CZ283506B6 - Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk - Google Patents

Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk Download PDF

Info

Publication number
CZ283506B6
CZ283506B6 CS91165A CS16591A CZ283506B6 CZ 283506 B6 CZ283506 B6 CZ 283506B6 CS 91165 A CS91165 A CS 91165A CS 16591 A CS16591 A CS 16591A CZ 283506 B6 CZ283506 B6 CZ 283506B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
plants
ppt
gene
plant
sri
Prior art date
Application number
CS91165A
Other languages
English (en)
Inventor
Denes Prof. Dr. Dudits
Katalin Paulovics
Katalin Kalman
János Györgyey
Ferenc Nagy
László Bako
Gábor Horvath
Peter Dr. Eckes
Günter Dr. Donn
Original Assignee
Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Aktiengesellschaft filed Critical Hoechst Aktiengesellschaft
Publication of CS9100165A2 publication Critical patent/CS9100165A2/cs
Publication of CZ283506B6 publication Critical patent/CZ283506B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8277—Phosphinotricin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Gen asnA, který kóduje prokaryotickou amoniak-specifickou asparaginsyntetázu (ASN-A) může být zaveden do rostlinných buněk. Takto transformované buňky a z nich vyvinuté rostliny nejen tolerují inhibitory glutaminsyntetázy, ale jsou takovými herbicidy účinně stimulovány.ŕ

Description

Asparagin hraje důležitou roli jako transportní forma dusíku v mnoha rostlinách, včetně těch, které fixují dusík, přičemž je základní sloučeninou v transportu dusíku z kořenů do transpiračního proudu. V rostlinách se asparagin tvoří z glutaminu, aspartátu a ATP za katalýzy asparaginsyntetázou ASN (E.C.6.3.5.4), přičemž vedlejšími produkty jsou glutamát, AMP a pyrofosfát.
V poslední době bylo zjištěno, že prokaiyotická, na amoniaku závislá, asparaginsyntetáza ASN (E.C.6.3.1.1) může být zaváděna do rostlinných buněk, což vede ktransgenním rostlinám, které vykazují značné přednosti: rostliny vykazují účinnější fixaci fotosyntetického CO2, zvýšenou rychlost růstu, zrychlený vývoj, časnější tvorbu květů, zvětšenou zelenou hmotu a hmotnost suché rostliny. Plochy, na kterých rostliny rostou, tak mohou být rozšířeny do oblastí s méně příznivým klimatem a v oblastech s teplým klimatem jsou například možné tři sklizně místo dvou. Dále transgenní rostliny tolerují aplikaci inhibitorů glutaminsyntetázy (GS), například fosfinotricinu (PPT) nebo methioninsulfoximinu (MSX), a vždy vykazují stimulaci fotosyntézy a růstu při aplikaci takových inhibitorů.
Oproti ASN kódujícímu genu (nebo genům) vyšších rostlin (asn gen) kóduje asnA gen E.coli různé typy ASN, které využívají amoniak spíše než glutamin pro produkci asparaginu, viz. Cedar a Schwartz (1969) J. Biol. Chem. 244, (4112-4121). Gen pro tento enzym byl izolován a charakterizován Nakamurou a kol. (1981) Nucleic Acids Research 9, 4669-4676. Bylo zjištěno, že tento prokaryotický enzym je aktivní v rostlinách, přičemž tak byla otevřena nová cesta asimilace amoniaku v těchto transgenních rostlinách. Tyto faktory vedou ke změně metabolismu v rostlinách se stimulačním účinkem na růst a tvorbu zelené hmoty.
Za normálních podmínek v transformantech využívají amoniak jak GS tak ASN-A. Výhoda bakteriálního způsobu je zřetelnější během nepřístupu světla, kdy je limitována aktivita chloroplastové GS snížením dostupnosti ATP, energetického zatížení a iontů hořčíku, viz. publikace CTNeal aJoy (1974), Plant Phys. 54, 773-779; Joy (1988) Can.J.Bot. 66, (2103-2109). Navíc exprese bakteriálního asn-A genu v rostlinách ještě umožňuje asimilaci amoniaku, jestliže je rostlinná GS blokována specifickými inhibitory podobnými PPT. V netransformovaných rostlinách narušuje inhibice aktivity GS využití amoniaku hlavním kořenem a akumulace amoniaku je jedním z klíčových faktorů letality ošetřených rostlin, viz publikace Tachibana a kol. (1986) J. Pesticide Sci. 11, (33-37). Přítomnost bakteriálního enzymu tak snižuje akumulaci v PPTošetřených transgenních rostlinách, které nejen mohou přežívat dávky herbicidů, které jsou letální pro divoký typ rostlin, ale takto ošetřená transgenní rostlina vykazuje stimulaci růstu.
Odborníkům pracujícím v daném oboru je zřejmé, že tyto pozitivní účinky nejsou omezeny na asnA gen z E.coli, jelikož stejný gen nebo gen, mající stejnou schopnost amidace asparaginové kyseliny a jejich solí za vzniku asparaginu, obsahují i jiné bakterie.
- 1 CZ 283506 B6
Podstata vynálezu
Předmětný vynález se týká použití prokaryotického asnA genu v rostlinné buňce, konstruktu genu, obsahujícího gen, kódující prokaryotickou asnA, operativně připojenou k regulátorové sekvenci, který umožňuje expresi tohoto genu v rostlinné buňce, vektoru, obsahujícího takový konstrukt genu, rostlinné buňky, transformované takovým konstruovaným genem nebo vektorem, a exprese prokaryotické amoniak specifické asparaginsyntetázy v rostlině, zejména kulturní rostlině, a semen nebo rozmnožovacího materiálu rostlin, které obsahují výše definované transformované buňky.
Podstata postupu přípravy transgenních rostlinných buněk podle předmětného vynálezu spočívá v tom, že se do těchto buněk zavede genový konstrukt, obsahující gen kódující prokaryotickou ASN-A, operativně připojený k regulátorové sekvenci, který působí expresi tohoto genu v rostlinné buňce.
Ve výhodném provedení tohoto postupuje uvedenou ASN-A E.coli ASN-A.
Podle dalšího výhodného provedení obsahuje gen, kódující ASN-A, rostlinné specifické kodony.
Výhodná provedení zahrnují použití E.coli asnA genu, kódujícího uvedený enzym, a syntetických genů, kódujících tento enzym, zvláště genů, obsahujících kodony, které jsou zvláště vhodné pro rostliny. Vynález také zahrnuje geny, které kódují enzymy, mající různé složení aminokyselin, než přírodní enzymy, ale v podstatě se stejnou katalytickou aktivitou delecí nebo adicí kodonů nebo přemístění kodonů v přírodních genech, které kódují různé aminokyseliny. Všechny tyto modifikace jsou pro odborníky z daného oboru zřejmé.
Příklady provedení vynálezu
Předmětný vynález bude v dalším blíže ilustrován s pomocí konkrétních příkladů provedení, které jsou ovšem pouze ilustrativní a nijak neomezují rozsah předmětného vynálezu.
Příklad 1
Exprese E.coli asnA genu v tabáku s malou podjednotkou promotoru RUBISCO
1. Produkce transgenních rostlin tabáku
Ve vztahu na celou nukleotidovou sekvenci asnA genu z E.coli (Nakamura a kol., (1981) Nucleic Acids Research 18, 4673, obr. 3) byl reklonován Pstl-Hgal fragment zplazmidu pMY114 do pUC9. Pak byl asnA gen (1,1 kb) připojen k promotoru malé podjednotky genu pro hrachovou ribulózu 1,5-bifosfát-karboxylázu (RUBISCO, Herrera-Estrella aspol. (1984) Nátuře 310, 115-120) a celý fragment byl zaveden do Agrobacterium vektoru pPCVOOl (Koncz a Schell (1986) Mol. Gen. Genet. 204, 383-396). Po listové diskové transformaci SRI tabákových rostlin byly transgenní rostliny identifikovány na základě jejich rezistence vůči kanamycinu. Z transformantů byly vybrány dvě rostliny (ASP4, ASP5), které vykazovaly toleranci vůči ošetření 1 kg/ha PPT. Následkem tohoto PPT ošetření byly SRI kontrolní rostliny úplně zničeny a nebylo možno nalézt takové, které by byly schopny kvést a produkovat semena. ASP4 a ASP5 transformanty vykazují symptomy pouze na menších a starších listech, zatímco meristematická oblast inhibici překonává. Při pokračování v růstu tyto rostliny kvetou a produkují semena.
-2CZ 283506 B6
Přirozenou selekcí ASP4 aASP5 transgenních tabákových rostlin došlo k rozdělení populace semenáčků na sexuálně rezistentní a senzitivní potomstvo. Za podmínek in vitro za použití přítomnosti 10 μΜ L-PPT v kultivačním médiu bylo zřejmé rozdělení mezi dvěma fenotypy.
Přítomnost asnA sekvence v genomu transformantů byla také prokázána hybridizací DNA dle Southema. Po digesci rostlinných DNA EcoRI byl v transformovaných rostlinách zjištěn hybridizační fragment. Nothem-hybridizační analýzou bylo v RNA, izolované z ASPS transformantů in vitro, detekováno malé množství mRNA, která je homologní s asnA genem.
2. Redukovaná akumulace amoniaku v transgenních tabákových rostlinách
Inhibice GS aktivity PPT ošetřením vyvolává rychlé zvýšení koncentrace amoniaku v listech kontrolních tabákových rostlin. Rychlost akumulace amoniaku, měřená mikrodifuzní metodou a následující Nesslerovou metodou (Shelp a spol. (1985) Can. J.Bot. 63, 1135-1140) závisí na koncentraci aplikovaného herbicidu.
Při dávce 0,5 kg/ha překonávají transgenní rostliny působení ošetření PPT (tab.l).
Tabulka 1
Akumulace amoniaku v kontrolních tabákových rostlinách (SRÍ) a v transgenních rostlinách s asnA genem po postřiku 0,5 kg/ha PPT
Hodiny SRÍ koncentrace amoniaku (mM) ASP4 ASP5
do 4 0,58 0,42 0,40
6 1,20 0,82 0,78
24 1,70 0,70 0,75
48 1,95 0,60 0,50
Snížená hladina akumulace je také zřejmá u těchto rostlin ve srovnání s SRÍ tabákovými rostlinami po postřiku dávkou 1 kg/ha (tabulka 2). Stanovená nižší hladina amoniaku odpovídá nižšímu předpokládanému poškození transformovaných rostlin.
Tabulka 2
Účinky 1 kg/ha PPT na koncentraci amoniaku v tabákových (SRÍ) a transgenních rostlinách (ASP4, ASP5)
Hodiny SRÍ koncentrace amoniaku (mM) ASP4 ASP5
až do 6 0,8 0,78 0,88
8 2,2 0,87 0,95
24 4,9 2,0 1,40
48 8,6 4,1 3,6
3. Stimulace růstu a vývoje rostlin
Detailní porovnání růstu mezi kontrolou a ASP rostlinami vykazuje výrazné rozdíly: pro transgenní rostliny byla charakteristická zvýšená rychlost růstu, ale výraznější stimulace byla dosažena ošetřením ASP rostlin malými dávkami PPT.
Základní jakož i PPT indukovaná akcelerace růstu může být demonstrována různými typy růstových křivek. Obr. 1 ukazuje, že zatímco postřik 0,025 kg/ha PPT již inhibuje růst SRÍ rostlin, byla detekována u obou transformantů velká stimulace. Postřik 0,05 kg/ha PPT měl negativní vliv na všechny rostliny. Každý bod představuje průměr výšky tří rostlin.
Rozdíl mezi různými křivkami za kontrolních a ošetřených podmínek je také detekovatelný, jestliže se růst rostlin charakterizuje Baule Mítsdherichovýmí křivkami (obr. 2) za podmínek růstu ve skleníku. Inhibice a stimulace růstu může být také vyjádřena sklonem grafu, který je charakterizován úhly alfa, uvedenými na obr. 2.
4. Zvýšení suché hmotnosti u transgenních rostlin
Mimo rozdílů ve výšce rostlin byly stimulační účinky také detekovány měřením suché hmotnosti. Údaje, uvedené v tabulce 3, dokládají vyšší produktivitu asnA transformantů:
Tabulka 3
Konečná suchá hmotnost (g) kontroly (SRÍ) a transformantů (ASP4, ASP5)
Linie ošetření kontrola 0,025 kg/ha PPT
SRÍ 3,19 100% 2,76 100%
ASP4 3,85 120% 4,79 173%
ASP5 3,74 117% 5,05 183%
Příklad II
Působení asnA genu, řízeného CaMV35S promotorem v transgenních rostlinách
1. Selekce transgenních rostlin
V alternativním pokuse byly zavedeny plazmidové molekuly (pUC), nesoucí E.coli asnA gen sCaMV35S, promotorem do SRÍ listových protoplastů přímým příjmem DNA (R.X.Fang a spol. (1989) The Planí Cell 1, 141-150). Transformanty byly přímo vybrány na základě jejich PPT rezistence. Rostliny byly regenerovány z mikrokalů, kultivovaných za přítomnosti 10 μΜ L-PPT. Southemova hybridizace potvrdila přítomnost asnA genu v DNA, izolované z PPT rezistentních regenerantů.
2. Snížená akumulace amoniaku a zlepšená PPT tolerence v transgenních rostlinách
Přirozená selekce transformantů vede k rozdělení potomstva s různými hladinami PPT rezistence (médium doplněné až do 30 μΜ L-PPT). V souladu s rezistentním fenotypem akumulují transformované rostliny méně amoniaku než SRÍ rostliny, jestliže jsou postříkány 1 kg/ha PPT (tabulka 4).
-4 CZ 283506 B6
Tabulka 4
Akumulace amoniaku po postřiku rostlin 1 kg/ha PPT
Hodiny SRÍ koncentrace amoniaku (mM) ASP70 ASP95
6 6,85 2,92 1,95
24 9,50 5,60 5,10
48 22,3 13,60 17,40
120 58,60 28,30 35,6
144 113,00 39,40 50,00
3. Účinnost fotosyntézy
Kontrolní SRÍ atransgenní tabákové rostliny byly charakterizovány různými parametry fotosyntézy, jako je rychlost fixace CO2 (Szajko a spol., Acta Agr. Acad. Hung. 20, 247-260) a indukce fluorescence (Hideg a spol., 1986, Photobiochem. Photobiophys. 12, 221-230). Za podmínek pěstování ve skleníku byly rostliny ošetřeny různými dávkami PPT a byl rovněž stanoven obsah amoniaku. Jak je zřejmé z tabulky 5, vykazují transgenní rostliny s ASN-A genem značné zvýšení účinnosti pletivové CO2 fixace ve srovnání s kontrolními rostlinami. Aplikace nízké dávky PPT při ošetření může dále stimulovat CO2 fixaci, zatímco rozdíl mezi SRÍ rostlinami s nebo bez PPT (50 g/ha) ošetřením není statisticky významný. Tabulka 5 poskytuje také údaje o tom, že v případě tabákových rostlin inhibiční koncentrace PPT vyvolává akumulaci amoniaku s vážným poškozením fotosyntézy inhibicí transportu elektronů a 50% redukci fixace CO2. Za stejných podmínek transformované rostliny (ASP70) mohou tolerovat ošetření v souvislosti s funkcí fotosyntézy.
Tabulka 5
Parametry fotosyntézy
Linie PPT ošetření (g/ha) koncentrace (mM) fixace CO2 (μιηοΐ CO2/dm2 x h) indukce fluorescence (v % kontroly SRÍ)
X ±Sx' η P 1% Fm Fo Fj. Fo/Fm.Fo
SRÍ 0 0,37 38,17 12,05 20- 100 100 0,45
50 2,00 44,23 17,73 20- 101 102 0,44
750 34,35 19,54 12,42 20 + 80 194 0,59
ASP70 0 0,47 49,32 7,86 20 + 98 114 0,38
50 2,70 58,07 6,06 20 + 99 110 0,42
750 15,80 31,61 14,16 20- 92 144 0,49
Analýzy byly provedeny 4 dny po PPT ošetření.
4. Růst asnA rostlinných transformantů
Analýzy rychlosti růstu (mm/den) reprodukovatelně prokazují zrychlený růst transformantů během časného vývoje rostliny. Údaje, uvedené v tabulce 6, se týkají rostlin ve skleníku.
Tabulka 6
Rychlost růstu (mm/den) během různých period vývoje rostlin (skleník)
Linie periody (6 dní) konečná výška
I Π ΠΙ IV V VI VIII VIII rostin (cm)
SRÍ 0,29 0,45 0,27 0,52 0,75 1,31 1,93 1,37 41,08
Asp70/l 0,60 1,15 0,43 1,23 1,83 2,08 1,53 0,50 58,0 141 %
Asp70/2 0,61 0,93 0,50 0,75 1,18 1,51 1,83 0,25 48,5 118%
SRÍ: průměr z 5 rostlin
ASP70/1 a ASP/2: jednotlivé rostliny
Analýzy rostlin za polních podmínek vykazují podobné rozdíly, jaké byly pozorovány ve skleníku (tabulka 7). Rychlost růstu ASP rostlin během periody I-III byla značně vyšší než v případě SRÍ rostlin. V tomto pokuse byl stimulační účinek PPT na transgenní rostliny také potvrzen zejména v poslední růstové periodě. Baule-Mitscherlichovy křivky (obr. 3) zřetelně dokládají, že ASP rostliny vykazují rychlejší růst než kontrolní SRÍ rostliny v polních podmínkách.
Tabulka 7
Rychlost růstu (mm/den) během různých period vývoje rostlin (polní pokus) periody (7 dní)
Ošetření linie I II III IV konečná výška rostliny (cm)
kontrola SRÍ 0,36 0,85 1,31 3,24 42,5 100%
Asp70 0,45 1,07 1,50 3,14 47,6 112%
Asp95 0,45 1,14 1,92 3,24 51,5 121 %
25g/ha SRÍ 0,29 0,56 1,15 2,74 35,0 100%
PPT Asp70 0,44 1,02 1,69 3,84 53,8 154%
Asp95 0,31 0,88 1,27 3,78 48,7 139 %
Průměr ze tří rostlin
5. Produktivita asnA transformantů
Jak je zřejmé z tabulky 8 zvýšila se celková zelená hmota jakož i suchá hmotnost u ASP rostlin ve srovnání s SRÍ rostlinami. Bylo také zřejmé, že transgenní rostliny jsou výziiaiuič stimulovány ošetřením PPT. Současně již byly kontrolní SRÍ rostliny postřikem inhibovány.
-6CZ 283506 B6
Tabulka 8
Zelená hmota (g) polní test kontrola 25 g/ha PPT
Linie celkem % listy % celkem % listy %
SRÍ 86,5 100 57,4 100 78,7 100 43,4 100
ASP70 95,2 110 62,3 108 139,9 178 92,41 213
ASP95 103,8 120 68,4 119 105,0 133 71,56 165
Suchá hmotnost (g) polní test kontrola 25 g/ha PPT
Linie celkem % listy % celkem % listy %
SRÍ 6,66 100 4,83 100 6,42 100 5,05 100
ASP70 8,05 121 5,82 120 10,99 171 8,56 169
ASP95 8,48 127 6,34 131 8,96 140 6,78 134
Všechny údaje jsou průměry z 5 rostlin.

Claims (3)

1. Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk, vyznačující se tím, že se do těchto buněk zavede genový konstrukt, obsahující gen, kódující prokaryotickou ASN-A, operativně připojený k regulátorové sekvenci, který působí expresi tohoto genu v rostlinné buňce.
2. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedenou ASN-A je E.coli ASN-A.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že gen, kódující ASN-A, obsahuje rostlinné specifické kodony.
CS91165A 1990-01-26 1991-01-25 Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk CZ283506B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP90101537 1990-01-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS9100165A2 CS9100165A2 (en) 1991-09-15
CZ283506B6 true CZ283506B6 (cs) 1998-04-15

Family

ID=8203541

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS91165A CZ283506B6 (cs) 1990-01-26 1991-01-25 Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk

Country Status (16)

Country Link
US (2) US5545819A (cs)
EP (1) EP0511979B1 (cs)
CN (1) CN1053641A (cs)
AU (1) AU7176891A (cs)
CZ (1) CZ283506B6 (cs)
DE (1) DE69103404T2 (cs)
DK (1) DK0511979T3 (cs)
HU (1) HUT65648A (cs)
MY (1) MY105446A (cs)
NZ (1) NZ236890A (cs)
PT (1) PT96577B (cs)
SK (1) SK279160B6 (cs)
TR (1) TR25404A (cs)
WO (1) WO1991011524A1 (cs)
YU (1) YU13191A (cs)
ZA (1) ZA91568B (cs)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5955651A (en) * 1989-05-03 1999-09-21 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
HUT65648A (en) * 1990-01-26 1994-07-28 Mta Biolog Kutato Intezete Transgenic plants expressing a prokaryotic ammonium dependent asparagine synthetase
WO1995009911A1 (en) * 1993-10-06 1995-04-13 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
US6864405B1 (en) 1993-10-06 2005-03-08 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
US6107547A (en) * 1993-10-06 2000-08-22 New York University Transgenic plants that exhibit enhanced nitrogen assimilation
EP0801134A1 (en) * 1996-04-11 1997-10-15 Hoechst Schering AgrEvo GmbH Process for the production of plants with enhanced growth characteristics
WO1998036084A2 (en) * 1997-02-14 1998-08-20 Agricola Technologies, Inc. Enhancing plant growth using genes encoding for carbonic anhydrase, calcium binding protein, metal binding protein or biomineralization protein
CA2328394C (en) 1998-05-13 2012-08-07 Planttec Biotechnologie Gmbh Transgenic plants with modified activity of a plastidial adp/atp translocator
CA2536320A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and polypeptides encoded thereby useful for increasing plant size and increasing the number and size of leaves
US20060200878A1 (en) 2004-12-21 2006-09-07 Linda Lutfiyya Recombinant DNA constructs and methods for controlling gene expression
US7335760B2 (en) 2004-12-22 2008-02-26 Ceres, Inc. Nucleic acid sequences encoding zinc finger proteins
US8222482B2 (en) 2006-01-26 2012-07-17 Ceres, Inc. Modulating plant oil levels
EP1911847A1 (en) * 2006-10-09 2008-04-16 Genoplante-Valor Improvement of the kernel productivity of maize through the modulation of glutamine synthetase activity
EP3378953A1 (en) 2006-10-12 2018-09-26 Monsanto Technology LLC Plant micrornas and methods of use thereof
WO2008067840A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-12 Swetree Technologies Ab Plants having improved growth characteristics and method for making the same
AR066218A1 (es) * 2007-04-19 2009-08-05 Monsanto Technology Llc Plantas de maiz y semillas con contenido incrementado de asparagina y proteina
CN102121018A (zh) * 2010-12-22 2011-07-13 上海大学 一种具有天冬酰胺合成酶功能的基因、其编码蛋白及其应用
CN105132347B (zh) * 2015-07-27 2018-08-21 中国食品发酵工业研究院有限公司 一株高效转化l-天冬氨酸生产l-天冬酰胺的工程菌及其应用
CN105462993A (zh) * 2015-12-26 2016-04-06 浙江大学 植物抗病调控基因SlASN2及用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN87100603A (zh) * 1987-01-21 1988-08-10 昂科公司 抗黑素瘤疫苗
DE3719053A1 (de) * 1987-06-06 1988-12-15 Hoechst Ag Verbesserte nutzung von pflanzenverwertbarem stickstoff durch kulturpflanzen mit ueberexpression der glutaminsynthetase
US5256558A (en) * 1989-05-03 1993-10-26 The Trustees Of Rockefeller University Gene encoding plant asparagine synthetase
HUT65648A (en) * 1990-01-26 1994-07-28 Mta Biolog Kutato Intezete Transgenic plants expressing a prokaryotic ammonium dependent asparagine synthetase

Also Published As

Publication number Publication date
HU9202437D0 (en) 1992-10-28
DE69103404T2 (de) 1995-09-28
EP0511979A1 (en) 1992-11-11
HUT65648A (en) 1994-07-28
CS9100165A2 (en) 1991-09-15
EP0511979B1 (en) 1994-08-10
YU13191A (sr) 1996-01-09
DK0511979T3 (da) 1995-01-02
SK279160B6 (sk) 1998-07-08
CN1053641A (zh) 1991-08-07
US5723762A (en) 1998-03-03
MY105446A (en) 1994-10-31
ZA91568B (en) 1991-10-30
WO1991011524A1 (en) 1991-08-08
DE69103404D1 (de) 1994-09-15
NZ236890A (en) 1993-03-26
PT96577A (pt) 1991-10-15
AU7176891A (en) 1991-08-21
TR25404A (tr) 1993-03-01
PT96577B (pt) 2001-04-30
US5545819A (en) 1996-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ283506B6 (cs) Způsob přípravy transgenních rostlinných buněk
EP1468096B1 (en) Selective plant growth using d-amino acids
Lea et al. Nitrogen assimilation and its relevance to crop improvement
KR100243996B1 (ko) 이미다졸리논-특이적 내성 ahas 서열 및 상기 내성을 수여하는 방법
EP0154204B1 (en) Herbicide resistance in plants
US5331107A (en) Herbicide resistance in plants
JPH09503389A (ja) 窒素同化の増加を示すトランスジェニック植物
Azevedo Analysis of the aspartic acid metabolic pathway using mutant genes
JP5988260B2 (ja) 形質転換植物および形質転換植物の育成方法
CN103045639B (zh) AtTGA4基因在提高植物抗逆性中的应用
WO2021047656A1 (zh) 除草剂抗性植物
KR102542508B1 (ko) 식물체의 비생물적 스트레스 저항성을 조절하는 α1-COP 유전자 및 이의 용도
WO2024103636A1 (zh) 控制大豆共生固氮效率的蛋白质、基因及其载体和应用
CN110499326B (zh) Rgga在调控作物农艺性状中的应用
US20230323373A1 (en) Sprayable cell-penetrating peptides for substance delivery in plants
US20220064656A1 (en) Gene expression elements and systems and use thereof
CN116732091A (zh) 一种钾营养高效利用且耐除草剂玉米的培育方法及检测方法
CN116064650A (zh) Mos3基因在调控植物抗盐性中的应用
CA2184420A1 (en) Procedure to increase the seed productivity of plants and to accelerate the growth of plants by means of an additional plastidic pyruvate, phosphate dikinase
CN116063425A (zh) TaGS蛋白质或生物材料在调控植物耐盐碱性、或植物育种中的应用
Minocha et al. GENETIC MANIPULATION OF POLYAMINE METABOLISM IN POPLAR1
Lycopersicon annua, 81
Amir et al. T-DNA and “gain of function” tobacco mutants with altered threonine metabolism

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20000125