) H-MeVal-Pro-OMe

Z-MeVal-Pro-OMe 48.9g(130mmol)을 메탄올 490ml중에 용해시켰다. 진한 염산 10.9ml(130mmol) 및 10% 팔라듐/목탄 2.43g을 첨가한 후에, 반응 혼합물을 수소화시켰다. 여과하고, 건조될때까지 증발시켜 생성물 36.43g을 수득하였다.

c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe

H-MeVal-Pro-OMe 18.1g(65mmol), Z-Val-N-카르복시 무수물 21.6g(78mmol) 및 디이소프로필에틸아민 22.8ml(130mmol)을 DMF 110ml중에서 40℃에서 2일 동안 교반시켰다. DMF를 증발시킨 후에, 디클로로메탄을 첨가하고, 유기상을 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액으로 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켰다. 생성물(29.3g)을 점성 오일로서 수득하였다.

d) H-Val-MeVal-Pro-OMe

Z-Val-MeVal-Pro-OMe 29.3g(61.6mmol)을 메탄올 230ml중에 용해시켰다. 10% 팔라듐/목탄 1.15g을 첨가한 후에, 반응 혼합물을 수소화시켰다. 여과하고, 건조될때까지 증발시켜 생성물 21.96g을 수득하였다.

e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe

Z-Val-OH 15.29g(61mmol) 및 H-Val-MeVal-Pro-OMe 21.96g(61mmol)을 건조 디클로로메탄 610ml중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. N-메틸모르폴린 8.16mol(73.2mmol), HOBt 2.77g(20.3mmol) 및 EDCI 11.74g(61mmol)의 첨가 후에, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시키고, 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켜 생성물 31.96g을 수득하였다.

f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH

Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe 31.96g(57mmol)을 메탄올 250ml중에 용해시켰다. 1N LiOH 용액 102.6ml를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물 500ml를 첨가한 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 건조될때까지 증발시켜 생성물 30.62g을 백색 고체로서 수득하였다.

g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH₂

Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH 25g(43.3mmol) 및 H-Pro-Val-Phe-NH₂15.59g (43.3mmol)을 건조 디클로로메탄 430ml중에 현탁시켰다. 0℃로 냉각시킨 후에, N-메틸모르폴린 5.81ml(52mmol), HOBt 1.97g(15mmol) 및 EDCI 8.33g(43.3mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔여물을 디클로로메탄 640ml중에 용해시키고, 포화된 NaHCO₃수용액(4×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켜, 생성물 33.04g을 수득하였다. 미정제 생성물을 20% MeOH/헥산을 갖는 실리카 겔 칼럼상에서 크로마토그래피로 정제시켰다. 원하는 생성물 18.32g을 수득하였다.

h) N,N-디메틸-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH₂

Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH₂18.32g을 메탄올 80ml중에 용해시켰다. 10% 팔라듐/탄소 0.4g을 질소 분위하에서 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 수소화시켰다. 37% 포름알데히드 수용액 6.22ml(81.24mmol)을 첨가한 후에, 5시간 동안 계속해서 수소화시켰다. 여과하고, 용매를 증발시켜, 미정제 생성물 15.6g을 수득하였다. 물중에 펩티드를 용해시키고, pH를 2로 조정하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 3회 추출함으로써 추가 정제하였다. 그 다음, 수성상을 pH 8 내지 9로 조정하고, 에틸 아세테이트로 4회 추출하였다. 유기상을 물로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하고 증발시켜, 백색 분말로서 정제된 생성물 11.3g을 수득하였다. 화합물을 급속 원자 충격 질량 분광학([M+H]⁺=797)로 특징화하였다.

실시예 2A: N,N-디메틸-Val-Val-NMe-Val-Pro-{1-[티아졸-(2)-일]-2-페닐}-에틸아민드

상기 Ib에서와 같이, 3mmol의 배치 크기에 상응하는 Fmoc-Pro-p-알콕시벤질-알코올-수지(치환 0.73mmol/g) 4.11g을 4.5mmol의 하기 물질 각각과 반응시켰다:

이 경우에는 반응 시간을 증가시키면서, N-메틸 아미노산 다음의 아미노산을 PyBrop 또는 Bop-Cl을 사용하여 이중 커플링 반응시켰다. 합성을 완성시킨 후에, 펩티드 수지를 N 말단에서 탈보호시키고(Ib에서 단계 2 내지 4), II에서와 같이 포름알데히드 수용액과 추가 반응시킨 다음, 감압하에 건조시켰다. 이러한 방식으로 수득된 수지를 IV에서와 같이 TFA 분리 공정으로 처리하였다. 미정제 생성물(750mg)을 다음 커플링에 바로 사용하였다. 실온에서 2일 동안 DMF중의 DIPEA 192㎕를 첨가하면서 상기 화합물 100mg을 (S)-2-[1-아미노-2-페닐에틸]티아졸 45mg 및 PyBop 230mg과 반응시켰다. 반응 혼합물을 겔 크로마토그래피 (SEPHADEX-LH-20, 메탄올)로 정제하고, 생성물 분획을 조합하였다. 생성물 83mg을 수득하였다.

실시예 1B:

Me₂Val-Val-MeVal-pro-Pro-NHCH(CH₃)₂

a) Z-MeVal-Pro-OMe

Z-MeVal-OH 66.25g(250mmol)을 건조 디클로로메탄 250ml중에 용해시켰다. 트리에틸아민 36.41ml(262.5mmol)의 첨가 후에, 반응 혼합물을 -25℃로 냉각시키고, 피발로일 클로라이드 32.37ml(262.5mmol)을 첨가하였다. 2.5시간 동안 교반시킨 후에, 0℃에서 트리에틸아민 36.41ml(262.5mmol)로 중화시킨, 디클로로메탄 250ml 중의 H-Pro-OMe-HCl 41.89g(250mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. -25℃에서 2시간 동안 및 실온에서 밤새 계속해서 교반시켰다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켰다. 잔여물(91.24g)을 밤새 석유 에테르와 함께 교반시키고, 여과하였다. 생성물 62.3g을 수득하였다.

b) H-MeVal-Pro-OMe

c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe

d) H-Val-MeVal-Pro-OMe

e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe

f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH

Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe 31.96g(57mmol)을 메탄올 250ml중에 용해시켰다. 1N LiOH 용액 102.6ml를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물 500ml를 첨가한 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 세척하고, 0℃에서 pH를 2로 조정하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 건조될때까지 증발시켜 생성물 30.62g을 백색 고체로서 수득하였다.

g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NHCH(CH₃)₂

Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH 2g(3.35mmol) 및 H-Pro-NHCH(CH₃)₂0.664g (3.35mmol)을 건조 디클로로메탄 34ml중에 현탁시켰다. 0℃로 냉각시킨 후에, N-메틸모르폴린 1.35ml(12.1mmol), HOBt 0.114g(0.84mmol) 및 EDCI 0.645g(3.35mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 디클로로메탄 80ml를 첨가하고, 유기상을 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액(1×)으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켜, 생성물 1.96g을 수득하였으며, 이 생성물을 추가 정제하지 않고서 다음 반응에 사용하였다.

h) Me₂-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH₃)₂

Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH₃)₂1.96g을 메탄올 11ml중에 용해시켰다. 10% 팔라듐/탄소 0.054g을 질소 분위하에서 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 수소화시켰다. 37% 포름알데히드 수용액 0.86ml(11.24mmol) 및 10% 팔라듐/탄소 0.281g을 첨가한 후에, 5시간 동안 계속해서 수소화시켰다. 여과하고, 용매를 증발시켜, 미정제 생성물 2.77g을 수득하였다. 물중에 펩티드를 용해시키고, pH를 2로 조정하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 3회 추출함으로써 추가 정제하였다. 그 다음, 수성상을 pH 8 내지 9로 조정하고, 에틸 아세테이트로 4회 추출하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하고 증발시켜, 백색 기포로서 정제된 생성물 1.37g을 수득하였다. 화합물을 중간 압력 액체 크로마토그래피를 사용하여 추가 정제하였다(10분 동안 10 내지 50% A; 320분 동안 50 내지 90% A). 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 동결건조시키고, 물중에 재용해시키고, 1N LiOH를 이용하여 pH를 9로 조정하였다. 디클로로메탄으로 추출시킨 후에, 유기상을 황산 나트륨에 대해 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켰다. 동결 건조하여 순수 생성물 500mg을 수득하였으며, 급속 원자 충격 질량 분광학 ([M+H]⁺=593)으로 특징화하였다.

실시예 2B

Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH₃)₃

a) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH₃)₃

Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH 2g(3.35mmol) 및 H-Pro-NHC(CH₃)₃0.692g (3.35mmol)을 건조 디클로로메탄 34ml중에 용해시켰다. 0℃로 냉각시킨 후에, N-메틸모르폴린 1.35ml(12.1mmol), HOBt 0.114g(0.84mmol) 및 EDCI 0.645g(3.35mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 디클로로메탄 80ml를 첨가하고, 유기상을 포화된 NaHCO₃수용액(3×), 물(1×), 5% 시트르산(3×) 및 포화된 NaCl 용액(1×)으로 철저하게 세척하였다. 유기상을 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켜, 생성물 1.8g을 수득하였으며, 이 생성물을 추가 정제하지 않고서 다음 반응에 사용하였다.

b) Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH₃)₃

Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH₃)₃1.8g을 메탄올 10ml중에 용해시켰다. 10% 팔라듐/탄소 0.045g을 질소 분위하에서 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 수소화시켰다. 37% 포름알데히드 수용액 0.86ml(11.24mmol) 및 10% 팔라듐/탄소 0.252g을 첨가한 후에, 5시간 동안 계속해서 수소화시켰다. 여과하고, 용매를 증발시켜, 미정제 생성물 1.82g을 수득하였다. 화합물을 중간 압력 액체 크로마토그래피를 사용하여 추가 정제하였다(10분 동안 10 내지 50% A; 320분 동안 50 내지 90% A). 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 동결건조시키고, 물중에 재용해시키고, 1N LiOH를 이용하여 pH를 9로 조정하였다. 디클로로메탄으로 추출시킨 후에, 유기상을 황산 나트륨에 대해 건조시키고, 여과시키고, 건조될때까지 증발시켰다. 동결 건조하여 순수 생성물 547mg을 수득하였으며, 급속 원자 충격 질량 분광학 ([M+H]⁺=607)으로 특징화하였다.

생물학적 활성의 평가

생체내 방법

도 1에서 화학식 ii로 지정된, 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체를 콜라겐 유도 관절염(Collagen induced arthritis: CIA)으로서 공지된 류마티스양 관절염에 대한 표준 동물 모델을 사용하여 시험하였다 [참조: Banerjee, et al., The Journal of Immunology 142: 2237-2243 (1989)]. CIA는 염증성 활막염 병인의 진찰 및 잠재적인 신규 치료학적 중재의 연구를 위한 생체내 시스템으로서 작용하는류마티스양 관절염의 유용한 동물 모델이다. 다른 적합한 모델이 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 예를 들어, 래트에서의 애주번트 유도된 관절염(Adjuvant Induced Arthritis)이 있다 [참조: Ward, et al., Arthritis Rheum. (1962) 5:557-564].

마우스에서의 콜라겐 유도 관절염(CIA)은 완전한 프로인트 애주번트중에 에멀션화된 병아리 콜라겐 유형 II의 피내 주사에 의해 유도되었으며, 면역후 26일째에 또는 26일째 정도에 보편적으로 발생하는 증상이 시작되었다.

일반적으로, 류마티스양 관절염의 억제를 허용되는 수준으로 제공하는 것으로 보이는 투여 섭생법이 적합하다. 허용되는 약물 투여 방법은 당업자들에게 널리 공지된 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 화학식(I)의 돌라스타틴-15 유도체는 앞서 기술된 바와 같이, 류마티스양 관절염의 치료에 유용한 것으로 공지된 다른 약물과 조합하여 투여될 수 있다.

실시예 3: 콜라겐 유도 관절염 - 예방 모델

콜라겐 유도 관절염에 걸리기 쉬운 종의 마우스를 모든 실험에서 사용하였다 [The FASEB, 2: 2950 (1988)]. 0 일째에 완전한 프로인트 애주번트중의 병아리 콜라겐 유형 II 100㎍을 사용하여 마우스를 피내로 면역화시켰다.

3개의 처리 군을 평가하였으며, 처리 군은 식염수 처리된 동물(대조군), 덱사메타손 처리된 동물(표준 치료) 및 화합물 ii가 처리된 동물로 구성된다. 처리는 모든 군에 대해서 증상이 나타나기 바로 전 면역후 26일째에 시작하였으며, 면역후 35일 째에 마쳤다. 덱사메타손은 5mg/kg/day의 투여량으로 복막내 주사하였고, 화합물 ii는 비이클로서 식염수를 사용하여 50mg/kg/day의 투여량으로, 위관 영양법에 의해 경구적으로 제공하였으며, 식염수는 대조군으로서 하루에 한번 경구적으로 투여하였다.

평균 관절염 스코어:

관절염 심각도의 정도를 각각의 발을 매일 관찰함으로써 기록하였다. 0 내지 5의 정수를 각각의 발에서의 홍반, 종기, 기형 및 관절 경직의 수준을 나타내는데 사용하였으며, 0이 정상이고 5가 최대를 나타내는 것이다. 4개 발 모두의 합은 평균 관절염 스코어를 나타내며, 최대 스코어는 20 이다. 그 결과를 도 2에 그래프로 도시하였다.

그 결과는 화합물 ii로 처리된 동물 중 어느 것도 처리를 마친 후 6일째까지 류마티스양 관절염을 나타내지 않은 것을 제시하고 있다. 그러나, 덱사메타손으로 처리된 동물들에서는 처리를 마치자 마자 바로 류마티스양 관절염이 나타났다.

실시예 4: 콜라겐 유도 관절염 - 치료학적 모델

DBA-1 마우스를 모든 실험에 사용하였다. 0 일째에 병아리 콜라겐 유형 II 100㎍을 사용하여 마우스를 피내로 면역화시켰다. 증상은 면역후 35일째경에 나타났다.

3개의 처리 군을 평가하였으며, 처리 군은 식염수 처리된 동물(대조군), 덱사메타손 처리된 동물(표준 치료) 및 화합물 ii가 처리된 동물로 구성된다. 모든 동물의 관절염 스코어가 3 내지 4에 도달한 경우에, 치료는 모든 군에 대해서 증상이 나타나기 바로 전 면역후 48일째에 시작하였다. 3개의 군에서 마우스의 평균관절염 스코어는 처리 시작시에 균등하였다. 동물을 21일 동안 처리하였다. 덱사메타손은 5mg/kg/day의 투여량으로 복막내 주사하였고, 화합물 ii는 비이클로서 식염수를 사용하여 50mg/kg/day의 투여량으로, 위관 영양법에 의해 경구적으로 제공하였으며, 비이클만을 대조군으로서 위관 영양법으로(0.25ml) 투여하였다.

평균 관절염 스코어:

관절염 심각도의 정도를 각각의 발을 매일 관찰함으로써 기록하였다. 0 내지 5의 정수를 각각의 발에서의 홍반, 종기, 기형 및 관절 경직의 수준을 나타내는데 사용하였으며, 0이 정상이고 5가 최대를 나타내는 것이다. 4개 발 모두의 합은 평균 관절염 스코어를 나타내며, 최대 스코어는 20 이다. 그 결과를 도 3에 그래프로 도시하였다.

그 결과는 화합물 ii로 처리된 동물에게서 대조군에 비해 평균 관절염 스코어가 감소하는 것으로 제시하고 있다 (만-휘트니 시험에 의해 결정된, 0.01 내지 0.05 미만의 P 값).

조직병리학적 결과:

각각의 치료군으로부터 5마리의 마우스를 면역후 71일째에 부검하였고, 각각의 마우스의 모든 네발의 관절상에서 조직병리학저 연구를 수행하였다. 활액성 염증 및 영향받은 관절의 연골 손상을 0 내지 3의 등급으로 분류하였다. 그 결과를 도 4에 도시하였다. 화합물 ii 및 덱사메타손으로 처리한 경우 비이클로 처리한 동물에 비해, 활막염 및 연골 관련 질환이 상당히 억제되었다..

실시예 5: 애드주번트 유도 관절염 래트 - 예방 모델

수컷 루이스 래트를 0일째에 불완전한 프로인트 애드주번트중의 열 치사된 M. Tuberculosis 1.2mg으로 피내 면역화시켰다. 처리 군(군당 10마리의 동물)은 식염수 처리된 동물(대조군), 메토트렉세이트 처리된 동물(표준 치료)(1mg/kg/day) 및 화합물 ii를 각각 10, 5 및 2.5mg/kg/day 처리한 3개의 군으로 구성되었다. 처리는 면역화한 날(0일째)에 시작하였으며, 전체 12회의 투여 동안 2일에 한번씩 계속하였다. 23일째에 실험을 종결지었으며, 그 결과는 화합물 ii가 투여 정도에 따라 관절염의 증상(염증된 사지)의 발병을 예방하는 것을 제시하였다. 즉, 10mg/kg의 화합물 ii를 처리한 동물에서는 질병이 전혀 나타나지 않은 반면에(0/10), 5mg/kg의 화합물 ii를 처리한 경우에는 10마리중 2마리(2/10) 동물에서, 그리고 2.5mg/kg의 화합물 ii를 처리한 경우에는 10마리중 7마리(7/10) 동물에서 질병이 나타났다. 대조군에서는, 10마리중 7마리 동물(7/10)에서 질병이 나타났다. 메토트렉세이트는 예상한 바와 같이 관절염을 예방하였다.

하기 화합물을 제조하였으며, 이들은 실시예에 따라 제조될 수 있다:

합성된 신규 화합물의 MS 특징화에 대한 예를 하기에 기재하였다:

실시예 급속 원자 충격 MS

분석

화학식(I)의 설명에서 사용된 부호는 하기의 의미를 갖는다:

Xfk: N-에틸발린

Xfl: N-메틸-3-3차-부틸알라닌

균등물

당업자들은 일상적인 실험을 이용하여 본원에 기술된 본 발명의 구체적인 구체예에 대한 여러가지 균등물을 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 하기 청구범위내에 포함되는 것이다.

Claims

화학식(I)의 화합물 및 이들의 생리학적으로 내성인 산과의 염을 치료학적 유효량으로 포유류에게 투여하는 것을 포함하는, 포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하는 방법:

R¹R²N-CHX-CO-A-B-D-(E)_s-(F)_t-(G)_u-K (I)

R¹은 알킬, 시클로알킬, 알킬술포닐, 플루오로알킬, 또는 아미노술포닐이고;

R²는 수소, 알킬, 플루오로알킬, 또는 시클로알킬이고;

R¹-N-R²는 함께 피롤리디노 또는 피페리디노 잔기일 수 있고;

A는 발릴, 이소루실, 루실, 알로-이소루실, 2,2-디메틸글리실, 2-시클로프로필글리실, 2-시클로펜틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, 2-3차-부틸글리실, 3-시클로헥실알라닐, 2-에틸글리실, 2-시클로헥실글리실, 노르루실 또는 노르발릴 잔기이고;

B는 N-알킬-발릴, -노르발릴, -루실, -이소루실, -2-3차-부틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, -2-에틸글리실, -2-시클로프로필글리실, -2-시클로펜틸글리실, -노르루실 또는 -2-시클로헥실글리실 잔기이고;

D는 프로필, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

E는 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플로오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

F 및 G는 독립적으로 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 1-아미노펜틸-1-카르보닐, 발릴, 2-3차-부틸글리실, 이소루실, 루실, 3-시클로헥실알라닐, 페닐알라닐, N-메틸페닐알라닐, 테트라히드로이소퀴놀릴-2-히스티딜, 1-아미노인딜-1-카르보닐, 3-피리딜알라닐, 2-시클로헥실글리실, 노르루실, 노르발릴, 네오펜틸글리실, 트리오토파닐, 글리실, 2,2-디메틸글리실 알라닐, β-알라닐 및 3-나프틸알라닐 잔기이고;

X는 수소, 알킬, 시클로알킬, -CH₂-시클로헥실 또는 아릴알킬이고;

s, t 및 u는 독립적으로 0 또는 1 이며;

K는 히드록시, 알콕시, 페녹시, 벤질옥시 또는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분이다.
제 1항에 있어서, 포유류가 사람임을 특징으로 하는 방법.
제 2항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, K가 하기 화학식을 갖는 치환된아미노산임을 특징으로 하는 방법:

R⁵-N-R⁶

상기식에서,

R⁵는 수소, 히드록시, 또는 C_1-7알콕시, 벤질옥시, 페닐옥시, C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬(하나 이상의 불소 원자로 치환될 수 있다), C_1-12선형 또는 분지된 알킬, C_3-10-시클로알킬, 또는 벤질(3개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다)이고;

R⁶는 수소, C_1-12선형 또는 분지된 알킬(하나 이상의 플루오로 원자로 치환될 수 있다), 또는 C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬, C_3-10-시클로알킬, -(CH₂)_v-C_3-7-시클로알킬(v=0, 1, 2 또는 3), 노르에페드릴, 노르슈도에페드릴, 퀴놀릴, 피라질, -CH₂-벤즈이미다졸릴, (1)-아다만틸, (2)-아다만틸, -CH₂-아다만틸, 알파-메틸-벤질, 알파-디메틸벤질, -(CH₂)_v-페닐(v=0, 1, 2 또는 3; 2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, 고리 시스템을 형성할 수 있는 C_1-4-알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), 또는 -(CH₂)_m-나프틸(m=0 또는 1); -(CH₂)_w-벤즈히드릴(w=0, 1 또는 2); 비페닐, 피콜릴, 벤조티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조피라졸릴, 벤즈옥사졸릴 또는 -(CH₂)_m-플루오레닐(m=0 또는 1); 피리미딜 또는 -(CH₂)_m-인다졸(m=0 또는 1); -(CH₂CH₂O)_y-CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), (CH₂CH₂O)_y-CH₂CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), NH-C₆H₅(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), -NCH₃-C₆H₅, -NH-CH₂-C₆H₅, -NCH₃-CH₂-C₆H₅또는 5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 티오메틸, 티오에틸, C_3-6시클로알킬, -CH₂-COOEt, 헤테로 고리와 함께 이중 고리 시스템을 형성하는 C_3-4알킬렌기이다), 페닐, 또는 -CHR⁷-5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 시아노, 할로겐, COOMe, COOEt, COOiPr, CONH₂, C_1-4-알킬, C_1-4-알콕시, 페닐, 벤질, 나프틸, 또는 C_1-7-알킬술포닐일 수 있으며, 상기에서 R⁷은 수소, 선형 또는 분지된 C_1-5알킬, 벤질이거나; R⁷및 R⁵는 함께 -(CH₂)₃- 또는 -(CH₂)₄- 기를 형성할 수 있다)이다.
제 3항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 -C(CH₃)₃(또한, 3차-부틸로서 언급된다);(또한, 1,1-디메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-메틸-1-에틸프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-메틸-2,2-디메틸-프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-에틸-2-메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-이소프로필-2-메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₂-CH(CH₃)₂(또한, 1,1-디메틸-2-메틸프로필로서 언급된다); CH(CH₃)₂(또한, 이소프로필로서 언급된다); -CH(CH₃)CH₂CH₃, 2차-부틸 [(S) 또는 (R)]; 또는 -CH(CH₃)CH(CH₃)₂(또한, 1,2-디메틸프로필로서 언급된다)로 이루어진 1가 라디칼의 군으로부터 선택되는 C_1-12선형 또는 분지된 알킬기이다)를 갖는 치환된 아미노산 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 4항에 있어서, 1가 라디칼이 -C(CH₃)₃(3차-부틸)임을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 (CH₂)v-페닐(v=1) 및 α,α-디메틸벤질로 이루어진 1가 라디칼의 군으로부터 선택된다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 히드록시알킬이다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서, R⁶가 3-히드록시-1,1-디메틸프로필임을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 (1)- 또는 (2)-아다만틸; 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-메틸시클로펜틸, 1-메틸 시클로헥실 및 [3.3.0]옥타-1-일로 이루어진 군으로부터 선택되는 C₃-C₁₀시클로알킬기이다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 4항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이고; R⁵가 수소이며, R⁶가 3차 부틸임을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이고; R⁵가 벤질이며, R⁶가 수소임을 특징으로 하는 방법.
a)치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 및 이들의 생리학적으로 내성인 산과의 염; 및

b) 치료학적 유효량의, 비스테로이드계 항염증 제제, 유기 금 유도체, D-펜실아민, 4-아미노퀴놀린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 시클로스포린,맥관형성 억제제, T 세포에 대한 단클론성 항체, 유착 분자에 대한 단클론성 항체, 시토킨 및 성장 인자에 대한 단클론성 항체, TNFR-IgG, IL-1 수용체 길항제 ICE 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제 2 항관절염 약제를 포함하는 약제학적 조성물을 포유류에게 투여하는 것을 포함하는, 포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하는 방법:

R¹R²N-CHX-CO-A-B-D-(E)_s-(F)_t-(G)_u-K (I)

R¹은 알킬, 시클로알킬, 알킬술포닐, 플루오로알킬, 또는 아미노술포닐이고;

R²는 수소, 알킬, 플루오로알킬, 또는 시클로알킬이고;

R¹-N-R²는 함께 피롤리디노 또는 피페리디노 잔기일 수 있고;

A는 발릴, 이소루실, 루실, 알로-이소루실, 2,2-디메틸글리실, 2-시클로프로필글리실, 2-시클로펜틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, 2-3차-부틸글리실, 3-시클로헥실알라닐, 2-에틸글리실, 2-시클로헥실글리실, 노르루실 또는 노르발릴 잔기이고;

B는 N-알킬-발릴, -노르발릴, -루실, -이소루실, -2-3차-부틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, -2-에틸글리실, -2-시클로프로필글리실, -2-시클로펜틸글리실, -노르루실 또는 -2-시클로헥실글리실 잔기이고;

D는 프로필, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

E는 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플로오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

F 및 G는 독립적으로 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 1-아미노펜틸-1-카르보닐, 발릴, 2-3차-부틸글리실, 이소루실, 루실, 3-시클로헥실알라닐, 페닐알라닐, N-메틸페닐알라닐, 테트라히드로이소퀴놀릴-2-히스티딜, 1-아미노인딜-1-카르보닐, 3-피리딜알라닐, 2-시클로헥실글리실, 노르루실, 노르발릴, 네오펜틸글리실, 트리오토파닐, 글리실, 2,2-디메틸글리실 알라닐, β-알라닐 및 3-나프틸알라닐 잔기이고;

X는 수소, 알킬, 시클로알킬, -CH₂-시클로헥실 또는 아릴알킬이고;

s, t 및 u는 독립적으로 0 또는 1 이며;

K는 히드록시, 알콕시, 페녹시, 벤질옥시 또는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분이다.
포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하기 위한 약제의 제조에의 화학식(I)의 화합물 및 이들의 생리학적으로 내성인 산과의 염의 용도:

R¹R²N-CHX-CO-A-B-D-(E)_s-(F)_t-(G)_u-K (I)

R¹은 알킬, 시클로알킬, 알킬술포닐, 플루오로알킬, 또는 아미노술포닐이고;

R²는 수소, 알킬, 플루오로알킬, 또는 시클로알킬이고;

R¹-N-R²는 함께 피롤리디노 또는 피페리디노 잔기일 수 있고;

A는 발릴, 이소루실, 루실, 알로-이소루실, 2,2-디메틸글리실, 2-시클로프로필글리실, 2-시클로펜틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, 2-3차-부틸글리실, 3-시클로헥실알라닐, 2-에틸글리실, 2-시클로헥실글리실, 노르루실 또는 노르발릴 잔기이고;

B는 N-알킬-발릴, -노르발릴, -루실, -이소루실, -2-3차-부틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, -2-에틸글리실, -2-시클로프로필글리실, -2-시클로펜틸글리실, -노르루실 또는 -2-시클로헥실글리실 잔기이고;

D는 프로필, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

E는 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플로오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

F 및 G는 독립적으로 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 1-아미노펜틸-1-카르보닐, 발릴, 2-3차-부틸글리실, 이소루실, 루실, 3-시클로헥실알라닐, 페닐알라닐, N-메틸페닐알라닐, 테트라히드로이소퀴놀릴-2-히스티딜, 1-아미노인딜-1-카르보닐, 3-피리딜알라닐, 2-시클로헥실글리실, 노르루실, 노르발릴, 네오펜틸글리실, 트리오토파닐, 글리실, 2,2-디메틸글리실 알라닐, β-알라닐 및 3-나프틸알라닐 잔기이고;

X는 수소, 알킬, 시클로알킬, -CH₂-시클로헥실 또는 아릴알킬이고;

s, t 및 u는 독립적으로 0 또는 1 이며;

K는 히드록시, 알콕시, 페녹시, 벤질옥시 또는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분이다.
포유류에게서 류마티스양 관절염을 치료하기 위한 치료학적 조성물을 제조하는 방법으로서, 조성물의 필수 성분으로서 제 13항에 따른 화학식(I)의 화합물을 사용함을 특징으로 하는 방법.
제 13항 또는 제 14항에 있어서, 포유류가 사람임을 특징으로 하는 방법.
제 13항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, K가 하기 화학식을 갖는 치환된 아미노산임을 특징으로 하는 방법:

R⁵-N-R⁶

상기식에서,

R⁵는 수소, 히드록시, 또는 C_1-7알콕시, 벤질옥시, 페닐옥시, C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬(하나 이상의 불소 원자로 치환될 수 있다), C_1-12선형 또는 분지된 알킬, C_3-10-시클로알킬, 또는 벤질(3개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다)이고;

R⁶는 수소, C_1-12선형 또는 분지된 알킬(하나 이상의 플루오로 원자로 치환될 수 있다), 또는 C_1-12선형 또는 분지된 히드록시알킬, C_3-10-시클로알킬, -(CH₂)_v-C_3-7-시클로알킬(v=0, 1, 2 또는 3), 노르에페드릴, 노르슈도에페드릴, 퀴놀릴, 피라질, -CH₂-벤즈이미다졸릴, (1)-아다만틸, (2)-아다만틸, -CH₂-아다만틸, 알파-메틸-벤질, 알파-디메틸벤질, -(CH₂)_v-페닐(v=0, 1, 2 또는 3; 2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 페녹시, 벤즈옥시, 할로겐, 고리 시스템을 형성할 수 있는 C_1-4-알킬, 시아노, 히드록시, N(CH₃)₂, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), 또는 -(CH₂)_m-나프틸(m=0 또는 1); -(CH₂)_w-벤즈히드릴(w=0, 1 또는 2); 비페닐, 피콜릴, 벤조티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조피라졸릴, 벤즈옥사졸릴 또는 -(CH₂)_m-플루오레닐(m=0 또는 1); 피리미딜 또는 -(CH₂)_m-인다졸(m=0 또는 1); -(CH₂CH₂O)_y-CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), (CH₂CH₂O)_y-CH₂CH₃(y=0, 1, 2, 3, 4 또는 5), NH-C₆H₅(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, C_1-7알킬술포닐, C_1-4알콕시, 할로겐, C_1-4알킬, 시아노, 히드록시, COOMe, COOEt, COOiPr 또는 COONH₂일 수 있다), -NCH₃-C₆H₅, -NH-CH₂-C₆H₅, -NCH₃-CH₂-C₆H₅또는 5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 티오메틸, 티오에틸, C_3-6시클로알킬, -CH₂-COOEt, 헤테로 고리와 함께 이중 고리 시스템을 형성하는 C_3-4알킬렌기이다), 페닐, 또는 -CHR⁷-5원 헤테로아릴(2개 이하의 치환기로 치환될 수 있으며, 상기 치환기는 독립적으로 CF₃, 니트로, 시아노, 할로겐, COOMe, COOEt, COOiPr, CONH₂, C_1-4-알킬, C_1-4-알콕시, 페닐, 벤질, 나프틸, 또는 C_1-7-알킬술포닐일 수 있으며, 상기에서 R⁷은 수소, 선형 또는 분지된 C_1-5알킬, 벤질이거나; R⁷및 R⁵는 함께 -(CH₂)₃- 또는 -(CH₂)₄- 기를 형성할 수 있다)이다.
제 16항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 -C(CH₃)₃(또한, 3차-부틸로서 언급된다);(또한, 1,1-디메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-메틸-1-에틸프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-메틸-2,2-디메틸-프로필로서 언급된다);(또한, (S)- 또는 (R)-1-에틸-2-메틸프로필로서 언급된다);(또한, 1-이소프로필-2-메틸프로필로서 언급된다); -C(CH₃)₂-CH(CH₃)₂(또한, 1,1-디메틸-2-메틸프로필로서 언급된다); CH(CH₃)₂(또한, 이소프로필로서 언급된다); -CH(CH₃)CH₂CH₃, 2차-부틸 [(S) 또는 (R)]; 또는 -CH(CH₃)CH(CH₃)₂(또한, 1,2-디메틸프로필로서 언급된다)로 이루어진 1가 라디칼의 군으로부터 선택되는 C_1-12선형 또는 분지된 알킬기이다)를 갖는 치환된 아미노산 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 17항에 있어서, 1가 라디칼이 -C(CH₃)₃(3차-부틸)임을 특징으로 하는 방법.
제 16항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 (CH₂)v-페닐(v=1) 및 α,α-디메틸벤질로 이루어진 1가 라디칼의 군으로부터 선택된다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 16항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 1-이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 C₁-C₁₂선형 또는 분지된 히드록시알킬이다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 20항에 있어서, R⁶가 3-히드록시-1,1-디메틸프로필임을 특징으로 하는 방법.
제 16항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸 또는 에틸이고; X가 이소프로필, 2차 부틸 또는 3차 부틸이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; B가 N-메틸발릴, 2-에틸글리실, 이소루실 또는 2-3차-부틸글리실이고; D가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐 또는 3,4-데히드로프롤릴이고; E가 프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 호모프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴 또는 히드록시프롤릴이며; K가 화학식 R⁵-N-R⁶(여기에서, R⁵는 수소 또는 C₁-C₄-알콕시이며, R⁶는 (1)- 또는 (2)-아다만틸; 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-메틸시클로펜틸, 1-메틸 시클로헥실 및 [3.3.0]옥타-1-일로 이루어진 군으로부터 선택되는 C₃-C₁₀시클로알킬기이다)을 갖는 치환된 아미노 부분임을 특징으로 하는 방법.
제 17항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이고; R⁵가 수소이며, R⁶가 3차 부틸임을 특징으로 하는 방법.
제 17항에 있어서, 화학식(I)의 화합물에서, R¹및 R²가 각각 메틸이고; X가 이소프로필이고; s가 1이고; t 및 u가 각각 0 이고; A가 발릴이고; B가 N-메틸발릴이고; D가 프롤릴이고; E가 프롤릴이고; R⁵가 벤질이며, R⁶가 수소임을 특징으로 하는 방법.
a) 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 및 이들의 생리학적으로 내성인 산과의 염; 및

b) 치료학적 유효량의, 비스테로이드계 항염증 제제, 유기 금 유도체, D-펜실아민, 4-아미노퀴놀린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 시클로스포린,맥관형성 억제제, T 세포에 대한 단클론성 항체, 유착 분자에 대한 단클론성 항체, 시토킨 및 성장 인자에 대한 단클론성 항체, TNFR-IgG, IL-1 수용체 길항제 ICE 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제 2 항관절염 약제를 포함하는 약제학적 조성물:

R¹R²N-CHX-CO-A-B-D-(E)_s-(F)_t-(G)_u-K (I)

R¹은 알킬, 시클로알킬, 알킬술포닐, 플루오로알킬, 또는 아미노술포닐이고;

R²는 수소, 알킬, 플루오로알킬, 또는 시클로알킬이고;

R¹-N-R²는 함께 피롤리디노 또는 피페리디노 잔기일 수 있고;

A는 발릴, 이소루실, 루실, 알로-이소루실, 2,2-디메틸글리실, 2-시클로프로필글리실, 2-시클로펜틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, 2-3차-부틸글리실, 3-시클로헥실알라닐, 2-에틸글리실, 2-시클로헥실글리실, 노르루실 또는 노르발릴 잔기이고;

B는 N-알킬-발릴, -노르발릴, -루실, -이소루실, -2-3차-부틸글리실, 3-3차-부틸알라닐, -2-에틸글리실, -2-시클로프로필글리실, -2-시클로펜틸글리실, -노르루실 또는 -2-시클로헥실글리실 잔기이고;

D는 프로필, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플루오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

E는 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 3,4-데히드로프롤릴, 4-플로오로프롤릴, 3-메틸프롤릴, 4-메틸프롤릴, 5-메틸프롤릴, 아제티딘-2-카르보닐, 3,3-디메틸프롤릴, 4,4-디플루오로프롤릴, 옥사졸리딘-4-카르보닐 또는 티아졸리딘-4-카르보닐 잔기이고;

F 및 G는 독립적으로 프롤릴, 호모프롤릴, 히드록시프롤릴, 티아졸리디닐-4-카르보닐, 1-아미노펜틸-1-카르보닐, 발릴, 2-3차-부틸글리실, 이소루실, 루실, 3-시클로헥실알라닐, 페닐알라닐, N-메틸페닐알라닐, 테트라히드로이소퀴놀릴-2-히스티딜, 1-아미노인딜-1-카르보닐, 3-피리딜알라닐, 2-시클로헥실글리실, 노르루실, 노르발릴, 네오펜틸글리실, 트리오토파닐, 글리실, 2,2-디메틸글리실 알라닐, β-알라닐 및 3-나프틸알라닐 잔기이고;

X는 수소, 알킬, 시클로알킬, -CH₂-시클로헥실 또는 아릴알킬이고;

s, t 및 u는 독립적으로 0 또는 1 이며;

K는 히드록시, 알콕시, 페녹시, 벤질옥시 또는 치환되거나 치환되지 않은 아미노 부분이다.
제 25항에 있어서, 화합물이 제 14항 내지 제 24항 중 어느 한 항에서 정의된 화학식을 가짐을 특징으로 하는 조성물.
제 25항 또는 제 26항에 있어서, 포유류, 예를 들어 사람의 류마티스양 관절염의 치료에서 치료적 또는 예방적으로 사용하기 위한 것임을 특징으로 하는 조성물.