SK3062001A3 - Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity - Google Patents
Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity Download PDFInfo
- Publication number
- SK3062001A3 SK3062001A3 SK306-2001A SK3062001A SK3062001A3 SK 3062001 A3 SK3062001 A3 SK 3062001A3 SK 3062001 A SK3062001 A SK 3062001A SK 3062001 A3 SK3062001 A3 SK 3062001A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- opgl
- polypeptide
- nucleic acid
- animal
- cell
- Prior art date
Links
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 title claims abstract description 317
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 title claims abstract description 317
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 101
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 27
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 title abstract 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 80
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 78
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 59
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 42
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 38
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 87
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 68
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 66
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 52
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 50
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 45
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 39
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 39
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 38
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 35
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 31
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 31
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 claims description 29
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 28
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 claims description 27
- 102000008108 Osteoprotegerin Human genes 0.000 claims description 27
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 26
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 claims description 24
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 claims description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 21
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 18
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 17
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 16
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 16
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 15
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 14
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 13
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 12
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 11
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 10
- 101000830603 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Proteins 0.000 claims description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 9
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 9
- 102000053529 human TNFSF11 Human genes 0.000 claims description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 5
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 4
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 4
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 claims description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 4
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 4
- 108700027921 interferon tau Proteins 0.000 claims description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 4
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 3
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 3
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 3
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 claims description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims description 2
- 102100039328 Endoplasmin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010036652 HSC70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027421 Heat shock cognate 71 kDa protein Human genes 0.000 claims description 2
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000004030 farnesyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000002686 geranylgeranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 108010017007 glucose-regulated proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 claims description 2
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 2
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 claims 2
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 claims 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims 2
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 claims 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 20
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 19
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 abstract 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 abstract 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 74
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 55
- 101000830602 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Proteins 0.000 description 30
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 24
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 23
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 21
- KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 19
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 19
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 18
- KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N Ala-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CN=CN1 KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N 0.000 description 17
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- HZDQUVQEVVYDDA-ACRUOGEOSA-N Tyr-Tyr-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HZDQUVQEVVYDDA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 17
- 108010075431 glycyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 17
- KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N Arg-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 16
- KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N Gly-Gly-Phe Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 16
- SYVMEYAPXRRXAN-MXAVVETBSA-N Ile-Cys-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N SYVMEYAPXRRXAN-MXAVVETBSA-N 0.000 description 16
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 16
- 108010039747 glycyl-seryl-histidyl-lysine Proteins 0.000 description 16
- TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N Asp-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 15
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 15
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 15
- LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N His-Asp-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 15
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 15
- NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N NVNPWELENFJOHH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 15
- RTXKJFWHEBTABY-IHPCNDPISA-N Ser-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N RTXKJFWHEBTABY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 15
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 14
- RMOKGALPSPOYKE-KATARQTJSA-N Lys-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RMOKGALPSPOYKE-KATARQTJSA-N 0.000 description 14
- DSGYZICNAMEJOC-AVGNSLFASA-N Ser-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O DSGYZICNAMEJOC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 14
- 108010033670 threonyl-aspartyl-tyrosine Proteins 0.000 description 14
- DCLBXIWHLVEPMQ-JRQIVUDYSA-N Thr-Asp-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DCLBXIWHLVEPMQ-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 13
- UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N Trp-Ser-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N UJGDFQRPYGJBEH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 13
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 13
- FFAUOCITXBMRBT-YTFOTSKYSA-N Ile-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FFAUOCITXBMRBT-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 12
- QQPMHUCGDRJFQK-RHYQMDGZSA-N Met-Thr-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QQPMHUCGDRJFQK-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 12
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 12
- DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 12
- HYVLNORXQGKONN-NUTKFTJISA-N Trp-Ala-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 HYVLNORXQGKONN-NUTKFTJISA-N 0.000 description 12
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- PQKCQZHAGILVIM-NKIYYHGXSA-N His-Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(O)=O PQKCQZHAGILVIM-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 10
- ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N Lys-Gly-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 10
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 10
- PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 9
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 9
- VBOHCKYFZJZSJR-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-chloroethanol Chemical compound NC(Cl)CO VBOHCKYFZJZSJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 8
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 8
- JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N Phe-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 8
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 8
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- UFOWQBYMUILSRK-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UFOWQBYMUILSRK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 7
- 208000002865 osteopetrosis Diseases 0.000 description 7
- -1 trehalose diesters Chemical class 0.000 description 7
- KVMPVNGOKHTUHZ-GCJQMDKQSA-N Asp-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KVMPVNGOKHTUHZ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 6
- FIAKNCXQFFKSSI-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FIAKNCXQFFKSSI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 6
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 6
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- QPOUERMDWKKZEG-HJPIBITLSA-N Tyr-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QPOUERMDWKKZEG-HJPIBITLSA-N 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 6
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 6
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 6
- VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N Ala-Leu-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 5
- VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- WHKLDLQHSYAVGU-ACRUOGEOSA-N His-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O WHKLDLQHSYAVGU-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 5
- AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N Ile-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 5
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 5
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 5
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- LHEZGZQRLDBSRR-WDCWCFNPSA-N Thr-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LHEZGZQRLDBSRR-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 5
- XVHAUVJXBFGUPC-RPTUDFQQSA-N Thr-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XVHAUVJXBFGUPC-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 5
- OKDNSNWJEXAMSU-IRXDYDNUSA-N Tyr-Phe-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OKDNSNWJEXAMSU-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 5
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 5
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 5
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 5
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 4
- MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N Arg-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N MMGCRPZQZWTZTA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- NYDIVDKTULRINZ-AVGNSLFASA-N Arg-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NYDIVDKTULRINZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 4
- JEKIARHEWURQRJ-BZSNNMDCSA-N Cys-Phe-Tyr Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N JEKIARHEWURQRJ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N Glu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 4
- QMOSCLNJVKSHHU-YUMQZZPRSA-N Glu-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O QMOSCLNJVKSHHU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 4
- MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N Gly-Ala-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- IMRNSEPSPFQNHF-STQMWFEESA-N Gly-Ser-Trp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C12)C(=O)O IMRNSEPSPFQNHF-STQMWFEESA-N 0.000 description 4
- AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N His-Glu-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N Ile-Gly-Ile Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 4
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 4
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- IBSGMIPRBMPMHE-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IBSGMIPRBMPMHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- JQEBITVYKUCBMC-SRVKXCTJSA-N Met-Arg-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JQEBITVYKUCBMC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 4
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N Ser-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 4
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 4
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 108010000998 wheylin-2 peptide Proteins 0.000 description 4
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 3
- WZUMSFQGYWBRNX-AVGNSLFASA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 WZUMSFQGYWBRNX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- XHNLCGXYBXNRIS-BJDJZHNGSA-N Ala-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O XHNLCGXYBXNRIS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 3
- WEZNQZHACPSMEF-QEJZJMRPSA-N Ala-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 WEZNQZHACPSMEF-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 3
- NHWYNIZWLJYZAG-XVYDVKMFSA-N Ala-Ser-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N NHWYNIZWLJYZAG-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 3
- PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- OOIMKQRCPJBGPD-XUXIUFHCSA-N Arg-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OOIMKQRCPJBGPD-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 3
- WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- GZXOUBTUAUAVHD-ACZMJKKPSA-N Asn-Ser-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GZXOUBTUAUAVHD-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZHNHJYYFCGUZNQ-KBIXCLLPSA-N Glu-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZHNHJYYFCGUZNQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- 102100031132 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 3
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Chemical group 0.000 description 3
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- RCHFYMASWAZQQZ-ZANVPECISA-N Gly-Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CN)=CNC2=C1 RCHFYMASWAZQQZ-ZANVPECISA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- TVMNTHXFRSXZGR-IHRRRGAJSA-N His-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TVMNTHXFRSXZGR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- RDFIVFHPOSOXMW-ACRUOGEOSA-N Leu-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RDFIVFHPOSOXMW-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 3
- DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N Lys-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O OVAOHZIOUBEQCJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 3
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 3
- OIFHHODAXVWKJN-ULQDDVLXSA-N Met-Phe-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OIFHHODAXVWKJN-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- COAHUSQNSVFYBW-FXQIFTODSA-N Ser-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O COAHUSQNSVFYBW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- RJHJPZQOMKCSTP-CIUDSAMLSA-N Ser-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJHJPZQOMKCSTP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N Ala-Asp-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N Ala-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- JSHVMZANPXCDTL-GMOBBJLQSA-N Arg-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JSHVMZANPXCDTL-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- JQHASVQBAKRJKD-GUBZILKMSA-N Arg-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JQHASVQBAKRJKD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N Asn-Ser-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 2
- AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N Asp-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- BPAUXFVCSYQDQX-JRQIVUDYSA-N Asp-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O BPAUXFVCSYQDQX-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N Gly-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(O)=O ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- IDXZDKMBEXLFMB-HGNGGELXSA-N His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 IDXZDKMBEXLFMB-HGNGGELXSA-N 0.000 description 2
- JJHWJUYYTWYXPL-PYJNHQTQSA-N His-Ile-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 JJHWJUYYTWYXPL-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 2
- DRKZDEFADVYTLU-AVGNSLFASA-N His-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DRKZDEFADVYTLU-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 2
- TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N Ile-Arg-Ala Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(C)C(O)=O)CCCN=C(N)N TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 2
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- RIHIGSWBLHSGLV-CQDKDKBSSA-N Leu-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RIHIGSWBLHSGLV-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N Met-Lys-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- UDOYVQQKQHZYMB-DCAQKATOSA-N Met-Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UDOYVQQKQHZYMB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YIGCDRZMZNDENK-UNQGMJICSA-N Met-Thr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O YIGCDRZMZNDENK-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 2
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- YRKFKTQRVBJYLT-CQDKDKBSSA-N Phe-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 YRKFKTQRVBJYLT-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N Phe-His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 2
- AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N Pro-His-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N Ser-His Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- CLKKNZQUQMZDGD-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CC1=CN=CN1 CLKKNZQUQMZDGD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MHVXPTAMDHLTHB-IHPCNDPISA-N Ser-Phe-Trp Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MHVXPTAMDHLTHB-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N Thr-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 2
- JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N Thr-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- JONPRIHUYSPIMA-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ala-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JONPRIHUYSPIMA-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- FIRUOPRJKCBLST-KKUMJFAQSA-N Tyr-His-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O FIRUOPRJKCBLST-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 2
- ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- DJIJBQYBDKGDIS-JYJNAYRXSA-N Tyr-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(C)C)C(O)=O DJIJBQYBDKGDIS-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QZCJOXAIQXPLNS-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4a,5,5,6,6,7,7,8,8,8a-octadecafluoronaphthalene 4-(2-aminoethyl)benzene-1,2-diol Chemical compound NCCc1ccc(O)c(O)c1.FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C1(F)F QZCJOXAIQXPLNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N Ala-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VEAPAYQQLSEKEM-GUBZILKMSA-N Ala-Met-Met Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O VEAPAYQQLSEKEM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DYXOFPBJBAHWFY-JBDRJPRFSA-N Ala-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N DYXOFPBJBAHWFY-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710133776 Alcohol dehydrogenase class-3 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BHSYMWWMVRPCPA-CYDGBPFRSA-N Arg-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N BHSYMWWMVRPCPA-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N Arg-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- LKDHUGLXOHYINY-XUXIUFHCSA-N Arg-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LKDHUGLXOHYINY-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N Arg-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N Arg-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N Asn-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FVKHEKVYFTZWDX-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UBGGJTMETLEXJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZAESWDKAMDVHLL-RCOVLWMOSA-N Asn-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O ZAESWDKAMDVHLL-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XWKBWZXGNXTDKY-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XWKBWZXGNXTDKY-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 241000701922 Bovine parvovirus Species 0.000 description 1
- PIGTXFOGKFOFTO-PPEDVFHSSA-N CC1(C)CC[C@@]2([C@H](O)C[C@]3(C)C(=CC[C@@H]4[C@@]5(C)CCC(O[C@@H]6O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)C(O)=O)[C@@](C)(C=O)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]2C1)C(O)=O Chemical compound CC1(C)CC[C@@]2([C@H](O)C[C@]3(C)C(=CC[C@@H]4[C@@]5(C)CCC(O[C@@H]6O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)C(O)=O)[C@@](C)(C=O)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]2C1)C(O)=O PIGTXFOGKFOFTO-PPEDVFHSSA-N 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000037164 Collema parvum Species 0.000 description 1
- 108010078018 Complement C3d Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- YFAFBAPQHGULQT-HJPIBITLSA-N Cys-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N YFAFBAPQHGULQT-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- UDDITVWSXPEAIQ-IHRRRGAJSA-N Cys-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UDDITVWSXPEAIQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N Cys-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108010074124 Escherichia coli Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N Gly-Thr-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 RHRLHXQWHCNJKR-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710165610 Heat-stable 19 kDa antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CTGZVVQVIBSOBB-AVGNSLFASA-N His-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CTGZVVQVIBSOBB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MCGOGXFMKHPMSQ-AVGNSLFASA-N His-Val-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MCGOGXFMKHPMSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- PKGGWLOLRLOPGK-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PKGGWLOLRLOPGK-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- CAHCWMVNBZJVAW-NAKRPEOUSA-N Ile-Pro-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N CAHCWMVNBZJVAW-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- JODPUDMBQBIWCK-GHCJXIJMSA-N Ile-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JODPUDMBQBIWCK-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- ZDNNDIJTUHQCAM-MXAVVETBSA-N Ile-Ser-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N ZDNNDIJTUHQCAM-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- HQLSBZFLOUHQJK-STECZYCISA-N Ile-Tyr-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HQLSBZFLOUHQJK-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N Leu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- QUAAUWNLWMLERT-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QUAAUWNLWMLERT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MMEDVBWCMGRKKC-GARJFASQSA-N Leu-Asp-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N MMEDVBWCMGRKKC-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N Leu-Asp-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PBGDOSARRIJMEV-DLOVCJGASA-N Leu-His-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PBGDOSARRIJMEV-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N Leu-His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NJMXCOOEFLMZSR-AVGNSLFASA-N Leu-Met-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NJMXCOOEFLMZSR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- MPOHDJKRBLVGCT-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N MPOHDJKRBLVGCT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WQWZXKWOEVSGQM-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WQWZXKWOEVSGQM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N Lys-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CCCN=C(N)N NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N Lys-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N Lys-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010038049 Mating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- DNDVVILEHVMWIS-LPEHRKFASA-N Met-Asp-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DNDVVILEHVMWIS-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 108090000143 Mouse Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 101100369995 Mus musculus Tnfsf11 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N Phe-Arg-Ala Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- HTTYNOXBBOWZTB-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N HTTYNOXBBOWZTB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OHUXOEXBXPZKPT-STQMWFEESA-N Phe-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 OHUXOEXBXPZKPT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- DMEYUTSDVRCWRS-ULQDDVLXSA-N Phe-Lys-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DMEYUTSDVRCWRS-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- GPSMLZQVIIYLDK-ULQDDVLXSA-N Phe-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GPSMLZQVIIYLDK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- AOKZOUGUMLBPSS-PMVMPFDFSA-N Phe-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AOKZOUGUMLBPSS-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710112477 Phycobiliprotein ApcE Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N Ser-Asn-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MUARUIBTKQJKFY-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUARUIBTKQJKFY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N Ser-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CC=CC=C1 JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N Ser-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061363 Skeletal injury Diseases 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKEKWDJCJSPXNI-IRIUXVKKSA-N Thr-Glu-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LKEKWDJCJSPXNI-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C)C([O-])=O)=CNC2=C1 OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- OGZRZMJASKKMJZ-XIRDDKMYSA-N Trp-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N OGZRZMJASKKMJZ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- SJWLQICJOBMOGG-PMVMPFDFSA-N Trp-Tyr-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)N[C@@H](CC4=CN=CN4)C(=O)O)N SJWLQICJOBMOGG-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091005956 Type II transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- QRCBQDPRKMYTMB-IHPCNDPISA-N Tyr-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N QRCBQDPRKMYTMB-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N Val-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C(C)C)N)O MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N Val-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N Valylglycine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005475 Vascular calcification Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- INJRKJPEYSAMPD-UHFFFAOYSA-N aluminum;silicic acid;hydrate Chemical compound O.[Al].[Al].O[Si](O)(O)O INJRKJPEYSAMPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 230000014461 bone development Effects 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229940087373 calcium oxide Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 229960004887 ferric hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000121 hypercalcemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- IEECXTSVVFWGSE-UHFFFAOYSA-M iron(3+);oxygen(2-);hydroxide Chemical compound [OH-].[O-2].[Fe+3] IEECXTSVVFWGSE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical group [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 231100001055 skeletal defect Toxicity 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/03—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Description
Predkladaný vynález sa týka zlepšenia terapie a prevencie osteoporózy a iných ochorení charakterizovaných pokračujúcou stratou kosťového tkaniva. Presnejšie, predkladaný vynález poskytuje spôsob na zníženie aktivity ligandu osteoprotegerinu (OPGL) umožnením produkcie protilátok proti OPGL pri jedincoch trpiacich osteoporózou alebo rizikových z hladiska osteoporózy. Predkladaný vynález tiež poskytuje spôsoby produkcie modifikovaných OPGL použitelných v tomto spôsobu, rovnako ako modifikovaných OPGL ako takých. Predkladaný vynález tiež zahŕňa fragmenty nukleových kyselín kódujúce také modifikované OPGL, rovnako ako vektory inkorporujúce tieto fragmenty nukleových kyselín a hostitelské bunky a bunkové línie transformované týmito vektory. Vynález tiež poskytuje spôsob pre identifikáciu analógov OPGL, ktoré sú použitelné v spôsobu podlá predkladaného vynálezu, rovnako ako prostriedkov obsahujúcich modifikované OPGL alebo obsahujúcich nukleové kyseliny kódujúce analógy OPGL.
Doterajší stav techniky
Osteoporóza je významný a narastajúci zdravotnícky problém vo svete. Postihuje približne 75 miliónov ludí v Spojených štátoch amerických, Európe a Japonsku. Preto ide o najčastejšie systémové ochorenie kostí v priemyselných krajinách.
Osteoporóza postihuje jednu z štyroch žien po menopauze a väčšinu žien v starobe, vrátane významného počtu mužov. Náklady na osteoporózu v Spojených štátoch amerických s 15 mi2 liónmi postihnutých boli v roku 1984 vyčíslené na 3,8 miliárd USD. Extrapoláciou je možné odhadovať náklady v svete na približne 20 miliárd USD.
Osteoporóza je systémové ochorenie skeletu charakterizované stratou kostovej hmoty a zhoršením mikroarchitektúry kostového tkaniva, s následným zvýšením krehkosti kostí a náchylnosti k fraktúram. Hoci sú postihnuté všetky kosti, sú najčastejšími fraktúrami fraktúra chrbtovej kosti, zápästia a bedrá. Riziko vzniku osteoporózy sa zvyšuje s vekom a je vyššie u žien ako u mužov. Zdá sa, že etiológia spočíva v mechanizmu, ktorý je základom zrýchlenia normálnej straty kostovej hmoty, ku ktorej dochádza v menopauze u žien a ku ktorej dochádza pri všetkých jedincoch s pokračujúcim starnutím.
Vrchol množstva kostovej hmoty je dosiahnutý v približne 35 rokoch veku. Po dosiahnutí vrcholu sa množstvo kostovej hmoty znižuje v dôsledku nerovnováhy v remodelovaní. Z kostí sa stráca ak minerálna, tak organická matrix, ale zostáva zachovaná jej základná organizácia.
Kost sa skladá z mineralizovanej extracelulárnej matrice zloženej z rôznych proteínov a proteoglykánov; základnou zložkou je kolagén typu I. Minerálom obsiahnutým v extracelulárnej matrici je hydroxyapatit (Ca3(PO4)2.Ca(OH)2)· Kost sa nepretržite modeluje počas rastu a vývoja a remodeluje sa počas života v reakcii na fyzikálne a chemické signály.
Rast, vývoj a udržovanie kostí sú značne regulované procesy, ktoré na bunkovej úrovni zahŕňajú koordinovanú reguláciu buniek vytvárajúcich kost (osteoblastov) a buniek resorbujú3 cich kosť (osteoklastov). Množstvo kostovej hmoty odráža rovnováhu medzi tvorbou a resorpciou kosti.
Osteoblasty vznikajú z mezenchýmových kmeňových buniek a produkujú kostovú matricu počas vývoja, po poranení kosti a počas normálnej remodelácie kosti, ku ktorej dochádza počas života. Osteoklasty sa diferencujú z hematopoetických prekurzorov monocytárnej-makrofágovej línie a resorbujú kostovú matricu.
Nerovnováha medzi funkciou osteoblastov a osteoklastov môže viest k vzniku skeletálnych abnormalít charakterizovaných zmnožením kostovej hmoty (osteopetróza) alebo úbytkom kostovej hmoty (osteoporóza).
Štúdie osteopetrózy na mutantných myšiach preukázali, že genetické defekty vo vývoji, zrení a/alebo aktivácii osteoklastov vedú k zníženiu resorpcie kosti a uniformné k ťažkej osteopetróze (Marks, 1989). Avšak relatívne málo je dosial známe o solubilných faktoroch, ktoré za fyziologického stavu regulujú vývoj osteoklastov.
Nedávno boli charakterizované dva proteíny, ktoré sa účastnia tejto regulácie (Simonet et al., 1997; Lacey et al., 1998). Týmito dvoma proteínmi sú osteoprotegerin a ligand osteoprotegerinu.
Osteoprotegerin je nový secernovaný člen rodiny receptoru pre faktor nekrózy nádorov. In vitro blokuje osteoprotegerin osteoklastogenézu spôsobom závislým od dávky. Transgénne myši exprimujúce osteoprotegerin vykazujú generalizované zvýšenie hustoty kostí (osteopetrózu) asociovanú so znížením osteoklastov. Podanie rekombinantného osteoprotegerinu vyvoláva po4 dobné účinky pri normálnych myšiach a chráni proti úbytku kostovej hmoty indukovaného ovarektómiou pri potkanoch (Simonet et al., 1997). Ďalej, pri osteoprotegerin-deficientných myšiach (knock-outované myši), ktoré sú normálne v čase pôrodu, sa časne vyvíja osteoporóza a arteriálna kalcifikácia (Bucay et al., 1998). Tieto pozorovania ukazujú na možnosť, že osteoprotegerin blokuje diferenciáciu osteoklastov, základného, pokial nie jediného typu buniek resorbujúcich kosť, čo naznačuje, že môže pôsobiť ako humorálny regulátor resorpcie kosti. Osteoprotegerin je predmetom WO 97/23614.
Predpokladá sa, že osteoprotegerin môže vykazovať svoj účinok väzbou na a neutralizáciou faktoru, ktorý stimuluje vývoj osteoklastov, a takto môže inhibovať zrenie osteoklastov (Simonet et al., 1997).
Ligand pre osteoprotegerin (OPGL) je člen cytokinovej rodiny faktoru nekrózy nádorov a existuje ako v solubilnej forme, tak vo forme viazanej na membránu. OPGL sa viaže na osteoprotegerin s väzbovou afinitou 4 nM. In vitro aktivuje OPGL zrelé osteoklasty a moduluje tvorbu osteoklastov z prekursorov kostovej drene v prítomnosti CSF-1. Tiež bolo demonštrované, že OPGL sa viaže na povrch progenitorov osteoklastov v kostovej dreni ošetrenej CSF-1. Receptor pre OPGL na týchto hematopoetických progenitorových bunkách je však neznámy. Rekombinantný solubilný OPGL je silný induktor resorpcie kosti in vivo (Lacey et al., 1998).
Opis OPGL
OPGL je syntetizovaný ako transmembránový proteín II typu skladajúci sa z 317 aminokyselín (ludský, SEQ ID NO: 2) alebo z 316 aminokyselín (myší, SEQ ID NO: 4 a 6). Priradenie týchto
dvoch aminokyselinových sekvencii ukazuje, že identické aminokyselinové zvyšky sa nachádzajú v 87% homologných pozícií.
Aminokyselinová sekvencia OPGL obsahuje krátku cytoplazmatickú doménu na N-konci, po ktorej nasleduje domnelý transmembránový región medzi aminokyselinovými zvyškami 49 a 69. Podía jeho homológie s faktorom nekrózy nádorov a sa predpokladalo, že extracelulárna čas£ OPGL by sa mala skladat z dvoch domén; stopkového regiónu v rozsahu od aminokyselinového zvyšku 70 až 157 a aktívnej ligandovej skupiny v rozsahu od aminokyselinového zvyšku 158 do C-konca.
Najviac príbuzným proteínom k OPGL sa zdá byt cytokin indukujúci apoptózu - TRAIL - s menej ako 25% identických aminokyselinových zvyškov. OPGL bol tiež nedávno klonovaný v inej súvislosti a bol označený ako TRANCE (Wong et al.,
1997, J. Biol. Chem. 272: 25190-25194) a RANKL, v príslušnom poradí (Anderson et al., 1997, Náture 390: 175-179. Proteín je tiež známy ako osteoklastový diferenciačný faktor (ODF).
Niekolko N-koncových delečných variantov myšieho oPGL bolo exprimovaných v E. coli a prečistých. Tieto varianty sa skladali z aminokyselinových zvyškov 75-316, 128-316, 137-316 a 158-316, v príslušnom poradí. Tri najkratšie varianty mali podobnú štruktúru β-listu podía analýz cirkulárneho dichroizmu a všetky boli schopné väzby na osteoprotegerin. Významnejšie je, že tieto tri varianty boli aktívne v testoch in vitro (Lacey et al., 1998).
Najkratší variant bol študovaný dalej. Podobne ako faktor nekrózy nádorov a existuje tento variant OPGL v roztoku ako trimér a tvorí 3:3 komplexy pri inkubácii s osteoprotegerinom. Bolo zistené, že väzbová afinita je 4 nM. Tento variant indu6 kuje významné zvýšenie ionizovaného vápnika v krvi (hyperkalcémiu) u myší in vivo. Súčasné podanie osteoprotegerinu významne redukuje tento hyperkalcemický efekt OPGL.
Najdlhší variant (aminokyselinové zvyšky 75-316) OPGL sa neviaže na osteoprotegerin a nemá žiadnu biologickú aktivitu.
V čase konštrukcie N-koncových delečných variantov nebolo prirodzené štepiace miesto v OPGL známe. Expresia kompletného OPGL v ludských 293 fibroblastoch viedla k vzniku solubilného OPGL začínajúceho aminokyselinovým zvyškom 139 myšieho proteínu alebo homológnym aminokyselinovým zvyškom 140 v ludskom proteíne. Tieto expresné štúdie tiež ukázali, že solubilný OPGL vzniknutý expresiou v ludských bunkách je glykozylovaný. Toto nie je prekvapivé, pretože ako myší, tak ludský OPGL obsahujú tri potenciálne glykozylačné miesta v C-koncovej ligandovej doméne.
Koncentrácie osteoprotegerinu v krvi a v tkanivách nie sú známe, ale proteín má významnú biologickou aktivitu v koncentráciách 1 ng/ml.
Biologická aktivita OPGL
OPGL je účinný diferenciačný faktor pre osteoklasty pri kombinácii s CSF-1. Ani jedna z týchto zložiek nie je samostatne schopná indukovať diferenciáciu osteoklastov z progenitorových buniek.
OPGL je účinný aktivátor zrelých osteoklastov. Samotný aktivuje OPGL zrelé osteoklasty k resorpcii kosti. Nebolo pozorované, že by OPGL pôsobil ako rastový faktor pre osteoklasty alebo ako faktor podporujúci prežívanie osteoklastov v týchto pokusoch.
Nezdá sa, že by bolo pôsobenie OPGL obmedzené druhovo, pretože myší OPGL tiež indukuje tvorbu osteoklastov v kultúrach ludských mononukleárnych buniek periférnej krve.
Podstata vvnálezu
Predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie novej terapie proti stavom charakterizovaným nadmernou resorpciou kostí, ako je osteoporóza. Ďalším predmetom je vývoj autovakcíny proti OPGL, za účelom novej terapie osteoporózy a ďalších patologických ochorení charakterizovaných nadmernou resorpciou kosti.
Zistili sme, že údaje uvedené hore ukazujú na patofyziologickú úlohu OPGL. Dôkaz in vivo je čiastočný alebo nepriamy, ale podl’a nášho názoru významný, predovšetkým v kombinácii s priamym dôkazom.
Pozorovanie, že injekcia rekombinantnej C-koncovej domény OPGL myšiam vedie k ťažkej hyperkalcémii podlá nášho názoru ukazuje priamo na patofyziologickú úlohu.
Nepriamy dôkaz pochádza od osteoprotegerin-deficientných myší (knock-outovaných myší), ktoré sú normálne v čase pôrodu a pri ktorých sa časne vyvíja osteoporóza. Toto ukazuje, že odstránenie proteínu, ktorý sa viaže na OPGL a neutralizuje jeho účinky, vedie k osteoporóze. Nazdávame sa, že najpravdepodobnejšou príčinou je zvýšené zrenie a aktivácia osteoklastov spôsobené OPGL.
I
Dvoma ďalšími nepriamymi dôkazmi je to, že ako pri myšiach transgénnych pre osteoprotegerin, tak pri myšiach, ktorým sa podal injekčné osteoprotegerin, sa vyvinula osteopetróza. Toto ukazuje, že neprirodzene vysoké koncentrácie proteínu, ktorý viaže OPGL a neutralizuje jeho účinky, vedú k vzniku osteopetrózy. Predpokladáme, že toto má dôsledok v zníženom zrení a aktivácii osteoklastov, čo je spôsobené neutralizáciou OPGL.
Preto navrhujeme model, v ktorom OPGL a osteoprotegerin pôsobia ako pozitívne a negatívne regulátory vývoja osteoklastov, v príslušnom poradí. Inými slovami, OPGL podporuje resorpciu kosti, zatial čo osteoprotegerin inhibuje resorpciu kosti.
Preto môže byt, vzhladom na osteoporózu, OPGL považovaný za patogénne činidlo, ktoré podporuje resorpciu kosti, ktorá nakoniec vedie k osteoporóze. Obdobne, osteoprotegerin môže byt považovaný za terapeutické činidlo, ktoré pôsobí proti patogénnemu činidlu neutralizáciou jeho účinkov.
Preto navrhujeme inhibíciu diferenciácie/zrania/tvorby osteoklastov a aktivácie osteoklastov pomocou produkcie protilátok schopných neutralizovať OPGL in vivo, čo je bezpečný a účinný prostriedok na liečbu/zmiernenie a/alebo prevenciu osteoporózy a iných ochorení charakterizovaných nadmernou resorpciou kosti v porovnaní s rýchlosťou tvorby kosti.
Preto, v najširšom a nejvšeobecnejšom aspekte, predkladaný vynález spočíva v spôsobu in vivo inhibície aktivity ligandu pre osteoprotegerin (OPGL) pri zvierati, vrátane človeka, kde uvedený spôsob zahŕňa účinnú prezentáciu imuno9 logicky účinného činidla imunitnému systému živočícha, kde uvedené činidlo je vybrané z
- aspoň jedného OPGL polypeptidu alebo jeho subsekvencie, ktoré boli pripravené tak, že imunizácia živočícha OPGL polypeptidom alebo jeho subsekvenciou indukuje produkciu protilátok proti OPGL polypeptidu; a/alebo
- aspoň jedného analógu OPGL obsahujúceho modifikáciu OPGHL polypeptidu, kde imunizácia živočícha analógom indukuje tvorbu protilátok proti OPGL polypeptidu.
Najzaujímavejším aspektom tohto prístupu je to, že napríklad osteoporóza môže byt kontrolovaná periodickými, ale nie príliš častými imunizáciami, čo je v protiklade s inými terapeutickými postupmi, ktoré vyžadujú časté (napríklad denné) podávanie osteoprotegerinu alebo molekúl majúcich väzbovú afinitu k analógom OPGL. Predpokladá sa, že 1-4 injekcie za rok imunogénneho prostriedku budú dostatočné na získanie požadovaného účinku, zatial čo podávanie osteoprotegerinu alebo iných inhibítorov aktivity OPGL bude vyžadovať denné podávanie.
Vynález sa tiež týka analógov OPGL, rovnako ako fragmentov nukleových kyselín kódujúcich tieto analógy. Vynález tiež zahŕňa imunogénne prostriedky obsahujúce analógy alebo fragmenty nukleových kyselín.
Vynález sa tiež týka spôsobu na identifikáciu analógov OPGL, rovnako ako prípravy prostriedkov obsahujúcich analógy OPGL.
Nakoniec sa vynález týka spôsobu liečby osteoporózy a iných ochorení charakterizovaných nadmernou resorpciou kostí, ktorý zahŕňa podanie non-OPGL molekuly (zvyčajne protilátky), ktorá blokuje interakciu medzi OPGL a jeho receptorom na osteoklastoch.
Podrobný opis vynálezu
Definície
Nasledujúce termíny použité v predkladanom vynáleze a patentových nárokoch budú definované a podrobne vysvetlené za účelom jednoznačného pochopenia vynálezu.
Termín T-lymfocyty označuje lymfocyty pôvodom z týmusu, ktoré sú zodpovedné za rôzne bunkami sprostredkované imunitné reakcie, rovnako ako za pomocnú aktivitu v humorálnej imunitnej reakcii. Obdobne, termín B-lymfocyty označuje lymfocyty produkujúce protilátky.
Termín OPGL polypeptid označuje polypeptidy majúce aminokyselinovú sekvenciu hore uvedených OPGL proteínov získaných od ludí alebo od myší (alebo ich skrátenej formy bez významnej časti epitopov pre B-lymfocyty s intaktným OPGL), ale tiež polypeptidy majúce aminokyselinovú sekvenciu identickú k analógom týchto dvoch proteínov izolovaným z iných druhov. Termín zahŕňa tiež neglykozylované formy OPGL, ktoré sú pripravené v prokaryotickom systému, rovnako ako formy majúce iný charakter glykozyláce spôsobený napríklad použitím kvasinkových alebo iných ako cicavčích eukaryotických expresných systémov. Je potrebné poznamenať, že termín OPGL polypeptid označuje polypeptid, ktorý je za normálnych okolností neimunogénny, keď je prítomný pri liečenom zvierati. Inými slovami, OPGL polypeptid je vlastný proteín alebo analóg takého vlastného proteínu, ktorý normálne nevyvoláva imunitnú odpoveď proti OPGL pri danom zvierati.
OPGL analóg je OPGL polypeptid, ktorého primárna štruktúra bola zmenená. Takou zmenou môže byť, napríklad, fúzia OPGL polypeptidu do vhodného fúzneho partnera (tzn. zmena primárnej štruktúry zahŕňajúca výlučne C- a/alebo N-koncové adície aminokyselinových zvyškov) a/alebo môže zmenou byt inzercia a/alebo delécia a/alebo substitúcia v aminokyselinovej sekvencii OPGL polypeptidu. Termín tiež zahŕňa derivát i zované OPGL molekuly, ako je uvedené ďalej v časti týkajúcej sa modifikácií OPGL.
Je potrebné poznamenať, že na vyvolanie požadovanej imunity proti OPGL u človeka je predstaviteľné použitie vakcín tvorených xeno-analógmi (napríklad psími alebo prasacími analógmi) ľudského OPGL. Také použitie xeno-analógov na imunizáciu tvorí tiež čast predkladaného vynálezu.
Termín polypeptid, ako je tu použitý, označuje ako krátke peptidy od 2 do 10 aminokyselinových zvyškov, oligopeptidy od 11 do 100 aminokyselinových zvyškov a polypeptidy väčšie ako 100 aminokyselinových zvyškov. Ďalej termín tiež zahŕňa proteíny, tzn. funkčné biomolekuly zložené aspoň z jedného polypeptidu; pokiaľ obsahujú dva polypeptidy, tak môžu tieto polypeptidy vytvárať komplexy, môžu byt kovalentne naviazané alebo môžu byt nekovalentne naviazané. Polypeptidy v proteíne môžu byt glykozylované a/alebo lipidované a/alebo môžu obsahovat prostetické skupiny.
Termín subsekvencia označuje akýkoľvek nepretržitý reťazec aspoň 3 aminokyselín, alebo - pokiaľ je to relevantné - aspoň 3 nukleotidov, ktoré sú odvodené priamo od prirodzenej aminokyselinovej sekvencie OPGL alebo od sekvencie nukleových kyselín OPGL, v príslušnom poradí.
Termín živočích označuje živočícha akéhokolvek druhu (výhodne cicavca), ako je Homo sapiens, Canis domesticus, apod., a nie len jediné zviera. Avšak termín tiež označuje populáciu takých živočíšnych druhov, pretože je dôležité, že jedinci imunizovaný spôsobom podlá predkladaného vynálezu majú všetci v podstate rovnaký OPGL umožňujúci imunizáciu živočíchov rovnakým imunogénom. Pokial napríklad existujú v rôznych ludských populáciách genetické variácie OPGL, môže byť nezbytné použiť v takých odlišných populáciách rôzne imunogény, aby bolo možné prekonať autotoleranciu k OPGL v každej populácii. Odborníkom v odbore bude jasné, že živočích je žijúci jedinec, ktorý má imunitný systém. Je výhodné, aby bol živočíchom stavovec, ako je cicavec.
Termín inhibícia aktivity OPGL in vivo označuje zníženie počtu interakcií medzi OPGL a jeho (neznámym) receptorom (alebo medzi OPGL a inými významnými väzbovými partnermi pre túto molekulu) v živom organizmu. Inhibícia môže byt dosiahnutá rôznymi mechanizmami; z ktorých je najjednoduchšia prostá interferencia s aktívnym miestom v OPGL väzbou protilátky. Avšak predkladaný vynález tiež zahŕňa to, že väzba protilátky vedie k odstráneniu OPGL fagocytujúcimi bunkami (ako sú makrofágy a iné fagocytujúce bunky).
Výraz dosiahnutie prezentácie ... imunitnému systému označuje to, že imunitný systém zvieraťa je podrobený kontrolovanému pôsobeniu imunogénu. Ako bude jasné z nasledujúcej diskusie, také pôsobenie imunogénu môže byt vykonané rôznymi spôsobmi, z ktorých najvýznamnejšia je vakcinácia farmaceutickými prostriedkami obsahujúcimi polypeptid (tzn. vakcínami, ktoré sú podávané na liečbu alebo zmiernenie existujúceho ochorenia) alebo vakcinácia nukleovými kyselinami. Dôsledkom tohto postupu je to, že imunokompetentné bunky zvieraťa sú konfrontované s antigénom imunologický účinným spôsobom, zatial čo presný spôsob na dosiahnutie tohto výsledku je menej významný vzhíadom na predmet predkladaného vynálezu.
Termín imunologický účinné množstvo má význam obvyklý v odbore, tzn. označuje množstvo imunogénu, ktoré môže indukovať imunitnú odpoveď, ktorá významne postihuje patogénne činidlo, ktoré má spoločné imunologické rysy s imunogénom.
Termín modifikácia OPGL označuje chemickú modifikáciu polypeptidu, ktorý tvorí skelet OPGL. Takou modifikáciou môže byť napríklad derivatizácia (napríklad alkylácia) niektorých aminokyselinových zvyškov v sekvencií OPGL, ale ako bude jasné z nasledujúceho opisu, výhodnou modifikáciou je zmena primárnej štruktúry aminokyselinovéj sekvencie OPGL.
Termínom autotolerancia k OPGL sa rozumie to, že pretože je OPGL vlastným proteínom vo vakcinovanej populácii, neudržuje sa pri normálnych jedincoch v populácii imunitná reakcia proti OPGL; nie je možné vylúčiť, že niektorí jedincovia v populácii živočíchov môžu byt schopný produkovať protilátky proti prirodzenému OPGL, napríklad v rámci autoimunitných ochorení. Zviera bude zvyčajne autotolerantné vzhíadom na vlastný OPGL, ale nemôže byt vylúčené, že analógy OPGL z iného druhu alebo z populácie majúcej iný OPGL fenotyp, budú tiež tolerované uvedeným zvieraťom.
Termín cudzorodý T-lymfocytárny epitop je peptid, ktorý je schopný väzby na MHC molekulu a ktorý stimuluje T-lymfocyty živočícha. Výhodnými cudzorodými T-lymfocytárnymi epitopmi v predkladanom vynáleze sú promiskuitné epitopy, tzn. epitopy, ktoré sa viažu na významnú frakciu určitej triedy MHC molekúl v živočíšnom druhu alebo populácii. Je známy iba velmi obmed14 zený počet takých promiskuitných T-lymfocytárnych epitopov a tieto sú podrobnejšie opísané dalej. Je potrebné poznamenať, že aby boli imunogény použité v spôsobu podľa predkladaného vynálezu účinné v čo najväčšej frakcii živočíšnej populácie, je nutné: (1) inzertovat niekolko cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov v rovnakom analógu OPGL; (2) pripraviť niekolko analógov OPGL, kde každý analóg má inzertovaný iný promiskuitný epitop. Je potrebné si uvedomiť tiež to, že koncept cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov tiež zahŕňa použitie kryptických T-lymfocytárnych epitopov, tzn. epitopov, ktoré sú odvodené od vlastného proteínu a ktoré sa správajú imunogénne iba vtedy, ked existujú v izolovanej forme bez spojenia s daným vlastným proteínom.
Cudzorodý T-helper lymfocytárny epitop je cudzorodý T-lymfocytárny epitop, ktorý sa viaže na molekulu MHC triedy II a ktorý môže byt prezentovaný na povrchu bunky prezentujúcej antigén (APC) naviazaný na molekulu MHC triedy II.
Termín funkčná časť (bio)molekuly označuje v predkladanom vynáleze čast molekuly, ktorá je zodpovedná za aspoň jeden biochemický alebo fyziologický efekt molekuly. V odbore je dobre známe, že vela enzýmov a iných efektorových molekúl má aktívne miesto, ktoré je zodpovedné za efekty danej molekuly. Iné časti molekuly môžu slúžiť na stabilizáciu alebo zosilnenie rozpustnosti a môžu byt preto vynechané, pokial tieto funkcie nie sú významné pre niektoré uskutočnenia predkladaného vynálezu. Napríklad je možné použit niektoré cytokiny ako modifikujúce skupiny v PGL (pozri podrobnú diskusiu dalej) a v takom prípade môže byt otázka stability irelevantná, pretože väzba na OPGL dodáva nutnú stabilitu.
Termín adjuvans*' má svoj obvyklý význam v odbore vakcinácií, tzn. označuje substanciu alebo kompozíciu, ktorá je (1) samotná neschopná vyvolávat špecifickú imunitnú odpoveď proti imunogénu vo vakcíne, ale ktorá, (2) je však schopná zosilňovať imunitnú reakciu proti imunogénu. Inými slovami, vakcinácia adjuvansom samotným nevyvoláva imunitnú reakciu proti imunogénu, vakcinácia imunogénom môže a nemusí vyvolať imunitnú reakciu proti imunogénu, ale kombinované vakcinácie imunogénom a adjuvansom indukuje imunitnú reakciu proti imunogénu, ktorá je silnejšia ako reakcia indukovaná imunogénom samotným.
Termín zacielenie molekuly označuje situáciu, v ktorej sa molekula po podaní zvierati objaví prednostne v niektorých tkanivách alebo je prednostne asociovaná s niektorými bunkami alebo typmi buniek. Toto môže byt dosiahnuté vela spôsobmi, vrátane prípravy molekuly v prostriedku ulahčujúcim zacielenie alebo vloženie skupín ulahčujúcich zacielenie do molekuly. Tieto možnosti budú podrobnejšie prebrané ďalej.
Stimulácia imunitného systému označuje to, že daná substancia alebo prostriedok vykazuje všeobecný, nešpecifický imunostimulačný efekt. Vela adjuvansov a domnelých adjuvansov (ako sú niektoré cytokiny) má schopnosť stimulovať imunitný systém. Výsledkom použitia imunostimulačného činidla je zvýšená pozornosť imunitného systému, čo znamená, že simultánna alebo následná imunizácia imunogénom indukuje významne účinnejšiu imunitnú reakciu v porovnaní s izolovaným použitím imunogénu.
Výhodné uskutočnenia inhibície aktivity OPGL
Je výhodné, aby OPGL polypeptid použitý ako imunogén v spôsobe podlá predkladaného vynálezu bola modifikovaná molekula, v ktorej je v aminokyselinovej sekvencii OPGL prítomná aspoň jedna zmena, pretože týmto spôsobom je značne zlepšená šanca na získanie úplného-významného prekonania autotolerancie proti OPGL. Je.potrebné uviest, že toto nevylučuje možnosť použitia takých modifikovaných OPGL v prostriedkoch, ktoré dalej ulahčujú prekonanie autotolerancie proti OPGL, napríklad v prostriedkoch obsahujúcich adjuvans.
Bolo preukázané (Dalum I, et al., 1996, J. Immunol. 157: 4796-4804), že potenciálne autoreaktívne B-lymfocyty rozpoznávajúce vlastné proteiny sú fyziologicky prítomné pri normálnych jedincoch. Avšak preto, aby boli tieto B-lymfocyty indukované na skutočnú tvorbu protilátok reaktívnych s relevantnými vlastnými proteínmi, je nutná asistencia T-pomocných lymfocytov produkujúcich cytokiny ( TH -lymfocytov). Normálne nie je táto asistencia poskytnutá, pretože T-lymfocyty všeobecne nerozpoznávajú T-lymfocytárne epitopy odvodené od vlastných proteínov, keď sú prezentované bunkami prezentujúcimi antigén (APC). Avšak dodaním cudzorodosti vlastnému proteínu (tzn. vložením imunologický významnej modifikácie) je možné dosiahnuť aktiváciu T-lymfocytov rozoznávajúcich cudzorodý element na APC (ako sú, prvotne, mononukleárne bunky). Polyklonálne B-lymfocyty (ktoré sú tiež APC) schopné rozpoznávania vlastných epitopov na modifikovaných vlastných proteínoch tiež internalizujú antigén a následne prezentujú jeho cudzorodý T-lymfocytárny epitop a aktivované T-lymfocyty následne dodávajú cytokiny týmto polyklonálnym B-lymfocytom reaktívnym s vlastnými proteínmi. Pretože sú protilátky produkované týmito polyklonáInými B-lymfocytmi reaktívne s rôznymi epitopmi na modifikovanom polypeptide, vrátane tých, ktoré sú tiež prítomné v prirodzenom polypeptide, indukuje sa tvorba protilátok skrížené reaktívnych s nemodifikovaným vlastným proteínom. Nakoniec môžu byt aktivované T-lymfocyty, pokial populácia polyklonálnych B-lymfocytov rozpoznáva celkom cudzorodý antigén hoci iba inzertovaný epitop je cudzorodý pre hostitela. Týmto spôsobom sú indukované protilátky skrížené reaktívne s nemodifikovanými vlastnými antigénmi.
V odbore je známych niekolko spôsobov na modifikáciu vlastného peptidového antigénu na prekonanie autotolerancie. Podlá predkladaného vynálezu modifikácie môžu zahŕňať:
- vloženie aspoň jedného cudzorodého T-lymfocytárneho antigénu, a/alebo
- vloženie aspoň jednej prvej skupiny, ktorá zamieruje modifikovanú molekulu na bunky prezentujúce antigén (APC), a/alebo
- vloženie aspoň jednej druhej skupiny, ktorá stimuluje imunitný systém, a/alebo
- vloženie aspoň jednej tretej skupiny, ktorá optimalizuje prezentáciu modifikovaného OPGL polypeptidu imunitnému systému.
Avšak všetky tieto modifikácie by mali byt vykonávané pri zachovaní významnej frakcie pôvodných B-lymfocytárnych epitopov v OPGL, pretože takto je zosilnené rozpoznávanie prirodzených molekúl B-lymfocyty.
V jednom výhodnom uskutočnení sú kovalentne alebo nekovalentne vložené vedlajšie skupiny (vo forme cudzorodých Tlymfocytárnych epitopov alebo hore uvedených prvých, druhých a tretích skupín). To znamená, že reťazce aminokyselinových zvyškov z OPGL sú derivatizované bez alterácie primárnej aminokyselinovej sekvencie alebo aspoň bez zmien v peptidových väzbách medzi jednotlivými aminokyselinami v reťazci.
Alternatívne a výhodné uskutočnenie využíva aminokyselinové substitúcie a/alebo delécie a/alebo inzercie a/alebo adície (ktoré môžu byt uskutočnené rekombinantnými technikami alebo peptidovou syntézou; modifikácie, ktoré postihujú dlhšie reťazce aminokyselín, môžu spôsobovať vznik fúznych polypeptidov). Jednou špeciálnou verziou tohto uskutočnenia je technika opísaná vo WO 95/05849, ktorá opisuje metódu na inhibíciu vlastných proteínov imunizáciou analógmi vlastných proteínov, kde určitý počet aminokyselinových sekvencii bol substituovaný zodpovedajúcim počtom aminokyselinových sekvencii, ktoré každá obsahovali cudzorodý imunodominantný T-lymfocytárny epitop, za súčasného zachovania celkovej terciárnej štruktúry vlastného proteínu v analógu. Pre účely predkladaného vynálezu je však dostatočné, pokial modifikácia (ktorou je inzercia, adícia, delécia alebo substitúcia) vedie k vzniku cudzorodého T-lymfocytárneho epitopu a zároveň zachováva významný počet B-lymfocytárnych epitopov v OPGL. Avšak na dosiahnutie maximálnej účinnosti indukovanej imunitnej reakcie je výhodné, aby bola v modifikovanej molekule zachovaná celková terciárna štruktúra OPGL.
Nasledujúci vzorec opisuje OPGL konštrukty spadajúce do rozsahu predkladaného vynálezu:
(MOD1)sl(OPGLel)nl(MOD2)s2(OPGLe2)n2... (MODX)sx(OPGLex)ηχ (I) kde OPGLel-OPGLex sú x B-lymfocytárne epitopy obsahujúce subsekvencie OPGL, ktoré sú nezávisle identické alebo neidentické a ktoré môžu, ale nemusejú, obsahovat cudzorodé vedlajšie skupiny, x je celé číslo > 3, nj-nx sú x celých čísel > 0 (aspoň 1 je > 1), MOD-^-ΜΟϋχ je x modifikácií vložených medzi konzervo vané B-lymfocytárne epitopy a Sj-Sj^ je x celých čísel, z ktorých jedno je 1, pokial nie sú v OPGLe sekvenciách vložené žiadne vedlajšie skupiny). Preto za podmienky zachovania imunogenickosti konštruktu umožňuje predkladaný vynález všetky permutácie pôvodnej OPGL sekvencie a všetky druhy jej modifikácie. Vynález teda zahŕňa modifikované OPGL, získané vynechaním častí OPGL sekvencie, ktoré napríklad vykazujú nežiadúce účinky in vivo, alebo vynechaním častí, ktoré sú za normálnych okolností intracelulárne a preto môžu spôsobovať nežiadúce imunologické reakcie.
Zachovanie významnej frakcie B-lymfocytárnych epitopov alebo I celkovej terciárnej štruktúry proteínu, ktorý je modifikovaný spôsobom tu opísaným, môže byť dosiahnuté niekolkými spôsobmi. Je možné pripraviť polyklonálne antisérum namierené proti OPGL (napríklad antisérum pripravené v králikoch) a potom použiť toto antisérum ako testovacie činidlo (napríklad v kompetitívnej ELISA) proti produkovaným modifikovaným proteínom. Modifikované verzie (analógy), ktoré reagujú v rovnakom rozsahu s antisérom ako OPGL, môžu byť považované za verzie s rovnakou celkovou terciárnou štruktúrou ako POGL, zatial čo analógy vykazujúce obmedzenú (ale stále ešte významnú a špecifickú) reaktivitu s takým antisérom môžu byt považované za verzie zachovávajúce si významnú frakciu pôvodných B-lymfocytárnych epitopov.
Alternatívne môžu byť pripravené monoklonálne protilátky reaktívne s rôznymi epitopmi na OPGL a tieto môžu byt použité ako testovací panel. Tento prístup je výhodný v tom, že umožňuje (1) mapovanie epitopov OPGL, a (2) mapovanie epitopov, ktoré sú zachované v pripravenom analógu.
Tretím prístupom môže byť určenie trojrozmernej štruktúry OPGL alebo jeho biologicky aktívneho skráteného variantu (pozri hore) a porovnanie tejto určenej trojrozmernej štruktúry pripravených analógov. Trojrozmerná štruktúra môže byt určená pomocou róntgenovej difrakcie a NMR-spektroskopie. Ďalšie informácie týkajúce sa trojrozmernej štruktúry môžu byt získané z analýz cirkulárneho dichroizmu, ktoré sú výhodné v tom, že vyžadujú len polypeptid v čistej forme (zatial čo rôntgenová difrakcia vyžaduje získanie kryštalizovaného polypeptidu a NMR vyžaduje pripravenie izotopových variantov polypeptidu) na získanie použitelných informácií o terciárnej štruktúre danej molekuly. Napriek tomu je pre získanie jednoznačných údajov nakoniec nutné uskutočnenie róntgenovej difrakcie a/alebo NMR, pretože cirkulárny dichroizmus poskytuje len nepriame dôkazy o správnej trojrozmernej štruktúre prostredníctvom informácií o prvkoch sekundárnej štruktúry.
V jednom uskutočnení vynález využíva mnohopočetné prezentácie B-lymfocytárnych epitopov OPGL (tzn. zlúčenín vzorca I, kde je aspoň jeden B-lymfocytárny epitop prítomný v dvoch pozíciách) . Toto môže byt dosiahnuté rôznymi spôsobmi, napríklad jednoducho prípravou fúznych polypeptidov obsahujúcich štruktúru (OPGL)m, kde m je celé číslo > 2, a potom vložením modifikácií opísaných hore do aspoň jednej OPGL sekvencie. Je výhodné, aby vložené modifikácie obsahovali aspoň jednu duplikáciu B-lymfocytárneho epitopu a/alebo vloženie hapténu.
Ako bolo uvedené hore, vloženie cudzorodého T-lymfocytárneho epitopu môže byt vykonané vložením aspoň jednej aminokyselinovej inzercie, adície, delécie alebo substitúcie. Samozrejme, že normálnou situáciou bude vloženie viac ako jednej zmeny aminokyselinovej sekvencie (napríklad inzercie alebo substitúcie kompletného T-lymfocytárneho epitopu), ale významným cielom je to, aby analóg OPGL, po spracovaní bunkou prezentujúci antigén (APC), viedol k prezentácii takého imunodominantného T-lymfocytárneho epitopu v kontexte molekuly MHC triedy II na povrchu APC. Preto, pokiaľ aminokyselinová sekvencia OPGL obsahuje vo vhodných pozíciách počet aminokyselinových zvyškov, ktoré sa tiež nachádzajú v cudzorodom TH epitope, tak môže byt vloženie cudzorodého epitopu vykonané dodaním zostávajúcich aminokyselín cudzorodého epitopu pomocou aminokyselinových inzercií, adícií, delécii a substitúcií. Inými slovami, nie je nutné vkladať celý epitop inzerciou alebo deléciou na splnenie účelu predkladaného vynálezu.
Je výhodné, aby počet aminokyselinových inzercií, delécií, substitúcií a adícií bol aspoň 2, napríklad 3, 4, 5, 6,
7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 a 25 inzercií, substitúcií, adícií alebo delécii. Ďalej je výhodné, aby počet aminokyselinových 25 inzercií, substitúcií, adícií alebo delécii nepresiahol 150, napríklad maximálne 100, maximálne 90, maximálne 80 a maximálne 70. Je osobitne výhodné, aby počet 25 inzercií, substitúcií, adícií alebo delécii nepresiahol 60, najmä 50 alebo 40. najvýhodnejšie je, aby tento počet nepresiahol 30. S ohľadom na aminokyselinové adície je nutné uviesť, že pokial je výsledný konštrukt vo forme fúzneho polypeptidu, tak je ich počet často významne vyšší ako 150.
Výhodné uskutočnenia vynálezu zahŕňajú modifikácie vložením aspoň jedného imunodominantného T-lymfocytárneho epitopu. Je potrebné si uvedomiť, že otázka imunodominancie Tlymfocytárneho epitopu závisí od daného živočíšneho druhu. Termín imunodominantný, ako je tu použitý, označuje epitopy, ktoré pri vakcinovanom jedinci/populácii vedú k vzniku významnej imunitnej reakcie, ale je dobre známe, že T-lymfocytárny epitop, ktorý je imunodominantný pri jednom jedinci/ populácii, nemusí nutne byt imunodominantný pri inom jedinci rovnakého druhu, ani keď sa môže viazať na MHC-II molekuly pri tomto druhom jedincovi. Preto je na účely predkladaného vyná22 lezu imunodominantným T-lymfocytárnym epitopom T-lymfocytárny epitop, ktorý môže byt účinný v spôsobení pomocného pôsobenia T-lymfocytov pri prezentácii antigénu. Typicky majú imunodominantné T-lymfocytárne epitopy tú vlastnosť, že sú vždy prezentované vo väzbe na MHC molekuly triedy Ii, bez ohľadu na polypeptid, v ktorom sa vyskytujú.
Inou významnou skutočnosťou je MHC reštrikcia T-lymfocytárnych epitopov. Všeobecne, prirodzené T-lymfocytárne epitopy sú MHC reštrihované, tzn. niektoré polypeptidy tvoriace T-lymfocytárne epitopy sa budú účinne viazať iba na podskupinu MHC molekúl triedy II. Toto má nakoniec ten efekt, že použitie jedného špecifického T-lymfocytárneho epitopu povedie k zisku zložky vakcíny, ktorá je účinná len pri časti populácie a podía veíkosti tejto frakcie môže byt nutné vložiť viac T-lymfocytárnych epitopov do rovnakej molekuly, alebo alternatívne, pripraviť viaczložkovú vakcínu, v ktorej sú zložkami OPGL varianty, ktoré sa navzájom odlišujú charakterom vložených Tlymfocytárnych epitopov.
Pokiaí je MHC reštrikcia použitých T-lymfocytov celkom neznáma (napríklad keď má vakcinovaný živočích slabo charakterizované zloženie MHC), tak môže byt frakcia populácie pokrytá špecifickým zložením vakcíny určená podía nasledujúceho vzorca:
r = 1-Π(1-Ρ.) (II>
M
- kde Pj^ je frekvencia responderov na i-tý cudzorodý T-lymfocytárny epitop prítomný vo vakcíne v populácii, a n je celkový počet cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov vo vakcíne. Čiže vakcína obsahujúca 3 cudzorodé T-lymfocytárne epitopy majúca frekvencie odpovedi v populácii 0,8, 0,7 a 0,6 dosiahne odpovedi
- 0,2 X 0,3 x 0,4 = 0,976 tzn. 97,6 % populácie bude mat štatisticky významnú MHC-II sprostredkovanú reakciu na vakcínu.
Hore uvedený vzorec sa nedá použit na situácie, keď je známy viac alebo menej presný charakter MHC reštrikcie použitých peptidov. Pokial sa napríklad niektorý peptid viaže len na ludské MHC II molekuly kódované HLA-DR alelami DRI, DR3,
DR5 a DR7, potom použitie tohto peptidu spoločne s iným peptidom, ktorý sa viaže na zostávajúce MHC-II molekuly kódované HLA-DR alelami, pokryje 100% danej populácie. Podobne, pokial sa druhý peptid viaže iba na DR3 a DR5, tak pridanie tohto peptidu vôbec nezvýši pokrytie. Pokial sa výpočet odpovedi populácie založí iba na MHC reštrikcii T-lymfocytárnych epitopov vo vakcíne, potom môže byt frakcia populácie pokrytá špecifickou vakcínou stanovená pomocou nasledujúceho vzorca:
fpop,i™« = (111) ;=i kde j je súčet frekvencií v populácii alelových haplotypov kódujúcich MHC molekuly, ktoré sa viažu na jeden z T-lymfocytárnych epitopov vo vakcíne a ktorý patrí do j-tej skupiny 3 známych HLA lokusov (DP, DR a DQ); v praxi sa najskôr určí to, ktorá molekula MHC bude rozpoznávat každý T-lymfocytárny epitop vo vakcíne a potom sa tieto typizujú (DP, DR a DQ) potom sa pre každý typ sčítajú jednotlivé frekvencie rôznych uvedených alelových haplotypov, čím sa dosiahne^, cp2 a ^3·
Môže sa štát, že hodnota p^ vo vzorci II presiahne príslušnú teoretickú hodnotu πj:
π.
(IV) kde v j je súčet frekvencií v populácii alelových haplotypov kódujúcich MHC molekuly, ktoré sa viažu na i-tý T-lymfocytárny epitop vo vakcíne a ktorý patrí do j-tej skupiny 3 známych HLA lokusov (DP, DR a DQ). To znamená, že v 1-1 populácii je frekvencia responderov fresiduai j = (Ρϊ“πϊ)/(1_7Γΐ) · Preto môže byt vzorec III upravený na vzorec V:
fpay.l.na. = 1 - Π 0 ~ P/)’ + [1 “ Π 0 “ Z.,,*,,I ,)) (V) kde termín 1_fresidual i 3e nular pokial je negatívny. Je potrené poznamenať, že vzorec V vyžaduje, aby boli všetky epitopy haplotypovo mapované proti identickej sade haplotypov.
Preto je pri výbere T-lymfocytárnych epitopov, ktoré majú byt vložené do analógu OPGL, nutné mat všetky informácie o epitope, ktoré sú dostupné: (1) frekvenciu responderov v populácii pre každý epitop, (2) charakter MHC reštrikcie a (3) frekvenciu relevantných haplotypov v populácii.
Existuje vela prirodzených promiskuitných T-lymfocytárnych epitopov, ktoré sú aktívne pri velkej časti jedincov živočíšneho druhu a tieto sú výhodne použité vo vakcíne, čo znižuje potrebu velmi velkého počtu rôznych analógov OPGL v jednej vakcíne.
Promiskuitný epitop podlá predkladaného vynálezu môže byt prirodzený ludský T-lymfocytárny epitop, ako sú epitopy z tetanického toxoidu (napríklad P2 a P30 epitopy), difterického toxoidu, hemaglutinínu chrípkového vírusu (HA) a CS antigénu P. falciparum.
Počas rokov bolo identifikované vela ďalších promiskuitných T-lymfocytárnych epitopov. Boli identifikované hlavne peptidy schopné väzby na veľkú frakciu HLA.DR molekúl kódovaných rôznymi HLA-DR alelami a tieto všetky sú možnými T-lymfocytárnymi epitopmi na vloženie do analógov OPGL podlá predkladaného vynálezu. Pozri tiež epitopy opísané v nasledujúcich odkazoch: WO 98/23653 (Frazer, I.H., et al., University of Queensland); Southwood, S. et al., 1998, J.
Immunol. 160: 3363-3373; Sinigaglia F. et al., 1988, Náture 336: 778-780; Chicz, R.M. et al., 1993, J. Exp. Med. 178: 27-47; Hammer, J. et al., 1993, Celí, 74: 197-203; a Falk,
K. et al., 1994, Immunogenetics 39: 230-242. Posledný odkaz sa týka tiež HLA.DQ a -DP ligandov. Všetky epitopy uvedené v týchto 5 odkazoch sú relevantné ako kandidáti naq prirodzené epitopy použité v predkladanom vynáleze, rovnako ako epitopy majúce spoločné motívy s týmito epitopmi.
Alternatívne môže byť epitopom akýkolvek artificiálny T-lymfocytárny epitop, ktorý je schopný väzby na velkú frakciu MHC molekúl triedy II. Z tohto hľadiska sú pan-DR epitopové peptidy (PADRE) opísané vo WO 95/07707 a v Alexander, J. et al., 1994, Immunity 1: 751-761 zaujímavými kandidátmi na epitopy použité v predkladanom vynáleze. Je potrebné uviesť, že najúčinejšie PADRE peptidy opísané v uvedených odkazoch obsahujú D-aminokyseliny na C- a N-koncoch na zlepšenie stability po podaní. Avšak predkladaný vynález sa primárne týka inkorporácie relevantných epitopov ako súčasti modifikovaného OPGL, ktorý by mal byt potom degradovaný enzymaticky v lysozómovom kompartmente APC, aby bola umožnená následná prezentácia v kontexte MHC-II molekuly a preto sa nepredpokladá použitie D-aminokyselín v epitopoch použitých v predkladanom vynáleze.
Jedným osobitne výhodným PADRE peptidom je peptid obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu AKFVAAWTLKAAA alebo jej imunologický účinnú subsekvenciu. Tento a iné epitopy s rovnakým chýbaním MHC reštrikcie, sú výhodné T-lymfocytárne epitopy, ktoré sú prezentované v analógoch OPGL podľa predkladaného vynálezu. Také super-promiskuitné epitopy umožňujú najjednoduchšie uskutočnenie vynálezu, v ktorom je imunitnému systému vakcinovaného zvieraťa prezentovaný iba jeden modifikovaný OPGL.
Ako bolo uvedené hor, modifikácia OPGL tiež zahŕňa vloženie prvej skupiny, ktorá smeruje modifikovaný OPGL k APC alebo k B-lymfocytom. Prvou skupinou môže byt napríklad špecifický väzbový partner pre špecifický povrchový antigén B-lymfocytu alebo pre špecifický povrchový antigén APC. V odbore je známe veľa takých špecifických povrchových antigénov. Napríklad môže byt skupinou karbohydrát, pre ktorý existuje receptor na -lymfocytoch alebo na APC (napríklad manan alebo manóza). Alternatívne môže byt druhou skupinou haptén. Ako prvá skupina môže byt tiež použitý fragment protilátky, ktorý rozpoznáva povrchovú molekulu na APC alebo lymfocytoch (povrchovou molekulou môže byt napríklad FCt receptor makrofágov alebo monocytov, ako je FCtRI alebo, alternatívne, akýkoľvek iný špecifický povrchový markér, ako je CD40 alebo CTLA-4). Je potrebné uviesť, že tieto zameriavacie skupiny môžu byt tiež použité ako súčasť adjuvansov, pozri tiež ďalej.
Ako alternatíva alebo doplnok na zacielenie modifikovaného OPGL polypeptidu na niektoré typy buniek na dosiahnutie silnejšej imunitnej reakcie je možné zvýšiť úroveň reaktivity imunitného systému obsiahnutím hore uvedenej druhej skupiny, ktorá stimuluje imunitný systém. Typickými príkladmi takých druhých skupín sú cytokiny a proteíny teplotného šoku alebo molekulové chaperóny, rovnako ako ich účinné časti.
Vhodnými cytokinmi na použitie v predkladanom vynáleze sú tie, ktoré normálne pôsobia ako adjuvansy vo vakcinačnom prostriedku, tzn. napríklad interferón τ ((IFN-τ), interleukin 1 ((IL-1), interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4), interleukin 6 (IL-6), interleukin 2 ((IL-12), interleukin 13 ((IL-13), interleukin 15 (IL-15) a faktor stimulujúci kolónie granulocytov-makrofágov (GM-CSF); alternatívne môže byt ako druhá skupina použitá funkčná čast cytokinovej molekuly. Použitie takých cytokinov ako adjuvansových substancií pozri dale j.
Vhodnými proteínmi teplotného šoku alebo molekulovými chaperónmi na použitie ako druhá skupina v predkladanom vynáleze sú HSP70, HSP90, HSC70, GRP94 ((tiež známy ako gp96, pozri Wearsch, PA, et al., 1998, Biochemistry 37: 5709-19) a CRT (calretikulin). Alternatívne môže byt druhou skupinou toxín, ako je listeriolycín (LLO), lipid A a termolabilný enterotoxín. Zaujímavými možnostami sú tiež rôzne mykobakteriálne deriváty, ako je MDP (muramyldipeptid), CFA (kompletný Freundov adjuvans) a trehalózové diestery TDM a TDE.
Pri uskutočnení predkladaného vynálezu je tiež významná možnost vloženia tretej skupiny, ktorá zlepšuje prezentáciu modifikovaného OPGL imunitnému systému. V odbore existuje niekoíko príkladov tohto princípu. Napríklad je známe, že palmitoylová lipidačná kotva b proteínu OspA Borrelia burgdorferi môže byt použitá tak, aby poskytovala samoadjuvansové polypeptidy (pozri napríklad WO 96/40718) - zdá sa, že lipidované proteíny vytvárajú štruktúry podobné micelám s jadrom skladajúcim sa z lipidačnej kotvy polypeptidov a z nej vyčnívajúcimi ostatnými časťami molekuly, čo vedie k znásobeniu prezentácie antigénnych determinantov. Preto sú použitia týchto a príbuzných prístupov využívajúcich iné lipidačné kotviace skupiny (napríklad myristylové skupiny, farnezylové skupiny, geranyl-geranylové skupiny, GPI-skupiny a N-aqyldiglyceridové skupiny) výhodnými uskutočneniami vynálezu, najmä pri dodržaní podmienky, že taká lipidačná kotva v rekombinantné produkovanom proteíne je jednoduchá a vyžaduje len použitie napríklad prirodzených signálnych sekvencií ako fúznych partnerov pre modifikovaný OPGL polypeptid. Inou možnosťou je použitie C3d fragmentu faktoru C3 komplementu alebo C3 fragmentu samotného (pozri Dempsey et al., 1996, Science 271: 480-350 a Lou and Kohler 1998, Náture Biotechnology 16: 458-462).
Alternatívne uskutočnenie vynálezu, ktoré tiež vedie k výhodnej prezentácii vela (napríklad aspoň 2) kópií významných epitopových regiónov OPGL imunitnému systému, je kovalentné naviazanie OPGL, jeho subsekvencie alebo variantu, na určité molekuly. Napríklad môžu byť použité polyméry, napríklad uhlovodany ako je dextrán, pozri napríklad Lees A. et al., 1994, Vaccine 12: 1160-1166; Lees A. et al., 1990, J. Immunol. 145: 3594-3600, ale manóza alebo manan sú tiež použitelné alternatívy. Integrálne membránové proteíny u, napríklad, E. coli a iných baktérií, sú tiež vhodné partnery na konjugáciu. Tradičné nosiče, ako je prílipkový hemokyanín (KLH), tetanický toxoid, difterický toxoid a hovädzí sérový albumín (BSA), sú tiež vhodné a použitelné partnery na konjugáciu.
Niektoré oblasti prirodzeného OPGL sa zdajú byt vhodnejšie na uskutočnenie modifikácií. Vzhíadom na štrukturálnu podobnosť OPGL s TNF-α a inými členmi rodiny faktoru nekrózy nádorov sa predpokladá, že vloženie T-lymfocytárnych epitopov alebo iných modifikácií v oblastiach definovaných pozíciami 170-192, 198-218, 221-246, 256-261 alebo 285-316 (aminokyselinové číslovanie podlá SEQ ID NO: 4, 6 a 12) bude s najväčšou pravdepodobnosťou viesť k požadovanému výsledku. Tieto pozície sa týkajú myšieho OPGL - príslušnej pozície y íudskej molekule SÚ 171-193, 199-219, 222-247, 257-262 a 286-317 (aminokyselinové číslovanie podía SEQ ID NO: 2).
Dôvody na vybranie týchto oblastí sú (a) zachovanie známych a predpokladaných B-lymfocytárnych epitopov, (b) zachovanie terciárnej štruktúry apod. V akomkoívek prípade je, ako bolo uvedené hore, íahké vyšetrovať sadu modifikovaných OPGL molekúl, ktoré boli upravené vložením T-lymfocytárneho epitopu do rôznych miest.
Pretože najvýhodnejšie uskutočnenia predkladaného vynálezu zahŕňajú inhibíciu íudského OPGL, je preto výhodné, aby OPGL polypeptid uvádzaný hore bol íudský OPGL polypeptid. V tomto uskutočnení je osobitne výhodné, aby bol íudský OPGL polypeptid modifikovaný substitúciou aspoň jednej aminokyselinovej sekvencie v SEQ ID NO: 2 (alebo v polypeptide, kde bol Cys-221 v SEQ ID NO: 2 substituovaný serínom) aspoň jednou aminokyselinovou sekvenciou s rovnakou alebo inou dĺžkou a obsahujúcou cudzorodý T^ epitop. Substituované aminokyselinové zvyšky sú vybrané zo zvyškov 257-262, 289-303 a 222-243 v SEQ ID NO: 2. Dôvody pre také konštrukty sú podrobne opísané v príkladoch.
Príprava OPGL a modifikovaných OPGL polypeptidov
Pri uskutočňovaní prezentácie OPGL polypeptidu alebo modifikovaného OPGL polypeptidu imunitnému systému živočícha prostredníctvom jeho podania živočíchovi je príprava polypeptidov vykonaná podía princípov všeobecne známych v odbore.
Príprava vakcín, ktoré obsahujú peptidové sekvencie ako aktívne zložky, je dobre známa v odbore, ako je doložené napríklad v US patentoch 4608251; 4601903; 4599231; 4599230; 4596792 a 4578770, ktoré sú tu všetky uvedené ako odkazy. Zvyčajne sú také vakcíny pripravené ako injekčné prostriedky, buď ako kvapalné roztoky alebo suspenzie; alebo ako pevné formy vhodné na rozpustenie alebo suspendovanie v kvapaline pred injekčným podaním. Prípravok môže byť tiež emulzifikovaný Aktívna imunogénna zložka je často zmiešaná s prísadami, ktoré sú farmaceutický prijatelné a kompatibilné s aktívnou zložkou. Vhodnými prísadami sú, napríklad, voda, salinický roztok, dextróza, glycerol, etanol a podobne, a ich kombinácie. Ďalej - pokial je to vhodné - môže vakcína obsahovat tiež malé množstvá pomocných substancií, ako sú namáčavé alebo zvlhčovacie činidlá, pH tlmiace činidlá alebo adjuvansy, ktoré zvyšujú účinnosť vakcíny; pozri podrobný opis adjuvansov uvedený ďalej.
Vakcíny sú zvyčajne podané parenterálne, injekciou, napríklad subkutánne, intrakutánne, intradermálne, subdermálne alebo intramuskulárne. Ďalšie prostriedky, ktoré sú vhodné n a iné spôsoby podania, sú čapíky a - v niektorých prípadoch - orálne, bukálne, sublinguálne, inraperitoneálne, intavaginálne, análne, epidurálne, spinálne a intrakraniálne prostriedky. Pre čapíky môžu byt tradičnými spojivami a nosičmi napríklad polyalkánglykoly alebo triglyceridy; také čapíky môžu byt pripravené zo zmesí obsahujúcich aktívnu zložku v rozmedzí od 0,5 % do 10 %, lepšie l - 2 %. Orálne prostriedky môžu obsahovat bežné prísady, ako je napríklad manitol, laktóza, škrob, stearan horečnatý, sacharín sodný, celulóza, uhličitan horečnatý a podobne, všetky s farmaceutickou čistotou. Tieto prostriedky môžu mat tiež formu roztokov, suspenzií tabliet, piluliek, kapsúl, prostriedkov so spomaleným uvolňo31 vaním alebo práškov a obsahujú 10 - 95 % aktívnej zložky, výhodne 25 -70 %. Pre orálne prostriedky je zaujímavou prísadou cholera-toxín (a tiež je vhodným partnerom na konjugáciu).
Polypeptidy môžu byť pripravené vo vakcíne v neutrálnej forme alebo vo forme soli. Farmaceutický prijatelné soli zahŕňajú adičné soli s kyselinami (tvorené s volnými aminoskupinami peptidu) a medzi použitelné kyseliny patria anorganické kyseliny, ako je, napríklad, kyselina chlorovodíková alebo fosforečná, alebo organické kyseliny, ako je kyselina octová, vínna, mandlová a podobne. Soli tvorené s volnými karboxylovými skupinami môžu byt tiež pripravené z anorganických báz, ako sú napríklad hydroxid sodný, draselný, amónny, vápenatý alebo železitý, a z organických báz, ako je napríklad izopropylamín, trimetylamín, 2-etylaminoetanol, histidín, prokaín a podobne.
Vakcíny sú podané spôsobom zlučitelným s dávkovou formou a v množstve, ktoré bude terapeuticky účinné a imunogénne. Podaná kvantita závisí od liečeného subjektu, vrátane napríklad kapacity imunitného systému jedinca pre udržovanie imunitnej reakcie a požadovaného stupňa ochrany. Vhodné dávky sú v rade niekolkých stoviek mikrogramov aktívneho činidla na vakcináciu s výhodným rozmedzím od približne 0,1 ug do 2000 μg (je možné podať I dávky 1-10 mg), ako je napríklad rozsah od 0,5 μg do približne 1000 μg, lepšie od 1 μg do približne 500 μg a najlepšie od 10 μg do približne 100 μg. Vhodné režimy pre počiatočnú dávku a následné dosytovacie dávky sú tiež variabilné, ale zvyčajne je podaná počiatočná dávka a po nej ďalšie očkovanie alebo iné formy podania.
Spôsob aplikácie môže byť rôzny. Je možné použiť akékoľvek bežné metódy na podanie vakcín. Medzi tieto spôsoby patrí orálne podanie na pevnej fyziologicky prijateľnej báze alebo vo fyziologicky prijateľnej disperzii, parenterálne podanie, injekciou alebo iným spôsobom. Dávka vakcín závisí od spôsobu podania a líši sa podľa veku vakcinovaného jedinca a podľa prípravy antigénu.
Niektoré polypeptidy vakcíny sú dostatočne imunogénne vo vakcíne, ale niektoré iné imunitné reakcie budú zosilnené, pokiaľ bude vakcína ďalej obsahovat adjuvansovú substanciu.
Sú známe rôzne metódy na dosiahnutie adjuvansového efektu pre vakcíny. Všeobecné princípy a spôsoby sú opísané v The Theory and Practical Application of Adjuvants, 1995, Duncan-E.S., Stewart-Tull (ed.), John Wiley and Sons, Ltd.,
ISBN 0-471-95170-6, a tiež vo Vaccines: New Generation Immunological Adjuvants, 1995, Gregoriadis, G. et al. (ed.) Plénum Press, New York, ISBN 0-306-45283-9, pričom obidve tieto citácie sú tu uvedené ako odkazy.
Osobitne výhodné je použitie adjuvansov, ktoré uľahčia prekonanie autotolerancie k autoantigénom; v skutočnosti je toto zásadné v prípadoch, keď je nemodifikovaný OPGL použitý ako aktívna zložka v autovakcíne. Príklady vhodných adjuvansov sú vybrané zo skupiny zahŕňajúcej adjuvansy napomáhajúce prezentácii antigénu imunitnému systému; imunomodulačné adjuvansy ako sú toxíny, cytokiny a mykobakteriálne deriváty? olejové prostriedky; polyméry; adjuvansy vytvárajúce micely; saponíny; imunostimulačné komplexné matrice (ISCOM matrice); častice;
DDA; hlinité adjuvansy; DNA adjuvansy; τ-inulín; a enkapsulačné adjuvansy. Všeobecne je potrebné uviest, že hore uvedený opis, ktorý sa týka zlúčenín a činidiel použiteľných ako prvá, druhá a tretia skupina v analógoch, sa tiež týka ich použitia ako adjuvansov vo vakcíne podľa predkladaného vynálezu.
Použitie adjuvansov zahŕňa použitie činidiel ako je hydroxid hlinitý alebo fosforečnan hlinitý (kamenec), ktoré sa bežne používajú ako 0,05 až 0,1% roztok v pufrovanom salinickom roztoku, zmiešaných so syntetickými polymérmi sacharidov (napríklad CarbopolR) použitými ako 0,25% roztok, agregácie proteínu vo vakcíne teplom pri použití teplôt od 70°C do 101°C počas 30 sekúnd až 2 minút, a tiež agregácie pomocou zositovacích činidiel. Agregácia reaktiváciou protilátkami k albumínu spracovanými pepsínom (Fab fragmenty), zmiešaním s bakteriálnymi bunkami ako je C. parvum alebo s endotoxínmi alebo lipopolysacharidovými zložkami gram-negatívnych baktérií, emulgovaním vo fyziologicky prijateľnom olejovom vehikule, ako je mannidmonooleát Aracel A) alebo emulgovaním s 20% roztokom perfluórkarbónu (Fluosol-DA) použitému ako blokovacie substitučné činidlo, môže byť tiež použité. Výhodné je tiež zmiešanie s olejmi, ako je skvalen a IFA.
Podľa predkladaného vynálezu je DDA (dimetyldioktadecylamóniumbromid) zaujímavým kandidátom na adjuvans, rovnako ako DNA a τ-inulín, ale tiež ako Freundov kompletný adjuvans a ne kompletný adjuvans a quillaja saponíny, ako je QuilA a QS21 a RIBI. Ďalšími možnosťami sú monofosforyllipid A (MPL), hore uvedené C3d a C3 a mramyldipeptid (MDP).
O lipozomálnych prostriedkoch je tiež známe, že majú adjuvansový účinok, a preto sú lipozomálne adjuvansy výhodnými adjuvansmi podľa predkladaného vynálezu.
Takisto adjuvansy typu imunostimulačnej komplexnej matrice (ISCOMR matrice) sú výhodnou voľbou pre predkladaný vynález, najmä preto, že bolo preukázané, že adjuvansy tohto typu sú schopné zvýšiť expresiu MHC molekúl II typu na APC. ISCOMr matrica sa skladá z (volitelne frakcionovaných) sapo34 nínov (triterpenoidov) z Quillaja saponaria, cholesterolu a fosfolipidu. Pri zmiešaní s imunogénnym proteínom vznikajú častice známe ako ISCOM častice, v ktorých saponín tvorí 60-70 % hmotnostných, cholesterol a fosfolipid 10-15 % hmotnostných a proteín 10-15 % hmotnostných. Podrobnosti týkajúce sa zloženia a použitia imunostimulačných komplexov môžu byt nájdené napríklad v hore uvedených učebniciach týkajúcich sa adjuvansov, ale tiež v Morein B., et al., 1995, Clin. Immunother. 3: 461-475, rovnako ako v Barr IG a Mitchell GF, 1996, Immunol. and Celí Biology 74: 8-25 (obidve práce sú tu uvedené ako odkazy) uvádzajú užitočné inštrukcie pre prípravu kompletných imunostimulačných komplexov.
Inou značne zaujímavou (a preto výhodnou) možnosťou na dosiahnutie adjuvansového efektu je použitie techniky opísanej v Gosselin et al., 1992 (ktorá je tu uvedená ako odkaz). Stručne, prezentácia relevantného antigénu, ako je antigén pódia predkladaného vynálezu, môže byt zosilnená konjugovaním antigénu na protilátky (alebo jej väzbový fragment pre antigén) proti Fct receptorom na monocytoch/makrofágoch. Bolo preukázané, že najmä konjugáty medzi antigénom a anti-FcTRI zosilňujú imunogenickost na účely vakcinácie.
Ďalšou možnosťou je použitie zamerovacích a imunomodulačných substancií (tzn. cytokinov) uvedených hore ako kandidáty na prvé a druhé skupiny v modifikovaných verziách OPGL. V tejto súvislosti je možné použiť tiež syntetické induktory cytokinov, ako je polyI:C.
Vhodné mykobakteriálne deriváty sú vybrané zo skupiny zahŕňajúcej muramyldipeptid, kompletný Freundov adjuvans,
RIBI a diesterov trehalózy, ako je TDM a TDE.
Vhodné činidlá zamierujúce antigén na imunitný systém sú vybrané zo skupiny zahŕňajúcej CD40 ligand.a CD40 protilátky alebo ich špecifické väzbové fragmenty (pozri hore), manózu,
Fab fragment a CTLA-4.
Vhodné polymérové adjuvansy sú vybrané zo skupiny zahŕňajúcej uhíovodany ako je dextrán, PEG, škrob, manan a manózu; plastových polymérov ako takých; a latexu, ako sú latexové koráliky.
Iným zaujímavým spôsobom na modulovanie imunitnej odpovedi je použitie OPGL imunogénu (volitelne spoločne s adjuvansami a farmaceutický prijatelnými nosičmi a vehikulami) vo virtuálnej lymfatickej uzline (VLN) (lekársky prostriedok vyvinutý v ImunoTherapy Inc., 360 Lexington Avenue, New York,
NY 10017-6501). VLN (tenká rúrka) napodobuje štruktúru a funkciu lymfatickej uzliny. Inzercia VLN pod kožu vytvára miesto sterilného zápalu so zvýšením koncentrácie cytokinov a chemokinov. T- a B-lymfocyty, rovnako ako APC, rýchlo reagujú na výstražné signály, migrujú do miesta zápalu a akumulujú sa vnútri poréznej matrice VLN. Bolo preukázané, že nutná dávka antigénu vyžadovaná na udržanie imunitnej reakcie na antigén je pri použití VLN znížená a že imunologická ochrana dosiahnutá vakcináciou pri použití VLN je lepšia ako konvenčná imunizácia využívajúca Ribi ako adjuvans. Technológia je stručne opísaná v Gelber C. et al., 1998, Elicitation of Robust Cellular and Humoral Immune Responses to Small Amounts of Immunogens Using a Novel Medical Device Designated the Virtual Lymph Node, in: From the Laboratory to the Clinic, Book of Abstracts, October 12th - 15th 1998, Seascape Resort, Aptos, California.
Predpokladá sa, že vakcína by mala byt podaná 1-6-krát za rok, ako napríklad 1, 2, 3, 4, 5 alebo 6-krát za rok jedincovi, ktorý potrebuje takú liečbu. Skôr bolo preukázané, že pamäťová imunita indukovaná použitím výhodných autovakcín podlá predkladaného vynálezu nie je trvalá a preto imunitný systém potrebuje byt periodicky vystavovaný pôsobeniu OPGL alebo modifikovaných OPGL polypeptidov.
V dôsledku genetických variácií môžu rôzni jedincovia reagovat rôzne silnou imunitnou odpoveďou na rovnaký polypeptid. Preto môže vakcína podlá predkladaného vynálezu obsahovať niekolko rôznych polypeptidov na zosilnenie imunitnej reakcie, pozri tiež diskusiu uvedenú hore, týkajúcu sa výberu vložených cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov. Vakcína môže obsahovať dva alebo viac polypeptidov, kde všetky polypeptidy sú také, ako boli definované hore.
Vakcína môže v dôsledku toho obsahovať 3-20 rôznych modifikovaných alebo nemodifikovaných polypeptidov, ako napríklad 3-10 rôznych polypeptidov.
Vakcinácia nukleovými kyselinami
Alternatívou ku klasickému podaniu vakcíny na báze peptidu je technika vakcinácie nukleovou kyselinou (tiež známa ako imunizácia nukleovou kyselinou, genetická imunizácia a génová imunizácia), ktorá ponúka vela atraktívnych vlastností
Po prvé, oproti klasickej vakcinácii nevyžaduje vakcinácia nukleovou kyselinou zdroj veľkoobjemovej produkcie imunogénneho činidla (napríklad vo forme priemyselnej fermentácie mikroorganizmov produkujúcich modifikovaný OPGL).
Okrem toho, nie je tu potrebné prečistenie prostriedku a opätovné skladanie imunogénu. Konečne, pretože vakcinácia nukleovou kyselinou spočíva v biochemickom aparáte vakcinovaného jedinca, ktorý vyrába expresný produkt vloženej nukleovej kyseliny, dochádza k optimálnemu posttranslačnému spracovaniu produktu expresie; toto je predovšetkým významné v prípade autovakcinácie, pretože - ako bolo uvedené hore - významná frakcia pôvodných OPGL B-lymfocytárnych epitopov by mala byt v modifikovanej molekule zachovaná a pretože B-lymfocytárne epitopy môžu byt tvorené časťami akejkoľvek biomolekuly (napríklad uhľovodanu, lipidu, proteínu apod.). Preto môže byt prirodzená glykozylácia a lipidácia imunogénu veľmi významná pre celkovú imunogenickost a toto je najlepšie zaistené produkciou imunogénu v hostiteľovi.
Preto výhodné uskutočnenie predkladaného vynálezu zahŕňa prezentáciu modifikovaného OPGL imunitnému systému prostredníctvom vloženia nukleovej kyseliny kódujúcej modifikovaný OPGL do buniek živočícha a takto dosiahnutím expresie in vivo v bunkách, do ktorých bola nukleová kyselina vložená.
V tomto uskutočnení je vloženou nukleovou kyselinou výhodne DNA, ktorá môže byt vo forme holej DNA, DNA pripravenej s nabitými alebo nenabitými lipidmi, DNA pripravenej v lipozómoch, DNA obsiahnutej vo vírusovom vektore, DNA pripravenej s proteínom alebo polypeptidom uľahčujúcim transfekciu, DNA pripravenej so zameriavacím proteínom alebo polypeptidom, DNA pripravenej s vápnikovým zrážacim činidlom, DNA naviazanej na molekulu inertného nosiča, DNA enkapsulovanej v chitíne alebo chitosáne a DNA pripravenej s adjuvansom. V tejto súvislosti je potrebné uviesť, že prakticky všetky úvahy týkajúce sa použitia adjuvansov v tradičnej príprave vakcín sa dajú použit na prípravu DNA vakcín. Preto sa všetky opisy týkajúce sa použitia adjuvansov v kontexte vakcín na báze polypeptidu týkajú tiež ich použitia v technológii vakcinácie nukleovými kyselinami .
Spôsoby podania a schémy podania vakcín na báze polypeptidov, ktoré boli podrobne opísané hore, sú tiež použitelné na vakcíny na báze nukleových kyselín podlá predkladaného vynálezu a všetky úvahy týkajúce sa spôsobov podania a schém podania pre polypeptidy sa týkajú tiež nukleových kyselín. Vakcíny na báze nukleových kyselín môžu byt podané tiež intravenózne alebo intraarteriálne. Ďalej je v odbore dobre známe, že nukleokyselinové vakcíny môžu byt podané pri použití takzvaného génového dela a preto je tiež tento a ekvivalentné spôsoby podania považované za súčast predkladaného vynálezu. Nakoniec, použitie VLN v podaní nukleových kyselín viedlo podlá literatúry k dobrým výsledkom a preto je tento spôsob podania osobitne výhodný.
Ďalej, nukleové kyseliny použité ako imunizačné činidlo môžu obsahovat regióny kódujúce prvú, druhú a/alebo tretiu skupinu, napríklad vo forme imunomodulačných substancií opísaných hore, ako sú cytokiny uvedené ako použitelné adjuvansy. Výhodná verzia tohto uskutočnenia zahŕňa použitie kódujúceho regiónu pre analóg a kódujúceho regiónu pre imunomodulátor v rôznych čítacích rámcoch alebo aspoň pod kontrolou rôznych promotorov. Preto je vylúčené to, aby bol analóg alebo epitop produkovaný ako fúzny partner k imunomodulátoru. Alternatívne môžu byť použité dva odlišné nukleotidové fragmenty, ale toto je menej výhodné z dôvodu výhody zaistenia súčasnej expresie pri obsiahnutí obidvoch kódujúcich regiónov v rovnakej molekule.
V súlade s tým sa vynález tiež týka prostriedku na indukciu produkcie protilátok proti OPGL, ktorý obsahuje
- fragment nukleovej kyseliny alebo vektor podía predkladaného vynálezu (pozri opis vektorov uvedený dalej), a
- farmaceutický alebo imunologický prijateíné vehikulum a/alebo nosič a/alebo adjuvans, ako boli opísané hore.
za normálnych okolností je nukleová kyselina kódujúca variant OPGL vložená vo forme vektoru, v ktorom je expresia pod kontrolou vírusového promotoru. Na podrobnejší opis vektorov podía predkladaného vynálezu pozri ďalej. Podrobný opis týkajúci sa prípravy a použitia nukleokyselinových vakcín je uvedený, napríklad, v Donnelly, J.J., et al., 1997, Annu.
Rev. Immunol. 15: 617-648; a Donnely J.J. et al., 1997, Life Sciences 60: 163-172. Obidve tieto práce sú tu uvedené ako odkazy.
Živé vakcíny
Tretou alternatívou na prezentáciu modifikovaných OPGL imunitnému systému je použitie technológie živých vakcín.
Pri použití živých vakcín je prezentácia imunitnému systému vykonaná podaním nepatogénnych mikroorganizmov živočíchovi, kde uvedené mikroorganizmy boli transformované fragmentom nukleovej kyseliny kódujúcim modifikovaný OPGL alebo vektorom obsahujúcim taký fragment nukleovej kyseliny. Nepatogénnym mikroorganizmom môže byt akýkoívek vhodný atenuovaný bakteriálny kmeň (atenuovaný pasážovaním alebo odstránením patogénnych produktov expresie technikou rekombinantnej DNA), ako je napríklad Mycobacterium bovis BCG., nepatogénny Streptococcus spp., E. coli, Salmonella spp., Vibrio cholerae, Shigella apod. Prehíady týkajúce sa prípravy živých vakcín sú uvedené v Saliou P., 1995, Rev. Prat. 45: 1492-1496 a Walker, P.D., 1992, Vaccine 10: 977-990, ktoré sú tu uvedené ako odkazy. Podrobnosti týkajúce sa fragmentov nukleových kyselín a vektorov použitých v takých živých vakcínach sú uvedené ďalej.
Alternatívne k bakteriálnym živým vakcínam môže byt fragment nukleovej kyseliny podlá predkladaného vynálezu opísaný ďalej inkorporovaný do nevirulentného vírusového vakcinačného vektoru, ako je kmeň vakcínie alebo akýkolvek iný vhodný pox vírus.
Zvyčajne je nepatogénny mikroorganizmus alebo vírus podaný zvierati iba raz, ale v niektorých prípadoch môže byt nutné podat mikroorganizmus viac ako raz za život na udržanie protektívnej imunity. Predpokladá sa, že imunizačné schémy, ako sú schémy uvedené pre polypeptidovú vakcináciu, budú použiteľné pre živé alebo vírusové vakcíny.
Alternatívne sa živá alebo vírusová vakcína kombinuje s predchádzajúcou alebo následnou polypeptidovou a/alebo nukleokyselinovou vakcináciou. Napríklad je možné vykonať primárnu imunizáciu živou alebo vírusovou vakcínou a potom uskutočniť následné dosytovacie imunizácie pri použití polypeptidovej alebo nukleokyselinovej vakcíny.
Mikroorganizmus alebo vírus môže byt transformovaný nukleovou kyselinou kódujúcou prvú, druhú a/alebo tretiu skupinu, napríklad vo forme imunomodulačných substancií opísaných hore, ako sú cytokiny uvedené ako použiteľné adjuvansy. Výhodná verzia tohto uskutočnenia zahŕňa použitie kódujúceho regiónu pre analóg a kódujúceho regiónu pre imunomodulátor v rôznych čítacích rámcoch alebo aspoň pod kontrolou rôznych promotórov. Preto je vylúčené to, aby bol analóg alebo epitop produkovaný ako fúzny partner k imunomodulátoru. Alternatívne môžu byt ako transformačné činidlá použité dva odlišné nu41 kleotidové fragmenty. Samozrejme v prítomnosti prvej a/alebo druhej a/alebo tretej skupiny v rovnakom čítacom rámci môže byt získaný expresný produkt, analóg podía predkladaného vynálezu, a také uskutočnenie je v predkladanom vynáleze osobitne výhodné.
Použitie spôsobu podía predkladaného vynálezu pri liečbe ochorení
Ako je jasné z uvedeného opisu, poskytnutie spôsobu podía predkladaného vynálezu umožňuje kontrolu ochorení charakterizovaných nadmernou stratou kostovej hmoty. V tomto kontexte je osteoporóza kíúčovým cielom pre spôsob podía predkladaného vynálezu, ale tiež vhodným cielom je strata kosti spojená s komplikovanými fraktúrami kostí. Preto zahŕňa významné uskutočnenie spôsobu podía predkladaného vynálezu na liečbu a/ alebo prevenciu a/alebo zmiernenie osteoporózy alebo iného stavu charakterizovaného nadmernou resorpciou kosti, kde spôsob obsahuje inhibíciu aktivity OPGL spôsobom podía predkladaného vynálezu v takom rozsahu, že rýchlosť resorpcie kosti je významne znížená.
V predkladaných súvislostiach je také významné zníženie aspoň 3 % v porovnaní s patologickou rýchlosťou, ale predpokladá sa vyššie zníženie, napríklad aspoň 5 %, aspoň 7 %, aspoň 9 %, aspoň 11 %, aspoň 13 %, aspoň 15 % a aspoň 17 %, ale očakávajú sa aj ešte vyššie zníženia, ako napríklad aspoň 20 % alebo aj aspoň 30 %. Osobitne výhodné je, aby zníženie kosťovej resorpcie viedlo k inverzii rovnováhy medzi tvorbou a resorpciou kosti, tzn. aby bol dosiahnutý stavu, ked je rýchlosť tvorby kosti vyššia ako rýchlosť resorpcie kosti. Samozrejmé je, že táto nerovnováha nemôže byt udržovaná (pretože by viedla k osteopetróze), ale starostlivým kontrolovaním počtu a imunologických dôsledkov imunizácie jedinca je možné dosiahnuť časom rovnováhu, ktorá vedie k zachovaniu kosťovej hmoty. Alternatívne, pokial nemôže spôsob podlá predkladaného vynálezu ukončiť u jedinca stratu kosťovej hmoty, môže spôsob podlá predkladaného vynálezu (volitelne v kombinácii s inými známymi metódami na zníženie straty kostí pacientov s osteoporózou) byť použitý na dosiahnutie významného zníženia straty kosťovej hmoty, čo predĺži čas, pri ktorom má pacient dostatok kosťovej hmoty.
Spôsoby na meranie rýchlosti resorpcie kosti a tvorby kosti sú známe v odbore. Biochemické testy umožňujú určiť rýchlosť kosťovej resorpcie pomocou merania koncentrácií niektorých fragmentov kolagénu typu I v krvi (pozri WO 93/15107 a WO 94/14844). Alternatívne môže byt rýchlost straty kosťovej hmoty meraná fyzikálne; reprezentatívne opisy spôsobov na hodnotenie kosťovej hmoty neivazívnymi, fyzikálnymi metódami sú uvedené vo WO 88/06862, WO 94/12855, WO 95/14431 a WO 97/00643.
Peptidy, polypeptidy a prostriedky podlá predkladaného vynálezu
Ako je zrejmé z hore uvedeného opisu, je predkladaný vynález založený na koncepte imunizácie jedincov proti OPGL antigénu na nepriame dosiahnutie zníženej aktivity osteoklastov. Výhodným spôsobom na dosiahnutie takej imunizácie je použitie modifikovaných verzií OPGL, čo poskytuje molekuly, ktoré neboli skôr opísané v odbore.
Predpokladá sa, že modifikované OPGL molekuly tu uvedené sú samotné nové a preto sa významná čast predkladaného vynálezu týka OPGL analógu, ktorý je odvodený od živočíšneho OPGL a ktorý obsahuje modifikácie vedúce k tomu, že imunizácia živočícha analógom vedie k produkcii protilátok reagujúcich špe43 cificky s nemodifikovaným OPGL polypeptidom. Výhodne zodpovedá charakter modifikácie typom modifikácií opísaným hore v opise rôznych uskutočnení spôsobu podľa predkladaného vynálezu pri použití modifikovaného OPGL. Preto sú akékoľvek tu uvedené opisy týkajúce sa modifikovaných OPGL molekúl relevantné pre účely opisu OPGL analógov podľa predkladaného vynálezu.
Je potrebné uviest, že výhodné modifikované molekuly OPGL obsahujú modifikácie, ktoré vedú k vzniku polypeptidu, ktorý má aspoň 70% identitu sekvencie s OPGL alebo s jeho subsekvenciou dĺžky aspoň 10 aminokyselín. Vyššie identity sekvencie sú výhodné, napríklad aspoň 75% identita alebo aj 80%, 85%, 90% alebo 95%. Identita sekvencie pre proteíny a nukleové kyseliny môže byt vyrátaná ako (Nref - Nd^f) . 100 / Nref, kde Nd^ je celkový počet neidentických zvyškov v dvoch zoradených sekvenciách a kde Nrej je počet zvyškov v jednej zo sekvencii. Tak má DNA sekvencia AGTCAGTC 75% identitu sekvencie so sekvenciou AATCAATC (Ndif = 2 a Nref =8).
Vynález sa tiež týka prostriedkov použiteľných v uskutočnení spôsobu podľa predkladaného vynálezu. Tak sa vynález týka tiež imunogénneho prostriedku obsahujúceho imunologický účinné množstvo OPGL polypeptidu, ktorý je pre zviera vlastným proteínom, kde uvedený OPGL polypeptid je pripravený spoločne s imunologický prijateľným adjuvansom tak, že je dosiahnuté prekonanie autotolerancie živočícha k OPGL polypeptidu, kde prostriedok dalej obsahuje farmaceutický a imunologický prijateľné riedidlo a/alebo vehikulum a/alebo nosič a/alebo prísadu. Inými slovami, táto čast vynálezu sa týka prípravkov prirodzených OPGL polypeptidov, ktoré boli opísané v súvislosti s uskutočnením! spôsobu podľa predkladaného vynálezu.
Vynález sa týka tiež imunogénneho prostriedku obsahujúceho imunologický účinné množstvo analógu OPGL, kde uvedený prostriedok dalej obsahuje farmaceutický a imunologický prijatelné riedidlo a/alebo vehikulum a/alebo nosič a/alebo prísadu. Inými slovami, táto časť vynálezu sa týka prípravkov obsahujúcich modifikovaný OPGL, ako bol opísaný hore. Volba adjuvansov, nosičov a vehikúl je rovnaká, ako bola opísaná hore pri opise prípravy modifikovaných a nemodifikovaných OPGL na použitie v spôsobu inhibície OPGL.
Polypeptidy sú pripravené spôsobmi dobre známymi v odbore. Dlhšie polypeptidy sú zvyčajne pripravené pomocou rekombinantnej techniky zahŕňajúcej vloženie sekvencie nukleovej kyseliny kódujúcej analóg OPGL do vhodného vektoru, transformáciu vhodnej hostitelskej bunky vektorom, expresiu sekvencie nukleovej kyseliny, získania produktu expresie z hostitelskej bunky alebo zo supernatantu kultúry a následné prečistenie a volitelne ďalšie modifikácie, napríklad opätovné zloženie alebo derivatizáciu.
Kratšie peptidy sú výhodne pripravené pri použití známych techník peptidovej syntézy na pevnej fáze alebo v kvapalnej fáze. Avšak nedávne pokroky v tejto technológii umožňujú produkciu kompletných polypeptidov a proteínov pomocou týchto techník a preto predkladaný vynález zahŕňa syntetickú prípravu dlhších konštruktov.
Fragmenty nukleovej kyseliny a vektory podlá predkladaného vynálezu
Z hore uvedeného opisu je jasné, že modifikované OPGL polypeptidy môžu byt pripravené pomocou rekombinantných techník, ale tiež chemickou syntézou alebo semisyntézou; po45 sledné dve možnosti sú osobitne významné vtedy, keď modifikácia spočíva v naviazaní na proteínový nosič (ako je KLH, difterický toxoid, tetanický toxoid a BSA) a neproteínové molekuly, ako sú karbohydrátové polyméry a samozrejme tiež vtedy, keď modifikácia zahŕňa adíciu vedľajších reťazcov alebo vedľajších skupín k peptidovému reťazcu odvodenému od OPGL.
Na účely rekombinantnej technológie - a samozrejme tiež na účely imunizácie nukleovými kyselinami - sú fragmenty nukleových kyselín kódujúce modifikovaný OPGL významnými chemickými produktmi. Preto sa významná čast predkladaného vynálezu týka fragmentov nukleových kyselín, ktoré kódujú analógy OPGL, tzn. polypeptid odvodený od OPGL, ktorý buď obsahuje sekvenciu prirodzeného OPGL, ku ktorej bol pridaný alebo na ktorú bol fúzovaný fúzny partner, alebo - výhodne - polypeptid odvodený od OPGL, do ktorého bol vložený cudzorodý T-lymfocytárny epitop prostredníctvom inzercie a/alebo adície, výhodne prostredníctvom substitúcie a/alebo delécie. Fragmenty nukleovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu sú DNA alebo RNA fragmenty.
Fragmenty nukleovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu sú zvyčajne inzertované vo vhodných vektoroch za vzniku klonovacích alebo expresných vektorov obsahujúcich fragment nukleovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu; také nové vektory sú súčasťou predkladaného vynálezu. Podrobnosti týkajúci sa konštrukcie týchto vektorov podľa predkladaného vynálezu budú opísané ďalej v súvislosti s transformovanými bunkami a mikroorganizmami. Vektory môžu, podľa účelu a typu aplikácie, byt vo forme plazmidov, fágov, kozmidov, mini-chromozómov alebo vírusov, ale môže ísť tiež o holú DNA, ktoré je exprimovaná iba prechodne v určitých typoch buniek. Výhodné klonovacie a expresné vektory podľa predkladaného vynálezu sú schopné autonómnej replikácie, čo umožňuje dosiahnutie vysokého počtu kópii pre vysokú expresiu alebo vysokú úroveň replikácie pre následné klonovanie.
Všeobecne obsahuje vektor podľa predkladaného vynálezu nasledujúce prvky v smere 5'->3', ktoré sú v operatívnej väzbe; promotor na riadenie expresie fragmentu nukleovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu, voliteľne sekvenciu nukleovej kyseliny kódujúcej vedúci peptid umožňujúci sekréciu (do extracelulárnej fázy, alebo - pokiaľ je to použiteľné - do periplazmy) alebo integráciu polypeptidového fragmentu do membrány, fragment nukleovej kyseliny podľa predkladaného vynálezu, a voliteľne sekvenciu nukleovej kyseliny kódujúcej terminátor. Pri použití expresného vektoru v produkujúcich kmeňoch alebo bunkových líniách je na zlepšenie genetickej stability transformovaných buniek výhodné, aby bol vektor, po vložení do hostiteľskej bunky, integrovaný do genómu hostiteľskej bunky. Naopak, pri použití vektorov v dosiahnutí in vivo expresie v zvieratách (tzn. pri použití vektoru pri DNA vakcinácii) je z dôvodov bezpečnosti výhodné, aby vektor nemohol byt integrovaný do genómu hostiteľskej bunky; zvyčajne sa použije holá DNA alebo neintegrujúce vírusové vektory, ktorých výber je dobre známy odborníkom v odbore.
Vektory podľa predkladaného vynálezu sú použité na transformáciu hostiteľských buniek na produkciu modifikovaných OPGL polypeptidov podľa predkladaného vynálezu. Také transformované bunky, ktoré sú tiež súčasťou predkladaného vynálezu, môžu byt kultivované bunky alebo bunkové línie použité na propagáciu fragmentov nukleových kyselín a vektorov podľa predkladaného vynálezu, alebo môžu byt použité na rekombinantnú produkciu modifikovaných OPGL polypeptidov podľa predkladaného vynálezu.
Alternatívne môžu byt transformované bunky vhodnými kmeňmi pre živé vakcíny, kde uvedený fragment nukleovej kyseliny (v jednej alebo viacerých kópiách) je do nich inzertovaný tak, aby bola dosiahnutá sekrécia alebo integrácia modifikovaného OPGL do bakteriálnej membrány alebo do bunkovej steny.
Výhodnými bakteriálnymi bunkami podlá predkladaného vynálezu sú mikroorganizmy, ako sú baktérie (ako sú Escherichia spp (napríklad E. coli), Bacillus (napríklad Bacillus subtilis), Salmonella alebo Mycobacterium (výhodne nepatogénne, napríklad M. bovis BCG), kvasinky (ako je S. cerevisiae) a protozoá. Alternatívne môže byt transformovaná bunka pôvodom z mnohobunkového organizmu, ako sú huby, hmyz, rastliny a cicavci. Najvýhodnejšie sú bunky od človeka, pozri opis vektorov a bunkových línií uvedený ďalej. Nedávne výsledky naznačili výhodné použitie komerčne dostupnej línie od Drosopbila melanogaster (Schneider 2 (S2) bunková línia a vektorový systém od Invitrogen) na rekombinantnú produkciu polypeptidov v laboratóriu prihlasovatelov vynálezu a preto je tento expresný systém osobitne výhodný.
Na účely klonovania a/alebo optimalizovanej expresie je výhodné, aby bola transformovaná bunka schopná replikovat fragment nukleovej kyseliny podlá predkladaného vynálezu.
Bunky exprimujúce fragment nukleovej kyseliny sú výhodnými uskutočnením! vynálezu; tieto bunky môžu byt použité na maloobejmovú alebo veľkoobjemovú prípravu modifikovaného OPGL alebo - v prípade nepatogénnych baktérií - ako zložky živých vakcín.
Pri produkcii modifikovaného OPGL podlá predkladaného vynálezu pomocou transformovaných buniek je vhodné, i keď nie zásadné, aby bol produkt expresie buď exportovaný do kultivačného média alebo prítomný na povrchu transformovaných buniek.
Po identifikácii účinnej produkčnej bunky je výhodné, aby sa z nej vytvorila stabilná bunková línia nesúca vektor podlá predkladaného vynálezu a exprimujúci fragment nukleovej kyseliny kódujúcej modifikovaný OPGL. Výhodne táto stabilná bunková línia nesie alebo secernuje analóg OPGL podlá predkladaného vynálezu, čo ulahčuje jeho prečistenie.
Všeobecne sú v hostitelovi použité plazmidové vektory obsahujúce replikón a kontrolné sekvencie, ktoré sú odvodené od druhu kompatibilného s hostitelskou bunkou. Vektory zvyčajne obsahujú replikačné miesto, rovnako ako značiace sekvencie, ktoré umožňujú fenotypovú selekciu transformovaných buniek. Napríklad, E. coli je zvyčajne transformovaná pri použití pBR322, plazmidu odvodeného od E. coli (pozri napríklad Bolivar et al., 1977). pBR322 plazmid obsahuje gény na rezistenciu na ampicilín a tetracyklín a preto poskytuje lahký prostriedok na identifikáciu transformovaných buniek. pBR plazmid, alebo iný mikrobiálny plazmid alebo fág musí tiež obsahovat - alebo musí byť modifikovaný tak, aby obsahoval - plazmid, ktorý môže byt použitý prokaryotickým mikroorganizmom pre expresiu.
Medzi promotory najčastejšie používané pre rekombinantné DNA konštrukty patrí B-laktamázový (penicilinázový) a laktózový promotorový systém (Chang et al., 1978; Itakura et al., 1977; Goeddel et al., 1979) a tryptofánový (trp) promotorový systém (Goeddel et al., 1979; EP-A-0036776). Hoci toto sú najbežnejšie používané promotory, môžu byt použité aj ďalšie mikrobiálne promotory a podrobnosti týkajúce sa ich nukleotidových sekvencii boli publikované, čo umožňuje ich funkčnú li49 gáciu na plazmidové vektory (Siebwenlist et al., 1980). Niektoré gény z prokaryontov môžu byť účinne exprimované v E. coli z ich vlastných promótorových sekvencii, takže nie je nutné artificiálne pridanie iného promotoru.
Okrem prokaryotických organizmov môžu byt použité tiež eukaryotické mikróby, ako sú kvasinkové kultúry, a tiež tu by mal byt promotor schopný riadenia expresie. Saccharomyces cerevisiae, alebo bežné pekárske kvasinky, sú najčastejšie používané eukaryotické mikroorganizmy, hoci je dostupných vela ďalších kmeňov. Na expresiu v Saccharomyces je bežne použitý plazmid Yrp7 (Stinchcomb et al., 1979; Kingsman et al., 1979; Tschemper et al., 1980). Tento plazmid už obsahuje trpí gén, ktorý je selekčným markérom pre mutantné kmene kvasiniek neschopných rastu v tryptofáne, ako je napríklad ATCC č.
44076 alebo PEP4-1 (Jones, 1977). Prítomnosť trpí lézie ako charakteristika genómu kvasinkovej hostitelskej bunky potom poskytuje účinné prostredie na detekciu transformácie pomocou kultivácie v neprítomnosti tryptofánu.
Medzi vhodné promotorové sekvencie v kvasinkových vektoroch patria promotory pre 3-fosfoglyceratkinázu (Hitzman et al., 1980) alebo iné glykolytické enzýmy (Hess et al., 1968; Holladn et al., 1978), ako je enoláza, glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenáza, hexokináza, pyruvátdekarboxyláza, fosfofruktokináza, glukóza-6-fosfát izomeráza, 3-fosfoglycerátmutáza, pyruvátkináza, triózafosfátizomeráza, fosfoglukózaizomeráza a glukokináza. Pri konštrukcii vhodných expresných plazmidov sú terminačné sekvencie asociované s týmito génmi tiež ligované do expresného vektoru 3' k sekvencii, ktorá má byť exprimovaná na dosiahnutie polyadenylácie mRNA a terminácie.
Iné promotory, ktoré majú ďalšiu výhodu v transkripcii riadenej kultivačnými podmienkami, sú promotorový región alkohol-dehydrogenázy 2, izocytrochrómu C, kyslej fosfatázy, degradačných enzýmov asociovaných s metabolizmom dusíka a hore uvedené glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenázy, a enzýmy zodpovedné za využitie maltózy a galaktózy. Vhodný je akýkolvek plazmidový vektor obsahujúci promotor, sekvenciu rozpoznávajúcu počiatok replikácie a terminačnú sekvenciu kompatibilnú s kvasinkami.
Okrem mikroorganizmov môžu byť tiež ako hostitelia použité kultúry buniek odvodených od mnohobunkových organizmov. V zásade je použitelná akákolvek bunková kultúra, nech zo stavovcov alebo z bezstavcových. Napriek tomu, významnejšie sú bunky zo stavovcov a propagácia buniek od stavovcov v kultúre (tkanivovej kultúre) sa stala v posledných rokoch rutinným postupom (Tissue Culture, 1973). Príkladmi takých použitelných hostitelských bunkových línií sú VERO a HeLa bunky, ovariálne bunky čínskeho chrčka (CHO) a W138, BHK, COS-7, 293, bunky Spodoptera frugiperda (SF) (komerčne dostupné ako kompletný expresný systém od Protein Sciences,
1000 Research Parkway, Meriden, CT06450, USA a od Invitrogen) a MDCK bunkové línie. V predkladanom vynáleze je osobitne výhodnou bunkovou líniou S2 dostupná od Invitrogen, PO Box 2312, 9704 CH Groningen, The Netherlands.
Expresné vektory pre také bunky zvyčajne obsahujú (pokial je to nutné) sekvenciu rozoznávajúcu počiatok replikácie, promotor umiestnený pred exprimovaným génom, spoločne s nezbytnými väzbovými miestami pre ribozómy, miesta pre zostrih RNA, polyadenylačné miesto a sekvencie na ukončenie transkripcie.
Na použitie v cicavčích bunkách sú kontrolné funkcie na expresných vektoroch často dodané vírusovým materiálom. Napríklad, bežne používané promotory sú odvodené od polyomavírusu, adenovírusu 2 a najčastejšie od opičieho vírusu 40 (SV40). Časné a pozdné promotory SV40 vírusu sú osobitne výhodné, pretože sú obidva získané lahko z vírusu ako fragment, ktorý tiež obsahuje SV40 vírusový zdroj replikácie (Fiers et al., 1978). Také môžu byt použité menšie alebo väčšie fragmenty SV40, s podmienkou, že obsahujú približne 250 bp sekvenciu od Hindlll miesta smerom k BglI miestu umiestnenému vo vírusovej sekvencii rozoznávajúcej počiatok replikácie. Ďalej je tiež možné, a často žiadúce, použit promotorové alebo kontrolné sekvencie normálne asociované so sekvenciou požadovaného génu, čo zaručí, že také kontrolné sekvencie budú kompatibilné so systémami hostiteľskej bunky.
Sekvencia rozoznávajúca počiatok replikácie môže byt dodaná buď úpravou vektoru tak, aby obsahoval exogénnu sekvenciu rozoznávajúcu počiatok replikácie, ktorá môže byt odvodená z SV40 alebo iného vírusu) napríklad polyomavírusu, adenovírusu, VSV, BPV), alebo môže byt dodaná chromozornálnym replikačným mechanizmom hostiteľskej bunky. Pokiaľ je vektor integrovaný do chromozómu hostiteľskej bunky, tak je často dostatočný druhý variant.
Identifikácia použiteľných analógov OPGL
Odborníkom v odbore bude jasné, že nie všetky možné varianty a modifikácie prirodzeného OPGL budú schopné vyvolať tvorbu protilátok u zvieraťa, ktoré sú skrížené reaktívne s prirodzenou formou. Nie je však obťažné vykonať účinné štandardné vyšetrenie na modifikované OPGL molekuly, ktoré splňujú minimálne požiadavky na tu opisovanú imunologickú reaktivitu.
Preto sa ďalšia časť predkladaného vynálezu týka spôsobu identifikácie modifikovaného OPGL polypeptidu, ktorý je schopný indukovať protilátky proti nemodifikovanému OPGL polypeptidu u zvieraťa, kde nemodifikovaný OPGL polypeptid je (neimunogénny) vlastný proteín, kde uvedený spôsob zahŕňa:
- prípravu, pomocou peptidovej syntézy alebo techník génového inžinierstva, sady navzájom odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov, v ktorých boli v aminokyselinovej sekvencii OPGL polypeptidu daného živočíšneho druhu vykonané inzercie, delécie alebo substitúcie aminokyselín, ktoré viedli k vzniku aminokyselinových sekvencii obsahujúcich T-lymfocytárne epitopy, ktoré sú cudzorodé pre živočíšny druh, alebo prípravu sady fragmentov nukleových kyselín kódujúcich sadu vzájomne odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov;
- testovanie členov sady modifikovaných OPGL polypeptidov alebo fragmentov nukleových kyselín na ich schopnosť indukovať produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v živočíšnom druhu; a
- identifikáciu a volitelne izoláciu členov sady modifikovaných OPGL polypeptidov, ktoré významne indukujú produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v druhu alebo identifikácii a volitelne izoláciu polypeptidových expresných produktov kódovaných členmi sady fragmentov nukleových kyselín, ktoré významne indukujú produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v živočíšnom druhu.
V tejto súvislosti je sada vzájomne odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov súbor neidentických modifikovaných OPGL polypeptidov, ktoré boli, napríklad, vybrané podlá kritérií uvedených hore (napríklad kombináciou analýzy cirkulárneho dichroizmu), NMR spektrálnej analýzy a/alebo rôntgenovej difrakcie). Táto sada môže obsahovať len niekolko členov, ale predpokladá sa, že môže obsahovať tiež niekolko stoviek členov
Test členov sady môže byt nakoniec vykonaný in vivo, ale môže byt vykonaný určitý počet testov in vitro, ktoré zužujú počet modifikovaných molekúl, ktoré môžu byt použité na predkladaný vynález.
Pretože účelom vkladania cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov je podpora B-lymfocytárnej odpovedi prostredníctvom pomoci T-lymfocytov, je podmienkou to, aby bola modifikovaným OPGL polypeptidom indukovaná proliferácia T-lymfocytov. Proliferácia T-lymfocytov môže byt testovaná štandardnými prolif eračnými testami in vitro. Stručne, vzorka bohatá na Tlymfocyty sa získa od jedinca a potom sa kultivuje. Kultivované T-lymfocyty sa kontaktujú s APC jedinca, ktoré vopred vychytali modifikovanú molekulu a spracovali ju a prezentujú jej T-lymfocytárne epitopy. Proliferácia T-lymfocytov sa sleduje a porovnáva sa s vhodnou kontrolou (napríklad T-lymfocytmi v kultúre kontaktovanými s APC, ktoré spracovali prirodzený, intaktný OPGL). Alternatívne môže byt proliferácia meraná stanovením koncentrácie relevantných cytokinov uvoľňovaných T-lymfocytmi v reakcii na rozpoznanie cudzorodých T-lymfocytárnych epitopov.
Takto môže byt dosiahnutá situácia, že je značne pravdepodobné, že jeden modifikovaný OPGL zo sady je schopný indukovať tvorbu protilátok proti OPGL a je možné pripravit imunogénny prostriedok obsahujúci aspoň jeden OPGL polypeptid, ktorý môže indukovať protilátky proti nemodifikovanému OPGL u živočícha, pri ktorom je nemodifikovaný OPGL polypeptid vlastným proteínom, kde táto príprava zahŕňa zmiešanie člena sady, ktorý signifikantne indukuje produkciu protilátok u živočícha, ktoré sú reaktívne s OPGL, s farmaceutický a imunologický prijateľným nosičom a/alebo vehikulom a/alebo riedidlom a/alebo prísadou, voliteľne v kombinácii s aspoň jedným farmaceutický a imunologický prijateľným adjuvansom.
Hore uvedené aspekty predkladaného vynálezu sa týkajú testu sady polypeptidov, ktorý je uskutočnený najskôr pomocou prípravy veľa vzájomne odlišných sekvencii nukleových kyselín alebo vektorov podľa predkladaného vynálezu, inzerciou týchto sekvencii alebo vektorov do vhodných expresných vektorov, transformáciou vhodných hostiteľských buniek vektormi a expresiou sekvencii nukleových kyselín podľa predkladaného vynálezu. Tieto kroky môžu byt nasledované izoláciou produktov expresie. Je výhodné, aby boli sekvencie nukleovej kyseliny a/alebo vektory pripravené spôsobom zahŕňajúcim uskutočnenie molekulárnej amplifikačnej techniky, ako je PCR, alebo pomocou syntézy nukleových kyselín.
Iná časť predkladaného vynálezu sa týka spôsobu liečby, profylaxie alebo zmiernenia ochorenia charakterizovaného nadmernou resorpciou kosti u zvieraťa, vrátane človeka, ktorý zahŕňa podanie účinného množstva aspoň jednej substancie odlišnej od osteoprotegerinu, ktorá blokuje stimulačný efekt OPGL na aktivitu osteoklastov, uvedenému zvierati. Predpokladáme, že taký postup nebol nikdy v odbore navrhnutý.
Výhodné uskutočnenie tohto aspektu vynálezu zahŕňa použitie protilátky špecifickej k OPGL (poly- alebo monoklonálnej) alebo jejho variantu so špecifickou väzbou, ako substancie blokujúcej stimulačný efekt OPGL. Je výhodné, aby bola protilátkou IgG alebo IgM molekula alebo špecificky sa viažuci variant odvodený od IgG alebo IgM. Špecificky sa viažucim variantom protilátky môže byt Fab fragment, F(ab')2 fragment, humanizovaná monoklonálna protilátka alebo jej fragment, alebo fragment di- alebo multimérnej protilátky, ako je diaproti55 látka (bišpecifická dimerická molekula odvodená od protilátky vyrábaná Cambridge Antibody Technology).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Rozhodli sme sa klonovať alebo syntetizovať cDNA kódujúcu myši a ludský OPGL v skrátenej verzii obsahujúci aminokyselinové zvyšky 158-316 v prípade myšieho a zvyšky 159-317 v prípade ludského OPGL (čísla zodpovedajú číslovaniu v SEQ ID NO:
a 4, v príslušnom poradí). Pretože skrátené verzie vykazujú biologickú aktivitu, je logické zamerať autoprotilátky proti tejto časti OPGL. Okrem toho je pri tomto uskutočnení proteín menší, čo ulahčuje manipuláciu s proteínom.
Syntetická cDNA kódujúca myšie OPGL zvyšky 158-316 bola syntetizovaná odstránením suboptimálních E. coli a Pichia pastoris kodónov z publikovanej sekvencie. Ďalej boli do otvoreného čítacieho rámca inkorporované N-koncová histidínová koncovka, časť štepiaceho miesta signálnej sekvencie Oí-párovacieho faktoru zo Saccharomyces cerevisiae a vhodné miesta pre reštrikčné enzýmy (pozri SEQ ID NO: 7).
Táto cDNA kódujúca prirodzený myší OPGL bola klonovaná do štandardného Escherichia coli expresného vektoru (pTrc99a) pri použití BspHI a HindlII reštrikčných enzýmov a štandardného klonovacieho vektoru (pBluescript KS+) pri použití Sací a Kpnl reštrikčných enzýmov (za zisku SEQ ID NO: 9).
Expresia v bunkách Escherichia coli viedla k približne 30% rekombinantného OPGL prítomných v celkových proteínoch Escherichia coli. Proteín bol znovu zložený a prečistený pri použití nasledujúceho postupu:
1. Bunky boli získané odstredením.
2. Bunky sa suspendovali vo fosfátom pufrovanom salinickom roztoku (PBS) a odstredili sa.
3. Supernatant sa odstránil a bunky sa resuspendovali v troch objemoch (100 mM Tris(hydroxymetyl)aminometánhydrochloridu, mM ditiotreitolu (DTT), 0,5 M NaCl, pH 8,0).
4. K bunkám sa pridalo 8 μΐ 50 mM PMSF a 80 μΐ lysozymu (10 mg/ml) na gram buniek a vykonala sa inkubácia pri teplote okolia počas 20 minút.
5. Na každý gram bunkovej pelety sa pridali 4 mg kyseliny deoxycholovej a suspenzia sa inkubovala pri 37°C do vzniku viskozity.
6. Pridá sa 20 μΐ DNAzy (1 mg/ml) na gram buniek a MgCl2 do 5 mM a suspenzia sa inkubuje pri teplote okolia počas 30 minút.
7. Suspenzia sa sonikuje na lade do vymiznutia viskozity.
8. Po odstredení (20000 x g počas 30 minút) sa peleta resuspenduje v H2O, opakovane sa odstredí a resuspenduje sa v 3 ml 1 M močoviny na gram hmotnosti buniek.
9. Po odstredení (20000 x g počas 30 minút) sa peleta resuspenduje v 1 M guanidínhydrochloridu, 100 mM Tris(hydroxymetylJaminometahydrochloridu, pH 7,5.
10. Po odstredení (20000 x g počas 30 minút) sa peleta resuspenduje v 1 M guanidínhydrochloridu, 20 mM Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridu, 1% β-merkaptoetanolu, pH 8,0, a mieša sa cez noc pri teplote 4’C.
11. Po odstredení (40000 x g počas 1-4 hodín) sa supernatant prefiltruje a uskladní sa pri -20’C.
12. Solubilizované inkluzné telieska sa separujú gélovou filtračnou chromatografiou pri použití Superdex 200 materiálu (Pharmacia).
13. Frakcie obsahujúce rekombinantný OPGL sa zhromaždia a riedia sa na 0,1 mg/ml 1,5 M guanidínhydrochloridu, 20 mM
Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridom, 1 mM DTT, pH 7,5.
14. Materiál sa dialyzuje cez noc pri 4°C proti 10 objemom
1,5 M guanidínhydrochloridu, 20 mM Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridu, 1 mM DTT, pH 7,5.
15. Materiál sa dialyzuje cez noc pri 4“C proti 10 objemom 1,0 M guanidínhydrochloridu, 20 mM Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridu, 1 mM DTT, pH 7,5.
16. Materiál sa dialyzuje cez noc pri 4’C proti 10 objemom 0,5 M guanidínhydrochloridu, 20 mM Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridu, 1 mM DTT, pH 7,5.
17. Materiál sa dialyzuje cez noc pri 4°C proti 10 objemom 20 mM Tris(hydroxymetyl)aminometahydrochloridu, 150 mM arginínu, 1 mM DTT, pH 7,5.
18. Materiál sa dialyzuje cez noc pri 4C proti 10 objemom 20 mM Tris(hydroxymetylJaminometahydrochloridu, 150 mM arginínu, pH 7,5.
19. Zložený materiál sa lyofilizuje a uskladní sa pri -20C.
Účinnosť skladania týmto postupom je približne 40% a čistota presahuje 65 %. Prečistenie a skladanie sú stále predmetom ďalšieho zlepšovania. Skladanie za imobilizovaného stavu je predmetom výskumu a enzymatické odstránenie histidínovej koncovky je možné vykonat spôsobom opísaným v Pedersen et al., 1999. Vlastnosti rekombinantného proteínu boli charakterizované a verifikované pomocou SDS-PAGE, N-koncového sekvenovania, aminokyselinovéj analýzy a hmotnostnej spektrometrie.
Pripravil sa cysteínový substitučný mutant prirodzeného myšieho OPGL (v ktorom je cysteín zodpovedajúci aminokyselinovému zvyšku v SEQ ID NO: 4 substituovaný ser inom, pozri SEQ ID NO: 11 a 12). Toto je vykonané na elimináciu potenciálnych problémov so stabilitou pri prečistenom rekombinantnom proteíne. Tento mutovaný skrátený OPGL slúži ako základ pre va58 kcinačné konštrukty v súlade s opisom uvedeným dalej, ktorý platí pre DNA SEQ ID NO: 9. Pre rovnaký účel bol tiež pripravený príslušný Cys—>Ser mutant (v ktorom je substituovaný Cys221) ludského OPGL.
Vakcinačné molekuly sa najskôr pripravili inzerciou alebo substitúciou buď P2, alebo P30 epitopu z tetanického toxoidu vo vybraných pozíciách. Neskoršie môžu byt použité iné vhodné imunodominantné T-lymfocytárne epitopy.
Pozície na vkladanie variácii sú vybrané podlá znalosti existujúcich alebo predpokladaných B-lymfocytárnych epitopov a predpokladaných prvkov sekundárnej štruktúry prirodzenej molekuly, rovnako ako podlá porovnania s existujúcou trojrozmerovou štruktúrou TNFa (la8m.pdb) a CD40 ligandu (laly.pdb) pre modelovanie sekundárnej a terciárnej štruktúry extracelulárnej časti OPGL. Vkladanie do myšej molekuly prebehne v regiónoch zodpovedajúcich aminokyselinovým zvyškom 170-192, 198-218, 221-246, 256-261 a 285-316 (pozri číslovanie aminokyselín podlá SEQ ID NO: 4), zatial čo vkladanie do ludskej molekuly prebehne v regiónoch zodpovedajúcich aminokyselinovým zvyškom 171-193, 199-219, 222-247, 257-262 a 286-317.
Boli konštruované štyri varianty myšieho OPGL a tieto varianty boli rekombinantne exprimované v Escherichia coli’.
DNA kódujúca mOPGL(158-316)_P30(256-261) s N-koncovou histidínovou koncovkou (SEQ ID NO: 13)
PCR SEQ ID NO: 9 bola uskutočnená pri použití SEQ ID NO:
a 25 ako prajmerov. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné štiepený Sadí a KpnI a potom bol prečistený z agarózového gélu
Druhá PCR pri použití SEQ ID NO: 9 ako templátu bola uskuto59 čnená pri použití prajmeru SEQ ID NO: 26 a prajmeru špecifického pre vektor. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený KpnI a Hindlll. Obidva fragmenty boli potom ligované do SEQ ID NO: 9 v pBluescript KS+ reštrikčné trávenom SacII a Hindlll.
Na správnu mutáciu jednej bázy v tomto konštrukte bola vykonaná PCR pri použití konštruktu ako templátu s prajmermi SEQ ID NO: 33 a 29. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený PstI + EcoRi, bol prečistený na géli a potom bol ligovaný do chybného konštruktu tráveného PstI a EcoRi. Verifikovaný konštrukt (SEQ ID NO: 13) bol potom prenesený do pTrc99a pri použití reštrikčných enzýmov BspHI a Hindlll.
DNA kódujúca mOPGL(158-316)_P2(256-261) s N-koncovou histidínovou koncovkou (SEQ ID NO: 15)
PCR bola uskutočnená pri použití SEQ ID NO: 27 a 28 ako prajmerov bez templátu. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený PstI a EcoRi a potom bol prečistený z agarózového gélu Získaný fragment bol potom ligovaný do SEQ ID NO: 9 v pBluescript KS+ reštrikčné trávenom SacII a Hindlll. Verifikovaný konštrukt (SEQ ID NO: 15) bol potom prenesený do pTrc99a pri použití reštrikčných enzýmov BspHI a Hindlll.
DNA kódujúca mOPGL(158-316)_P2(288-302) s N-koncovou histidínovou koncovkou (SEQ ID NO: 17)
PCR SEQ ID NO: 9 bola uskutočnená pri použití SEQ ID NO: 22 a 29 ako prajmerov. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený PstI a BstBI a potom bol prečistený z agarózového gélu. Druhá PCR pri použití SEQ ID NO: 9 ako templátu bola uskutočnená pri použití prajmeru SEQ ID NO: 30 a prajmeru špecifického pre vektor. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený BstBI a KpnI a potom bol prečistený na géli. Obidva fragmenty boli potom ligované do SEQ ID NO; 9 v pBluescript
KS+ reštrikčné trávenom PstI a KpnI. Verifikovaný konštrukt (SEQ ID NO: 17) bol potom prenesený do pTrc99a pri použití reštrikčných enzýmov BspHI a HindlII.
DNA kódujúca mOPGL(158-316)_P30(221-241) s N-koncovou histidínovou koncovkou (SEQ ID NO: 19)
PCR SEQ ID NO: 9 bola uskutočnená pri použití SEQ ID NO:
a 29 ako prajmerov. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený SacII a KpnI a potom bol prečistený z agarózového gélu. Druhá PCR pri použití SEQ ID NO: 9 ako templátu bola uskutočnená pri použití prajmerov SEQ ID NO: 34 a 31. Vzniknutý PCR fragment bol reštrikčné trávený KpnI a EcoRI a potom bol prečistený na géli. Obidva fragmenty boli potom ligované do SEQ ID NO: 9 v pBluescript KS+ reštrikčné trávenom SacII a EcoRI. Verifikovaný konštrukt (SEQ ID NO: 19) bol potom prenesený do pTrc99a pri použití reštrikčných enzýmov BspHI a HindlII.
Expresia týchto skrátených variantov OPGL prebehla v E. coli za zisku viac ako 20 % celkového proteínu pre všetky varianty. Ďalší vývoj hore opísaných prečisťovacích a skladacích postupov pre prirodzený proteín (SEQ ID NO: 9) bude vykonaný. Tento postup môže slúžiť ako základ pre vývoj optimálnych postupov pre každý z variantov. Imobilizované skladanie variantov proteínov využívajúce histidínovú koncovku je ďalším postupom, na ktorom sa pracuje.
Alternatívne môžu byť varianty priamo prenesené do expresných vektorov pre Pichia pastoris pomocou reštrikčných enzýmov, alebo do iných kvasinkových expresných systému pri použití PCR, pokial je požadovaná glykozylácia. Je potrebné po61 znamenať, že glykozylácia nie je nutná pre biologickú aktivitu OPGL in vivo. Je tiež možné exprimovať skrátené OPGL v ľudských 293 fibroblastoch, ako je opísané v Lacey et al. Expresia v hmyzích bunkách je tiež možná (napríklad v Schneider 2 (S2) bunkovej línii a vektorovom systému alebo v bunkách Spodoptera frugiperda (SF) a vektorových systémoch, kde obidve línie sú dostupné od Invitrogen).
Prečistené varianty môžu byť použité na produkciu protilátok v králikoch na neskoršie použitie ako detekčné nástroje, pretože neexistujú žiadne komerčne dostupné protilátky. Ďalej bude tento materiál veľmi hodnotným prostriedkom v biologických testoch na hodnotenie potenciálne vhodných zlúčenín pre autovakcíny. Príprava protilátok bude uskutočnená pri použití metód známych v odbore.
Selekcia najlepších kandidátov pre autovakcíny sa vykoná hodnotením inhibičnej aktivity v testoch zrenia/aktivácie osteoklastov in vitro alebo in vivo na zvieracích modeloch osteoporózy. Použiteľné testy a modelové systémy sú opísané v literatúre (napríklad v Lacey et al., Fuller et al., a Simonet et al.).
Aktivita rekombinantných proteínov bude analyzovaná intravenóznou injekciou 100 μΐ neanestetizovaným Balb/c myšiam (0, 0,1 a 1,0 mg proteínu na kg hmotnosti myši) a o hodinu neskoršie odohraním 125 μΐ krvi z hlavnej žily ušnice pri použití kapiláry potiahnutej heparínom nasýteným vápnikom. Koncentrácia vápnika sa merí pri použití ICA2 (Rádiometer, Denmark). Prečistený a zložený rekombinantný myší OPGL (SEQ ID NO: 9) je reaktívny v tomto teste a zvyšuje koncentrácie ionizovaného vápnika v cirkulácii o až 100 %.
Kandidáti na autovakcínu sa budú hodnotiť napríklad pri použití autovakcinácie a následného sledovania inhibície uvol ňovania ionizovaného vápnika do periférnej krvi po injekcii rekombinantného mOPGL myšiam (ako je opísané v Burgess et al.).
Je potrebné uviesť, že ako alternatíva k modifikovanému OPGL môžu antiidiotypové protilátky namierené proti idiotypu anti-OPGL protilátky tiež slúžiť ako imunogény podía predkladaného vynálezu. Obdobne, použitie mimotopových polypeptidov, ktoré môžu byť izolované napríklad pomocou fágového zobrazovacieho systému pri použití anti-OPGL alebo osteoprotegerinu ako zachytávačej sondy, ako imunogénov, spadá tiež do rozsahu predkladaného vynálezu.
Odkazy:
1. Bucay, N. et al., 1998, Genes Dev. 12: 1260-1268.
2. Lacey, D.L. et al., 1998, Celí 93: 165-176.
3. Marks, S.C. Jr., 1989, Am. J. Med. Genet. 34: 43-53.
4. Simonet, W.S. et al. (1997), Celí 89: 309-319.
5. Fuler, W.S. et al., 1997, J. Exp. Med. 188: 997-1001.
6. Burgess, T.L. et al., 1999, J. Celí. Biol. 145: 527-538.
7. Pedersen J. et al., 1999, Protein Expr. Purif. 15: 389-400
Zoznam sekvencii <110> M&E Biotech A/S HALKIER, Torben HAANING, Jesper <120> Spôsob na in vivo inhibíciu aktivity ligandu pre osteoprotegerin
| <130> | 22021 PC 1 |
| <140> <141> | |
| <160> <170> | 35 Patentln ver |
| <210> <211> <212> <213> | 1 2271 DNA Homo sapiens |
| <220> <221> <222> | CDS (185).. (1138) |
| <400> | 1 |
aagcttggta ccgagctcgg atccactacC cgacccacgc gtccgcgcgc cccaggagcc 60 aaagccgggc tccaagtcgg cgccccacgt cgaggctccg ccgcagcctc cggagttggc 120 cgcagacaag aaggggaggg agcgggagag ggaggagagc tccgaagcga gagggccgag 180 cgcc atg cgc cgc gcc agc aga gac tac acc aag tac ctg cgt ggc tcg 229 Met Arg Arg Ala Ser Arg Asp Tyr Thr Lys Tyr Leu Arg Gly Ser
10 15
| gag gag Glu Glu | atg ggc ggc ggc ccc gga gcc | ccg cac gag ggc ccc ctg cac Pro His Glu Gly Pro Leu His | 277 325 | |||||||||||||
| Met ccg Pro | Gly Gly Gly Pro Gly Ala | |||||||||||||||
| 20 ccg cct Pro Pro 35 | gcg ccg | cac His | cag Gin 40 | 25 | 30 tcc cgc tcc | |||||||||||
| gcc Ala | ccg Pro | ccc pro | ccc gcc gcc | |||||||||||||
| Ala | Pro | Pro | Ala | Ala | Ser 45 | Arg Ser | ||||||||||
| atg | ttc | gtg | gcc | ctc | ctg | ggg | ctg | ggg | ctg | ggc | cag | gtt | gtc | tgc | agc | 373 |
| Met | Phe | Val | Ala | Leu | Leu | Gly | Leu | Gly | Leu | Gly | Gin | Val | Val | Cys | Ser | |
| 50 | 55 | 60 |
| gtc | gcc | ctg | ttc | ttc | tat | ttc aga | gcg | cag | atg | gat | cct | aat | aga | ata | 421 |
| Val | Ala | Leu | Phe | Phe | Tyr | Phe Arg | Ala | Gin | Met | Asp | Pro | Asn | Arg | íle | |
| 65 | 70 | 75 | .. | ||||||||||||
| tca | gaa | gat | ggc | act | cac | tgc att | tat | aga | att | ttg | aga | ctc | cat | gaa | 469 |
| Ser | Glu | Asp | Gly | Thr | His | Cys Íle | Tyr | Arg | Íle | Leu | Arg | Leu | His | Glu | |
| BO | 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| aat | gca | gat | ttt | caa | gac | aca act | ctg | gag | agt | caa | gat | aca | aaa | tta | 517 |
| Asn | Ala | Asp | Phe | Gin | Asp | Thr Thr | Leu | Glu | Ser | Gin | Asp | Thr | Lys | Leu | |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| ata | cct | gat | tca | tgt | agg | aga att | aaa | cag | gcc | ttt | caa | gga | get | gtg | 565 |
| íle | Pro | Asp | Ser | cys | Arg | Arg íle | Lys | Gin | Ala | Phe | Gin | Gly | Ala | Val | |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| caa | aag | gaa | tta | caa | cat | atc gtt | gga | tca | cag | cac | atc | aga | gca | gag | 613 |
| Glr. | Lys | Glu | Leu | Gin | His | íle Val | Gly | Ser | Gin | His | íle | Arg | Ala | Glu | |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| aaa | gcg | atg | gtg | gat | ggc | tca tgg | tta | gat | ccg | gcc | aag | agg | age | aag | 661 |
| Lys | Ala | Met | Val | Asn | Gly | Ser Trp | Leu | Asp | Leu | Ala | Lys | Arg | Ser | Lys | |
| 145 | 150 | 155 | |||||||||||||
| ctt | gaa | get | cag | cct | ttt | get cat | ctc | act | atc | aat | gcc | acc | gac | atc | 709 |
| Leu | Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Thr | Asp | Íle | |
| 160 | 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| cca | tct | ggt | tcc | cat | aaa | atg agt | ctg | tcc | tct | tgg | tac | cat | gat | cgg | 757 |
| Pro | Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val Ser | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| ggt | tgg | gcc | aag | atc | tcc | aac atg | act | ttt | age | aat | gga | aaa | cta | ata | 805 |
| Gly | Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asr. Met | Thr | Phe | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | íle | |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| gtt | aat | cag | gat | ggc | ttt | tat tac | ctg | tat | gcc | aac | att | tgc | ttt | ega | 853 |
| Val | Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| cat | cat | gaa | act | tca | gga | gac cta | get | aca | gag | tat | ctt | caa | cta | atg | 901 |
| His | His | Glu | Thr | Ser | Gly | Asp Leu | Ala | Thr | Glu | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | |
| 225 | 230 | 235 | |||||||||||||
| gtg | tac | gtc | act | aaa | acc | age atc | aaa | atc | cca | agt | tct | cat | acc | ctg | 949 |
| Val | Tyr | Val | Thr | Lys | Thr | Ser íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Thr | Leu | |
| 240 | 245 | 250 | 255 | ||||||||||||
| atg | aaa | gga | gga | age | acc | aag tat | tgg | tca | ggg | aat | tct | gaa | ttc | cat | 997 |
| Met | Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys Tyr | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | |
| 260 | 265 | 270 |
| ttt Phe | tat Tyr | tcc Ser | ata íle 275 | aac Asn | gtt ggt | gga Gly | ttt Phe 280 | ttt aag | tta Leu | cgg Arg | tet Ser 285 | gga Gly | gag Glu | 1045 | ||
| Val | Gly | Phe | Lys | |||||||||||||
| gaa | atc | age | atc | gag | gtc | tcc | aac | ccc | tcc | tta | ctg | gat | ccg | gat | cag | 1093 |
| Glu | íle | Ser | íle | Glu | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | |
| 290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
| gat | gca | aca | tac | ttt | ggg | get | ttt | aaa | gtt | ega | gat | ata | gat | tga | 1138 | |
| Asp | Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Arg | Asp | íle | Asp |
305 310 315
| gccccagttt | ttggagtgtt | atgtatttcc | tggatgtttg | gaaacatttt ttaaaacaag | 1198 |
| ccaagaaaga | tgtatatagg | tgcgtgagac | tactaagagg | catggcccca acggtacacg | 1258 |
| actcagtatc | catgctcttg | accttgtaga | gaacacgcgt | atttacagcc agtgggagat | 1318 |
| gttagactca | tggtgtgtta | cacaatggtt | tttaaatttt | gtaatgaatt cctagaatta « | 1378 |
| aaccagattg | gagcaattac | gggttgacct | tatgagaaac | tgcatgtggg ctatgggagg | 1438 |
| ggttggtccc | tggtcatgtg | ccccttcgca | gctgaagtgg | agagggtgtc atetagegea | 1498 |
| attgaaggat | catctgaagg | ggcaaattct | tttgaattgt | tacatcatgc tggaacctgc | 1558 |
| aaaaaatact | ttttctaatg | aggagagaaa | atatatgtat | ttttatataa tatctaaagt | 1618 |
| tatatttcag | atgtaatgtt | ttctttgcan | agtattgtaa | attatatttg tgctatagta | 1678 |
| tttgattcaa | aatatttaaa | aatgtcttgc | tgttgacata | tttaatgttt taaatgtaca | 1738 |
| gacatattta | actcgtgcac | tttgtaaatt | ccctggggaa | aacttgcagc taaggagggg | 1798 |
| aaaaaaatgt | tgtttcctaa | tatcaaatgc | agtatatttc | ttcgttcttt ttaagttaat | 1858 |
| agattttttc | agacttgtca | agcctgtgca | aaaaaattaa | aatggatgcc ttgaataata | 1918 |
| agcaggatgt | tggccaccag | gtgcctttca | aatttagaaa | ctaattgact ttagaaagct | 1978 |
| gacattgcca | aaaaggatac | ataatgggcc | actgaaatct | gtcaagagta gttatataat | 2038 |
| tgttgaacag | gtgtttttcc | acaagtgccg | caaattgtac | cttttttttt ttttcaaaat | 2098 |
| agaaaagtta | ttagtggttt | atcagcaaaa | aagtccaatt | ttaatttagt aaatgttatc | 2158 |
| ttatactgta | caataaaaac | attgcctttg | aatgttaatt | ttttggtaca aaaataaatt | 2218 |
| tatatgaaaa | aaaaaaaaaa | agggcggccg | ctctacaggg | ccctatccta tag | 2271 |
<210> 2 <211> 317 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 00> 2
| Met Arg Arg Ala Ser | Arg | Asp | Tyr Thr | Lys Tyr Leu Arg Gly Ser Glu | ||||||||||
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
| Glu | Met | Gly | Gly | Gly | Pro | Gly | Ala | Pro | His | Glu | Gly | Pro | Leu | His Ala |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
| Pro | Pro | Pro | Pro | Ala | Pro | His | Gin | Pro | Pro | Ala | Ala | Ser | Arg | Ser Met |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||
| Phe | Val | Ala | Leu | Leu | Gly | Leu | Gly | Leu | Gly | Gin | Val | Val | Cys | Ser Val |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||
| Ala | Leu | Phe | Phe | Tyr | Phe | Arg | Ala | Gin | Met | Asp | Pro | Asn | Arg | íle Ser |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
| Glu | Asp | Gly | Thr | His | Cys | íle | Tyr | Arg | íle | Leu | Arg | Leu | His | Glu Asn |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| Ala | Asp | Phe | Gin | Asp | Thr | Thr | Leu | Glu | Ser | Gin | Asp | Thr | Lys | Leu íle |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||
| Pro | Asp | Ser | Cys | Arg | Arg | íle | Lys | Gin | Ala | Phe | Gin | ciy | Ala | Val Gin |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||
| Lys | Glu | Leu | Gin | His | íle | Val | Gly | Ser | Gin | His | íle | Arg | Ala | Glu Lys |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||
| Ala | Met | Val | Asp | Gly | Ser | Trp | Leu | Asp | Leu | Ala | Lys | Arg | Ser | Lys Leu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Thr | Asp | íle Pro |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Ser | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg Gly |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||||
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Phe | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | íle Val |
| 195 | 200 | 205 | ||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg His |
| 210 | 215 | 220 | ||||||||||||
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Asp | Leu | Ala | Thr | Glu | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met Val |
| 225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||
| Tyr | Val | Thr | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Thr | Leu Met |
| 245 | 250 | 255 | ||||||||||||
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Tyr | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His Phe |
260 265 270
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ser | Gly Glu Glu |
| 275 | 280 | 285 | · | ||||||||||
| íle | Ser | íle | Glu | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp Gin Asp |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Arg | Asp | íle | Asp |
305 310 315 <210> 3 <211> 951 <212> DMA <213> Mus musculus <22O>
<221> CDS <222> (1)..(951) <220>
<221> rôzne vlastnosti, <222> (142?..(213) <223> Transmembránová doména <22O>
<22ΐ> rôzne_vlastnosti <222> (454) .. (94Β) <223> doména podobná faktoru nekrózy nádorov (TNF) <400> 3
| atg Met 1 | cgc cgg gcc agc ega gac tac | ggc aag tac ctg | cgc agc tcg Arg Ser Ser 15 | gag Glu | 48 | |||||||||||
| Arg | Arg | Ala | Ser 5 | Arg Asp | Tyr | Gly | Lys 10 | Tyr | Leu | |||||||
| gag | atg | ggc | agc | ggc | CCC | ggc | gtc | cca | cac | gag | ggt | ccg | ctg | cac | CCC | 96 |
| Glu | Met | Gly | Ser | Gly | Pro | Gly | Val | Pro | His | Glu | Gly | Pro | Leu | His | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| gcg | cct | tet | gca | ccg | get | ccg | gcg | ccg | cca | CCC | gcc | gcc | tcc | cgc | tcc | 144 |
| Ala | Pro | Ser | Ala | Pro | Ala | Pro | Ala | Pro | Pro | Ala | Ala | Ser | Arg | Ser | ||
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| atg | ttc | ctg | gcc | ctc | ctg | ggg | ctg | gga | ctg | ggc | cag | gtg | gtc | tgc | agc | 192 |
| Met | Phe | Leu | Ala | Leu | Leu | Gly | Leu | Gly | Leu | Gly | Gin | Val | Val | Cys | Ser | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| atc | get | ctg | ttc | ctg | tac | ttt | ega | gcg | cag | atg | gat | cct | aac | aga | ata | 240 |
| íle | Ala | Leu | Phe | Leu | Tyr | Phe | Arg | Ala | Gin | Met | Asp | Pro | Asn | Arg | íle | |
| 65 | 70 | 75 | 80 |
| tca | gaa | gac | agc | act cac | tgc | ttt tat aga | atc | ctg aga | ctc | cat | gaa | 288 |
| Ser | Glu | Asp | Ser | Thr His | Cys | Phe Tyr Arg | íle | Leu Arg | Leu | His | Glu | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||
| aac | gca | ggt | ttg | cag gac | tcg | act ctg gag | agt | gaa gac | aca | cta | cct | 336 |
| Asn | Ala | Gly | Leu | Gin Asp | Ser | Thr Leu Glu | Ser | Glu Asp | Thr | Leu | Pro | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||
| gac | tcc | tgc | agg | agg atg | aaa | caa gcc ttt | cag | ggg gcc | gtg | cag | aag | 384 |
| Asp | Ser | Cys | Arg | Arg Met | Lys | Gin Ala Phe | Gin | Gly Ala | Val | Gin | Lys | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||
| gaa | ctg | caa | cac | att gtg | ggg | cca cag cgc | ttc | tca gga | get | cca | get | 432 |
| Glu | Leu | Gin | His | íle Val | Gly | Pro Gin Arg | Phe | Ser Gly | Ala | Pro | Ala | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||
| atg | atg | gaa | ggc | tca tgg | ttg | gat gcg gcc | cag | ega ggc | aag | cct | gag | 480 |
| Mat | Met | Glu | Gly | Ser Trp | Leu | Asp Val Ala | Gin | Arg Gly | Lys | Pro | Glu | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||
| gcc | cag | cca | ttt | gca cac | ctc | acc atc aat | gcc | gcc agc | atc | cca | tcg | 528 |
| Ala | Gin | Pro | Phe | Ala His | Leu | Thr íle Asn | Ala | Ala Ser | íle | Fro | Ser | |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||
| ggt | tcc | cat | aaa | gtc act | ctg | tcc tct tgg | tac | cac gat | ega | ggc | tgg | 576 |
| Gly | Ser | His | Lys | Val Thr | Leu | Ser Ser Trp | Tyr | His Asp | Arg | Gly | Trp | |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||
| gcc | aag | atc | tct | aac atg | acg | tta agc aac | gga | aaa cta | agg | gtt | aac | 624 |
| Ala | Lys | íle | Ser | Asn Met | Thr | Leu Ser Asn | Gly | Lys Leu | Arg | Val | Asn | |
| 195 | 200 | 205 | ||||||||||
| caa | gat | ggc | ttc | tat tac | ctg | tac gcc aac | att | tgc ttt | cgg | cat | cat | 672 |
| Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr Tyr | Leu | Tyr A.la Asn | íle | Cys Phe | Arg | His | His | |
| 210 | 215 | 220 | ||||||||||
| gaa | aca | tcg | gga | agc gta | cct | aca cac tat | ctt | cag ctg | atg | gtg | tat | 720 |
| Glu | Thr | Ser | Gly | Ser Val | Pro | Thr Asp Tyr | Leu | Gin Leu | Met | Val | Tyr | |
| 225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||
| gtc | gtt | aaa | acc | agc atc | aaa | atc cca agt | tct | cat aac | ctg | atg | aaa | 768 |
| Val | Val | Lys | Thr | Ser íle | Lys | íle Pro Ser | Ser | His Asn | Leu | Met | Lys | |
| 245 | 250 | 255 | ||||||||||
| gga | ggg | agc | acg | aaa aac | tgg | tcg ggc aat | tct | gaa ttc | cac | ttt | tat | 816 |
| Gly | Gly | Ser | Thr | Lys Asn | Trp | Ser Gly Asn | Ser | Glu Phe | His | Phe | Tyr | |
| 260 | 265 | 270 | ||||||||||
| tcc | ata | aat | gtt | ggg gga | ttt | ttc aag ctc | ega | get ggt | gaa | gaa | att | 864 |
| Ser | Íle | Asn | Val | Gly Gly | Phe | Phe Lys Leu | Arg | Ala Gly | Glu | Glu | íle |
275 280 285
| agc att | cag Gin | gtg Val | tcc aac cct | tcc ctg ctg gat ccg | gat caa gat | gcg Ala | |||||||||
| Ser | íle 290 | Ser Asn | Pro 295 | Ser | Leu | Leu | Asp Pro 300 | Asp | Gin | Asp | |||||
| acg | tac | ttt | ggg | get | ttc | aaa | gtt | cag | gac | ata | gac | tga | |||
| Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
305 310 315
912
951 <210> 4 <211> 316 <212> PRT <213> Mus musculus
| <400> 4 | ||||||||||||||
| Met | Arg | Arg | Ala | Ser | Arg | Asp | Tyr | Gly Lys | Tyr | Leu | Arg | Ser | Ser | Glu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
| Glu | Met | Gly | Ser | Gly | Pro | Gly | Val | Pro His | Glu | Gly | Pro | Leu | His | Pro |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
| Ala | Pro | Ser | Ala | Pro | Ala | Pro | Ala | Pro Pro | Pro | Ala | Ala | Ser | Arg | Ser |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||
| Met | Phe | Leu | Ala | Leu | Leu | Gly | Leu | Gly Leu | Gly | Gin | Val | Val | Cys | Ser |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||
| íle | Ala | Leu | Phe | Leu | Tyr | Phe | Arg | Ala Gin | Met | Asp | Pro | Asn | Arg | íle |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
| Ser | Glu | Asp | Ser | Thr | His | Cys | Phe | Tyr Arg | Ilc | Leu | Arg | Leu | His | Glu |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| Asn | Ala | Gly | Leu | Gin | Asp | Ser | Thr | Leu Glu | Ser | Glu | Asp | Thr | Leu | Pro |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||
| Asp | Ser | Cys | Arg | Arg | Met | Lys | Gin | Ala Phe | Gin | Gly | Ala | Val | Gin | Lys |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||
| Glu | Leu | Gin | His | íle | Val | Gly | Pro | Gin Arg | Phe | Ser | Gly | Ala | Pro | Ala |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||
| Met | Met | Glu | Gly | Ser | Trp | Leu | Asp | Val Ala | Gin | Arg | Gly | Lys | Pro | Glu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
| Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle Asr. | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | Ser |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | Trp |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||||
| Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | Asn |
| 195 | 200 | 205 |
| Gin Asp Gly Phe Tyr | Tyr Leu Tyr Ala Asn íle Cys | Phe | Arg | His | His | ||||||||||
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met'1 | Val | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | Lys |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | Tyr |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ser | Íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Thr | Tyr | Phe | Gly | Al a | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
305 310 315
| <210> 5 <211> 2299 <212> DMA <213> Kus nusculus | |||||
| <220> <221> CDS <222> (170) | ..(1120) | ||||
| <400> 5 gagctcggat | ccactactcg | acccacgcgt | ccgcccacgc | gtccggccag cacctctgtg | 60 |
| aaccggtcgg | ggcgggggcc | gcctggccgg | gagtctgctc | ggcggtgggt ggccgaggaa | 120 |
| gggagagaac | gatcgcggag | cagggcgccc | gaactccggg | cgccgcgcc atg ege cgg | 178 |
Met Acg Arg 1
| gcc age ega | gac Asp | tac ggc | aag tac Lys Tyr 10 | ctg ege age tcg | gag gag atg ggc | ||||||||||
| Ala | Ser Arg S | Tyr | Gly | Leu | Arg Ser | Ser 15 | Glu | Glu Met | Gly | ||||||
| age | ggc | CCC | ggc | gtc | cca | cac | gag | ggt | ccg | ctg | cac | ccc | gcg | cct | tet |
| Ser | Gly | Pro | Gly | Val | Pro | His | Glu | Gly | Pro | Leu | His | Pro | Ala | Pro | Ser |
| 20 | 25 | 30 | 35 | ||||||||||||
| gca | ccg | get | ccg | gcg | ccg | cca | ccc | gcc | gcc | tcc | ege | tcc | atg | ttc | ctg |
| Ala | Pro | Ala | Pro | Ala | Pro | Pro | Pro | Ala | Ala | Ser | Arg | Ser | Met | Phe | Leu |
| 40 | 45 | 50 |
| gcc Ala | ctc ctg Leu Leu | ggg Gly 55 | ctg Leu | gga ctg Gly Leu | ggc Gly | cag gtg Gin Val 60 | gtc Val | tgc Cys | agc Ser | atc íle 65 | get Ala | ctg Leu | 370 | |
| ttc | ccg tac | ttt | ega | gcg | cag | atg | gat cct | aac | aga | ata | tca | gaa | gac | 418 |
| Phe | Leu Tyr | Phe | Arg | Ala | Gin | Met | Asp Pro | Asn | Arg | íle | Ser | Glu | Asp | |
| 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| agc | act cac | tgc | ttt | tat | aga | atc | ctg aga | ctc | cat | gaa | aac | gca | ggt | 466 |
| Ser | Thr His | Cys | Phe | Tyr | Arg | íle | Leu Arg | Leu | His | Glu | Asn | Ala | Gly | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| ttg | cag gac | tcg | act | ctg | gag | agt | gaa gac | aca | cta | cct | gac | tcc | tgc | 514 |
| Leu | Gin Asp | Ser | Thr | Leu | Glu | Ser | Glu Asp | Thr | Leu | Pro | Asp | Ser | Cys | |
| 100 | 105 | 110 | 115 | |||||||||||
| agg | agg atg | aaa | caa | gcc | ttt | cag | ggg gcc | gtg | cag | aag | gaa | ccg | caa | 562 |
| Arg | Arg Met | Lys | Gin | Ala | Phe | Gin | Gly Ala | Val | Gin | Lys | Glu | Leu | Gin | |
| 120 | 125 | 130 | ||||||||||||
| cac | act gtg | ggg | cca | cag | ege | ttc | tca gga | get | cca | get | atg | atg | aaa | 610 |
| His | Íle Val | Gly | Pro | Gin | Arg | Phe | Ser Gly | Ala | Pro | Ala | Met | Met | Glu | |
| 135 | 140 | 145 | ||||||||||||
| ggc | tca tgg | ttg | gat | gtg | gcc | cag | ega ggc | aag | cct | gag | Q C C | cag | cca | 658 |
| Gly | Ser Trp | Leu | Asp | Val | Ala | Gin | A.rg Gly | Lys | Pro | Glu | Ala | Gin | Pro | |
| 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| ttt | gca cac | ctc | acc | atc | aat | get | gcc agc | atc | cca | tcg | ggt | tcc | cat | 706 |
| Phe | Ala His | Leu | Thr | Xle | Asn | Ala | Ala Ser | íle | Pro | Ser | Gly | Ser | Kis | |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| aaa | gtc act | ctg | tcc | tct | tgg | tac | cac gat | ega | ggc | tgg | gcc | aag | atc | 754 |
| Lys | Val Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His Asp | Arg | Gly | Trp | Al a | Lys | íle | |
| 180 | 185 | 190 | 195 | |||||||||||
| tct | aa: atg | acg | tta | agc | aac | gga | aaa cta | agg | gtt | aac | caa | gat | ggc | 802 |
| Ser | Asn Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys Leu | Arg | Val | Asn | Gin | Asp | Gly | |
| 200 | 205 | 210 | ||||||||||||
| ttc | tat tac | ctg | tac | gcc | aac | att | tgc ttt | cgg | cat | cat | gaa | aca | tcg | 850 |
| Phe | Tyr Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys Phe | Arg | His | His | Glu | Thr | Ser | |
| 215 | 220 | 225 | ||||||||||||
| gga | agc gta | cct | aca | gac | tat | ctt | cag ctg | atg | gtg | tat | gtc | gtt | aaa | 898 |
| Gly | Ser Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin Leu | Met | Val | Tyr | Val | Val | Lys | |
| 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| acc | agc atc | aaa | atc | cca | agt | tct | cat aac | ctg | atg | aaa | gga | ggg | agc | 946 |
| Thr | Ser íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His A.sn | Leu | Met | Lys | Gly | Gly | Ser |
215 250 255
| acg Thr 260 | aaa Lys | aac Asn | tgg Trp | tcg Ser | ggc Gly 265 | aat Asn | tct Ser | gaa Glu | ttc cac ttt | tat Tyr | tcc Ser | ata íle | aat Asn 275 | 994 | ||
| Phe | His 270 | Phe | ||||||||||||||
| get | ggg | gga | ttt | ttc | aag | ctc | ega | get | ggt | gaa | gaa | att | agc | att | cag | 1042 |
| Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle | Ser | íle | Gin | |
| 280 | 285 | 290 | ||||||||||||||
| gcg | tcc | aac | cct | tcc | ctg | ctg | gat | ccg | gat | caa | gat | gcg | acg | tac | ttt | 1090 |
| Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala | Thr | Tyr | Phe | |
| 295 | 300 | 305 | ||||||||||||||
| ggg | get | ttc | aaa | gtt | cag | gac | ata | gac | tga | gactcatttc | gtggaacatt | 1140 | ||||
| Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | ||||||||
| 310 | 315 |
| agcatggacg | tcctagatgt | ttggaaactt | cttaaaaaat | ggatgatgtc | tatacatgtg | 1200 |
| taagactact | aagagacacg | gcccacggtg | tatgaaactc | acagccctct | ctcttgagcc | 1260 |
| tgtacaggtt | gtgtatatgt | aaagtccaca | ggtgatgtta | gattcatggt | caccacacaa | 1320 |
| cggttttaca | attttgtaat | gatttcctag | aattgaacca | gattgggaga | ggtaccccga | 1380 |
| tgcttatgaa | aaacttacac | gtgagctatg | gaagggggtc | acag tetetg | cgtctaaccc | 1440 |
| ctggacatgt | gccactgaga | accttgaaat | taagaggatg | ccatgtcatt | gcaaagaaat | 1500 |
| gatagtgtga | agggttaagt | tcttttgaat | tgttacattg | cgctgggacc | cgcaaataag | 1560 |
| ttcttttttt | ctaatgagga | gagaaaaata | tatgtatttt | tatataatct | ctaaagttat | 1620 |
| atttcaggtg | taatgttttc | tgtgcaaagt | tttgtaaatt | atat ttgtgc | tatagtattt | 1680 |
| gattcaaaat | atttaaaaat | gtctcactgt | tgacatattt | aatgttttaa | atgtacagat | 1740 |
| gtatttaact | ggtgcacttt | gtaattcccc | tgaaggtact | cgtagctaag | ggggcagaat | 1800 |
| actgtttctg | gtgaccacat | gtagtttatt | tetttattet | ttttaactta | atagagtctt | 1860 |
| cagacttgtc | aaaactatgc | aagcaaaata | aataaataaa | aataaaatga | ataccctgaa | 1920 |
| taataagtag | gatgttggtc | accaggtgcc | tttcaaattt | agaagctaat | tgactttagg | 1980 |
| agctgacata | gccaaaaagg | atacataata | ggctactgaa | atctgtcagg | agtatttatg | 2040 |
| caattattga | acaggtgtct | ttttttacaa | gagctacaaa | ttgtaaattt | tgtttctttt | 2100 |
| ttttcccata | gaaaatgtac | tatagttcat | cagccaaaaa | acaatccact | ttttaactta | 2160 |
| gtgaaagtta | ttttattata | ctgtacaata | aaagcattgt | ctctgaatgt | taatcttttg | 2220 |
| gtacaaaaaa | taaatttgta | cgaaaacctg | aaaaaaaaaa | aaaaaaaggg | cggccgctct | 2280 |
agagggccct attctatag
2299 <210> 6 <211> 316 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6
| Met | Arg | Arg | Ala | Ser | Arg | Asp | Tyr | Gly | Lys | Tyr | Leu | Arg | Ser | Ser | Glu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Met | Gly | Ser | Gly | Pro | Gly | Val | Pro | His | Glu | Gly | Pro | Leu | His | Pro |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ala | Pro | Ser | Ala | Pro | Ala | Pro | Ala | Pro | Pro | Pro | Ala | Ala | Ser | Arg | Ser |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Met | Phe | Leu | Ala | Leu | Leu | Gly | Leu | Gly | Leu | Gly | Gin | Val | Val | Cys | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| íle | Ala | Leu | Phe | Leu | Tyr | Phe | Arg | Ala | Gin | Met | Asp | Pro | Asn | Arg | íle |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ser | Glu | Asp | Ser | Thr | His | Cys | Phe | Tyr | Arg | íle | Leu | Arg | Leu | His | Glu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Asr. | Ala | Gly | Leu | Gin | Asp | Ser | Thr | Leu | Glu | Ser | Glu | Asp | Thr | Leu | Pro |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Asp | Ser | Cys | Arg | Arg | Met | Lys | Gin | Ala | Phe | Gin | Gly | Ala | Val | Gin | Lys |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Glu | Leu | Gin | Kis | íle | Val | Gly | Pro | Gin | Arg | Phe | Ser | Gly | Ala | Pro | Ala |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Met | Met | Glu | Gly | Ser | Trp | Leu | Asp | Val | Ala | Gin | Arg | Gly | Lys | Pro | Glu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ma | Ser | íle | Pro | Ser |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | Trp |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | Íle | cys | Phe | Arg | His | His |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Glu | Tne | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val | Tyr |
| 225 | 230 | 235 | 240 |
ι
| Val | Val | Lys | Thr | Ser íle Lys 245 | íle | Pro Ser 250 | Ser His | Asn | Leu | Met 255 | Lys | ||||
| Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | Hi's | Phe | Tyr |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Thr | Tyr | Phe | Gly | Ma | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | ||||
| 305 | 310 | 315 |
<210> 7 <211> 564 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<221> CDS <222> (1)..(564) <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Syntetický produkt s optimálnymi kodónmi na expresiu v E. coli a P.pastoris <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (43)..(84) <223> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (1)..(36, <223> C-koncová časť α-párovacieho faktoru S. cerevisiae <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (85)..(561) <223> kódujúce zvyšky 158-316 prirodzeného myšieho OPGL <400> 7 gag ccc gga tcc ctc gag aaa aga gag get gaa get cat gtc atg aaa Glu Leu Gly Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala His Val Met Lys
10 15
| cac His | caa Gin | cac His | caa Gin 20 | cat His | caa Gin | cat His | caa Gin | cat His 25 | caa Gin | cat His | caa Gin | aaa Lys | cct Pro 30 | gaa Glu | get Ala | 96 |
| cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg | atc | cct | tct | ggt | 144 |
| Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | Ser | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| tct | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tct | tct | tgg | tat | cac | gac | cgc | ggt | tgg | get | 192 |
| Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | Trp | Ala | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| aaa | atc | tct | aac | atg | acc | ctg | tct | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | aac | cag | 240 |
| Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | Asn | Gin | |
| 65 | 70 | « | 75 | 80 | ||||||||||||
| gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | get | aac | atc | tgc | ttc | aga | cac | cac | gaa | 288 |
| Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His | His | Glu | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| acc | tct | ggt | tct | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ctg | atg | gcc | tac | gtc | 336 |
| Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val | Tyr | Val | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| gtt | aaa | acc | tct | atc | aaa | atc | cca | tct | tca | cat | aac | ctg | acg | aaa | ggt | 384 |
| Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | Lys | Gly | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| ggt | cct | acc | aaa | aac | tgg | tct | ggt | aac | tct | gaa | ttc | cat | CCc | cac | tct | 432 |
| Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | Tyr | Ser | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| atc | aac | gtt | ggt | ggt | ttc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa | gaa | aCc | tct | 480 |
| íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle | Ser | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
| atc | cag | gtt | tct | aac | cct | tct | ctg | ctg | gac | cca | gac | cag | cac | get | acc | 528 |
| íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala | Thr | |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
| tac | ttc | ggg | gcc | ttc | aaa | gtt | cag | gac | atc | gac | tag | 564 | ||||
| Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
180 185 <210> 8 <211> 187 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: Syntetický PCR produkt s optimálnymi kodónmi na expresiu v E. coli a P. pastoris
| <400 | > 8 | ||||||||||||||
| Glu | Leu | Gly | Ser | Leu | Glu | Lys | Arg | Glu | Ala | Glu | Ala | His | Val | Met | Lys |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro | Glu | Ala |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | Ser | Gly |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | Trp | Ala |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | A.sn | Gin |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His | His | Glu |
| 85 | SO | 95 | |||||||||||||
| Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Glr. | Leu | Met | Val | Tyr | Val |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Val | Lys | Thr | Ser | Íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | Lys | Gly |
| 115 | 120 | • | 125 | ||||||||||||
| Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | Tyr | Ser |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Pr.e | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala | Thr |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
180 185 <210> 9 <211> 519 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artif iciálnej sekvencie: DNA kódujúca zvyšky 158-316 prirodzeného myšieho OPGL fúzovaná na His koncovku <220>
<221> CDS <222> (1)..(519) <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <223> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(519) <223> zvyšky 158-316 myšieho OPGL <4OO> 9
| atg | aaa | cac | caa | cac | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | aaa | cct | 48 |
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro | |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| gaa | get | cag | cca | tcc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg | atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | Íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| tct | ggt | tcc | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tct | tct | tgg | tat | cac | gac | ege | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| tgg | get | aaa | atc | tct | aac | acg | acc | ctg | tct | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala | Lys | Xle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | §er | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | get | aac | atc | tgt | ttc | aga | cat | 240 |
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| cac | gaa | acc | tct | ggt | tct | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ccg | atg | gtt | 288 |
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val | |
| 05 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| tac | gtt | gtt | aaa | acc | tct | atc | aaa | atc | cca | tct | tca | cat | aac | ctg | atg | 336 |
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| aaa | ggt | ggt | tct | acc | aaa | aac | tgg | tct | ggt | aac | tct | gaa | ttc | cat | ttc | 384 |
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| tac | tct | atc | aac | gtt | ggt | ggt | ttc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa | gaa | 432 |
| Tyr | Sec | Íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu |
130 135 140
| atc tct atc cag gtt tct íle Ser íle Gin Val Ser | aac Asn | cct tct ctg ctg gac cca | gac cag gac Asp Gin Asp 160 | ||||||||||||
| Pro | Ser Leu | Leu 155 | Asp | Pro | |||||||||||
| 145 | 150 | ||||||||||||||
| get | acc | tac | ttc | ggg | gcc | ttc | aaa | get | cag | gac | atc | gac | |||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | |||
| 165 | 170 |
519 <210> 10 <211> 173 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: DNA kódujúca 2vyšky 158-316 prirodzeného myšieho OPGL fúzovaná na Éis koncovku <4OO> 10
| Mat | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Kis | Gin | Lys | Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | Kis | Phe |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Íle | Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Sec | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | Iie | Asp |
165 170 <210> 11 <211> 519 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s mutáciou C na S, a His koncovky i
<220>
<221> CDS <222> (1)..(519) <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <22 3> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(228) <223> zvyšky 158-219 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (232)..(519) <223> zvyšky 221-316 myšieho OPGL· <220>
<221> Mutácia <222> (229)..(231) <223> tpg (Cys) na tcc (Ser) <22O>
<4OO> 11
| atg Met 1 | aaa Lys | cac His | caa Gin | cac His 5 | caa Gin | cat His | caa Gin | cat His | caa Gin 10 | cat caa | cat His | caa Gin | aaa Lys 15 | cct Pro | 48 | |
| His | Gin | |||||||||||||||
| gaa | get | cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg | atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Gin | Pro 20 | Phe | Ala | His | Leu | Thr 25 | íle | Asn | Ala | Ala | Ser 30 | íle | Pro | |
| tet | ggt | tet | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tet | tet | tgg | tat | cac | gac | ege | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser 35 | His | Lys | Val | Thr | Leu 40 | Ser | Ser | Trp | Tyr | His 45 | Asp | Arg | Gly | |
| tgg | get | aaa | atc | tet | aac | atg | acc | ctg | tet | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala 50 | Lys | íle | Ser | Asn | Met 55 | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly 60 | Lys | Leu | Arg | Val | |
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | * get | aac | atc | tcc | ttc | aga | cat | 240 |
| Asn 65 | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr 70 | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn 75 | íle | Ser | Phe | Arg | His 80 | |
| cac | gaa | acc | tet | ggt | tet | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ctg | atg | gtt | 288 |
| His | Glu | Thr | Ser | Gly 65 | Ser | Val | Pro | The | Asp 90 | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met 95 | Val |
| tac | gtt gtt | aaa acc tet atc aaa | atc cca tet tca | cat aac | ctg | atg | 336 |
| Tyr | Val Val | Lys Thr Ser íle Lys | íle Pro Ser Ser | His Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | |||||
| aaa | ggt ggt | tet acc aaa aac tgg | tet ggt aac tet | gaa ttc | cat | ttc | 3β4 |
| Lys | Gly Gly | Ser Thr Lys Asn Trp | Ser Gly Asn Ser | Glu Phe | Kis | Phe | |
| 115 | 120 | 125 | |||||
| tac | tet atc | aac gtt ggt ggt ttc | ttc aaa ctg aga | get ggt | gaa | gaa | 432 |
| Tyr | Ser íle | Asn Val Gly Gly Phe | Phe Lys Leu Arg | Ala Gly | Glu | Glu | |
| 130 | 135 | 140 | |||||
| atc | tet atc | cag gtt tet aac cct | tet ctg ctg gac | cca gac | cag | gac | 480 |
| íle | Ser íle | Gin Val Ser Asn Pro | Ser Leu Leu Asp | Pro Asp | Gin | Asp | |
| 145 | 150 | ' 155 | 160 | ||||
| get | acc tac | ttc ggg gcc ttc aaa | gtt cag gac atc | gac | 519 | ||
| Ala | Thr Tyr | Phe Gly Ala Phe Lys | Val Gin Asp íle | Asp | |||
| 165 | 170 | ||||||
| <210> 12 <211> 173 <212> PRT | |||||||
| <213> Artificiálna sekvencia | |||||||
| <223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov | |||||||
| 158-316, ! | s mutáciou C na S, a His koncovky | ||||||
| <400> 12 | |||||||
| Met | Lys Kis | Gin His Gin His Gin | His Gin His Gin | Kis Gin | Lys | Pro | |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||
| Glu | Ala Gin | Pro Phe Ala His Leu | Thr íle Asn Ala | Ala Ser | íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | |||||
| Ser | Gly Ser | His Lys Val Thr Leu | Ser Ser Trp Tyr | His Asp | Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | |||||
| Trp | Ala Lys | íle Ser Asn Met Thr | Leu Ser Asn Gly | Lys Leu | Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | |||||
| Asn | Gin Asp | Gly Phe Tyr Tyr Leu | Tyr Ala Asn íle | Ser Phe | Arg | Kis | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||
| His | Glu Thr | Ser Gly Ser Val Pro | Thr Asp Tyr Leu | Gin Leu | Met | Val | |
| 85 | 90 | 95 | |||||
| Tyr | Val Val | Lys Thr Ser íle Lys | íle Pro Ser Ser | His Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | |||||
| Lys | Gly Gly | Ser Thr Lys Asn Trp | Ser Gly Asn Ser | Glu Phe | His | Phe | |
| 115 | 120 | 125 |
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| íle | Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp· | Gin | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | |||
| 165 | 170 | • |
<210> 13 <211> 564 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL·, zvyškov 158-316, modifikovaných vložením P30 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <220>
<221> CDS <222> (1)..(564) <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <223> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(336) <223> zvyšky 158-255 myšieho OPGL· <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (337)..(339) <223> P30 epitop tetanického toxoidu <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (400)..(564) <223> zvyšky 262-316 myšieho OPGL <4OO> 13 atg aaa cac caa cac caa cat caa cat caa cat caa cat caa aaa cct Met Lys His Gin His Gin His Gin His Gin His Gin His Gin Lys Pro
10 15
| gaa | get | cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser Íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| tct | ggt | tct | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tct | tct | tgg | tat | cac | gac ege | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| tgg | get | aaa | atc | tct | aac | atg | acc | ctg | tcc | aac | ggt | aaa | ctg aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ccg | tac | get | aac | atc | tgt | ttc aga | cat | 240 |
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe Arg | His | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| cac | gaa | acc | tct | ggt | tct | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ctg atg | gtt | 288 |
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu Met | Val | |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| tac | gtt | gtt | aaa | acc | tct | atc | aaa | atc | cca | tct | tca | cat | aac ctg | atg | 336 |
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| ttc | aac | aac | ttc | acc | gtt | tct | ttc | tgg | ctg | agg | gta | ccg | aaa get | tct | 384 |
| Phe | Asn | Asn | Phe | Thr | Val | Ser | Phe | Trp | Leu | Arg | Val | Pro | Lys Val | Sol | |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| get | tct | cac | ctg | gaa | aac | tgg | tct | ggt | aac | tcc | gaa | ttc | cat ttc | tac | 432 |
| Ala | Ser | His | Leu | Glu | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His Phe | Tyr | |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| tct | atc | aac | gtt | ggt | ggt | tcc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa gaa | atc | 480 |
| Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu Glu | íle | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| tct | atc | cag | gtt | tct | aac | cct | tct | ctg | ctg | gac | cca | gac | cag gac | get | 528 |
| Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin Asp | Ala | |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| acc | tac | ttc | ggg | gcc | ttc | aaa | gtt | cag | gac | atc | gac | * | 564 | ||
| Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
180 185 <210> 14 <211> 188 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, modifikovaných vložením P30 epitopu tetanického toxoidu, a Bis koncovky .83
| <400 | > 14 | ||||||||||||||
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Kis | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Phe | Asn | Asn | Phe | Thr | Val | Ser | Phe | T rp | Leu | Arg | Val | Pro | Lys | Val | Ser |
| 115 | 120 | • | 125 | ||||||||||||
| Ala | Ser | His | Leu | Glu | Asn | Trp | Ser | Gly | Asr. | Ser | Glu | Phe | His | Phe | Tyr |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
180 185 <210> 15 <211> 546 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P2 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <220>
<221> CDS <222> (1)..(564)
84.
<220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <223> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(336) <223> zvyšky 158-255 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (382)..(546) <223> 2vyšky 262-316 myšieho OPGL <22O>
<221> rôzne vlastnosti <222> (337,..(381) <223> P2 epitop tetanického toxoidu <4OO> 15
| atg | aaa | cac | caa | cac | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | aaa | cct | 48 |
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro | |
| 1 | 5 | •10 | 15 | |||||||||||||
| gaa | get | cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | 9=t | gca | tcg | atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| tct | ggt | tct | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tct | tct | tgg | tat | cac | gac | cgc | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| tgg | get | aaa | atc | tct | aac | atg | acc | ctg | tct | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | get | aac | atc | tgt | ttc | aga | cat | 240 |
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| cac | gaa | acc | tct | ggt | tct | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ctg | atg | gtt | 288 |
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | As'p | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| tac | gtt | gtt | aaa | acc | cct | atc | aaa | atc | caa | tct | tca | cat | aac | ctg | atg | 336 |
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Pro | íle | Lys | íle | Gin | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| cag | tac | atc | aaa | get | aat | tcg | aaa | ttc | atc | ggt | atc | acc | gaa | ctg | aac | 384 |
| Gin | Tyr | íle | Lys | AJ a | Asn | Ser | Lys | Phe | íle | Gly | íle | Thr | Glu | Leu | Asn | |
| 115 | 120 | 125 |
| tgg Trp | tet Ser 130 | ggt Gly | aac Asn | tet Ser | gaa Glu | ttc Phe 135 | cat His | ttc Phe | tac Tyr | tet atc aac gtt ggt | ggt Gly | 432 | ||||
| Ser | íle Asn 140 | Val | Gly | |||||||||||||
| ttc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa | gaa | atc | tet | atc | cag | gtt | tet | aac | 480 |
| Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle | Ser | íle | Gin | Val | Ser | Asn |
145 150 155 160
| cct Pro | tet ctg Ser Leu | ctg gac cca gac cag gac get acc tac ttc ggg gcc ttc | 528 | |||||||||||||
| Leu | Asp Pro Asp Gin Asp Ala Thr Tyr Phe Gly Ala | Phe | ||||||||||||||
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
| aaa | gtc | cag | gac | atc | gac | 546 | ||||||||||
| Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | |||||||||||
| 180 |
<210> 16 <211> 182 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P2 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <400> 16
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asr. | Ala | Ala | Ser | íle | Pro |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Pro | íle | Lys | íle | Gin | Ser | Ser | Kis | Asn | Leu | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gin | Tyr | íle | Lys | Ala | Asn | Ser | Lys | Phe | íle | Gly | íle | Thr | Glu | Leu | Asn |
115 120 125
Trp Ser Gly Asn Ser Glu Phe His Phe Tyr Ser Xle Asn Val Gly Gly 130 135 140
| Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | íle | Ser | He | Gin | Val | Ser | Asn |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp | Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp |
180 <210> 17 <211> 519 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <22O>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P2 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <22O>
<221> CDS <222> (1)..(519) <22O>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <223> His koncovka <22O>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(432) <223> zvyšky 158-287 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (478)..(519) <223> zvyšky 303-316 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (433)..(477) <223> P2 epitop tetanického toxoidu <4OO> Π
| atg Met 1 | aaa Lys | cac Kis | caa Gin | cac His 5 | caa Gin | cat His | caa Gin | cat Kis | caa Gin 10 | cat Kis | caa Gin | cat His | caa Gin | aaa Lys 15 | cct Pro | 48 |
| gaa | get | cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg | atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 |
| tet | ggt | tet | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tet | tet | tgg | tat | cac | gac | cgc | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| tgg | get | aaa | acc | tet | aac | atg | acc | ctg | Cct | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | get | aac | atc | tgt | ttc | aga | cat | 240 |
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| cac | gaa | acc | tet | ggt | tet | gtt | cca | acc | gac | tac | ctg | cag | ctg | atg | gtt | 288 |
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| tac | gtt | get | aaa | acc | tet | atc | aaa | atc | cca | tet | tca | cat | aac | ctg | atg | 336 |
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| aaa | ggt | ggc | cct | acc | aaa | aac | tgg | tet | ggt | aac | tet | gaa | ttc | cat | ttc | 384 |
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| tac | cct | acc | aac | gtt | ggt | ggt | ttc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa | gaa | 432 |
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Giu | Glu | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| cag | Cac | atc | aaa | get | aat | tcg | aaa | ttc | atc | ggt | atc | acc | gaa | ctg | gac | 480 |
| Gin | Tyr | íle | Lys | Ala | Asn | Ser | Lys | Phe | íle | Gly | íle | Thr | Glu | Leu | Asp | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
| get | acc | tac | ttc | ggg | gcc | ttc | aaa | gtt | cag | gac | atc | gac | 519 | |||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | ||||
| 165 | 170 |
<210> 18 <211> 173 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P2 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <400 18
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro |
25 30
Ser Gly Ser His Lys Val Thr Leu Ser Ser Trp Tyr His Asp Arg Gly
40 45
| Trp Ala Lys | íle | Ser Asn | Met 55 | Thr Leu Ser | Asn Gly Lys 60 | Leu | Arg | Val | |||||||
| 50 | |||||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Arg | His |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| His | Glu | Thr | Ser | Gly | Ser | Val | Pro | Thr | Asp | Tyr | Leu | Gin | Leu | Met | Val |
| es | 90 | 95 | |||||||||||||
| Tyr | Val | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gin | Tyr | íle | Lys | Ala | Asn | Ser | Lys | Phe | íle | Gly | íle | Thr | Glu | Leu | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Qln | Asp | íle | Asp | |||
| 165 | 170 |
<210> 19 <211> 519 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P30 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <220>
<221> CDS <222> (1)..(519) <220>
<221> rôzne naviazané zložky <222> (1)..(42) <223> His koncovka <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (43)..(231) <223> zvyšky 158-220 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (295)..(519) <223> zvyšky 242-316 myšieho OPGL <220>
<221> rôzne vlastnosti <222> (232)..(294) <223> P30 epitop tetanického toxoidu <4OO> 19
| atg | aaa | cac | caa | cac | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | cat | caa | aaa | cct | 48 . |
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Lys | Pro | |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| gaa | get | cag | cca | ttc | get | cat | ctg | acc | atc | aac | get | gca | tcg | atc | cct | 96 |
| Glu | Ala | Glr. | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| tet | ggt | tet | cat | aaa | gtt | acc | ctg | tet | tet | tgg | tat | cac | gac | ege | ggt | 144 |
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| tgg | get | aaa | atc | tet | aac | atg | acc | ctg | tet | aac | ggt | aaa | ctg | aga | gtt | 192 |
| Trp | Ala | Lys | íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | 5er | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| aac | cag | gac | ggt | ttc | tac | tac | ctg | tac | get | aac | atc | tgt | ttc | aac | aac | 240 |
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | Cys | Phe | Asn | Asn | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| ttc | acc | gtt | tet | ttc | tgg | ctg | agg | gta | ccg | aaa | gtt | tet | get | tet | cac | 288 |
| Phe | Thr | Val | Ser | Pne | Trp | Leu | Arg | Val | Pro | Lys | Val | Ser | Ala | Ser | His | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| ctg | gaa | gtt | aaa | acc | tet | atc | aaa | atc | cca | tet | tca | cat | aac | ctg | atg | 336 |
| Leu | Glu | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| aaa | ggt | ggt | tet | acc | aaa | aac | tgg | tet | ggt | aac | tet | gaa | ttc | cat | ttc | 384 |
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| tac | tet | atc | d d C | gtt | ggt | ggt | ttc | ttc | aaa | ctg | aga | get | ggt | gaa | gaa | 432 |
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| atc | tet | atc | cag | gtt | tet | aac | cct | tet | ctc | ctg | gac | cca | gac | cag | gac | 480 |
| íle | Ser | íle | Glr. | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp |
145 150 155 160 get acc tac ttc ggg gcc ttc aaa gtt cag gac atc gac
Ala The Tyr Phe Gly Ala Phe Lys Val Gin Asp íle Asp 165 Π0
519 <210> 20 <211> 173 <212> PRT <213> Artificiálna sekvencia <223> Opis artificiálnej sekvencie: Fúzia myšieho OPGL, zvyškov 158-316, s vložením P30 epitopu tetanického toxoidu, a His koncovky <4OO> 20
| Met | Lys | His | Gin | His | Gin | His | Gin | His | Gin | Kis | Gin | His | Gin | Lys | Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Ala | Gin | Pro | Phe | Ala | His | Leu | Thr | íle | Asn | Ala | Ala | Ser | íle | Pro |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | His | Lys | Val | Thr | Leu | Ser | Ser | Trp | Tyr | His | Asp | Arg | Gly |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Trp | Ala | Lys | Íle | Ser | Asn | Met | Thr | Leu | Ser | Asn | Gly | Lys | Leu | Arg | Val |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Asn | Gin | Asp | Gly | Phe | Tyr | Tyr | Leu | Tyr | Ala | Asn | íle | cys | Phe | Asn | Asn |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Phe | Thr | Val | Ser | Phe | Trp | Leu | Arg | Val | Pro | Lys | Val | Ser | Ala | Ser | His |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Leu | Glu | Val | Lys | Thr | Ser | íle | Lys | íle | Pro | Ser | Ser | His | Asn | Leu | Met |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Lys | Gly | Gly | Ser | Thr | Lys | Asn | Trp | Ser | Gly | Asn | Ser | Glu | Phe | His | Phe |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Tyr | Ser | íle | Asn | Val | Gly | Gly | Phe | Phe | Lys | Leu | Arg | Ala | Gly | Glu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Íle | Ser | Xle | Gin | Val | Ser | Asn | Pro | Ser | Leu | Leu | Asp | Pro | Asp | Gin | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ala | Thr | Tyr | Phe | Gly | Ala | Phe | Lys | Val | Gin | Asp | íle | Asp | |||
| 165 | 170 |
<210> 21 <211> 68 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 21 agctgcaggt agtcggttgg aacagaacca gaggtttegt gatgtctgaa acagatgtta 60 gcgtacag 68 <210> 22 <211> 24 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artif iciálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 22 ctcatctgac catcaacgct gcat <210> 23 <211> 64 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <22j>
<223> Opis artif iciálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 23 tttcggtacc ctcagccaga aagaaacggt gaagttgttg aaacagatgt tagcgtacag 60 gtag 64 <210> 24 <211> 61 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 24 tgagggtacc gaaagtttct gcttctcacc tggaagttaa aacccctatc aaaatccaat 60 c 61 <210> 25 <211> 63 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 25 tttcggtacc ctcagccaga aagaaacggt gaagttgttg aacatcaggt tatgtgaaga 60 ttg 63 <210> 26 <211> 62 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 26 tgagggtacc gaaagtttct gcttctcacc tggaaaactg gtctggtaac tctgaattcc 60 at 62 <210> 27 <211> 79 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 27 tacctgcagc tgatggttta cgttgttaaa acccctatca aaatccaatc ttcacataac 60 ctgatgcagt acatcaaag 79 <210> 28 <211> 83 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 28 tggaattcag agttaccaga ccagttcagt tcggtgatac cgatgaattt cgaattagct 60 ttgatgtact gcatcaggtt atg 83 <210> 29 <211> 49 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 29 gaatttcgaa ttagctttga tgtactgttc ttcaccagct ctcagtttg 49 <210> 30 <211> 53 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 30 gctaattcga aattcatcgg tatcaccgaa ctggacgcta cctacttcgg ggc <210> 31 <211> 26 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 31 cttactagtc gatgtcctga actttg <210> 32 <211> 74 <212> DNA <213> Artificiálna sekvencia <220>
<223> Opis artificiálnej sekvencie: syntetický PCR prajmer <400> 32 agtggaattc agagttacca gaccagtttt tggtagaacc acctttcatc aggttatgtg 60 aagatgggat tttg 74 <210> 33 <211> 65 <212> DNA <213> Clostridium tetani <400> 33 actacctgca gctgatggtt tacgttgtta aaacctctat caaaatccca tcttcacata 60 * 65 acctg <210> 34 <211> 15 <212> PTR <213> Clostridium tetani <400> 34
Gin Tyr íle Lys Ala Asn Ser Lys Phe íle Gly Ile Thr Glu Leu <210> 35 <211> 21 <212> PTR <213> Clostridium tetani <400> 35
Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 15 10 IS
Ala Ser His Leu Glu 20
Claims (56)
1. Spôsob na in vivo inhibíciu aktivity ligandu pre osteoprotegerin (OPGL) u zvieraťa, vrátane človeka, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa účinnú prezentáciu imunologický účinného činidla imunitnému systému živočícha, kde uvedené činidlo je vybrané z
- aspoň jedného OPGL polypeptidu alebo jeho subsekvencie, ktoré boli pripravené tak, že imunizácia živočícha OPGL polypeptidom alebo jeho subsekvenciou indukuje produkciu protilátok proti OPGL polypeptidu; a/alebo
- aspoň jedného analógu OPGL obsahujúceho aspoň jednu modifikáciu aminokyselinovej sekvencie OPGL, kde imunizácia živočícha analógom indukuje tvorbu protilátok proti OPGL polypeptidu;
kde vlastný OPGL zvieraťa je inhibovaný v dôsledku väzby na protilátku, kde OPGL je proteín, ktorý pôsobí ako diferenciačný faktor pre osteoklasty a má aminokyselinovú sekvenciu podľa SEQ ID NO: 2 pre ľudský OPGL a SEQ ID NO: 4 a 6 pre myší OPGL.
2. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že je prezentovaný analóg OPGL s aspoň jednou modifikáciou aminokyselinovej sekvencie OPGL.
3. Spôsob podľa nároku 2,vyznačujúci sa tým, že modifikácia vedie k tomu, že je zachovaná významná frakcia B-lymfocytárnych epitopov OPGL a že
- je vložený aspoň jeden T-pomocný lymfocytárny epitop (T^ epitop), a/alebo
- je vložená aspoň jedna prvá skupina, ktorá spôsobuje cielené dodanie modifikovanej molekuly bunkám prezentujúcim antigén (APC) alebo B-lymfocytom, a/alebo
- je vložená aspoň jedna druhá skupina, ktorá stimuluje imunitný systém, a/alebo
- je vložená aspoň jedna tretia skupina, ktorá optimalizuje prezentáciu modifikovaného OPGL polypeptidu imunitnému systému
4. Spôsob podía nároku 3,vyznačujúci sa tým, že modifikácia zahŕňa vloženie cudzorodého TH epitopu a/alebo prvej a/alebo druhej a/alebo tretej skupiny ako vedľajšej skupiny, kovalentnou alebo nekovalentnou väzbou na vhodné chemické skupiny v OPGL alebo jeho subsekvenciu.
5. Spôsob podlá nárokov 3, alebo 4, vyznačujúci sa t ý m, že modifikácia zahŕňa aminokyselinové substitúcie a/alebo delécie a/alebo inzercie a/alebo adície.
6. Spôsob podlá nároku 5,vyznačujúci sa tým, že modifikácia vedie k vzniku fúzneho polypeptidu.
7. Spôsob podlá nárokov 5 alebo 6, vyznačuj úci sa t ý m, že vloženie aminokyselinovej substitúcie a/alebo delécie a/alebo inzercie a/alebo adície vedie k významnému zachovaniu celkovej terciárnej štruktúry OPGL.
8. Spôsob podlá akéhokolvek z nárokov 2-7, v y z n a čujúci sa tým, že modifikácia zahŕňa duplikáciu aspoň jedného OPGL B-lymfocytárneho epitopu a/alebo vloženie hapténu.
9. Spôsob podlá akéhokolvek z nárokov 3-8, vyznačujúci sa tým, že cudzorodý T-lymfocytárny epitop je pri zvierati imunodominantný.
10. Spôsob podía akéhokoívek z nárokov 3-9, vyznačujúci sa tým, že cudzorodý T-lymfocytárny epitop je schopný väzby na veíkú časť MHC molekúl triedy II.
11. Spôsob podía nároku 10,vyznačujúci sa tým, že aspoň jeden cudzorodý T-lymfocytárny epitop je vybraný z prirodzeného T-lymfocytárneho epitopu a artificiálnej peptidovej sekvencie viažúcej sa na MHC triedy II.
12. Spôsob podía nároku 11,vyznačujúci sa tým, že prirodzený T-lymfocytárny epitop je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej epitopy tetanického toxoidu, ako je P2 alebo P30, epitop difterického toxoidu, epitop hemaglutinínu chrípkového vírusu a CS epitop P. falciparum.
13. Spôsob podía akéhokoívek z nárokov 3-12, vyznačujúci sa tým, že prvá skupina je špecifický väzbový partner pre povrchový antigén špecifický pre B-lymfocyty alebo pre povrchový antigén špecifický pre APC, ako je haptén alebo uhíovodan, pre ktorý existuje receptor na B-lymfocytoch alebo APC.
14. Spôsob podía akéhokoívek z nárokov 3-13, vyznačujúci sa tým, že druhá skupina je vybraná z cytokinov, hormónov a proteínov teplotného šoku.
15. Spôsob podía nároku 6,vyznačujúci sa tým, že cytokin je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej interferón τ (IFN-τ), Flt3L, interleukin 1 ((IL-1), interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4), interleukin 6 (IL-6), interleukin 12 ((IL-12), interleukin 13 ((IL-13), interleukin
15 (IL-15) a faktor stimulujúci kolónie granulocytov-makrofágov (GM-CSF), a tým, že proteín teplotného šoku je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej HSP70, HSP90, HSC70, GRP94 a kalretikulin (CRT) alebo ich účinné časti.
16. Spôsob podlá akéhokoľvek z nárokov 3-15, vyznačuj úcisatým, že tretia skupina má lipidový charakter, ako je palmitoylová skupina, myristylová skupina, farnezylová skupina, geranyl-geranylová skupina, GPI-kotviaca skupina a N-acyldiglyceridová skupina.
17. Spôsob podlá akéhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že OPGL polypeptid alebo jeho subsekvencia bola modifikovaná v akejkoľvek z pozícií 170-192, v akejkoľvek z pozícií 198-218, v akékoľvek z pozícií 221-246, v akejkoľvek z pozícií 256-261 alebo v akejkoľvek z pozícií 285-316, podľa číslovania aminokyselín podľa akékoľvek zo SEQ ID NO: 4, 6 a 12, alebo tým, že OPGL polypeptid bol modifikovaný v akejkoľvek z pozícií 171-193, v akejkoľvek z pozícií 199-219, v akejkoľvek z pozícií 222-247, v akejkoľvek z pozícií 257-262 alebo v akejkoľvek z pozícií 286317 podľa číslovania aminokyselín podľa SEQ ID NO: 2.
18. Spôsob podľa nároku 17,vyznačujúci sa tým, že modifikácia zahŕňa substitúcii aspoň jednej aminokyselinovej sekvencie v pozíciách definovaných v nároku 17 aminokyselinovou sekvenciou rovnakej alebo inej dĺžky, ktorá obsahuje cudzorodý epitop.
19. Spôsob podľa nároku 18,vyznačujúci sa tým, že aminokyselinová sekvencia obsahujúca cudzorodý TH epitop substituuje aminokyseliny 256-261 a/alebo 288-302 a/alebo 221-241 v SEQ ID NO: 4 alebo aminokyseliny 257-262 a/alebo 289-303 a/alebo 222-243 v SEQ ID NO: 2 alebo v poly99 peptide, v ktorom bol cysteín zodpovedajúci Cys-221 substituovaný Ser.
20. Spôsob podlá akéhokolvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že prezentácia imunitnému systému je uskutočnená pri použití aspoň dvoch kópií OPGL polypeptidu, jeho subsekvencie alebo modifikovaného OPGL polypeptidu, kovalentne alebo nekovalentne naviazaného na molekulu nosiča, ktorý je schopený vykonat účinnú prezentáciu mnohých kópií antigénnych determinantov.
21. Spôsob podlá akéhokolvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že OPGL polypeptid, jeho subsekvencia alebo modifikovaný OPGL polypeptid bol pripravený s adjuvansom, ktorý ulahčuje prekonanie autotolerancie k autoantigénom.
22. Spôsob podlá akéhokolvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že účinné množstvo OPGL polypeptidu alebo analógu OPGL je podané zvierati spôsobom vybraným z parenterálneho spôsobu ako je intradermálny, subdermálny, intrakutány, subkutánny a intramuskulárny spôsob podania; orálneho spôsobu; bukálneho spôsobu; subliguálneho spôsobu; epidurálneho spôsobu; spinálneho spôsobu; análneho spôsobu; a intrakraniálneho spôsobu.
23. Spôsob podlá nároku 22,vyznačujúci sa tým, že že účinné množstvo je od 0,5 μg do 2000 μg OPGL polypeptidu, jeho subsekvencie alebo analógu.
24. Spôsob podlá nároku 22 alebo 23, vyznačuj úci sa t ý m, že OPGL polypeptid alebo analóg je obsiahnutý vo virtuálnej lymfatickej uzline (VLN).
100
25. Spôsob podľa akéhokoľvek z nárokov 1-21, vyznačujúci sa tým, že prezentácia modifikovaného OPGL imunitnému systému je vykonaná vložením nukleovej kyseliny kódujúcej modifikovaný OPGL do buniek zvieraťa a takto dosiahnutím expresie vloženej nukleovej kyseliny bunkami in vivo.
26. Spôsob podľa nároku 25,vyznačujúci sa tým, že vložená nukleová kyselina je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej holé DNA, DNA pripravené s nabitými alebo nenabitými lipidmi, DNA pripravené v lipozómoch, DNA obsiahnuté vo vírusovom vektore, DNA pripravené s proteínom alebo polypeptidom uľahčujúcim transfekciu, DNA pripravené s proteínom alebo polypeptidom umožňujúcim cielené podanie, DNA pripravenej s vápnikovým zrážacím činidlom, DNA naviazanej na molekulu inertného nosiča, DNA enkapsulovanej v chitíne alebo chitosáne a DNA pripravenej s adjuvansom.
27. Spôsob podľa nároku 26,vyznačujúci sa tým, že nukleová kyselina je obsiahnutá vo VLN prostriedku.
28. Spôsob podľa akéhokoľvek z nárokov 22-27, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa aspoň jedno podanie/vloženie za rok, ako napríklad aspoň 2, aspoň 3, aspoň 4, aspoň 6 a aspoň 12 podaní/vložení.
29. Spôsob na liečbu a/alebo prevenciu a/alebo zmiernenie osteoporózy alebo iného ochorenia alebo stavu charakterizovaného nadmernou resorpciou kosti, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa inhibíciu aktivity OPGL podľa akéhokoľvek z nárokov 1-28 v takom rozsahu, že rýchlosť resorpcie kosti sa významne zníži, napríklad o aspoň 3 %, aspoň 7 %, aspoň
101
9 %, aspoň 11 %, aspoň 13 %, aspoň 1 5% a aspoň 17 %, aspoň 20 % a aspoň 30 %.
30. Analóg OPGL, ktorý je odvodený od OPGL polypeptidu a do ktorého bola vložená modifikácia, ktorá spôsobuje to, že po imunizácii zvieraťa analógom dochádza k produkcii protilátok proti OPGL polypeptidu a kde táto modifikácia je definovaná v akomkoivek z nárokov 17-19, za súčasného zachovania významnej frakcie B-lymfocytárnych epitopov OPGL zvieraťa.
31. Analóg OPGL pódia nároku 30, kde modifikáciou je modifikácia pódia nároku 19.
32. Imunogénny prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje
- imunologický účinné množstvo OPGL polypeptidu autologného pre zviera, kde uvedený OPGL polypeptid je pripravený spoločne s imunologický prijateiným adjuvansom na prekonanie autotolerancie zvieraťa k OPGL polypeptidu, kde prostriedok ďalej obsahuje farmaceutický a imunologický prijateiný nosič a/alebo vehikulum, alebo
- imunologický účinné množstvo analógu OPGL pódia nároku 30 alebo 31, kde prostriedok dalej obsahuje farmaceutický a imunologický prijateiný nosič a/alebo vehikulum a voliteine adjuvans.
33. Fragment nukleovej kyseliny, ktorý kóduje analóg OPGL pódia nároku 30 alebo 31.
34. Vektor, vyznačujúci sa tým, že obsahuje fragment nukleovej kyseliny pódia nároku 33.
102
35. Vektor podía nároku 34,vyznačujúci sa tým, že je schopný autonómnej replikácie.
36. Vektor podía nároku 34 alebo 35, vyznačujúci satým, že je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej plazmid, fág, kozmid, minichromozóm a vírus.
37. Vektor podía akéhokolvek z nárokov 34-36, vyznačujúci sa tým, že obsahuje, v smere 5'->3' a v opera tívnej väzbe: promotor na riadenie expresie fragmentu nukleovej kyseliny podía nároku 33, volitelne sekvenciu nukleovej kyseliny kódujúcej vedúci peptid umožňujúci sekréciu alebo integráciu polypeptidového fragmentu do membrány, fragment nukleovej kyseliny podía nároku 33 a volitelne terminátor.
38. Vektor podía akéhokolvek z nárokov 34-37, vyznačujúci sa tým, že po vložení do buniek je schopný alebo neschopný integrácie do genómu hostitelskej bunky.
39. Vektor podía nároku 37 alebo 38, vyznačujúci sa tým, že promotor riadi expresiu v eukaryotickej bunke a/alebo v prokaryotickej bunke.
40. Tranformovaná bunka obsahujúca vektor podía akéhokolvek z nárokov 34-39.
41. Transformovaná bunka podía nároku 40, ktorá je schopná replikovat fragment nukleovej kyseliny podía nároku 33.
42. Transformovaná bunka podía nároku 41, ktorou je mikroorganizmus vybraný z baktérií, kvasiniek a protozoí, alebo bunka odvodená od mnohobunkového organizmu vybraná zo skupiny
103 zahŕňajúcej bunky hub, hmyzie bunky ako je S2 alebo SF bunka, rastlinné bunky a cicavčie bunky.
43. Transformovaná bunka podía akéhokoívek z nárokov 40-42, ktorá exprimuje fragment nukleovej kyseliny podía nároku 33.
44. Transformovaná bunka podía nároku 43, ktorá secernuje alebo nesie na svojom povrchu analóg OPGL podía nároku 30 alebo 31.
45. Spôsob podía akéhokoívek z nárokov 1-19, vyznačujúci sa tým, že prezentácia imunitnému systému je uskutočnená podaním nepatogénneho mikroorganizmu alebo vírusu, ktorý nesie fragment nukleovej kyseliny, ktorý kóduje a exprimuje OPGL polypeptid alebo analóg.
46. Prostriedok na indukciu produkcie protilátok proti OPGL vyznačujúci sa tým, že obsahuje fragment nukleovej kyseliny podía nároku 33 alebo vektor podía akéhokoívek z nárokov 34-39, a
- farmaceutický a imunologický prijateíný nosič a/alebo vehikulum a/alebo adjuvans.
47. Stabilná bunková línia obsahujúca vektor podía akéhokoívek z nárokov 34-39, ktorá exprimuje fragment nukleovej kyseliny podía nároku 33 a ktorá volitelne secernuje alebo nesie analóg OPGL podía nároku 30 alebo 31 na svojom povrchu.
48. Spôsob prípravy buniek podía akéhokoívek z nárokov 40-44, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa transformáciu hostiteľských buniek fragmentom nukleovej kyseliny podía nároku 33 alebo vektorom podía akéhokoívek z nárokov 34-39.
104
49. Spôsob na identifikáciu modifikovaného OPGL polypeptidu, ktorý je schopný indukovať tvorbu protilátok proti nemodifikovanému OPGL pri zvierati, pri ktorom je nemodifikovaný OPGL polypeptid vlastným proteínom, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa
- prípravu, pomocou peptidovej syntézy alebo techník génového inžinierstva, sady navzájom odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov, v ktorých boli v amínokyselinovej sekvencií OPGL polypeptidu daného živočíšneho druhu vykonané inzercie, deléciie alebo substitúcie aminokyselín, ktoré viedli k vzniku aminokyselinových sekvencií obsahujúcich T-lymfocytárne epitopy, ktoré sú cudzorodé pre živočíšny druh, alebo prípravu sady fragmentov nukleových kyselín kódujúcich sadu vzájomne odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov;
- testovanie členov sady modifikovaných OPGL polypeptidov alebo fragmentov nukleových kyselín na ich schopnost indukovať produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v živočíšnom druhu; a
- identifikáciu a volitelne izoláciu členov sady modifikovaných OPGL polypeptidov, ktoré významne indukujú produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v druhu alebo identifikácii a voliteľne izoláciu polypeptidových expresných produktov kódovaných členmi sady fragmentov nukleových kyselín, ktoré významne indukujú produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v živočíšnom druhu.
50. Spôsob prípravy imunologického prostriedku obsahujúceho aspoň jeden modifikovaný OPGL polypeptid, ktorý je schopný indukovať tvorbu protilátok proti nemodifikovanému OPGL pri zvierati, pri ktorom je nemodifikovaný OPGL polypeptid vlastným proteínom, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa
105
- prípravu, pomocou peptidovej syntézy alebo techník génového inžinierstva, sady navzájom odlišných modifikovaných OPGL polypeptidov, v ktorých boli v amínokyselinovej sekvencii OPGL polypeptidu daného živočíšneho druhu vykonané inzercie, delécie alebo substitúcie aminokyselín, ktoré viedli k vzniku aminokyselinových sekvencii obsahujúcich T-lymfocytárne epitopy, ktoré sú cudzorodé pre živočíšny druh;
- testovanie členov sady na ich schopnosť indukovať produkciu protilátok proti nemodifikovanému OPGL v živočíšnom druhu; a
- zmiešanie členov sady, ktorý významne indukujú produkciu pro tilátok pri zvierati, ktoré sú reaktívne s OPGL, s farmaceutický a imunologický prijateľným nosičom a/alebo vehikulom, voliteľne v kombinácii s aspoň jedným farmaceutický a imunologický prijateľným adjuvansom.
51. Spôsob podľa nároku 49 alebo 50, vyznačujúci sa t ý m, že príprava členov sady zahŕňa prípravu vzájomne odlišných sekvencii nukleovej kyseliny, kde každá sekvencia je sekvencia nukleovej kyseliny podľa nároku 33, inzerciu sekvencií nukleovej kyseliny do vhodných expresných vektorov, transformáciu vhodných hostitelských buniek vektormi a expresiu sekvencii nukleovej kyseliny, a potom voliteľne izoláciu produktov expresie.
52. Spôsob podľa nároku 51,vyznačujúci sa tým, že príprava sekvencii nukleových kyselín a/alebo vektorov je uskutočnená pomocou molekulárnych amplifikačných techník, ako je PCR, alebo pomocou syntézy nukleových kyselín.
53. Použitie OPGL alebo jeho subsekvencie na prípravu imunogénneho prostriedku obsahujúceho adjuvans na inhibíciu aktivity OPGL pri zvierati.
106
54. Použitie OPGL alebo jeho subsekvencie na prípravu imunogénneho prostriedku obsahujúceho adjuvans na liečbu, profylaxiu alebo zmiernenie osteoporózy alebo iného stavu charakterizovaného nadmernou resorpciou kosti.
55. Použitie analógu OPGL podlá nároku 30 alebo 31 na prípravu imunogénneho prostriedku obsahujúceho adjuvans na inhibíciu aktivity OPGL pri zvierati.
56. Použitie analógu OPGL podlá nároku 30 alebo 31 na prípravu imunogénneho prostriedku obsahujúceho adjuvans na liečbu, profylaxiu alebo zmiernenie osteoporózy alebo iného stavu charakterizovaného nadmernou resorpciou kosti.
01-768-01-Če
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA199801164 | 1998-09-15 | ||
| US10289698P | 1998-10-02 | 1998-10-02 | |
| PCT/DK1999/000481 WO2000015807A1 (en) | 1998-09-15 | 1999-09-13 | Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK3062001A3 true SK3062001A3 (en) | 2002-02-05 |
Family
ID=26065320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK306-2001A SK3062001A3 (en) | 1998-09-15 | 1999-09-13 | Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6645500B1 (sk) |
| EP (1) | EP1114166B1 (sk) |
| JP (1) | JP2002525060A (sk) |
| KR (1) | KR100671036B1 (sk) |
| CN (1) | CN1318105A (sk) |
| AT (1) | ATE291628T1 (sk) |
| AU (1) | AU754971B2 (sk) |
| CA (1) | CA2343654A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ2001789A3 (sk) |
| DE (1) | DE69924392T2 (sk) |
| EE (1) | EE200100149A (sk) |
| ES (1) | ES2239457T3 (sk) |
| HK (1) | HK1040261A1 (sk) |
| HR (1) | HRP20010188A2 (sk) |
| HU (1) | HUP0103578A3 (sk) |
| ID (1) | ID28386A (sk) |
| IL (2) | IL141588A0 (sk) |
| NO (1) | NO20011304L (sk) |
| NZ (1) | NZ510508A (sk) |
| PL (1) | PL196790B1 (sk) |
| PT (1) | PT1114166E (sk) |
| SK (1) | SK3062001A3 (sk) |
| TR (1) | TR200100737T2 (sk) |
| WO (1) | WO2000015807A1 (sk) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1717315A3 (en) * | 1997-04-16 | 2007-06-20 | Amgen Inc. | Osteoprotegerin binding proteins and receptors |
| US6316408B1 (en) * | 1997-04-16 | 2001-11-13 | Amgen Inc. | Methods of use for osetoprotegerin binding protein receptors |
| CN1318105A (zh) * | 1998-09-15 | 2001-10-17 | M&E生物技术公司 | 负调节Osteoprotegerin配体活性的方法 |
| GB9908263D0 (en) * | 1999-04-13 | 1999-06-02 | Binding Site The Limited | Eliciting improved immune responses |
| WO2000067777A1 (en) * | 1999-05-07 | 2000-11-16 | Biofan Pty Ltd | A method of prophylaxis and treatment and agents useful therefor |
| CA2647796A1 (en) * | 1999-07-28 | 2001-02-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of inhibiting osteoclast activity |
| US6673771B1 (en) | 1999-07-28 | 2004-01-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of inhibiting osteoclast activity |
| WO2001023559A1 (en) * | 1999-09-27 | 2001-04-05 | Eli Lilly And Company | Osteoclast differentiation factor regulatory region |
| AUPQ314799A0 (en) * | 1999-09-29 | 1999-10-21 | University Of Western Australia, The | Bone cell factor |
| BR0108566A (pt) * | 2000-02-21 | 2002-11-19 | Pharmexa As | Método para a regulação negativa in vivo de proteìna amilóide em um animal, incluindo um ser humano e para o tratamento e/ou prevenção e/ou melhora da doença de alzheimer ou outras doenças e condições cartacterizadas por depósitos de amilóide, análogo de um polipeptìdeo amiloidogênico,composição imunogênica, fragmento de ácido nucleico, vetor, célula transformada, composição para induzir a produção de anticorpos contra um polipeptìdeo amiloidogênico, linhagem celular estável, métodos para a preparação de uma célula, para a identificação de um polipeptìdeo amiloidogênico modificado, e para preparação de uma composição imunogênica, uso de um polipeptìdeo amiloidogênico ou de uma subsequência do mesmo, e, uso de um análogo de um polipeptìdeo amiloidogênico |
| MXPA02007796A (es) * | 2000-02-21 | 2003-12-08 | Pharmexa As | Metodo novedoso para la disminucion de cuerpos amiloides. |
| US20030103978A1 (en) * | 2000-02-23 | 2003-06-05 | Amgen Inc. | Selective binding agents of osteoprotegerin binding protein |
| EP1257648B2 (en) † | 2000-02-23 | 2016-09-14 | Amgen Inc. | Antagonistic selective binding agents of osteoprotegerin binding protein |
| AU2001266604A1 (en) * | 2000-05-26 | 2001-12-11 | Smith Kline Beecham Corporation | Anti-rank ligand monoclonal antibodies useful in treatment of rank ligand mediated disorders |
| EP1458411A2 (en) * | 2000-08-21 | 2004-09-22 | Smithkline Beecham Corporation | Anti-rank ligand monoclonal antibodies useful in treatment of rank ligand mediated disorders |
| AU2001288094A1 (en) * | 2000-09-21 | 2002-04-02 | Center For Advanced Science And Technology Incubation, Ltd. | Method of regulating osteoclast formation |
| WO2002024896A2 (en) | 2000-09-22 | 2002-03-28 | Immunex Corporation | Screening assays for agonists or antagonists of receptor activat or of nf-kb |
| US7128911B2 (en) | 2001-01-19 | 2006-10-31 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of bone disease |
| EP1385532A4 (en) * | 2001-03-22 | 2004-12-15 | Barnes Jewish Hospital | STIMULATION OF THE OSTEOGENESIS WITH RANG-LIGAND FUSION PROTEINS |
| AU2002253133B2 (en) | 2001-04-03 | 2008-02-28 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Osteoprotegerin in milk |
| TR201809008T4 (tr) | 2001-06-26 | 2018-07-23 | Amgen Fremont Inc | Opgl ye karşi antikorlar. |
| MY144532A (en) * | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
| US20030109444A1 (en) * | 2001-10-12 | 2003-06-12 | Jonathan Lam | Bone anti-resorptive compounds |
| JP4336467B2 (ja) * | 2001-10-15 | 2009-09-30 | 株式会社林原生物化学研究所 | 破骨細胞形成抑制因子の産生を調節し得る物質のスクリーニング方法 |
| US7381792B2 (en) | 2002-01-04 | 2008-06-03 | Xencor, Inc. | Variants of RANKL protein |
| EP1560843A4 (en) * | 2002-01-04 | 2006-09-06 | Xencor Inc | NEW VARIANTS OF RANKL PROTEIN |
| US7399829B2 (en) | 2002-01-04 | 2008-07-15 | Xencor, Inc. | Variants of RANKL protein |
| EP1494714A4 (en) * | 2002-04-05 | 2008-03-05 | Amgen Inc | HUMAN ANTI-OPGL NEUTRALIZING ANTIBODIES AS SELECTIVE OPGL PATH HEMMER |
| US6921538B2 (en) * | 2002-05-10 | 2005-07-26 | Allergan, Inc. | Therapeutic treatments for neuropsychiatric disorders |
| US7462700B2 (en) | 2002-12-10 | 2008-12-09 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Canine RANKL and methods for preparing and using the same |
| MXPA06013854A (es) * | 2004-06-02 | 2007-03-02 | Cytos Biotechnology Ag | Usos medicos de conjugados portadores de peptidos del factor de necrosis tumoral, no humanos. |
| US20080107597A1 (en) * | 2006-01-12 | 2008-05-08 | Anaptys Biosciences, Inc. | Isolation of antibodies that cross-react and neutralize rankl originating from multiple species |
| WO2008088594A2 (en) * | 2007-01-12 | 2008-07-24 | Anaptysbio, Inc. | Isolation of antibodies that cross-react and neutralize rankl orginating from multiple species |
| CN101434656B (zh) * | 2007-11-16 | 2011-12-14 | 首都医科大学 | Opg-hsp70融合蛋白的制备方法及用途 |
| US10035834B2 (en) * | 2008-06-18 | 2018-07-31 | The Texas A&M University System | Mesenchymal stem cells, compositions, and methods for treatment of cardiac tissue damage |
| WO2011128892A2 (en) * | 2010-04-12 | 2011-10-20 | Protea Vaccine Technologies Ltd. | Modified forms of pneumococcal surface immunogenic protein b (psipb) |
| CN107286244B (zh) * | 2016-04-11 | 2021-10-08 | 北京普纳生物科技有限公司 | 抗免疫检查点pd-l1和pd-l2肿瘤疫苗 |
| CN107286245B (zh) * | 2016-04-11 | 2021-10-08 | 北京普纳生物科技有限公司 | Pd-l1和pd-l2重组蛋白及其用途 |
| CN108498786A (zh) * | 2018-02-13 | 2018-09-07 | 南昌大学第二附属医院 | 载骨保护素的缓释纳米粒及其制备方法和应用 |
| KR102154637B1 (ko) * | 2018-11-12 | 2020-09-10 | 조선대학교산학협력단 | Rankl의 돌연변이체, 및 이를 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
| WO2024054566A1 (en) * | 2022-09-07 | 2024-03-14 | The Regents Of The University Of California | Treatment of cancer by blockade of osteoprotegerin |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1237764B (it) * | 1989-11-10 | 1993-06-17 | Eniricerche Spa | Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici. |
| DK96493D0 (da) * | 1993-08-26 | 1993-08-26 | Mouritsen Og Elsner Aps | Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden |
| US5641404A (en) | 1993-08-27 | 1997-06-24 | The Dow Chemical Company | Process for the separation of enantiomers |
| WO1995027058A1 (en) * | 1994-04-01 | 1995-10-12 | The University Of Utah | MOLECULAR CLONING AND EXPRESSION OF A η-INTERFERON INDUCIBLE ACTIVATOR OF THE PROTEASOME |
| US6340459B1 (en) * | 1995-12-01 | 2002-01-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Therapeutic applications for the anti-T-BAM (CD40-L) monoclonal antibody 5C8 in the treatment of reperfusion injury in non-transplant recipients |
| US6369027B1 (en) * | 1995-12-22 | 2002-04-09 | Amgen Inc. | Osteoprotegerin |
| EP1995318A1 (en) * | 1996-12-13 | 2008-11-26 | Schering Corporation | Mammalian cell surface antigens; related reagents |
| JP2002509431A (ja) * | 1996-12-23 | 2002-03-26 | イミュネックス・コーポレーション | ＮＦ−κＢのレセプター活性化因子−レセプターはＴＮＦレセプタースーパーファミリーの一員である− |
| EP1717315A3 (en) * | 1997-04-16 | 2007-06-20 | Amgen Inc. | Osteoprotegerin binding proteins and receptors |
| US5843678A (en) * | 1997-04-16 | 1998-12-01 | Amgen Inc. | Osteoprotegerin binding proteins |
| CN1318105A (zh) * | 1998-09-15 | 2001-10-17 | M&E生物技术公司 | 负调节Osteoprotegerin配体活性的方法 |
-
1999
- 1999-09-13 CN CN99810872A patent/CN1318105A/zh active Pending
- 1999-09-13 PL PL346698A patent/PL196790B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-13 WO PCT/DK1999/000481 patent/WO2000015807A1/en active IP Right Grant
- 1999-09-13 DE DE69924392T patent/DE69924392T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-13 CA CA002343654A patent/CA2343654A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-13 EP EP99942778A patent/EP1114166B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-13 TR TR2001/00737T patent/TR200100737T2/xx unknown
- 1999-09-13 AU AU56173/99A patent/AU754971B2/en not_active Ceased
- 1999-09-13 SK SK306-2001A patent/SK3062001A3/sk not_active Application Discontinuation
- 1999-09-13 JP JP2000570334A patent/JP2002525060A/ja active Pending
- 1999-09-13 PT PT99942778T patent/PT1114166E/pt unknown
- 1999-09-13 KR KR1020017003379A patent/KR100671036B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-09-13 AT AT99942778T patent/ATE291628T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-09-13 EE EEP200100149A patent/EE200100149A/xx unknown
- 1999-09-13 CZ CZ2001789A patent/CZ2001789A3/cs unknown
- 1999-09-13 NZ NZ510508A patent/NZ510508A/en unknown
- 1999-09-13 IL IL14158899A patent/IL141588A0/xx unknown
- 1999-09-13 ID IDW20010822A patent/ID28386A/id unknown
- 1999-09-13 HU HU0103578A patent/HUP0103578A3/hu unknown
- 1999-09-13 ES ES99942778T patent/ES2239457T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-15 US US09/396,937 patent/US6645500B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-02-22 IL IL141588A patent/IL141588A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-03-14 HR HR20010188A patent/HRP20010188A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-03-14 NO NO20011304A patent/NO20011304L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-01-08 HK HK02100128.3A patent/HK1040261A1/zh unknown
-
2003
- 2003-09-17 US US10/664,801 patent/US20040115199A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ID28386A (id) | 2001-05-17 |
| IL141588A0 (en) | 2002-03-10 |
| JP2002525060A (ja) | 2002-08-13 |
| AU754971B2 (en) | 2002-11-28 |
| HK1040261A1 (zh) | 2002-05-31 |
| CA2343654A1 (en) | 2000-03-23 |
| US6645500B1 (en) | 2003-11-11 |
| PL196790B1 (pl) | 2008-01-31 |
| PL346698A1 (en) | 2002-02-25 |
| TR200100737T2 (tr) | 2001-07-23 |
| HRP20010188A2 (en) | 2002-04-30 |
| HUP0103578A2 (hu) | 2002-01-28 |
| EP1114166B1 (en) | 2005-03-23 |
| WO2000015807A1 (en) | 2000-03-23 |
| DE69924392D1 (de) | 2005-04-28 |
| NO20011304L (no) | 2001-05-15 |
| AU5617399A (en) | 2000-04-03 |
| EP1114166A1 (en) | 2001-07-11 |
| PT1114166E (pt) | 2005-08-31 |
| US20040115199A1 (en) | 2004-06-17 |
| ATE291628T1 (de) | 2005-04-15 |
| NO20011304D0 (no) | 2001-03-14 |
| HUP0103578A3 (en) | 2005-11-28 |
| NZ510508A (en) | 2005-05-27 |
| KR20010085807A (ko) | 2001-09-07 |
| KR100671036B1 (ko) | 2007-01-18 |
| EE200100149A (et) | 2002-08-15 |
| DE69924392T2 (de) | 2006-03-09 |
| CN1318105A (zh) | 2001-10-17 |
| CZ2001789A3 (cs) | 2001-08-15 |
| IL141588A (en) | 2008-07-08 |
| ES2239457T3 (es) | 2005-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6645500B1 (en) | Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity | |
| US7070784B1 (en) | Method for down-regulating GDF-8 activity using immunogenic GDF-8 analogues | |
| AU2006312847A1 (en) | Therapeutic vaccines targeting HMGB1 | |
| US20070184023A1 (en) | Method for down-regulation of vegf | |
| CZ20013709A3 (cs) | Analog interleukinu 5, fragment nukleové kyseliny, vektor, buňka, přípravky a pouľití | |
| US20020172673A1 (en) | Method for down-regulating IgE | |
| US20050063952A1 (en) | Immunogenic CEA | |
| AU2006228872A1 (en) | Immunogenic EGFR peptides comprising foreign Tcell stimulating epitope | |
| HALKIER et al. | Sommaire du brevet 2343654 | |
| AU2004235875A1 (en) | Immunogenic human TNF alpha analogues with reduced cytotoxicity and methods of their preparation | |
| EP1541587A2 (en) | Method for down-regulating osteoprotegerin ligand activity | |
| HALKIER et al. | Patent 2343654 Summary | |
| KR20050052499A (ko) | 자가 그렐린에 대한 면역화 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |