SK3198A3

SK3198A3 - Analogs of parathyroid hormone

Info

Publication number: SK3198A3
Application number: SK31-98A
Authority: SK
Inventors: Zheng Xin Dong
Original assignee: Biomeasure Inc
Priority date: 1995-07-13
Filing date: 1996-07-03
Publication date: 1998-07-08
Also published as: PT1405861E; PL186710B1; DE69630133T2; US5723577A; AU707094B2; CN1199340A; JPH11509201A; EP0847278A4; ATE250425T1; AU6483496A; IL122837A; PL325905A1; ATE442159T1; JP2003238595A; CN1521189A; TW482766B; JP4008825B2; HUP9901718A3; EP1405861B1; WO1997002834A1

Description

Analógy hormónu prištítnej žľazy

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka analógov, peptidových variantov hormónu prištítnej žľazy (parathormónu).

Doterajší stav techniky

Hormón prištítnej žľazy (PTH) je polypeptid, ktorý sa tvorí v prištítnych žľazách. Vyzretá obehová forma hormónu sa skladá z 84 aminokyselinových zvyškov. Biologický účinok PTH sa môže reprodukovať peptidovým fragmentom jeho N-konca (napr. aminokyselinových zvyškov 1 až 34). Proteín hormónu prištítnej žľazy (PTHrP) je proteín so 139 až 173 aminokyselinami, ktorý má N-koncovú homológiu s PTH. PTHrP má veľa biologických účinkov spoločných s PTH, ku ktorým patrí aj väzba na spoločný PTH/PTHrP receptor. (Tregear a kol., Endocrinol., 93:1349 (1983)). Charakterizovali sa peptidy PTH z veľkého množstva rozličných zdrojov, napr. ľudský, hovädzí, potkaní, slepačí. (Nissenson a kol., Receptor, 3:193 (1993)).

Ukázalo sa, že PTH zvyšuje množstvo kostnej hmoty aj jej kvalitu. (Dempster a kol., Endocrine Rev., 14:690 (1993); a Riggs, Amer. J. Med., 91 (Dodatok 5B):37S (1991)). Pozoroval sa anabolický účinok pri prerušovane podávanom PTH u osteoporotických mužov a žien so súčasnou antiresorpčnou liečbou alebo bez nej. (Slovik a kol., J. Bone Miner. Res, 1: 377 (1986); Reeve a kol, Br. Med. J., 301:314 (1990); a R.-D. Hesch a kol., Calcif. Tissue Inťl, 44:176 (1989)).

Podstata vynálezu

Jeden aspekt vynálezu sa týka peptidových variantov PTH(l-34) s nasledujúcim generickým vzorcom:

Ai-Val-A₃-Glu-A₅-Gln-A7-ArHis-Asn-Aii-Ai2-Lys-His-Ai5-Ai6-Ai7-Ai8-Ai9' Arg-A2,-Glu-A23-A24-Arg-Lys-A27-A28-Gln-A₃o-A3i-A32-A33-A34-R3,

kde

Ai je Ser, Ala alebo Dap;

A₃ je Ser, Thr alebo Aib;

Aj je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

A7 je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

A« je Met, Nva, Leu, Val, íle, Cha alebo Nie;

Au je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, haloI gén alebo CH₃;

A12 je Gly alebo Aib;

Au je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Aie je Ser, Asn, Ala alebo Aib;

An je Ser, Thr alebo Aib;

Ai8 je Met, Nva, Leu, Val, íle, Nie, Cha alebo Aib;

A19 je Glu alebo Aib;

A21 je Val, Cha alebo Met;

A23 je Trp alebo Cha;

A₂₄ je Leu alebo Cha;

A27 je Lys, Aib, Leu, hArg, Gin alebo Cha;

A₂8 je Leu alebo Cha;

A₃₀ je Asp alebo Lys;

A31 je Val, Nie, Cha alebo je vynechané;

A32 je His alebo je vynechané;

A33 je Asn alebo je vynechané;

A₃₄ je Phe, Tyr, Amp, Aib alebo je vynechané;

každé z Ri a R2 je nezávisle H, alkyl C1-12, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.20, hydroxyalkyl C1.12, hydroxyalkenyl C2.12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.20; alebo jedno a len jedno z Ri a R2 je COEi, kde Ei je alkyl Cj.p, alkenyl C2-12, fenylalkyl ¢7-20, naftylalkyl Cn.20, hydroxyalkyl Ci-p, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl C n-20; a

R₃ je OH, NH₂, alkoxy skupina C1-12 alebo NH-Y-CH2-Z, kde Y je uhľovodíková časť Ci.,2 a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že (i) aspoň jedno z A5, A₇, Ag, Au, Au, Au, A21, A₂₃, A24, A27, A28 a A₃i je Cha alebo aspoň jedno z A₃, Ap, Au, Ap, Au, Ap a A₃₄ je Aib; alebo že (ii) aspoň Ai je Dap, A7 je β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, Au je β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, A27 je hArg alebo A31 je Nie; alebo ich farmaceutický prijateľná soľ.

Podskupinou zlúčenín, ktoré odpovedajú vyššie uvedenému vzorcu, sú tie, v ktorých aspoň jedno z A₅, A₇, An, Ap, Au, A₂i, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ and A₃₁ je Cha. Napríklad A₃ je Ser; A₅je íle; A7 je Leu alebo Cha; Ag je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie; An je Leu alebo Cha; Ap je Gly; Au je Leu alebo Cha; Au je Asn alebo Aib; Ap je Ser; Au je Met alebo Nie; A₂i je Val; A₂7 je Lys, hArg alebo Cha; A₃₂ je His; A_3i je Val, Nie alebo Cha; A₃₃ je Asn; A₃₄ je Phe, Tyr, Amp alebo Aib; Ri je H; R₂ je H; a R₃ je NH₂; za prepokladu, že aspoň jedno z A₅, A₇, Ag, An, Au, Au, A₂i, A23, A₂4, A₂7, A₂8 and A₃i je Cha, alebo aspoň jedno z A₃, Ap, Au, Ap, Au, Ap and A₃4 je Aib. Ak sa to požaduje, aspoň jedno z A₇ a An môže byť Cha; alebo aspoň jedno z Ap, A23, A24, A27, A28 and A₃i je Cha.

V ďalšej podskupine aspoň jedno z A₃, Ap, Au, Ap, Au, Ap and A₃₄ je Aib. Napríklad A₃ je Ser alebo Aib; A₅ je íle; A₇ je Leu alebo Cha; Ag je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie; An je Leu alebo Cha; Ap je Leu alebo Cha, Au je Asn alebo Aib; Au je Met, Aib alebo Nie; A₂i je Val; A₂7 je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha; A₃j je Val, Nie alebo Cha; Ap je His; A₃₃ je Asn; A₃4 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib; Ri je H; R2 je H; a R₃ je NH₂; za predpokladu, že aspoň jedno z A₅, A7, Ag, An, Ap, Au, A21, A₂₃, A24, A₂7, A₂₈ and A₃i je Cha, alebo aspoň jedno z A₃, Ap, Au, Ap, Au, Ap and A₃₄ je Aib. Ak sa to požaduje, aspoň jedno z A₇ and An môže byť Cha; alebo aspoň jedno z Ap, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A_2g a A_3] je Cha.

V ešte ďalšej podskupine aspoň jedno z A_s, A₇, Ag, An, Ap, Au, Α₂ι, A23, A₂4, A₂₇, A₂₈a A₃i je Cha, alebo aspoň jedno z A₃, Ap, Au, Ap, Au, Ap a A₃₄ je Aib. Napríklad A₃ je Ser alebo Aib; A_s je íle; A₇ je Leu alebo Cha; A« je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie; A_B je Leu alebo Cha; Au je Leu alebo Cha; Au je Asn alebo Aib; Au je Met, Aib alebo Nie; A₂i je Val; A₂₇je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha; A31 je Val, Nie alebo Cha; A₃₂ je His; A₃₃ je Asn; A34 je Phe, Tye, Amp alebo Aib; Ri je H; R₂ je H; and R₃ je NH₂. Ak sa to požaduje, aspoň jedno z A₇ and Au je Cha a aspoň jedno z Au, A19 a A34 je Aib; alebo aspoň jedno z A₂4, A₂e and A31 je Cha a aspoň jedno z Au and Ai₇ je Aib.

V ešte ďalšej podskupine aspoň jedno z Ai je Dap, A₇ je β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-XPhe, Au je β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe. Napríklad Ai je Ser, Gly alebo Dap; A₃ je Ser alebo Aib; A« je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie; Au je Asn alebo Aib; Au je Met, Aib alebo Nie; A₂i je Val; A₂₇ je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha; A₃i je Val, Nie alebo Cha; A₃₂ je His; A₃₃je Asn; A34 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib; Ri je H; R₂ je H; and R₃ je NH₂.

Nasledujú príklady peptidov podľa tohto vynálezu, ktoré zodpovedajú vyššie uvedenému vzorcu: [Cha⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha]hPTH(l-34)NH2; [Cha¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ ]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ , Nie⁸’ ¹⁸, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha²³]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁴]hPTH(l-34)NH2; [Nie⁸’ ¹⁸, Cha²⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁸]hPTH(l-34)NH2; [Cha³¹]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁷’ ²⁹]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁸]bPTH(l34)NH2; [Cha²⁸]rPTH(l-34)NH2; [ Cha²⁴’ ²⁸’ ³¹]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁹]hPTH(l-34)NH2; [Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁶’ ¹⁹]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁶’ ¹⁹’ ³⁴]bPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁶’³⁴ ]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁹’ ³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ , Nie⁸’ ¹⁸, Aib¹⁶’ ¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷' , Nie⁸’^I8’³¹, Aib¹⁶’¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷, Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH2; [Cha¹¹, Aib¹⁶]hPTH(l-34) 2; [Cha⁷, Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha, Aib³⁴ ]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁷, Aib¹⁶ ]hPTH(l-34)NH2; [ Cha²⁷, Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁸, Aib^,6]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁸, Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Nle³¹]hPTH(l-34)NH2; [hArg^2,]hPTH(l-34)NH2; [Dap¹, Nie⁸’ ¹⁸, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Nle³¹]bPTH(l-34)NH2; [Nle³¹]rPTH(l-34)NH2; [hArg²⁷]bPTH(l-34)NH2;[hArg²⁷]rPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ , Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹²]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁴’ ²⁸’ ³¹, Lys³⁰]hPTH(l-34)NH2; [Cha²⁸’ ³¹]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ ¹¹ Nie⁸’ ’⁸, Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Aib³]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁸]hPTH(l-34)NH2; [Cha¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’, Aib¹⁹]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷· , Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH2; [Aib¹⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁵]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ ’ ^1S] hPTH(l34)NH2; [ Cha⁷’ , Nie⁸’ ¹⁸, Aib¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ , Nie⁸’ ¹⁸, Aib¹⁹, Lys³⁰, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ ’ ¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Aib^l7]hPTH(l-34)NH₂; [Cha⁷’ ,

Leu²⁷] hPTH( 1-34)NH2; [Cha⁷·’¹⁵, Leu²⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ⁿ’²⁷]hPTH(l-34)NH2; [Cha⁷’ · ¹⁵’ ²⁷]hPTH (1-34)NH2; [Trp¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Nal¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Trp¹⁵,

Cha²³]hPTH(l-34)NH2; [Cha¹⁵’²³]hPTH(l-34)NH2; [Phe⁷’]hPTH(l-34)NH2; [Nal⁷’ⁿ]hPTH(l34)NH2; [Trp⁷’ ]hPTH (1-34)NH2; [ Phe⁷’ ^ls]hPTH(l-34)NH2; [Nal⁷’ ’ ¹⁵]hPTH(l-34)NH2; [Trp⁷’ ¹⁵]hPTH(l-34)NH2; a [Tyr⁷’ ’ ^,5]hPTH(l-34)NH₂.

Ďalší aspekt tohto vynálezu sa týka peptidov odpovedajúcich nasledujúcemu vzorcu:

R.

\

Ai-Val-A3-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Aio-An-Ai₂-Lys-Ai4-Ai5-Ai6-Ai7-Ai8-Ai9I Arg-Arg-A₂₂-A23-A₂4-A₂j-A₂6-A₂7-A₂8-A₂9-A30-A3i-A3₂-A33-A34-R3, r₂ kde

Ai je Ala, Ser alebo Dap;

A₃ je Ser alebo Aib;

A₅ je His, íle alebo Cha;

A₇ je Leu, Cha, Nie, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Ae je Leu, Met alebo Cha;

A10 je Asp alebo Asn;

Au je Lys, Leu, Cha, Phe alebo β-Nal;

Ai₂je Gly alebo Aib;

A14 je Ser alebo His;

Au je íle alebo Cha;

Ai₆ je Gin alebo Aib;

A17 je Asp alebo Aib;

Ais je Leu, Aib alebo Cha;

A19 je Arg alebo Aib;

A₂₂ je Phe, Glu, Aib alebo Cha;

A23 je Phe, Leu, Lys alebo Cha;

A₂₄ je Leu, Lys alebo Cha;

A₂₅ je His, Aib alebo Glu;

A₂₆ je His, Aib alebo Lys;

A₂7 je Leu, Lys alebo Cha;

A₂g je íle, Leu, Lys alebo Cha;

A₂₉ je Ala, Glu alebo Aib;

A30 je Glu, Cha, Aib alebo Lys;

A₃i je íle, Leu, Cha, Lys alebo je vynechané;

A₃₂ je His alebo je vynechané;

A₃₃ je Thr alebo je vynechané;

A34 je Ala alebo je vynechané;

každé z Ri a R₂ je nezávisle H, alkanyl C1-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.₂o, hydroxyalkyl C1-12, hydroxyalkenyl C₂.i₂, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.₂o; alebo jedno a len jedno z Ri a R₂ je COEi, kde Ei je alkyl C1-12, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7.20, naftylalkyl Cn-20, hydroxyalkyl C,.,2, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7.20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn-₂₀; a

R3 je OH, NH₂, alkoxy skupina Cm₂ alebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je uhľovodíková časť C,.i2 a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že (i) aspoň jedno z A_s, A₇, Ag, A„, A_1S, A_lg, A₂₂, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈, A₃₀alebo A₃, je Cha, alebo aspoň jedno z A3, Απ, A,e, Α,₇, A,g, A,9, A₂₂, A₂s, Α₂β, A₂9, A30 alebo A34 je Aib; alebo že (ii) aspoň jedno z A₂₃, A₂₄, A_27> A₂g alebo A₃, je Lys; alebo ich farmaceutický prijateľná soľ. V jednom praktickom uskutočnení aspoň jedno z A₇ a A,, je Cha. V inom praktickom uskutočnení aspoň jedno z Α,β alebo A,9 is Aib. Ku konkrétnym príkladom peptidov, ktoré majú práve popísaný vzorec, patria, ale neobmedzujú sa iba na tieto, [Cha⁷]hPTHrP(l34)NH2; [Chaⁿ]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷' ⁿ]hPTHrP(l-34)NH2; [Aib¹⁶, Tyr³⁴]hPTHrP(l34)NH2; [Aib¹⁹]hPTHrP(l-34)NH2; [Aib^{16, ,9}]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷’ , Aib¹⁶]hPTHrP(l34)NH2; [Cha⁷' , Aib^,9]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha²², Leu²³'²⁸’”, Glu²⁵'²⁹, Lys²⁶' ³⁰]hPTHrP(l34)NH2; [Glu²²'²⁵'²⁹, Leu²³’²⁸'”, Lys²⁶' ²⁷’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha ²²’ Glu²⁵’ ²⁹, Leu²⁸'”, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’ ²⁵, Leu²³’²⁸’³¹, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’²⁵’ ²⁹, Lys²³’ ²⁶’³⁰, Leu²⁸’³¹] hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’²⁵’²⁹, Leu²³’ ²⁸’³¹, Lys²⁶, Cha³⁰] hPTHrP(l34) NH2; [Glu²²’²⁵’²⁹, Leu²³’²⁸’³¹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²'²⁵’²⁹, Leu²³’ ”, Lys²⁶’ ²⁸'³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [ Cha²²’ ²³’²⁴’²⁷’²⁸’³¹, Glu²⁵’²⁹, Lys²⁶' ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’²⁵’ ²⁹, Cha²³’ ²⁴’ ²⁸’ ”, Lys²⁶’ ²⁷’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu^{22, 25}’ ²⁹, Cha²³’ ²⁴’ ²⁷’ ”, Lys²⁶’ ²⁸’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’ ²⁵’ ²⁹, Lys²³’ ²⁶'³⁰, Cha²⁴’ ²⁷’²⁸’ ³¹]hPTHrP(l-34)NH₂; [Cha²², Leu²³’

28, 31, _θ1ι125, 29^ ^26. 27, 30_]hp_THrp₍₁.34)^· _[Cha* 31, 29, ^26, 28, 30^^(134)NH₂; [Cha²², Lys²³· ²⁶· ³⁰, Glu²⁵'²⁹, Leu²⁸· ³¹]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha²², Leu²³· ²⁸' ³¹, Glu²⁵, Lys^{26, 30}, Aib²⁹]hPTHrP (1-34)NH2; [Cha²², Leu²³’ ²⁸’ ³¹, Glu²⁵’ ²⁹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(l34)NH2; [Glu²²· ²⁵, Leu²³’ ²⁸’³¹, Lys²⁶’²⁷’³⁰, Aib²⁹]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²·²⁵, Lys²³’²⁶· ^3θ· Leu ²⁸' ³¹, Aib²⁹] hPTHrP(l-34)NH2; [Glu^{22, 25}, Leu²³· ³¹, Lys ²⁶’ ²⁸’ ³⁰, Aib²⁹]hPTHrP(l-34)NH2 (Cha⁷· , Glu²²’ ^{25> 29}, Leu²³’ ²⁸’³¹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷·^1,122, Leu²³’ ^{28> 31}, Glu²⁵·²⁹Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l- 34)NH2; [Cha⁷' , Glu²²’²⁵·²⁹, Leu²³·²⁸·³¹, Lys²⁶’^{27> 30}]hPTHrP(l-34)NH2 [Cha⁷· · ^{22> 23}, Glu²⁵' ²⁹, Leu²⁸·³’, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷' ”, Glu²²’²⁵' ²⁹, Lys²³’²⁶’³⁰] hPTHrP(l-34)NH₂

7, 11

Leu^{28, 31}]hPTHrP(l-34)NH₂; [Cha'· , Glu

22, 25, 29

Leu^{23, 31}, Lys

26, 28, 30 [Cha⁷’ , Glu²²’²⁵, Leu²³·²⁸·³¹, Aib²⁹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷·, Glu²²* ^{25> 29}, Leu²³’^{28 31}, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(l- 34)NH2; [Cha¹⁵, Glu²²’^25,29, Leu^23,28,31, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2 [Cha¹⁵’ ²², Leu²³·²⁸·³¹, Glu²⁵’ ²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha¹⁵, Glu²²’ ^{25> 29}, Leu²³· ²⁸· ³¹

Lys

26, 27, 30 ]hPTHrP(l-34)NH₂; [Cha

15. 22. 23 ,28, 31

26, 30η , Glu²⁵’ ²⁹, Leu²⁸· ^3l, Lys²⁶· ^JU]hPTHrP(l-34) NH₂ [Cha¹⁵, Glu²²·²⁵, Leu²³’²⁸'³¹, Aib²⁹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [ Cha¹⁵, Glu²²’²⁵’²⁹, Lys²³·²⁶·³⁰Leu²⁸' ³¹]hPTHrP (1-34)NH2; [Cha¹⁵, Glu²²·²⁵·²⁹, Leu²³·²⁸·³¹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(l- 34)NH2 [Cha¹⁵, Glu²²’²⁸’ ²⁹, Leu²³·³¹, Lys²⁶· ²⁸-³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha¹⁵·³⁰, Glu²²’²⁵· ²⁹, Leu²³·^{28> 31}Lys²⁶]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha^{7,8l 22}, Leu²³’^{28> 31}, Glu²⁵’²⁹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha^7,8

Glu²²’ ²⁵’ ²⁹, Leu²³· ^{28> 31}, Lys²⁶’ ²⁷’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷· ⁸’ ²²’ ²³, Glu²⁵’ ²⁹, Leu²⁸· ³¹, Lys²⁶-³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷’⁸, Glu²²’ ^{25> 29}, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶’³⁰] hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷· ⁸, Glu²²' ^2S, Leu²³· ²⁸’ ³¹, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷·⁸, Glu²²’ ²⁵’ ²⁹, Lys²³' ²⁶’ ³⁰, Leu²⁸· ³¹]hPTHrP(l- 34)NH2; [Cha⁷·⁸, Glu²²’²⁵·²⁹, Leu²³’²⁸’³¹, Lys²⁶, Aib³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷·⁸, Glu²²·^{25> 29}, Leu²³·³¹, Lys²⁶’²⁸’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Cha⁷·⁸·³⁰, Glu²²· ²⁵’ ²⁹, Leu²³· ²⁸’³¹, Lys²⁶]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ ·²², Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Leu²³· ²⁸·³¹, Glu²⁵'²⁹, Lys²⁶· ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷· ”, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²·²⁵’²⁹, Leu²³·²⁸’³¹, Lys²⁶’²⁷’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷· , Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²’ ²⁵' ²⁹, Leu²³· ³¹, Lys²⁶' ²⁸· ³⁰] hPTHrP(l-34)NH₂; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ ”, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²’ ²⁵· ²⁹, Lys²³’ ^{26> 30}, Leu²⁸’ ³¹] hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ ”, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²'^2S, Leu²³' ²⁸·³¹, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ , Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²’²⁵·²⁹, Leu²³’²⁸·³¹, Lys²⁶, Aib³⁰] PTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ ”·²²’²³, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²⁵·²⁹, Leu²⁸·³¹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ ”’ ¹⁵, Met⁸, Asn¹⁰, His^,4]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu, His¹⁴, Aib¹⁶]hPTHrP (1-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’²⁸’³¹, His¹⁴, Cha²²· ²³, Glu²⁵· ²⁹, Lys²⁶· ³°]hPTHrP(l-34)NH₂; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷’ , Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²· ²⁵' ²⁹, Leu²³’ ²⁸’ ³¹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, His¹⁴, Cha¹⁵, Glu²²’ ²⁵’ ²⁹Leu²³' ^{28> 31}, Lys²⁶' ³⁰]hPTHrP (1-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Cha⁷' ”, Asn¹⁰, His¹⁴, Glu²²' ²⁵’ ²⁹, Leu²³'^{: 31}, Lys²⁶' ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²’²⁵’²⁹, Leu²³’²⁸'³¹, Lys²⁴'²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Aib^;Leu²³' ²⁸' ³¹, Glu²⁵’ ²⁹, Lys²⁶’ ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu²²' ²⁹, Leu²³’ ²⁸’ ³¹, Aib²⁵, Lys^{: 30}]hPTHrP(l-34)NH2; [Glu^22,25' ²⁹, Leu²³' ²⁸’ ³¹, Aib²⁶, Lys³⁰]hPTHrP (1-34)NH2; [Glu²²’²⁵’ ⁷Leu²³' ²⁸, Lys ²⁶'³⁰’³¹] hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹' ²³’ ²⁸’³¹, His¹⁴, Cha' Glu²⁵’ ²⁹, Lys²⁶' ³⁰]hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹' ²⁸' ³¹, His¹⁴, Glu²²' ²⁵’ ²⁹Lys²³’²⁶’ ³⁰]PTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’ ²⁸’³¹, His¹⁴, Glu²²’²⁵’²⁹, Lys²⁶’^{27 30}] hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’ *· ³¹, His¹⁴, Glu²²’ ²⁵’ ²⁹, Lys²⁶’ ²⁸’ ³⁰] hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’ ²³’ ²⁸’ ³¹, His¹⁴, Glu²²’ ²⁵, Aib²⁹, Lys²⁶’ ³⁰] hPTHrP(l-34)NH2; [Ser¹, íle⁵, Met⁸, Asn¹⁰, Leu¹¹’ ²³’ ²⁸’ ³¹, His¹⁴, Glu²²’ ²⁵’ ²⁹, Lys²⁶, Aib³⁰] hPTHrP(l-34)NH2; alebo [Ser¹, íle⁵, Met⁸]hPTHrP(l-34)NH₂.

S výnimkou N-koncovej aminokyseliny všetky skratky (napr. Ala alebo Ai) aminokyselín v tomto opise označujú štruktúru -NH-CH(R)-CO-, v ktorej R je bočný reťazec aminokyseliny (napr. CH3 pre Ala). Pre N-koncovú aminokyselinu skratka označuje štrukúru =N-CH(R)-CO-, v ktorej R je bočný reťazec aminokyseliny. β-Nal, Nie, Dap, Cha, Nva, Amp, Pal a Aib sú skratkami nasledujúcich α-aminokyselín: P-(2-naftyl)alanín, norleucín, kyselina α,βdiaminopropiónová, cyklohexylalanín, norvalín, 4-aminofenylalanín, 3-pyridinylalanín, a kyselina α-aminoizomaslová. Vo vyššie uvedenom vzorci môže hydroxyalkyl, hydroxyfenylalkyl a hydroxynaftylalkyl obsahovať 1-4 hydroxy substituenty. Podobne COEi označuje -C=CO-Ei. K príkladom -C=O-Ei patria, ale neobmedzujú sa iba na tieto, acetyl a fenylpropionyl.

Peptid podľa tohto vynálezu sa tu tiež označuje iným formalizmom, napr. [Cha^{7, n}]hPTH(l-34)NH2, so substituovanými aminokyselinami z prirodzenej sekvencie umiestnenými do druhého druhu zátvoriek (napr. Cha⁷ za Leu⁷ a Cha¹¹ za Leu¹¹ v hPTH). Skratka hPTH označuje ľudský PTH, hPTHrP ľudský PTHrP, rPTH potkaní PTH a bPTH hovädzí PTH. Čísla v okrúhlych zátvorkách znamenajú počet aminokyselín prítomných v peptide (napr. hPTH(l-34) je peptidová sekvencia aminokyselín 1 až 34 ľudského PTH). Sekvencie pre hPTH(l-34), hPTHrP(l-34), bPTH(l-34) a rPTH(l-34) sú uvedené v publikácii Nissenson a kol., Receptor, 3:193 (1993). Označenie NH2 v PTH(1-34)NH₂ znamená, že C-koniec peptidu je amidovaný. Na druhej strane PTH(l-34) má voľný kyselinový C-koniec.

Každý z peptidov tohto vynálezu je schopný stimulovať rast kostí subjektu (napr. cicavca, ako je ľudský pacient). Je teda užitočný pri liečení osteoporózy a kostných zlomenín, keď sa podáva samotný alebo súčasne s antiresorpčnou liečbou, napr. bifosfonátmi a kalcitonínom.

Peptidy tohto vynálezu sa môžu poskytovať vo forme farmaceutický prijateľných solí. Príkladmi takých solí sú, ale neobmedzujú sa iba na tieto, soli s organickými kyselinami (napr. kyselinou octovou, mliečnou, maleínovou, citrónovou, jablčnou, askorbovou, jantárovou, benzoovou, metánsulfónovou, toluénsulfónovou alebo pamovou), anorganickými kyselinami (napr. kyselinou chlorovodíkovou, sírovou alebo fosforečnou) a polymémymi kyselinami (napr. kyselinou trieslovou, karboxymetylcelulózou, kyselinou polymliečnou, polyglykolovou alebo kopolymérmi kyselín polymliečnych-glykolových).

Terapeuticky účinné množstvo peptidu podľa tohto vynálezu a farmaceutický prijateľná nosičová látka (napr. uhličitan horečnatý, laktóza alebo fosfolipid, s ktorým terapeutická zlúčenina môže tvoriť micelu) spolu vytvárajú terapeutický preparát (napr. pilulku, tabletku, kapsulu alebo tekutinu) na podávanie subjektu (napr. orálne, intravenózne, transdermálne, pulmonárne, t

vaginálne, subkutánne, nazálne, iónoforeticky alebo intratracheálne). Pilulka, tabletka alebo kapsula, ktorá sa má podávať orálne, môže byť pokrytá látkou na ochranu aktívnej zložky pred žalúdočnou kyselinou alebo pred tráviacimi enzýmami v žalúdku po dostatočne dlhý čas, aby sa jej umožnilo prejsť v nestrávenej forme do tenkého čreva. Terapeutický preparát môže byť tiež vo forme biologicky odbúrateľnej alebo biologicky neodbúrateľnej sústavy postupne uvoľňujúcej liečivo na subkutánne alebo intramuskulárne podanie. Pozri napr. patenty USA· 3,773,919 a 4,767,628 a prihlášku PCT č. WO 94/15587. Nepretržité podávanie sa môže tiež dosiahnuť s použitím implantovateľnej alebo externej pumpy (napr. pumpa INFUSAID™). Podávanie môže byť tiež prerušované, napr. jedna injekcia denne, alebo nepretržité s pomalým dávkovaním, napr. preparát postupne uvoľňujúci liečivo.

Dávkovanie peptidu podľa tohto vynálezu na liečbu vyššie uvedených chorôb alebo porúch sa mení v závislosti od spôsobu podávania, veku a telesnej hmotnosti subjektu a stavu liečeného subjektu a konečné rozhodnutie o ňom urobí ošetrujúci lekár alebo veterinár.

Očakáva sa tiež, že do tohto vynálezu patrí aj peptid popísaný vyššie uvedeným generickým vzorcom na použitie pri liečení chorôb a porúch spojených s nedostatočným rastom kostí a podobne, napr. osteoporózy alebo zlomenín.

Ďalšie stránky a výhody tohto vynálezu budú zrejmé z podrobného opisu uskutočnenia vynálezu a z patentových nárokov.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Na základe tu uvedeného opisu sa tento vynález môže využiť v jeho najširšom rozsahu. Nasledujúce konkrétne príklady sa chápu len ako ilustrácia a neobmedzujú nijakým spôsobom rozsah vynálezu. Ďalej, všetky tu citované publikácie sú tu zaradené ako odkazy.

Štruktúra

Publikovalo sa, že PTH(l-34) má dve amfofilické alfa špirálové domény. Pozri napr. Barden a kol., Biochem, 32:7126 (1992). Prvá α-špirála je vytvorená medzi aminokyselinovými zvyškami 4 až 13, kým druhá α-špirála je vytvorená medzi aminokyselinovými zvyškami 21 až 29. Niektoré peptidy tohto vynálezu obsahujú substitúciu Cha za jeden alebo viac zvyškov vo vnútri alebo v blízkosti týchto dvoch oblastí PTH(l-34), napr. Cha⁷ a Cha¹¹ vnútri prvej ašpirály alebo Cha²⁷ a Cha²⁸ vnútri druhej a-špirály.

Týmto vynálezom sú tiež pokryté varianty PTH(l-34) so substitúciou Aib za niektorý zvyšok priľahlý k α-špirálam, napr. Aib¹⁶, Aib¹⁹ a Aib³⁴; hArg²⁷ a Nie³¹ alebo so substitúciou Dpa za N-koncový zvyšok.

Syntéza

Peptidy tohto vynálezu sa môžu pripraviť štandardnou syntézou v tuhej fáze. Pozri napr. Stewart, J.M., a kol., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., druhé vyd. 1984). Nasleduje popis, ako sa pripraví [Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2. Ďalšie peptidy tohto vynálezu môže pripraviť analogickým spôsobom osoba s bežnou praxou v uvedenej problematike.

Peptid sa syntetizoval na syntetizéri peptidov Applied Biosystems (Foster City, CA) model 430A, ktorý bol zmodifikovaný, aby sa urýchlila syntéza peptidov v tuhej fáze založených na chémii Boe. Pozri Schnoize a kol., Int. J. Peptide Protein Res., 90:180 (1992). Použila sa živica 4-metylbenzhydrylamínu (MBHA) (Peninsula, Belmont, CA) so substitúciou 0,93 mmól/g. Použili sa aminokyseliny Boe (Bachem, CA, Torrance, CA; Nová Biochem., La Jolla, CA) s nasle11 dujúcou ochranou bočných reťazcov: Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHxl)-OH, Boc-Asn(Xan)OH, Boc-Glu(OcHxl)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Asn-GH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, BocSer-OH, Boc-Gly-OH, Boc-Met-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Lys(2ClZ)-OH, BocSer(Bzl)-OH a Boc-Trp(Fm)-OH. Syntéza sa uskutočnila v 0,14 mmól mierke. Skupiny Boe sa odstránili 2x1 min. pôsobením 100% TFA. Boe aminokyseliny (2,5 mmól) sa predaktivovali HBTU (2,0 mmól) a DIEA (1,0 ml) v 4 ml DMF a pospájali sa bez predchádzajúcej neutralizácie TFA soli peptidovej živice. Časy spájania boli 5 min s výnimkou Boc-Aib-OH a nasledujúceho zvyšku, Boc-Asn(Xan)-OH, pri ktorých časy spájania boli 20 min.

Na konci budovania peptidového reťazca sa na živicu pôsobilo 2 x 30 min. 20% merkaptoetanolom/10% DIEA v DMF, aby sa odstránila DNP skupina na bočnom reťazci His. Nkoncová Boe skupina sa potom odstránila pôsobením 100% TFA po dobu 2x2 min. Po neutralizácii peptidovej živice 10% DIEA v DMF (1 x 1 min.) sa formylová skupina na bočnom reťazci Trp odstránila 2 x 30 min. pôsobením roztoku 15% etanolamínu/15% vody/70% DMF. Peptidová živica čiastočne zbavená chránenia sa premyla DMF a CDM a vysušila sa pri zníženom tlaku. Záverečné štiepenie sa uskutočnilo miešaním peptidovej živice 75 minút v 10 ml HF obsahujúcom 1 ml anizolu pri 0 °C. HF sa odstránil prúdom dusíka. Zvyšok sa premyl éterom (6x10 ml) a extrahoval sa 4N HoAc (6x10 ml).

Zmes peptidov vo vodnom extrakte sa prečistila preparatívnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou s obrátenou fázou (HPLC) s použitím kolóny Vydac™ Cig na obrátenú fázu (Nest Group, Southborough, MA). Kolóna sa eluovala s lineárnym gradientom (10% až 45% roztoku B v čase 130 min.) pri rýchlosti toku 10 ml/min (Roztok A = 0,1% vodný roztok TFA; Roztok B = acetonitril obsahujúci 0,1% TFA). Zachytili sa frakcie a skontrolovali sa analytickou HPLC. Tie frakcie, ktoré obsahovali čistý produkt, sa spojili a lyofílizovali do sucha. Získalo sa 62,3 mg bielej tuhej látky. Na základe analýzy analytickou HPLC bola čistota >99%. Analýza na hmotnostnom spektrometri s elektrosprejom poskytla molekulovú hmotnosť 4054,7 (v súhlase s vypočítanou molekulovou hmotnosťou 4054,7).

Syntéza a čistenie [Cha^{7, H}]hPTH(l-34)NH2 sa vykonala rovnakým spôsobom ako vyššie uvedená syntéza [Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2. Chránená aminokyselina Boc-Cha-OH sa zakúpila od Bachemu, Ca. Čistota konečného produktu bola >98% a hmotnostný spektrometer s elektrosprejom poskytol molekulovú hmotnosť 4197,0 (vypočítaná molekulová hmotnosť je 4196,9).

Plné názvy pre skratky použité vyššie sú nasledujúce: Boe pre t-butyloxykarbonyl, HF pre flourovodík, Fm pre formyl, Xan pre xantyl, Blz pre benzyl, Tos pre tozyl, DNP pre 2,4dinitrofenyl, DMF pre dimetylformamid, DCM pre dichlórmetán, HBTU pre 2-(lH-benztriazoll-yl)-l,l,3,3-tetrametyluróniumhexafluórfosfát, DIEA pre diizopropyletylamín, HOAc pre kyselinu octovú, TFA pre kyselinu trifluóroctovú, 2C1Z pre 2-chlórbenzyloxykarbonyl a OcHxl pre O-cyklohexyl.

Substituenty Ri a R2 vyššie uvedeného generického vzorca sa môžu pripojiť k voľnému amínu N-koncovej aminokyseliny štandardnými metódami známymi v tomto odbore. Napríklad alkylové skupiny, napr. alkyl C1.12, sa môže pripojiť redukčnou alkyláciou. Hydroxyalkylové skupiny, napr. hydroxyalkyl C1.12, sa môže tiež pripojiť s použitím redukčnej alkylácie, pri ktorej sa voľná hydroxy skupina chráni t-butylesterom. Acylové skupiny, napr. COEi, sa môžu pripojiť reakciou voľnej kyseliny, napr. EiCOOH, s voľným amínom N-koncovej aminokyseliny 1 hodinovým miešaním pripravenej živice s 3 molámymi ekvivalentami voľnej kyseliny a diizopropylkarbdiimidu v metylénchloride a spracovaním výslednej živice v krokoch (a) až (f) vyššie uvedeného premývacieho programu. Ak voľná kyselina obsahuje voľnú hydroxy skupinu, napr. kyselina p-hydroxyfenylpropiónová, potom sa spájanie má vykonať s ďalšími 3 molárnymi ekvivalentami HOBT.

Iné peptidy tohto vynálezu môže pripraviť analogickým spôsobom osoba s bežnou praxou v uvedenej problematike.

Funkčné skúšky

A. Väzba na receptory PTH

Peptidy tohto vynálezu boli skúšané na ich schopnosť viazať sa na receptor PTH prítomný na SaOS-2 (bunky ľudského osteosarkómu). Bunky SaOS-2 (American Type Culture Collection, Rockville, MDD; ATCC #HTB 85) sa udržovali v médiu RPMI 1640 (Sigma, St. Louis, MO) doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS) a 2 mM glutamínom pri 37 °C vo zvlhčenej atmosfére 5% CO2 vo vzduchu. Médium sa menilo každé tri až štyri dni a bunky boli subkultivované trypsinizáciou každý týždeň.

Bunky SaOS-2 sa pestovali 4 dni, kým vytvorili zhluk. Médium sa nahradilo 5% FBS v RPMI 1640 médiu a 2 hodiny sa inkubovalo pri izbovej teplote s 10 x 10⁴ cpm mono-^l25I-[Nle⁸’ ¹⁸, Tyr³⁴(3-^12SI)] bPTH(l-34)NH2 v prítomnosti konkurenčných peptidov tohto vynálezu pri rozličných koncentráciách medzi 10’¹¹ M až 1(7⁴ M. Bunky sa premyli štyrikrát ľadovo chladným PBS a rozložili sa 0,1 M NaOH a rádioaktivita súvisiaca s bunkami sa vyhodnotila v scintilačnom čítači. Syntéza ¹²⁵I-[Nle^{8, 18}, Tyr³⁴(3-¹²⁵I)] bPTH(l-34)NH2 sa uskutočnila podľa popisu v práci Goldman, M.E. a kol., Endocrinol., 123:1468 (1988).

Väzbová skúška sa vykonala s rozličnými peptidmi tohto vynálezu a pre každý peptid sa vypočítala hodnota ICjo (polovica maximálnej inhibície viazania mono-¹²⁵I-[Nle^8,18, Tyr^j4(3-¹²⁵I)] bPTH(l-34)NH₂).

Ako vidieť z tabuľky I, všetky skúšané peptidy mali vysokú väzbovú afinitu na receptory PTH buniek SaOS-2.

B. Stimulácia aktivity adenylátcyklázy

Merala sa schopnosť peptidov tohto vynálezu vyvolať biologickú odozvu v bunkách SaOS-2. Konkrétnejšie, stanovovala sa stimulácia adenylátcyklázy meraním úrovne syntézy cAMP (adenozín-3'5'-monofosfátu), ako už bolo popísané v práci Rodan a kol., J. Clin. Invest. 72:1511 (1983) a Goldman a kol., Endocrinol., 123:1468 (1988). Zhluknuté bunky SaOS-2 na 24jamkových platniach sa inkubovali s 0,5 pCi [³H]adenínu (26,9 Ci/mmól, New England Nuclear, Boston, MA) 2 hodiny v čerstvom médiu pri 37 °C a premyli sa dvakrát Hankovým vyváženým soľným roztokom (Gibco, Gaithersburg, MD). Na bunky sa účinkovalo 1 mM IBMX [izobutylmetylxantín, Sigma, St. Louis, MO) 15 minút v čerstvom médiu a k médiu sa pridali peptidy tohto vynálezu, aby sa 5 minút inkubovali. Reakcia sa zastavila prídavkom 1,2 M kyseliny trichlóroctovej (TCA) (Sigma, St. Louis, MO), po čom sa vzorka zneutralizovala 4 N KOH. cAMP sa oddelil dvojkolónovou chromatografickou metódou (Salmon a kol., Anál Biochem., 58:541 (1974)). Rádioaktivita sa merala scintilačným čítačom (Kvapalinový scintilačný čítač 2200CA, PACKARD, Downers Grove, BL).

Pre skúšané peptidy sa vypočítali jednotlivé hodnoty EC50 (polovica maximálnej stimulácie adenylátcyklázy), ktoré sú uvedené v tabuľke I. Zistilo sa, že všetky skúšané peptidy sú potenciálnymi stimulátormi aktivity adenylátcyklázy, čo predstavuje biochemickú cestu, ktorá sa považuje za proximálny signál proliferácie osteoblastov (napr. rastu kosti).

TABUĽKA I

PEPTID	Kd(gM)	EC₅₀(nM)
[Cha⁷’ “]hPTH(l-34)NH₂	0,01	0,6
[Cha²³lhPTH(l-34)NH₂	0,2	20
[Cha²⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,1	10
[Nie⁸’¹⁸, Cha²⁷]hPTH(l-34)NH₂	0,05	2
[Cha²⁸]hPTH(l-34)NH₂	0,05	2,5
[Cha³¹]hPTH(l-34)NH₂	0,03	4
[Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH₂	0,004	0,7
[Aib¹⁹]hPTH(l-34)NH₂	0,005	0,6
[Aib³⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,007	3
[Nle³¹]hPTH(l-34)NH₂	0,004	0,7
[hArg²⁷]hPTH(l-34)NH₂	0,007	1
[Dap, Nie⁸’¹⁸, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,150	10
[Cha²⁴·²⁸’³*, Lys³⁰]hPTH( 1 -34)NH₂	0,5	7
[Cha⁷' Nie⁸' *⁸, Tyŕ⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,006	0,6
[Cha⁷·, Nie⁸·¹⁸, Aib¹⁶’¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,005	1,5
[Cha⁷’, Nie⁸’¹⁸·³¹, Aib¹⁶·¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,04	4
[Cha^,l]hPTH(l-34)NH₂	0,005	2
[Cha^28,31]hPTH(l-34)NH₂	0,06	7
[Cha^{7 H}, Nie⁸· ¹⁸, Aib³⁴]hPTH(l-34)NH₂	0,03	1,5
[Cha^,5]hPTH(l-34)NH₂	0,005	1,3
[Cha⁷·, Aib^,9]hPTH(l-34)NH₂	0,007	0,5
[Cha^7,11, Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH₂	0,004	1,1
[Aib¹⁶· ¹⁹]hPTH(l-34)NH₂	0,004	0,6
[Aib¹²]hPTH(l-34)NH₂	0,005	2
[Aib³]hPTH(l-34)NH₂	0,004	1,1
[Cha⁷’, Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(l-34)NH₂	0,004	2
[Cha⁷]hPTH(l-34)NH₂	0,02	2,3
[Cha²⁴·²⁸’ ³¹]hPTH(l-34)NH₂	1,0	30
[Aib”]hPTH(l-34)	0,05	3
[Cha⁷’^ls]hPTH(l-34)	0,01	1,4

Iné praktické uskutočnenia vynálezu

Treba to chápať tak, že aj keď vynález bol opísaný v spojitosti s jeho podrobným opisom uskutočnenia, zámerom tohto predchádzajúceho opisu je len ilustrovať a nie obmedziť rozsah pôsobnosti vynálezu, ktorý je určený rozsahom vymedzeným pripojenými patentovými nárokmi. Iné stránky, výhody a modifikácie sú v patentových nárokoch.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptid so vzorcom

Ri

Ai-Val-A3-Glu-A₅-Gln-A7-Aí-His-Asn-An-Ai2-Lys-His-Ai5-Ai6-Ai7-Ai8-Ai9/ Arg-A2i-Glu-A23-A24-Arg-Lys-A₂7-A₂g-Gln-A3o-A31-A32-A33-A34-R3,

R₂ kde

Ai je Ser, Ala alebo Dap;

A3 je Ser, Thr alebo Aib;

Aj je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

A₇ je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Ag je Met, Nva, Leu, Val, íle, Cha alebo Nie;

Au je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH3;

A|2 je Gly alebo Aib;

Aj5 je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

A^je Ser, Asn, Ala alebo Aib;

An je Ser, Thr alebo Aib;

Aig je Met, Nva, Leu, Val, íle, Nie, Cha alebo Aib;

Au je Glu alebo Aib;

A₂i je Val, Cha alebo Met;

A23 je Trp alebo Cha;

A₂4 je Leu alebo Cha;

A₂7 je Lys, Aib, Leu, hArg, Gin alebo Cha;

A₂8 je Leu alebo Cha;

Aío je Asp alebo Lys;

A₃i je Val, Nie, Cha alebo je vynechané;

A32 je His alebo je vynechané;

A33 je Asn alebo je vynechané;

A34 je Phe, Tyr, Amp, Aib alebo je vynechané;

každé z Ri a R2 je nezávisle H, alkyl Ci.n, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn-20, hydroxyalkyl Ch₂, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn-20; alebo jedno a len jedno z Rj a R2 je COEi, kde Ei je alkyl C1.12, alkenyl C2.12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.₂o, hydroxyalkyl C1-12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl C11.20; a

R3 je OH, NH2, alkoxy skupina C1-12 alebo NH-Y-CH2-Z, kde Y je uhľovodíková časť C,.12 a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že aspoň jedno z A₅, A₇, A«, Α_π, Au, Au, Α₂ι, A23, A₂₄, Α_27> A₂₈ a A31 je Cha alebo aspoň jedno z A3, An, Au, An, Au, A₁₉ a A34 je Aib; a ďalej za predpokladu, že A n nie je Aib, keď A34 je Tyr; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
2. Peptid podľa nároku 1, kde aspoň jedno z A₇, Au, Au, A₂₃, A₂₄, A₂₇, A₂₈ and A_3! je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
3. Peptid podľa nároku 2, kde A₃ je Ser;

A_s je íle;

A7jeLeu alebo Cha;

Ae je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie; Au je Leu alebo Cha;

A_nje Gly;

Au je Leu alebo Cha;

Au je Asn alebo Aib;

A_nje Ser;

Au je Met alebo Nie;

A₂i je Val;

A₂7 je Lys, hArg alebo Cha; A₃₂jeHis;

A₃i je Val, Nie alebo Cha;

A₃₃ je Asn;

A₃4 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib; RijeH;

R₂je H; a R₃ je NH₂;

alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
4. Peptid podľa nároku 3, kde aspoň jedno z A7 a Au je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
5. Peptid podľa nároku 4, kde uvedený peptid je [Cha^{7, n}]hPTH(l-34)NH2, [Cha^{7, H}, Nie^8,18, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2, [Cha]hPTH(l-34)NH₂, [Cha⁷' ^H' ¹⁵]hPTH(l-34)NH2 alebo [Cha⁷]hPTH(l-34)NH2; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
6. Peptid podľa nároku 3, kde aspoň jedno z A15, A25, A₂₄, A₂₇, A₂g and A₃i je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
7. Peptid podľa nároku 6, kde uvedený peptid je [Cha²³]hPTH(l-34)NH2, [Cha²⁴]hPTH(l34)NH2, [Nie⁸' ^IS, Cha²⁷]hPTH(l-34)NH2, [Cha²⁸]hPTH(l-34)NH2, [Cha³¹]hPTH(l34)NH2, [Cha²⁴’ ^{28> 31}]hPTH(l-34)NH2, [Cha²⁴' ²⁸' ³¹, Lys³⁰]hPTH(l-34)NH2, [Cha²⁸' ³¹]hPTH(l-34)NH2 alebo [Cha¹⁵JhPTH(l-34)NH₂; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
8. Peptid podľa nároku 1, kde aspoň jedno z A3, Ai₂, Au, An, Au, Au a A34 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
9. Peptid podľa nároku 8, kde

A3 je Ser alebo Aib;

Aj je íle;

A7 je Leu alebo Cha;

Ag je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie;

Au je Leu alebo Cha;

Au je Leu alebo Cha;

Au je Asn alebo Aib;

Au je Met, Aib alebo Nie;

A₂i je Val;

A27 je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha;

A31 je Val, Nie alebo Cha;

A₃₂jeHis;

A33 je Asn;

A34 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib;

RijeH;

R₂jeH; a R₃ je NH₂;

alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
10. Peptid podľa nároku 9, kde aspoň jedno z A3, Aj₂, Au, A₎₇, Au a A₃₄ je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
11. Peptid podľa nároku 10, kde uvedený peptid je [Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH2, [Aib¹⁹]hPTH(l34)NH2, [Aib³⁴]hPTH(l-34)NH2, [Aib¹⁶· ”]hPTH(l-34)NH2, [Aib³]hPTH(l-34)NH₂, [Aib¹⁷]hPTH(l-34)NH2 alebo [Aib^,2]hPTH(l-34)NH2; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
12. Peptid podľa nároku 1, kde aspoň jedno z A₇, Au, Au, A^, A₂4, A₂₇, A₂« a A31 je Cha a aspoň jedno z A₃, Ai₂, Au, Ap, Au, A19 a A34 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
13. Peptid podľa nároku 13, kde

A₃ je Ser alebo Aib;

As je íle;

A₇ je Leu alebo Cha;

As je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie;

Au je Leu alebo Cha;

Au je Leu alebo Cha;

Aj6 je Asn alebo Aib;

Aig je Met, Aib alebo Nie;

A₂i je Val;

A₂₇ je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha;

A31 je Val, Nie alebo Cha;

A₃₂je His;

A33 je Asn;

A34 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib;

Ri je H;

R₂jeH; a R₃jeNH₂;

alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
14. Peptid podľa nároku 13, kde aspoň jedno z A₇ a Au je Cha a aspoň jedno z Au, A19 a A34 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
15. Peptid podľa nároku 14, kde uvedený peptid je [Cha^7, , Nie^8,18, Aib^16,19, Tyr³⁴]hPTH(l34)NH2, [Cha^7, , Nie⁸· ^{18> 31}, Aib¹⁶’ ”, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2, [Cha⁷· , Aib¹⁹]hPTH(l34)NH2, [Cha^7, , Aib¹⁶]hPTH(l-34)NH2, [Cha⁷' , Nie⁸’¹⁸, Aib³⁴] hPTH(l-34)NH2 alebo [Cha^7,, Aib¹⁹, Lys³⁰]hPTH(l-34)NH2; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
16. Peptid podľa nároku 13, kde aspoň jedno z A₂₄, A₂₈ a A₃i ja Cha a aspoň jedno z Ai₆ a An je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
17. Peptid podľa nároku 16,kde uvedený peptid je [Cha²⁸, Nie^{8, 18}, Aib¹⁶’ ¹⁹, Tyr³⁴]hPTH(l34)NH2 alebo [Cha²⁸, Aib^16,19] PTH(1-34)NH2 alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
18. Peptid so vzorcom:

Ai-Val-A₃-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Asn-An-Ai₂-Lys-His-Ai5-Ai6-Ai7-Ai8-Ai9Arg-A₂i-GIu-A₂₃-A₂4-Arg-Lys-A₂7-A₂8-Gln-A₃o-A₃i-A₃₂-A₃₃-A₃4-R₃,

R₂ kde

Ai je Dap

A₃ je Ser, Thr alebo Aib;

A5 je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

A7 je Leu, íle, Nie, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je H, OH, halogén alebo CH₃;

Ae je Met, Nva, Leu, Val, íle, Cha alebo Nie;

An je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Ai₂ je Gly alebo Aib;

Au je Leu, Nie, íle, Cha, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Aieje Ser, Asn, Ala alebo Aib;

An je Ser, Thr alebo Aib;

Au je Met, Nva, Leu, Val, íle, Nie, Cha alebo Aib;

A19 je Glu alebo Aib;

A₂i je Val, Cha alebo Met;

A23 je Trp alebo Cha;

A24 je Leu alebo Cha;

A27 je Lys, Aib, Leu, hArg, Gin alebo Cha;

A28 je Leu alebo Cha;

A₃₀ je Asp alebo Lys;

A₃i je Val, Nie, Cha alebo je vynechané;

A32 je His alebo je vynechané;

A33 je Asn alebo je vynechané;

A34 je Phe, Tyr, Amp, Aib alebo je vynechané;

každé z Ri a R₂ je nezávisle H, alkyl C1-12, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.20, hydroxyalkyl C1-12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.20; alebo jedno a len jedno z Ri a R₂ je COEi, kde Ei je alkyl C1.12, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7.20, naftylalkyl Cn-20, hydroxyalkyl C1.12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7.20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.20; a

R3 je OH, NH₂, alkoxy skupina C1-12 alebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je uhľovodíková časť C1-12 a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že aspoň Aj je Dap, A₇ je β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe; A15 je βNal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, A₂7 je hArg alebo A31 je Nie; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
19. Peptid podľa nároku 18, kde Ai je Ser, Gly alebo Dap;

A₃ je Ser alebo Aib;

As je Met, Nva, Leu, Val, íle alebo Nie;

Ale je Asn alebo Aib;

Au je Met, Aib alebo Nie;

A₂i je Val;

A27 je Lys, Aib, Leu, hArg alebo Cha; A31 je Val, Nie alebo Cha;

A₃₂je His;

A33 je Asn;

A34 je Phe, Tyr, Amp alebo Aib;

R. je H;

R₂jeH; a R₃jeNH₂;

alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
20. Peptid podľa nároku 19, kde uvedený peptid je [Nle³¹]hPTH(l-34)NH2, [hArg²⁷]hPTH(l34)NH2 alebo [Dap¹, Nie^{8, 18}, Tyr³⁴]hPTH(l-34)NH2; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
21. Peptid so vzorcom

R.

\

Ai-Val-A3-Glu-A5-Gln-A7-A8-His-Aio-An-Ai2-Lys-Ai4-Ais-Ai6-Ai7-Ai8-Ai9I Arg-Arg-A22-A23-A24-A25-A26-A27“A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3, r₂ kde

Ai je Ala, Ser alebo Dap;

A3 je Ser alebo Aib;

A_s je His, íle alebo Cha;

A7 je Leu, Cha, Nie, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

As je Leu, Met alebo Cha;

Aio je Asp alebo Asn;

Au je Lys, Leu, Cha, Phe alebo β-Nal;

Au je Gly alebo Aib;

A14 je Ser alebo His;

Au je íle alebo Cha;

Auje Gin alebo Aib;

An je Asp alebo Aib;

Au je Leu, Aib alebo Cha;

A19 je Arg alebo Aib;

A22 je Phe, Glu, Aib alebo Cha;

A23 je Phe, Leu, Lys alebo Cha;

A₂₄ je Leu, Lys alebo Cha;

A25 je His, Aib alebo Glu;

A₂6 je His, Aib alebo Lys;

A₂7 je Leu, Lys alebo Cha;

A₂8 je íle, Leu, Lys alebo Cha;

A29 je Ala, Glu alebo Aib;

A30 je Glu, Cha, Aib alebo Lys;

A31 je íle, Leu, Cha, Lys alebo je vynechané;

A32 je His alebo je vynechané;

A33 je Thr alebo je vynechané;

A34 je Ala, Aib alebo je vynechané;

každé z Ri a R2 je nezávisle H, alkanyl C1-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.₂o, hydroxyalkyl Ci -12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7.20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.₂o; alebo jedno a len jedno z R] a R2 je COEi, kde Ei je alkyl C1.12, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.₂o, hydroxyalkyl C1-12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.₂o; a

R₃ je OH, NH₂, alkoxy skupina C|.|₂ alebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je uhľovodíková časť C ,.,₂ a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že aspoň jedno z A_s, A₇, A_g, An, Au, Ai_g, A22, A23, A₂₄, A27, A_2g, A₃₀alebo A31 je Cha, alebo aspoň jedno z A₃, A12, Au, A_n, Ai_g, A19, A₂₂, A₂₅, A₂₆, A₂₉, A30 alebo A34 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
22. Peptid podľa nároku 21, kde namiesto A₂₂ je Phe alebo Cha; A₂₃ je Phe alebo Cha; A₂s je His; A₂<5 je His; A₂7 je Leu alebo Cha; A₂₈ je íle alebo Cha; A₂₉ je Ala; A₃o je Glu alebo Lys; A₃i je íle alebo Cha; A₃₂ je His; A₃₃ je Thr; a A₃₄ je Ala; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
23. Peptid podľa nároku 22, kde aspoň jedno z A7 a Au je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
24. Peptid podľa nároku 22, kde aspoň jedno z A_]6 alebo Ai? je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
25. Peptid podľa nároku 21, kde A₂₂ je Glu, Aib alebo Cha; A₂₃ je Leu, Lys alebo Cha; A₂s je Aib alebo Glu; A₂₆ je Aib alebo Lys; A_2g je Leu, Lys alebo Cha; A₂₉ je Glu alebo Aib; A₃₀ je Cha, Aib alebo Lys; A₃i je Leu, Cha alebo Lys; A₃₂ je His; A₃₃ je Thr; a A₃₄ je Ala; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
26. Peptid podľa nároku 25, kde aspoň jedno z A7 a Au je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
27. Peptid podľa nároku 25, kde aspoň jedno z Aje alebo A19 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
28. Peptid so vzorcom:

Ri \

Ai-Val-As-Glu-As-Gln-Av-Ag-His-Aio-Aii-An-Lys-AH-Ais-Aie-An-Aig-Au! Aíg-Arg-A₂2~ A23-A₂4” A25-A26^-A27-A28^-A₂9^-A30-A31 ~ A32-A33“ A34-R3, r₂ kde

Ai je Ala, Ser alebo Dap;

A₃ je Ser alebo Aib;

Aj je His, íle alebo Cha;

A₇ je Leu, Cha, Nie, β-Nal, Trp, Pal, Phe alebo p-X-Phe, v ktorom X je OH, halogén alebo CH₃;

Ae je Leu, Met alebo Cha;

Aio je Asp alebo Asn;

Au je Lys, Leu, Cha, Phe alebo β-Nal;

An je Gly alebo Aib;

Am je Ser alebo His;

Au je íle alebo Cha;

Au je Gin alebo Aib;

Ap je Asp alebo Aib;

Au je Leu, Aib alebo Cha;

An je Arg alebo Aib;

A22 je Phe, Glu, Aib alebo Cha;

A23 je Phe, Leu, Lys alebo Cha;

A₂4 je Leu, Lys alebo Cha;

A25 je His, Aib alebo Glu;

A₂6 je His, Aib alebo Lys,

A27 je Leu, Lys alebo Cha;

A₂₈ je íle, Leu, Lys alebo Cha;

A29 je Ala, Glu alebo Aib;

A₃₀ je Glu, Cha, Aib alebo Lys;

A₃i je íle, Leu, Cha, Lys alebo je vynechané;

A₃2 je His alebo je vynechané;

A33 je Thr alebo je vynechané;

A34 je Ala alebo je vynechané;

každé z R, a R₂ je nezávisle H, alkanyl C1.12, fenylalkyl C7.20, naftylalkyl C11-20, hydroxyalkyl Cm₂, hydroxyalkenyl C₂.i₂, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.20; alebo jedno a len jedno z Ri a R₂ je COEi, kde Ej je alkyl Ci_i₂, alkenyl C2-12, fenylalkyl C7-20, naftylalkyl Cn.20, hydroxyalkyl C1.12, hydroxyalkenyl C2-12, hydroxyfenylalkyl C7-20 alebo hydroxynaftylalkyl Cn.20; a

R₃ je OH, NH2, alkoxy skupina C1.12 alebo NH-Y-CH₂-Z, kde Y je uhľovodíková časť Ci.,2 a Z je H, OH, CO₂H alebo CONH₂;

za predpokladu, že aspoň jedno z A23, A24, A₂₇, A₂e alebo A_3J je Lys; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
29. Peptid podľa nároku 28, kde A22 je Glu, Aib alebo Cha; A₂₃ je Leu, Lys alebo Cha; A25 je Aib alebo Glu; A₂₆ je Aib alebo Lys; A_2g je Leu, Lys alebo Cha; A₂g je Glu alebo Aib; A₃₀ je Cha, Aib alebo Lys; A31 je Leu, Cha alebo Lys; A₃₂ je His; A₃₃ je Thr a A₃₄ je Ala; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
30. Peptid podľa nároku 29, kde aspoň jedno z A₇ a An je Cha; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
31. Peptid podľa nároku 29, kde aspoň jedno z Aie alebo A19 je Aib; alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.