SE460825B - Komposition foer behandling av infektionssjukdomar, gikt och arterioscleros, innehaallande humant pepsin och/eller humant leukocyt-pepsinliknande enzym - Google Patents

Description

460 825 2 att reglera fagocytförmedlad immunitet och åstadkommer en för- bättring av infektionssjukdomar, gikt och arterioskleros. ;¿ Föreliggande uppfinning avser sålunda användning av humant à pepsin och/eller ett humanleukocytpepsinliknande enrym för fram- g ställning av en farmaceutisk komposition med förmåga att reglera \ fagocytiska funktioner. Den farmaceutiska kompositionen_kan använ- A das för behandling av infektionssjukdomar, gikt och arterioskleros. 3 Infektionssjukdomar, gikt eller arterioskleros kan behandlas genom administrering av en terapeutiskt verksam mängd av humant pepsin och/eller ett humanleukocytpepsinliknande enzym till en patient som lider av infektionssjukdomar, gikt eller arterioskleros.

Det humanpepsin och det humanleukocytpepsinliknande enzym ä som användes enligt föreliggande uppfinning har förmåga att för- stärka fagocyters fagocytos, förmåga att förstärka fagocyters överföring av immuninformation till lymfocyter, förmåga att främja makrofagers fagocytos av heterocyter, förmåga att förstärka neutro- , filers baktericida verkan, förmåga att hämma avsättning av koles- terol i artärerna, och förmåga att hämma experimentella gång- störningar framkallade genom injektion av ett urat i ledhálan. A Humant pepsin, som är en av de aktiva beståndsdelarna enligt a föreliggande uppfinning, är ett känt enzym Lïtherington et al., ' 3 Biochim. et Biophi. Acta, gââ, 92 (1971)] och det kan utvinnas ur humana magceller, human magsaft, humanurin, etc. genom att man på å lämpligt sätt kombinerar kända metoder som vanligen användes rör V V rening av proteiner, t.ex. utsaltning, adsorptionskromatografi med användning av oorganiska adsorptionsmedel, jonbytarkromatografi med användning av jonbytare, gelkromatografi med molekylsilverkan, etc.

Humant pepsin kan dessutom massproduceras genom odling av celler erhållna genom sammansmältning av pepsinproducerande celler, såsom humana magceller, med kancerceller. Man kan även använda genteknik, t.ex. framställning av cDNA med användning av mRNA för humant pep- fr sin såsom mall och användning av reverstranskriptas, varefter detta 'M DNA införes i Escherichia coli, etc.

I I 4ao?à§s rv vr y. f 3 Det humanpepsin som användes enligt föreliggande uppfinning kan t.ex. framställas enligt den metod som har beskrivits av seijffers a: al., Amar. J. Pnysioi., 1106 (1964). Härvid ledes humanurin genom en kolonn av DEAE-cellulosa, som har bragts i jämvikt med O,1M acetatbuffert (pH 5,3). Humanpepsinet adsorbe- ras på kolonnen och elueras med samma buffert innehållande 0,3M natriumklorid. Eluatet koncentreras därefter, och slutligen renas koncentratet ytterligare genom gelkromatografi med användning av Sephadexm G-100, som har fått svälla i 0,92-ig fysiologisk saltlös- ning. Detta humana pepsin visar sig ha en molekylvikt av 32 0004 38 000, bestämd genom gelkromatografisk analys med användning av Sephadex.® G-100, en isoelektrisk punkt av 1-3, bestämd genom iso- elektrisk elektrofores med amforein, och en maximal absorption vid 274 nm. Humanpepsinet uppvisar en positiv ninhydrinreaktion, och det är lättlösligt i vatten och olösligt i eter och kloroform.

Det humanleukocytpepsinliknande enzymet är ett enzym som be- skrives i den internationella patentansökan PCT/JP82/00213. Detta enzym kan utvinnas ur humana leukocyter eller ur promyelocytiska leukemiceller, stam HL-60, etc,, behandlade med aktinomycin D, varvid man på lämpligt sätt kombinerar kända metoder som val' on användes för rening av proteiner, t.ex. utsaltning, adsorptionskro- matografi med användning av oorganiska adsorptionsmedel, jonbytar- kromatografi med användning av jonbytare, gelkromatografi med mole- kylsilverkan, etc. Vidare kan enzymet massproduceras genom odling av celler erhållna genom sammansmältning av kancerceller med celler som producerar det pepsinliknande enzymet, såsom humana leukocyter.

Man kan även använda genteknik, t.ex. framställning av cDNA med användning av mRNA för det humanleukocytpepsinliknande enzymet såsom mall och användning av reverstranskriptas, varefter nämnda DNA införes i Escherichia coli, etc.

Det humanleukocytpepsinliknande enzymet kan t.ex. erhållas genom homogenisering av de ovan angivna odlade cellerna. Den här- vid erhållna överstâende vätskan ledas genom en kolonn av DEAE- cellulosa, som har bragts i jämvikt med 0,1M acetatbuffert (pH 5,3).

Det humanleukocytpepsinliknande enzymet adsorberas härvid på kolon~ nen och elueras sedan med samma buffert innehållande O,5M natrium- klorid. 'Eluatet koncentreras, och koncentratet renas slutligen ytterligare genom gelkromatografi med använding av Sephadexæ G~100, som har fått svälla i 0,9%-ig fysiologisk saltlösning.

Detta humnn~ 460 8251 4 leukocytpepsinliknande enzym har en molekylvikt av 35 000-41 000, bestämd genom gelkromatografisk analys med Sephadexø-G-100, en iso- elektrisk punkt av 2,5-3,5, bestämd genom isoelektrisk elektrofores med amforein, och en maximal absorption vid 278 nm. Enzymet ger en positiv ninhydrinreaktion, och det är lättlösligt i vatten och olösligt i eter och kloroform. ' .

Det humanleukocytliknande enzymet uppvisar dessutom en kraf- tig hydrolytisk verkan mot hemoglobin i ett surt område, pH 7,0 eller lägre, och dess optimala pH-värde är 2,0-3,5.

Nedan illustreras verkan, toxicitet, användning och dosering av det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande enzymet.

Experiment 1. Inverkan på humana monocvters fagocytos.

Humana perifera monocyter (106 celler) fästade på en odlings- yta framställdes utgående från en suspension av perifera leukocyter i Eagle minsta essentiella medium (Eagle MEM) genom odling av cel- lerna i en plastskâl vid 37°C under 1 timme.

Svml Eagle MEM kompletterat med 10 volym-% fetalt nötkrea- turserum och innehållande humant pepsin eller ett humanleukocyt- pepsinliknande enzym sattes till 106 celler av humana perifera mono- cyter, och cellerna odlades vid 37°C. Efter 20 timmar ändrades mediet till Eagle MEM kompletterat med 10% fetalt nötkreatursserum' och innehållande humant pepsin eller ett humanleukocytpepsinliknan- de enzym samt 2 x 106 celler av värmebehandlad'brödjäst, och od- lingen fortsattes under ytterligare två timmar. Efter avslutad odling beräknades graden av fagocytos enligt följande formel: fagocytiska monocyter totalmängd monocyter Resultaten anges i nedanstående tabell 1.

Graá av fagocytos (%) = x 100.

Tabell 1 Provsubstans Koncentration Grad av fagocytos (Hg/ml) (%) Ingen (endast Eagle MEM) - 37,3 i 2,9 Humant pepsin 0,6 42,6 E 2,8 H .~ 6 48,1 - 2,3* umanleukocytpepsin- + liknande enzym 6 47,9 - 2,5* * P < 0,05 (Student's t-test)' Det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande en- zymet främjade humana monocyters fagocytos av jäst. Av dessa resul- tat framgår, att humant pepsin och ett humanleukocytpepsinliknande enzym förstärker fagocyters fagøcytos. 460 azs S' Experiment 2. 'inverka 'pâ humana monocyters fagocytos Humana periferi monocyter (106 celler) fästade på en odlings- yta framställdes utgående från en suspension av perifera leukocyter. 'i Eagle MEM genom odling av cellerna i en plastskål vid 37°C under en timme. 5 ml Eagle MEM kompletterat med 10 volym-% fetalt nöt? kreatursserum och innehållande en given mängd humant pepsin eller humanleukocytpepsinliknande enzym sattes till de humana perifera monocyterna, och dessa odlades vid 37°C. "Efter 20 timmar ändrades mediet till samma medium innehållande 2 x 108 röda blodceller från får, och odlingen fortsattes~under ytterligare två timmar. Celler- na fixerades därefter med metanol och underkastades giemsa-färgning, och graden av fagocytos beräknades på samma sätt som beskrivas i experiment 1. Resultaten anges i nedanstående tabell 2. læabeli 2 Provsubstans Koncentration Grad av fagocytos ' -(ug/ml) (%) Endast Eagle MEM - ' 7,5 : 0,6 Human: pepsin 0,6 s,sgï 0,6 9,6 i 0,5* Humanleukocytpepsin- + liknande enzym 6 9,5 - 0,4* *P < 0,05 (Student's t-test) A _ _ Det humana;pepsinet.och det humanleukocytpepsinliknande en-V zymet främjade de humana momocyternas fagocytos av de röda blod~ cellerna från fâr. Dessa resultat visar tydligt, att humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym förstärker fagocyters fago- cytos. A Experiment 3. Inverkan på humana monocyters förmåga att överföra immuninformation till lymfocyter g Eagle MEM kompletterat med 10% fetalt nötkreatursserum och innehållande humant pepsin eller ett humanleuk-r' .liknande enzym sattes till humana_perifera monocyter i sådan mängd att man erhöll 106 celler per ml. Odling genomfördes under 20 timmar.

Därefter ändrades mediet till Eagle MBM kompletterat med 10% fetalt nötkreatursserum och innehållande humant pepsin eller ett human- _ leukocytpepsinliknande enzym samt 2 x 107 celler per ml av erytrocy- ter från får, och odling genomfördes vid 37°C under 30 minuter, Efter denna odling ändrades mediet ännu en gång, nämligen till medium RPMI 1640 kompletterat med 10% humanserum och innehållande 3 x 107 celler per ml av humana perifera lymfocyter, och odling / 1 I J I 1 r i 04600025 vgenomfördes under sju dygn. Efter avslutad odling uppsamlades lym- focyterna, och antalet plaques räknades enligt den metod som be- skrivas av Dosch et al., J. Immunol., Älg, 302 (1972). Resultaten anges i nedanstående tabell 3¿ 0-Taåeliáa Provsubstans Koncentration Antalet plaques "' (ng/mll" '(per 105 celler) Endast Eagle nan - se ï 11 Humant pepsin 0 0,6 97 I 9 6 i 138 I 11* Humanleukocytpepsin-- _ + liknande enzym »6 _! 131 - 12* *P < 0,05 (Student's t-test) Det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande enzymet ökade lymfocyternas produktion av antikroppar mot erytrocy- terna från fâr, dvs. ett främmande ämne. Av dessa resultat fram- _gâr klart, att humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym förstärker fagocyternas förmåga att överföra immuninformation till lymfocyter. 0 Experiment 4. Inverkan på musmakrofagers fagocytos v5'ml Eagle MEM kompletterat med 10% fetalt nötkreatursserum, och innehållande humant pepsin, ett humanleukocytpepsinliknande enzym eller muspepsin sattes till 106 celler av intraperitoneala musmakrofager, och cellerna odlades vid 37°C under 20 timmar. Me- diet ändrades därefter till Eagle MEM kompletterat med 10% fetalt nötkreatursserum och innehållande humant pepsin, ett humanleukocyt- pepsinliknande enzym eller muspepsin samt 2 x 108 celler av fårery- trocyter eller humanerytrocyter, och odlingen fortsattes under två timmar. Efter odlingen studerades makrofagerna, och graden av fagocytos beräknades på samma sätt som i experiment 1. Resultaten anges i nedanstående tabell 4.

Tabell 4 Provsubstans _ Koncentration .Grad av fagocytos (%) -ÅÅEÜQÉLL-- Fåreqwnrxyter Ihmmnerytmxqurï Endast Eagle MEM - 26,3 1 2,1 0 53,1 ï 2,7 Lwwuu;;epsin 0,6 - 31,3 I 2,2 45,8 ï 3,0 35,0 i 1,9* 42,1 ï 2,4* Ihmanlæjmmyqqïßin- V + » + g liknande enzym 6 34,7 ~'2,5* 41,8 ~ 2,7* Mtspepsin 0 ' 6 35,1 ï 2,6* 63,5 ï ~,3* ' *P < 0,05 (Student's t~test) 1W1flf ” " "_ 1Ü“" I“IllI""uriPiIlIIlrIIllIIIiI“"lr“»@«1»,«~»1~»»~~~»w 460 825 ? Det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande en- zymet ökade liksom muspepsinet musmakrofagernas fagocytos av får- erytrocyter. 'Vid musmakrofagernas fagocytos av humanerytrocyter hämmades emellertid fagocytosen av både det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande enzymet, under det att muspepsinet öka- de denna fagocytos. Av dessa resultat framgår tydligt, att humant pepsin och ett humanleukocytpepsinliknande enzym har förmåga att reglera fagocytiska funktioner så att fagocytos av heterogena ery- trocyter Xfårerytrocyter) ökas, medan däremot fagocytos av allogena erytrocyter (humanerytrocyter) hämmas.

Experiment S. Inverkan på neutrofilers baktericida verkan 2,6 x 105 celler av humana perifera leukocyter, 3 x 108 bitar av polystyrenlatexpartiklar, 50 pl nitroblâtt-tetrazolium- reagens och 150 nl Crebs-Henseleit-buffert innehållande humant pepsin, ett humanleukocytpepsinliknande enzym eller en blandning av lika viktdelar humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande en- -zym inkuberades vid 37°C under 15 minuter, och blandningens absorp- tion mättes vid en våglängd av 710 nm enligt den metod som har be- skrivits av Okamura et al., Chem, Pharm. Bull., gi, 2175 (1976).

De erhållna resultaten anges i nedanstående tabell 5.

Tabell 5 Provsubstans Koncentration Absorgtion Endast Krebs-Henseleit- (u /ml) + buffert - 0,132 - 0,012 Human: pepsin _ ~ 6 _ 0,181 3 0,020 Humanleukocytpepsin- i -+ liknande enzym ' 6 0,175 - 0,018 Blandning av lika vikt- delar humant pepsin och humanleukocytpepsinlik- + nande enzym 6 0,180 - 0,015 Det humana pepsinet, det humanleukocytpepsinliknande enzymet och blandningen därav förstärkta neutrofilernas baktericida verkan.

Av dessa resultat framgår, att förmågan att reglera fagocytiska funktioner observeras icke enbart när (et humana pepsinet eller det humanleukocytpepsinliknande enzymet användes ensamt utan även när de båda enzymerna användes i kombination med varandra.

Experiment 6. Verkan nå infektionssjukdomar framkallade av Pseudomonas aeruginosa I En suspension av 108 celler av P.aeruginosa, IFO 3445, i O W ml fysiologisk saltlösning injicerades intraperitonealt till 1 _. 460 825 möss av ICR-stam med en vikt av ca 18 g, varvid man använde grupper om 10 möss. Efter en timme injicerades intravenöst fysiologisk saltlösning innehållande humant serumalbumin, humant pepsin, ett humanleukocytpepsinliknande enzym eller en blandning av lika vikt- delar humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym. Denna injicering upprepades varje dag under sju dygn, och man bestämda antalet döda djur och antalet överlevande djur. Resultaten anges i nedanstående tabell 6. ' "“lahell 6 Provsubstans “Dos (mg/kg) Överlevnadsgrad (%) Humant serumalbumin 6 _ 0 Humant pepsin- 0,6 20 6 “ 40 Humanleukocytpepsin- ' liknande enzym 6 40 Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human- leukocytpepsinliknande , W V 6 40 enzym _ Det humana pepsinet, det humanleukocytpepsinliknande enzymet och blandningen därav utövade en verkan mot infektionssjukdomar.

Experiment 7. Botande verkan på lokala lunginfektioner framkallade av E; coli Till grupper om 10 möss av ICR-stam, vardera med en vikt av ca 15 g, administrerade man intranasalt 109 celler av E.coli (stam En timme efter A4) suspenderade i 0,05 ml fysiologisk saltlösning. denna.infektering injicerade man intravenöst en lösning av en given mängd humant serumalbumin, humant pepsin, humanleukocytpepsinlik- nande enzym eller en blandning av lika viktdelar humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym i 0,1 ml fysiologisk saltlösning.

Denna injektion upprepades dagligen under sju dygnt Man bestämde djurens överlevnadsgrad, och de erhållna resultaten-anges i nedan- stående tabell 7.

"Fåšf '~^'-1f~.:ï“-*~"W~fi;-L~sfi Wie-fasa» v,_..<~-ymiful~ H w « v qi”-a««~«--'“ mg* . -vw 44-- ..- q i 460 825 Éëëššlil _ Provsubstans Dos (mg/kg) "överlevnadsgrad (%) Humant serumalbumin » 6 300 Humant pepsin 0,6 _ 70 6 _ 90* Humanleukocytpepsin- ' liknande enzym V 6 90* Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human-_ leukocytpepsinliknande ' enzym ~ 0 - 6 90* *1>,< 0,05 (xz-test) _ Det humana pepsinet, det humanleukocytpepsinliknande enzymet och blandningen därav uppvisade en botande verkan på lokala lung- infektioner.' _ Experiment 8. möss med nedsatt immunförsvar Grupper om tio möss av ICR-stam, vardera med en vikt av ca 20 g, gavs intraperitonealt cyklofosfamid i en mängd av 200 mg/kg.

Cyklofosfamiden var löst i fysiologisk saltlösning i en koncentra- tion av 20 mg/ml. Efter fyra dygn administreras intraperitonealt 3 x 107_celler av E. coli (stam A4) suspenderade i 0,2 ml fysiolo- gisk saltlösning. En timme efter infekteringen administrerades intravenöst en lösning av en given mängd humant serumalbumin, humant pepsin, humanleukocytpepsinliknande enzym eller en blandning avi A lika viktdelar humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym i 0,1 ml fysiologisk saltlösning. Denna administrering upprepades dagligen under sju_dygn. Man bestämde djurens överlevnadsgrad, och de erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell 8.

Botande verkan på infektioner av E. coli hos Tabell 8 Provsubstans Dos (mg/kg) -ferlevnadsgrad (%) Humant serumalbumin 6 O Humant pepsin 0.6 A 20 ,6 - 40 Humanleukocytpepsin- _ V I liknande enzym 6 40* Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human- leukocytpepsinliknande enzym ' A 6 40* *P < 0,05 (%2-test) l., ga d4eo s2s 10 Det humana pepsinet, det humanleukooytpepsinliknande enzymet och blandningen därav uppvisade en botande verkan på infektioner av E. coli hos möss med nedsatt_immun§örsvar._ V Experiment 9. 'Dotande verkan på Candide-infektioner Till grupper om tio möss av ICR-stam, vardera med en vikt av ca 15 g, administrerades intraperitonealt 6 x 108 celler av C. albicans suspenderade i 0,2 ml fysiologisk saltlösning. En timme efter infekteringen administrerades intravenöst en lösning av en given mängd humant serumalbumin, humant pepsin, humanleukocytpepsin- liknande enzym eller en blandning av lika viktdelar humanpepsin och humanleukooytpepsinliknande enzym i 0,1 ml fysiologisk saltlösning.

Denna administrering'upprepades dagligen under sju dygn. Man be- stämde djurens överlevnadsgrad, och de erhållna resultaten är sam- manställda i nedanstående tabell 9.

Tabell 9 Provsubstans _ Dos (mg/kg) Överlevnadsgrad (%) 'Hmæmt serumalbumin 6 40 Humant pepsin 0,6 60 6 80 Human_leukocytpepsin- liknande enzym 6 100* Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human- leukocytpepsinliknande enzym » 6 90 *p < o,os (xÄtesu) Det humana pepsinet, det humanleukocytpepsinliknande enzymet och blandningen därav uppvisade en botande verkan på Candida-infek- tioner. ' De infektionssjukdomar som har studerats i de ovan beskrivna experimenten anses vara representativa för infektionssjukdomar framkallade av främmande ämnen som invaderar kroppen eller alstras i kroppen, t.ex. mikroorganismer, såsom virus, bakterier, Eumycetes, 'etc.

Experiment 10. Inverkan på avsättning av kolesterol i ar- tärerna 0 _ Grupper om tio hanráttor av Wistar-stam, vardera med en vikt av ca 180 g, utfodrades med ett djurfoder innehållande 10% tillsatt kolesterol. Samtidigt med påbörjandet av denna utfodring startades en daglig intravenös injicering av 0,1 ml fysiologisk saltlösning 460 82531 11 innehållande humant serumalbumin, humant pepsin, ett humanleukocyt- pepsinliknande enzym eller en blandning av lika viktdelar humant pepsin øch humanleukócyypepsinliknande enzym§ Efter tre månader _ Tabell 10 Provsubstanš 0 Dqs »“ _ V ' Kolesterol “ (mg/kg) (gg]100 q artär) Human: serumalbumin 6 112 I 18 Humant pepsin 0,6 1 91 I 20 s so 111* Humanleukocytpepsin- + A liknande enzym 6 51 - 9* Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human- leukocytpepsinliknande - + enzym 6 - 48 - 14* *P < 0,05 (Student's t-test) Experiment 11. bInverkan på inflammationer framkallade av gåatkristaller êfflff ; 'fåïe-.awf 460 825 12 'dïabell 11 y Provsubstans 'Dos (mg/kg) "Observation Humant serumalbumin 6 “ 1-6 timmar efter injektio- - nen gick hundarna på 3 ben Humant pepsin 6 Ingen abnormitet 'Humanleukocytpepsin- I' V likande enzym 6 Ingen abnormitet Blandning av lika viktdelar humant pepsin och human- leukocytpepsinliknande enzym - -' »Det humana pepsinet, det humanluekocytpepsinliknande enzymet och blandningen därav hämmade gângabnormiteter till följd av urat- 6 A Ingen abnormitet injicering och uppvisade verkan mot gikt.

Experiment 12. Akut giftiahet Till grupper om tio hanmöss av ddï-stam, vardera med en vikt av 20-25 g, administrerade man intravenöst eller intraperitonealt humant pepsin, ett humanleukocytpepsinliknande enzym eller en bland- ning av lika viktdelar därav löst i fysiologisk saltlösning. Den administrerade enzymmängden var 2 g/kg. Mössen iakttogs under en vecka, varvid inga abnormiteter kunde observeras.

Av resultaten i de ovan beskrivna experimenten framgår, att humant pepsin och ett humanleukocytpepsinliknande enzym uppvisar förmåga att reglera fagocytiska funktioner, och de kan användas för att behandla olika sjukdomar med anknytning till fagocytiska funktioner, såsom tumörer, allergier, infektionssjukdomar, auto- immuna sjukdomar, bristfälligt immunförsvar, arterioskleros, gikt, etc. De erforderliga doserna är tillräckligt säkra, vilket framgår av experimentet för bestämning av akut giftighet. Eftersom de verksamma enzymerna är protein härrörande fràn människor, antages det dessutom att det endast finns obetydlig risk för allvarliga biverkningar till följd av antigenicitet, såsom anafylaktisk chock, etc} Enzymerna kan sålunda förväntas vara ytterst användbara kliniska medel för behandling av olika tumörer. De terapeutiska medlen administreras vanligen genom injicering, t ex intravenöst, intraarteriellt, subkutant, intramuskulärt, topiskt, etc; De kan också användas såsom orala preparat, inhalationspreparat, rektala suppositorier, etc. Den terapeutiska dosen av det humana pepsinet eller det humanleukocytpepsinliknande enzymet är för en vuxen män- »användas i kombination med varandra i vilka som helst proportioner.

”S o4eo szs niska från 1 till 1000 mg per dygn, företrädesvis 5-500 mg per' dygn. Dosen kan varieras på lämpligt sätt beroende på sjukdomens allvarlighet och den använda administreringsmetoden. Det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande enzymet kan dessutom f .- Av det humana pepsinet och det humanleukocytpepsinliknande enzymet kan man bereda farmaceutiska preparat på konventionellt sätt, varvid man använder valfria och konventionella farmaceutiska bärare eller utdrygningsmedel.* y Såsom exempel på lämpliga fasta bärare och utdrygningsmedel kan man nämna vanliga utdrygningsmedel, såsom laktos, mannitol, majsstärkelse_och potatisstärkelse; bindemedel, såsom kristallin cellulosa, cellulosaderivat, gummi arabikum, majsstärkelse och gela- tin; desintegreringsmedel, såsom majsstärkelse, potatisstärkelse och kalciumkarbohydroximetylcellulosa; och smörjmedel, såsom talk och magnesiumstearat. Såsom exempel på lämpliga flytande bärare kan man nämna destillerat vatten för injektionsändamål, fysiologisk saltlösning, vegetabiliska oljor för injektionsändamàl och glykoler, såsom propylenglykol och polyetylenglykol..' Såsom exempel på föredragna injektionspreparat kan man nämna injicerbara flytande preparat och frystorkade preparat som kan lösas före användning. Såsom exempel på orala preparat kan man nämna kapslar, tabletter, granuler. pulver och flytande orala preparat.,A Såsom exempel på inhalationspreparat kan man nämna frystorkade pul- ver, och såsom exempel på.preparat för rektal administrering kan man nämna rektala suppositorier.

Uppfinningen illustreras genom följande exempel.

Exempel 1. 100 mg humant pepsin löstes i 10 ml fysiologisk saltlösning, och lösningen filtrerades aseptiskt med användning av ett membranfilter. Filtratet hälldes i steriliserade glasbehålla- re i en mängd av 1,0 ml per behållare. Efter frystorkning försegla- des behâllarna, varvid frystorkade pulverpreparat erhölls.

Exempel 2. Man blandade likformigt 100 g frystorkat humant pepsin, 97 g laktos och 3 g magnesiumstearat. Blandningen infördes i gelatinkapslar nr 2 i en mängd av 200 mg per kapsel., Kapslarna försågs med en enterobeläggning, så att enteroknpslar erhölls.

Exempel 3. -100 mg av ett humanleukocytpepsinliknande en- zym löstes i 10 ml fysiologisk saltlösning, och den erhållna lös- ningen filtrerades aseptiskt med användning av ett membranfiltor. 914 4eo s25 Filtratet hälldes i steriliserade glasbehållare i en mängd av 1,0 ml per behållare. Genom frystorkning framställdes frystorkade pulverpreparat.Å ' ExemEel\4. Äggulelecitin, kolesterol och diacetylfosfat blandades i ett molförhállande av 7:2:1. Av den erhållna bland- ningen löstes 100 mg i 12,5 ml kloroform, och en tunn film bilda- des på väggen av en flaska. En dispersion framställdes genom att denna film blandades med 25 ml fosfatbuffert innehållande S0 mg humant pepsin och 50 mg av ett humanlukocytpepsinliknande enzym.

Dispersionen underkastades_ultraljudbehandling och centrifugerades vid 110 G00 g. De resulterande fällningarna suspenderades i 3 ml fysiologisk saltlösning och sterliserades. Härvid erhölls ett liposompreparat innehållande en blandning av lika viktdelar humant pepsin och humanleukocytpepsinliknande enzym.

I *ïïfj «-«»---.4.4 ..- _. i., e. . '*“v *flf-nr-»wg-wvfx-r.. i, e .. p _» z :.¿,~.»:v:;'.'vm -_ë< ».;-ff«?«1-'{:¿a-.;:

Claims (9)

.doseringsenheten innehåller 5~500 mg humant pepsin och/eller human- ,.__. . . v, ,, w, _ , ._ .M W WW., ., _. _ _. _ ._ .. .W yrvflw, NW. w ~ WWHW» * 'vw w«-;,~< ; _» g III , v 460 825 15 P a t e n t k r a vu

1. Användning av humant pepsin och/eller ett humanleukocyt- pepsinliknande enzym för framställning av en farmaceutisk komposi- tion med förmåga att reglera fagocytiska funktioner för behandling av infektionssjukdomar, gikt och arterioskleros.

2. Användning enligt krav 1, k ä n n e t e~c k n a d av att det humana pepsinet härrör från magsäck hos människa eller från humanurin.

3. Användning enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att det humana pepsinet har en molekylvikt av 32 000-38000,en iso- elektrisk punkt av 1-3 och en maximal absorption vid 274 nm, ger ¿ en positiv ninhydrinreaktion och är lättlösligt i vatten och olös- g ligt i eter och kloroform.

4. Användning enligt krav 1, k ä n n e tle c k n a d av att det humanleukocytpepsinliknande enzymet har en molekylvikt av 35 000-41 000, en isoelektrisk punkt av 2,5-3,5 och en maximal absorption vid 278 nm, ger en positiv ninhydrinreaktion och är lätt- lösligt_i vatten och olösligt i eter och kloroform.“ V .

5._ Användning enligt krav 1, k ä n n_e t e c k n a d av att den farmaceutiska-kompositionen är en vattenlöslig injektionslösning eller ett frystorkat injektionspreparat.

6. Användning enligt krav 1, k ä n n'e t e c k n a d av att den farmaceutiska kompositionen föreligger i form av kapslar, tab- letter, granuler, pulver eller flytande preparat för oral administre- ring.

7. Användning enligt krav 1, k ä n n~e t e c k n a d av att den farmaceutiska kompositionen är ett inhalationspreparat eller ett suppositorium.

8. Användning enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att den farmaceutiska kompositionen föreligger i form av en doserings- enhet innehållande 1~1000 mg humant pepsin och/eller humanleuko- cytpepsinliknande enzym.

9. Användning enligt krav 8 k ä n n e t e c k n a d av att' R leukocytpepsinliknande enzym.