SK279160B6 - Rastlinná bunka exprimujúca asn-a, génový konštruk - Google Patents

Rastlinná bunka exprimujúca asn-a, génový konštruk Download PDF

Info

Publication number
SK279160B6
SK279160B6 SK165-91A SK16591A SK279160B6 SK 279160 B6 SK279160 B6 SK 279160B6 SK 16591 A SK16591 A SK 16591A SK 279160 B6 SK279160 B6 SK 279160B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
asn
gene
plants
plant
ppt
Prior art date
Application number
SK165-91A
Other languages
English (en)
Inventor
Denes Dudits
Katalin Paulovics
Katalin Kalman
J�Nos Gy�Rgyey
Ferenc Nagy
L�Szl� Bako
G�Bor Horvath
Peter Eckes
G�Nter Donn
Original Assignee
Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Aktiengesellschaft filed Critical Hoechst Aktiengesellschaft
Publication of SK279160B6 publication Critical patent/SK279160B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8277—Phosphinotricin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka rastlinnej bunky exprimujúcej prokaryotickú amoniak-špecifickú asparagínsyntetázu (ASN-A), rastlín, semien, alebo množiteľného materiálu obsahujúceho tieto rastlinné bunky. Ďalej sa týka génového konštruktu, obsahujúceho gén kódujúci ASN-A a vektora s týmto génovým konštruktom. Nakoniec sa týka použitia uvedeného génu v rastlinnej bunke.
Doterajší stav techniky
Asparagín má dôležitú úlohu ako transportná forma dusíka a v mnohých rastlinách, vrátane tých, ktoré fixujú dusík, je základnou zlúčeninou v transporte dusíka z koreňov do transpiračného prúdu. V rastlinách sa asparagín tvorí z glutamínu, aspartátu a ATP za katalýzy asparagínsyntetázou ASN (E.C.6.3.5.4), pričom sú vedľajšími produktmi glutamát, AMP a pyrofosfát.
Teraz sa zistilo, že prokaryotická, od amoniaku závislá asparagínsyntetáza ASN (E.C.6.3.1.1) môže byt zavádzaná do rastlinných buniek, čo vedie k transgénnym rastlinám, ktoré vykazujú značné výhody: majú účinnejšiu fixáciu fotosyntetického CO2 v pletive, zvýšenú rýchlosť rastu, zrýchlený vývoj, skoršiu tvorbu kvetov, zväčšenú zelenú hmotu a hmotnosť suchej rastliny. Plochy, na ktorých rastliny rastú, tak môžu byť rozšírené do oblastí s menej priaznivou klímou a v oblastiach s teplou klímou sú napríklad možné tri zbery úrody namiesto dvoch. Ďalej transgénne rastliny tolerujú aplikáciu inhibítorov glutamínsyntetázy (GS), napr. fosfínotricínu (PPT) alebo metionínsulfoximinu (MSX) a vždy vykazujú stimuláciu fotosyntézy a rastu pri aplikácii takýchto inhibítorov.
Oproti ASN kódujúcemu génu (alebo génom) vyšších rastlín (asn gen) kóduje ASN-A gen E. coli rôzne typy ASN, ktoré využívajú amoniak skôr ako glutamín na produkciu asparagínu (Cedar a Schwarz (1969) J. Biol. Chem. 244, 41 12-4121). Gén pre tento enzým bol izolovaný a charakterizovaný Nakamurom a spol. (1981) Nucleic Acids Research 9, 4669-4676. Bolo zistené, že tento prokaryotický enzým je aktívny v rastlinách a bola tak otvorená nová cesta asimilácie amoniaku v týchto transgénnych rastlinách, ktorá vedie k zmene metabolizmu v rastlinách so stimulačným účinkom na rast a tvorbu zelenej hmoty.
Za normálnych podmienok v transformantoch tak GS, ako aj ASN-A využívajú amoniak. Výhoda bakteriálneho spôsobu je zreteľnejšia počas neprístupu svetla, keď je limitovaná aktivita chlóroplastovej GS znížením dostupnosti ATP, energetického zaťaženia a iónov horčíka. (O’Neal a Joy (1974), Plánt Phys. 54, 773-779; Joy (1988) Can. J. Bot. 66, 2103-2109). Navyše expresia bakteriálneho asn-A génu v rastlinách ešte umožňuje asimiláciu amoniaku, ak je rastlinná GS blokovaná špecifickými ihhibítormi podobnými PPT. V netransformovaných rastlinách narušuje inhibícia aktivity GS využitie amoniaku hlavným koreňom a akumulácia amoniaku je jedným z kľúčových faktorov letality ošetrených rastlín (Tachibana a spol. (1986) J. Pesticíde Sci. 11,33-37). Prítomnosť bakteriálneho enzýmu tak znižuje akumuláciu v PPT-ošetrených transgénnych rastlinách, ktoré nielen môžu prežívať dávky herbicídov, ktoré sú letálne pre divoký typ rastlín, ale takto ošetrená transgénna rastlina vykazuje stimuláciu rastu.
Odborníkom bude zrejmé, že tieto pozitívne účinky nie sú obmedzené na ASN-A gén. z E. coli, pretože rovnaký gén alebo gén, ktorý má rovnakú schopnosť amidácie aspa ragínovej kyseliny a jej solí za vzniku asparagínu obsahujú aj iné baktérie.
Podstata vynálezu
Predložený vynález sa týka použitia prokaryotického ASN-A génu v rastlinnej bunke, konštruktu génu, obsahujúceho gén, kódujúci prokaryotickú ASN-A, operatívne pripojenú k regulátorovej sekvencii, ktorý umožňuje expresiu tohto génu v rastlinnej bunke, vektora, obsahujúceho takýto konštrukt génu, rastlinnej bunky transformovanej takto konštruovaným génom alebo vektorom a expresiu prokaryotickej amoniak špecifickej asparagínsyntetázy v rastline, obzvlášť kultúrnej rastline a semien alebo rozmnožovacieho materiálu rastlín, ktoré obsahujú definované transformované bunky.
Výhodné spôsoby realizácie zahŕňajú použitie E. coli ASN-A génu kódujúceho uvedený enzým a syntetických génov, kódujúcich tento enzým, obzvlášť génov, obsahujúcich kodóny, ktoré sú zvlášť vhodné pre rastliny. Vynález tiež zahŕňa také gény, ktoré kódujú enzýmy s rôznym zložením aminokyselín ako prírodné enzýmy, ale v podstate s rovnakou katalytickou aktivitou delécií alebo adícií kodónov alebo premiestnením kodónov v prírodných génoch, ktoré kódujú rôzne aminokyseliny. Všetky tieto modifikácie budú odborníkom zrejmé.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Expresia E. coli ASN-A génu v tabaku s malou podjednotkou promótora RUBISCO
1. Produkcia transgénnych rastlín tabaku
Vztiahnuté na celú nukleotidovú sekvenciu ASN-A génu z F. coli (Nakamura a spol., (1981) Nucleic Acids Research 18, 4673, obr. 3) bol reklonovaný Pstl-Hgal fragment z plazmidu pMY114 do pUC9. Potom bol ASNA gén (1,1 kb) pripojený k promótora malej podjednotky génu na hrachovú ribulózu-l,5-bifosfát-karboxylázu (RUBISCO, Herrera-Estrella a spol. (1984) Náture 310, 115-120) a celý fragment bol zavedený do Agrobacterium vektora pPCVOOl (Koncz a Schell (1986) Mol. Gen. Genet. 204, 383-396). Po listovej diskovej transformácii SRI tabakových rastlín boli transgénne rastliny identifikované na základe ich rezistencie proti kanamycínu. Z transformantov boli vybraté dve rastliny (ASP4, ASP5), ktoré vykazovali toleranciu proti ošetreniu 1 kg/ha PPT. Následkom tohto PPT ošetrenia boli SRI kontrolné rastliny úplne zničene a nebolo možné nájsť také, ktoré by boli schopné kvitnúť a produkovať semená. ASP4 a ASP5 transformanty vykazujú symptómy iba na menších a starších listoch, zatiaľ čo meristematická oblasť inhibíciu prekonáva. Pri pokračovaní v raste tieto rastliny kvitnú a produkujú semená.
Prirodzenou selekciou ASP4 a ASP5 transgénnych tabakových rastlín došlo k rozdeleniu populácie semenáčkov na sexuálne rezistentné a senzitívne potomstvo. Za podmienok in vitro s použitím prítomnosti 10 μΜ L-PPT v kultivačnom médiu bolo zrejmé rozdelenie medzi dvomi fenotypmi.
Prítomnosť ASN-A sekvencie v genóme transformantov bola tiež preukázaná hybridizáciou DNA podľa Southema. Po digescii rastlinných DNA EcoRI bol v transformovaných rastlinách zistený hybridizačný fragment. Not2
SK 279160 Β6 hem-hybridizačnou analýzou bolo v RNA izolované z ASPS transformantu in vitro detegované malé množstvo mRNA, ktorá je homologická s ASN-A génom.
2. Redukovaná akumulácia amoniaku v transgénnych tabakových rastlinách
Inhibícia GS aktivity PPT ošetrením vyvoláva rýchle zvýšenie koncentrácie amoniaku v listoch kontrolných tabakových rastlín. Rýchlosť akumulácie meraná mikrodifúznou metódou a nasledovne Nesslerovou metódou (Shalp a spol. (1985) Can. J. Bot. 63, 1135-1140) závisí od koncentrácie aplikovaného herbicídu.
Pri dávke 0,5 kg/ha prekonávajú transgénne rastliny pôsobenie ošetrenia PPT (tab.l).
Tabuľka 1
Akumulácia amoniaku v kontrolných tabakových rastlinách (SR1) a v transgénnych rastlinách s ASN-A po postreku 0,5 kg/ha PPT
Hodiny koncentrácia amoniaku (mM)
SR1 ASP4 AS5
do 4 0,58 0,42 0,40
e 1,20 0,82 0,78
24 1.70 0,70 0,75
48 1,95 0,60 0,50
Znížená hladina akumulácie je tiež zrejmá v týchto rastlinách v porovnaní s SRI tabakovými rastlinami po postreku dávkou 1 kg/ha (tabuľka 2). Stanovená nižšia hladina amoniaku zodpovedá nižšiemu predpokladanému poškodeniu transformovaných rastlín.
Tabuľka 2
Účinky 1 kg/ha PPT na koncentráciu amoniaku v tabakových (SRI) a transgénnych rastlinách (ASP4, ASP5)
Hodiny koncentrácia amoniaku (mM)
SR1 ASP4 AS5
až do 6 0.8 0.78 0,88
8 2.2 0,87 0,95
24 4,9 2,0 1,40
48 8,6 4.1 3,6
3. Stimulácia rastu a vývoja rastlín
Detailné porovnanie rastu medzi kontrolou a ASP rastlinami vykazuje výrazné rozdiely: pre transgénne rastliny bola charakteristická zvýšená rýchlosť rastu, ale výraznejšia stimulácia bola dosiahnutá ošetrením ASP rastlín malými dávkami PPT.
Základná ako i PPT indukovaná akcelerácia rastu môže byť demonštrovaná rôznymi typmi rastových kriviek. Obr. 1 ukazuje, že zatiaľ čo postrek 0,025 kg/ha PPT už inhibuje rast SRI rastlín, bola detegovaná pri oboch transformantoch veľká stimulácia. Postrek 0,05 kg/ha PPT mal negatívny vplyv na všetky rastliny. Každý bod predstavuje priemer troch rastlín.
Rozdiel medzi rôznymi krivkami za kontrolných a ošetrených podmienok je tiež detegovateľný, ak sa rast rastlín charakterizuje Baule Mitscherichovými krivkami (obr. 2) za podmienok rastu v skleníku. Inhibícia a stimulácia rastu môže byť tiež vyjadrená sklonom grafu, ktorý je charakterizovaný uhlami alfa, uvedenými na obr. 2.
4. Zvýšenie suchej hmotnosti v transgénnych rastlinách
Okrem rozdielov vo výške rastlín boli stimulačné účinky tiež detegované meraním suchej hmotnosti. Údaje uvedené v tabuľke 3 dokladujú vyššiu produktivitu ASN-A transformantov:
Tabuľka 3
Konečná suchá hmotnosť (g) kontroly (SRI) a transformatov (ASP4, ASP5)
Línia ošetrenie
kontrola 0,025kg/ha PPT
SR1 3,19 100% 2,76 100%
ASP4 3,85 120% 4,79 173%
ASP5 3,74 117% 5,05 183%
Príklad 2
Pôsobenie ASN-A génu riadeného CaMV35S promótorom v transgénnych rastlinách . Selekcia transgénnych rastlín
V alternatívnom pokuse boli zavedené plazmidové molekuly (pUCI nesúce E. coli ASN-A gén s CaMV35S promótorom do SRI listových protoplastov priamym príjmom DNA (R. X. Fang a spol.(1989) The Plánt Celí 1, 141-150). Transformanty boli priamo vybraté na základe ich PPT rezistencie.
Rastliny boli regenerované z mikrokalov kultivovaných za prítomnosti 10 μΜ LPPT. Southemova hybridizácia potvrdila prítomnosť ASN-A génu v DNA izolovanej z PPT rezistentných regenerantov.
2. Znížená akumulácia amoniaku a zlepšená PPT tolerancia v transgénnych rastlinách
Prirodzená selekcia transformantov vedie k rozdeleniu potomstva s rôznymi hladinami PPT rezistencie (médium doplnené až do 30 μΜ L-PPT). V súlade s rezistentným fenotypom akumulujú transformované rastliny menej amoniaku ako SRI rastliny, ak sú postriekané 1 kg/ha PPT (tabuľka 4).
Tabuľka 4
Akumulácia amoniaku po postreku rastlín 1 kg/ha PPT
Hodiny koncentrácia amoniaku (mM)
SR1 ASP70 ASP95
6 6,85 2,92 1,95
24 9,50 5,60 5,10
48 22,3 13,60 17,40
120 58,60 28,30 35,6
144 113,00 39,40 50,00
3. Účinnosť fotosyntézy
Kontrolné SRI a transgénne tabakové rastliny boli charakterizované rôznymi parametrami fotosyntézy, ako je rýchlosť fixácie CO2 (Szajko a spol., Acta Agr. Acad. Hung. 20, 247-260) a indukcia fluorescencie (Hideg a spol., 1986, Photobiochem. Photobiophys. 12, 221-230). Za podmienok pestovania v skleníku boli rastliny ošetrené rôznymi dávkami PPT a bol takisto stanovený obsah amoniaku. Ako je zrejmé z tabuľky 5, vykazujú transgénne rastliny s ASN-A génom značné zvýšenie účinnosti pletivovej CO2 fixácie v porovnaní s kontrolnými rastlinami. Aplikácia nízkej dávky PPT pri ošetrení môže ďalej stimulovať CO2 fixáciu, zatiaľ čo rozdiel medzi SRI rastlinami s alebo bez PPT (50 g/ha) ošetrenia nie je štatisticky významný. Tabuľka 5 poskytuje tiež údaje o tom, že v prípade tabakových rastlín inhibičná koncentrácia
PPT vyvoláva akumuláciu amoniaku s vážnym poškodením fotosyntézy inhibíciou transportu elektrónov a 50 % redukciou fixácie CO2. Za rovnakých podmienok transformované rastliny (A5P70) môžu tolerovať ošetrenie v súvislosti s funkciou fotosyntézy.
Tabuľka 5
Línia PPT kon- fixá- indukcia
ošet- cen- cia COj fluorescencie
renta trácia (μιηοΙ COydnŕxh) (v% kontroly SR1)
(g/ha) (mM) x ±sx n P1% Fm Fc Fi.Fo/Fm.Fo
SR1 0 0,37 38,17 12.05 20 - 100 100 0,45
50 2,00 44,23 17,73 20 - 101 102 0,44
750 34,35 19,54 12,42 20 * 80 194 0,59
ASP70 0 0,47 49,32 7.86 20 + 98 114 0,38
50 2,70 58,07 6,06 20 + 99 110 0.42
750 15,80 31,61 14,16 20 - 92 144 0.49
Analýzy boli vykonané 4 dni po PPT ošetrení.
4. Rast ASN-A rastlinných transformantov
Analýzy rýchlosti rastu (mm/deň) reprodukovateľné vykazujú zrýchlený rast transformantov počas skorého vývoja rastliny. Údaje uvedené v tabuľke sa týkajú rastlín v skleníku.
Tabuľka 6
Rýchlosť rastu (mm/deň) počas rôznych periód vývoja rastlín (skleník)
Línia I II periódy (6 dní) konečná výška rastlín (cm) VIII
III IV V VI Vil
SR1 0,29 0,45 0,27 0,52 0.75 1,31 1,93 1,37 41,08
Asp70/1 0.60 1,15 0.43 1,23 1,83 2,08 1,53 0.50 58,0 141%
Asp70/2 0,61 0,93 0,50 0,75 1.18 1,51 1.83 0,25 43.5 118%
SR1: priemer z 5 rastlín
ASP70/1 a ASP70/2: jednotlivé rastliny
Analýzy rastlín v poľných podmienkach vykazujú podobné rozdiely, aké boli pozorované v skleníku (tabuľka 7). Rýchlosť rastu ASP rastlín počas periódy I-III bola značne vyššia ako v prípade SR1 rastlín. V tomto pokuse bol tiež potvrdený v stimulačný účinok PPT na transgénne rastliny obzvlášť v poslednej rastovej perióde. Baule-Mitscherlichove krivky (obr. 3) zreteľne potvrdzujú, že ASP rastliny vykazujú rýchlejší rast ako kontrolné SR1 rastliny v poľných podmienkach.
Tabuľka 7
Rýchlosť rastu (mm/deň) počas rôznych periód vývoja rastlín (poľný pokus)
Ošetrenie-Linia I periódy (7 dní) konečná výška rastliny (cm)
II III IV
kontrola
SR1 0,36 0,85 1,31 3,24 42,5 100%
Asp70 0,45 1,07 1,50 3,14 47,6 112%
Asp95 0,45 1,14 1,92 3,24 51,5 121%
25 g/ha PPT
SR1 0.29 0,56 1,15 2,74 35,0 100%
Asp70 0,44 1.02 1.69 3,84 53.8 154%
Asp95 0,31 0,83 1.27 3,78 48,7 139%
Priemer z troch rastlín
5. Produktivita ASN-A transformantov
Ako je zrejmé z tabuľky 8, zvýšila sa celková zelená hmota ako aj suchá hmotnosť pri ASP rastlinách v porovnaní sSRl rastlinami. Bolo tiež zrejmé, že transgénne rastliny sú významne stimulované ošetrením PPT. Súčasne kontrolné SR1 rastliny už boli postrekom inhibované.
Tabuľka 8
Zelená hmota (g)
poľný test
kontrola 25g/ha PDT
Linia celkom listy celkom listy
% % % %
SR1 86,5 100 57,4 100 78,7 100 43,4 100
ASP70 95,2 110 62,3 108 139,9 178 92,41 213
ASP95 103,8 120 68,4 119 105,0 133 71,56 165
Suchá hmotnosť (g)
polný test
kontrola 25g/ha PPT
Línia celkom listy celkom listy
% % % %
SR1 6.66 100 4.83 100 6,42 100 5,05 100
ASP70 8,05 121 5,82 120 10.99 171 8,55 169
ASP95 8,48 127 6.34 131 8,96 142 6,78 134
Všetky údaje sú priemery z 5 rastlín.

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Rastlinná bunka, exprimujúca prokaryotickú amoniak-špecifickú asparagínsyntetázu (ASN-A).
  2. 2. Rastlina, semená alebo množiteľský materiál obsahujúci bunky podľa nároku 1.
  3. 3. Génový konštrukt obsahujúci gén kódujúci prokaryotickú ASN-A, operatívne pripojený k regulátorovej sekvencii, ktorá zabezpečuje expresiu tohto génu v rastlinnej bunke.
  4. 4. Génový konštrukt podľa nároku 3, v ktorom uvedená ASN-A je É. coli ASN-A.
  5. 5. Gén kódujúci E. coli ASN-A obsahujúci rastlinné špecifické kodóny.
  6. 6. Génový konštrukt obsahujúci gén podľa nároku 5, pod kontrolou regulátorovej sekvencie aktívnej v rastlinách.
  7. 7. Vektor obsahujúci génový konštrukt podľa nárokov 3, 4 alebo 6.
  8. 8. Rastlinná bunka transformovaná génovým konštruktom podľa nárokov 3,4 alebo 6 alebo vektorom podľa nároku 7.
  9. 9. Použitie prokaryotického ASN-A génu v rastlinnej bunke.
  10. 10. Použitie E. coli ASN-A génu v rastlinnej bunke.
SK165-91A 1990-01-26 1991-01-25 Rastlinná bunka exprimujúca asn-a, génový konštruk SK279160B6 (sk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP90101537 1990-01-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK279160B6 true SK279160B6 (sk) 1998-07-08

Family

ID=8203541

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK165-91A SK279160B6 (sk) 1990-01-26 1991-01-25 Rastlinná bunka exprimujúca asn-a, génový konštruk

Country Status (16)

Country Link
US (2) US5545819A (sk)
EP (1) EP0511979B1 (sk)
CN (1) CN1053641A (sk)
AU (1) AU7176891A (sk)
CZ (1) CZ283506B6 (sk)
DE (1) DE69103404T2 (sk)
DK (1) DK0511979T3 (sk)
HU (1) HUT65648A (sk)
MY (1) MY105446A (sk)
NZ (1) NZ236890A (sk)
PT (1) PT96577B (sk)
SK (1) SK279160B6 (sk)
TR (1) TR25404A (sk)
WO (1) WO1991011524A1 (sk)
YU (1) YU13191A (sk)
ZA (1) ZA91568B (sk)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5955651A (en) * 1989-05-03 1999-09-21 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
HUT65648A (en) * 1990-01-26 1994-07-28 Mta Biolog Kutato Intezete Transgenic plants expressing a prokaryotic ammonium dependent asparagine synthetase
WO1995009911A1 (en) * 1993-10-06 1995-04-13 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
US6864405B1 (en) 1993-10-06 2005-03-08 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
US6107547A (en) * 1993-10-06 2000-08-22 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
EP0801134A1 (en) * 1996-04-11 1997-10-15 Hoechst Schering AgrEvo GmbH Process for the production of plants with enhanced growth characteristics
WO1998036084A2 (en) * 1997-02-14 1998-08-20 Agricola Technologies, Inc. Enhancing plant growth using genes encoding for carbonic anhydrase, calcium binding protein, metal binding protein or biomineralization protein
CA2328394C (en) 1998-05-13 2012-08-07 Planttec Biotechnologie Gmbh Transgenic plants with modified activity of a plastidial adp/atp translocator
CA2536320A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and polypeptides encoded thereby useful for increasing plant size and increasing the number and size of leaves
US20060200878A1 (en) 2004-12-21 2006-09-07 Linda Lutfiyya Recombinant DNA constructs and methods for controlling gene expression
US7335760B2 (en) 2004-12-22 2008-02-26 Ceres, Inc. Nucleic acid sequences encoding zinc finger proteins
US8222482B2 (en) 2006-01-26 2012-07-17 Ceres, Inc. Modulating plant oil levels
EP1911847A1 (en) * 2006-10-09 2008-04-16 Genoplante-Valor Improvement of the kernel productivity of maize through the modulation of glutamine synthetase activity
EP3378953A1 (en) 2006-10-12 2018-09-26 Monsanto Technology LLC Plant micrornas and methods of use thereof
WO2008067840A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-12 Swetree Technologies Ab Plants having improved growth characteristics and method for making the same
AR066218A1 (es) * 2007-04-19 2009-08-05 Monsanto Technology Llc Plantas de maiz y semillas con contenido incrementado de asparagina y proteina
CN102121018A (zh) * 2010-12-22 2011-07-13 上海大学 一种具有天冬酰胺合成酶功能的基因、其编码蛋白及其应用
CN105132347B (zh) * 2015-07-27 2018-08-21 中国食品发酵工业研究院有限公司 一株高效转化l-天冬氨酸生产l-天冬酰胺的工程菌及其应用
CN105462993A (zh) * 2015-12-26 2016-04-06 浙江大学 植物抗病调控基因SlASN2及用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN87100603A (zh) * 1987-01-21 1988-08-10 昂科公司 抗黑素瘤疫苗
DE3719053A1 (de) * 1987-06-06 1988-12-15 Hoechst Ag Verbesserte nutzung von pflanzenverwertbarem stickstoff durch kulturpflanzen mit ueberexpression der glutaminsynthetase
US5256558A (en) * 1989-05-03 1993-10-26 The Trustees Of Rockefeller University Gene encoding plant asparagine synthetase
HUT65648A (en) * 1990-01-26 1994-07-28 Mta Biolog Kutato Intezete Transgenic plants expressing a prokaryotic ammonium dependent asparagine synthetase

Also Published As

Publication number Publication date
HU9202437D0 (en) 1992-10-28
DE69103404T2 (de) 1995-09-28
EP0511979A1 (en) 1992-11-11
HUT65648A (en) 1994-07-28
CS9100165A2 (en) 1991-09-15
EP0511979B1 (en) 1994-08-10
YU13191A (sr) 1996-01-09
DK0511979T3 (da) 1995-01-02
CN1053641A (zh) 1991-08-07
CZ283506B6 (cs) 1998-04-15
US5723762A (en) 1998-03-03
MY105446A (en) 1994-10-31
ZA91568B (en) 1991-10-30
WO1991011524A1 (en) 1991-08-08
DE69103404D1 (de) 1994-09-15
NZ236890A (en) 1993-03-26
PT96577A (pt) 1991-10-15
AU7176891A (en) 1991-08-21
TR25404A (tr) 1993-03-01
PT96577B (pt) 2001-04-30
US5545819A (en) 1996-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK279160B6 (sk) Rastlinná bunka exprimujúca asn-a, génový konštruk
EP1468096B1 (en) Selective plant growth using d-amino acids
KR100243996B1 (ko) 이미다졸리논-특이적 내성 ahas 서열 및 상기 내성을 수여하는 방법
KR100365969B1 (ko) 퀴놀레이트 포스포리보실 트랜스퍼라제 발현의 조절
KR20000010758A (ko) 트레할로스-6-포스페이트 수준의 변경에 의한 대사 조절
JPH09503389A (ja) 窒素同化の増加を示すトランスジェニック植物
Katayama et al. Production and characterization of transgenic rice plants carrying a high-affinity nitrate transporter gene (OsNRT2. 1)
CN110129358B (zh) 水稻Os01g32730基因的应用
CN112779270B (zh) 一种增强植物缺铁耐受及铁积累的功能基因及应用
JP2012507262A (ja) 窒素の摂取と利用が強化されたグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ｇａｄ）トランスジェニック植物
CN113293167A (zh) 控制番茄开花早晚的基因及应用
CN109182350A (zh) 玉米Zm675基因在植物品质改良中的应用
WO2024103636A1 (zh) 控制大豆共生固氮效率的蛋白质、基因及其载体和应用
CN114790230B (zh) 蛋白质TaARE1在调控植物耐低氮中的应用
CN111454987B (zh) GhNAC091基因在提高植物光合利用效率和强光耐受中的应用
CN117844819A (zh) ZmSht1基因及其在提高玉米耐高温强光胁迫中的应用
CN116063425A (zh) TaGS蛋白质或生物材料在调控植物耐盐碱性、或植物育种中的应用
CN110499326A (zh) Rgga在调控作物农艺性状中的应用
CN116064650A (zh) Mos3基因在调控植物抗盐性中的应用
Amir et al. T-DNA and “gain of function” tobacco mutants with altered threonine metabolism
CN109369787A (zh) 一种来自烟草的钾转运蛋白kup11及其编码基因与应用
HANDA et al. Date of Submission of the report: May 27, 2004 BARD Project Number: US-3132-99 Project Title: Enhancing Quality Attributes Of Potato And Tomato By Modifying And Controlling Their Oxidative Stress Outcome Investigators Institutions