SK153695A3

SK153695A3 - Stabilizing agent and synergistically by it stabilized liquid enzymatic composition

Info

Publication number: SK153695A3
Application number: SK1536-95A
Authority: SK
Inventors: Percy A Jaquess
Original assignee: Buckman Labor Inc
Priority date: 1993-06-07
Filing date: 1994-06-06
Publication date: 1996-04-03
Also published as: CA2164615A1; ES2126764T3; WO1994029424A1; SG104908A1; ZA943640B; NO954957D0; CZ323095A3; FI955851A0; DE69415524D1; DK0702712T3; EP0702712A1; BR9407029A; DE69415524T2; NO954957L; EP0702712B1; JPH08510786A; AU7058694A; CN1128543A; FI955851A; NZ267909A

Description

Oblasť techniky /·

Predložený vynález sa týka nových prostriedkov na stabilizovanie najmenej jedného enzýmu nachádzajúceho sa v kvapalnej enzymatickej zmesi. Jedinečné reologické vlastnosti zložiek týchto stabilizovaných prostriedkov prednostne poskytujú synergickú stabilizačnú kapacitu prevyšujúcu iné vodné zmesi enzymatických disperzií a to dokonca v podmienkach stredne vysokých až vysokých teplôt a v širokom rozmedzí pH. Vynález sa preto tiež týka stabilizovaných kvapalných enzymatických prostriedkov. Ďalej sa vynález vzťahuje na novú metódu prípravy stabilizovaných enzymatických zmesí a metódam používajúcim stabilizované prostriedky na báze kvapalných enzymatických zmesí.

Doterajší stav techniky

Používanie enzýmov a kvapalných enzymatických zmesí v priemysle a na priemyselnom trhu v posledných niekoľkých rokoch rýchle vzrástlo. Ako je dobre známe, enzýmy môžu byť kyslé, alkalické alebo neutrálne, v závislosti na rozmedzí pH, v ktorom sú aktívne. Uvažuje sa všetky tieto typy enzýmov využiť vo vzťahu s predkladaným vynálezom.

Veľa enzýmov a kvapalných enzymatických zmesí súvisí s kvapalnými detergentami a používajú sa ako rozpúšťacie a čistiace prostriedky. Ďalej v spojení s kvapalnými detergentami sa enzýmy a kvapalné enzymatické zmesi používajú tiež v rade rôznych obchodných a priemyselných oblastiach, v ktorých sa uplatňuje široký rozsah tried enzýmov.

Proteázy, dobre známe trieda enzýmov, sa často používajú v širokom rozsahu priemyselných aplikácií, kde hydrolyzujú peptidové väzby v proteínoch a proteínových substrátoch. Z obchodného hľadiska majú proteázy najväčšie použitie v priemysle čistiarenských detergentov, kde pomáhajú odstraňovať škvrny proteínového pôvodu, ako sú škvrny od krvi alebo vajec, a v syrárenskom priemysle, kde pomáhajú pri sýrení mlieka. Proteázy sa tiež používajú ako prostriedky na zjemnenie mäsa, na zmäkčovanie kože, na úpravu potravinárskych prísad a na uvoľňovanie vôní. Dokázalo sa, že kvapalné enzymatické prostriedky obsahujúce alkalické proteázy je možné používať ako dispergačné činidlá pre bakteriálne filmy a povlaky rias a húb vo vodných chladiacich vežiach a v zadržovacích nádržiach kvapalín v kovopriemysle.

Proteázy sa môžu charakterizovať ako kyslé, ňeutrálne alebo alkalické proteázy v závislosti na rozmedzí pH, v ktorom sú aktívne. Medzi kyslé proteázy patria mikrobiálne renety, renin (chymotrypsín), pepsin, a kyslé proteázy húb. Medzi neutrálne proteázy patrí trypsín, papain, bromelain/ficín, a neutrálne bakteriálne proteázy. Medti alkalické proteázy patrí subtilizín a podobné enzýmy. Komerčné kvapalné enzymatické zmesi obsahujúce proteázy sú dostupné pod názvami Rennilase®, PTN (pankreatický trypsín NOVO), PEM (proteolytická enzymatické zmes), Neutrase®, Alcalase®, Esperase®, a Savinase®, ktoré všetky dodáva Novo Nordisk Bioindustrials, Inc. Danbury, CT. Iná komerčná proteáza je dostupná pod názvom HT-Proteolytic a dodáva ju firma Solvay Enzýme Products.

Amylázy, iná trieda enzýmov, sa tiež používajú v mnohých priemyselných a komerčných postupoch, v ktorých katalyzujú alebo urýchľujú hydrolýzu škrobu. Amylázy majú široké uplatnenie v priemyselnom spracovaní kukuričných sirupov pri výrobe glukózových sirupov, maitózových sirupov a rady iných vyššie rafinovaných konečných produktov hydrolýzy škrobu, ktorými sú sirupy s vysokým obsahom frutózy. Amylázy ako trieda zahrňujú a-amylázu, β-amylázu, amyloglukozidázu (glukoamylázu), amylázu z húb a pulluianázu. Komerčné kvapalné enzymatické prostriedky obsahujúce amylázu sú dostupné pod názvami BAN, Termamyl®, AMG, Fungamy® a Promozyme® od dodávateľa Novo Nordisk, a Diazyme L/200 výrobca Solvay Enzýme Products.

Iné komerčné hodnotné triedy enzýmov sú také, ktoré spôsobujú hydrolýzu vlákien. Tieto triedy zahrňujú celulázy, hemicelulázy, pektinázy a β-glukanázy. Celulázy sú enzýmy, ktoré odburávajú celulózu, lineárny polymér glukózy, vyskytujúci sa v bunkových stenách rastlín. Hemicelulázy sú zapojené do hydrolýzy hemicelulóz, ktoré sú obdobne ako celulóza rastlinným polysacharidom. Pektinázy sú enzýmy zúčastňujúce sa odburávania pektínu, sacharidu, ktorého hlavnou zložkou je cukrová kyselina. β-Glukanázy sú enzýmy zapojené do hydrolýzy βglukanov, ktoré sú tiež podobné celulóze, a to v tom, že sú lineárne polyméry glukózy. Z obchodného hľadiska tieto enzýmy majú menšie alebo väčšie využitie vo výrobných procesoch využívajúcich odbúranie vlákien.

Celulázy sa používajú pri postupe odstránenia tlačiarenskej černe zo starého odpadového novinového papiera (ONP), takže nie je potrebné používať žiadne povrchovo aktívne látky a alkalické chemikálie. Enzýmy vytlačia tlačiarenskú čerň z povrchu vlákien a dispergujú častice černe do konečnej podoby. Pozri S. Say-Kyoun Ow, Metódy biologického odstraňovania tlačiarenskej černe z novinového odpadového papiera, World Púlp and Paper Technology, pp. 63, 64 (1992). Súhrnne celulázy zahrňujú endocelulázu, exocelulázu, exocelo/biohydrolázu, mannázu a celobioázu. Komerčné kvapalné enzymatické prostriedky obsahujúce celulázy sú dostupné pod názvami Celluclast® a Novo-zym ® 188, obidva dodávané Novo Nordisk.

Hemicelulázy sa tiež používajú na odstraňovanie tlačiarenskej černe na vytlačenie častíc černe z povrchu vlákien ONP. Pozri D. Y. Prasad a spol., Enzymatické odstraňovanie tlačiarenskej černe z čiernobielych tlačiarenských odpadných novinových papierov, Progress in Paper Recycling, May 1992, pp 21, 22. Ďalej sa hemicelulázy ako sú xylanázy používajú pri postupe bielenia buničiny. Predbežná úprava sulfátovej buničiny vedie k značnému zníženiu spotreby bieliacich chemikálií ako je molekulový chlór a tiež zvyšuje kvalitu buničiny, čo sa odráža v jej vyššie dosiahnutom lesku. Pozri D. J. Senior a spoť, Zníženie spotreby chlóru pri bielení sulfátovej buničiny po pôsobení xylanáz, Tappi Journal (predbežné zdelenie, aspekty publikácie boli prednesené na Medzinárodnej konferencii o bielení buničiny, Stockholm, 1991). PULPZYM®, produkt dodávaný Novo Nordisk, ECOPULP®, produkt dodávaný Alko Biotechnology, sú dva príklady komerčne dostupných kvapalných enzymatických prípravkov obsahujúcich bieliace enzýmy na báze xylanáz.

Hemicelulázy ako trieda zahrňujú zmes hemiceluláz a galaktomananázu. Obchodné kvapalné enzymatické zmesi obsahujúce hemicelulázy sú tiež dostupné ako PULPZYM® od firmy Novo, ECOPULP® od Alko Biotechnology, Novozym® a Gamanase®, tieto dva produkty sú od Novo Nordisk.

Pektinázy sa komerčne používajú k zoslabovaníu bunkových stien a k zvýšeniu extrakcie ovocných štiav ako aj k zníženiu viskozity a zabráneniu gelovateniu v týchto extraktoch. Pektinázy sa skladajú z endopolygalakturonázy, exopoly-galakturonázy, endopektát lyázy (transeliminázy), a endopektín lyázy (transeliminázy). Obchodné kvapalné enzymatické prípravky obsahujúce pektinázy sú dostupné pod názvami Pectinex®, Ultra SP and Pectinex®, obidva vyrába Novo Nordisk.

β-Glukanázy majú dôležitú úlohu v sladovníctve a pivovarníctve, kde je potrebné modifikovať bunkové steny jačmeňa obsahujúceho β-glukany. β-Glukanázy zahrňujú lichenázu, laminarinázu a exoglukanázu. Obchodnými kvapalnými enzymatickými prípravkami obsahujúcimi β-glukanázy sú Novozym® 234, Cereflo® , BAN, Finizym®, a Ceremix®· výrobca je Novo Nordisk. ^z

Dve ďalšie triedy priemyselne a obchodne významných enzýmov sú lipázy a fosfolipázy. Lipázy a fosfolipázy sú esterázové enzýmy, ktoré hydrolyzujú tuky a oleje napadnutím esterovej väzby týchto zlúčenín. Lipázy pôsobia na triglyceridy, zatiaľ čo fosfolipázy na fosfolipidy. Pre priemysel sú lipázy a fosfolipázy komerčne dostupné esterázy a obidve tieto triedy majú rad priemyselných a obchodných použití.

V priemysle papiera a celulózy sa kvapalné enzymatické prípravky osvedčili najmä pri znížení smolných úsad na valcoch a iných zariadeniach používaných vo výrobnom postupe. Napríklad, spracovanie nebielenej buničiny lipázami pred bielením buničiny chlórom znižuje obsah chlórovaných triglyceridov, o ktorých je známe, že spôsobujú smolné usadeniny pri postupe výroby papiera. Pozri K. Fischer a K. Messner, Zníženie obtiažnych usadenín v drtičoch buničiny lipolytickými enzýmami, Tappi Journal, február 1992, str. 130. Novo Nordisk dodáva na trh dva kvapalné enzymatické prípravky pod názvami Resinase™ A a Resinase™ A 2X, obidva za určitých podmienok podľa zdelenia znižujú významne smolné usadeniny odbúraním živíc z dreva prítomných v bunčine.

Iné dôležité použitie lipáz je pri odmastňovaní koží a holín v koželužiarskych výrobách. Alkalické lipázy sa používajú na odmastnenie v spojení so špeciálnymi proteázami a emulgačnými systémami, čo taktiež zlepšuje zmáčacie a vyluhovacie účinky pri spracovaní koží. Pozri J. Christner, Použitie lipáz v mokrých koželužiarskych procesoch, 87 J. A. L. C. A. 128 (1992).

Lipázy sa tiež používajú na rozvinutie chuti syrov a k zlepšeniu chutnosti hovädzieho loja pre psov. V nevodných systémoch sa používajú lipázy na syntézu esterov z karboxylových kyselín a alkoholov.

Komerčne sú dostupné kvapalné enzymatické prípravky obsahujúce lipázy, napríklad pod obchodnými názvami Lipolase 100, Greasex 50L, Pallatase™A, Palatase™M a Lipozyme™, ktoré dodáva Novo Nordisk.

hľadiska komerčne používaných fosfolipáz sa používa pankreatická fosfolipáza Az na konverziu lecitínu na lyzolecitín. Lyzolecitín je podľa zdelenia výborný emulgátor na výrobu majonézy a pečenie chleba. Obchodne je fosfolipáza

Az dostupná v kvapalnom enzymatickom prípravku dodávanom ako LECITASE™ firmou Novo Nordisk.

Inou komerčne hodnotnou triedou enzýmov sú izomerázy. ktoré katalyzujú konverzné reakcie medzi izomérmi organických zlúčenín. Izomerázy majú významné použitie pri výrobe kukuričných sirupov s vyšokým obsahom fruktózy. Napríklad, izomerizácia aldózy na ketózu katalyzovaná glukózoizomerázou zahrňuje tiež premenu glukózy na fruktózu a je teda jednou z troch kľúčových enzymatických reakcií v priemysle. Prostriedok Sweetzyme® je kvapalný enzymatický prípravok obsahujúci glukózoizomerázu a dodáva sa firmou Novo Nordisk.

Redoxné enzýmy sú enzýmy, ktoré pôsobia ako katalyzátory v chemických oxidačných/redukčných reakciách a teda sa uplatňujú pri odburávaní a syntéze mnohých biochemikálií. V súčasnej dobe ešte veľa redoxných enzýmov nenašlo významné uplatnenie v priemysle, pretože väčšina redoxných enzýmov vyžaduje prítomnosť kofaktorov. Ovšem, tam, kde kofaktory sú integrálnou súčasťou enzýmu, alebo nemusia byť pridávané, sú redoxné enzýmy komečne používané, najmä v potravinárskom priemysle.

Redoxný enzým, glukózooxidáza sa používa na zabránenie nežiadúcich reakcií vedúcich k zhnednutiu, ktoré ovplyvňujú farbu a chuť jedla. Glukózooxidáza sa tiež používa ako odstraňovač kyslíka k zabráneniu vyvíjania pachutí v šťavách a k ochrane farieb a stability niektorých citlivých potravinárskych prísad.

Redoxný enzým, kataláza, sa používa na rozklad zvyškového peroxidu vodíka, ktorý sa používa ako sterilizačný prostriedok. Tretí redoxný enzým (lipoxygenáza) prírodné sa nachádzajúci v sojovej múčke a málokedy čistený pre priemyselné použitie, sa používa pri pečení, nielen na získanie belšieho chleba, ale tiež na zabránenie mäknutia cesta spôsobeného určitými činidlami. Iné redoxné enzýmy je možné použiť od enzymatických syntéz derivátov steroidov až k diagnostickým testom. Tieto redoxné systémy zahrňujú peroxidázy, superoxidizmutázu, alkoholoxidázu, polyfenoloxidázu, xantinoxidázu, sufhydryloxidázu, hydroxylázy, cholesteroloxidázy, lakjfázu, alkoholdehydrooxygenázu a steroidné dehydrogenázy.

Ak sú enzýmy také, ako boli vyššie opísané, pripravené alebo predávané pre priemyselné použitie, zvyčajne sú vo forme vodných alebo prevažne vodných kvapalných enzymatických prípravkoch určených pre určitý postup. Prevažne vodné kvapalné enzymatické prípravky môžu obsahovať ďalšie rozpúšťadlá v závislosti na určitom enzýme alebo použití prípravku. Tieto kvapalné enzymatické prípravky sú tradične spojené s problémami, akými je chemická nestabilita, ktorá môže vyústiť do straty enzymatickej aktivity najmä pri skladovaní. Tieto značné problémy straty enzymatickej aktivity pri skladovaní postihujú najmä priemysel kvapalných detergentov. /·

Pre priemyselné produkty, akými sú kvapalné enzymatické prípravky, nie je nezvyčajné, že sa skladujú v predajniach v rôznych vyskytujúcich sa klimatických podmienkach, kedy výrobky sú vystavené teplotám od mrazu až po viac ako 50 °C po dlhý čas. Po skladovaní pri extrémnych teplotách v rozsahu od 0 °C do 50 °C počas niekoľkých mesiacov veľa kvapalných enzymatických prípravkov stráca 20 až 100 percent ich enzymatickej aktivity v dôsledku nestability enzýmu.

Konali sa mnohé pokusy stabilizovať enzýmy nachádzajúce sa v kvapalných enzymatických prípravkoch. Pokusy zvýšiť stabilitu kvapalných enzymatických prípravkov použitím prípravkov obsahujúcich alkoholy, glyceroly, dialkylglykolétery, ich zmesi a ďalšie látky, mali iba okrajový úspech a to i v rozsahu miernych skladovacích teplôt.

V U. S. patente 4,801,544 sa použil ako stabilizátor systém etylénglykolu a etoxylovaný lineárny neiónový tenzid s uhľovodíkovým rozpúšťadlom a opisuje sa enkapsulácia enzýmu v micelách vytvorených v zmesi rozpúšťadlo - tenzid. Obsah vody v zmesi sa udržoval na menej ako 5 percentách a enzýmová stabilita sa overovala pri 35°, 70°a 100 °F.

Stabilizácia vodného enzymatického prípravku inými estermi bola opísaná v U. S. patente 4,548,727. Ester, ktorý sa použil ako stabilizátor, mal vzorec RCOOR', kde R je alkyl s jedným až troma uhlíkovými atómami alebo vodík, a R' je alkyl s jedným až šiestimi uhlíkovými atómami. Ester sa nachádza vo vodnom enzymatickom prípravku v množstve od 0,1 až 2,5 hmotnostných percent.

U. S. patent 4,318,818 opisuje stabilizačný systém pre vodné kvapalné enzymatické prípravky, kde stabilizačný systém obsahuje vápenaté ióny a nízkomolekulovú karboxylovú kyselinu, alebo jej soľ. pH stabilizačného systému je v rozmedzí pH od asi 6,5 do asi 10.

U. S. patent 4,243,543 sa týka stabilizácie kvapalných detergentných prípravkov obsahujúcich proteolytické enzýmy. Detergentný prípravok sa stabilizuje prídavkom antioxidantu a hydrofilného polyolu do prípravku, pričom sa stabilizuje pH prípravku.

U. S. patent 4,169,817 sa vzťahuje na kvapalné čistiace prípravky obsahujúce stabilizované enzýmy. Prípravok je vodný roztok, ktorý obsahuje od 10 do 50 hmotnostných % pevné látky a obsahuje detergentné plnidlá, povrchovo aktívne látky, enzymatický systém odvodený od Bacillus subtilis a enzým stabilizujúci činidlo. Stabilizačné činidlo obsahuje vo voďe dobre rozpustné sodné alebo draselné soli a/alebo vo vode rozpustné hydroxyalkoholy a umožňuje skladovať roztok predĺženú dobu bez deaktivácie enzýmu.

Európsky patent 0 352 244 A2 opisuje stabilizovaný kvapalný detergentný prípravok za použitia amfoterného tenzidu.

Podstata vynálezu

Predložený vynález poskytuje prostriedok, ktorý je schopný synergicky stabilizovať jeden alebo viac enzýmov nachádzajúcich sa v kvapalnej enzymatickej zmesi.

Vynález teda poskytuje stabilizovanú kvapalnú enzymatickú zmes.

Ďalej vynález poskytuje postupy na prípravu stabilizovaných kvapalných enzymatických zmesí.

Rôzne aspekty vynálezu je možné v širokom rozsahu splniť použitím prostriedku na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi obsahujúceho:

(a) najmenej jeden polymér vybraný z polyéteru celulózy, akrylového polyméru, a polyamidu, (b) C2-Cg viacsýtny alkohol, a (c) vodu, kde zložky (a) a (b) sa nachádzajú v množstve účinnom na stabilizáciu najmenej jedného enzýmu nachádzajúceho sa v kvapalnej enzymatickej zmesi. Výhodne polymér (a) a C2-C6 viacsýtny alkohol (b) sa nachádzajú v množstve, ktoré v ich vzájomnej kombinácii synergisticky stabilizuje najmenej jeden enzým nachádzajúci sa v kvapalnej enzymatickej zmesi.

Stabilizačný prostriedok, ktorý je predmetom vynálezu, môže sa používať pre široký rozsah enzýmov používaných v kvapalných enzymatických zmesiach pri zabezpečení širokého rozsahu ich funkcií. Enzýmy a triedy enzýmov, ktoré je možné s týmto stabilizačným prostriedkom použiť, zahrňujú, ale neobmedzujú sa na vyššie uvedené enzýmy a triedy enzýmov.

Predmetom vynálezu sú tiež stabilizované kvapalné zmesi obsahujúce:

(a) najmenej jeden polymér vybraný z polyéteru celulózy, akrylového polyméru a polyamidu, (b) C2-Cg viacsýtny alkohol, (c) vodu, /· (d) najmenej jeden enzým kde zložky (a) a (b) sú prítomné v množstve účinnom na stabilizáciu najmenej jedného enzýmu v kvapalnej enzymatickej zmesi. Výhodne polymér (a) a C2-C5 viacsýtny alkohol (b) sú prítomné v množstve, ktoré v ich vzájomnej kombinácii synergisticky stabilizuje najmenej jeden enzým nachádzajúci sa v kvapalnej enzymatickej zmesi.

Ďalej sa vynález vzťahuje na metódu prípravy stabilizovanej kvapalnej enzymatickej zmesi spojením enzýmu s vyššie uvedeným stabilizačným prostriedkom. Taktiež sa vynález vzťahuje na metódu používania stabilizovaného prostriedku na stabilizáciu kvapalného enzymatického prostriedku zahrňujúcu postup spojenia stabilizačného prostriedku s kvapalnou enzymatickou zmesou.

Vynález poskytuje vo výhodnom uskutočnení prostriedok na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi obsahujúci:

(a) najmenej jeden polymér vybraný z polyéteru celulózy, akrylového polyméru, a polyamidu, (b) C2-Cg viacsýtny alkohol, a (c) vodu, kde zložky (a) a (b) sú prítomné v množstve, ktoré v ich vzájomnej kombinácii synergicky účinne stabilizuje najmenej jeden enzým nachádzajúci sa v kvapalnej enzymatickej zmesi.

Vo vode rozpustný alebo aspoň čiastočne rozpustný polymér sa použije v prostriedku na stabilizáciu kvapalných enzymatických zmesí alebo v stabilizovaných kvapalných enzymatických zmesiach, ktoré sú predmetom vynálezu. Teda, polymér musí mať dostatočnú rozpustnosť, aby sa dosiahla miešateľnosť s vodou a vytvorila sa jedna fáza. Pokiaľ má polymér túto rozpustnosť, nesmie sa tento polymér oddeliť po spojení s C2-Cg viacsýtnym alkoholom a vodou nachádzajúcou sa v stabilizačnom prostriedku alebo s kvapalnou enzymatickou zmesou. Prostriedok nemusí byť číry roztok. Výhodne je prostriedok emulzie so zdanlivo homogénnou štruktúrou.

V prostriedku na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi alebo v stabilizovanej kvapalnej zmesi, ktoré sú predmetom vynálezu, množstvo prítomného polyméru tiež závisí na molekulovej hmotnosti použitého určitého polyméru. Čím vyššia je molekulová hmotnosť použitého polyméru, tým nižšie je všeobecne množstvo polyméru potrebné na stabilizáciu ehzýmu.

Polymér sa môže s výhodou použiť v množstvách do asi 50 hmotnostných % stabilizačného prostriedku. Ešte výhodnejší je obsah polyméru od 0,05 do 30 hmotnostných percent a najvýhodnejší od 1 do 10 % hmotnostných. Vo výhodnom uskutočnení je samozrejme polymér nachádzajúci sa v množstve, ktoré poskytuje žiadanú synergickú stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi, ak je spojený s viacsýtnym alkoholom vo vodnom alebo prevažne vodnom prostriedku.

Polymér, ktorý sa použil v predloženom vynáleze, je vybraný z.polyéterov celulózy, akrylových polymérov a polyamidov. Polymér môže byť substituovaný alebo nesubstituovaný. Polymér môže mať nižší iónový náboj, ale výhodne je svojou povahou neiónogenný.

Pokiaľ je vybraný polymér polyéter celulózy, polymér je výhodne zvolený z poly(karboxymetyl)éterov celulózy, poly(hydroxypropylmetyl)éterov celulózy, poly(hydroxyetylmetyl)éterov celulózy, poly(hydroxybutylmetyl)éterov celulózy, poly(hydroxypropyl)éterov celulózy, poly(etylhydroxyetyl)éterov celulózy.

S výhodou je polymérom poly(karboxymetyl)éter celulózy. Určité polyétery celulózy použité v predloženom vynáleze, ako poly(karboxymetyl)étery celulózy sa dodávajú ako soli, t. j. sodné soli, a majú nevysoký aniónový charakter. Výhodné sú polyétery celulózy s molekulovou hmotnosťou v rozsahu 15.000 až 100.000, ale ešte vhodnejšie sú tieto polyméry v rozsahu molekulových hmotností 20.000 až 75.000.

Akrylové polyméry, ktoré sa použili v tomto vynáleze; sú výhodne polyméry alebo kopolyméry akrylovej kyseliny, metakrylovej kyseliny alebo ich derivátov, napr. esterov alebo solí akrylovej kyseliny. Príklady výhodne vybraných akrylových polymérov sú polyméry firmy Rohm a Haas Acrylos GS (polyakrylát sodný), Acrysol TI-935 (akrylový polymér), a Acrylin 22 (akrylový polymér). Molekulová hmotnosť akrylových polymérov môže byť v rozmedzí od asi 5.000 až viac ako 4.000.000. Výhodné akrylové polyméry majú molekulové hmotnosti od 100.000 do viac ako 4.000.000, ale výhodnejšie sú polyméry s molekulovou hmotnosťou y rozsahu od 750.000 do viac ako 4.000.000. Najmä výhodné sú akrylové polyméry s molekulovou hmotnosťou od 1.250.000 do 4.000.000. Akrylové polyméry s týmito molekulovými hmotnosťami sú dostupné u Aldrich Chemical Company. Akrylové polyméry môžu mať aniónový charakter. Výhodné akrylové polyméry sú tie polyméry alebo ich deriváty, ktoré majú mierny aniónový charakter alebo sú nenabité, najvýhodnejšie sú iónovo elektroneutrálne polyméry.

Pokiaľ sa použije polymér polyamid, najvýhodnejším polyamidom je polyvinylpyrolidón. Výhodné sú polyvinylpyrolidóny s molekulovou hmotnosťou v rozsahu 5.000 až 400.000, výhodnejšie potom tie s molekulovou hmotnosťou v rozsahu 300.000 až 400.000, pričom najviac výhodné sú polyméry s vyššou molekulovou hmotnosťou.

Stabilizačný prostriedok tiež obsahuje C2-C6 viacsýtny alkohol ako druhú zložku, C2-Cg viacsýtny alkohol má synergický účinok s vyššie opísaným polymérom na stabilizáciu enzýmu v kvapalnej enzymatickej zmesi. C2-Cg viacsýtny alkohol je s výhodou glykol alebo trojsýtny alkohol. Výhodnejším C2-Cg viacsýtnym alkoholom je glycerol, sorbitol, propylénglykol, butylénglykol, hexylénglykol alebo etylénglykol. Najvýhodnejším C2-Cg viacsýtnym alkoholom je glycerol.

Stabilizačný prostriedok obsahuje C2-Cg viacsýtny alkohol v množstve dostatočnom, spolu s polymérom, stabilizovať aspoň jeden enzým v kvapalnej enzymatickej zmesi. Výhodne je C2-Cg viacsýtny alkohol prítomný v množstve 0,50 až 60 hmotnostných percent stabilizačného prípravku, výhodnejšie v množstve 5 až 50 hmotnostných percent, a dokonca ešte výhodnejšie medzi 10 až 30 hmotnostnými percentami. Najvýhodnejšie stabilizačný prípravok alebo enzymatická zmes obsahuje C2~Cg viacsýtny alkohol v množstve spojenom s polymérom na dosiahnutie synergického účinku.

Prostriedky, ktoré sú predmetom vynálezu, sú prostriedky obsahujúce vodu alebo vodné prostriedky, ktoré obsahujú dostatok vody k tomu, aby bol polymér miešateľný sprostriedkom a neoddeľoval sa. Všeobecne, C2-Cg viacsýtne alkoholy sú rozpustné vo vode, ale je potrebná prítomnosť dostatočného množstva vody, aby prostriedok tvoril jednu fázu. Ako už bolo uvedené, nevyžaduje sa, aby prostriedok bol číry roztok, s výhodou sa jedná o emulziu so zdanlivo homogénnou štruktúrou. Prostriedky obsahujúce vodu môžu obsahovať ešte ďalšie rozpúšťadlo okrem vody.

Hoci stabilizačné prostriedky, ktoré sú predmetom vynálezu, sa môžu pripraviť zmiešaním zložiek v akomkoľvek poradí, prostriedky sa s výhodou pripravujú pridaním potrebného množstva polyméru k zmesi C2-Cg viacsýtneho alkoholu a vody. Zmes C2-Cg viacsýtneho alkoholu s vodou sa môže pripraviť bežným postupom. Napríklad, zmes sa môže pripraviť jednoduchým zmiešaním vybraného viacsýtneho alkoholu so zodpovedajúcim množstvom vody, alebo zriedením vopred pripravenej zmesi.

Výhodná zmes C2-C6 viacsýtneho alkoholu a^z- vody môže obsahovať akékoľvek množstvo C2-C5 alkoholu dostatočné spoločne s vyššie uvedeným polymérom stabilizovať, výhodne synergicky, aspoň jeden enzým v kvapalnej enzymatickej zmesi. S výhodou, zmes obsahuje 1 až 95 hmotnostných percent viacsýtneho alkoholu alebo vo vode rozpustného polyméru: výhodnejšie 10 až 50 hmotnostných percent; najvýhodnejšie 30 až 50 hmotnostných percent. Pokiaľ je viacsýtnym alkoholom glycerol, zmes obsahuje s výhodou 50 hmotnostných percent glycerolu v zmesi s vodou. Bez väzieb na určité teórie sa prihlasovateľ domnieva, že zmes spôsobuje navlhčenie polyméru použitého v predloženom vynáleze, ktorý v zmesi s C2-Cgviacsýtnym alkoholom synergicky stabilizuje enzým.

K zodpovedajúcej stabilizácii enzýmu v kvapalnej enzymatickej zmesi v súlade s predloženým vynálezom je potrebné, aby enzým vykazoval aspoň 90 % svojej aktivity po 30 dňoch pri 25 °C. Nižšie uvedené príklady demonštrujú výhodnú synergickú stabilizáciu rôznych enzýmov pri 50 °C po 30 dňoch.

Stabilizačný prostriedok, ktorý sa tu opisuje, môže sa použiť pre široký rozsah enzýmov, priemyselných postupov a obchodných produktov. Enzýmy, priemyselné postupy a obchodné produkty, s ktorými sa môže tento stabilizačný prostriedok použiť, zahrňujú vyššie uvedené, ale nie sú nimi obmedzené.

Použitie stabilizačného prostriedku na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi vyúsťuje do druhého predmetu predloženého vynálezu, na stabilizovanú kvapalnú enzymatickú zmes. Vynález sa tiež týka stabilizovanej kvapalnej zmesi obsahujúcej najmenej jeden polymér vybraný z polyéterov celulózy, akrylových polymérov a polyamidov; C2-Cg viacsýtny alkohol; vodu; a najmenej jeden enzým. Polymér a C2~Cg viacsýtny alkohol sa nachádzajú v celkovom množstve účinnom na stabilizáciu, najmä synergickú stabilizáciu, najmenej jedného enzýmu nachádzajúceho sa v kvapalnej enzymatickej zmesi. Výhodné prostriedky zodpovedajúce tomuto vynálezu sú schopné dosiahnuť vyššiu viskozitu ako kvantitatívne zodpovedajúce vodné zmesi s rovnakým polymérom.

Pozorované a výhodné uskutočnenia vzhľadom k polyméru, C2-Cg viacsýtnemu alkoholu a vode, prítomných v tejto stabilizovanej kvapalnej enzymatickej zmesi sú tie isté ako tie, ktoré sa diskutovali vyššie v prípade stabilizovaného prípravku, ktorý je tiež predmetom tohto vynálezu.

Ako u stabilizačného prípravku, kvapalná enzymatická zmes, ktorá je tiež predmetom tohto vynálezu, môže sa využiť pre široký okruh enzýmov. Tieto enzýmy zahrňujú enzýmy a enzýmové triedy predtým tu diskutované, ale neobmedzujú sa na ne. Enzýmy, ktoré sa môžu použiť, môžu pochádzať zo zvieracích, rastlinných, fungálnych, bakteriálnych a syntetických zdrojov. Výhodne vo vode dispergovateľné enzýmy vtomto systéme sú proteázy vrátane kyslých, alkalických a neutrálnych proteáz, ktoré majú široké použitie v čistiarenských detergentoch a syrárskom priemysle; amylázy, vrátane kyslých, alkalických a neutrálnych amyláz, ktoré sa používajú napr. pri spracovaní kukuričného sirupu; lipázy používané na rozvinutie chuti syrov, v priemysle papiera a celulózy a v kožiarenskom priemysle; celulázy a xylázy.

V závislosti na predpokladanom použití sa enzýmy často balia a predávajú v koncentrovaných kvapalných enzymatických zmesiach a zrieďujú sa pred použitím. Enzýmy môžu sa tiež dodávať v práškovej alebo vysušenej forme. Množstvo enzýmu prítomného po zriedení koncentrovaného enzýmu závisí na forme, v akej bol enzým dodaný. Všeobecne, množstvo enzýmu je výhodné, v rozmedzí 0,05 až 40 hmotnostných percent koncentrovanej kvapalnej enzymatickej zmesi, výhodnejšie v rozmedzí 0,5 až 25 %, a najvýhodnejšie v rozmedzí 10 až 20 %. Stabilizačný prostriedok, ktorý je predmetom tohto vynálezu, sa špecificky uvažuje na použitie v koncentrovanej kvapalnej zmesi rovnako ako pre zmes už zriedený pre použitie. Množstvo stabilizačného prostriedku potrebné na stabilizáciu alebo na synergickú stabilizáciu koncentrovaného roztoku sa môže a pravdepodobne sa bude líšiť od množstva pre zriedenú zmes. Určenie zodpovedajúceho množstva stabilizačného prostriedku alebo jeho zložiek sa môže ľahko zistiť jednou z bežných metód v odbore uvedenou v príkladoch uvedených ďalej. Ako je bežne známe v odbore, množstvo prítomného enzýmu je však závislé na aktivite určitého enzýmu a na požadovanom konečnom použití.

V závislosti na nachádzajúcom sa enzýme a jeho zamýšľanom použití, pH konečnej stabilizovanej enzymatickej zmesi je výhodné v rozmedzí 5,0 až 10,0, ale výhodnejšie okolo 7,0. Najvýhodnejšie je nechať systém nastaviť si svoje vlastné pH, všeobecne zhruba neutrálne. Ale ako je v odbore známe, môže byť nutné nastaviť pH malým množstvom kyslej alebo alkalickej látky.

Stabilizovaná kvapalná enzymatická zmes môže obsahovať vodu alebo byť vodným roztokom a obsahovať iné rozpúšťadlá alebo aditíva so zameraním na použitie zmesi v určitom priemyselnom postupe. Napr. stabilizovaná kvapalná enzymatická zmes môže obsahovať aditíva ako povrchovo aktívne látky, odpeňovače a podobne, čo je bežne známe v odbore. Prksynergickej stabilizácii sa môžu tieto aditíva pridať v množstvách neinterferujúcich so synergickou stabilizáciou kvapalnej enzymatickej zmesi. Skúsený pracovník v odbore môže ľahko určiť tieto množstvá. Výhodne sa môže stabilizovaná kvapalná enzymatická zmes, ktorá je predmetom tohto vynálezu, použiť a stabilizačný prostriedok využiť ako dispergačné činidlo enzýmu v priemyselných procesných vodách.

Predmetom tohto vynálezu je tiež postup prípravy stabilizovanej kvapalnej enzymatickej zmesi s krokom zahrňujúcim spojenie najmenej jedného enzýmu so stabilizačným prostriedkom, ktorý je tiež predmetom tohto vynálezu. Vynález ďalej zahrňuje metódu použitia stabilizačného prostriedku na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi obsahujúcu krok spojenia kvapalnej enzymatickej zmesi so stabilizačným prostriedkom. Ilustratívné a výhodné zložky, rovnako ako ich množstvá, použité v postupe, sú rovnaké ako v predchádzajúcej diskusii.

Priemerný odborník vie, že zložky prostriedka na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi môžu byť spojené v akomkoľvek poradí alebo dokonca súčasne. Napriek tomu je výhodnejšie toto poradie:

(a) zmiešať C2-C6 viacsýtny alkohol s vodou, (b) k zmesi pripravenej v kroku (a) pridať najmenej jeden polymér vybraný z polyéterov celulózy, akrylových polymérov, a polyamidov, a (c) pridať najmenej jeden enzým k zmesi vzniknutej v kroku (b).

Polymér a C2-Cg viacsýtny alkohol sú prednostne prítomné v spojenom množstve synergicky účinnom stabilizovať najmenej jeden enzým vo vzniknutej kvapalnej enzymatickej zmesi.

Alternatívnym postupom na prípravu stabilizovanej kvapalnej zmesi sú tieto kroky:

(a) zmiešanie C2-Cg viacsýtneho alkoholu s vodou, (b) k zmesi pripravenej v bode (a) pridať najmenej jeden polymér vybraný z polyéterov celulózy, akrylových polymérov a polyamidov, a (c) spojiť prostriedok vzniknutý v krokoch (a) a (b) s kvapalnou enzymatickou zmesou obsahujúcou najmenej jeden enzým. Polymér a C2-Cg viacsýtny alkohol sú s výhodou prítomné v spojenom množstve synergicky účinnom stabilizovať najmenej jeden enzým v kvapalnej enzymatickej zmesi.

V postupoch zodpovedajúcich tomuto vynálezu polymér pridaný v kroku (b) sa môže pridať samotný, ako vodná disperzia alebo roztok, kde polymér je rozpustený vo vode alebo vo vhodnom organickom rozpúšťadle. Ak sa majú do stabilizovanej enzymatickej zmesi pridať ďalšie aditíva, tieto sa môžu pridať kedykoľvek, ale výhodne pred krokom (c) alebo v ďalšom kroku po pridaní enzýmu.

Nasledujúce príklady sú uvedené na objasnenie predmetu vynálezu. Je však treba upozorniť na to, že vynález sa neobmedzuje na určité podmienky alebo podrobnosti uvedené v týchto príkladoch.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Synergizmus sa dokázal testovaním glycerolu, označeného ako Zložka A, a poly(karboxymetyl)éteru celulózy (CMC) s molekulovou hmotnosťou 250.000 označenej ako Zložka B alebo polyvinylpyrolidónu (PVP) s molekulovou hmotnosťou 360.000 označeného ako Látka B'. Ako je zrejmé z tabuliek 1 a 2, experimenty sa uskutočňovali s premenlivým množstvom Látky A k Látke B alebo B' v rozsahu koncentrácií a overovali sa rôzne typy enzýmov na zlepšenie stabilizácie enzymatickej aktivity pri 50 °C počas 30 dní. Koncentrácia každej zložky potrebná na dosiahnutie 90 % pôvodnej enzymatickej aktivity sa vzala ako koncový bod. Koncentrácie sú vyjadrené ako hmotnostné percentá látky v konečnej zmesi pri započítaní pridaného enzýmu, kde zvyšok tvorí voda. Voda sa pridala k Látke A, glycerolu, za vzniku zmesi glycerol-voda. Koncové body pre zmesi obsahujúce Látku A a Látku b alebo B' sa porovnali s koncovými bodmi pre. samotnú látku A a samotnú B, resp. B'.

Synergizmus sa určil metódou, ktorú opísali Kuli, F. C., Eisman, P. C., Sylwestrowicz, H. D., a Mayer, R. L., Applied Microbiology 9:538-541 (1961) za použitia pomeru určeného vzťahom:

QA QB Q? Qb kde Qa je množstvo v hmotnostných percentách vodnej zmesi Látky A pôsobiace samostatne, ktoré poskytlo koncový bod,

Qb - množstvo v hmotnostných percentách vodnej zmesi Látky B pôsobiace samostatne, ktoré poskytlo koricový bod,

QA - množstvo v hmotnostných percentách vodnej zmesi Látky A k Látke B, ktoré poskytlo koncový bod,

QB - množstvo v hmotnostných percentách vodnej zmesi Látky B k Látke A, ktoré poskytlo koncový bod.

Ak je súčet QA/Qa a QB/Qb väčší ako jedna, indikuje antagonizmus. Ak je tento súčet rovný jednej, indikuje aditivitu. Ak je tento súčet menší ako jedna, vykazuje synergizmus.

Tento postup na dokázanie synergizmu zmesi, ktorá je predmetom vynálezu, je široko používaný a prijatý. Podrobnejšie informácie k tomuto postupu obsahuje U. S. patent 3.231.509, ktorého uvedenie tuje odkazom.

Získané výsledky, ktoré vyplývajú z tabuliek 1 a 2 dokazujú zvýšenú stabilizáciu enzýmu, HT-Proteolytic L-175, alkalické proteázy dodávané Solvay Enzymes, Inc. Použitím metódy, ktorú opísal Kuli aspol., sa vypočítali súčty QA/Qa + QB/Qb pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtov sú uvedené pre niektoré koncové body, kde je zrejmý synergizmus v týchto prípadoch. Ako vyplýva z tabuľky 1 a vzoru výpočtu, hodnoty koncových bodov sú 0,58; 0,67; 0,67 a 0,67; resp., čo dokazuje existenciu synergizmu. Obdobne sa vypočítali súčty pre QA/Qa + QB'/Qb' pre všetky zloženia obsahujúce glycerol (Látka A) a PVP (Látka B'). Ako vyplýva z tabuľky 2 a vzoru výpočtu, konečné body 0,85; 0,95; 0,65; 0,85 opäť dokazujú existenciu synergizmu.

Tabuľka 1

Látka B (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
60	30	20	10	5	0
6	+	+	+	+	+	+X
3	+	+	+	/ +X	+x	+X
2	+	+	+x	-	-
1	+	+x	-	-	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(1)(^x) (2) ω (3) (-) (4) Látka A (5) Látka B = koncový bod > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C

- > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = < 90 % enzymovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C

- glycerol = CMC

Výpočty:

Qa	Qb	QA	QB	QA/Qa + QB/Qb
60	6	5	3	5/60 + 3/6 = 0,58
		10	3	10/60 + 3/6 = 0,67
		20	2	20/60 + 2/6 = 0,67
		30	1	30/60 + 1/6 = 0,67

Tabuľka 2

Látka B' (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
50	30	20	10	5	0
40	+	+	+	+	+	+X
30	+	+	+	+χ ^z-	+x	-
20	+	+	+	-	-	-
10	+	+x	+x	-	-	-
5	+	-	-	-	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(¹) (^x) ~ koncový bod > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (2) (+) = > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (3) (-) = < 90 % enzymovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C (4) Látka A = glycerol (5) Látka B' = PVP

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	40	5	30	5/50 + 30/40 = 0,85
		10	30	10/50 + 30/40 = 0,95
		20	10	20/50 + 10/40 = 0,65
		30	10	30/50 + 10/40 = 0,85

Príklad 2

Stabilizačný prípravok, ktorý je predmetom vynálezu, ako v Príklade 1 sa testoval iným enzýmom, Diazyme L-200, glukoamylázou dodávanou Solvay Enzymes, Inc. Výsledky vyplývajúce z tabuliek 3 a 4 taktiež ukazujú zvýšenú stabilizáciu stýmto enzýmom. Vypočítal sa súčet QA/Óa + QB/Qb pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtov sú uvedené pre niektoré koncové body, kde je v tomto prípade jasný synergizmus. Ako vyplýva z tabuľky 3 a vzoru výpočtov, hodnoty týchto koncových bodov sú 0,59; 0,67; 0,67 a 0,84, resp. dokazujú existenciu synergizmu. Obdobne sa vypočítali súčty QA/Qa + QB'/Qb' pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a PVP (Látka B'). Hodnoty koncových bodov vyplývajúce z tabuľky 4 a vzorov výpočtu boli 0,77; 0,53; 0,53 a 0,77 resp. a opäť svedčiace o existencii synergizmu.

Tabuľka 3

Látka B (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
60	30	20	10	5	0
6	+	+	+	+	+	+x
3	+	+	+	+x	+x
2	+	+X	+x	-	-	-
1	+	-	-	-	-
0	+X	-	-	-	-	-

(1)(^x) (2) (+) (3) (-) (4) Látka A (5) Látka B = koncový bod > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = < 90 % enzymovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C = glycerol = CMC

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
60	6	5	3	5/60 + 3/6 = 0,59
		10	3	10/60 + 3/6 = 0,67
		20	2	20/60 + 2/6 = 0,67
		30	2	30/60 + 2/6 = 0,84

Tabuľka 4

Látka B' (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
50	30	20	10	5	0
30	+	+	+	+	+	+x
20	+	+	+		+x	-
10	+	+	+x	+X	-
5	+	+X	-	-	-	-
0	+x	-	-	-		-

(1)(^x) (2) (+) (3) (-) (4) Látka A (5) Látka B = koncový bod > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = < 90 % enzýmovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C = glycerol = PVP

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	30	5	20	5/50 + 20/30 = 0,77
		10	10	10/50 + 10/30 = 0,53
		20	10	20/50 + 10/30 = 0,73
		30	5	30/50 + 5/30 = 0,77

Príklad 3

Enzýmy s esterázovou aktivitou sa testovali so stabilizačnou zmesou, ktorá je predmetom vynálezu, podobne ako v Príklade 1. Výsledky získané s enzýmom, Lipolase, lipázou dodávanou Novo Nordisk Bioindustries, Inc. vyplývajú z tabuliek 5 a 6 a ukazujú zvýšenú stabilizáciou tohto enzýmu. Vypóčítali sa súčty QA/Qa + QB/Qb pre všetky zmesi obsahujúce vodný glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzory výpočtov sú uvedené pre niektoré koncové body, kde je dokázaný synergizmus v tomto prípade. Ako vyplýva z tabuľky 5 a vzoru výpočtu, hodnoty koncových bodov 0,43; 0,37; 0,57 a 0,77, resp., vykazujú prítomnosť synergizmu. Podobne sa vypočítali súčty QA/Qa + QB/Qb' pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a PVP (Látka B'). Hodnoty koncových bodov vyplývajúce z tabuľky 6 a vzoru výpočtu boli 0,60; 0,70; 0,65 a 0,85, resp., vykazujú prítomnosť synergizmu.

Tabuľka 5

Látka B (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné	__
50	30	20	10	5	0
6	+	+	+	/· +	+	+x
3	+	+	+	+	+	-
2	+	+	+	+	+x	-
1	+	+x	+x	+X	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(¹) (^x) = koncový bod > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (2) (+) = > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (3) (-) = < 90 % enzymovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C (4) Látka A = glycerol (5) Látka B = CMC

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	6	5	2	5/50 + 2/6 = 0,43
		10	1	10/50 + 1/6 = 0,37
		20	1	20/50 + 1/6 = 0,56
		30	1	30/50 + 1/6 = 0,76

Tabuľka 6

Látka B' (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
50	30	20	10	5	0
30	+	+	+	/- +	+	+X
20	+	+	+	+	+	+
10	' +	+	+	+x	+x	-
5	+	+x	+x	-	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(1) (^x) = koncový bod > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (2) (+) = > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C (3) (-) = < 90 % enzýmovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C (4) Látka A = glycerol (5) Látka B = PVP

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	20	5	10	5/50 + 10/20 = 0,60
		10	10	10/50 + 10/20 = 0,70
		20	5	20/50 + 5/20 = 0,65
		30	5	30/50 + 5/20 = 0,85

Príklad 4

Hemiceluláza, Pulpzyme HB, xylanáza dodávaná Novo Nordisk Bioindustrials, Inc. sa vybrala na testovanie zvýšenej stability zmesi ako v Príklade 1. Pre tento príklad vyplývajú z tabuliek 7 a 8 nasledujúce výsledky. Vypočítali sa súčty QA/Qa + QB/Qb pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a CMC (Látka B). Vzorové výpočty sú uvedené pre koncové body, v ktorých je v tomto prípade zrejmý synergizmus. Z tabuľky 7 a vzorového výpočtu vyplývajú hodnoty koncových bodov 0,43; 0,53; 0,57 a 0,77, resp., ktoré ukazujú prítomnosť synergizmu. Podobne sa vypočítali súčty QA/Qa + QB'/Qb' pre všetky zmesi obsahujúce glycerol (Látka A) a PVP (Látka B'). Hodnoty koncových bodov 0,35; 0,45; 0,65 a 0,85, resp., vykazujú prítomnosť synergizmu.

Tabuľka 7

Látka B (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné	’/o)
50	30	20	10	5	0
6	+	+	+	/· +	+	+x
3	+	+	+	+	+	-
2	+	+	+	+X	+x	-
1	+	+x	+x	-	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(1)(^x) (2) (+) (3) (-) (4) Látka A (5) Látka B = koncový bod > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = > 90 % enzýmovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = < 90 % enzýmovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C = glycerol = CMC

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	6	5	2	5/50 + 2/6 = 0,43
		10	2	10/50 + 2/6 = 0,53
		20	1	20/50 + 1/6 = 0,56
		30	1	30/50 + 1/6 = 0,76

Tabuľka 8

Látka B' (hmotnostné %)	Látka A (hmotnostné %)
50	30	20	10	5	0
40	+	+	+	/· +	+	+X
30	+		+	+	+	-
20	+	+	-h	+	+	-
10	+	+x	+x	+x	+X	-
5	+	-	-	-	-	-
0	+x	-	-	-	-	-

(1)(^x) (2) (+) (3) (-) (4) Látka A (5) Látka B = koncový bod > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = > 90 % enzymovej aktivity po 30 dňoch pri 50 °C = < 90 % enzymovej aktivity zostáva po 30 dňoch pri 50 °C = glycerol = PVP

Výpočty:

Qa	Qb'	QA	QB'	QA/Qa + QB'/Qb'
50	40	5	10	5/50 + 10/40 = 0,35
		10	10	10/50 + 10/40 = 0,45
		20	10	20/50 + 10/40 = 0,65
		30	10	30/50 + 10/40 = 0,85

Claims

zmenený list

PATENTOVÉ NÁROKY 1. • Prostriedok na stabilizáciu kvapalných enzymatických zmesí vyznačujúci sa tým, že obsahuje; (a) najmenej jeden polymér vybraný zo súboru zahrňujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid (b) C2-Cg viacsýtny alkohol, a (c) vodu, kde uvedené zložky (a) a (b) sú prítomné v spojenom množstve synergicky * účinnom stabilizovať najmenej jeden enzým nachádzajúci sa v kvapalnej enzymatickej zmesi. 2. Prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že uvedený polymér je polyéter celulózy vybraný zo súboru zahrňujúceho poly(karboxymetyl)éter celulózy, poly(hydroxypropylmetyl)éter celulózy, poly(hydroxyetylmetyl)éter celulózy, poly(hydroxybutylmetyl)éter celulózy r poly(hydroxypropyl)éter celulózy a poly(etylhydroxyetyl)éter celulózy. 3. Prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že uvedený C2Cg viacsýtny alkohol je glycerol, sorbitol, propylénglykol, butylénglykol, hexylénglykol alebo etylénglykol a uvedené zložky (b) a (c) sa nachádzajú v zmesi obsahujúcej 1 až 95 hmotnostných % uvedeného C2-Cg viacsýtneho alkoholu a zvyšok je voda. 4. Stabilizovaná kvapalná enzymatické zmes vyznačujúca sa tým, že obsahuje: (a) najmenej jeden polymér vybraný zo súboru zahrňujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid, (b) zmes C2-Cg viacsýtnych alkoholov, (c) vodu, a

zmenený list (d) najmenej jeden enzým kde zložky (a) a (b) sú prítomné v spojenom množstve synergicky účinnom na stabilizáciu najmenej jedného enzýmu v kvapalnej enzymatickej zmesi.
5. Zmes podľa nároku 4, vyznačujúca sa tým, že uvedeným polymérom je polyéter celulózy vybraný zo súboru zahrňujúceho poly(karboxymetyl)éter celulózy poly(hydroxypropylmetyl)éter celulózy, poly(hydroxyetylmetyl)éter celulózy, poly(hydroxybutylmetyl)éter celulózy poly(hydroxypropyl)éter celulózy a poly(etylhydroxyetyl)éter celulózy.
6. Zmes podľa nároku 4, vyznačujúca sa tým, že uvedený C2-C6 viacsýtny alkohol je glycerol, sorbitol, propylénglykol, . butylénglykol, hexylénglykol alebo etylénglykol; uvedené zložky (b) a (c) sa nachádzajú v zmesi v množstve 1 až 95 hmotnostných % uvedeného C2-CQ viacsýtneho alkoholu a zvyšok je voda; a uvedený enzým je vybraný z proteázy, amylázy, lipázy, celulázy, manázy a xylázy.
7. Zmes podľa nároku 4, vyznačujúca sa tým, že uvedená zmes je emulzia.
8. Stabilizovaná kvapalná enzymatická zmes vyznačujúca sa tým, že obsahuje:

(a) najmenej jeden polymér zvolený zo súboru zahrňujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid, (b) zmes ϋ2-0θ viacsýtnych alkoholov, (c) vodu, a (d) najmenej jeden enzým, kde zložky (a) a (b) sa nachádzajú v množstve účinnom stabilizovať uvedený najmenej jeden enzým v kvapalnej enzymatickej zmesi.
9. Spôsob výroby kvapalnej stabilizovanej enzymatickej zmesi vyznačujúci sa tým, že zahrňuje stupeň miešania najmenej jedného enzýmu a zmesi obsahujúcej:

zmenený list (a) najmenej jeden polymér zvolený zo súboru zahrnujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid, (b) C2-C6 viacsýtny alkohol, a (c) vodu, kde zložky (a) a (b) sú prítomné v spojenom množstve, ktoré je synergicky účinné stabilizovať najmenej jeden enzým v uvedenéj zmesi.
10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že pred uvedeným stupňom miešania ďalej zahrňuje stupne zmiešania uvedeného C2-Cg viacsýtneho alkoholu a vody a pridanie polyméru zvoleného zo súboru zahrňujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid do uvedenej zmesi C2'Cg viacsýtneho alkoholu a vody.
11. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že uvedený C2-C6 viacsýtny alkohol je glycerol, sorbitol, propylénglykol, butyléngylkol, hexylénglykol alebo etylénglykol; uvedená zmes obsahuje 1 až 95 hmotnostných % uvedeného C2-C5 viacsýtneho alkoholu a zvyšok je voda; uvedený najmenej jeden enzým je vybraný z proteázy, amylázy, lipázy, celulázy, manázy a xylázy.
12. Spôsob použitia prostriedku vyznačujúci sa tým, že prostriedok obsahuje:

(a) najmenej jeden polymér vybraný zo súboru zahrňujúceho polyéter celulózy, akrylový polymér a polyamid, (b) C2-C6 viacsýtny alkohol, a (c) vodu, kde zložky (a) a (b) sú prítomné v spojenom množstve, ktoré je synergicky účinné stabilizovať najmenej jeden enzým nachádzajúci sa v kvapalnej enzymatickej zmesi, na stabilizáciu kvapalnej enzymatickej zmesi zahrňujúci stupeň zmiešania kvapalnej enzymatickej zmesi obsahujcúci aspoň jeden enzým s uvedeným prostriedkom.
13. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že uvedeným polymérom je polyéter celulózy vybraný z poly(karboxymetyl)éteru celulózy a uvedeným C2-Cg viacsýtnym alkoholom je glycerol a uvedený najmenej zmenený list jeden enzým je vybraný z proteázy, amylázy, lipázy, celulázy, manázy a xylázy. 14. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že uvedený polymér je polyamid vybraný z polyvinylpyrolidónu a uvedený C2-C6 viacsýtny alkohol je glycerol a uvedený najmenej jeden enzým je vybraný z proteázy, amylázy, lipázy, celulázy, manázy a xylázy.