SE431212B - Sett for framstellning av oljehaltiga, hogrenade fosfatidylkoliner - Google Patents

Description

7804325-# patentskriften 2 945 869 är förut kända reningsförfaranden för ut- vinning av sojafosfatidfraktionen, som skall användas som emulgato- rer för fettemulsioner,avsedda för intravenösa applikationer. Härvid behandlas alkohollösningar av râfosfatider, från vilka olja avskilts, med Al203, Mg0 resp. aktivt kol, för att utarma dessa lösningar på kefalin och framför allt i stor utsträckning befria den från inosit- haltiga fosfatider, som vid intravenös användning på katt ger upphov till en blodtryckssänkning.

Detta förfarande kräver dock alltid först en oljeavskiljning från de i handeln förekommande râfosfatiderna, först därefter framställes de alkoholiska lösningar, vilka, precis på samma sätt som det adsorbens _behandlas med, alltid bara möjliggör en utarmning av kefalin. En mer långtgående eller en fullständig kefalinborttagning kan icke uppnås med detta förfarande.

Av den egna tyska patentskriften 1 053 299 är vidare känt ett förfa- rande för utvinning av kolaminfosforsyra-diglyceridesterfria, natur- liga kolinfosforsyra-diglyceridestrar genom kolonnkromatografi, var- vid som adsorbens bland annat också användes aluminiumoxid. Även vid detta förfarande användes ett alkoholextrakt av den tidigare oljebe- friade råfosfatiden, varvid denna tidigare oljeavskiljning åstadkom- mes genom upprepad extraktion med aceton.

Vid förfaranden enligt de tyska patentskrifterna 1 617 679 och 1 617_680 upplöses oljehaltiga râfosfatidblandningar utan tidigare oljeavskiljning i ättikester eller ett klorerat kolväte och dessa lösningar behandlas med aluminiumoxid. Härvid sker i nästa steg en oljeavskiljning av råfosfatiden, varvid all fosfatid stannar kvar på adsorptionsmedlet. I anslutning därtill kan fosfatidylkolinet selek- tivt utlösas genom behandling av aluminiumoxiden med alkohol. Också med detta tillvägagångssätt erhålles högrenade, oljefria fosfatidyl- koliner.

Till skillnad härifrån erhålles med sättet enligt uppfinningen fos- fatidylkolinerna med en hög halt essentiella fettsyror i molekylen tillsammans med den i utgångsfosfatiden befintliga växtoljan. Det har nämligen i praktiken visat sig, att det mycket ofta är nödvändigt att framställa oljehaltiga lösningar av högrenade fosfatidylkoliner.

Detta gäller framför allt för användning inom det farmaceutiska omrâ- det, när det gäller att göra högrenade fosfatidylkoliner tillgängli- ?so4z2s-4 ga för en oral administrering, exempelvis i form av gelatinkapslar.

Nyare resorptionsstudier med radioaktivt märkt fosfatidylkolin har nämligen visat, att vid oralt intag kan resorptionen av en oljehal- tig överföringsform av fosfatidylkolin med övervägande fleromättade fettsyror stegras ett flertal gånger jämfört med en vattenhaltig bland- ning.

Som föredraget oljemedium visar sig härvid den med fosfatiderna all- tid förenade, naturliga växtoljan, såsom solros- eller sojaolja, fö- reträdesvis i blandning med mono- och diglycerider, som framställts av samma oljor. På detta sätt är det möjligt att erhålla omedelbart flytande, dvs hällbara, fosfatidylkolin-fraktioner, som vanligen kan vara till mycket stor nytta även inom andra områden, exempelvis kos- metik och dietik.

Enligt teknikens nuwææmde stàuümnkt nrfir fnæmfiälhrüræn av en flytande, oljehaltig lösning av högrenad fosfatidylkolin, som lämpar sig för fyllning i= gelatinkapslar, till så att man återigen försätter en oljefri fosfatidylkolin, t.ex. erhâllen med sättet enligt den tyska patentskriften 1 617 679, med den vid reningen erhållna naturliga växtoljan eller en annan matolja, eventuellt under tillsats av mono- glycerider eller fria fettsyror. Det betyder dock, att man för att avlägsna kefalinet och inositfosfatiden först måste avlägsna den vid fosfatidblandningen fortfarande vidhäftande oljan före eller under adsorptionsförloppet på Al2O3.

De förut kända förfarandena, såväl det enligt tyska patentskriften 1 053 299 liksom även enligt tyska patentskrifterna 1 617 679 resp. 1 617 680 är förutom en viss kostsamhet behäftade med ytterligare nackdelar. För det första förekommer under oljeavskiljningen från i handeln vanligarâfosfatider med aceton alltid bildning av mindre mängder mesityloxid, som kemiskt uppstår genom sammanbindning av två acetonmolekyler och beroende på sin giftighet och sin karakteristis- ka egenlukt är mycket störande även i mycket små mängder. För det gandra uppstår vid den kromatografiska fraktioneringen av olja och fosfolipid alltid lösningsmedelblandningar, som före återanvändnin- gen måste underkastas en fraktionerad destillation.

Vid det praktiska genomförandet av sättet enligt uppfinningen ext- raheras först de i handeln förekommande râlecitinerna, som fortfa- v 78043254» rande innehåller ca 20-40% olja, vid temperaturer på upp till 50°C med metanol, etanol eller propanol, varvid de båda faser som bildas vid blandningens avkylning skiljes från varandra genom dekantering.

Den alkoholrika övre fasen behandlas sedan med aluminiumoxid antin- gen under omröring eller genom att den får passera genom en med ad- sorbenten fylld kromatografikQh¶m_ Vid eluering med alkoholen erhål- les en oljehaltig kefalin- och inositfosfatidfri fosfatidylkolin med en hög halt av essentiella fettsyror.

Det kunde inte förutses, att i motsats till teknikens ståndpunkt en oljehaltig alkoholisk fosfatidlösning utan vidare förbehandling skulle lämpa sig för en kromatografisk uppdelning på aluminiumoxid, varvid lösningens höga oljehalt inte på något sätt inverkar på adsorp- tionen av de sura fosfatiderna. Detta är desto mer förvånande, då man betraktar den ringa lösligheten för olja i alkohol, då man skulle för- vänta sig att oljan skulle skilja sig från fosfatidfasen under kon- takten med.aluminiumoxiden och därmed leda till en blockering av ad- sorbentens aktiva centra. Dessutom kunde förväntas, att adsorption av fosfatidylkolinet ur den alkoholiska lösningen ej skulle äga rum i tillräcklig utsträckning, då vid de tidigare kända förfarandena eluerades med detta lösningsmedel.

De vid genomförandet av sättet enligt uppfinningen använda, oljehal- tiga, alkoholiska extrakten kan erhållas genom enstaka eller upprepad behandling av råfosfatiderna med alkohol vid temperaturer upp till lösningsmedlets kokpunkt, lämpligen vid 20-SOOC. Separeringen av den därvid uppkommande fasblandningen kan ske genom dekantering eller centrifugering. Efter omröring av den alkoholiska övre fasen med alu- miniumoxid omröres sedan det från lösningen avskilda adsorberings- medlet med etanol under nâgra minuter och avskiljes därefter i de- kanteringskärl. Efter uttvättningen med litet etanol kan detta uppre- pas en gång till och därefter kan aluminiumoxiden, som innehåller de oönskade,medföljande lipiderna, antingen kastas bort eller upparbetas.

I det fall en kromatografikolonn användes för avskiljning av de sura fosfolipiderna erhålles de oljehaltiga fosfatidylkolin-koncentraten genom eluering av kolonnen med alkohol, lämpligen också med etylal- kohol. Därvid kan, om så erfordras, genom fraktionering av det från kolonnen utströmmande eluatet fortfarande eventuellt uppnås en redu- cering av oljeinnehållet i fosfatidylkolin-fraktionen. 7804325 -lr I båda fallen, såväl efter omröring med aluminiumoxid som även ef- ter kolonnkromatografi, befrias de på detta sätt erhållna alkoholis- ka lösningarna, eventuellt efter filtrering med en liten mängd celit som filtrerhjälpmedel, i vakuum under skydd av en inertgas från lös- ningsmedlet. Därvid erhålles en högren, oljehaltig fraktion av natur- lig fosfatidylkolin, som är kefalinfri eller mycket utarmad och som innehåller från 66 till över 70% essentiella fettsyror.

För extraktionen av de oljehaltiga râfosfatiderna och för genomföran- de av det kromatografiska förfarandet enligt uppfinningen lämpar sig de lägre alkoholerna med 1-3 kolatomer, företrädesvis etylalkohol, också i blandning med mindre mängder vatten vid ett innehåll av 85- 96% alkohol, varvid den senare koncentrationen såsom varande den i handeln vanligen förekommande, är särskilt fördelaktig.

Som adsor/beringsmedel kan basiska och neutrala aluminiumoxider an- vändas, men företrädesvis användes dock basisk med aktivitetsnivå 1-3 och enligt Brockmann standardiserad aluminiumoxid.

Sättet enligt uppfinningen möjliggör nu befriandet av oljehaltiga fosfatidfraktioner från kefalin och inosit-fosfatid genom en enkel behandling med aluminiumoxid antingen på en kromatografikolonn eller genom omröring under erhållande av en oljefas, och framställningen av oljehaltiga fosfatidylkolin-fraktioner med hög halt av essentiella fettsyror i endast ett framställningssteg.

De produkter som erhålles med sättet enligt uppfinningen besitter, beroende på sin höga fosfatidylkolin-andel på mer än 90% av fosfa- tid-fraktionen, och med över 70% essentiella fettsyror av den totala fettsyramängden, vid oralt intag redan vid så låga doseringar som 2 g per dag terapeutiskt vid många sjukdomstillstånd, såsom arte- rioskleros, diabetes eller hyperlipidemi, en värdefull ämnesomsätt- ningsverkan, som exempelvis beror på sänkningen av sjukligt förhöjt blodfettvärde.

De enligt sättet av vanliga râfosfatider utvunna, högrenade, olje- haltiga fosfatidylkolin-fraktionerna uppvisar följande typiska ana- lytiska sammansättning: 780lr325-4 6 Jodtal: 95-105 Oljeinnehåll: 15-30% Total mängd fosfor: 2,4-2,75% Kolin: 9,5-10,&% Mo1förhållande:_ Fosfor:Ko1in 0,996 Gaskromatografisk analys av fettsyrorna uppvisar följande genom- snittsvärdenf Oljehaltig fosfatidylkolin-fraktion Från olja avskild fosfatidylkolin- enlflfl:uppfünfingen fiæütflmï från sojafosfatid från solrosfosfatid Soja Solros C16 13,7% g 9,8% 15,0% ' 10,0% C18 3,0% 7 4,0% 3,3% 3,5% C18:1 l3,0% 14,0% 10,0% 14,0% C18:2 63,5% 72,2% 65,5% 72,5% C18:3 6,8% ' - 6,2% - Sättet enligt uppfinningen beskrives närmare i anslutning till någ- ra utföringsexempel nedan.

Exempel 1 a) Framställning av den oljehaltiga, etanoliska solrosfosfatid- lösningen. 1 kg solrosråfosfatid med ett oljeinnehâll av 35% omrördes med 5 l etanol i 1 timme i kvävgasatmosfär vid 40°C. Sedan den fått stå un- der 1 timme vid rumstemperatur avskildes den specifikt lättare eta- nolrika övre fasen från den viskösa undre fasen i en separertratt. b) Behandling med Al2O3 1,5 l av den enligt a) utvunna övre fasen med ett substansinnehåll på 75 g och 30 g solrosolja omrördes kraftigt med 300 g Al2O3 under 2,5 timmar vid rumstemperatur under kvävgasskydd. Sedan adsorptions- medlet fått avsätta sig, avdekanterades etanollösningen och den av- satta Al203 tvättades 2 gånger med vardera 150 ml etanol. De samman- slagna etanollösningarna avfiltrerades sedan 1 g celit irörts som filterhjälpmedel och lösningsmedlet avdunstades i vakuum under kväv- gasatmosfär vid en badtemperatur på 40°C. Härvid resulterade 45 g av en viskös, oljehaltig fosfatidylkolin-fraktion, som praktiskt ta- get var kefalinfri och uppvisade följande sammansättning: 7 73ÛÅ32S~# Oljeinnehåll 30% Fosfatidylkolin-innehåll 64% Exempel 2 1 l av en övre fas, som erhållits på samma sätt som enligt exempel 1a genom etanolextraktion av sojabönrâfosfatid, med ett substans- 'innehåll av 53 g, varav 27% sojaolja, omrördes kraftigt med 280 g Al2O3 under 4 timmar i en inertgasatmosfär. Sedan adsorbenten av- satt sig, avskildes etanollösningen, Al2O3 eftertvättades 2 gånger med vardera 150 ml etanol och de sammanslagna etanolextrakten, even- tuellt under tillsats av celit, renfiltrerades. Efter förångning av lösningsmedlet i vakuum under kvävgasskydd resulterade 33 g av en mjukplastisk, gulfärgad, kefalinfri fosfatidylkolin-fraktion, som ge- nom tillsats av olja eller delglycerider med över 50% omättade fett- syror kunde överföras i en hällbar form och uppvisade följande sam- mansättning: _ Sojaolja 25% Fosfatidylkolin-innehåll 68% Exempel 3 1,3 l av en 4,1~procentig, etanolisk sojafosfatidlösning med ett ol- jeinnehâll på 28%, vilken uppstått som övre fas vid etanolextraktion av oljehaltig sojabönråfosfatid vid 25OC, tillsattes under kvävgas- skydd till en kromatografikolonn med 31 mm diameter och 400 mm höjd, vilken är fylld med en uppslamning av 280 g AIZO3 i etanol. Sedan lös- ningen passerat, eftertvättas adsorbenten med 350 ml alkohol. De före- nade etanolextrakten befriades från lösningsmedel under inertgas- skydd i vakuum vid 40°C badtemperatur. Härvid resulterade 35 g, 68%, av en helt kefalinfri, högrenad fosfatidylkolin-fraktion med ett ol- jeinnehâll på 29% och en halt fosfatidylkolin på 70%.

Exempel 4 400 g sojabönrâfosfatid extraherades 2 gånger med vardera 1000 ml metanol i 30 minuter vid 40°C. De sammanslagna metanolextrakten upp- visade efter avkylning till rumstemperatur en torrhalt på 9%, oljehal- ten uppgick till 12% och innehållet av fosfatidylkolin till 33%. 1 l av denna metanoliska lösning satsades under inertgasskydd på en kromatografikolonn, som var fylld med en uppslamning av 500 g alumi- niumoxid. Sedan lösningen passerat eftertvättades kolonnens adsorp- tionsmedel med ytterligare 700 ml metanol. De sammanslagna metanolelu- aten indunstades i vakuum under inertgasskydd vid 40°C. Härvid resul- terade 55 g av en gul plastisk produkt, som var helt kefalinfri, och 780432544 som hade ett oljeinnehâll pâ 30% och ett fosfatidylkolininnehâll på 66%. Efter tillsats av mono-diglycerider med ett innehåll av omätta- de fettsyror på mer än 50% uppstod ett hållbart, oljigt fosfatidyl- kolin-koncentrat.

Claims (4)

1. q 7804325-4

2. 'Patentkrav

3. Sätt för framställning av oljehaltiga, högrenade fosfatidyl- koliner med ett högt innehåll av essentiella fettsyror genom extrak- tion av i handeln förekommande råfosfatider med organiska lösningsme- del och adsorption på aluminiumoxid eller en aluminiumoxidkolonn och utlösning av fosfatidylkolinet med alkohol, k ä n n e t e o k n a t av att den oljehaltiga råfosfatiden extraheras med en lägre alkohol med

4. -5 kolatomer, och att det erhållna oljehaltiga fosfatidextraktet omedelbart behandlas med aluminiumoxiden.