ES2298827T3 - Procedimiento de obtencion de n-carboxianhidridos de alfa-aminoacidos protegidos con uretano. - Google Patents

Procedimiento de obtencion de n-carboxianhidridos de alfa-aminoacidos protegidos con uretano. Download PDF

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ES2298827T3 ES04786315T ES04786315T ES2298827T3 ES 2298827 T3 ES2298827 T3 ES 2298827T3 ES 04786315 T ES04786315 T ES 04786315T ES 04786315 T ES04786315 T ES 04786315T ES 2298827 T3 ES2298827 T3 ES 2298827T3
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Abstract

Procedimiento de obtención de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano (UNCA), de fórmula I (Ver fórmula) en la que R1 y R2, idénticos o diferentes, representan juntos o independientemente uno del otro, un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un alfa-aminoácido natural o sintético portadora eventualmente de grupos funcionales, cuando sea apropiado protegidos; R 3 representa un radical alquilo en C1-C10 saturado o insaturado, lineal o ramificado o un radical aralquilo o alquilarilo en 7 a 14 átomos de carbono, caracterizado porque un N-carboxianhídrido de alfaaminoácido (NCA) de fórmula II (Ver fórmula) en la que R1 y R2 tienen el mismo significado que para la fórmula I, se hace reaccionar con al menos un equivalente, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II, de dicarbonato de fórmula III (Ver fórmula) en la que R3 tiene el mismo significado que para la fórmula I, en presencia de una cantidad catalítica de 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, denominado asimismo trietilendiamina (TEDA), con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II, en un disolvente orgánico, con un punto de fusión inferior a aproximadamente -20ºC.

Description

Procedimiento de obtención de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano.
La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento de preparación de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano. El nuevo procedimiento permite la síntesis de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano a partir de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos en presencia de una cantidad catalítica de trietilendiamina, sin adición de cantidades significativas de una base del tipo amina terciaria.
Los N-carboxianhídridos de los alfa-aminoácidos (a continuación designados bajo la abreviatura NCA), opcionalmente protegidos, son unos agentes de acilación usados frecuentemente para la formación de poli alfa-aminoácidos de alto peso molecular y para la producción de dipéptidos. Los NCA son unos compuestos muy reactivos, que no forman, en particular a través de re-configuración, ningún producto secundario no deseado y cuyo único subproducto de reacción es el dióxido de carbono. Cuando el NCA se pone a reaccionar con una función amina libre de un aminoácido, se libera inmediatamente dióxido de carbono y se forma un dipéptido, que contiene a su vez una función amina libre. Esta amina reaccionará con NCA para formar un tripéptido, y así sucesivamente. Así, los NCA se pueden usar en la formación de poli(alfa-aminoácidos) pero no se pueden usar fácilmente en la síntesis secuencial de polipéptidos, siendo difíciles de controlar las reacciones secundarias múltiples de condensación tal como una oligomerización.
Se han descrito en la bibliografía N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos sustituidos por unos grupos uretano, y se usan en las síntesis peptídicas. El sustituyente uretano aporta un alto grado de protección y permite minimizar las reacciones de polimerización durante la reacción de acoplamiento. Los NCA protegidos con uretano, abreviados como UNCA a continuación, presentan todas las ventajas de los NCA no sustituidos sin los inconvenientes de estos últimos.
Los UNCA permiten una síntesis controlada de polipéptidos sin que sea necesaria ninguna pre-activación de los grupos carboxilo, y sin que sea necesaria ninguna adición de aditivos tales como el N-hidroxibenzotriazol. De esta forma, se facilita la purificación de los péptidos preparados en disolución, debido a que solamente el subproducto de la reacción de síntesis peptídica es el dióxido de carbono.
Los UNCA son muy útiles asimismo como materias primas en la síntesis de hormonas o de medicamentos anti-sida.
Los UNCA, que están en forma cristalina en condiciones de temperatura y de presión ambientales, son estables bajo las condiciones estándares de manipulación en laboratorio, almacenamiento, y bajo las condiciones de síntesis peptídica.
Las dos vías principales de síntesis de los UNCA a partir de NCA son las siguientes:
1) Los UNCA se pueden sintetizar por condensación de un cloroformiato de alquilo o de aralquilo, tal como Fmoc-Cl (cloroformiato de 9-fluorofenilmetiloxicarbonilo) o cloroformiato de bencilo, con un NCA en presencia de por lo menos una cantidad estequiométrica de una amina terciaria. Esta amina terciaria, que es habitualmente la N-metilmorfolina, permite depurar el ácido clorhídrico liberado. Así, el NCA se pone en disolución en un disolvente inerte, tal como THF, y se enfría. Se añadieron 1,1 a 1,3 equivalentes de cloroformiato de alquilo o de aralquilo de una sola vez, y después se añadieron lentamente al menos 1,5 equivalentes de una amina terciaria, por ejemplo la N-metilmorfolina. La suspensión resultante se dejó en reposo durante 1 a 2 horas, a una temperatura comprendida entre -25 y -5ºC. Después, se añadió lentamente ácido clorhídrico disuelto en dioxano hasta la obtención de valores de pH de aproximadamente 4-5. El clorhidrato de la amina terciaria así formado se eliminó mediante filtración, y el UNCA se concentró y después se cristalizó.
Todas las etapas del procedimiento se llevan a cabo bajo una atmósfera inerte (N_{2}), y todos los disolventes se secan en un tamiz molecular de 4 \ring{A} antes de ser utilizados (William D. Fuller et al., Urethane-protected-alpha-amino acid N-carboxyanhydrides and peptide synthesis, Biopolymers, 1996, 40, 183-205).
Esta vía de síntesis es poco apropiada para preparar ciertos N-carboxianhídridos de alfa-aminoácido protegidos, en particular los protegidos por un radical t-butoxicarbonilo, siendo el cloroformiato de t-butilo muy inestable por encima de -20ºC o en presencia de aminas terciarias.
2) Los UNCA se pueden sintetizar asimismo mediante condensación de un dicarbonato de dialquilo con un NCA. Esta reacción libera una molécula de alcohol y una molécula de dióxido de carbono. Esta síntesis se debe realizar imperativamente en presencia de una cantidad elevada, por lo menos una cantidad de 50% molar con relación a la cantidad molar de NCA involucrada, de una amina terciaria tal como la N-metilmorfolina asociada con una cantidad catalítica de DMAP (4-dimetilaminopiridina) o una piridina (William D. Fuller et al., Urethane-protected-alpha-amino acid N-carboxyan hydrides and peptide synthesis, Biopolymers, 1996, 40, 183-205). Esta vía de síntesis está particularmente adaptada para la síntesis de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos por un radical di-butoxicarbonilo utilizando el dicarbonato de di-terciobutildicarbonato, véase asimismo Bull. Cham. Soc. Japón, 69 (1996), 2309-2316.
La solicitud WO 89/08643 describe N-carboxianhídridos de alfa alfa-aminoácidos y N-tiocarboxianhídridos de alfa-aminoácidos con protección de uretano, de fórmula,
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en la que R y R' representan un átomo de hidrógeno, un radical alquilo, cicloaquilo, cicloalquilo sustituido por un radical alquilo sustituido, arilo o arilo sustituido, y al menos un grupo R o R' no representa un átomo de hidrógeno; R'' representa un radical alquilo, arilo, alquilo sustituido, o arilo sustituido; Z representa un átomo de oxígeno o de azufre y n es 0, 1 ó 2.
Estos compuestos se preparan mediante reacción de NCA con un halogenoformato en un disolvente inerte, tal como el tolueno, en condiciones anhidras, en presencia de una base de tipo amina terciaria añadida en exceso.
Los procedimientos existentes de síntesis de UNCA no resultan satisfactorios. En efecto, el mejor procedimiento descrito anteriormente en la presente memoria, que usa una base de tipo amina terciaria en una cantidad al menos igual a 50% molar con relación a la cantidad de NCA involucrado, proporciona unos rendimientos sólo de aproximadamente 60%, con la condición de que los disolventes se sequen sobre un tamiz molecular de 4 \ring{A} y que sean tratados entre -20 y -15ºC.
Sorprendentemente, se ha descubierto que el uso de trietilendiamina (TEDA) en una cantidad catalítica muy baja, inferior a 5% molar con relación a la cantidad molar de NCA involucrado, sin ninguna adición de base de tipo amina terciaria, lleva a buenos resultados.
En el ámbito de la presente invención, la abreviatura NCA designa lo(s) N-carboxianhídrido(s) de alfa-aminoá-
cido(s) y UNCA designa lo(s) N-carboxianhídrido(s) de alfa-aminoácido(s) protegidos con uretano.
En el sentido de la presente invención, mediante la expresión "cantidad catalítica" se entiende una cantidad significativamente inferior y más específicamente inferior en 50% a la requerida por la estequiometría.
La presente invención se refiere a un procedimiento de obtención de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano (UNCA), de fórmula I
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en la que R^{1} y R^{2}, idénticos o diferentes, representan juntos o independientemente uno del otro, un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un alfa-aminoácido natural o sintético portadora eventualmente de grupos funcionales, cuando sea apropiado protegidos; R^{3} representa un radical alquilo lineal en C_{1}-C_{10} saturado o insaturado, lineal o ramificado o un radical aralquilo o alcarilo de 7 a 14 átomos de carbono, caracterizado porque un N-carboxianhídrido de alfa-aminoácido (NCA) de la fórmula II,
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en la que R^{1} y R^{2} tienen el mismo significado que para la fórmula I, se hace reaccionar con al menos un equivalente, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II, de dicarbonato de fórmula III
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en la que R^{3} tiene el mismo significado que para la fórmula I, en presencia de una cantidad catalítica de 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, denominado asimismo trietilendiamina (TEDA), con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de la fórmula II, en un disolvente orgánico inerte con un punto de fusión inferior a aproximadamente -20ºC.
Un alfa-aminoácido natural o sintético es un aminoácido portador en el primer carbono de la cadena de una función amina y de una función de ácido carboxílico. El resto del alfa-aminoácido se denomina cadena lateral del alfa-aminoácido.
R1 y R2 son, cuando es apropiado, protegidos con grupos protectores usados habitualmente en el campo de los aminoácidos y de los péptidos (Bodansky, principles of peptide synthesis, Springer-Verlag, 1984; Alpha amino-acids N-carboxyanhydrides and related heterocycles, Hans R. Kricheldorf, Springer Verlag, 1987).
R1 y R2, idénticos o diferentes, representan ventajosamente un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C_{1}-C_{8} lineal o ramificado, que comprende eventualmente uno o más sustituyente(s) habitual(es) en el campo de los aminoácidos y de los péptidos. Los sustituyentes se seleccionan en particular de entre el grupo constituido por OH, SH, NH_{2}, NHC(NH)NH_{2}, CONH_{2}, O-alquilo en C_{1}-C_{6}, O-arilo en C_{6}-C_{10}, S-alquilo en C_{1}-C_{6}, COO-alquilo en C_{1}-C_{6}, COO-aralquilo en C_{5}-C_{8}, en particular el radical éster bencílico.
Un grupo R1 o R2 puede representar ventajosamente un radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7}, sustituido opcionalmente por uno o más grupo(s) habitual(es) en el campo de los aminoácidos y de los péptidos. Los sustituyentes se seleccionan en particular de entre el grupo constituido por los halógenos, OH, O-alquilo en C_{1}-C_{6}, O-arilo en C_{6}-C_{10}, alquilo en C_{1}-C_{6}.
Un grupo R1 o R2 puede representar ventajosamente un radical fenilo, naftilo, heteroaromático de 5 ó 6 miembros o indol eventualmente sustituido con uno o más grupo(s) habitual(es) en el campo de los aminoácidos y de los péptidos. Los sustituyentes se seleccionan en particular de entre el grupo constituido por los halógenos, OH, O-alquilo en C_{1}-C_{6}, O-arilo en C_{6}-C_{10}, alquilo en C_{1}-C_{6}.
Por razones obvias de obstáculos estéricos, R1 y R2 no pueden representar simultáneamente un radical cíclico. Mediante la expresión "radical cíclico" se entiende dicho radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7} así como dicho radical fenilo, naftilo, o heteroaromático de 5 ó 6 miembros o indol.
R^{1} y R^{2} pueden formar asimismo juntos un radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7} sustituido eventualmente con uno o más grupo(s) habitual(es) en el campo de los aminoácidos y de los péptidos. Los grupos se seleccionan en particular de entre el grupo constituido por los halógenos, OH, O-alquilo en C_{1}-C_{6}, alquilo en C_{1}-C_{6}, O-arilo en C_{6}-C_{10}.
En el caso en el que R1 y R2 no forman juntos un radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7}, por lo menos uno de los grupos R1 y R2, tales como se han definido anteriormente, representa ventajosamente un átomo de hidrógeno.
En los compuestos de la fórmula II, los grupos funcionales están protegidos ventajosamente con unos grupos protectores adecuados.
Según una variante ventajosa de la invención, R3 representa el radical metilo, el radical etilo, el radical tercio-butilo, el radical bencilo, el radical alilo o el radical 9-fluorenilmetilo. En efecto, aunque existe una gran variedad de uretanos que se pueden usar como grupos protectores, sólo unos cuantos se usan ampliamente en la síntesis peptídica. Se pueden citar en particular T-butiloxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (Cbz) y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc). Por consiguiente, los N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos por estos sustituyentes son particularmente interesantes.
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El procedimiento según la presente invención permite evitar el uso de una amina terciaria, en una cantidad muy elevada de 50 a 200% molar con relación a la cantidad molar de NCA involucrado. Las aminas terciarias usadas en la técnica anterior, la N-metilmorfolina y la piridina, plantean realmente numerosos problemas. De forma especial, su uso implica trabajar con una alta dilución, la formación de productos parásitos, una etapa adicional de separación, un reciclaje difícil y, además, resulta muy costoso.
El procedimiento según la invención permite asimismo reducir notablemente los tiempos de reacción que son a partir de ahora menores que 24 horas y ventajosamente del orden de 1 a 4 horas, mientras que para los procedimientos de la técnica anterior, los tiempos de reacción variaban de 30 horas a 5 días.
El procedimiento según la invención permite obtener UNCA, cuya pureza medida mediante GPC (cromatografía fase gaseosa) es superior a 90%, ventajosamente superior a 95%, con un rendimiento muy satisfactorio, superior a 60% en masa.
Según una variante ventajosa de la invención, el disolvente se selecciona del grupo constituido por éteres en C_{4}-C_{10} cíclicos o lineales, y por alcanos en C_{1}-C_{5} clorados. Ventajosamente, el disolvente es el THF (tetrahidrofurano).
Cuando el disolvente de la reacción es el THF, la cantidad de disolvente introducido está comprendida generalmente entre 500 g y 2 kg de disolvente por mol de NCA de fórmula II involucrado.
Según una variante ventajosa del procedimiento según la presente invención, la cantidad introducida de TEDA está comprendida entre 0,1 y 5% molar de TEDA, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II. Aún más ventajosamente, la cantidad introducida de TEDA está comprendida entre 0,2% y 1% molar, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II.
El NCA de fórmula II se hace reaccionar ventajosamente con 1,1 a 1,5 equivalentes de dicarbonato de fórmula III en presencia de TEDA, en particular en presencia de 0,2% a 1% molar de TEDA con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II.
El dicarbonato de fórmula III se introduce ventajosamente, en forma de una disolución, en una parte del disolvente, ventajosamente en 0,5 a 2,0 partes en peso con relación a la cantidad total en peso involucrada de dicarbonato, de forma regular en el medio de reacción que comprende la otra parte necesaria del disolvente, el NCA de fórmula II que se va a transformar y el TEDA. Durante la introducción del dicarbonato, la temperatura del medio de reacción se mantiene entre -20 y 5ºC, ventajosamente entre -15 y 5ºC, y aún más ventajosamente entre -10 y 0ºC. Según una variante ventajosa de la invención, la reacción se realiza en una atmósfera inerte.
El efecto catalítico del TEDA permite una técnica de introducción gradual del dicarbonato en el medio de reacción, lo que permite el control de la exotermicidad mediante la detención de la introducción, evitando así cualquier riesgo de una reacción descontrolada peligrosa.
El procedimiento permite trabajar en un medio mucho más concentrado que, acoplado con tiempos de reacción reducidos, permite una ganancia substancial en la productividad y limita mucho los riesgos de polimerización.
Al final de la adición del dicarbonato de fórmula III, el medio de reacción se deja ventajosamente bajo agitación, durante al menos 30 minutos a una temperatura comprendida entre -5 y 10ºC.
Al final de la adición del dicarbonato de fórmula III, en cuanto el medio de reacción se ha dejado opcionalmente bajo agitación, el medio de reacción se filtra, y después se elimina al menos 80%, de forma ventajosa aproximadamente 90%, del disolvente mediante evaporación a presión reducida. Después, se añade un compuesto no-disolvente en una cantidad preferentemente equivalente a la cantidad de disolvente de reacción eliminada mediante evaporación, a fin de precipitar el UNCA de fórmula I, el cual se recupera después mediante filtración, cuando sea apropiado, después de la eliminación de dichos grupos protectores adaptados.
Según una variante de la invención, el disolvente se elimina mediante evaporación a presión reducida a una temperatura comprendida entre 15 y 30ºC, ventajosamente a temperatura ambiente.
El compuesto no-disolvente de UNCA es ventajosamente un alcano en C_{5}-C_{10} lineal o ramificado, en particular el heptano B.
Según una variante de la invención, el precipitado se seca después al vacío a una temperatura inferior a 30ºC.
Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención y no son limitativos.
Ejemplo 1
Preparación de Boc-Val-NCA
La abreviatura Val representa el alfa-aminoácido valina. Val-NCA representa por lo tanto el compuesto de la fórmula siguiente:
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En un reactor de 1 litro de doble cámara, equipado con un criotermostato, un embudo, un sistema de circulación de nitrógeno, una agitación mecánica y una sonda termométrica, se introducen, después de obtener un ambiente inerte con nitrógeno y de enfriar a -5 \pm 2ºC:
- 204 g de THF,
- 37,5 g (0,26 moles) de Val-NCA,
- 0,15 g (1,3 mmoles) de TEDA.
Se agita el medio de reacción durante ½ hora, y después se introduce lentamente una disolución de 69 g (0,316 moles) de (Boc)_{2}O en 50 g de THF durante 2 horas mediante un embudo de goteo, regulando la temperatura a -5ºC \pm 2ºC. Aparece una ligera liberación de gas.
El medio de reacción se mantiene bajo agitación durante 1 hora después del final del goteo de (Boc)_{2}O.
El medio de reacción se filtra a 0ºC en una pre-capa inerte montada con THF y el reactor se enjuaga así como la pre-capa inerte con 50 ml de THF.
Los filtrados se vuelven a colocar en el reactor de doble cámara todavía bajo nitrógeno y se destilan 300 ml de THF a una temperatura de medio de reacción de 18 a 26ºC con una presión de 140 a 160 milibares.
Se añaden 300 ml (215 g) de heptano B a una temperatura de 25ºC. El producto UNCA de valina precipita. Después, se destilan 300 ml de mezcla THF/heptano B a 25ºC con 900-100 milibares hasta un volumen de medio de reacción de aproximadamente 100 ml. Después, se añaden 200 ml de heptano B a una temperatura de aproximadamente 25ºC. El medio de reacción se deja enfriar hasta -10ºC, temperatura que se mantiene durante 1 hora. La filtración se realiza en un filtro nº 3 sinterizado, en una atmósfera de nitrógeno a -10ºC. El producto se seca en un horno al vacío a una temperatura de 25 \pm 5ºC.
Así, se obtienen 51,6 g (rendimiento de 80,8%) de un polvo blanco con poder giratorio de 59,1º (C = 1, THF) cuya pureza medida mediante GPC es de 100%.
Ejemplo 2
Preparación de Boc-Ile-NCA
La abreviatura Ile representa el alfa-aminoácido isoleucina. Ile-NCA representa por lo tanto el compuesto de la fórmula siguiente:
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Se procede como en el ejemplo 1 con:
- 200,9 g de THF,
- 40,0 g (0,255 moles) de Ile-NCA,
- 0,14 g (1,3 mmoles) de TEDA,
y una disolución de 66 g (0,302 moles) de (Boc)_{2}O en 66 g de THF.
Después de la filtración y del secado, se recuperan 51,5 g (rendimiento de 78,6%) del producto esperado, con un punto de fusión de 107,6ºC y cuyo poder giratorio es de 60,3º (C = 1, THF). La pureza medida mediante GPC es de 99,3%.
Ejemplo 3
Preparación de Boc-D-Phe-NCA
La abreviatura Phe representa el alfa-aminoácido fenilalanina. Phe-NCA representa por lo tanto el compuesto de la fórmula siguiente:
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Se procede como en el ejemplo 1, con la diferencia de que la temperatura se establece a -17 \pm 1ºC con:
- 427 g de THF,
- 25 g (0,131 moles) de D-Phe-NCA,
- 0,07 g (0,65 mmoles) de TEDA,
y una disolución de 34,2 g (0,157 moles) de (Boc)_{2}O en 21,5 g de THF.
Después de la filtración y del secado, se recuperan 24,1 g (rendimiento de 63%) del producto según la estructura RMN^{1}H esperada, y cuya pureza medida mediante GPC es de 95,2%.
Ejemplo 4
Preparación de N-etoxicarbonil-valina-N-carboxianhídrido (EtOC-Val-NCA)
En un reactor de 1 litro de doble cámara equipado con un criotermostato, un embudo de goteo, un sistema de circulación de nitrógeno, una agitación mecánica y una sonda termométrica, se introducen después de obtener un ambiente inerte con nitrógeno y de enfriar hasta -5 \pm 2ºC:
- 204 g de THF,
- 20,0 g (0,141 moles) de Val-NCA,
- 0,078 g (0,7 mmoles) de TEDA.
El medio de reacción se agita durante 30 minutos, y después se introducen lentamente 27,1 g (0,167 moles) de dicarbonato de dietilo [(EtOC)_{2}O] durante 1 hora mediante un embudo de goteo, regulando la temperatura a -5ºC \pm 2ºC. Aparece una ligera liberación de gas.
El medio de reacción se mantiene con agitación durante 1 hora después del final del goteo de (EtOC)_{2}O.
El THF se concentra a una temperatura del medio de reacción de 18 a 26ºC a una presión de 140 a 160 milibares.
Se añaden 220 ml de heptano B a una temperatura de 25ºC, y se vierte en una gran cantidad de agua helada. El producto precipita. Se filtra en un filtro nº 3 sinterizado en una atmósfera de nitrógeno. El producto se seca en un horno al vacío a una temperatura de 25 \pm 5ºC.
Se obtienen así 20,1 g (rendimiento de 67%) de un polvo blanco, cuyos espectros de RMN^{1}H y de RMN^{13}C son conformes a la estructura esperada.

Claims (15)

1. Procedimiento de obtención de N-carboxianhídridos de alfa-aminoácidos protegidos con uretano (UNCA), de fórmula I
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en la que R1 y R2, idénticos o diferentes, representan juntos o independientemente uno del otro, un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un alfa-aminoácido natural o sintético portadora eventualmente de grupos funcionales, cuando sea apropiado protegidos; R^{3} representa un radical alquilo en C_{1}-C_{10} saturado o insaturado, lineal o ramificado o un radical aralquilo o alquilarilo en 7 a 14 átomos de carbono, caracterizado porque un N-carboxianhídrido de alfa-aminoácido (NCA) de fórmula II
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en la que R1 y R2 tienen el mismo significado que para la fórmula I, se hace reaccionar con al menos un equivalente, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II, de dicarbonato de fórmula III
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en la que R3 tiene el mismo significado que para la fórmula I, en presencia de una cantidad catalítica de 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, denominado asimismo trietilendiamina (TEDA), con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II, en un disolvente orgánico, con un punto de fusión inferior a aproximadamente -20ºC.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque R1 y R2, idénticos o diferentes, representan un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C_{1}-C_{8} lineal o ramificado, eventualmente sustituido, un radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7}, eventualmente sustituido, un radical fenilo, un naftilo, o un heteroaromático de 5 ó 6 miembros, o indol eventualmente sustituido, con la condición de que R1 y R2 no represente cada uno simultáneamente un radical cíclico; o R1 y R2 forman juntos un radical cicloalquilo en C_{5}-C_{7} eventualmente sustituido, siendo los sustituyentes eventuales unos sustituyentes habituales en el campo de los aminoácidos y de los péptidos.
3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado porque los sustituyentes eventuales se seleccionan de entre el grupo constituido por OH, SH, NH_{2}, NHC(NH)NH_{2}, CONH_{2}, O-alquilo en C_{1}-C_{6}, O-arilo en C_{1}-C_{6}, S-alquilo en C_{1}-C_{6}, COO-alquilo en C_{1}-C_{6}, COO-aralquilo en C_{5}-C_{8}.
4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque R3 representa el radical metilo, el radical etilo, el radical terciobutilo, el radical bencilo, el radical alilo o el radical 9-fluorenilmetilo.
5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el disolvente se selecciona del grupo de los éteres en C_{4}-C_{10} y alcanos en C_{1}-C_{5} clorados.
6. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque el disolvente es el THF.
7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la cantidad de TEDA está comprendida entre 0,1% y 5% molar, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II.
8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque la cantidad de TEDA está comprendida entre 0,2% y 1% molar, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II.
9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el NCA de fórmula II se hace reaccionar con 1,1 a 1,5 equivalentes de dicarbonato de fórmula III, con relación a la cantidad molar involucrada de NCA de fórmula II.
10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el dicarbonato de fórmula III se introduce en forma de disolución en 0,5 y 2 partes en peso del disolvente, con relación a la cantidad en peso involucrada de dicarbonato, regularmente en el medio de reacción que comprende la otra parte del disolvente necesaria, el NCA de fórmula II a transformar y el TEDA.
11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque la temperatura del medio de reacción se mantiene durante la introducción del dicarbonato entre -20 y 5ºC, ventajosamente entre -10 y 0ºC.
12. Procedimiento según la reivindicación 10 u 11, caracterizado porque comprende después las siguientes etapas:
i)
filtrar el medio de reacción;
ii)
eliminar al menos 80%, de forma ventajosa aproximadamente 90%, del disolvente mediante evaporación a presión reducida; y después
iii)
agregar un compuesto no-disolvente, en una cantidad equivalente a la cantidad del disolvente de reacción eliminada mediante evaporación, a fin de precipitar el UNCA de la fórmula I; y
iv)
recuperar el UNCA de fórmula I mediante filtración, después de eliminar dichos grupos protectores si es necesario.
13. Procedimiento según la reivindicación 12, caracterizado porque el disolvente se elimina mediante evaporación a presión reducida a una temperatura comprendida entre 15 y 30ºC.
14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 13, caracterizado porque el compuesto no-disolvente es un alcano en C_{5}-C_{10} lineal o ramificado.
15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, caracterizado porque el precipitado se seca después al vacío a una temperatura inferior a 30ºC.
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