SK157099A3

SK157099A3 - Guanidinylation reagents

Info

Publication number: SK157099A3
Application number: SK1570-99A
Authority: SK
Inventors: Murray Goodman; Konrad Feichtinger; Todd T Romoff
Original assignee: Univ California
Priority date: 1997-05-22
Filing date: 1998-05-21
Publication date: 2000-06-12
Also published as: PL336996A1; NO995693L; JP2002502378A; US6072075A; WO1998052917A2; EP0983232A2; EP0983232B1; HUP0003978A3; BR9809859A; KR20010012732A; ATE227705T1; CA2288196A1; WO1998052917A3; US6380358B1; AU736072B2; DE69809412D1; NO995693D0; US20030055214A1; IL132773A0; HUP0003978A2

Description

Guanidinizačné činidlo a spôsob guanidinizácie

Oblasť techniky

Vynález sa týka činidiel a spôsobov syntézy organických molekúl obsahujúcich guanidínovú skupinu. Vynález sa týka predovšetkým činidiel na zavádzanie chránenej guanidínovej skupiny do molekuly.

Doterajší stav techniky

Mnoho prírodných zlúčenín, ktoré majú guanidínové funkcie, vykazuje biologickú aktivitu, ktorá ich robí použiteľnými ako farmaceutické prostriedky. Medzi tieto zlúčeniny patria antimikrobiálne, fungicídne a antivírusové látky, neurotoxíny, hormóny a činidlá, ktoré pôsobia ako agonisty alebo antagonisty na biologické signály. Prehľad týchto prírodných látok je uvedený v Progress in the Chemistry of Organic Natural Products (1995) 66:119 a Berlinck, R.G.S. (1996) Nat.Prod.Reports 13(5):377-409. Bolo už uskutočnených mnoho pokusov pripraviť tieto zlúčeniny alebo ich analógy synteticky.

Bioaktívne molekuly, ktoré obsahujú guanidín, predovšetkým analógy alebo deriváty prírodných látok, sú v súčasnej dobe dôležitým objektom pre tvorbu a hľadanie liečiv. Guanidínová zložka v bioaktívnych látkach sa často vyskytuje v polypeptidových reťazcoch, ktoré obsahujú arginín, pričom tieto reťazce môžu predstavovať celú biomolekulu alebo existovať ako začlenená časť. Arginín, spolu s lyzínom, inou aminokyselinou s pozitívne nabitým postranným reťazcom, hrá významnú úlohu v biologicky aktívnych proteínoch a peptidoch. Boli synteticky vyrobené rôzne analógy a deriváty arginínu a začlenené do peptidov, aby sa mohla študovať štruktúrna interakcia molekúl obsahujúcich arginín. Tieto zvyšky sú často kritickými zvyškami aminokyselín v peptidoch.

Nebolo doteraz nájdené guanidinizačné činidlo, ktoré by plne uspokojovalo. Mnohé guanidinizačné činidlá sa používajú na zlepšenie syntézy analógov arginínu a iných molekúl obsahujúcich guanidín.

Podstata vynálezu

Definícia

Pojem “alkyl” sa tu používa pre monovalentný radikál s priamym alebo rozvetveným reťazcom, obsahujúci jeden až desať uhlíkových atómov, avšak neobmedzuje sa na metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, /er/-butyl, nhexyl a podobne. Pojem “alkyl” zahrnuje tiež cyklické radikály, vrátane cyklopropylu, cyklobutylu, cyklopentylu, cyklohexylu a podobne, opäť bez obmedzenia len na tieto látky.

I

Pojem “perfluóralkyl” sa tu používa pre monovalentné radikály s priamym reťazcom, obsahujúce jeden až štyri uhlíkové atómy, v ktorom sú všetky vodíkové atómy nahradené atómami fluóru. Typickou perfluórovanou alkylovou skupinou je trifluórmetylová skupina.

Pojem “aryl” použitý samostatne sa tu týka aromatického radikálu, viazaného alebo neviazaného. Jedná sa predovšetkým o arylové skupiny obsahujúce fenyl, naftyl, bifenyl a podobne. Pojem “aryl” tiež zahrnuje heteroaromatické skupiny zahrnujúce furanyl, pyrrolyl, tienyl, pyrazolyl, tiazolyl, oxazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, indomyl a podobne, opäť bez obmedzenia len na tieto látky.

Pojem “substituovaný aryl” označuje arylovú skupinu substituovanú jedným, dvoma alebo tromi substituentami zvolenými zo skupiny obsahujúcej halogény, kyano skupiny, nitro skupiny, C1-C10 alkyly, C1-C10 alkyloxy, trifluórmetyl, alkylkarbonyl a podobne. Príkladom takých skupín sú 4-chlórfenyl, 2metylfenyl a 3-etoxyfenyl.

Pojem “arylalkyl” označuje jednu, dve alebo tri arylové skupiny s označeným počtom uhlíkových atómov, privesené na alkylovom reťazci s označeným počtom uhlíkových atómov. Typickou arylalkylovou skupinou je benzylová skupina.

Pojem “alkenyl” sa týka skupiny s priamym alebo rozvetveným reťazcom, ktorý obsahuje dva až desať uhlíkových atómov s dvojitou väzbou medzi uhlíkami. Neobmedzujúcim príkladom sú allyl, vinyl a podobne.

Guanidinizačné činidlá

Boli nájdené dva typy guanidinizačných činidiel, ktoré dovoľujú syntézu chránených guanidínov. Zlúčeniny typu I obsahujú guanidiníny s tromi symetricky usporiadanými elektrónovo viazanými ochrannými skupinami (P) a majú štruktúrny vzorec .11 p,_n^/xn_p₂

A A (I) kde Pi,P₂ a P3 sú zhodné alebo rôzne uretánové ochranné skupiny, z ktorých každá má všeobecný štruktúrny vzorec o

II

R,—O-Ckde R je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová alebo arylová skupina alebo heterocyklická skupina.

P sa volí z uretánových ochranných skupín, ktoré možno konvenčnými spôsobmi odstrániť. Tieto skupiny sú dostupné v takmer neobmedzenom počte. Prehľad uretánových skupín a ich použitie pri syntéze peptidov je obsiahnutý v publikácii Geiger, R. a Kônig W. “The Peptides” (Gross, E. Meienhofer, J.,eds) Vol.3, p3. New York, NY 1981 a v publikácii Wunsch, E. “Methoden der organischen Chemie” (Houben-Weyl) Vol. 15/1 (Wunsch, E., rd.), p 46, Stuttgart. Thieme 1974. Zvlášť výhodné sú uretánové skupiny obsahujúce substituovaný alebo nesubstituovaný atóm benzylického uhlíka. Ochranné skupiny uretánového typu s benzylickým uhlíkovým atómom sú popísané v publikácii Bodanszky, M. (1984) Principles of Peptide Synthesis Cháp. III Sec. C, Springer-Verlag, New York 1984. Také skupiny možno odstrániť hydrogenolýzou a acidolýzou, rovnako ako base-induced β-elimináciou. Ochranná skupina P je výhodne alkyloxykarbonylová skupina, ako je Boe (P = /ez7-butyloxykarbonyl), Cbz (P = benzyloxykarbonyl), Alloc (P = allyloxykarbonyl), Troc (P = 2,2,2trichlóretyloxykarbonyl) alebo Moz (P = 4-metoxybenzyloxykarbonyl). Výhodné sú predovšetkým ochranné skupiny Boe a Cbz.

Chránené guanidiníny typu I podľa vynálezu sú slabé kyseliny a môžu sa použiť na guanidinizáciu primárnych alebo sekundárnych alkoholov v Mitsinobureakcii za účelom prípravy trojnásobne chránených alkyl guanidínov (schéma 1). Produkt takej reakcie stále ešte obsahuje kyselinový vodíkový atóm, ktorý môže byť v druhej Mitsinobu-reakcii využitý na prípravu chránených dialkylovaných guanidínov.

N'^P

P-NN-P i i H H

R₂-CH-OH

PPh₃. DEAD

N

U

P-NN-P

RrCH ’ i «2

N

X

P-NN-P * H RrCH ^H ’ i

R,

Rj-CH-OH

PPh₃. DEAD

N'

X

P-NN-P

RrCH HC-R, ’ l I ³

R, R.

Schéma 1; Guanidinizácia alkoholov

Ri, R2, R3, a R₄ môžu byť vodík alebo ľubovoľná substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová, alkenylová, arylová alebo arylalkylová skupina, ako bolo popísané vyššie. R| a R₂ (a/alebo R3 a R₄) môžu byť súčasťou kruhovej štruktúry, ako, je tomu v cyklopropanole, cyklobutanole, cyklopentanole, cyklohexanole a podobne.

Zlúčeniny typu II obsahujú guanidíny, ktoré prídavné k dvom uretánovým ochranným skupinám obsahujú sulfonylovú skupinu, a majú štruktúrny vzorec •SO₂

P,-N H n-p₂

I

H (II) kde Pi a P₂ sú definované vyššie a Ri je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová alebo arylová skupina. Výhodné sú perfluóralkylové skupiny. Chránené guanidíny typu II reagujú s primárnymi alebo sekundárnymi amínmi a vznikajú dvojnásobne chránené alkylové guanidíny (schéma 2).

?<

N'⁵⁰’

I

P-N N-P I I

H H ·

Ϊ3 r₂-nh

2.

P-N

N-P

Schéma 2: Guanidinizácia amínov

R₂ a R₃ môžu byť vodík alebo ľubovoľná substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová, alkenylová, arylová alebo arylalkylová skupina, ako bolo popísané vyššie. R₂ a R₃ môžu byť súčasťou kruhovej štruktúry, aká sa nachádza v aziridíne, acetidíne, pyrrolidíne, piperidíne, morfolíne a podobne.

Zložkou P je výhodne Boe alebo Cbz a zložkou Ri je fenyl, 4-metylfenyl, metyl alebo trifluórmetyl. Predpokladá sa, že rovnakým spôsobom budú reagovať analógy s inými ochrannými skupinami, ako je Troc, Alloc alebo Moz v polohe P. S ohľadom na silnú výlučne elektrónovú väzbu triflylovej skupiny sú triflyl-guanidíny (R] = trifluórmetyl) medzi syntetizovanými látkami najviac reaktívne a dáva sa im preto prednosť. Boli zistené ako najlepšie z vyššie popísaných guanidinizačných činidiel.

Postupy syntézy

Syntéza guanidinizačných činidiel typu I

Všeobecný postup pre symetrické trojnásobne substituované guanidíny je znázornený v schéme 3. Zavedenie prvých dvoch ochranných skupín do guanidínhydrochloridu sa uskutočňuje v jednom kroku. Obvykle sa dosiahne výťažnosť medzi 50 a 80 %. Dvojnásobne chránený guanidín je potom bez prítomnosti vody spracovaný dvoma ekvivalentami hydridu sodného. Syntéza sa potom dokončí acyláciou výsledného aniónu. Je výhodné, ak R je benzyl, 2-chlorobenzyl, 4-metoxybenzyl, 2,2,2-trichlóretyl, allyl alebo /erZ-butyl a X je chloro, acido, succinimidyloxy alebo alkoxykarbonyloxy.

CI NH* O

X ⁺ X h₂n nh₂ rck x

NaOH

-►1,4-Dioxane

O NH O „ΛΑΛ,

FTCr N N OR H H

O NH O I.NaH, THF

JL JL X -► °^H H ^0R í

2RO^X

OR

C=O

ONO

Schéma 3: Syntéza trojnásobne chránených guanidínov

Alternatívne môžu byť trojnásobne chránené guanidíny syntetizované v jednom kroku z guanidínhydrochloridu fázovo transferovou katalýzou (schéma 4). Sú výhodné acylačné činidlá, kde R = benzyl, R = allyl a R = 2,2,2trichlóretyl.

NH,

X ₂n nh₂

NaOH. CH₂CI₂

RO-CO-X -►TEBA, 55-90%

N-CO-OR ll

RO-CO-HN NH-CO-OR

Schéma 4: Všeobecná syntéza trojnásobne chránených guanidínov fázovo transferovou katalýzou

Syntéza guanidinizačných činidiel typu II

Guanidinizačné činidlá typu II môžu byť syntetizované deptoteináciou dvojnásobne chránených guanidínov hydridom sodným v inertným rozpúšťadle a reakciou výsledného aniónu so sulfonylchloridom (schéma 5). Táto metóda bola úspešne použitá pri syntéze N-,N’-di-Cbz-N”-metylsulfonyI-guanidínu (Ri = benzyl, R2 = metyl), N-,N’-di-Cbz-N”-fenylsulfbnyI-guanidínu (Rj = benzyl, R₂= fenyl) a N-,N’-di-Cbz-N”-tosyl-guanidínu (Ri = benzyl, R₂ = tosyl).

O NH O ·°^ΛΛ^Αθκ·

1. NaH, THF ->

2. f^-SOj-CI

R.O «2

ONO

A_nxx

H R ^OR«

Schéma 5: Sulfonylácia dvojnásobne chránených guanidínov

Miesto sulfonylchloridov sa môžu použiť sulfonylanhydridy, ako je toto znázornené na syntéze N-,N’-di-Cbz-N”-triflyl-guanidínu (schéma 6).

1. NaH

NH O

,. || || Chlorobenzene

PhCH₂O N N OCH₂Ph ₂. (CF₃SO₂)₂O

SO-CF, l ^{2 3}

ONO

XXX

PhCH₂O N N OCH-Ph ² H H ²

Schéma 6: Syntéza N-,N’-di-Cbz-N”-triflyl-guanidínu

V niektorých prípadoch sa ako základ môže miesto hydridu sodného použiť trietylamín. Príklad je znázornený v schéme 7, kde je znázornená syntéza N,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínu.

(CH.)₃CO

O NH

Λ.Λ fj OC(CH₃)₃ (cf₃so₂)₂o

->ΝΕς, C‘ri₂Ci₂

SO.CF,

I ^{2 3}

ONO

JL Jl JL (CH.₃)₃CO^M^^OC(CH₃)₃

Schéma 7: Syntéza N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínu

Reakcia guanidinizačných činidiel typu I

Guanidinizačné činidlá typu I reagujú s primárnymi a sekundárnymi alkoholmi v Mitsunobu-reakcii na chránené alkylované guanidíny. Uskutočňuje sa to pri syntéze viac ortogonálne chránených analógov arginínu (schéma 8) z vhodných prekurzorových molekúl. Reakcie s N-,N’-tri-Boc-N”-guanidínom sa výhodne uskutočňujú refluxovaním THF, výťažnosť pritom činí až 70 %. Ak sa ako guanidinizačná vzorka použije N-,N’-N”-tri-Cbz-guanidín, môže sa reakcia uskutočniť pri izbovej teplote. Naviac, výťažnosť je v porovnaní s N-,N’-N”triBoc-guanidínom obvykle trocha vyššia (až 86 %).

Cbz-HN^COOBzl (?η₂)„ ch₂oh + ·

HN-Boc

Boc-N^NHBoc

Cbz-HN^COOBzl (CH₂)_n

DEAD, PPh₃ 9^H2

-* N-Boc

Boe-N

NKBoc

Boc-HN^COOCH,

Boc-HNT „COOCH, (ch₂)„ ch₂oh +

HN-Cbz

Cbz-N^NHCbz

DEAD, PPhj (CH₂)_n ch₂

N-Cbz

Cbz-N^NHCbz

Schéma 8: Syntéza analógov arginínu Mitsunobu-reakciou; n = 0-3

Mnohé biologicky zaujímavé guanidíny obsahujú dva rôzne alkylové substituenty, pripojené k dvom rôznym N-atómom guanidínového jadra. Látky tohto typu možno dvoma po sebe nasledujúcimi Mitsunobu-reakciami získať z trojnásobne chránených guanidínov. Príklad je znázornený v schéme 9, kde je znázornená syntéza chráneného derivátu ω-metylarginínu, čo je významný inhibítor syntézy oxidov dusíka.

HN-Boc Λ Boc-N NH-Boc	H,COH	DEAD	HN-Boc Boc-N^NH CH
PPh,
Cbz-HN^COOBzl		Cbz-HN	^COOBzl
C»,			CH,
<?H₂			CH,
CH,OH			CH,
2	DEAD		I ²
+		->	N-Boc
HN-Boc	PPh,
Ϊ		Boc-N	N-Boc
Boc-N NH-Boc			Me

CH,

Schéma 9: Syntéza chráneného derivátu -metylarginínu v dvoch po sebe nasledujúcich Mitsunobu-reakciach

Reakcia guanidinizačných činidiel typu II

N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidín reaguje rýchle a za miernych podmienok s primárnymi (schéma 10) a sekundárnymi (schéma 11) amínmi. Reakcie sa uskutočňujú pri izbovej teploty a sú obvykle ukončené počas jednej hodiny. Úspešné guanidinizačné reakcie boli uskutočnené so širokým radom rozpúšťadiel, ako je benzén, chloroform, dichlórmetán, acetonitril alebo DMSO. Dáva sa prednosť nepolárnym rozpúšťadlám, ako je benzén, chloroform alebo dichlórmetán. Látky, ktoré sú nerozpustné v niektorom z výhodných rozpúšťadiel, môžu byť v mnohých prípadoch konvertované vo viac rozpustné deriváty, ktoré potom môžu byť úspešne guanidinizované. Toto je demonštrované v schéme 10, kde je znázornená syntéza derivátu homoarginínu z Ν-α-Fmoc-lyzínu. Tento N-a -Fmoc-lyzín je v tomto procese najskôr spracovaný látkou MSTFA (N-metyl-Ntrimetylsilyl-trifluóracetamid), aby sa získal derivát, ktorý je rozpustný v dichlórmetáne. Tento derivát je potom v tej istej nádobe guanidinizovaný N-,N’-diBoc-N”-triflyl-guanidínom. Silylové skupiny, použité na rozpúšťanie východzie12 ho materiálu, sa potom opäť odstránia počas spracovania. Predpokladá sa, že rovnakým spôsobom budú reagovať i iné diaminokyseliny, ako je N-a-Fmocornitín, N-a-Fmoc.2,4-diamino-butyrová kyselina alebo N-a-Fmoc-2,3-diaminopropiónová kyselina. Analógy arginínu, vyrobené touto metodológiou, sú chránené ortogonálne a môžu byť bez ďalších modifikácií použité pre väzbové reakcie peptidov.

Fmoc-HN. -COOH

CH, 1 ² CH, i ² CH, I ² CH,	1. MSTFA. CHjCl₂	CH, I ² V“² í»² ch₂
2. BocJfGu. NEL,
NH		NH
		Boc-HN^%

95%

Schéma 10: Reakcia N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínu Fmoc-Lyz

Mimoriadne dobrá výťažnosť chránených guanidínov sa dosiahne pri guanidinizácii sekundárnych amínov (schéma 11). Reakcia je extrémne ľahká i s bivalentnými amínmi, ako je piperazín.

CHCI.,. 93%

F₃C-SO₂—N / \

V-NH-Boo- ““T'

Boc-HN^Γ H ^NEt=

Q

Boc-HN -^NBoc

FjC-SOj—N

Boc-HN

NH-Boo- HN NH

..... Boc-HN. j-v NHBoc

CHCI,. 100%

NEL, BocN ^f NBoc

Schéma 11: Reakcia N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínu so sekundárnymi amínmi

N-,N’-di-Cbz-N”-triflyl-guanidín je vynikajúcim činidlom pre guanidinizáciu nereaktívnych aromatických amínov. Reakcia s anilínom je pri izbovej teplote ukončená za 1 hodinu (schéma 12)

FjC-SOj— N

Cbz-HN

V- NH-Cbz + ΐί^Ί

CHCIj. 90%

1h

HN

Cbz-HN ^=N-Cbz

Schéma 12: Reakcia N-,N’-di-Cbz-N”-triflyl-guanidínu s anilínom

Guanidinizácia N-.N’-di-Boc-N’’-triflyl-euanidínom na pevnej fáze

Reakcie na alebo v pevnej fáze sú obvykle pomalšie než porovnateľné reakcie v roztoku. Mnoho úsilia sa obvykle venuje úprave použiteľných chemických reakcií na zvláštne podmienky syntézy v pevnej fáze. Také optimalizované reakcie sú zvlášť dôležité na budovanie chemických knižníc a zbierok paralelnými a kombinačnými metódami.

Vysoká reaktivita N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínu umožňuje, aby sa guanidinizácia v pevnej fáze mohla uskutočniť úspešne. Je to demonštrované konverziou ornitínového zvyšku v peptidovom reťazci na arginín (schéma 13). Peptid bol štandardnými metódami umiestnený na PAM-živici (PAM: fenylacetamidmetyl). Namiesto arginínu bol na jeho mieste začlenený ornitín, εaminoskupina, chránená pomocou Fmoc. Po skompletizovaní sekvencie na ornitínovom postrannom reťazci bola Fmoc-skupina selektívne odstránená a voľná aminoskupina bola guanidinizovaná N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínom. Nechránený peptid, obsahujúci arginín, bol potom získaný po odstránení Bocskupín a odštiepení peptidu zo živice pomocou HF. Analýza surového peptidu metódou FAB-MS ukázala homogénny produkt. Nebola zistená znateľná nekompletnosť guanidinizácie.

Postup, ktorý je naznačený v schéme 13, by sa mohol prejaviť ako veľmi cenný pre syntézu peptidov, ktoré obsahujú viacnásobné arginínové zvyšky. Také peptidy je často obtiažne syntetizovať konvenčnými metódami.

Boc-Pro-PAM-Resin

I Solid Phase Peptide Synthesis

Boc-Gly-NH^^_{NH Gly Asp(cHex) Ser(OBn)}._pro.p_AM._Resin

CH₂CH, ch₂

NHFmoc

Piperidine. DMF

O

Boc-Gly-NHv^A,_{NH Qly Asp(cHex) Ser(0Bn}y_Pro._pAM._Resin

CH,

I ²

CH, i ²

NH, f₃c-so-n

Boc-HN ^-NH-Boc. NEL). CH₂CI₂

M ^Boc'^G,y‘^NH''V^NH-Gly-Asp(cHex)-Ser(OBn)-Pro-PAM-Resin ch₂

Čh₂ i ²CH,

NH

BocN ^^NHBoc

1. TFA. CH₂CI₂

2. HF, Anisole

Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro

Schéma 13: Syntéza peptidov, obsahujúcich arginín, konverziou ornitínu na argi nín v pevnej fáze

Porovnanie N-.N^,-di-Boc-N^,,-triflvl-guanidínu s inými guanidinizačnými činidlami

Na porovnanie dvoch komerčne dostupných guanidinizačných činidiel s N,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidínom bola ako modelová reakcia zvolená guanidinizácia benzylamínu v benzéne (schéma 14). Všetky tri reakcie boli uskutočnené v zariadení s jadrovou rezonanciou (NMR) a vytváranie produktu bolo sledované integráciou signálov benzylických CH₂-skupín. N-,N’-di-Boc-N”-triflyl-guanidín sa za zvolených podmienok osvedčil lepšie než iné činidlá. Podobné výsledky boli dosiahnuté v deuterovanom chloroforme a v deuterovanom acetonitrile.

NSO₂CF₃

U

BocHN NHBoc + PhCH₂NH₂

HN-CH₂Ph * BocN^NHBoc

SMe

BocN ^NHBoc + PhCH₂NH₂

HN-CH₂Ph

BocN ' NHBoc

O

V^N

BocHN + PhCH₂NH₂

HN-CH₂Ph

BocHN ^NH

Schéma 14: Guanidinizácia benzylamínu

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obr. 1 je znázornená v rentgenovom žiarení zrejmá štruktúra di-boctrifyl-guanidínu.

Na obr. 2 je znázornené porovnanie N-, N'-di-boc-N-trifyl-guanidínu s dvoma komerčne dostupnými guanidinizačnými činidlami. Všetky tri reakcie sa uskutočnili na zariadení s jadrovou rezonanciou (NMR) a vytváranie produktu bolo sledované integrovaním signálov benzylických CH₂-skupín. Koncentrácia guanidinizačného činidla bola pri všetkých reakciách 100 mM a koncentrácia benzylamínu bola 90 mM. Ako rozpúšťadlo bol použitý benzén dó. Podobné výsledky sa získali v deuterovanom chloroforme a v deuterovanom acetonitrile.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Ν-,Ν'-,Ν’'-tri-Boc-guanidin

Pelety hydroxidu draselného (2,81 g, 50 mmol) a uhličitan sodný (5,30 g, 50 mmol) sa jemne rozomelú v mažiari a prenesú do 250 ml banky s kruhovým dnom, ktorá je vybavená magnetickým miešadlom a spätným chladičom. Pridá sa 50 ml DMSO a vznikla suspenzia sa mieša po dobu 5 minút pri izbovej teplote. Pridá sa 4,78 g, 50 mmol guanidínhydrochloridu a zmes sa opäť mieša po dobu 5 minút. Po pridaní 51,7 ml, 225 mmol di-te/7-butyldikarbonátu sa zmes mieša po dobu 60 hodín pri teplote 40 °C. Bezfarebný prípravok, ktorý sa získa vliatím chladnej reakčnej zmesi do 1 I vody, sa skoncentruje filtráciou v Buchnerovej nálevke, vymyje vodou a suší cez noc vo vákuu. Rekryštalizáciou z acetonitrilu sa získajú bezfarebné ihličky (14.9 g, 83 %): bod topenia 147-150 °C (dec); ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, CDCI3) 1.48 (s 27H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 360 (100, M+H⁺), 304 (34), 260 (10), 248 (74);, analytický výpočet pre: C, 53,47 %; H, 8,13 %; N, 11,69 %; zistené: C, 53,48 %; H, 8,34 %; N, 11,86 %.

Príklad 2

N-,N'-,N-tri-Cbz-guanidín

Hydroxid sodný (400 mg, 60 %-ná disperzia v minerálnom oleji) sa pridá po malých dávkach k suspenzii N-,N'-,N-tri-Cbz-guanidínu (1,65 g, 5.0 mmol) v bezvodom THF (20 ml), a to pri teplote 45 °C pod argónovou atmosférou. Po ukončení pridávania sa zmes mieša počas 1 hodiny pri teplote 45 °C. Pridá sa benzylchloroformát (0,82 ml, 5 mmol), zmes sa nechá zahriať na izbovú teplotu a mieša cez noc. Pri zníženom tlaku sa odstráni rozpúšťadlo a zvyšok sa rozpustí v zmesi dichlórmetánu (50 ml) a vody (25 ml). Fázy sa separujú a vodná vrstva sa dvakrát extrahuje dichlórmetánom (každý raz 50 ml). Extrakty sa zmiešajú, vymyjú ΙΝ-kyselinou chlorovodíkovou a vodou a sušia sa síranom horečnatým. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt čistí okamihovou chromatografíou na silikagéli (eluent: dichlórmetán-etyléter 98:2). Získa sa N-,N'-,N-tri-Cbz-guanidín (2,07 g, 90 %) vo forme bieleho prášku: bod topenia 111-112 °C; ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSOde) 10.55 (s, 2H), 7,36 (s, 10H) 5,22 (br s, 6H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 506 (5, M-H* + 2Na⁺), 484 (100, M+Na⁺), 462 (24, M+H⁺); analytický výpočet pre: C, 65,07 %; H, 5,02 %; N, 9,11 %; zistené: C, 64,89 %, H, 4,74 %, N, 8,82 %.

Príklad 3

N-metyl-N-,N^,-,N'^,-tri-Boc-guanidín

Roztok bezvodého metanolu (0,04 ml, 1.0 mmol), N-,N'-,N-tri-Bocguanidínu (1,80 g, 5,0 mmol) a trifenylfosfidu (393 mg, 1.5 mmol) v bezvodom THF (50 ml) sa pod argónovou atmosférou ochladí na - 5 °C. Dietylazodikarboxylát (DEAD, 0,22 ml, 1,5 mmol) sa pridáva po kvapkách takou rýchlosťou, že reakčná zmes je pred pridaním ďalšej kvapky vždy bezfarebná. Po ukončení pridávania sa reakčná zmes nechá počas 15 hodín cirkulovať. Roztok sa potom ochladí na izbovú teplotu a pridá sa hexán (50 ml). Vyzrážaný prebytok N-,N',N-tri-Boc-guanidínu sa separuje filtráciou v Biichnerovej nálevke a premyje sa zmesou THF/hexán 1:1. Filtrát sa skoncentruje pri zníženom tlaku a produkt (bezfarebný olej, 182 mg, 49 %) sa izoluje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán-etyléter 98:2): Ή magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-d₆) 10.17 (s, 1H), 2,94 (s, 3H), 1,43-1,36 (27H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 396 (100, M+Na⁺) 374 (91, M+H⁺).

Príklad 4

L-N-cbz-δ, o, ω'-tri-Boc-arginínmetyIester

Roztok S-N-Cbz-2-amino-5-hydroxy-metylesteru kyseliny valerovej (0,56 g, 2,0 mmol), N-,N'-,N-tri-Boc-guanidínu (3,59, g, 10,0 mmol) a trifenylfosfidu (0,79 g, 3.0 mmol) v bezvodom THF (100 ml) sa pod argónovou atmosférou ochladí na - 5 °C. Dietylazodikarboxylát (DEAD, 0,45 ml, 3,0 mmol) sa pridáva po kvapkách takou rýchlosťou, že reakčná zmes je pred pridaním ďalšej kvapky vždy úplne bezfarebná. Po ukončení pridávania sa reakčná zmes mieša po dobu 18 hodín pri teplote 45 °C. Roztok sa potom ochladí na izbovú teplotu a pridá sa hexán (100 ml). Vyzrážaný prebytok N-,N^,-,N-tri-boc-guanidinu sa separuje filtráciou v Búchnerovej nálevke a premyje sa zmesou THF/hexán 1:1. Filtrát sa skoncentruje pri zníženom tlaku a produkt (bezfarebný olej, 0,87 g, 70 %) sa izoluje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán-etyléter

9:1): ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-d₆) 10.18 (s 1H), 7,72 (d, 1H, J=7.9 Hz), 7,40-7,26 (m, 5H), 5,01 (s, 2H), 4,03-3,94 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,45 (t, 2H, J=5,8 Hz), 1,73-1,45 (m, 4H), 1,39 (s, 18H), 1,37 (s, 9H); FAB-MS m/e 623 (M+H⁺).

Príklad 5

L-N-Cbz-ω -metyl-δ, o, ω'-tri-Boc-arginínbenzylester

Roztok S-N-Cbz-2-amino-5-hydroxy-metylesteru kyseliny valerovej (143 mg, 0,4 mmol), N-metyl-N-,N'-,N-tri-Boc-guanidínu (150 mg, 0,4 mmol) a trifenylfosfidu (105 mg, 0,4 mmol) v bezvodom THF (2 ml) sa ochladí na - 5 °C. Dietylazodikarboxylát (DEAD, 0,06 ml, 0,38 mmol) sa pridáva po kvapkách takou rýchlosťou, že reakčná zmes je pred pridaním ďalšej kvapky vždy úplne bezfarebná. Po ukončení pridávania sa reakčná zmes nechá po dobu 3 hodín cirkulovať. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a produkt (bezfarebný olej, 181 mg, 63 %) sa izoluje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: etylacetát-hexán 1:3): ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-de) 7,80 (d, 2H, J=7,9 Hz), 7,39-7,28 (m, 10H), 5,10 (s, 2H) 5,06-4,94 (m, 2H), 4,11-4,00 (m, 1H), 3,53-3,44 (m, 2H), 2,89 (s, 3H), 1,75-1,50 (m, 4H), 1,401,34 (27H); FAB-MS m/e 845 (M+Cs⁺).

Príklad 6

N-,N'-di-Boc-guanidín

1,4-dioxán (50 ml) sa pridá k roztoku guanidínhydrochloridu (2,39 g, 25 mmol) a hydroxidu sodného (4,0 g, 0,1 mol) vo vode (25 ml) a výsledná zmes sa ochladí na 0 °C. Za miešania sa naraz pridá di-/er/-butyl-pyrokarbonát (12.0 g, 55 mmol). Reakčná zmes sa nechá po dobu dvoch hodín zahrievať na izbovú teplotu. Po miešaní počas 20 hodín sa zmes skoncentruje vo vákuu na tretinu svojho pôvodného objemu. Výsledná suspenzia sa rozriedi vodou (50 ml) a ex21 trahuje trikrát etylacetátom (každý raz 50 ml). Kombinované extrakty sa premyjú 10 %-nou kyselinou citrónovou, vodou a solankou a vysušia sa síranom horečnatým. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetánmetanol 97:3). N-,N'-di-Boc-guanidín (3,84 g, 59 %) sa získa vo forme bezfarebného prášku: bod topenia 144 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360

MHz, DMSO-d₆) 10,42 (br s, 1H), 8,47 (br s, 2H), 1,39 (s, 18H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 260 (50, M+H⁺), 204 (48), 148 (100); analytický výpočet pre: C, 50,95 %; H, 8,16 %; N, 16,21 %, nájdené: C, 50,83 %; H, 8,04 %; N, 16,26 %.

Príklad 7

N'-di-Boc-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín

Roztok N-,N'-di-boc-guanidínu (0,52 g, 2,0 mmol) a trietylamínu (0,29 ml) v bezvodom dichlórmetáne (10 ml) sa ochladí na - 78 °C pod argónovou atmosférou. Triflicanhydrid (0,35 ml, 2.1 mmol) sa pridáva po kvapkách takou rýchlosťou, aby reakčná teplota neprekročila - 65 °C. Po ukončení pridávania sa zmes ponechá za 4 hodiny zahriať na izbovú teplotu. Roztok sa prenesie do separačnej banky, premyje sa 2M dvojsíranom sodným a vodou a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán). Získa sa N-,N'-di-Boc-N^,trifluórmetánsulfonyl-guanidín (686 mg, 88 %) vo forme bledých žltých kryštálov. Produkt sa môže ďalej rafinovať rekryštalizáciou z hexánov: bod topenia 115 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-de) 11,45 (br s, 2H), 1,45 (s, 18H). FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 414 (16, M+Na⁺), 392 (13, M+H⁺), 336 (43), 280 (100), 236 (9); analytický výpočet pre: C, 36,83 %; H, 5,15 %; N, 10,74 %; F, 14,56 %; S, 8,19 %; nájdené: C, 36,93 %; H, 5,21 %; N, 10,66 %; F, 14,80 %; S, 8,33 %.

Príklad 8

N-,N'-di-Cbz-guanidín

Dichlórmetán (80 ml) sa pridá k roztoku guanidínhydrochloridu (3,82 g, 40 mmol) a hydroxidu sodného (8 g, 0,2 mol) vo vode (40 ml) a výsledná zmes sa ochladí na 0 °C. Pri intenzívnom miešaní sa po dobu 45 minút pridáva po kvapkách benzyloxykarbonylchlorid (17.1 ml, 120 mmol). Po ukončení pridávania sa pokračuje v miešaní po dobu 20 hodín pri teplote 0 °C. Zmes sa rozpustí v dichlórmetáne (100 ml), oddelia sa vrstvy a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (100 ml). Extrakty sa skombinujú, premyjú vodou a sušia síranom horečnatým. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rekryštalizuje z metanolu. Získa sa Ν-,Ν'-di-Cbz-guanidín (9,85 g, 75 %) vo forme bezfarebných kryštálov: bod topenia 149-150 °C, Ή magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-d₆) 10,88 (br s, 1H), 8,67 (br s, 2H), 7,40-7,25 (m, 10H); 5,10 (s, 4H); analytický výpočet pre: C, 62,38 %; H, 5,23 %; N, 12,84 %. Nájdené: C, 62,26 %; H, 5,01 %; N, 12,79 %.

Príklad 9

N-,N'-di-Cbz-trifluórmetánsulfonyl-guanidín

Hydrid sodný (400 mg, 60 disperzia v minerálnom oleji) sa pridá pri teplote 0 °C pod argónovou atmosférou k roztoku Ν-,Ν'-di-Cbz-guanidínu (1,65 g, 5,0 mmol) v bezvodom chlórbenzéne. Po miešaní počas 1 hodiny pri 0 °C sa zmes ochladí na - 45 °C. Pridá sa triflicanhydrid (0,82 ml, 5 mmol) a zmes sa nechá cez noc za miešania zahriať na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustí v zmesi etylacetátu (100 ml) a 2M dvojsiranu sodného (25 ml). Fázy sa oddelia a organická vrstva sa premyje vodou a solankou a vysuší síranom horečnatým. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán-etyléter 95:5). N-.N'-di-Cbz-N'trifluórmetánsulfonyl-guanidín (1,58 g, 69 %) sa získa vo forme bledého oleja, ktorý kryštalizuje vo vákuu: bod topenia 74-75 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-de) 11,55 (br s, 2H), 7,45-7,28 (m, 10H), 5,20 (s, 4H); elekrospray-MS m/e (relatívna intenzita) 498 (30, M+K⁺), 482 (100, M+Na*), 460 (2, M+H*); analytický výpočet pre: C, 47,06 %; H, 3,51 %; N, 9,15 %; F, 12,41 %; S, 6,98 %; nájdené: C, 47,37 %; H, 3,35 %; N, 8,67 %; F, 12,97 %; S, 6,92 %.

Príklad 10

N-Cbz-guanidín

1,4-dioxán (20 ml) sa pridá k roztoku guanidínhydrochloridu (0,96 g, 10 mmol) a hydroxidu sodného (0,8 g, 20 mmol) vo vode (10 ml) a výsledná zmes sa ochladí na 0 °C. Za intenzívneho miešania sa po kvapkách po dobu 10 minút pridáva benzyloxykarbonylchiorid (1,1 ml, 7,7 mmol). Po skončení pridávania sa zmes vyberie z ľadového kúpeľa a miešanie pokračuje počas 1 hodiny pri izbovej teplote. Zmes sa skoncentruje vo vákuu na tretinu svojho pôvodného objemu a extrahuje trikrát vinylacetátom (každý raz 20 ml). Kombinované extrakty sa premyjú solankou (20 ml) a vysušia bezvodým síranom sodným. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa získa N-Cbz-guanidín (1,31 g, 88 %) vo forme bieleho prášku: bod topenia 120-122 °C; Ή magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-de) 7,35-7,25 (m, 5H), 6,88 (br s, 4H), 4,95 (s, 2H); elekrospray-MS m/e (relatívna intenzita) 194 (M+H⁺).

Príklad 11

N-Boc-N’-Cbz-guanidín

Roztok di-/er/-butylpyrokarbonátu (1,32 g, 6,05 mmol) v acetóne sa pridá v jednej dávke za miešania k roztoku N-Boc-N'-Cbz-guanidínu (1,30 g, 6,73 mmol) a trietylamínu (0,94 ml) v acetóne (15 ml). Po miešaní po dobu 48 hodín pri izbovej teplote sa rozpúšťadlo odstráni pri zníženom tlaku a výsledný zvyšok sa rozpustí v zmesi etylacetátu (100 ml) a vody (50 ml). Fázy sa separujú a organická vrstva sa premyje 2M dvojsíranom sodným, vodou a solankou a vysušia sa bezvodým síranom sodným. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán-etyléter 9:1). N-Boc-N'-Cbz-guanidín (1,44 g, 82 %) sa získa vo forme bieleho prášku: bod topenia 125-126 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-d₆) 10,59 (br s, 1H), 8,69 (br s, 1H), 8,50 (br s, 1H); 7,40-7,25 (m, 5H), 5,04 (s, 2H),.1,42 (s, 9H).

Príklad 12

N-íerf-butoxykarbonyl-N'-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín

Roztok N-Boc-N'-Cbz-guanidínu (586 mg, 2,0 mmol) a trietylaminu (0,42 ml) v bezvodom dichlórmetáne (20 ml) sa pod argónovou atmosférou ochladia na - 78 °C. Pridáva sa po kvapkách triflicanhydrid (0,42 ml, 2,5 mmol) takou rýchlosťou, aby reakčná teplota neprekročila - 65 °C. Po ukončení pridávania sa zmes nechá po dobu 4 hodín zahriať na izbovú teplotu. Zmes sa prenesie do separačnej banky, premýva sa 2M dvojsíranom sodným a vodou a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: dichlórmetán). N-boc-N'-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín (699 mg, 82 %) sa získa vo forme bledého oleja, ktorý kryštalizuje pri sušení vo vákuu: bod topenia 95-97 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-de)

11,49 (br s, 1H), 11,17 (br s, 1H), 7,40 (m, 5H); 5,21 (s, 1H), 1,43 (s, 9H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 448 (23, M+Na⁺), 426 (44, M+H⁺), 329 (5), 370 (100), 348(15), 326 (15).

Príklad 13

N,N'-bis(ŕerŕ-butyloxykarbonyl)-pyrrolidín-l-karboxamidín

N-N'-di-Boc-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín (235 mg, 0,6. mmol) sa pridá k roztoku pyrrolidínu (0,042 ml, 0,5 mmol) a trietylamínu v chloroforme (1 ml). Po miešaní po dobu 4 hodín pri izbovej teplote sa surový produkt rafinuje okamihovou chromatografiou na silikagéli (eluent: etylacetát-hexán 2:3). Produkt (146 mg, 93 %) sa získa vo forme bezfarebného oleja, ktorý kryštalizuje vo vákuu: bod topenia 88-91 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, CDCI3) 3,58-3,53 (m, 4H), 1,90-1,83 (m, 4H), 1,46 (s, 18H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 649 (13, 2M+Na⁺), 627 (5, 2M+H⁺), 336 (29, M+Na⁺), 314 (100, M+ H⁺), 258 (28), 202 (94).

Príklad 14

N-N’-di-Boc-N*’-fenyl-guanidín

Anilín (0,055 ml, 0,6 mmol) sa pridá k roztoku N-N'-di-Cbz-Ntrifluórmetánsulfonyl-guanidínu v chloroforme a zmes sa mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustí v etyléteri (10 ml). Roztok sa premyje 10 %-nou kyselinou citrónovou, vodou a solankou a vysuší sa síranom horečnatým. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku sa získa N-N'-di-Boc-N-fenyl-guanidín (198 mg, 98 %) vo forme bezfarebného oleja, ktorý kryštalizuje vo vákuu: bod topenia 105-108 °C, ‘H magnetická jadrová rezonancia (360 MHz, DMSO-d₆) 11,34 (br s, 1H), 9,99 (s, 1H), 7,56-7,11 (m, 15H); 5,23 (s, 2H), 5,02 (s, 1H); FAB-MS m/e (relatívna intenzita) 426 (M+Na⁺), 404 (M+H⁺).

Vyššie popísané postupy podľa vynálezu sú len príklady a nepredstavujú žiadne obmedzenie vynálezu, ktorý je vymedzený len rozsahom pripojených patentových nárokov.

Claims

1. Chránený guanidín so štruktúrnym vzorcom

Pi—

IÍN .b

NH-P2 kde Pi, P2 a P3 sú zhodné alebo rôzne uretánové ochranné skupiny, soli a ich solváty.

2. Chránený arginínový homológ so štruktúrnym vzorcom

Q_HN—CH—OOOH (J»)n k, jl—b

Pi—

NH—b kde Q, Pi, P2 a P3 sú zhodné alebo rôzne uretánové ochranné skupiny a n má hodnotu 0-3, a soli a ich solváty.

4.

5.

6.

7.

8.

Chránené molekuly podľa nárokov 1 až 2, kde uretánové ochranné skupiny sú zvolené zo skupiny obsahujúcej (a) /er/-butylkarbonyl (Boe), (b) benzyloxykarbonyl (Cbz), (c) allyloxykarbonyl (Alloc), (d) 2,2,2-trichlóretyloxykarbonyl (Troc), (e) 2-chlo'robenzyloxykarbonyl; a (f) 4-metoxy-benzyloxykarbonyl (Moz).

N-,N'-,N-tri-/er/-butyloxykarbonyl-guanidín.

N-,N'-,N-trí-benzyloxycarbonyl-guanidín,

N-metyl-N-,N'-,N-tri-/er/-butyloxykarbonyI-guanidín.

N-metyl-N-,N'-,N^l,-tri-/í;/7-benzyloxykarbonyl-guanidín.

Chránený guanidín so štruktúrnym vzorcom

R

H H

P,—N N—P₂ kde Pi a P₂ sú zhodné alebo rozdielne uretánové ochranné skupiny a R je substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová alebo arylová skupina alebo heterocyklická skupina a soli a ich solváty.

9. Chránený guanidín so štruktúrnym vzorcom cf₃

P,-N N—P₂

H H kde Pi a P₂ sú zhodné alebo rozdielne uretánové ochranné skupiny a soli a ich solváty.

10. N-N'-di-Boc-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín.

11. N-N'-di-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyI-guanidín.

12. N-Boc-N'-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín.

13. Spôsob guanidinizácie reakciou guanidínu so štruktúrnym vzorcom

N^‘

Λ

P,—N N—P₂ kde Pi, P₂ a P3 sú zhodné alebo rôzne uretánové ochranné skupiny, s alkoholom so štruktúrnym vzorcom

Ri

RaíľH

-OH kde Ri a R₂ sú zvolené zo skupiny obsahujúcej H, substituované alebo nesubstituované alkyly, alkenyly, aryly a arylalkyly, alebo Rj a R₂ sú členmi cykloalkylovej štruktúry so 3-6 členmi, za účelom získania produktu so štruktúrnym vzorcom

N—p,

Λ

P|- N NH—P₂

Ri—ČH

14. Spôsob podľa nároku 13, obsahujúci ďalej reakciu primárneho alebo sekundárneho alkoholu so štruktúrnym vzorcom

Rj l

R4-CH -OH kde R3 a R4 sú nezávisle zhodné alebo odlišné od Ri a R2, s produktom spôsobu podľa nároku 13 za účelom získania zlúčeniny so štruktúrnym vzorcom

N—p₃

Λ

P|- N N—P, ¹ 1

R,—CH HC— R, k k.

15.

Spôsob prípravy homológov arginínu reakciou guanidínu sa štruktúrnym vzorcom p,—N . N—p,

I I H H kde Pj, P2 a P₃ sú zhodné alebo rôzne uretánové skupiny, minoacidom so štruktúrnym vzorcom s chráneným aQ- HN^^COOR, (ČH^ ch₂oh kde Ri je substituovaná alebo nesubstituované alkylová alebo arylová sku pina, Q je uretánová ochranná skupina a n má hodnotu 0-3, za účelom zís kania produktu so štruktúrnym vzorcom

Q-hn

COOR, (CH^

I

CHj

16.

Spôsob guanidinizácie amínov reakciou chráneného guanidínu so štruktúr nym vzorcom ,SOj

Λ

P|-HN ^XNH-P₂ kde Pi, P₂ a P₃ sú zhodné alebo rôzne uretánové skupiny, a Ri je substitu ovaná alebo nesubstituované alkylová skupina, a primárneho alebo sekun dárneho amínu so štruktúrnym vzorcom

Rj-NH kde R₂ a R₃ sú nezávisle H, alebo substituované alebo nesubstituované alkylové skupiny, alebo aminoacid alebo polypeptid, alebo R₂ a R₃ sú časťami cyklickej štruktúry, napríklad v piperidíne, pyrrolidíne alebo morfolíne, za účelom získania produktu so štruktúrnym vzorcom

R,

R,-N \f

17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že guanidinizačná skupina má štruktúrny vzorec

N-⁵⁰’

Λ

P,—N N—P,

I I H H

18. Guanidinizované zlúčeniny pripravené spôsobom podľa ktoréhokoľvek z nárokov 15 až 17. ^{19 * * * * *}

19. Guanidinizované zlúčeniny pripravené reakciou guanidinizačného činidla zvoleného zo skupiny obsahujúcej

N-N'-di-Boc-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín,

N-N'-di-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín, a

N-Boc-N'-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyl-guanidín, s primárnym amínom.

20. Guanidínované zlúčeniny pripravené reakciou guanidinizačného činidla zvoleného zo skupiny obsahujúcej

N-N'-di-Boc-N-trifluórmetánsulfbnyl-guanidín,

N-N'-di-Cbz-N-trifluórmetánsuIfonyl-guanidín, a

N-Boc-N'-Cbz-N-trifluórmetánsulfonyI-guanidín, so sekundárnym aminom.

21. Spôsob syntézy peptidov obsahujúcich jeden alebo viac homológov arginínu v pevnej fáze, ktorá pozostáva z krokov:

(a) vytvorenie sekvencie (Xaa)„ aminokyselín na peptidovej syntetickej živici v pevnej fáze, kde Xaa značí ľubovoľnú vhodne chránenú aminokyselinu, (b) pripojenie aminokyseliny so štruktúrnym vzorcom

Q_HN—CH—COOH (b+ln

Íihp kde Q je Boe alebo Fmoc a P je ľubovoľná ochranná skupina, ktorá môže byť selektívne odstránená, a n = 0-3, k amínovému zakončeniu produktu z kroku (a);

(c) naviazanie ľubovoľnej sekvencie vhodne chránených aminokyselín k amínovému zakončeniu produktu z kroku (b);

(d) selektívne odstránenie všetkých ochranných skupín P, ako sú definované v (b), z produktu z kroku (c);

(e) reakcia chráneného guanidínu so štruktúrnym vzorcom

R

I

SO2

P,—N N—P₂ s produktom z kroku (d) za účelom guanidinizácie všetkých prítomných nechránených aminových funkcií; a (f) odstránenie všetkých ochranných skupín a odštiepenie peptidov od živice za účelom získania produktu

H-(Xaa)_m-HN - CH - CO-(Xaa)_n-OH (ch₂)„ ch₂

NH

HN nh₂ <·

2/2

Λ'

2/2

NT f

BocHN

U ' NHBoc

SMe • SocN^^^ NHBoc % produktu

Q

A.

Á BocHN-^^NH

100%

80%’

60%

40%

20%

0%--a—fi A—£-£-í-í-í

O 10 20 30 40 50 60 min reagencia = 100 mM benzylamín = 90 mM