FI112948B - Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 11beta-bentsaldoksiimi-17beta-metoksi-17alpha-metoksimetyyli-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

112948

Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 11 β-bentsaldoksiimi-liβ-metoksi-14a-metoksimetyvii-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien 11 (3-bentsaldoksiimi-cstra-4,9-dieeni-johdan-5 naisten valmistamiseksi.

Ιΐβ-substituoidut fenyyli-estratrieenit ovat jo tunnettuja. 11 β-aryyli-17a-propi-nyyli-estra-4,9-dieenien valmistusta on jo kuvattu esimerkiksi patenttijulkaisussa EP 057 115 ja 11 β-(4-formyylifenyyli)-estra-4,9-dien-3-onien reaktiota hydrok-syyliamiinien kanssa patenttijulkaisussa DE 3 504 421. Kuvatussa menetelmässä 10 oksimoidaan sekä 11 β-formyylifenyyliryhmä että myös 3-ketoryhmä. Tämän lisäksi C-3:ssa muodostuu syn- ja anti-isomeerejä. Kuvattujen yhdisteiden vaikutusta ei vielä tähän mennessä tunneta.

Progesteronia erittyy kuukautiskierron ja raskauden aikana suurissa määrissä munasarjoista ja istukasta. Sen säätelevää merkitystä ei ole oletettavasti kokonaan sel-15 vitetty.

Varmaa on, että progesteroni vaikuttaa yhdessä estrogeenien kanssa kohdun limakalvon rytmisiin muutoksiin kuukautiskierron ja raskauden aikana. Kohonneen pro-gesteronipitoisuuden vaikutuksesta ovulaation jälkeen kohdun limakalvo muuttuu sellaiseksi, että alkion (blastokystan) kiinnittyminen kohdun seinämään mahdollis-20 tuu. Progesteronista riippuu samoin myös niiden kudosten säilyminen, joissa kasvava alkio (embryo) kehittyy.

Raskauden aikana kohdun lihastoiminnassa tapahtuu dramaattinen muutos. Gravidi kohtulihas reagoi hyvin heikosti tai ei ollenkaan hormonaalisiin ja mekaanisiin ärsykkeisiin, jotka ilman raskautta aiheuttavat kipuja. Ei ole epäilystäkään siitä, että 25 progesteroni on tällöin avainasemassa, vaikkakin raskauden monissa vaiheissa, esimerkiksi välittömästi ennen synnytystä reaktiovalmius on hyvä, veren progestero-nipitoisuuden ollessa samalla äärimmäisen korkea.

Edelleen raskaudelle tyypillistä on samoin hyvin korkea progesteronitaso. Rintarauhasten rakenne ja kohdun suun sulkeutuminen synnytysajankohdan lähestymiseen 30 saakka ovat tästä esimerkkejä.

Progesteroni osallistuu hienosti ovulaation säätelyyn. Tiedetään, että progesteronilla on suurina annostuksina antiovulatorisia ominaisuuksia. Nämä ovat tuloksena aivo- 2 112948 lisäkkeen gonadotropiinierityksen estosta, joka on edellytyksenä follikkelin kypsymiselle ja ovulaatiolle. Toisaalta on havaittavissa, että kypsän follikkelin verrattain vähäisellä progesteronin erityksellä on aktiivinen merkitys ovulaation valmistelulle ja aiheuttamiselle. Tällöin on aivolisäkkeen mekanismeilla (ajallisesti rajoitettu pro-5 gesteronin niin sanottu positiivinen palautevaikutus gonadotropiinieritykseen) havaittavissa suuri merkitys (Loutradie, D.; Human Reproduction 6. 1991, 1238-1240).

Vähemmän sen sijaan on analysoitu progesteronin toimintoja kypsässä follikkelissa ja itse keltarauhasessa, joiden olemassaolosta ei ole epäilystäkään. Lopuksi myös 10 tässä on tunnustettava endokriiniseen follikkelin ja keltarauhasen toimintaan kohdistuvat stimuloivat ja estävät vaikutukset.

Progesteronilla ja progesteronireseptoreilla on myös suuri merkitys patofysiologi-sissa prosesseissa. Progesteronireseptorit voidaan osoittaa endometrioosipesäkkeis-sä, mutta myös kohdun, rintarauhasen ja keskushermoston (aivokalvokasvain) kas-15 vaimissa. Näiden reseptorien merkitys viimeksi mainittujen patologisesti relevanttien kudosten kasvuun ei välttämättä liity veren progesteronitasoon. On osoitettu, että aineet, jotka on karakterisoitu progesteroniantagonisteiksi, RU 486 = Mifepriston (EP-0 057 115) ja ZK 98299 = Onapriston (julkaisu DE-OS-35 04 421) aikaansaavat näissä kudoksissa selviä toiminnan muutoksia myös silloin, kun veren progeste-20 ronipitoisuus havaitaan hyvin pieneksi. Näyttää mahdolliselta, että silloin kun progesteroni ei ole antagonistien vaikutuksesta sitoutunut progesteronireseptoriin, niin ; progesteronireseptorin transkriptiovaikutusten muutoksilla on suuri merkitys (Chvvalisz, K. et. ai., Endocrinology, 129, 317-322, 1991).

•': Progesteronin vaikutukset sukupuolielinten ja muiden elinten kudoksissa tapahtuvat 25 vuorovaikutuksessa progesteronireseptorin kanssa. Progesteroni sitoutuu solussa :·. suurella affiniteetilla reseptoriinsa. Tämä aiheuttaa reseptoriproteiinin muutokset konformaation muutokset, 2 reseptoriyksikön dimerisoituminen kompleksiksi, re-, septorin DNA-sitoutumiskohdan paljastuminen proteiinin katketessa (HSP 90), si toutuminen DNA:n hormoni-vastaaviin (hormoniin reagoiviin) osiin. Lopuksi tietty-; ' 30 jen geenien transkriptio on tarkkaan säädeltyä. (Gronemeyer, H. et ai., J. Steroid.

: : Biochem. Molec. Biol. 41, 3-8, 1992).

Progesteronin tai progesteroniantagonistien vaikutus ei ole riippuvainen ainoastaan \ ! niiden konsentraatiosta veressä. Reseptorien konsentraatio solussa on samoin tark- :‘ ; kaan säädeltyä. Estrogeenit stimuloivat progesteronireseptorien synteesiä useimmis- 35 sa kudoksissa. Progesteroni estää estrogeenireseptorien synteesiä ja sen oman resep- 112948 3 torin synteesiä. Oletettavasti nämä ja muut estrogeenien ja gestageenien väliset vuorovaikutussuhteet voivat selittää, miksi gestageenit ja antigestageenit voivat vaikuttaa estrogeenista riippuvaisiin tapahtumiin sitoutumatta itse estrogeenireseptoriin. Näillä suhteilla on luonnollisesti suuri merkitys antigestageenien terapeuttiselle käy-5 tölle. Nämä aineet näyttävät soveltuvan vaikuttamaan tarkoituksellisesti naisen li-sääntymistapahtumiin, esim. ovulaation jälkeen estämään hedelmöityneen munasolun kiinnittymistä kohdun limakalvoon, myöhäisraskaudessa lisäämään kohdun supistumisvalmiutta prostaglandiineja ja oksitosiinia kohtaan tai avaamaan ja pehmittämään ("kypsentämään") kohdun kaulaa.

10 Antigestageenit estävät ovulaation eri kädellislajeilla. Tätä vaikutusmekanismia ei ole selvitetty yksiselitteisesti. Gonadotropiinierityksen eston ohella keskustellaan myös munasarja-mekanismeista, jotka häiritsevät progesteronin para- ja autokriini-siä toimintoja munasaijoissa.

Antigestageeneillä on kyky muunnella tai heikentää estrogeenien vaikutuksia, vaik-15 kakin niillä itsellään ei ole ylipäätänsä minkäänlaista affiniteettia estrogeenireseptoriin sytoplasmatasolla ja vaikka ne voivat saada aikaan estrogeenireseptorikonsent · raation kohoamisen. On odotettavissa, että vastaavat ominaisuudet voivat saada ai kaan edullisen vaikutuksen endometrioosipesäkkeissä tai kasvainkudoksissa, joissa on estrogeeni- ja progesteronireseptoreita. Sairauksiin, kuten endometrioosiin koh-20 distuvalle edulliselle vaikutukselle on odotettavissa erityisiä etuja silloin, kun anti-gestageenin estovaikutuksiin päästään aikaansaamalla kudoksissa ovulaation estyminen. Ovulaation estymisen ohella jäisi pois myös osa munasarjojen hormoni-;' tuotannosta ja täten myös tähän kuuluva patologisesti muuttuneeseen kudokseen ' : · ‘ kohdistuva stimulaatio vaikutus. Vaikean endometrioosin ollessa kyseessä, olisi toi- \: 25 voitavaa estää ovulaatio ja saattaa muutoin aina ympärillä olevat sukupuolielinten ' ·' kudokset palautumattomasi! lepotilaan.

Myös ehkäisyn kohdalla keskustellaan menetelmästä, jossa antigestageenihoito eh-, käisee ovulaation ja tämän jälkeen tapahtuva gestageenihoito aiheuttaa kohdun li makalvon sekretorisen transformaation siten, että antigestageeni- ja gestageenihoi-30 topäivien ja niiden päivien, jolloin mitään hoitoa ei tapahdu, tuloksena on 28-päivän : pituinen kuukautiskierto, jossa on säännöllinen kuukautisvuoto (Baulieu, E. E., Ad- ": vances in Contraception 7, 345-1991).

,’· Antigestageeneillä voi olla erilaisia hormonaalisia ja antihormonaalisia ominai- . : suuksia. Erityistä terapeuttista merkitystä on tällöin antiglukokortikoidisilla ominai- 35 suuksilla. Nämä ovat haitallisia terapeuttisessa käytössä, jossa progesteroniresepto- 112948 4 reiden estyminen on hoidossa tärkeintä, koska ne aiheuttavat terapeuttisesti vaadittavina annostuksina ei-toivottuja sivuvaikutuksia, estävät terapeuttisesti merkitsevän annoksen käytön tai voivat johtaa hoidon keskeytymiseen. Antiglukokortikoi-disten ominaisuuksien osittainen tai täydellinen vähentäminen on edellytyksenä an-5 tigestageenihoidolle, erityisesti viikkoja tai kuukausia kestävää hoitoa vaativissa indikaatioissa.

Esillä olevan keksinnön tehtävänä on asettaa käyttöön menetelmä uusien, yleisen kaavan I mukaisten lip-bentsaldoksiimiestra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi farmaseuttisissa koostumuksissa, joilla on antigestageeninen 10 vaikutus ja vähäinen glukokortikoidiaktiivisuus

NOZ

0CH3 . /JUch2-o-ch3 ^1^1 (i)

Yleisessä kaavassa I

NOZ

: 0CH3 •^JUch.-o-c^ (I) : ’ Z on -CO-CH3, -CO-O-C2H5, -CO-NH-fenyyli, -CO-NH-C2H5, -CO-C2H5, -CH3 15 tai -CO-fenyyli.

112948 5

Edullisina pidettyjä keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: 11 P~[4-(asetoksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra- 4.9- dien-3-oni, lip-{4-[(etoksikarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-17p-metoksi-17a-metoksi-5 metyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 11 β- {4-[(etyyliaminokarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli} - 17p-metoksi-17a-me-toksimetyyli-estra-4,9-dien-3 -oni, 17p-metoksi- 17a-metoksimetyyli-11 p-{4-[(fenyyliaminokar-bonyyli)oksi-imino-metyyli]fenyyli}-estra-4,9-dien-3-oni, 10 1 ip-[4-(propionyylioksi-iminometyyli)fenyyli]- 17P-metoksi- 17a-metoksimetyyli- estra-4,9-dien-3-oni, 11 p-[4-(metyylioksi-iminometyyli)fenyyli]- 173-metoksi- 17a-metoksimetyyli-estra- 4.9- dien-3-onija 1 ip-[4-(bentsoyylioksi-iminometyyli)fenyyli]- 17p-metoksi- 17a-metoksimetyyli-15 estra-4,9-dien-3-oni.

Keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että yleisen kaavan II mukainen yhdiste

NOH

: · ’ och3 \s^Sy^^//^CHr°’CH3 (ll) esteröidään tai eetteröidään asylointiaineilla.

20 Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistus esteröimällä, eetteröimällä tai metaanin muodostuksella voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla asylointiaineilla, kuten happoanhydrideillä tai happoklorideilla emästen, edullisesti pyridiinin läsnä ollessa, eetteröinti voidaan suorittaa metyylijodidilla emästen, edullisesti kali 112948 6 um-tert.-butanolaatin läsnä ollessa, tai diatsometaanilla metanolissa ja uretaanin muodostus antamalla reagoida alkyyli- tai aryyli-isosyanaattien kanssa inerteissä liuottimissa, edullisesti tolueenissa, tai antamalla reagoida karbamoyylikloridien kanssa emästen, edullisesti trietyyliamiinin, läsnä ollessa.

5 Yleisen kaavan II mukaisen lähtöyhdisteen valmistus tapahtuu 5a,10a-epoksidista III

o ΗΛ I _ ( III ) h3co ^ ^'° h3co ^ N/ [vertaa esim. Nedelec Bull. Soc. chim. France (1970), 2548],

Fenyyliryhmän liittäminen Ιΐβ-asemaan A9(10),5a-hydroksi-rakenteen IV muo-10 dostuessa saavutetaan Cu(I)-suolalla katalysoidulla Grignard-reaktiolla (Tetrahedron Letters 1979, 2051) p-bromibentsaldehydiketaalin, edullisesti p-bromibentsal-dehydidimetyyliketaalin kanssa 0 °C:n ja 30 °C:n välisessä lämpötilassa.

och3

h3co^I

_ ( IV } h3co^ '' ·: h3co ^ j ... 1 ’ : oh : Ryhmittymän -CH2-O-CH3 liittäminen 17-asemaan tapahtuu sinänsä tunnetun me- : : 15 netelmän mukaisesti spiroepoksidin V kautta antamalla reagoida trimetyylisulfo- • ’ . niumjodidin ja kalium-tert.-butanolaatin kanssa dimetyylisulfoksidissa [Hubner et.

ai.; J. prakt. Chem. 314, 667 (1972); Arzneim. Forsch. 30, 401 (1973] ja 7 112948 0CH3 H3C0 ^_ ( V )

H3c°J

h3co ^

OH

tämän jälkeen avaamalla rengas alkoholaateilla [Ponsold et. ai.; Z. Chem. 11, 106 (1971)]. Tällöin muodostuvat 17a-CH2-0-CH3-yhdisteet VI

och3

h3co^I

^J^ch2-o-ch3 ^_ ( VI )

h3co^I

H3CO ^ 1 * i

OH

5 voidaan lohkaista joko happamella hydrolyysillä, edullisesti p-tolueenisulfoni-hapolla asetonissa (Teutsch et. ai. DE 2 801 416) vastaaviksi aldehydeiksi tai sen ; · jälkeen, kun vapaat hydroksyyliryhmät on eetteröity alkyylihalogenideilla kalium- • ‘ ' tert.-butanolaatin läsnä ollessa, ne voidaan muuttaa ensiksi 5a,17p~dieettereiksi (Kasch et. ai. DD 290 893), jotka sitten voidaan muuttaa happamella hydrolyysillä, 10 edullisesti p-tolueenisulfonihapolla asetonissa vastaaviksi aldehydeiksi, minkä jälkeen saadut aldehydit muutetaan sitten yleisen kaavan II mukaisiksi yhdisteiksi an-: \t tamallareagoidahydroksyyliamiininkanssa.

:: Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettu yleisen kaavan I mukainen yhdiste . * . ; muutetaan mahdollisesti happoadditiosuolaksi, edullisesti fysiologisesti käytettävän *, : 15 hapon suolaksi. Tavanomaisia, fysiologisesti käytettäviä epäorgaanisia ja orgaanisia happoja ovat esimerkiksi suolahappo, bromivetyhappo, fosforihappo, rikkihappo, 112948 8 oksaalihappo, maleiinihappo, fumaarihappo, maitohappo, viinihappo, omenahappo, sitruunahappo, salisyylihappo, adipiinihappo ja bentsoehappo. Muita käyttökelpoisia happoja on kuvattu esimerkiksi julkaisuissa: Fortschritte der Arzneimittel-forschung, Bd. 10, sivut 224-225, Birkhäuser Verlag, Basel und Stuttgart, 1966 ja 5 Journal of Pharmaceutical Sciences, Bd. 66, sivut 1-5 (1977).

Happoadditiosuoloja saadaan yleensä sinänsä tunnetulla tavalla sekoittamalla vapaaseen emäkseen tai sen liuoksiin vastaavaa happoa tai sen liuoksia orgaanisessa liuottimessa, esimerkiksi alemmassa alkoholissa, kuten metanolissa, etanolissa, n-propanolissa tai isopropanolissa tai alemmassa ketonissa, kuten asetonissa, metyy-10 lietyyliketonissa tai metyyli-isobutyyliketonissa tai eetterissä, kuten dietyylieette-rissä, tetrahydrofuraanissa tai dioksaanissa. Mainittujen liuottimien seoksia voidaan myös käyttää, jotta kiteet erottuisivat paremmin. Tämän lisäksi voidaan valmistaa kaavan I mukaisen yhdisteen happoadditiosuolojen fysiologisesti käytettäviä, vesipitoisia liuoksia.

15 Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolat voidaan muuttaa sinänsä tunnetulla tavalla, esimerkiksi alkaleilla tai ioninvaihtimilla, vapaaksi emäkseksi. Vapaasta emäksestä voidaan saada muita suoloja antamalla reagoida epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa, erityisesti sellaisten kanssa, jotka soveltuvat terapeuttisesti käytettävien suolojen muodostukseen. Näitä tai myös muita uuden yhdis-20 teen suoloja, kuten esimerkiksi pikraattia, voidaan käyttää myös vapaan emäksen puhdistamiseksi siten, että vapaa emäs muutetaan suolaksi, tämä erotetaan ja suolas-;; ta saadaan jälleen emäs.

Esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuja yhdisteitä voidaan • · käyttää lääkeaineissa, jotka on tarkoitettu annettaviksi suun kautta, peräsuolen kaut-! 25 ta, ruiskeena ihonalaiseen kudokseen, laskimoon tai lihakseen ja, jotka sisältävät ta- ;; vanomaisten kantaja- ja laimennusaineiden ohella vaikuttavana aineena yleisen kaavan I mukaista yhdistettä tai sen happoadditiosuolaa.

•: - Tällaiset lääkeaineet valmistetaan tunnetulla tavalla tavanomaisten, kiinteiden tai . ·. nestemäisten kantaja-aineiden tai laimennusaineiden ja tavallisesti käytettyjen, far- 30 maseuttis-teknisten apuaineiden kanssa halututtua antotapaa vastaaviksi, annostuk-; ·' sen ollessa sopiva. Edullisena pidetyt valmisteet koostuvat oraaliseen käyttöön so- : veltuvasta antomuodosta. Tällaisia antomuotoja ovat esimerkiksi tabletit, kalvotab- letit, lääkerakeet, kapselit, pillerit, jauheet, liuokset tai suspensiot tai depot-muodot.

112948 9

Luonnollisesti kyseeseen tulevat myös parenteraaliset valmisteet, kuten injektio-liuokset. Edelleen mainittakoon valmisteina esimerkiksi myös peräpuikot.

Vastaavia tabletteja voidaan saada esimerkiksi sekoittamalla vaikuttavaan aineeseen tunnettuja apuaineita, esimerkiksi inerttejä laimennusaineita, kuten dekstroosia, so-5 keriä, sorbitolia, mannitolia, polyvinyylipyrrolidonia, hajotusaineita, kuten maissi-tärkkelystä tai algrinihappoa, sideaineita, kuten tärkkelystä tai gelatiineja, liukuai-neita, kuten magnesiumstearaattia tai talkkia ja/tai depotvaikutuksen aikaansaamiseksi käytettäviä aineita, kuten karboksipolymetyleeniä, karboksimetyyliselluloo-saa, selluloosa-asetaattiftalaattia tai polyvinyyliasetaattia. Tabletit voivat myös 10 koostua useammista kerroksista.

Vastaavasti lääkerakeita voidaan valmistaa päällystämällä tablettien mukaisesti valmistetut ydinosat tavallisesti lääkerakeiden päällyksissä käytetyillä aineilla, esimerkiksi polyvinyylipyrrolidonilla tai shellakalla, arabikumilla, talkilla, titaanidioksidilla tai sokerilla. Tällöin lääkerakeen kuori voi myös koostua useammista kerrok-15 sista, jolloin voidaan käyttää edellä tablettien kohdalla mainittuja apuaineita.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettua vaikuttavaa ainetta sisältävät liuokset tai suspensiot voivat lisäksi sisältää makua parantavia aineita, kuten sakkarii-nia, syklamaattia tai sokeria sekä esim. aromiaineita, kuten vanilliinia tai appelsiini-uutetta. Ne voivat tämän lisäksi sisältää suspendointiapuaineita, kuten natriumkar-20 boksimetyyliselluloosaa tai säilöntäaineita, kuten p-hydroksibentsoaatteja. Vaikut-tavia aineita sisältäviä kapseleita voidaan valmistaa esimerkiksi siten, että vaikutta-' : vaan aineeseen sekoitetaan inerttiä kantaja-ainetta, kuten maitosokeria tai sorbitolia \ ja ne suljetaan gelatiinikapseleihin.

Sopivia peräpuikkoja voidaan valmistaa esimerkiksi sekoittamalla vaikuttavaan ai-:' 25 neeseen tarkoitukseen soveltuvia kantaja-aineita, kuten neutraalirasvoja tai polyety- r leeniglykolia tai niiden johdannaisia.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut Ιΐβ-substituoidut bentsaldoksiimi-estra-4,9-dieenit ovat antigestageenisesti vaikuttavia aineita, joilla havaitaan in vivo vaikutuksen ollessa ylivoimainen (vrt. taulukko 2) RU 486:teen verrattuna selvästi ; 30 alentunut antiglukokortikoidinen aktiviteetti, mikä voidaan osoittaa alentuneella : glukokortikoidi-reseptoriin sitoutumisella (vrt. taulukko 1).

ίο 112948

Taulukko 1

Valittujen esimerkissä 1 ja 2 esitettyjen aineiden reseptoriin sitoutuminen

Seuraavan esimerkin mukainen Suhteellinen molaarinen sitoutumisaf-yhdiste finiteetti (RBA) [%] glukokortikoidi- __reseptoriin (Deksametasoni = 100 %) 1 (J914)__73_ 2 (J900)__66_

Vertailu RU 486 (Mifepristone)__685_ ZK 98299 (Onapristone)__39_

On odotettavissa, että keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut antigestagee-5 nit aiheuttavat tällä ominaisuuksien yhdistelmällä progesteronin ylivoimaisen estymisen, antiglukokortikoidisen aktiviteetin ollessa samanaikaisesti alentunut. Tämä etu on relevantti erityisesti niissä indikaatioissa, jotka vaativat hoidon keston vuoksi erityisen hyvää siedettävyyttä. Kuukautiskierron aikana kiertävät estrogeenit vaikuttavat ratkaisevasti kohdun painoon. Kohdun painon aleneminen ilmoittaa estrogee-10 nien tämän toiminnan estymisen. Todettu, RU 486:een nähden selvästi parempi kohdun painoon kohdistuvan vaikutuksen estyminen marsulla kierron aikana viittaa keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen yhdisteiden (epäsuoriin) antiest-rogeenisiin ominaisuuksiin. Vastaavista ominaisuuksista voidaan odottaa erityisen suotuisaa vaikutusta patologisesti muuttuneisiin kudoksiin, joissa estrogeenit vä-‘; 15 liitävät kasvuimpulsseja (endometrioosipesäkkeet, myoomat, rintarauhasen ja suku- :': puolielinten karsinoomat eli syöpäkasvaimet, eturauhasen hyvänlaatuinen hypertro- \ fia eli liikakasvu).

112948 11

Taulukko 2 RU 486:n ja J 914:n (esimerkki 1) ja J 900:n (esimerkki 2) keskenmenon aiheuttava vaikutus rotalla raskauden 5.-7. päivänä tapahtuneen subkutaanisen annon jälkeen (annostelu 0,2 ml/eläin/päivä bentsyylibentsoaatti/risiiniöljyssä [1 + 4 v/v]).

Ryhmä Annos Täydellinen raskauden estymi- ed 50 ++

Aine_mg/eläin/päivä nen+__mg/eläin/päivä __N*/N_%__

Kantaja-aine _0/25_0__ RU 486 3,0_5/5_JOO__ _ 10_2/5_40__U_ _0J_0/5_0__ J 900_Ιβ_9/10_90_0,6_ _0J_0/5_0__ J 914_3J0_5/5_^00__ __M>_7/10_70_Οβ_ _Οβ_J/5_20__ 0,1 0/6 [O ~ 5 + = tyhjä kohtu , , N = kaikkien naaraiden lukumäärä ‘ · * N* = ei raskaana olevien naaraiden lukumäärä .: -H- = graafinen määritys 10 Seuraavat esimerkit selventävät keksintöä.

Esimerkit

Esimerkki 1 liiti 180 mg lip-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia asetyloidaan 5 ml.ssa asetanhydridi/pyridiiniä (1 : 1). Sen jäl-• 15 keen, kun on lisätty vettä, uutetaan kolme kertaa etikkaesterillä, orgaaninen faasi , . pestään laimennetulla suolahapolla ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haih dutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 172 mg raakatuotetta, joka puhdistetaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF254+366:lla käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/asetonia 4:1.

12 112948

Saadaan 115 mg lip-[4-(asetyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17P-metoksi-17a-me-toksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia. Tuote kiteytyy etikkaesteristä.

Sulamispiste: 115-120 °C (etikkaesteri) αϋ = + 218° (CHC13) 5 IR-spektri KBr:ssä (cm'1): 1754 (OAc); 1654 (C=C-C=C-C=0); 1602 (fenyyli) UV-spektri MeOH.ssa Xmax = 271 nm ε = 28 157 ληιαχ ; 297 nm ε “ 26 369 ^-NMR-spektri CDCl3:ssa [6, ppm]: 0,511 (s, 3H, H-18); 2,227 (s, 3H, 10 OCOCH3); 3,247 (s, 3H, 17β-ΟΟΗ3); 3,408 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,386, 3,431, 3,544, 3,580 (m, 2H, CH2OCH3); 4,399 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-lla); 5,785 (s, 1H, H-4); 7,242, 7,266, 7,618, 7,647 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,315 (s, 1H, CH=NOAc) MS m/e: 446 C28H32NO4 M+ - CH2OCH3 +.

15 Esimerkki 2 210 mg:aan 11 p-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi- 17a-metoksime-tyyli-estra-4,9-dien-3-onia tiputetaan 5 ml:ssa pyridiiniä 0,3 ml kloorimuurahais-happoetyyliesteriä vedellä jäähdyttäen. Tällöin muodostuu valkoinen sakka. 30 minuutin kuluttua lisätään vettä, jolloin syntyy liuos, tämän jälkeen muodostuu val-. . 20 koinen sakka, joka imusuodatetaan ja pestään vedellä. Saanto on kuivauksen jälkeen 133 mg. Vesipitoinen faasi uutetaan kloroformilla, pestään laimennetulla suolaha-'; ‘ polla ja vedellä, kuivataan ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Saanto on 66 mg.

:.: Molemmat kiinteät aineet yhdistetään ja suoritetaan preparatiivinen kerroskromato- grafia silikageeli 60 PF254+366:lla käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/asetonia ;;· 25 4:1.

Saadaan 150 mg 11 P-[4-(etoksikarbonyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia, joka kiteytetään uudelleen asetoni/hek-saanista.

Sulamispiste: 137-148 °C

30 aD = + 204° (CHCI3) ; - ‘ UV-spektri MeOH:ssa λmax = 270 nm ε = 27 094 • Xmax= 297 nm ε = 25 604

> I

112948 13 ^-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,507 (s, 3H, H-18); 1,383 (t, 3H, J = 7,0 Hz, OCH2CH3); 3,246 (s, 3H, 17P-OCH3); 3,410 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,39 - 3,56 (m, 2H, CH2OCH3); 4,35 (d, 1H, J = 7,0 Hz, H-lla); 5,784 (s, 1H, H-4); 7,23, 7,26, 7,61, 7,64 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,303 (s, 1H, 5 CH=NR) MS m/e: 431,24701 C28H33NO3 M+- C2H5OCOOH.

Esimerkki 3 190 mg 1 ip-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia suspendoidaan 10 ml:aan tolueenia. Sitten lisätään peräkkäin 10 0,5 ml fenyyli-isosyanaattia ja 1 ml trietyyliamiinia. Sekoitetaan 3 tuntia huoneen lämpötilassa, tämän jälkeen kuumennetaan 2 tuntia paluujäähdyttäen, valkoinen sakka imusuodatetaan ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 310 mg vaaleanruskeata kiinteätä ainetta, joka puhdistetaan suorittamalla prepara-tiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF-254+366:lla käyttäen eluointiaii.e- 15 seoksena tolueeni/asetonia 9:1.

Eristetään 65 mg 17P-metoksi-17a-metoksimetyyli-11 β- {4-[(fenyyliaminokarbo-nyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-estra-4,9-dien-3-onia.

Sulamispiste: 241-246 °C (asetoni) • 0 aD = + 178° (CHCI3) ·' ·',·* 20 UV-spektriMeOH:ssa Xmax = 238 nm ε = 29 444 : _: ’: λιηηχ = 300 nm ε = 29 649 ί . ·· ^-NMR-spektri CDCl3:ssa [5, ppm]: 0,474 (s, 3H, H-18); 3,245 (s, 3H, 17β- , j* OCH3); 3,405 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,406-3,545 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a- Γ: CH2OCH3); 4,413 (d, 1H, J = 6,8 Hz, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,264 (m, 5H, 25 aromaatti); 7,272, 7,293, 7,548, 7,575 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systee-·:·· mi); 8,0 (s, 1H, CH=N-) MS m/e: 431,24249 C28H33NO3 M+-C6H5CNO + H2O.

: Esimerkki 4 708 mg lip-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-: 30 estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan 15 ml:aan tolueenia. Sitten lisätään peräkkäin 1,5 ml etyyli-isosyanaattia ja 3 ml trietyyliamiinia. Sekoitetaan 6 tuntia huoneenlämpötilassa, tämän jälkeen annetaan seistä yön ajan, lisätään 20 ml vesipitoista ammoniakkiliuosta, faasit erotetan, uutetaan tolueenilla, pestään vedellä, vesipitoi- 112948 14 sella ammoniumkloridiliuoksella ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 800 mg vaaleankeltaista kiinteätä ainetta, joka puhdistetaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF254+366:lla käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/asetonia (9 : 1).

5 Eristetään 610 mg 11 p-{4-[(etyyliaminokarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-17P-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3 -onia.

Sulamispiste: 142-147 °C hajoaminen valossa (eetteri/asetoni/heksaani) ^-NMR-spektri CDCl3:ssa [6, ppm]: 0,522 (s, 3H, H-18); 1,241 (t, 3H, J = 7,5 Hz, NHCH2CH3); 3,253 (s, 3H, 17p-OCH3); 3,415 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,366-10 3,574 (m, 4H, ABX-systeemi, 17a-CH20CH3, NHCH2CH3); 4,410 (d, 1H, J = 7,2

Hz, H-11a); 5,790 (s, 1H, H-4); 6,238 (m, 1H, NHCO); 7,258, 7,286, 7,561, 7,589 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,294 (s, 1H, CH=N-).

Esimerkki 5 500 mg 11 β-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-metoksi-17a-metoksimetyyli-15 estra-4,9-dien-3-onia sekoitetaan 4 ml:ssa propionihappoanhydridi/pyridiiniä 1 : 1 (v/v) 2,5 tunnin ajan suojakaasuatmosfäärissä. Kaadetaan jääveteen, liimamainen massa uutetaan kloroformilla, orgaaninen faasi pestään laimennetulla suolahapolla . y; ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Vaa- . . ·. leankeltainen vaahto puhdistetaan kromatografoimalla ja kiteytetään uudelleen etik- .·, 20 kaesteristä. Saanto: 306 mg l^-[4-(propionyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17p- . ! metoksi- 17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia.

'j’ Sulamispiste: 110-114 °C (etikkaesteri) ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,515 (s, 3H, H-18); 1,241 (t, 3H, J = 7,6 Hz, OCOCH2CH3); 3,253 (s, 3H, 17β-ΟΟί3); 3,415 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,4-3,6 25 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH20CH3); 4,128 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-l la); 5,790 (s, 1H, H-4); 7,244, 7,271, 7,627, 7,655 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-sys-*.: ‘ i teemi); 8,322 (s, 1H, CH=N-).

Esimerkki 6 170 mg: aan 11 P-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-metoksi-17a-metoksime-30 tyyli-estra-4,9-dien-3-onia 5 ml:ssa metanolia lisätään jäällä jäähdyttäen eetteripi-toista diatsometaaniliuosta, kunnes tapahtuu heikko keltaiseksi värjäytyminen. Sit- 112948 15 ten sekoitetaan 2 tuntia 5 °C:ssa, tähän lisätään laimennettua natronlipeätä, uutetaan eetterillä, pestään neutraaliksi, kuivataan natriumsulfaatilla ja orgaaninen faasi haihdutetaan alennetussa paineessa. Keltainen hartsi puhdistetaan suorittamalla pre-paratiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF254+366:lla käyttäen eluoin- 5 tiaineseoksena tolueeni/asetonia (4 : 1).

Saadaan 110 mg 11P-[4-(metoksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-hydroksi-17oc-metok-simetyyli-estra-4,9-dien-3-onia värittöminä levyinä.

Sulamispiste: 83-89 °C aD = + 197° (CHCI3) 10 IR-spektri CHCI3 (cm-1): 1700 (C=NOCH3>; 1649 (C=C-C=C-C=0); 1590 (aromaatti) UV-spektri MeOH:ssa λmax = 275 nm ε = 23 098 λ-max = 300 nm ε ~ 22 872 ^-NMR-spektri CDCl3.ssa [δ, ppm]: 0,529 (s, 3H, H-18); 3,247 (s, 3H, 17β-15 OCH3); 3,408 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,39-3,598 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH2OCH3); 4,381 (d, 1H, J = 7,5 Hz, H-lla); 5,773 (s, 1H, H-4); 7,173, 7,201, 7,463, 7,491 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,023 (s, 1H, CH-fenyyli).

Esimerkki 7 20 500 mg:aan lip-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-173-metoksi-17a-metoksi- V metyyli-estra-4,9-dien-3-onia lisätään suodatettu seos, jossa on 2 ml bentsoyyliklo- ridia ja 3 ml pyridiiniä. 2 tunnin kuluttua sekoitetaan 150 ml.aan jäävettä. Steroidi muodostuu liimamaisena massana. Tähän lisätään 5 ml laimennettua suolahappoa, ; liuotetaan etikkaesteriin, faasit erotetaan, orgaaninen faasi pestään vesipitoisella bi- 25 karbonaattilmoksella ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdu-tetaan alennetussa paineessa. Keltaisesta öljystä (1,57 g) poistetaan ei-polaariset tuotteet kromatografioimalla 40 g:lla silikageeli 60:tä käyttäen tolueeni/etikkaesteri-gradienttia. Pääfraktio (0,7 g) puhdistetaan suorittamalla preparatiivinen kerroskro-. ; matografia silikageeli 60 PF254+366’Ha käyttäen eluointiaineseoksena klorofor- 30 mi/asetonia. Saadaan 410 mg väritöntä vaahtoa, joka kiteytetään uudelleen me-tanolista.

Saadaan 263 mg lip-[4-(bentsoyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia värittöminä kiteinä.

112948 16

Sulamispiste: 115-122 °C (metanoli) c© = + 216° (CHCI3) UV-spektri MeOH.ssa λmax = 279 nm ε = 33 720 ^niax = 299 nm ε = 30 120 5 1H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,527 (s, 3H, H-18); 3,253 (s, 3H, 17β-OCH3); 3,415 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,403-3,589 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH2OCH3); 4,416 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-11a); 5,792 (s, 1H, H-4); 7,299-7,615 (m, 5H, aromaattiprotonit, CO-fenyyli); 7,701, 7,729, 8,111, 8,140 (m, 4H, aromaat-tiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,520 (s, 1H, CH-fenyyli).

10 Esimerkki 8

Reseptorin sitoutumisaffiniteetin mittaus: 3

Reseptorin sitoutumisaffiniteetti määritettiin spesifisesti sitovan H-leimatun hormonin (tracer) ja testattavan yhdisteen kompetitiivisella sitoutumisella eläinten kohde-elimistä saadun sytosolin reseptoreihin. Tällöin pyrittiin reseptorin satuiM-15 miseen ja reaktiotasapainoon. Valittiin seuraavat inkubointiolosuhteet:

Glukokortikoidireseptori: kateenkorvasytosoli, saatu rotalta, jolta on poistettu lisä- 3 munuaiset, kateenkorvia säilytetty -30 °C:ssa; Puskuri: TED. Tracer: H-deksame-tasoni, 20 nM; Vertailuaine: deksametasoni.

Sen jälkeen, kun oli inkuboitu 18 tuntia 0-4 °C:ssa, tapahtui sitoutuneen ja vapaan ' : 20 steroidin erottaminen sekoittamalla aktiivihiili/dekstraania (1 %/0,l %), sentrifugoi- • 3 maila ja mittaamalla sitoutunut H-aktiviteetti päällä olevasta kerroksesta.

; Konsentraatiosarjojen mittaustuloksista määritettiin IC50 testattavalle yhdisteelle ja vertailuaineelle ja molempien arvojen osamääränä (x 100 %) suhteellinen molaari-nen sitoutumisaffiniteetti.

; 25 Esimerkki 9

Rotan varhaisraskauden estäminen:

Naarasrottien annetaan pariutua proestrus-vaiheessa. Osoittamalla siemennesteen . esiintyminen vaginan sivelynäytteissä seuraavana päivänä lasketaan tämä päivä ras- , kauden ensimmäiseksi päiväksi (=dl). Käsittely testiaineella tai kantaja-aineella ta- 30 pahtuu 5.-7. päivänä, ruumiinavaus tapahtuu 9. päivänä. Aineet annetaan 0,2 ml:ssa kantaja-ainetta (bentsyylibentsoaatti/risiiniöljy 1+4) ruiskeena ihonalai- 112948 17 seen kudokseen. Eri ryhmien täydellisesti estyneiden raskauksien arvot käyvät ilmi taulukosta 1. Todettiin, että yhdisteet J 917 ja J 900 estivät yhdisteeseen RU 486 verrattuna selvästi paremmin hedelmöityneen munasolun kohdun limakalvoon kiinnittymisen.

Claims (2)

112948