SK281432B6 - Spôsob prípravy n-acetyl-(l)-4-kyanofenylalanínu ac-(l)-phe(4- -cn)-oh a n-acetyl-(l)-p-amidinofenylalanín-cyklohexylglycín- -beta-(3-n-metylpyridínium)-alanínu ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2 - Google Patents

Spôsob prípravy n-acetyl-(l)-4-kyanofenylalanínu ac-(l)-phe(4- -cn)-oh a n-acetyl-(l)-p-amidinofenylalanín-cyklohexylglycín- -beta-(3-n-metylpyridínium)-alanínu ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2 Download PDF

Info

Publication number
SK281432B6
SK281432B6 SK855-98A SK85598A SK281432B6 SK 281432 B6 SK281432 B6 SK 281432B6 SK 85598 A SK85598 A SK 85598A SK 281432 B6 SK281432 B6 SK 281432B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
compound
formula
reaction medium
sufficient amount
amount
Prior art date
Application number
SK855-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK85598A3 (en
Inventor
Chi-Hsin R. King
Original Assignee
Hoechst Marion Roussel, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Marion Roussel, Inc. filed Critical Hoechst Marion Roussel, Inc.
Publication of SK85598A3 publication Critical patent/SK85598A3/sk
Publication of SK281432B6 publication Critical patent/SK281432B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes

Abstract

Príprava N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu, Ac-(L)-Phe(4- -CN)-OH, zlúčeniny so vzorcom (IA), sa uskutočňuje štiepením racemickej zlúčeniny, etylesteru N-acetyl-(D,L)-4-kyanofenylalanínu, a ďalej je opisaný postup prípravy stereoizoméru, Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe (3)-NH2, zlúčeniny so vzorcom (II), s použitím uvedeného medziproduktu, N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu.ŕ

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka nového postupu prípravy N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu rozštiepením racemickej zlúčeniny etylesteru N-acetyl-(D,L)-4-kyanofenylalanínu, a rovnako nového postupu prípravy stereoizoméru Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe (3)-NH2 s použitím tohto medziproduktu N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu.
Doterajší stav techniky
Racemická zlúčenina, N-acetyl-(D,L)-4-kyanofenylalanín a steroizomér Ac-(L)-pAph-Chg-PalMc(3)-NH2 sú uvádzané a opisované v patentovej prihláške Spojených štátov amerických č. 08/428, 404, podanej 24. apríla 1995, ktorá je pokračovaním patentovej prihlášky Spojených štátov amerických č. 08/233, 054, podanej 26. apríla 1994, pričom tieto patentové prihlášky tu slúžia ako odkazové materiály. Uvedený konečný produkt, to znamená Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2 je použiteľný ako inhibítor Faktora Xa.
Všeobecne je želané vyvíjať liečivá vo forme stereoizomérov než ako racemáty, pretože stereoizoméry majú oproti racemátom určité výhody, ako je napríklad vynikajúca účinnosť, menšie vedľajšie účinky, znížená úroveň toxicity alebo dokonca vôbec žiadna toxicita atd’. Niekedy tieto výhody stereoizomérov oproti racemátom nie sú známe až do času, kým sa vyvinie liečivo, alebo v niektorých prípadoch dokonca keď je toto liečivo uvádzané na trh. V mnohých oficiálnych štátnych inštitúciách, ktoré sa zaoberajú povoľovaním liečiv na uvedenie na trh, sa dáva prednosť potvrdzovaniu dokladov týkajúcich sa stereoizomérov ako liečiva než ako racemátu. Z tohto dôvodu je vhodné a želané mať k dispozícii postup prípravy stereoizomérov zlúčeniny Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2. Kľúčovým medziproduktom na prípravu tohto stereoizoméru je stereoizomérN-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanín.
Na to, aby sa dosiahlo rozdelenie racemátu, je nutné vybrať niektorý z celého radu rôznych technických prostriedkov, ktoré sú známe z doterajšieho stavu techniky. Ako príklad niektorých z týchto známych metód je možné uviesť prípravu diastereoizomérov, po ktorej nasleduje kryštalizácia alebo diferenciálna absorpcia (chromatografia) [pozri napríklad publikácie Enantiomers, Racemates and Resolutions, J. Jacques, A. Collet a S. H. Wilen, Wiley (1982)], ďalej chromatografícké delenie na chirálnej stacionárnej fáze, kinetické štiepenie a enzymatické štiepenie. V prípade enzymatického štiepenia, najmä čo sa týka hydroláz alebo esteráz, bolo preukázané, že sú tieto metódy vhodné na rozštiepenie aminokyselín, čo jc napríklad opisované v publikácii Chemistry and Biochemistry of the amino acids, Chapman and Halí, New York, 1984, Cháp. 10, str. 338 - 353, ďalej v publikácii Applications of Biochemical Systems in Organic Chemistry, part I. J. B. Jones, C. J. Sih a D. Perlman, Wiley, New York, 1976, Cháp. 4. Str. 104 - 401, a ďalej v publikácii Chemistry of the Amino Acids, Vol. 1, Wiley New York, 1961, Cháp 9, str. 728 -750.
V ďalšom štádiu experimentálneho výskumu, aj keď sa našiel vhodný postup, musí odborník pracujúci v danom odbore uskutočniť mnoho experimentálnych pokusov s cieľom nájsť správne a vhodné rozpúšťadlo, ko - rozpúšťadlo (ak je to potrebné), teplotu, čas a ďalšie podmienky na účely dosiahnutia efektívneho a účinného rozštiepenia racemátu, pomocou ktorých sa dosiahne ľahké získanie požadovanej zlúčeniny, vysoký výťažok, vysoký prebytok e nantioméru a ďalej taký spôsob uskutočnenia daného procesu, ktorý by nebol pri uskutočňovaní príliš zložitý a komplikovaný. Podľa predmetného vynálezu bolo nájdené riešenie týchto problémov súvisiacich so štiepením N-acetyl-(D,L)-4-kyanofenylalanínu, ktorého izomér sa potom použije ako medziprodukt na prípravu Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2, to znamená zlúčeniny so všeobecným vzorcom (II).
Podstata vynálezu
Vynález sa týka spôsobu prípravy N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu, zlúčeniny so vzorcom (IA):
Zlúčenina (IA) zahŕňajúcej nasledujúce stupne:
(a) kombinovanie dostatočného množstva zlúčeniny (I):
dostatočného množstva vodného roztoku, dostatočného množstva acetonitrilu a dostatočného množstva subtilisínu na zreagovanie podstatného množstva zlúčeniny so vzorcom (I) za vzniku reakčného média, a (b) úpravu reakčného média na vhodnú hodnotu pH pri pridaní subtilisínu a udržovanie vhodnej hodnoty pH pri prebiehajúcej reakcii na získanie zlúčeniny so vzorcom (IA).
Vynález sa rovnako týka postupu prípravy zlúčeniny Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2, zlúčeniny so vzorcom
Zlúčenina (II) alebo farmaceutický prijateľných soli odvodených od tejto zlúčeniny, ktorý zahŕňa nasledujúce stupne:
(a) kombinovanie dostatočného množstva zlúčeniny so vzorcom (I):
Zlúčenina (I)
SK 281432 Β6 dostatočného množstva vodného roztoku, dostatočného množstva acetonitrilu a dostatočného množstva Subtilisínu na zreagovanie s podstatným množstvom zlúčeniny so vzorcom (I) za vzniku reakčného média, a (b) úpravu reakčného média na vhodnú hodnotu pH pri pridaní subtilisínu a udržovanie vhodnej hodnoty pH pri prebiehajúcej reakcii na získanie zlúčeniny so vzorcom (IA):
zlúčenina (IA), (c) adovanie zlúčeniny so vzorcom (IA) na zlúčeninu so vzorcom (3)
zlúčenina (3) za vzniku zlúčeniny so vzorcom (4):
zlúčenina (4), (d) prevedenie kyanoskupiny v zlúčenine so vzorcom (4) na amidínovú skupinu ametylácia dusíka pyridylovej skupiny za vzniku zlúčeniny so vzorcom (II).
V opise predmetného vynálezu majú tu použité termíny nasledujúci význam:
(a) Symbolom „Ac“ alebo termínom „acetyl“ sa myslí funkčná skupina so vzorcom:
CH3 —C — (b) Termínom „amidínová“ skupina sa myslí funkčná skupina so vzorcom:
nh2 ~' CNH (c) Termínom „pyridilová“ skupina sa myslí funkčná skupina so vzorcom:
Termín „stereoizoméry“ sa používa ako všeobecný termín pre všetky izoméry, ktoré sa odlišujú iba orientáciou svojich atómov na určitom mieste. Do rozsahu tohto termínu náležia izoméry zlúčenín s viac ako jedným chirálnym centrom, ktoré nepredstavujú svoje zrkadlové obrazy (diastereoméry alebo diastereoizoméry). Termínom „enantiomér“ sa myslia dva stereoizoméry, ktoré nepredstavujú vzájomne sa prekrývajúce zrkadlové obrazy. Termínom „chirálny stred“ sa tu myslí uhlíkový atóm, ku ktorému sú pripojené štyri rôzne skupiny. Nomenklatúra L/D alebo R/S, použitá v opise predmetného vynálezu, je opisovaná v publikácii IUPAC - IUB Joint Commision on Biochetnical Nomenclature, Eur. J. Biochem. 138, 9-37 (1984). Chirálna látka môže buď to obsahovať ekvivalentné množstvo R a S izoméru (alebo L a D izoméru), pričom v tomto prípade sa označuje „racemická“ alebo „racemát“, alebo nemusí obsahovať ekvivalentné množstvo R a S izoméru (alebo L a D izoméru), pričom v tomto prípade sa nazýva „opticky aktívna“ alebo „ne - racemická“.
Termínom „štiepenie“ sa myslí rozdeľovanie racemickej zmesi na opticky aktívne zložky.
Termínom „enantiomémy prebytok“ alebo „ee“ sa myslí percentuálny podiel, ktorým jeden enantiomér, EI prevyšuj e v zmesi množstvo oboch týchto enantiomérov, E1 plus E2, to znamená:
(E1-E2)
--------x 100 % = ee.
(E1 + E2)
Termínom (+) - sa myslí plus enantiomér, termínom (-) - sa myslí mínus enantiomér.
Označením „ „ sa myslí väzba, ktorá vystupuje z roviny, ktorú tvorí list papiera, smerom von nahor. Označením „ ............. „ sa myslí väzba, ktorá vystupuje z roviny, ktorú tvorí list papiera, smerom späť dolu.
Termínom „farmaceutický prijateľné soli“, sa myslia adičné soli s kyselinami, ktoré sú získané reakciou s týmito kyselinami, napríklad s kyselinou chlorovodíkovou, s kyselinou bromovodíkovou, s kyselinou sírovou, s kyselinou dusičnou alebo s kyselinou fosforečnou, a s organickými karboxylovými kyselinami, ako je napríklad kyselina octová, kyselina trifluóroctová, kyselina propiónová, kyselina glykolová, kyselina maleínová, kyselina vínna, kyselina citrónová, kyselina salicylová, kyselina 2-acetyloxybenzoová, alebo s organickými sulfónovými kyselinami, ako je napríklad kyselina metánsulfónová, kyselina 4-toluénsulfónová a kyselina naftalénsulfónová. Predpokladá sa ako samozrejmé, že je možné použiť rovnako aj iné ďalšie bežne známe kyseliny v tomto odbore prípravy farmaceutických prostriedkov, ktoré sa zvyčajne používajú na daný účel.
Termínom „aminokyselina“, ktoiý je použitý v opise predmetného vynálezu, sa myslia v prírode sa vyskytujúce aminokyseliny, ktoré pochádzajú z genetického kódu a obsahujú ako stavebné bloky proteíny. Tento termín „aminokyselina“ rovnako zahŕňa, pokiaľ nebude výslovne uvedené inak, tak (L)-aminokyseliny ako (D)-aminokyseliny, chemicky modifikované aminokyseliny, ako sú napríklad analógy aminokyselín, v prírode sa vyskytujúce aminokyseliny, ktoré nie sú zvyčajne inkorporované do proteínov. Skratky používané pre tieto aminokyseliny, aminokyselinové analógy, vyskytujúce sa v rozsahu opisu predmetného vynálezu, sú uvedené v nasledujúcej tabuľke č. 1.
Tabuľka 1
Aminokyselina____________________Symbol alanín Ala fenylalanín Phe p-kyanofenylalanín Phe (4-C) p-amidinofenylalanín pAphe cyklohexylglycín Chg p-(3-pyridyl)-alanín Pal
P-(3-N-metylpyridínium)-alanín PalMe (3)
Schéma 1
Štiepenie zlúčeniny (I)
Schéma 1:
Štiepenie etylesteru N-acetyl-(D,L)-4-kyano-fenylalanínu.
Stupeň A
Zlúčenina (I)
Racemát etylesteru (zlúčenina (I)) sa podľa tohto postupu rozštiepia na L-stereoizomér kyseliny, to znamená Nace-tyl-4-kyanofenylalanín (zlúčenina (IA)), pričom však D-stereoizomér tohto esteru (zlúčenina (D-I)) v podstate nie je prevedený na túto kyselinu. Týmto spôsobom teda môže byť uskutočnené oddelenie požadovanej kyseliny od neželaného esteru. Ako ešte bude detailne opísané v ďalšom texte, kyselina získaná týmto spôsobom predstavuje hlavne L-izomér, čo je znázornené v uvedenej schéme, a táto skutočnosť je deklarovaná vysokým „ec“ faktorom tejto zlúčeniny.
Pri uskutočňovaní postupu podľa predmetného vynálezu je uvedeným dostatočným množstvom zlúčeniny (I), ktoré je kombinované na získanie reakčného média prinajmenšom dvakrát tak veľké množstvo, ako je požadované na získanie L-stereoizoméru týmto postupom podľa vynálezu. Reakčné médium obsahuje dostatočné množstvo acetonitrilu a dostatočné množstvo vodného roztoku. Tieto dostatočné množstvá sú požadované z toho dôvodu, aby bolo umožnené vzájomné zreagovanie jednotlivých prísad (pridaných zložiek) spôsobom podľa predmetného vynálezu. V texte predmetného vynálezu je použitý termín „prísada“ (alebo pridaná zložka), pričom týmto termínom sa myslia všetky látky dodávané do reakčného média.
Termínom „dostatočné množstvo“ acetonitrilu sa myslí množstvo, ktoré rozpustí podstatný podiel zlúčeniny (I) v reakčnom médiu. Vo výhodnom uskutočnení je táto zlúčenina so vzorcom (I) solubilizovaná do acetonitrilu, pričom sa pomaly pridáva vodný roztok až do okamihu, keď sa tento vodný roztok začína zakaľovať. Zakalený roztok naznačuje, že sa časť zlúčeniny so vzorcom (I) začína zrážať, to znamená, že je potrebné pridať ďalší podiel acetonitrilu na rozpustenie tejto zrazeniny. Napríklad je možné uviesť, že toto dostatočné množstvo acetonitrilu predstavuje podiel v rozmedzí od asi 5 do asi 95 % objemových reakčného média a podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia podiel v rozmedzí od asi 50 do asi 60 % objemových tohto reakčného média. Rovnako je výhodné, ak sa zlúčenina so vzor com (I) použije v koncentrácii pohybujúcej sa v rozmedzí od asi 20 gramov do asi 140 gramov na liter reakčného média a podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia v koncentrácii pohybujúcej sa v rozmedzí od asi 35 gramov do asi 65 gramov na liter tohto reakčného média.
Uvedeným „dostatočným množstvom“ vodného roztoku je také množstvo, ktoré je potrebné na rozpustenie podstatného podielu enzýmu subtilisínu v reakčnom médiu. V texte predmetného vynálezu je použitý termín „vodný roztok“, pričom týmto termínom sa myslí roztok obsahujúci vodu a podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia sa tým myslí roztok obsahujúci vodu a ďalšie prísady (pridané zložky), ktoré napomáhajú zvýšeniu výťažku „ee“ faktora. Termín „roztok“ nemusí nevyhnutne znamenať to, že sa všetky pridávané zložky (prísady) rozpustia. Tento termín rovnako môže znamenať, že tieto pridávané zložky sú dispergované, takže v tomto prípade vznikne suspenzia.
Napríklad je možné uviesť, žc tento vodný roztok môže ďalej obsahovať ako prísadu dostatočné množstvo anorganickej soli, ako je napríklad chlorid draselný, chlorid sodný, chlorid lítny atď. Vo výhodnom uskutočnení podľa vynálezu je touto anorganickou soľou chlorid draselný. Predpokladá sa, že táto anorganická soľ pôsobí tak, že stabilizuje uvedený subtilisín. Uvedeným termínom „dostatočné množstvo“ anorganickej soli sa myslí také množstvo, ktoré je dostatočné na stabilizovanie subtilisínu. Týmto množstvom je asi 0,02 mólu až asi 0,20 mólu na liter vodného roztoku, podľa výhodnejšieho uskutočnenia je toto množstvo asi 0,05 mólu až asi 0,15 mólu na liter vodného roztoku. Napríklad sa použije riešenie, podľa ktorého sa skombinuje 1 M roztok chloridu draselného v množstve predstavujúcim asi 10 až asi 15 percent objemových reakčného média.
So zlúčeninou so vzorcom (I), acetonitrilom a vodným roztokom sa kombinuje dostatočné množstvo subtilisínu. Týmto termínom „dostatočné množstvo“ subtilisínu sa myslí množstvo, ktoré je schopné reagovať s podstatným podielom (pokiaľ možno prakticky so všetkým množstvom) zlúčeniny so vzorcom (I). Týmto dostatočným množstvom je asi 0,5 až asi 10 hmotnostných miliekvivalentov podielu zlúčeniny so vzorcom (I).
Hodnota pH tohto reakčného média sa meria po prídavku uvedeného enzýmu, pričom v prípade potreby sa táto hodnota upraví na vhodnú hodnotu pH. Touto vhodnou hodnotou pH sa myslí taká hodnota pH, pri ktorej je tento enzým schopný reagovať. Vo výhodnom uskutočnení je touto vhodnou hodnotou pH hodnota pohybujúca sa v rozmedzí od asi 5 do asi 9, podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia v rozmedzí od asi 6,5 do asi 7,5. Táto vhodná hodnota pH sa udržuje v čase, keď prebieha reakcia medzi zlúčeninou so vzorcom (I) a subtilisínom. To znamená, že tento čas je v rozmedzí od asi 15 minút do asi 4 hodín, vo výhodnom uskutočnení sa táto reakcia uskutočňuje za miešania alebo počas súčasného aplikovanie inej vhodnej metódy, ktorá napomáha k uskutočneniu reakcie. Na udržovanie uvedenej vhodnej hodnoty pH je možné použiť akúkoľvek ľubovoľnú metódu alebo prostriedok, ako je napríklad pridávanie dostatočného množstva bázickej látky, akou je napríklad hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lítny, hydroxid amónny, uhličitan sodný, uhličitan draselný, výhodne vo forme 1 M roztoku, alebo je možné použiť pridávanie roztoku pufra, ako je napríklad acetát amónny, hydrogenuhličitan amónny, hydrogenuhličitan sodný alebo fosfátový pufor, ako je napríklad hydrogenfosforečnan amónny, hydrogenfosforečnan sodný. Na monitorovanie hodnoty pH reakčného média je možné použiť pH-meter.
Zlúčeninu so vzorcom (IA) je možné oddeliť bežne známymi metódami z doterajšieho stavu techniky, ako je napríklad metóda, pri ktorej sa roztok zriedi prídavkom bázického roztoku anorganickej soli, ako je napríklad hydrogenuhličitan sodný. Táto organická fáza sa potom premyje organickými rozpúšťadlami, ako sú napríklad étery, chlórované rozpúšťadlá, ako je napríklad metylénchlorid, chloroform, toluén, heptán alebo etylacetát. Tento vodný roztok sa potom okyslí s použitím koncentrovanej kyseliny, ako je napríklad kyselina chlorovodíková, na pH v rozmedzí od asi 1 do asi 3, na čo potom nasleduje extrakcia organickým rozpúšťadlom, čím sa získa zlúčenina so vzorcom (IA).
V nasledujúcich tabuľkách 2 a 3 je uvedené porovnávanie reakcií uskutočňovaných pri použití vodného roztoku a acetonitrilu (tabuľka 2) a s použitím vodného roztoku a dimetylsulfoxidu namiesto acetonitrilu (tabuľka 3).
V stĺpci Aje uvedené množstvo zlúčeniny so vzorcom (I) v gramoch použitej pri tomto postupe.
V stĺpci B je uvedené množstvo (v mililitroch, ml) dimetylsulfoxidu (DMSO) alebo acetonitrilu (CH3CN), vody a 1 M roztoku chloridu draselného použitého na prípravu tohto vodného roztoku.
V stĺpci C je uvedené použité množstvo subtilisínu v miligramoch (mg) a zodpovedajúci hmotnostný ekvivalent (meq) zlúčeniny so vzorcom (I).
V stĺpci D je uvedený čas uskutočňovania daného experimentu.
V stĺpci E je uvedený enantiomémy prebytok získanej zlúčeniny so vzorcom (IA).
V stĺpci F je uvedený výťažok takto získanej zlúčeniny so vzorcom (IA).
Tabuľka 2
Termín „vstup 1“ znamená, že reakcia bola uskutočňovaná za prítomnosti anorganickej soli (chlorid draselný). Termín „vstup 2“ znamená, že reakcia bola uskutočnená bez použitia anorganickej soli.
Stĺpec
A B C D E F
Vstup (I) (D; L 40:60) ίβ) CHjCN/ h2o/ 1 K kci (D Subti* lisín (•g) (»oq) Čas (inúty) (IA) %ee (IA) %výťažok
1 67 1000/ 100 180 99.4 58
600/ (3.7) (pevná
214 látka):
2 1 15/ 01.6 120 98 90
9.5/ (3.2) (pevná
0 látka)3
Tabuľka 3
Reakcie, pri ktorých bol použitý dimetylsulfoxid, boli uskutočňované za rôznych podmienok, ktoré sa líšili v použití rôzneho času, podielu subtilisínu a množstva zlúčeniny so vzorcom (I).
Stĺpec
A B C D E F
Vstup (I) ch3cn/ Subti- Č.. (IA) (IA)
(O; L 82°/ lisín· (inú-
40:60) 1 M KC1 (°g) ty) ťaiok
(g) (1) (»eq)
1 2,0 32/ 1.5 30 95,4 70
18/ (1.5) (olej
6.4 v DMSO)1
2 7,8 125/ 12 30 94 88
100/ (3.0) (olej
25 v DMSO)1
3 25 400/ 19 40 88 70
200/ (1.5) (olej
81 v DMSO)1
4 100 1600/ 75 60 88 90
900/ (1.5) (olej
320 v DMSO)1
5 2,8 10/ 4,4 65 86 50
»/ (3.0) (pevná
2 látka) 2
6 2.0 42/ 1.5 120 80 70
26/ (1.5) (olej
6.4 v DMSO)1
Poznámky:
DMSO je prítomný v zlúčenine so vzorcom (IA), veľmi ťažko odstrániteľný
Odstránenie DMSO odparovaním pri teplote 90 °C a tlaku 1064 Pa, rozpustenie v etylacetáte a premytie vodou (spolu trikrát)
Zlúčenina so vzorcom (IA) sa ľahko oddelí ako pevná látka.
Pomocou týchto testovacích pokusov bolo preukázané efektívne a účinné rozštiepenie východiskovej látky so súčasným ľahkým oddeľovaním zlúčeniny so vzorcom (IÁ) za súčasného vysokého výťažku a vysokého enantiomémeho prebytku, ak sa použije acetonitril pri uskutočňovaní tohto postupu.
Schéma 2
Táto schéma 2 je pokračovaním schémy 1, pričom podľa tejto schémy sa navrhuje postup prípravy zlúčeniny Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe (3)-NH2, zlúčeniny so vzorcom (II).
Podľa tejto reakčnej schémy 2 sa v stupni A zlúčenina so vzorcom (3) adujc na zlúčeninu so vzorcom (IA), pričom sa získa zlúčenina so vzorcom (4). Táto zlúčenina so vzorcom (3) môže byť adovaná s použitím azidovej metódy, ako je napríklad metóda, pri ktorej sa zlúčenina so vzorcom (IA) rozpustí vo vhodnom bezvodom organickom rozpúšťadle ako je napríklad bezvodý dimetylformamid alebo bezvodý metylénchlorid, a s použitím inertnej atmosféry, ako je napríklad dusík. Do tohto roztoku sa potom pridá difenylfosforylazid, 1 až 4 ekvivalenty vhodnej bázickej látky, ako je napríklad diizopropyletylamín a prinajmenšom jeden ekvivalent chránenej aminokyseliny, zlúčenina so vzorcom (3), rozpustená vo vhodnom bezvodom organickom rozpúšťadle, ako je napríklad bezvodý dimetylformamid alebo bezvodý metylénchlorid. Táto reakčná zmes sa potom ponechá za súčasného premiešavania počas asi 1 až 15 hodín. Takto získaný adičný produkt, zlúčenina so vzorcom (4), sa potom oddelí a vyčistí s použitím bežne známych a používaných metód podľa doterajšieho stavu tech niky, ako sú napríklad extrakčné metódy, zrážanie, kryštalizácia a blesková chromatografia. Napríklad je možné použiť postup, pri ktorom sa odparí rozpúšťadlo, adičný produkt (4) sa vyzráža etyléterom, premyje sa a oddelí filtráciou.
Pri uskutočňovaní postupu podľa tejto reakčnej schémy 2 sa pri uskutočňovaní stupňov (B) a (D) kyanoskupina zlúčeniny so vzorcom (4) prevedie na amidínovú skupinu zlúčeniny so vzorcom (II). Táto konverzia sa uskutočňuje aminolýzou zodpovedajúceho metyltioimidátu, zlúčeniny so vzorcom (5), ktorá vznikne reakciou kyanoskupiny zlúčeniny so vzorcom (4) sa sírovodíkom, pričom potom nasleduje postup podľa patentu NDR č. 155 954 (publikovaný 21. 1982, autori Wagner a kol., opätovne podrobený prieskumu 9. novembra 1988), ktorý je tu uvádzaný ako odkazový materiál.
Tento postup je možné napríklad podľa tejto schémy 2, stupeň (B) uskutočniť tak, že sa zlúčenina so vzorcom (4) rozpustí v organickom rozpúšťadle, ako je napríklad dimetylsulfoxid. Potom sa pridá organická bázická zlúčenina, ako je napríklad pyridín, trietylamín, diízopropyletylamín, 2,6-lutidín, kolidín. Do tohto roztoku sá potom zavedie prúd sírovodíka, čo sa uskutočňuje pri teplote miestnosti tak dlho, pokým sa nespotrebuje zlúčenina so vzorcom (4). Táto reakčná zmes môže byť udržovaná pri teplote miestnosti počas ďalších 1 až 18 hodín. Takto získaná zlúčenina so vzorcom (5) sa potom oddelí bežne známymi metódami podľa doterajšieho stavu techniky, ako je napríklad vyzrážanie a filtrácia. Takto získaná zrazenina sa potom premyje organickým rozpúšťadlom, ako je napríklad dietyléter, a potom sa usuší pri použití vákua.
Schéma 2
Postup syntézy Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2, stupeň A:
stupeň C: metylácia
zlúčenina (6) stupeň D:
Pri uskutočňovaní postupu podľa tejto schémy 2, stupeň C, sa pyridilová skupina zlúčenina (5) metylujc za vzniku zlúčeniny so vzorcom (6). Podľa zvyčajné uskutočnenia sa na uskutočnenie tejto metylácie použijú metylhalogenidy, ako je napríklad metyljodid, metylbromid alebo metylchlorid. Rovnako je možné použiť metylfluorosulfonát, dimetylsulfát, metylester kyseliny toluén-p-sulfónovej a ďalšie metylačné činidlá, ktoré sú uvádzané napríklad v publikácii Zoltewicz and Deady, Adv. Heterocycl. Chem. 22, 71 - 121 (1978), a v publikácii Duífin, Adv. Heterocycl. Chem. 3, 1 - 56 (1964), ktoré tu slúžia ako odkazové materiály. Vo výhodnom uskutočnení sa použije prebytok metylhalogenidu a podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia sa použije prebytok metyljodidu. Táto reakcia sa uskutočňuje v rozpúšťadle, ako sú napríklad alkoholy, ako napríklad metanol a etanol, acetón, chloroform, acetonitril, nitrobenzén a dimetylformamid. Vo výhodnom uskutočnení sa táto reakcia uskutočňuje v zmesi acetónu a dimetylsulfoxidu a za súčasného miešania pri teplote miestnosti počas jednej až 24 hodín. Takto získaná zlúčenina so vzorcom (6) sa potom oddelí bežne známymi metódami z doterajšieho stavu techniky v tomto odbore, ako napríklad v prípade použitia prebytku metyljodidu sa táto látka odparí a zlúčenina so vzorcom (6) sa vyzráža etyléterom, oddelí sa dekantáciou, premyje a usuší.
Pri uskutočňovanom stupni (D) podľa tejto reakčnej schémy 2 sa metyltioimidátový derivát zlúčeniny so vzorcom (6) ďalej prevedie na zlúčeninu so vzorcom (II) so zodpovedajúcou amidovou skupinou. Vo výhodnom uskutočnení sa zlúčenina so vzorcom (6) rozpustí v organickom rozpúšťadle, ako je napríklad metanol, pričom podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia sa tento postup uskutoční za prítomnosti kyseliny octovej. Do tohto roztoku sa potom pridá acetát amónny. Vo výhodnom uskutočnení sa táto reakčná zmes zahrieva na teplotu v rozmedzí od 40 °C do 65 °C, podľa ešte výhodnejšieho uskutočnenia na teplotu v rozmedzí od 50 °C do 60 °C, a pri tejto teplote sa potom udržuje v rozmedzí od 2 do 3 hodín. Takto získaná zlúčenina so vzorcom (II) sa potom oddelí bežnými metódami všeobecne známymi z doterajšieho stavu techniky v tomto odbore, pričom môže byť izolovaná vo forme svojej farmaceutický prijateľnej soli. Napríklad je možné uviesť postup, pri ktorom sa odparia použité rozpúšťadlá, zvyšok sa rozpustí v acetonitrile a prídavkom kyseliny trifluóroctovej sa
SK 281432 Β6 pripraví zrazenina, ktorá sa potom odfiltruje a vysuší vo vákuu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
V nasledujúcich príkladoch je ilustrovaný postup podľa predmetného vynálezu, pričom sú tu bližšie objasnené typické syntetické postupy opísané v uvedených schémach 1 a 2. Tieto príklady sú však iba ilustratívnymi a v žiadnom smere nijak neobmedzujú rozsah tohto vynálezu.
Pre odborníkov pracujúcich v danom odbore je evidentne zjavná výhoda postupov podľa týchto reakčných schém spočívajúca v tom, že poradie uskutočňovania jednotlivých stupňov je iba prípadné.
Použité východiskové látky sú bežne dostupné na trhu alebo je možné tieto látky ľahko pripraviť pomocou bežne známych metód v tomto odbore.
V ďalej uvádzaných príkladoch sú použité niektoré symboly, ktoré majú nasledujúci význam: „g“ znamená gramy, „mol“ znamená moly, „mmol“ znamená milimóly, „1“ znamená litre, „ml“ znamená mililitre, ,,λΓ znamená mikrolitre, „mp“ znamená teplotu tavenia, „°C“ znamená stupne Celzia, „TLC“ znamená chromatografiu v tenkej vrstve, „M“ znamená molaritu a „Rf ‘ znamená retenčný faktor.
Príklad 1 (D,L)-n-acetyl-4-kyanofenylalanín Ac-(D,L)-Phe(4-CN)-OH.
Stupeň A:
Dietylester kyseliny 4-kyanobenzylacetamidomalónovej
Podľa tohto postupu bol suspendovaný dietylacetamidomalonát (použitých 44 gramov, čo je 0,203 mólu), alfa-bróm-p-toluonitrii (použitých 40 gramov, čo je 0,204 mólu) a jodid draselný (10 gramov) v dioxáne (400 mililitrov), na čo bol pridaný roztok etoxidu sodného (4,6 gramu sodíka v 200 mililitroch suchého etanolu). Táto reakčná zmes bola zahrievaná pri teplote varu pod spätným chladičom počas 3 až 4 hodín a potom bola ponechaná stáť cez noc. Táto zmes bola potom naliata na ľad (2 litre), vytvorená zrazenina bola sfiltrovaná, premytá vodou a produkt bol usušený v lyofilizére. Rekryštalizáciou z metanolu bol získaný dietylester kyseliny 4-kyanobenzylacetamidomalónovej vo forme bielych kryštálikov. Výťažok: 61 gramov (91 %).
Stupeň B:
Etylester N-(D,L)-acetyl-4-kyanofenylalamnu, Ac-(D,L)-Phe(4-CN)-Oet.
COOEt
Podľa tohto uskutočnenia bol suspendovaný 4-kyanobenzylacetamidomalonát (použitých 41,97 gramov, čo je 0,126 mólu) v etanole (0,6 litra). Potom bol pridaný hydroxid sodný (6M) v nasledujúcich intervaloch: 10 mililitrov (60 mmólov) v okamihu 0, 10 mililitrov (60 mólov) po 30 minútach, 5 mililitrov (30 mmólov) po 3 hodinách. Táto reakčná zmes bola premiešavaná za súčasného pridávania hydroxidu sodného (GM) pokiaľ nevymizla východisková látka (metóda TLC, etylacetát ako elučné činidlo, Rf = = 0,63). Tento roztok bol potom zriedený vodou (100 mililitrov) a hodnota pH bola upravená na 3 pomocou prídavku koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Potom bol odparený etanol a takto získaný polopevný produkt bol sušený v lyofilizéri cez noc, pričom týmto spôsobom bol pripravený N-acetyl-4-kyanobenzylmonoetylacetamidomalo-nát.
V ďalšom postupe bol takto pripravený N-acetyl-4-kyanobcnzylmonoctylacetamidomalonát v suchom dioxáne (0,5 litra) a táto reakčná zmes bola potom zahrievaná pri teplote varu pod spätným chladičom počas 2,5 až 3 hodín. Použitý dioxán bol odparený, získaný pevný podiel bol potom extrahovaný nasýteným vodným roztokom nasýteného hydrogenuhličitanu sodného (trikrát), vodou, kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M) a soľankou. Takto získaný etylacetátový roztok bol vysušený s použitím síranu horečnatého, sfiltrovaný a odparený. Rekryštalyzáciou takto pripraveného produktu zo zmesi etylacetátu a hexánov bol pripravený etylester N-(L-D)-acetyl-4-kyanofenylalanínu. Výťažok: 28,95 gramu (88 %).
Príklad 2
Enzymatické štiepenie Ac-(D,L)-Phe(4-CN)-Oet (6 : 4, D : L) a postup prípravy (L)-N-acetyl-4-kyanofenylalanínu, Ac-(L)-Phe(4-CN)-OH.
COOH
Podľa tohto uskutočnenia bol pridaný roztok chloridu sodného (IM, 242 mililitrov) a voda (600 mililitrov) do roztoku Ac-(D,L)-Phe(4-CN)-Oet (6 : 4, D : L, použitých 67 gramov) v acetonitrile (1 liter). Hodnota pH tohto roztoku bola potom upravená z hodnoty 7,3 na hodnotu 6,9, na čo bol pridaný roztok subtilisínu Carlsberg (50 miligramov) vo vodnom roztoku chloridu draselného (8 mililitrov, 0,1 M roztok). Hodnota pH takto pripraveného roztoku bola potom udržovaná titrovaním hydroxidom sodným (1 M roztok). Po jednej hodine bol pridaný roztok subtilisínu (50 miligramov) vo vodnom roztoku chloridu draselného (8 mililitrov, 0,1 M roztok), pričom hodnota pH tohto roztoku bola udržovaná titráciou hydroxidom sodným (1 M roztok). Po 2,5-hodine bol pridaný roztok hydrogenuhličitanu sodného (88 mililitrov) a tento podiel bol potom extrahovaný etylacetátom (štyri podiely po 800 mililitroch). Etylacetátový roztok bol usušený s použitím síranu horečnatého, na čo bola táto zmes sfiltrovaná. Skoncentrovaním tohto filtrátu bol získaný Ac-(D)-Phe(4-CN)-Oet vo forme pevnej látky (38 gramov, výťažok 95 %, 90 % ee). Vodná vrstva bola okyslená koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (56 mililitrov) na pH 1. Vodná vrstva bola extrahovaná etylacetátom (štyri podiely po 800 mililitroch). Organická vrstva bola usušená s použitím síranu horečnatého a takto získaná reakčná zmes bola sfiltrovaná. Skoncentrovaním takto získaného filtrátu bol získaný požadovaný AcSK 281432 B6
-(L)-Phe(4-CN)-0H vo forme pevnej látky. Výťažok: 21 gramov (88 %), teplota topenia: 124 - 126 °C, 99,4 % ee.
Príklad 3
N-acetyl-(L)-p-amidinofenylalan ín, Ac-(L)-pAph-(L)-Chg-(L)-PalMe(3)-NH2.
N-t-butyloxykarbony l-(L)-p-(3 -pyridylj-alanínamid, Boe-(L)-Pal-NH2.
Podľa tohto uskutočnenia bol Boc-(L)-Pal-OH (v množstve 1,34 gramu, čo je 5 mmólov) suspendovaný v metylénchloride (50 mililitrov), na čo bol tento roztok ochladený na teplotu -15 °C. K tomuto roztoku bol pridaný diizopropyletylamín (963 λΐ, čo je 5,5 mmólu) a izobutylchlórmravčan (715 λΐ, čo je 5,5 mmólu). Táto reakčná zmes bola premiešavaná počas 15 minút pri teplote -15 °C. Týmto roztokom bol potom intenzívne prebublávaný prúd bezvodého amoniaku (sušený pevným hydroxidom sodným) počas asi 3 minút. Táto reakčná zmes bola potom premiešavaná počas 10 minút pri teplote -15 °C a potom počas 20 minút pri teplote miestnosti. Použitý metylénchlorid bol odparený, na čo bol pridaný etylacetát (70 mililitrov) a tento podiel bol premytý nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Produkt bol usušený pomocou síranu horečnatého a odparený. Kryštalizáciou zo zmesi etylacetátu a hexánu bol pripravený požadovaný Boc-(L)-Pal-NH2. Výťažok 0,98 gramu (75 %).
Stupeň B:
Hydrochloridová soľ (Lj-β -(3-pyridyl)-alanínamidu, H-(L)-Pal-NH2.2 HC1.
2HCI
Podľa tohto postupu bol Boc-(L)-Pal-NH2 (použité 0,98 gramu) suspendovaný v metylénchloride (15 mililitrov) za súčasného mierneho zahrievania, na čo bol pridaný roztok kyseliny chlorovodíkovej (4 M roztok, 10 mililitrov) v dioxáne. Po 30 minútach bol použitý metylénchlorid a dioxán odparený. Pevný zvyšok bol rozpustený v metanole, pridaním éteru bol vyzrážaný pevný podiel, ktorý bol sfiltrovaný a týmto spôsobom bol získaný požadovaný H-(L)-Pal-NH2.2 HC1.
Výťažok: 0,86 gramu (98 %).
Stupeň C:
N-t-butyloxykarbonyl-(L)-cyklohexylglycín-(L)-p-(3-pyridyl)-alanínamid, Boc-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2.
Pri uskutočňovaní tohto postupu bol použitý H-(L)-Pal-NHj . 2 HC1, (v množstve 432 miligramov, čo je 1,82 mmólu), Boc-(L)-Chg-OH (použitých 609 miligramov, čo je 2,37 mmólu alebo 1,3 ekvivalentu), dicyklohexylkarbodiimid (použitých 494 miligramov, čo je 2,4 mmólu), hydroxybenzotriazol (použitých 324 miligramov, čo je 2,4 mmólu) a diizopropyletylamín (4 mmóly) v dimetylformamide (15 mililitrov). Použitý dimetylformamid bol potom odparený, do reakčnej zmesi bol pridaný etylacetát a táto zmes bola uchovávaná pri teplote miestnosti počas 1 hodiny. Takto vytvorená diizopropylkarbodiimidcyklohexylmočovina bola sfiltrovaná, roztok bol extrahovaný nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (trikrát), na čo bol usušený síranom horečnatým a odparený. K tomuto podielu boli pridané hexány, na čo bol kryštalizáciou získaný požadovaný produkt, Boc-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2. Výťažok: 598 miligramov (81 %).
Stupeň D:
Hydrochloridová soľ (L)-cyklohexylglycín-(L)-p-(3-pyridyl)-alanínamidu, H-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2.2 Hcl.
Podľa tohto postupu bol Boc-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2 (v množstve 1,27 gramu, čo je 3,12 mmólu) suspendovaný v metylénchloride (50 mililitrov), na čo bola pridaná kyselina chlorovodíková (10 mililitrov, 4 M roztok v dioxáne). Po 30 minútach bol odparený dioxán a metylénchlorid, získaný pevný podiel bol rozpustený v metanole, pričom požadovaný produkt bol vyzrážaný prídavkom éteru (200 mililitrov), ktorý bol potom odfiltrovaný, pričom týmto spôsobom bol získaný požadovaný H-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2. 2 HC1. Výťažok: 1,12 gramu (95 %).
SK 281432 Β6
Stupeň E:
N-acetyl-p-kyanofenylalanín-(L) cyklohexylglycín-(L)-P-(3-pyridyl)-alanínamid, Ac-(L)-Phe(4-CN)-(L)-Chg-(L)-
Pri uskutočňovaní tohto postupu bol použitý H-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2.2 HCI (v množstve 1,13 gramu, čo sú 3 mmóly), Ac-(L)-Phe(4-CN)-OH (použitých 0,84 gramu, čo je 3,6 mmólu), diizopropyletylamín (v množstve 10 mmólov) a difenylfosforylazid (803 λΐ, čo je 3,6 mmólu) a dimetylformamid (30 mililitrov), pričom táto reakčná zmes bola premiešavaná cez noc. Použitý dimetylformamid bol odparený, pričom prídavkom éteru bol vyzrážaný pevný podiel, ktorý bol odfiltrovaný a premytý éterom, pričom týmto spôsobom bol pripravený požadovaný Ac-(L)-Phe(4-CN)-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2. Výťažok; 1,282 gramu (82 %).
Stupeň F:
N-acetyl-(L)-p-tioamidfenylalanín-(L)-cyklohexylglycín-(L)-p-(3-pyridyl)-alanínamid, Ac-(L)-Phe(4-tioamid)-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2.
NHž
SCH3
Pri uskutočňovaní tohto postupu bol použitý Ac-(L)-Phe(4-tioamid)-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2 (v množstve 1,2 gramu), ktorý bol suspendovaný v dimetylsulfoxide (10 až 20 mililitrov) a acetóne (80 mililitrov). Potom bol pridaný metyljodid (14 mililitrov, čo je 50 ekvivalentov). Táto reakčná zmes bola potom udržovaná cez noc pri teplote miestnosti, na čo bol odparený acetón a prebytkový metyljodid. Takto získaný podiel bol potom podrobený vyzrážaniu prídavkom dietyléteru (0,5 až 1,1). Po niekoľkých hodinách, keď bol tento produkt uchovávaný pri teplote 4 °C, bol tento dietyléter oddekantovaný alebo sfiltrovaný a polopevný produkt na stenách bol omytý dietyléterom a dietylacetátom. Získaný produkt bol usušený vo vákuu a týmto spôsobom bol získaný požadovaný produkt, Ac-(L)-Phe(4-metyltioamidát)-(L)-Chg-(L)-Pal(Me)-NH2 . 2 Hl. Výťažok: 1,31 gramu.
Stupeň H:
Trifluóracetátová soľ N-acetyl-(L)-p-acetamidofenylalanm-cyklohexylglycín-(L)-p-(3-metylpyridínium)-alanínamidu, Ac-(L)-pAphe-(L)-PalMe-NH2. TFA.
Podľa tohto postupu bol použitý Ac-(L)-Phe (4 CN)-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2 (v množstve 1,18 gramu, čo je 2,28 mmólu), ktorý bol rozpustený v dimetylsulfoxide (20 až 40 mililitrov), na čo bol pridaný pyridin (40 mililitrov) a trietylamín (14 mililitrov). Týmto roztokom bol potom prevádzaný vodík pri teplote okolia a počas 30 minút. Takto získaný roztok bol potom uchovávaný pri teplote miestnosti cez noc, na čo bol odparený na malý objem a produkt bol vyzrážaný prídavkom dietyléteru. Tento produkt bol uchovávaný počas niekoľkých hodín v mrazničke, na čo bol sfiltrovaný, premytý dietyléterom a usušený vo vákuu, pričom týmto spôsobom bol získaný požadovaný Ac-(L)-Phe-(4-tioamid)-(L)-Chg-(L)-Pal-NH2 vo forme žltej pevnej látky. Výťažok: 1,26 gramu.
Stupeň G:
Hydrojodidová soľ N-acetyl-p-metyltioamidát-fenylalanín-cyklohexylglycín-(L)-P-(3-metylpyridinium)-alanínu, Ac-(L)-Phe(4-metyltioamidát)-(L)-Chg-(L)-Pal(Me)-NH2.2 Hl.
Pri uskutočňovaní tohto postupu bol použitý Ac-(L)-Phe(4-metyltioamidát)-(L)-Chg-(L) Pal (Me)-NH2.2 HCI (v množstve 1,31 gramu), ktorý bol rozpustený v metanole (50 mililitrov) a v kyseline octovej (0,5 mililitrov). Potom bol pridaný acetát amónny (v množstve 0,8 gramu). Táto reakčná zmes bola zahrievaná pri teplote 55 °C počas 3 hodín, na čo bola odparená, získaný podiel bol rozpustený v zmesi acetonitrilu a vody (0,1 % kyseliny trifluóroctovej) v pomere 1 : 1, na čo bol tento podiel sfiltrovaný a lyofilizovaný, čím bol získaný požadovaný produkt Ac-(L)-pAphe-(L)-Chg-(L)-PalMe-NH2. TFA. Výťažok: 1,22 gramu.
Predmetný vynález sa týka spôsobu prípravy medziproduktu, N-acetyl-L-fenylalanínu, čo je zlúčenina so vzorcom (IA), ktorý je vhodný na prípravu Ac-(L) pAph-Chg-PalMe(3)-NII2 , to znamená zlúčeniny so vzorcom (II). Táto naposledy uvedená zlúčenina je vhodná na ínhibovanie proteínov na zrážanie krvi, a konkrétne na inhibovanie enzýmov na zrážanie krvi, faktora „Xa“, čo je podrobnejšie uvádzané v patentovej prihláške Spojených štátov amerických č. 08/ 428, 404, podanej 25. apríla 1995, ktorá je tu uvádzaná ako odkazový materiál.
V texte predmetného vynálezu je používaný termín „aktivita faktora Xa“, pričom týmto termínom sa myslí schopnosť faktora Xa samého osebe, alebo v spojení s podjednotkami známymi ako protrombinázový komplex, katalyzovať konverziu protrombínu na trombín. V prípadoch, keď sa v súvislosti s aktivitou faktora Xa používa termín „inhibovanie“ sa týmto termínom myslí tak priame, ako nepriame inhibovanie aktivity faktora Xa. Túto priamu inhibíciu aktivity faktora Xa je možné dosiahnuť napríklad viazaním peptidu na faktor Xa alebo protrombinázu, čím sa zabráni viazaniu protrombínu na aktívne miesto protrombinázového komplexu.
V opise predmetného vynálezu je v súvislosti s inhibovaním aktivity faktora Xa používaný termín „špecifický“ účinok, pričom týmto termínom sa myslí to, že táto zlúčenina inhibuje aktivitu faktora Xa, pričom by v podstate došlo k inhibovaniu aktivity ďalších špecifických proteáz (pri použití rovnakej koncentrácie tohto inhibítora). Medzi tieto ďalšie špecifické proteázy je možné zaradiť napríklad proteázy podieľajúce sa na koagulačnej kaskáde, ako sú napríklad trombín, plazmín, trypsín a elastáza.
Aj keď je v určitých prípadoch choroby tvorba krvných zrazenín vyskytujúcich sa v krvnom obehu sama osebe príčinou úmrtia, nie je vhodné dosiahnuť úplného inhibovania zrážacieho systému, pretože by mohla nastať hemoragia, ktorá je rovnako životu nebezpečná.
Proces zrážania krvi je komplexným procesom, ktorý zahŕňa množstvo postupne sa zosilujúceho radu enzýmových aktivačných reakcií, v ktorom sú plazmové zymogény postupne aktivované obmedzenou proteolýzou. Po stránke mechanickej bola kaskáda zrážania krvi rozdelená do dvoch systémov, „vnútorného“ a „vonkajšieho“. Tieto systémy sa spájajú pri aktivácii faktora X, pričom následné generovanie trombínu prebieha prostredníctvom „spoločného systému“.
Podľa súčasných znalostí v tomto odbore sa uvádza, že uvedený vnútorný systém má dôležitú úlohu pri udržovaní a zvyšovaní tvorby fibrínu, zatiaľ čo vonkajší systém je dôležitý v iniciačnej fáze zrážania krvi. Všeobecne je teraz akceptovaná skutočnosť, že zrážanie krvi je fyzicky iniciované tvorbou komplexu tkanivového faktora a faktora Vila. Po svojom vytvorení tento komplex rýchlo iniciuje koaguláciu aktiváciou faktora IX a X. Novovytvorený faktor Xa potom vytvára komplex s faktorom Vla v pomere jedna k jednej a s fosfolipidmi. Tento takzvaný protrombinázový komplex je príčinou uskutočnenia rozpustného fibrinogénu na nerozpustný fibrín. S postupujúcim časom je aktivita tohto komplexu faktora Vila a tkanivového faktora (vonkajší systém) postupne potlačená proteínom Kunitzovho typu predstavujúcim inhibitor proteázy, TFPI, ktorý po skomplexovaní s faktorom Xa môže priamo inhibovať proteolytickú aktivitu komplexu faktora Vila a tkanivového faktora. Nato, aby bol udržaný koagulačný proces v prítomnosti inhibovaného vonkajšieho systému je potrebné vyprodukovať ďalšie množstvo faktora Xa prostredníctvom trombínom sprostredkovanej aktivity vo vnútornom systéme. Z uvedeného je zrejmé, že trombín má dvojakú „autokatalytickú“ úlohu, tak pri sprostredkovaní svojej vlastnej výroby ako pri konverzii fibrinogénu na fibrín.
Táto uvedená autokatalytická povaha generovania trombínu predstavuje dôležitý bezpečnostný prvok proti nekontrolovateľnému krvácaniu. Tento systém zaručuje, žc sotva sa dosiahne prahová úroveň protrombinázy, prebehne úplné vyzrážanie krvi, čo spôsobí napríklad koniec hemoragie. Vzhľadom na uvedené je zrejmé, že je nanajvýš želané vyvinúť činidlá, ktoré inhibujú koaguláciu, pričom by bol priamo inhibovaný trombín.
Zlúčenina Ac-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2 ktorá je peptidovým analógom, synteticky pripravená postupom podľa predmetného vynálezu predstavuje vhodný inhibítor aktivity faktora Xa, pričom súčasne v podstate neinhibuje aktivitu ostatných proteáz zúčastňujúcich sa na procese zrážania krvi.

Claims (30)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Spôsob prípravy N-acetyl-(L)-4-kyanofenylalanínu, zlúčeniny so vzorcom (IA):
    Zlúčenina (IA) vyznačujúci sa tým, že zahŕňa nasledujúce stupne:
    množstva zlúčeniny
    Zlúčenina (I) dostatočného množstva vodného roztoku, dostatočného množstva acetonitrilu a dostatočného množstva subtilisínu na zreagovanie podstatného množstva zlúčeniny so vzorcom (I) za vzniku reakčného média, a (b) úpravu reakčného média na vhodnú hodnotu pH pri pridaní subtilisínu a udržovanie hodnoty pH pri prebiehajúcej reakcii na získanie zlúčeniny so vzorcom (IA).
  2. 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo acetonitrilu predstavuje asi 5 až asi 95 percent objemových reakčného média.
  3. 3. Spôsob podľa nároku 1, v y z n a č u j ú c i sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo acetonitrilu predstavuje asi 50 až asi 60 percent objemových vodného roztoku.
  4. 4. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že vodný roztok obsahuje dostatočné množstvo anorganickej soli.
  5. 5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo anorganickej soli predstavuje asi 10 až asi 15 percent objemových vodného 1 molámeho roztoku anorganickej soli.
  6. 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že anorganickou soľou je chlorid draselný.
  7. 7. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje pridávaním dostatočného množstva bázickej látky.
  8. 8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa t ý m , že uvedenou bázickou látkou je hydroxid sodný.
  9. 9. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje pridávaním dostatočného množstva pufra.
    (c) adovanie zlúčeniny so vzorcom (IA) na zlúčeninu so vzorcom (3):
  10. 10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa t ý m , že týmto pufrom je roztok fosforečnanu.
  11. 11. Spôsob podľa nároku 1, v y z n a č u j ú c i sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje na hodnote v rozmedzí od asi 5 do asi 9.
  12. 12. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje na hodnote v rozmedzí od asi 6,5 do asi 7,5.
  13. 13. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že ďalej zahŕňa miešanie reakčného média pri prebiehajúcej reakcii medzi dostatočným množstvom subtilisínu a podstatným množstvom zlúčeniny so vzorcom (I) v rozmedzí od asi 15 minút do asi 4 hodín.
  14. 14. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo subtilisínu predstavuje množstvo v rozmedzí od asi 0,5 do asi 10 hmotnostných miliekvivalentov množstva zlúčeniny so vzorcom (I)·
  15. 15. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že ďalej zahŕňa ďalší stupeň oddeľovania zlúčeniny so vzorcom (IA) z reakčného média.
  16. 16. Spôsob prípravy zlúčeniny Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH2 zlúčeniny so vzorcom (II):
    Zlúčenina (II) alebo farmaceutický prijateľných solí odvodených od tejto zlúčeniny, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa nasledujúce stupne:
    (a) kombinovanie dostatočného množstva zlúčeniny so vzorcom (I):
    množstva acetonitrilu a dostatočného množstva subtilisínu na zreagovanie s podstatným množstvom zlúčeniny so vzorcom (I) za vzniku reakčného média, a (b) úpravu reakčného média na vhodnú hodnotu pH pri pridaní subtilisínu a udržovanie vhodnej hodnoty pH pri za vzniku zlúčeniny so vzorcom (4):
    zlúčenina (4) (d) prevedenie kyanoskupiny v zlúčenine so vzorcom (4) na amidínovú skupinu a metylácia dusíka pyridylovej skupiny za vzniku zlúčeniny so vzorcom (II).
  17. 17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo acetonitrilu predstavuje asi 5 až asi 95 percent objemových vodného roztoku.
  18. 18. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo acetonitrilu predstavuje asi 50 až asi 60 percent objemových vodného roztoku.
  19. 19. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že vodný roztok obsahuje dostatočné množstvo anorganickej soli.
  20. 20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo anorganickej soli predstavuje asi 10 až 15 percent objemových vodného 1 molárneho roztoku anorganickej soli.
  21. 21. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa t ý m , že anorganickou soľou je chlorid draselný.
  22. 22. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje pridávaním dostatočného množstva bázickej látky.
  23. 23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa t ý m , že uvedenou bázickou látkou je hydroxid sodný.
  24. 24. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje pridávaním dostatočného množstva pufra.
  25. 25. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa t ý m , že týmto pufrom je roztok fosforečnanu.
  26. 26. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje na hodnote v rozmedzí od asi 5 do asi 9.
  27. 27. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že sa upraví vhodná hodnota pH reakčného média a táto hodnota sa udržuje na hodnote v rozmedzí od asi 6,5 do asi 7,5.
  28. 28. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že ďalej zahŕňa miešanie reakčného média pri
    SK 281432 Β6 prebiehajúcej reakcii medzi dostatočným množstvom subtilisínu a podstatným množstvom zlúčeniny so vzorcom (I) v rozmedzí od asi 15 minút do asi 4 hodín.
  29. 29. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že uvedené dostatočné množstvo subtilisínu predstavuje množstvo v rozmedzí od asi 0,5 do asi 10 hmotnostných miliekvivalentov množstva zlúčeniny so vzorcom (I).
  30. 30. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa t ý m , že ďalej zahŕňa ďalší stupeň oddeľovania zlúčeniny so vzorcom (IA) z reakčného média.
SK855-98A 1995-12-20 1996-11-25 Spôsob prípravy n-acetyl-(l)-4-kyanofenylalanínu ac-(l)-phe(4- -cn)-oh a n-acetyl-(l)-p-amidinofenylalanín-cyklohexylglycín- -beta-(3-n-metylpyridínium)-alanínu ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2 SK281432B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US57556995A 1995-12-20 1995-12-20
PCT/US1996/019005 WO1997022712A1 (en) 1995-12-20 1996-11-25 NOVEL PROCESS FOR PREPARING N-ACETYL(L)-4-CYANOPHENYLALANINE Ac-(L)-Phe(4-CN)-OH AND N-ACETYL-(L)-p-AMIDINOPHENYLALANINE-CYCLOHEXYLGLYCINE-β-(3-N-METHYLPYRIDINIUM)-ALANINE Ac-(L)-pAph-Chg-PalMe(3)-NH¿2?

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK85598A3 SK85598A3 (en) 1998-12-02
SK281432B6 true SK281432B6 (sk) 2001-03-12

Family

ID=24300839

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK855-98A SK281432B6 (sk) 1995-12-20 1996-11-25 Spôsob prípravy n-acetyl-(l)-4-kyanofenylalanínu ac-(l)-phe(4- -cn)-oh a n-acetyl-(l)-p-amidinofenylalanín-cyklohexylglycín- -beta-(3-n-metylpyridínium)-alanínu ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2

Country Status (27)

Country Link
EP (1) EP0868526B1 (sk)
JP (1) JP4044614B2 (sk)
KR (1) KR100438879B1 (sk)
CN (1) CN1087349C (sk)
AR (1) AR005119A1 (sk)
AT (1) ATE222293T1 (sk)
AU (1) AU717995B2 (sk)
BR (1) BR9612059A (sk)
CA (1) CA2241210C (sk)
CZ (1) CZ295362B6 (sk)
DE (1) DE69623038T2 (sk)
DK (1) DK0868526T3 (sk)
EE (1) EE03698B1 (sk)
ES (1) ES2179957T3 (sk)
HK (1) HK1017384A1 (sk)
IL (1) IL125003A (sk)
MX (1) MX9804997A (sk)
NO (1) NO319678B1 (sk)
NZ (1) NZ324159A (sk)
PL (1) PL185541B1 (sk)
PT (1) PT868526E (sk)
RU (1) RU2170764C2 (sk)
SK (1) SK281432B6 (sk)
TR (1) TR199801107T2 (sk)
UA (1) UA48993C2 (sk)
WO (1) WO1997022712A1 (sk)
ZA (1) ZA9610600B (sk)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR9916732A (pt) * 1999-01-02 2001-09-25 Aventis Pharma Gmbh Derivados de ácido malÈnico, processo para a sua preparação, seu uso e composições farmacêuticas contendo-os (inibição da atividade do fator xa)
EP1016663A1 (en) * 1999-01-02 2000-07-05 Aventis Pharma Deutschland GmbH Novel malonic acid derivatives, processes for their preparation, their use and pharmaceutical compositions containing them (inhibition of factor Xa activity)
RU2250212C2 (ru) * 2000-01-28 2005-04-20 Авентис Фарма Дойчланд Гмбх Способ получения ацетиламидиниофенилаланилциклогексилглицилпиридиниоаланинамидов
EP1127884A1 (en) * 2000-02-26 2001-08-29 Aventis Pharma Deutschland GmbH Novel malonic acid derivatives, processes for their preparation, their use as inhibitor of factor XA activity and pharmaceutical compositions containing them
PT1569912E (pt) 2002-12-03 2015-09-15 Pharmacyclics Llc Derivados 2-(2-hidroxibifenil-3-il)-1h-benzoimidazole-5- carboxamidina como inibidores do fator viia
GB0306267D0 (en) * 2003-03-19 2003-04-23 Ineos Fluor Ltd Process
JP2008260755A (ja) * 2007-03-20 2008-10-30 Sumitomo Chemical Co Ltd Ｌ−ビフェニルアラニン化合物の塩の回収方法、およびそれを用いたビフェニルアラニンエステル化合物の回収方法
CN106946724B (zh) * 2017-04-07 2019-03-22 苏州汉德创宏生化科技有限公司 单胺基抑制剂类中间体2-乙酰氨基-2-苄基丙二酸单乙酯的合成方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4981799A (en) * 1987-08-21 1991-01-01 Takeda Chemical Industries, Ltd. Acylamino acid racemase, production and use thereof
DE4115468A1 (de) * 1991-05-11 1992-11-12 Behringwerke Ag Amidinophenylalaninderivate, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel als antikoagulantien
DE69213546T2 (de) * 1991-05-13 1997-02-27 Fujisawa Pharmaceutical Co Neue Peptid-Verbindungen und Verfahren zur Herstellung davon
ATE262536T1 (de) * 1994-04-26 2004-04-15 Aventis Pharma Inc Faktor xa inhibitoren

Also Published As

Publication number Publication date
RU2170764C2 (ru) 2001-07-20
ZA9610600B (en) 1997-06-20
CZ195698A3 (cs) 1999-01-13
DE69623038T2 (de) 2002-12-12
ES2179957T3 (es) 2003-02-01
EP0868526B1 (en) 2002-08-14
CN1087349C (zh) 2002-07-10
ATE222293T1 (de) 2002-08-15
IL125003A (en) 2001-12-23
DE69623038D1 (de) 2002-09-19
HK1017384A1 (en) 1999-11-19
DK0868526T3 (da) 2002-12-02
NO982868L (no) 1998-08-19
NO982868D0 (no) 1998-06-19
UA48993C2 (uk) 2002-09-16
TR199801107T2 (xx) 1998-10-21
CA2241210C (en) 2002-05-14
NO319678B1 (no) 2005-09-05
NZ324159A (en) 1999-07-29
JP2000501618A (ja) 2000-02-15
PL185541B1 (pl) 2003-05-30
WO1997022712A1 (en) 1997-06-26
JP4044614B2 (ja) 2008-02-06
PL327314A1 (en) 1998-12-07
EE03698B1 (et) 2002-04-15
EP0868526A1 (en) 1998-10-07
BR9612059A (pt) 1999-02-23
IL125003A0 (en) 1999-01-26
AU1125197A (en) 1997-07-14
CA2241210A1 (en) 1997-06-26
CN1205742A (zh) 1999-01-20
CZ295362B6 (cs) 2005-07-13
KR20000064486A (ko) 2000-11-06
KR100438879B1 (ko) 2004-07-16
SK85598A3 (en) 1998-12-02
MX9804997A (es) 1998-09-30
AU717995B2 (en) 2000-04-06
PT868526E (pt) 2002-12-31
EE9800188A (et) 1998-12-15
AR005119A1 (es) 1999-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2945680B2 (ja) ペプチド誘導体およびその用途
US4316889A (en) Novel peptidyl-arginine aldehyde derivatives and process for the preparation thereof
RU2088591C1 (ru) Производные амидинофенилаланина, способ их получения и производные амидинофенилаланина, обладающие антикоагулирующей активностью
US5932733A (en) 3-amino-2-oxo-1-piperidineacetic derivatives containing an arginine mimic as enzyme inhibitors
KR100339456B1 (ko) 신규펩티드유도체
US6034067A (en) Serine protease inhibitors
EP0699074A1 (en) Thrombin inhibitors
US6410684B1 (en) Serine protease inhibitors
AU4111700A (en) Low-molecular inhibitors of complement proteases
CS106492A3 (en) Derivatives of amidinophenylalanine, process for preparing thereof, theiruse and compositions comprising said derivatives
SK281432B6 (sk) Spôsob prípravy n-acetyl-(l)-4-kyanofenylalanínu ac-(l)-phe(4- -cn)-oh a n-acetyl-(l)-p-amidinofenylalanín-cyklohexylglycín- -beta-(3-n-metylpyridínium)-alanínu ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2
EP0313969B1 (en) Tripeptide derivatives and antiplasmin agents containing the same
EP0817795B1 (en) Novel 4-substituted-3-peptidyl-azetidin-2-one derivatives useful as cysteine proteinase inhibitor
US5686419A (en) Basic α-aminoalkylphosphonate derivatives
US5952307A (en) Basic α-aminoalkylphosphonate derivatives
EP1212300B1 (en) Azacycloalkanone serine protease inhibitors
EP0956293B1 (en) Thrombin inhibitors
US5766932A (en) Process for preparing N-acetyl(L)-4-cyanophenylalanine from a mixture of the corresponding D,L ethyl esters using subtilisin
TW389755B (en) Novel process for preparing n-acetyl (1) -4-cyanophenylalanine ac -(1) -phe (4-cn) -oh and n-acetyl -(1)-p-amidinophenylalanine-cyclohexylglycine-<beta>-(3-n-methylpyridinium)-alanine ac-(1)-paph-chg-palme(3)-nh2
US5948939A (en) Selective amidination of diamines
Bizzozero et al. Enzyme‐Catalyzed Peptide‐Bond Formation: Elastase‐and δ‐Chymotrypsin‐Assisted Synthesis of Oligopeptides
JPH0778038B2 (ja) Ｌ―アルギニナールジ低級アルキルアセタールの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20111125