SK280315B6

SK280315B6 - Deriváty 11-benzaldoxím-17beta-metoxy-17alfa--meto

Info

Publication number: SK280315B6
Application number: SK958-94A
Authority: SK
Inventors: Gerd Schubert; G�Nther Kaufmann; Lothar Sobeck; Michael Oettel; Walter Elger; Anatoli Kurischko
Original assignee: Jenapharm Gmbh
Priority date: 1993-09-20
Filing date: 1994-08-10
Publication date: 1999-11-08
Also published as: ATE149513T1; DE4332284C2; NO942952L; NO942952D0; HU9402695D0; AU682373B2; SK95894A3; EP0648779A3; RU94029667A; PL305091A1; UA39101C2; AU7035194A; CA2130515C; NO304988B1; KR100190775B1; FI943688A0; DK0648779T3; JP2696672B2; GR3023644T3; PL179460B1

Description

Vynález sa týka nových 11-bcnzaldoxímestradiénových derivátov, spôsobu ich výroby a liečiv, ktoré obsahujú tieto zlúčeniny.

Doterajší stav techniky

11β-Substituované fenyl-estratriény sú už známe. Výroba 1 l[j-aryl-17a-propinyl-4,9-estradiénov už je opísaná, napr. v patentovom spise EP 057 115, reakcia llp-(4-formylfenyl)-4,9-estradien-3-ónov s hydroxylamínmi je opísaná v patentovom spise DE 3 504 421. Podľa uvedených spôsobov vznikne oxím tak z 11 β-formylfenylskupiny, ako aj z 3-keto skupiny. Okrem toho vzniknú na C-3 syn- a antiizoméry. O účinku opísaných zlúčenín nie je doteraz nič známe.

Progesterón je počas cyklu a počas gravidity vylučovaný vo veľkých množstvách vaječníkmi a placentou. Jeho regulačný význam pravdepodobne nie je vo všetkých aspektoch objasnený.

Isté je, že progesterón ovplyvňuje v spoluúčinkovaní s estrogénmi cyklické zmeny sliznice maternice v menštruačnom cykle a gravidite. Pod vplyvom zvýšenej hladiny progesterónu po ovulácii je sliznica maternice v takom stave, že umožní zahniezdenie embrya (blastocysty). Zachovanie tkanív, v ktorých sa rozširuje rastúce embryo, je tiež závislé od progesterónu.

Počas gravidity nastáva dramatická zmena svalovej funkcie maternice. Sval gravidnej maternice reaguje veľmi slabo alebo nereaguje vôbec na hormonálne alebo mechanické podráždenia, ktoré mimo gravidity spôsobujú bolesti. Niet pochýb, že pritom hrá kľúčovú rolu progesterón, aj keď v niektorých fázach gravidity, napr. bezprostredne pred pôrodom, existuje pri extrémne vysokých hladinách progesterónu v krvi jeho vysoká reakčná pohotovosť.

Iné typické prejavy tehotenstva sú rovnako výrazom veľmi vysokej hladiny progesterónu. Zväčšovanie mliečnych žliaz a pevné uzavretie krčka maternice až do blízkosti termínu pôrodu sú príkladom tohto efektu.

Progesterón sa v malej miere zúčastňuje na riadení ovulačných orgánov. Je známe, že progesterón má vo veľkých dávkach antiovulačné vlastnosti. Tieto vlastnosti vyplývajú zo zábrany hypofýznej sekrécie gonadotropínu, ktorá je predpokladom na dozretie folikula a jeho ovuláciu. Na druhej strane je zrejmé, že porovnateľne nižšia sekrécia progesterónu v dozrievajúcom folikulc hrá aktívnu rolu pri príprave a spustení ovulácie. Pritom hrajú viditeľne dôležitú úlohu hypofýzárne mechanizmy (časovo obmedzená, dokonca pozitívna odozva progesterónu na sekréciu gonadotropínu) (Loutradie, D.; Human Reproduction 6, 1991, 1238-1240).

Menej podrobne sú analyzované funkcie progesterónu v dozrievajúcom folikule a vlastnom žltom teliesku, o ktorých existencii nie je pochýb. Koniec koncov sa aj tu predpokladajú stimulujúce a brzdiace efekty na endokrinné folikuly a funkciu žltého telieska.

Dôležitá rola progesterónu a progesterónových receptorov sa predpokladá aj v patopsychologických procesoch. Progesterónové receptory sú dokázateľné v endometrióznych ohniskách, ale aj v tumoroch maternice, prsníka a centrálneho nervového systému (meningeómy). Úloha uvedených receptorov pri raste týchto patologicky relevantných tkanív nie je nevyhnutne viazaná na prítomnosť hladiny progesterónu v krvi. Je dokázané, že substancie, ktoré sú charakterizované ako progesterónové antagonisty,

RU 486 = Mifepriston (EP-0 057 115) a ZK 98299 = Onapriston (DE-OS-35 04 421), vyvolávajú aj neskôr hlboko zasahujúce funkčné zmeny v týchto tkanivách, keď je v krvi prítomná zanedbateľné nízka hladina progesterónu. Zdá sa byť možné, že pritom hrajú dôležitú rolu zmeny transkripčných účinkov progesterónom neobsadeného progesterónoveho receptoru antagonistami (Chwalisz, K. et al., Endocrinology, 129,317-322, 1991).

Účinky progesterónu v tkanivách genitálnych orgánov a ostatných tkanivách nastávajú interakciou s progesterónovým receptorom. V bunke sa naviaže progesterón s vysokou afinitou na svoj receptor. Zmeny receptorového proteínu sú ovplyvnené týmito faktormi: zmeny konformácie, dimerizácia 2 receptorových jednotiek do jedného komplexu, uvoľnenie väzbového miesta v receptore DNA po disociácii jedného proteínu (HSP 90) a naviazaní na hormonálne príslušnú časť DNA. Nakoniec je transkripcia určitých génov regulovaná (Gronemeyer, H. et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 41, 3-8,1992).

Účinok progesterónu alebo progesterónových antagonistov nie je závislý iba od ich koncentrácie v krvi. Koncentrácia receptorov v bunke je rovnako veľmi regulovaná. Estrogény stimulujú syntézu progesterónových receptorov vo väčšine tkanív. Progesterón brzdí syntézu estrogénových receptorov a syntézy jeho vlastného receptora. Pravdepodobne sú to tieto a iné interaktívne vzťahy medzi estrogénmi a gestagénmi, ktoré môžu vysvetliť, prečo môžu gestagény a antigestagény ovplyvniť estrogénovo závislé prejavy bez toho, aby boli naviazané estrogénovým receptorom. Tieto vzťahy majú prirodzene veľký význam pri terapeutickom použití antigestagénov. Tieto substancie sa zdajú byť vhodné, aby mohli cielene zasiahnuť do reprodukčných dejov ženy, napr. poovulačných, pri zabránení nidácie, v neskorej gravidite, do zvýšenia reakčnej pohotovosti maternice na prostaglandín a oxytocín, alebo aby sa dosiahlo otvorenie a zmäknutie (dozrievanie) cervixu.

.Antigestagény brzdia pri rôznych subhumánnych druhoch primátov ovuláciu. Mechanizmus tohto účinku nie je jednoznačne objasnený. Diskutované sú okrem zábran sekrécie gonadotropínu aj ovariálne mechanizmy kvôli poruche para- a autokrinných funkcií progesterónu vo vaječníkoch.

Antigestagény majú schopnosť modulovať alebo oslabovať efekty estrogénov, aj keď samotné prevažne nemajú žiadnu afinitu k estrogénnym receptorom v cytoplazmatickej rovine a aj keď môžu ovplyvňovať koncentráciu estrogénových receptorov. Od príslušných efektov v endometrióznych ohniskách, prípadne v tumorových tkanivách, ktoré boli vybavené estrogénovými a progesterónovými receptormi, sa dá očakávať priaznivé ovplyvnenie zdravotného stavu. Mimoriadne prednosti priaznivého ovplyvnenia zdravotného stavu, ako endometriózy, by mohli byť dané, keby sa k brzdiacim efektom antigestagénu pôsobením v tkanive pripojilo brzdenie ovulácie. S brzdením ovulácie by odpadla aj časť ovariálnej hormonálnej produkcie a tým aj stimulačný efekt na patologicky zmenené tkanivo. Pri prítomnosti ťažkej endometriózy by bolo želateľné brzdiť ovuláciu a uviesť stále sa prestavujúce tkanivá genitálneho traktu reverzibilne do pokojného stavu.

Diskutuje sa aj o postupe pri antikoncepcii, pri ktorom antigestagénna liečba potláča ovuláciu a následnou gestagénnou liečbou sa indukuje sekretorická transformácia endometria tak, aby z liečebných krokov s antigestagénmi a gestagénmi a liečebnej pauzy rezultoval cca 28-denný cyklus s pravidelnými krvácaniami (Baulieu, E. E., Advances in Contraception 7, 345-351, 1991).

SK 280315 Β6

Antigestagény môžu mať rôzne hormonálne a antihormonálne vlastnosti. Mimoriadnym terapeutickým efektom sú zároveň aj antiglukokortikoidné vlastnosti. Tieto sú na terapeutické použitia, pri ktorých je v popredí terapie blokovanie nepriaznivých progesterónových receptorov, spôsobujúcich v terapeuticky potrebných množstvách nepriaznivé vedľajšie účinky, ktoré znemožňujú aplikáciu terapeuticky zmyselného množstva, alebo môžu viesť k ukončeniu liečby. Čiastočná alebo úplná redukcia antiglukokortikoidných vlastností je dôležitým predpokladom na terapiu s antigestagénmi, najmä pri tých indikáciách, ktoré vyžadujú viac týždennú alebo mesačnú liečbu.

Podstata vynálezu

Úlohou predloženého vynálezu je poskytnúť nové 11 β-benzaldoxím-4,9-estradiénové deriváty všeobecného vzorca (I)

a ich farmaceutický prijateľné soli, ako aj spôsob ich prípravy. Ďalšou úlohou vynálezu je poskytnutie liečiv, ktoré obsahujú zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ.

Vo všeobecnom vzorci (I)

sa esterifikuje so skupinou Z a výsledná zlúčenina sa ľubovoľným spôsobom prevedie na farmaceutický prijateľnú soľ.

Esterifikácia, éterifikácia alebo tvorba uretánovej väzby v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) sa môže vykonať známymi spôsobmi, pomocou acylačných činidiel, ako sú anhydridy alebo chloridy kyselín za prítomnosti bázy, výhodne pyridínu. Éterifikácia sa môže uskutočniť metyljodidom za prítomnosti bázy, výhodne za prítomnosti terc.butanolátu draselného alebo diazometánom v metanole. Tvorba uretánovej väzby sa uskutoční reakciou s alkyl- alebo arylizokyanátmi v inertných rozpúšťadlách, výhodne v toluéne alebo reakciou karbamoylchloridov za prítomnosti bázy, výhodne trietylamínu.

Príprava východiskovej zlúčeniny všeobecného vzorca (II) j e založená na 5α, 1 Oa-epoxide III

Z predstavuje -CO-CH₃, -CO-O-C2H5, -CO-NH-fenyl, -CO-NH-C₂H₅, -CO-C₂H₅ alebo -CO-fenyl.

Podľa tohto vynálezu sú uprednostňované tieto zlúčeniny:

P-[4-(acetoxy iminomety ljfeny 1] -17p-metoxy-17a-metoxymctyl-4,9-estradién-3-ón,

I lp-(4-[(etoxykarbonyl)oxyiminometyl]fenyl]--l7p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón, liP-{4-[(etylaminokarbonyl)oxyiminometyl]fenyl}-17P-metoxy-17a-metoxymely l-4,9-estradién-3-ón, 17P-metoxy-17a-metoxymetyl-lip-{4-[(fenylaminokarbony I )oxy im inom etyl] fenyl} -4,9-estradién-3-ón, lip-[4-(propionyloxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón a

II p-[4-(benzoyloxyiminometyl)fenyl]-17P-hydroxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón.

Vynález sa ďalej týka spôsobu výroby zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľných solí, ktorý sa vyznačuje tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (H) [napr. Nédélec, Bull. Soc. chim. France (1970), 2548].

Zavedenie fenylového zvyšku do 11 P-polohy za vzniku A9(10),5a-hydroxy štruktúry IV sa dosiahne Cu(I)-soľou katalyzovaňou Grignardovou reakciou (Tetrahedron Letters 1979, 2051) s ketalom p-brómbenzaldehydu, výhodne s dimetylketalom p-brómbenzaldehydu pri teplotách medzi 0 °C a 30 °C

Zavedenie skupiny -CH₂-O-CH₃ do C-17 polohy sa urobí známym spôsobom cez spiroepoxid V, reakciou s trimetylsulfóniumjodidom a terc.butanolátom draselným v dimetylsulfoxide [Húbner et. al.; J. Prakt. Chem. 314, 667 (1972); Arzneim. Forsch. 30, 401 (1973)]

a následným otvorením kruhu alkoholátmi [Ponsold et. al.;

Z. Chem. 11, 106 (1971)]. Takto pripravené 17a-CH₂-O-CH₃ zlúčeniny (VI)

sa dajú štiepiť buď kyslou hydrolýzou, výhodne s kyselinou p-toluénsulfónovou v acetóne (Teutsch et. al. DE 2801416), na vhodné aldehydy alebo po éterifikácii voľnej hydroxylovej skupiny alkylhalogenidmi za prítomnosti terc.butanolátu draselného sa prevedú najprv na 5a,17P-diétery (Kasch et. al. DD 290 893), ktoré sa potom kyslou hydrolýzou, výhodne kyselinou p-toluénsulfónovou v acetóne, prevedú na požadované aldehydy a takto získaný aldehyd sa reakciou s hydroxylamínom prevedie na zlúčeninu všeobecného vzorca (II).

Získaná zlúčenina všeobecného vzorca (I), ktorá je predmetom vynálezu, sa môže prípadne previesť na adičnú soľ anorganickej alebo organickej kyseliny, výhodne na takú soľ, ktorá je fyziologicky neškodná. Obvyklými fyziologicky neškodnými anorganickými a organickými kyselinami sú napríklad kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina fosforečná, kyselina sírová, kyselina oxálová, kyselina maleínová, kyselina fumárová, kyselina mliečna, kyselina vínna, kyselina jablčná, kyselina citrónová, kyselina salicylová, kyselina adipová a kyselina benzoová. Ďalšie použiteľné kyseliny sú opísané napríklad v Pokroky výskumu liekov, zväzok 10, strany 224 - 225, vydavateľstvo Birkhäuser, Basel a Stuttgart, 1966, a v Joumal of Pharmaceutical Sciences, zväzok 66, stranv 1 - 5 (1977).

Adičné soli anorganických alebo organických kyselín sa spravidla pripravia známym spôsobom, zmiešaním voľných báz alebo ich roztokov s príslušnou kyselinou, alebo zmiešaním ich roztokov v organickom rozpúšťadle, napríklad v nižšom alkohole, ako je metanol, etanol, n-propanol alebo izopropanol, alebo v nižšom ketóne, ako je acetón, metyletylketón alebo metylizobutylketón, alebo v étere, ako je dietyléter, tetrahydrofurán alebo dioxán. Lepšie vylučovanie kryštálov sa získa pri použití zmesi uvedených rozpúšťadiel. Takýmto spôsobom sa môžu fyziologicky neškodné vodné roztoky adičných solí anorganických alebo organických kyselín pripravovať zo zlúčenín všeobecného vzorca I a vodných roztokov kyselín.

Adičné soli anorganických alebo organických kyselín všeobecného vzorca (I) môžu známym spôsobom reagovať napr. so zásadami alebo iónomeničmi, pričom sa uvoľnia voľné bázy. Z voľnej bázy sa reakciou s anorganickými alebo organickými kyselinami, hlavne takými, ktoré sú vhodné na vytvorenie terapeutických solí, dajú získať ďalšie soli. Tieto soli alebo aj iné soli predmetnej zlúčeniny, ako napr. pikrát, môžu sa použiť aj na čistenie voľnej bázy tak, že voľná báza sa prevedie na soľ, ktorá sa oddelí a zo soli sa znova uvoľni báza.

Predmetom predloženého vynálezu sú aj liečivá na orálnu, rektálnu, subkutánnu, intravenóznu alebo intramuskulámu aplikáciu, ktoré okrem obvyklých nosičov a riedidiel obsahujú ako prísadu zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej adičnú soľ s anorganickou alebo organickou kyselinou. Liečivá podľa tohto vynálezu sa vyrábajú známym spôsobom s použitím bežných, tuhých alebo kvapalných nosičov alebo riedidiel a bežne používaných farmaceutických pomocných látok, primerane k aplikačnému spôsobu a primerane k dávkovaniu. Uprednostňuje sa príprava takých foriem liečiv, ktoré sú vhodné na orálnu aplikáciu. Takéto dosiahnuteľné formy sú napríklad tablety, poťahované tablety, dražé, kapsuly, pilulky, prášky, roztoky, suspenzie alebo depotné formy.

Samozrejme prichádzajú do úvahy aj parenterálne prípravky ako injekčné roztoky. Okrem toho, napríklad aj čapíky.

Príslušné tablety sa môžu získať napríklad zmiešaním účinnej látky so známymi pomocnými látkami, napríklad s inertnými riedidlami, ako sú dextróza, cukor, sorbit, manit, polyvinylpyrolidón, rozvoľňovadlami, ako sú kukuričný škrob alebo kyselina alginová, spojovacími prostriedkami, ako sú škrob alebo želatína, mazadlami, ako sú stearan horečnatý alebo talok a/alebo s prostriedkami na dosiahnutie depotného efektu, ako sú karboxypolymetylén, karboxymetylcelulózu, acetátftalát celulózy alebo polyvinylacetát. Tablety môžu pozostávať aj z viacerých vrstiev.

Príslušné dražé môžu byť vyrobené obalením jadier, ktoré sa vyrobia analogickým spôsobom ako tablety, s obvykle používanými obaľovacími prostriedkami, napr. polyvinylpyrolidónom alebo šelakom, arabskou gumou, talkom, titándioxidom alebo cukrom. Pritom môže aj obal dražé pozostávať z viacerých vrstiev, pričom môžu byť použité pomocné látky, ktoré boli spomenuté pri výrobe tabliet.

Roztoky alebo suspenzie s účinnou látkou podľa predloženého vynálezu môžu dodatočne obsahovať chuť zlepšujúce prostriedky ako sacharín, cyklamát alebo cukor, ako aj napr. aromatické látky, ako sú vanilín alebo pomarančový extrakt. Okrem toho môžu obsahovať suspendujúce pomocné látky, ako je natriumkarboxymetylcelulóza alebo konzervačné látky, ako sú estery kyseliny p-hydroxybenzoovej. Kapsuly, ktoré obsahujú účinnú látku, sa môžu vyrobiť napríklad tak, že prísada sa zmieša s inertným nosičom, ako je mliečny cukor alebo sorbitol a zapuzdria sa do želatínových kapsúl.

Vhodné čapíky sa dajú vyrobiť napríklad zmiešaním s vhodnými nosičmi, ako sú neutrálne tuky alebo polyetylénglykol, príp. ich derivátmi.

Podľa tohto vynálezu pripravené Ιΐβ-substituované benzaldoxím-4,9-estradiény sú antigestagénne pôsobiace substancie, ktoré pri prevažujúcom účinku in vivo (porov. tab. 2) majú v porovnaní s RU 486 jasne zredukovanú antiglukokortikoidnú aktivitu, ktorá bola dokázaná zmenšenou glukokortikoidnou receptorovou väzbou (porov. tab. 1).

Tabuľka 1

Receptorová väzba vybratých zlúčenín, pripravených podľa príkladov 1 a 2

Zlúčenina podľa príkladu	Relatívna melónu vfizbová afinita (RMVA) [%] voči glukokcrtikoidovčmu receptoru (Dexametazon -100¾)
1 (J914)	73
2<J900)	66
na porovnanie
RU 486 (Miŕepristone)	685
ZK 98299 (Onapristone)	39

Pri tejto kombinácii vlastností sa dá od antigestagénov, pripravených podľa tohto vynálezu, očakávať prevažujúce tlmenie účinku progesterónu pri súčasne redukovanej antiglukokortikoidnej aktivite. Táto výhoda je obzvlášť relevantná najmä vzhľadom na indikácie, pri ktorých doba použitia liečiva vyžaduje mimoriadne dobrú znášanlivosť. Hmotnosť maternice v cykle je rozhodujúco určená cirkulujúcimi estrogénmi. Zníženie hmotnosti maternice je výsledkom tlmenia týchto funkcií estrogénov. Zistené prevažujúce zníženie hmotnosti maternice v cykle morčaťa pôsobením RU 486 poukazuje na (nepriame) antiestrogénne vlastnosti zlúčenín pripravených podľa tohto vynálezu. Od príslušných účinkov sa dá očakávať mimoriadne výhodné ovplyvnenie patologicky zmenených tkanív, v ktorých estrogény dávajú rastové impulzy (zdroje endometriózy, myómy, karcinómy prsníka a genitálií, benígné hypertrofie prostaty).

Tabuľka 2

Urýchlenie abortívneho účinku RU 486 a J 914 (príklad 1) a J 900 (príklad 2) potkana po subkutánnej aplikácii od 5. - 7. dňa gravidity (aplikácia 0,2 ml/zviera/dcň v zmesi benzylbenzoát/ricínový olej [1+4 v/v])

Skupina, zlúčenina	Dávka [mg/zviera/defi]	Kompletné tlmenie gravidity +	EDjo ++ [mg/zviera/deň]
N7N	I%1
vehikulum	-	0/25	0
RU486	3,0	5/5	100
	1.0	2/5	40	U
		0/5	0
J 900	1,0	9/10	90	0,6
	03	0/5	0
J 914	3.0	5/5	100
	1,0	7/10	70	0,6
	03	1/5	20
	0,1	0/6	0

+ - prázdna maternica; N - počet všetkých samíc;

N* - počet negravidných samíc; ++ - grafické stanovenie

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

180 mg 1 ip-[4-(Hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetylestra-4,9-dién-3-ónu sa acetyluje v priebehu 12 hodín v 5 ml zmesi acetanhydrid/pyridín (I : 1). Po pridaní vody sa reakčná zmes 3-krát extrahuje octanom etylnatým, organická fáza sa premyje do neutrál nej reakcie zriedenou HC1 a vodou a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 172 mg surového produktu, ktorý sa prečistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu PF₂₅₄₊₃66 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4: 1).

Získa sa 115 mg 1 ip-[4-(acetyloxyiminometyl)fenyl]-17(Lmctoxy-17a-metoxy-metyl-4,9-estradién-3-ónu. Produkt sa kryštalizuje z octanu etylnatého. Teplota topenia: 115 - 120 °C (octan etylnatý) «_D= + 218° (CHC1₃) UV spektrum v MeOH: lambda_raax = 271 nm epsilon = 28 157 lambda_max = 297 nm epsilon = 26 369 ’H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,511 (s, 3H, H-18); 2,227 (s, 3H, OCOCH₃); 3,247 (s, 3H, 17p-OCH₃); 3,408 (s, 3H, 17ct-CH₂OCH₃); 3,386, 3,431, 3,544, 3,580 (m, 2H, CH₂OCH₃); 4,399 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,785 (s, 1H, H-4); 7,242, 7,266, 7,618, 7,647 (m, 4H, AA'BB’-systém aromatických protónov); 8,315 (s, 1H, CH=NOAc). MS m/e: 446 C₂₈H₃₂NO₄ M⁺ -CH₂OCH₃ ⁺

Príklad 2

K 210 mg 1 l[>-[4-(hydroxyiminometyl)f'enyl]-17[)-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu v 5 ml pyridínu sa za chladenia vodou prikvapká 0,3 ml etylesteru kyseliny chlórmravčej. Vznikne biela zrazenina. Po 30 minútach sa k reakčnej zmesi pridá voda. Vznikne roztok, z ktorého potom vypadne biela zrazenina, ktorá sa odsaje a premyje vodou. Výťažok po vysušení je 133 mg. Vodná fáza sa extrahuje chloroformom, ktorý sa premyje zriedenou kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší a za zníženého tlaku sa odparí rozpúšťadlo. Získa sa ďalších 66 mg. Obidva podiely sa spoja a vyčistia preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF_254+366 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4 : 1).

Získa sa 150 mg 1 ip-{4-[(etoxykarbonyl)oxyiminometyl]fenyl)-17P-metoxy-17a-metoxymetylestra-4,9-dién-3-ónu, ktorý' sa prekryštalizoval zo zmesi acetón/hexán. Teplota topenia: 137 - 148 °C a_D= + 204° (CHC₃) UV spektrum v MeOH: larnbda_max = 270 nm epsilon = 27 094 lambda_max = 297 nm epsilon = 25 604 'H-NMR spektrum v CDCI3 [δ, ppm]: 0,507 (s, 3H, H-18); 1,383 (t, 3H, J=7,0 Hz, OCH₂CH₃); 3,246 (s, 3H, 17β-OCH₃); 3,410 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,39 - 3,56 (m, 2H, CH₂OCH₃); 4,35 (d, 1H, J=7,0 Hz, H-lla); 5,784 (s, 1H, H-4); 7,23, 7,26, 7,61, 7,64 (m, 4H, AA'BB'-systcm aromatických protónov); 8,303 (s, 1H, CH=NR) MS m/e: 431,24701 C₂₈H₃₃NO₃ M' - C₂H₅OCOOH

Príklad 3

190 mg 1 lp-[4-(Hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu sa suspenduje v 10 ml toluénu. Postupne sa pridá 0,5 ml fenylizokyanátu a 1 ml trietylamínu. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri izbovej teplote a potom sa zahrieva 2 hodiny pri teplote spätného toku. Biela zrazenina sa odsaje a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 310 mg bledohnedej tuhej látky, ktorá sa vyčistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF_25<W66 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (9:1).

Izoluje sa 65 mg l7[J-metoxy-l7a-metoxymety 1-11β-{4-[(fenylaminokarbonyl)oxyiminometyl]fenyl)-4,9-estradién-3-ónu.

SK 280315 Β6

Teplota topenia: 241 - 246 °C (acetón) a_D = + 178° (CDClj) UV spektrum v MeOH: lambda_n]ax = 238nm epsilon = 29 444 lambda_max = 300 nm epsilon = 29 649 'H-NMR spektrum v CDClj [δ, ppm]: 0,474 (s, 3H, H-18); 3,245 (s, 3H, 17p-OCH₃); 3,405 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,406 - 3,545 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₂OCH₃); 4,413 (d, J=6,8 Hz, IH, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,264 (m, 5H, aromat); 7,272, 7,293, 7,548, 7,575 (m, 4H, AA'BB’-systém aromatických protónov); 8,0 (s, 1H, CH=N-) MS m/e: 431,24249 C₂₈H₃₃NO₃ M⁺ - C₆H₅CNO + H₂O

Príklad 4

708 mg 1 ip-[4-(Hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-mctoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu sa rozpusti v 15 ml toluénu. Potom sa pridá 1,5 ml etylizokyanátu a 3 ml trietylamínu. Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri izbovej teplote a potom sa nechá cez noc stáť. Pridá sa 20 ml vodného roztoku amoniaku, rozdelia sa fázy a vodná váza sa extrahuje toluénom. Spojené organické fázy sa premývajú vodným roztokom chloridu amónneho a vodou, vysušia sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 800 mg svetložltej pevnej látky, ktorá sa čistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂54+₃₆6 so zmesou rozpúšťadiel taluén/acetón (9:1).

Izoluje sa 610 mg 1 iP-{4-[(etylaminokarbonyl)oxyiminometyl]fenyl}-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu.

Teplota topenia: 142 - 147 °C (éter/acetón/hexán) rozkladá sa na svetle 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,522 (s, 3H, H-18); 1,241 (t, 3H, J=7,5 Hz, NHCH₂CH₃); 3,253 (s, 3H, 17β-OCH₃); 3,415 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,366 - 3,574 (m, 4H, ABX-systém, Ua-CHjOCHj, NHCH2CH₃); 4,410 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,790 (s, 1H, H-4); 6,238 (m, 1H, NHCO); 7,258, 7,286, 7,561, 7,589 (m, 4H, AA’BB’-systém aromatických protónov); 8,294 (s, 1H, CH=N-).

Príklad 5

500 mg 1 ip-[4-(Hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu sa mieša v inertnej atmosfére 2,5 hodiny v 4 ml zmesi anhydrid kyseliny propiónovej/pyridín (1 : 1, v/v). Potom sa reakčná zmes vyleje do ľadovej vody a lepkavá masa sa extrahuje chloroformom. Organická vrstva sa premyje s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Svetložltá pena sa čistí chromatograficky a prekryštalizuje sa z octanu etylnatého. Výťažok je 306 mg lip-[4-(propionyloxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu.

Teplota topenia: 110 - 114 °C (octan etylnatý) 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,515 (s, 3H, H-18); 1,241 (t, 3H, J=7,6 Hz, OCOCH₂CH,); 3,253 (s, 3H, 17β-OCH₃); 3,415 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,4 - 3,6 (m, 2H, ABX-systém, 17cc-CH₂OCH₃); 4,128 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-11a); 5,790 (s, 1H, H-4); 7,244, 7,271, 7,627, 7,655 (m, 4H, AA’BB’-systém aromatických protónov); 8,322 (s, 1H, CH=N-).

Príklad 6

K 170 mg ll|l-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17[l-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu v 5 ml metanolu sa za chladenia ľadom prileje roztok diazometánu v éteri až do slabožltého sfarbenia. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote 5 °C a potom sa vyleje do koncentrovaného hydroxidu sodného. Extrahuje sa éterom, premýva do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Žltá živica sa čistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂₅₄₊₃66 So zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4 : 1).

Získa sa 110 mg lip-[4-(metoxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu vo forme bezfarebných lístočkov.

Teplota topenia: 83 - 89 °C a _D = + 197° (CHClj)

IČ spektrum v CHC1₃ (cm’¹): 1700 (C=NOCH₃); 1649 (C=C-C=C-C=O); 1590 (aromat.)

U V spektrum v MeOH: lambda_mox = 275 epsilon = 23 098 lambda_nlax = 300 epsilon = 22 872 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,529 (s, 3H, H-18); 3,247 (s, 3H, 17P-OCHj); 3,408 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,39 - 3,598 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₂OCH₃); 4,381 (d, 1H, J=7,5 Hz, H-lla); 5,773 (s, 1H, H-4); 7,173, 7,201, 7,463, 7,491 (m, 4H, AA’BB’-systém aromatických protónov); 8,023 (s, 1H, CH-fenyl).

Príklad 7

K 500 mg 1 ip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu sa pridá prefiltrovaná zmes 2 ml benzoylchloridu a 3 ml pyridínu. Reakčná zmes sa po 2 hodinách vyleje do 150 ml ľadovej vody. Steroid vypadne ako lepkavá masa. Pridá sa 5 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a potom octan etylnatý. Vrstvy sa rozdelia a organická vrstva sa premýva vodným roztokom uhličitanu sodného a vodou, vysuší sa nad síranom sodným, prefiltruje a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Žltý' olej (1,57 g) sa oddelí od nepolárnych produktov chromatografiou na 40 g Kieselgelu 60 s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý. Hlavná frakcia sa prečistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF_254+366 so zmesou rozpúšťadiel chloroform/acetón. Získa sa 410 mg bezfarebnej peny, ktorá sa prekryštalizuje z metanolu.

Získa sa 263 mg liP-[4-(benzoyloxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-etoxy-metyl-4,9-estradién-3-ónu vo forme bezfarebných kryštálov.

Teplota topenia: 115 - 122 °C a_D = + 216° (CHClj) UV spektrum v MeOH: lambda_niax = 279 epsilon = 33 720 lambda,_rax = 299 epsilon = 30 120 '-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,527 (s, 3H, H-18); 3,253 (s, 3H, 17p-OCH₃); 3,415 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,403 - 3,589 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₂OCH₃); 4,416 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,792 (s, 1H, H-4); 7,299 - 7,615 (m, 5H, aromatické protóny, CO-fenyl); 7,701, 7,729, 8,111, 8,140 (m, 4H, AA’BB’- systém aromatických protónov); 8,520 (s, 1H, CH-fenyl).

Príklad 8

Meranie receptorovej väzbovej afinity

Receptorová väzbová afinita bola stanovená kompetitívnou väzbou špecificky viažuceho sa ³H-značkovaného hormónu (Tracer) a zlúčeniny testovanej na receptoroch v cytosole zo zvieracích cieľových orgánov. Pritom dochádza k nasýteniu receptorov a k reakčnej rovnováhe. Zvolili sa nasledujúce inkubačné podmienky:

Glukokortikoidový receptor: cytosol týmusu adrenalektomovaného potkana, týmus skladovaný pri -30 °C; Puffer: TED. Tracer: ³H-dexametazón, 20 nM; Referenčná látka: Dcxamctazón.

Po 18 hodinovej inkubačnej dobe pri teplote 0 - 4 °C nasledovalo oddelenie viazaných a voľných steroidov pridaním aktívneho uhlia a dextránu (1 %/0,1 %), odcentrifugovanie a meranie viazanej ³H-aktivity v nadbytku.

Z meraní koncentračných radov sa stanovili IC50 testovanej zlúčeniny a referenčnej látky a tiež kvocient oboch hodnôt (x 100 %) relatívnej molámej väzbovej afinity.

Príklad 9

Tlmenie skorej gravidity potkana

Samičky potkanov sa spária v prooestruse. Po potvrdení, že spermie boli vo vaginálnom stere, sa druhý deň počíta ako prvý deň (= dl) gravidity. Liečba s testovacími substanciami alebo vehikulom nasleduje od d5 - d7, autopsia nasleduje v d9. Substancie sa subkutánne injikujú v 0,2 ml vehikula (benzylbenzoát/ricínový olej 1 + 4). Počet úplne zabránených gravidít v rôznych skupinách uvádza tabuľka 1. Pre J 917 a J 900 bolo pri RU 486 stanovené zabránenie nidácie.

3. Spôsob prípravy zlúčenín podľa nároku 1 a ich farmaceutický prijateľných solí, vyznačujúci sa t ý m , že zlúčenina všeobecného vzorca (II)

sa esterifikuje so skupinou Z a výsledná zlúčenina sa ľubovoľne prevedie na farmaceutický prijateľnú soľ.

4. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , žc obsahuje aspoň jednu zlúčeninu podľa nároku 1 až 2.

Koniec dokumentu

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Deriváty 1 ip-benzaldoxím-17p-metoxy-17a-metoxymetylestradiénu všeobecného vzorca (I), kde Z predstavuje -CO-CH₃, -CO-O-C₂H₅, -CO-NH-fenyl, -CO-NH-C₂H₅, -CO-C₂H₅ alebo -CO-fenyl, ako aj ich farmaceutický prijateľné soli.

2. Zlúčeniny podľa nároku 1, vybrané zo skupiny zahŕňajúcej:

1 iP-[4-(acetoxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón,

I ip-{4-[(etoxykarbonyl)oxyimmomctyl]ícnyl)-17[i-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón,

II P-{4-[(etylaminokarbonyl)oxyiminometyl]fenyl}-17β-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón,

17P-metoxy-17a-metoxymetyl-11 P-{4-[(fenylaminokarbonyl)oxyiminometyl]fenyl)-4,9-estradién-3-ón,

11 p-[4-(propionyloxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymety l-4,9-estradién-3 -ón a

1 lp-[4-(benzoyloxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ón.