RU2769364C1 - Композиция для лечения фибротических заболеваний, содержащая бензгидрилтиоацетамид в качестве активного компонента - Google Patents
Композиция для лечения фибротических заболеваний, содержащая бензгидрилтиоацетамид в качестве активного компонента Download PDFInfo
- Publication number
- RU2769364C1 RU2769364C1 RU2021105457A RU2021105457A RU2769364C1 RU 2769364 C1 RU2769364 C1 RU 2769364C1 RU 2021105457 A RU2021105457 A RU 2021105457A RU 2021105457 A RU2021105457 A RU 2021105457A RU 2769364 C1 RU2769364 C1 RU 2769364C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cbm
- formula
- compound
- fibrosis
- group
- Prior art date
Links
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 60
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 60
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 title claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 7
- HVWYTOBXSCCZOP-UHFFFAOYSA-N 3,3-diphenylpropanethioamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CC(=S)N)C1=CC=CC=C1 HVWYTOBXSCCZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 85
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 44
- 102000034573 Channels Human genes 0.000 claims abstract description 24
- -1 (tetrahydrofuran-2-yl) methyl Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 14
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims abstract description 7
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract 2
- YFGHCGITMMYXAQ-UHFFFAOYSA-N 2-[(diphenylmethyl)sulfinyl]acetamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(S(=O)CC(=O)N)C1=CC=CC=C1 YFGHCGITMMYXAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229960001165 modafinil Drugs 0.000 claims description 9
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 5
- YEAQNUMCWMRYMU-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-fluorophenyl)methylsulfinyl]acetamide Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C(S(=O)CC(=O)N)C1=CC=C(F)C=C1 YEAQNUMCWMRYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NLFRAANHHHTUBJ-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfanyl-n-(oxolan-2-ylmethyl)acetamide Chemical compound C1CCOC1CNC(=O)CSC(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NLFRAANHHHTUBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RUWNLPDUHKOWFR-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfanyl-n-phenylacetamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)CSC(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RUWNLPDUHKOWFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VUGSUCNCNNALFC-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-fluorophenyl)methylsulfinyl]acetamide Chemical compound FC1=C(C=CC=C1)C(S(=O)CC(=O)N)C1=C(C=CC=C1)F VUGSUCNCNNALFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NNHUOBDLUAOWEA-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(3-fluorophenyl)methylsulfinyl]acetamide Chemical compound C=1C=CC(F)=CC=1C([S+]([O-])CC(=O)N)C1=CC=CC(F)=C1 NNHUOBDLUAOWEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SXJQYFVLJKFGFK-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfinyl-n-(oxolan-2-ylmethyl)acetamide Chemical compound C1CCOC1CNC(=O)CS(=O)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 SXJQYFVLJKFGFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- USDHVNQXFRZMAP-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfinyl-n-methylacetamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(S(=O)CC(=O)NC)C1=CC=CC=C1 USDHVNQXFRZMAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 27
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 abstract 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 64
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 62
- YUKQRDCYNOVPGJ-UHFFFAOYSA-N thioacetamide Chemical compound CC(N)=S YUKQRDCYNOVPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N thioacetamide Natural products CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 25
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 25
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 21
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 21
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 19
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 19
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 17
- 235000021068 Western diet Nutrition 0.000 description 17
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 14
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 13
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 12
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 12
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 9
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 9
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 9
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 9
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 8
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 7
- 230000009795 fibrotic process Effects 0.000 description 7
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 102100031151 C-C chemokine receptor type 2 Human genes 0.000 description 5
- 101710149815 C-C chemokine receptor type 2 Proteins 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 5
- 102000005354 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010031372 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 Proteins 0.000 description 5
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HCRQRIFRHGPWBH-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfanylacetamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(SCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 HCRQRIFRHGPWBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- ZTRHXEXUSPEKPX-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-fluorophenyl)methylsulfanyl]acetamide Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C(SCC(=O)N)C1=CC=C(F)C=C1 ZTRHXEXUSPEKPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- CXUCKELNYMZTRT-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-2-benzimidazolinone Chemical compound C1=CC=C2NC(=O)N(CC)C2=C1 CXUCKELNYMZTRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJCNLVZXWUKKSO-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(3-fluorophenyl)methylsulfanyl]acetamide Chemical compound C=1C=CC(F)=CC=1C(SCC(=O)N)C1=CC=CC(F)=C1 FJCNLVZXWUKKSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000914469 Homo sapiens CD82 antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 2
- WCTZPQWLFWZYJE-UHFFFAOYSA-N bis(4-fluorophenyl)methanol Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C(O)C1=CC=C(F)C=C1 WCTZPQWLFWZYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBLOYTBDVHDEGM-UHFFFAOYSA-N 2-benzhydrylsulfanyl-n-methylacetamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(SCC(=O)NC)C1=CC=CC=C1 VBLOYTBDVHDEGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 5'-hydroxystreptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710126338 Apamin Proteins 0.000 description 1
- 208000006096 Attention Deficit Disorder with Hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 208000007590 Disorders of Excessive Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 101000899806 Homo sapiens Retinal guanylyl cyclase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- CGNMLOKEMNBUAI-UHFFFAOYSA-N adrafinil Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(S(=O)CC(=O)NO)C1=CC=CC=C1 CGNMLOKEMNBUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002820 adrafinil Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- YFGHCGITMMYXAQ-LJQANCHMSA-N armodafinil Chemical compound C=1C=CC=CC=1C([S@](=O)CC(=O)N)C1=CC=CC=C1 YFGHCGITMMYXAQ-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- 229960004823 armodafinil Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100000871 behavioral problem Toxicity 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- DUWHHGVNDORBNQ-UHFFFAOYSA-N bis(2-fluorophenyl)methanol Chemical compound C=1C=CC=C(F)C=1C(O)C1=CC=CC=C1F DUWHHGVNDORBNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCMJXDJOHQCPOO-UHFFFAOYSA-N bis(3-fluorophenyl)methanol Chemical compound C=1C=CC(F)=CC=1C(O)C1=CC=CC(F)=C1 JCMJXDJOHQCPOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009028 cell transition Effects 0.000 description 1
- 229940125400 channel inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N hydroxystreptomycin Natural products CNC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(C=O)(O)C(CO)OC1OC1C(N=C(N)N)C(O)C(N=C(N)N)C(O)C1O OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002102 hyperpolarization Effects 0.000 description 1
- 206010020765 hypersomnia Diseases 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000160 inhibitory effect on fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000002718 inhibitory effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 239000007925 intracardiac injection Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940126181 ion channel inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N isoorientaline Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CC2C3=CC(OC)=C(O)C=C3CCN2C)=C1 OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- YVIIHEKJCKCXOB-STYWVVQQSA-N molport-023-276-178 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)=O)CC(C)C)[C@@H](C)O)C(N)=O)C1=CNC=N1 YVIIHEKJCKCXOB-STYWVVQQSA-N 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- PFNQFXDGWGYYON-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-3,3-diphenylpropanethioamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CC(=S)NO)C1=CC=CC=C1 PFNQFXDGWGYYON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003631 narcolepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N reticulin Natural products COC1CC(OC2C(CO)OC(OC3C(O)CC(OC4C(C)OC(CC4OC)OC5CCC6(C)C7CCC8(C)C(CCC8(O)C7CC=C6C5)C(C)O)OC3C)C(O)C2OC)OC(C)C1O JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 102000014898 transaminase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/111—Aromatic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/116—Heterocyclic compounds
- A23K20/121—Heterocyclic compounds containing oxygen or sulfur as hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
- A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
- A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к применению фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы А или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и обладающей эффектом подавления экспрессии белка канала KCa2.3 в клеточной мембране для лечения фиброза печени или фиброза легких. В формуле A каждый из X1 ~ X10 независимо представляет собой водород (H) или фтор (F), все из которых могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга; Y представляет собой серу (S) или сульфоксид (S=O), * указывает на хиральное положение; R1 является любым из водорода, метильной группы, гидроксильной группы, фенильной группы и (тетрагидрофуран-2-ил)метила. Технический результат – лечение фиброза печени и фиброза легких за счет использования фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы А или его фармацевтически приемлемой соли, которое подавляет экспрессию белка канала KCa2.3 в клеточной мембране. 5 з.п. ф-лы, 13 ил., 4 табл., 2 пр.
формула А
Description
[Область техники]
Настоящее изобретение относится к композиции для лечения фиброзного заболевания, которая включает соединение бензгидрилтиоацетамида в качестве активного ингредиента, и, более конкретно, к композиции для лечения фиброзного заболевания, которая подавляет экспрессию белков канала KCa2.3 в клеточной мембране, и имеет отличный эффект при лечении, в частности, фиброза печени и фиброза легких.
[Уровень техники]
Фиброз - это явление чрезмерного накопления внеклеточного матрикса, такого как коллаген, в ткани, которое возникает в процессе повреждения и восстановления тканей. Фиброз может возникать во всех органах тела, и он легко возникает особенно при серьезном и обширном повреждении и когда процесс повреждения и восстановления тканей повторяется, как при хронических заболеваниях. Когда возникает фиброз, поврежденная ткань заменяется фиброзной тканью, что ухудшает функции органа. Следовательно, когда фиброз распространяется широко, функция органа значительно ухудшается, что вызывает различные типы заболеваний. В частности, когда фиброз возникает во внутренних органах, которые напрямую влияют на жизнь, таких как печень, легкие, почки и сердце, он может иметь фатальные последствия для здоровья.
Обычно процесс фиброза может включать 1) воздействие вызывающих фиброз заболеваний (обычно хронических заболеваний) или материалов и 2) возникающий в результате фиброзный процесс (воспаление, фиброз и ангиогенез). Когда воспаление и повреждение возникают из-за заболевания или материала, вызывающего фиброз, фиброз и ангиогенез ускоряются факторами роста и цитокинами, которые секретируются клетками, участвующими в этом процессе. Следовательно, фиброзные заболевания можно лечить, устраняя причины фиброза (заболевания или материалы) или подавляя фиброзный процесс.
Однако полностью устранить причины фиброза практически невозможно. Причины многих фиброзных заболеваний, таких как идиопатический фиброз легких, неизвестны. Даже если известны причины фиброзных заболеваний, таких как хронический вирусный гепатит, стеатогепатит, диабет, вызывающий фиброз сердца или почек, и старение, часто вызывающее различные типы фиброзных заболеваний, часто невозможно полностью вылечить эти заболевания. Следовательно, лечение фиброзных заболеваний требует одновременного лечения для подавления фиброзного процесса (воспаления, фиброза, ангиогенеза), а также лечения заболевания, являющегося его причиной. Однако до сих пор не было разработано терапевтического средства для подавления фиброзного процесса.
В фиброзном процессе очень важны образование миофибробластов и активация звездчатых клеток печени (в печени активированные звездчатые клетки печени служат миофибробластами). Формирование миофибробластов, включая активацию звездчатых клеток печени, индуцируется активацией фибробластов или гладкомышечных клеток или эндотелиально-мезенхимальным переходом эндотелиальных клеток. Кроме того, когда образуются миофибробласты, количество миофибробластов значительно увеличивается из-за активной пролиферации клеток, увеличивается выработка внеклеточного матрикса, такого как коллаген, и стимулируется ангиогенез из-за активной пролиферации эндотелиальных клеток сосудов. Такой фиброзный процесс, то есть образование миофибробластов (включая активацию звездчатых клеток печени), пролиферация миофибробластов, образование внеклеточного матрикса, активация эндотелиальных клеток сосудов и ангиогенез, происходят через внутриклеточные Са2+-зависимые сигнальные пути. Следовательно, Са2+ играет очень важную роль в фиброзном процессе.
Для увеличения Са2+ в фибробластах, звездчатых клетках печени и эндотелиальных клетках сосудов существенно важны Са2+ активированные K+ каналы, то есть «каналы KCa». Гиперполяризация, вызванная активацией K+ каналов, способствует притоку Са2+ через входные каналы Са2+ в этих клетках. Каналы KCa, играющие такую роль в этих клетках, - это канал KCa2.3 и канал KCa3.1. Эти два канала K+ похожи по структуре и функциям, но есть разница в клетках, в которых эти каналы распространены.
Поскольку мРНК обнаруживается в большинстве клеток ткани, каналы KCa2.3, возможно, распределены в большинстве тканей организма (Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol.2004; 369 (6): 602-15) и широко распространены в печени, нервах и эндотелиальных клетках сосудов. С другой стороны, канал KCa3.1 обычно распространен в эндотелиальных клетках сосудов, фибробластах, иммунных клетках и эритроцитах (Curr Med Chem. 2007; 14 (13): 1437-57; Expert Opin Ther Targets. 2013; 17 (10): 1203-1220).
Как описано выше, каналы KCa2.3 или KCa3.1, которые, как считается, вносят значительный вклад в прогрессирование фиброза, способствуя притоку Са2+ через каналы входа Са2+, изучаются в качестве основных мишеней терапевтических агентов при фиброзных заболеваниях. В частности, сообщалось, что селективный ингибитор канала KCa2.3, апамин, оказывает ингибирующее действие на эндотелиально-мезенхимальный переход, который имеет решающее значение для фиброзного процесса, и оказывает терапевтическое действие на фиброз печени и фиброз желчевыводящих путей (Biochem Biophys. Res Commun. 2014; 450 (1): 195-201; Int J. Mol Med. 2017; 39 (5): 1188-1194).
Ингибиторы ионных каналов, которые были разработаны к настоящему времени, подавляют функции клетки посредством ингибирования активности ионного канала (ингибирования потока ионов через белок канала). Поскольку количество канальных белков, экспрессируемых в клеточной мембране, влияет на функцию клетки, функции клеток также можно регулировать путем уменьшения количества канальных белков, экспрессируемых в клеточной мембране (ингибирование экспрессии канального белка в клеточной мембране). До сих пор не было разработано лекарственных средств для регулирования уровня экспрессии канального белка в клеточной мембране, и молекулы, регулирующие уровень экспрессии, могут быть новым терапевтическим средством от различных заболеваний (Chem Med С hem. 2012, 7 (10): 1741-1755). В частности, поскольку экспрессия канала K+ Са2.3 увеличивается за счет факторов роста при фиброзных заболеваниях, лекарственные средства для ингибирования экспрессии белков канала KCa2.3 могут быть разработаны в качестве терапевтических агентов для лечения фиброзных заболеваний.
В то же время в патентах США №4066686 и 4177290 производное бензгидрилсульфенилацетамида, включенное в настоящее изобретение, предлагается в качестве лекарственного средства для лечения расстройств центральной нервной системы, и это соединение было разработано в качестве лекарственного средства для лечения нарколепсии компанией Lafon, Франция, и продается под непатентованным наименованием «модафинил». Адрафинил, известный как предшественник модафинила, то есть дифенилметилтиоацетогидроксамовая кислота, также был разработан как лекарство, обладающее такой же эффективностью, как модафинил (CNS Drug Reviews Vol5, №3 193-212, 1999).
Кроме того, в соответствии с патентом США № 4927855 было высказано предположение, что R-изомер модафинила (лафон), то есть (-)-бензгидрилсульфенилацетамид, действует в качестве антидепрессанта оказывая терапевтическое действие на гиперсомнию и болезнь Альцгеймера; согласно патенту США №6180678 было высказано предположение, что R-модафинил (ветохинол, Франция) эффективен при лечении поведенческих проблем у пожилых собак, улучшении обучаемости, контроле мочевого пузыря и улучшении памяти, и согласно патенту США № 9637447 было высказано предположение, что 2-[бис(4-фторфенил)метансульфенил]ацетамид, известный под общим названием «лауфлумид», эффективен против синдрома дефицита внимания с гиперактивностью (ADHD), нарколепсии, эпилепсии и летаргии.
Кроме того, изобретатели сообщили в корейских патентах № 10-1345860 и 10-1414831 и соответствующем патенте США № 9259412, что модафинил и его производные могут быть использованы в качестве лекарственных средств для лечения сосудистых заболеваний и заболеваний, опосредованных каналом KCa3.1, то есть рака и аутоиммунных заболеваний, за счет увеличения уровня цАМФ для расслабления кровеносных сосудов и подавления тока KCa3.1.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[Техническая проблема]
В процессе изучения фармацевтической активности соединений бензгидрилтиоацетамида, включая производные бензгидрилсульфенилацетамида, авторы обнаружили, что такие соединения неожиданно подавляют экспрессию канала KCa2.3 в клеточной мембране и, кроме того, оказывают терапевтическое действие на фиброзные заболевания у мышиных моделей.
Настоящее изобретение направлено на обеспечение новой композиции для лечения фиброзных заболеваний, которая включает соединение бензгидрилтиоацетамида или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента. Для справки, термин «соединение бензгидрилтиоацетамида», используемый в данном документе, используется как понятие, включающее «соединение бензгидрилсульфенилацетамида».
Техническое решение
Композиция для лечения фиброзного заболевания согласно настоящему изобретению включает соединение бензгидрилтиоацетамида, представленное приведенной ниже формулой А, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.
[Формула А]
[В формуле А каждый из X1 ~ Х10 может независимо представлять собой водород (Н) или фтор (F), все из которых могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга; Y представляет собой серу (S) или сульфоксид (S=O), * указывает на хиральное положение; R1 является любым из водорода, метильной группы, этильной группы, метоксигруппы, этоксигруппы, гидроксильной группы и углеродного соединения, содержащего от 3 до 6 атомов углерода.]
В соединении формулы А каждый из X1 ~ Х10 независимо представляет собой водород (Н) или фтор (F), Y представляет собой серу (S), a R1 представляет собой водород (Н).
В соединении формулы А каждый из X1 ~ Х10 независимо представляет собой водород (Н) или фтор (F), Y представляет собой сульфоксид (S=О), a R1 представляет собой водород (Н).
Соединение формулы А имеет эффект подавления экспрессии белка канала KCa2.3 в клеточной мембране.
Соединение формулы А эффективно при лечении, в частности, фиброза печени и фиброза легких.
Преимущества изобретения
Было подтверждено, что соединение бензгидрилтиоацетамида согласно настоящему изобретению обладает эффектом подавления экспрессии белка канала KCa2.3 в эксперименте in vitro для культивирования клеток, а также обладает эффектом подавления воспаления и фиброза и улучшения функций печени в эксперименте in vivo на мышиных моделях, в которых были индуцированы заболевания печени и легких.
Соответственно, соединение бензгидрилтиоацетамида согласно настоящему изобретению может быть эффективно использовано в качестве фармацевтической композиции для лечения различных типов воспалительных и фиброзных заболеваний, которые возникают в организме человека, и, в частности, воспалительных и фиброзных заболеваний в печени и легких, и ожидается, что при необходимости оно будет реализовано в виде лекарственного средства для животных.
Описание чертежей
На фиг. 1А-1С показаны эффекты PDGF, TGFβ и соединения формулы А1 согласно настоящему изобретению на экспрессию каналов KCa2.3 и KCa3.1 в эндотелиальных клетках сосудов, фибробластах и звездчатых клетках печени.
На фиг. 2А и 2В показаны эффекты соединения формулы А1 на экспрессию маркера фиброза (фиг. 2А) и пролиферацию клеток (фиг. 2В) в фибробластах, подвергшихся воздействию TGFβ, индуцирующего увеличение экспрессии канала KCa2.3 и фиброз.
На фиг. 3 показано влияние соединении формул А1-А9 согласно настоящему изобретению на экспрессию канала KCa2.3 в звездчатых клетках печени.
На фиг. 4 показан ток KCa2.3 в звездчатых клетках печени, сниженный в экспрессирующемся канале KCa2.3 из-за воздействия соединений формул А2-А4 и А9 согласно настоящему изобретению в течение 24 часов.
На фиг. 5 показано влияние соединений формул А2-А5, А8 и А9 согласно настоящему изобретению на пролиферацию клеток в фибробластах, подвергнутых воздействию TGFβ или PDGF, индуцирующих фиброз, в течение 24 часов.
На фиг. 6A-6D показано влияние соединения формулы А1 согласно настоящему изобретению и его изомеров на ингибирование воспаления и ингибирование фиброза на мышиных моделях ТАА-индуцированного заболевания печени с помощью гистологического или иммуногистохимического метода.
На фиг. 7А и 7В показаны результаты тестирования функций печени в зависимости от наличия или отсутствии введения соединений формул А1-А5 согласно настоящему изобретению на мышиных моделях заболеваний печени, вызванных ТАА или западной диетой (фиг. 7А или 7В).
На фиг. 8А и 8В показано изменение экспрессии мРНК воспалительных цитокинов в результате введения соединений формул А1 и А2-А5 согласно настоящему изобретению в мышиных моделях ТАА-индуцированного заболевания печени, и на фиг. 8С показано изменение экспрессии мРНК воспалительных цитокинов в результате введения соединения формулы А1 в мышиных моделях заболевания печени, индуцированного западной диетой (WD).
На фиг. 9 показано изменение экспрессии мРНК маркеров фиброза в зависимости от наличия или отсутствия введения соединения формулы А1 на мышиных моделях с ТАА-индуцированным заболеванием печени.
На фиг. 10А и 10В показано действие R-изомера и S-изомера соединения формулы А1 на экспрессию белков маркера воспаления (фиг. 10А) и маркера фиброза (фиг. 10В) на мышиных моделях с ТАА-индуцированным заболеванием печени.
На фиг. 11 показано действие R-изомера и S-изомера соединения формулы А1 на экспрессию белка канала KCa2.3 на мошиных моделях ТАА-индуцированного заболевания печени
На фиг. 12 показано действие соединения формулы А9 на воспаление легких и фиброз на мышиных моделях индуцированного блеомицином фиброза легких.
На фиг. 13А и 13В показано действие соединения формулы А9 на экспрессию белков маркера воспаления (фиг. 13А) и маркера фиброза (фиг. 13В) на мышиных моделях индуцированного блеомицином фиброза легких.
Осуществление изобретения
Соединение бензгидрилтиоацетамида согласно настоящему изобретению, представленное формулой А, включает, в частности, соединения формул А1-А9, представленных ниже.
[Формула А1]
Соединение формулы А1 известно под общим названием «модафинил» и в настоящее время используется в качестве лекарственного средства для лечения гипнолепсии, а клинические испытания для лечения других психических заболеваний продолжаются. Химическое название модафинила - 2-(бензгидрилсульфенил)ацетамид, и он может быть синтезирован известным способом или приобретен.
[Формула А2]
[Формула A3]
[Формула А4]
[Формула A5]
[Формула А6]
[Формула А7]
[Формула А8]
[Формула А9]
Все соединения формул А2-А9 обладают эффектом подавления экспрессии белка канала KCa2.3 в клеточной мембране в соответствии с тем же механизмом, что и модафинил, и, кроме того, оказывают терапевтическое действие на фиброзные заболевания в организме человека. Среди них соединение формулы А9 известно под непатентованным наименованием «лауфлумид».
Химические названия соединений формул от А1 до А9 следующие. Кодовые названия, перечисленные в скобках в конце каждого химического названия, являются кодовыми названиями, используемыми авторами в следующих примерах.
1) Формула А1, 2-(бензгидрилсульфенил)ацетамид (CBM-N1)
2) Формула А2; 2-(бензгидрилтио)-N-[(тетрагидрофуран-2-ил)метил]ацетамид (CBM-N2)
3) Формула A3; 2-(бензгидрилтио)-N-фенилацетамид (CBM-N3)
4) Формула А4; 2-(бензгидрилсульфенил)-N-метилацетамид (CBM-N4)
5) Формула A3; 2-(бензгидрилсульфенил)-N-[(тетрагидрофуран-2-ил)метил]ацетамид (CBM-N5)
6) Формула А6; 2-(бензгидрилтио)-ен-метилацетамид (CBM-N6)
7) Формула А7; 2-[бис(2-фторфенил)метансульфенил]ацетамид (CBM-N7)
8) Формула А8; 2-[бис(3-фторфенил)метансульфенил]ацетамид (CBM-N8)
9) Формула А9; 2-[бис(4-фторфенил)метансульфенил]ацетамид (CBM-N9).
Соединения формул А2-А6 могут быть синтезированы способами, раскрытыми в патенте Кореи №10-1345860. или коммерчески доступны, но эффективные способы получения соединений формул А7-А9 неизвестны. Таким образом, в настоящем изобретении способы получения соединений формул А7-А9 были описаны в качестве примеров.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению включает фармацевтически приемлемую соль соединения формулы А. Здесь «фармацевтически приемлемая соль» может обычно включать соль металла, соль с органическим основанием, соль с неорганической кислотой, соль с органической кислотой или соль с основной или кислой аминокислотой. Кроме того, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может включать как сольват, так и гидрат соединения формулы А, и может включать все доступные стереоизомеры и, кроме того, включать кристаллическую или аморфную форму каждого соединения.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть приготовлена в форме таблетки, пилюли, порошка, гранулы, капсулы, суспензии, жидкости для внутреннего применения, эмульсии, сиропа, аэрозоля или стерильного раствора для инъекций по общепринятой методике. Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена перорально или парентерально в соответствии с целью применения, и парентеральное введение может осуществляться путем кожной инъекции для наружного применения, внутрибрюшинной инъекции, интраректальной инъекции, подкожной инъекции, внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции или внутрисердечной инъекции.
Доза фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению может варьироваться в зависимости от массы тела пациента, возраста, пола, состояния здоровья, диеты, продолжительности введения, способа введения, скорости выведения и тяжести заболевания. Суточная доза составляет предпочтительно от 0,2 до 20 мг/кг, и более предпочтительно от 0,5 до 10 мг/кг в расчете на активный ингредиент, и ее можно вводить один или два раза в день, но настоящее изобретение этим не ограничивается.
Примеры
1) Синтез соединений
1-1) Синтез соединения формулы А9
Способ синтеза соединения (лауфлумида) формулы А9 будет описан со ссылкой на следующую схему реакции. 24 г 4,4'-бисфторбензгидрола (1) помещали в 500 мл круглодонную колбу, растворяли в 150 мл добавленной трифторуксусной кислоты и перемешивали с 12,05 г добавленной тиголовой кислоты в течение приблизительно 2 часов с последующим подтверждением прекращения реакции методом тонкослойной хроматографии. Продукт реакции подвергали вакуумной перегонке для удаления трифторуксусной кислоты, нейтрализовали и экстрагировали этилацетатным органическим растворителем. Полученный экстракт сушили сульфатом магния, получая при этом 34,8 г соединения (II), которое представляет собой липкое масло желтого цвета, с количественным выходом.
34,8 г соединения (II) растворяли в 250 мл безводного этанола и добавляли 4,2 г концентрированной серной кислоты с последующим кипячением с обратным холодильником в течение 8 часов. Затем полученный продукт охлаждали до комнатной температуры, концентрировали для удаления этанола, растворяли в метиленхлориде и дважды промывали водой. Полученный продукт снова промывали 5% раствором NaHCO3 и сушили безводным сульфатом магния, получая при этом 39,1 г соединения (III), которое представляет собой масло желтого цвета, с количественным выходом.
34,3 г соединения (III) помещали в круглодонную колбу (500 мл), добавляли 210 мл метанола, 21,4 мл кислотного катализатора (кислотный катализатор получали растворением 4 г серной кислоты в 90 мл изопропилового спирта), и медленно добавляли 35% раствор H2O2 с последующим перемешиванием в течение ночи при комнатной температуре. Затем добавляли 70 г хлорида натрия (NaCl), трижды экстрагировали раствором метиленхлорида, сушили безводным сульфатом магния и концентрировали, получая таким образом соединение (IV) с количественным выходом.
В круглодонную колбу (100 мл) добавляли 5,1 г соединения (IV) с 13 мл метанола, добавляли 1,3 г хлорида аммония (NH4Cl) и затем добавляли 98 мл концентрированного раствора гидроксида аммония (NH4OH). После перемешивания в течение ночи белый раствор эмульсионного типа фильтровали, получая при этом 4 г твердого порошка. 4 г твердого порошка растворяли в 28 г изопропилового спирта, кипятили с обратным холодильником и охлаждали до комнатной температуры, получая тем самым 2,1 г 2-[бис(4-фторфенил)метансульфенил]ацетамида, который представляет собой белое кристаллическое соединение, представленное Формулой А9.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 7,68 (bs, 1Н); 7,56-7,51 (m, 4Н), 7,33 (bs, 1Н), 7,29-7,24 (m, 4Н), 5,4 (s, 1H); 3,4 (d, J=13,6 Hz, 1H); 3,16 (d, J=13,6 Hz, 1H)
1-2) Синтез соединения формулы A8
3,3'-бисфторбензгидрол был синтезирован обычным методом (Tetrahedron Lett, vol 58, 442, 2017, ЕР 1433744, J. Med. Chem. vol 40, 851, 1997). Это соединение использовали в качестве исходного материала, и соединение формулы А8, то есть 2-[бис(3-фторфенил)метансульфенил]ацетамид, синтезировали способом синтеза соединения формулы А9.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 7,68 (bs, 1Н); 7,5-7,2 (m, 9H), 5,4 (s, 1H); 3,4 (d, 1H); 3,16 (d, Hz, 1H)
1-3) Синтез соединения формулы A7
2,2'-бисфторбензгидрол был синтезирован обычным методом (ЕР 1,661930, J. Med. Chem. vol 51, # 4, 976, 2008). Это соединение использовали в качестве исходного материала, и соединение формулы А7, то есть 2-[бис(2-фторфенил)метансульфенил]ацетамид, синтезировали способом синтеза соединения формулы А9.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 7,68 (bs, 1Н); 7,5-7,2 (m, 9H), 7,33 (bs, 1H), 5,4 (s, 1H); 3,4 (d, 1H); 3,16 (d, 1H)
2. Экспериментальный способ
2-1) Культура клеток
Фибробласты (CRL-2795; American Type Culture Collection, VA) культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (Hyclone, Logan, UT), эндотелиальные клетки микрососудов матки человека (PromoCell GmbH, Геидельберг, Германия) культивировали в среде MV2 (PromoCell GmbH), а звездчатые клетки печени человека (Innoprot, Bizkia, Испания) культивировали в среде Р60126 (Innoprot).
Все клетки поддерживали в условиях 5% увлажненного углекислого газа при 37°С. Культивированные клетки подвергали воздействию каждого из PDGF, TGFβ и соединений формул А1-А9 (CBM-N1 ~ N9) в течение 24 часов с последующим проведением экспериментов
2-2) Создание мышиных моделей болезни печени.
Чтобы подтвердить эффекты соединений формул А1-А5 (CBM-N1 ~ N5) согласно настоящему изобретению на воспаление и фиброз печени, последующие эксперименты были выполнены на мышах C57BL/6 дикого типа (приобретенных у Orient Bio). Во-первых, чтобы вызвать заболевание печени у мышей, мышам вводили тиоацетамид (ТАА) (эксперимент А) или мышей выращивали на западной диете, вызывающей ожирение печени (эксперимент В). Мышей разделили на здоровую контрольную группу, группу с вызванным заболеванием, и труппу, в которой вводили лекарственное средство, и среди этих трех групп от 15 до 100 мышей использовали в каждой труппе для эксперимента А, и 10 мышей использовали в каждой группе для эксперимента В. Способ медикаментозного лечения мышей в каждой группе следующий.
(1) Здоровый контроль: здоровым контрольным мышам в эксперименте А внутрибрюшинно вводили три раза в неделю такое же количество растворителя ТАА. которое использовалось, когда ТАА вводили группе с вызванным заболеванием, и группу здорового контроля в эксперименте В держали на нормальном рационе питания. В обоих экспериментах А и В растворитель CBM-N1 вводили через пероральную трубку в том же количестве, что и при инъекции CBM-N1, пять раз в неделю. Растворителем ТАА была дистиллированная вода, растворитель CBM-N1 и его производное представляли собой смесь ДМСО и дистиллированной воды в соотношении 1:1. На прилагаемых фигурах С или Контроль относится к здоровому контролю.
(2) Группа с вызванным заболеванием: группе с вызванным заболеванием в эксперименте А внутрибрюшинно вводили ТАА в дозе 100 мг/кг три раза в неделю, группу с вызванным заболеванием в эксперименте В держали на западной диете (WD, 45% насыщенных жиров. 0,2% холестерина и вода, содержащая фруктозу и глюкозу). Все растворители CBM-N1 в экспериментах А и В вводили через пероральную трубку в том же количестве, что и при введении CBM-N1 пять раз в неделю. На прилагаемых фигурах ТАА относится к группе, в которой заболевание вызывается TAA, a WD относится к группе, в которой заболевание вызывается западной диетой.
(3) Группа, в которой вводили лекарственное средство: в эксперименте А соединения формул 1-5 (50 м г/к г/день. 5 раз в неделю) вводили с ТАА (100 мг/кг, 3 раза в неделю) и в эксперименте В CBM-N1-N5 (50 мг/кг/день, 5 раз/неделю) вводили с западной диетой. Мышей, получавших лечение описанным выше способом в течение 16 недель, немедленно умерщвляли чрезмерным введением анестетика, а затем извлекали печень и кровь. На прилагаемых фигурах ТАА + CBM-N1, ТАА + CBM-N2, ТАА + CBM-N3, ТАА + CBM-N4 и ТАА + CBM-N5 относятся к группам с вызванным заболеванием, которым вводили соединения формул А1-А5, соответственно.
2-3) Создание мышиных моделей легочного воспаления и фиброза
Чтобы подтвердить действие соединения формулы А9 (CBM-N9) на воспаление легких и фиброз, вызванные блеомицином, следующие эксперименты были выполнены на мышах C57BL/6 дикого типа. Сначала мышей разделили на здоровую контрольную группу, группу с вызванным заболеванием и группу, получавшую лекарственное средство, и в каждую из трех групп включали по десять мышей. Способ медикаментозного лечения мышей в каждой группе выглядит следующим образом.
(1) Здоровый контроль: такое же количество дистиллированной воды, которое использовалось при применении блеомицина в группе с вызванным заболеванием, вводили интратрахеально. Кроме того, растворитель CBM-N9 вводили внутрибрюшинно в том же количестве, что и при введении CBM-N9 группе с вызванным заболеванием, как описано ниже, пять раз в неделю.
(2) Группа с вызванным заболеванием: 1,5 единицы блеомицина вводили интратрахеально. Кроме того, растворитель CBM-N9 вводили внутрибрюшинно в том же количестве, что и при введении CBM-N9, пять раз в неделю.
(3) Группа, получавшая лекарственное средство: 1,5 единицы блеомицина вводили интратрахеально. Кроме того, CBM-N9 (50 мг/кг) вводили внутрибрюшинно пять раз в неделю.
Мышей, получавших лекарственное средство в течение 4 недель таким же образом, как описано выше, немедленно умерщвляли чрезмерным введением анестетика, а затем извлекали легкие.
2-4) Подготовка парафиновых образцов ткани печени и тканей легких и наблюдение за их морфологическими изменениями
Для гистологического подтверждения терапевтического эффекта соединения формулы А1 (CBM-N1) или соединения формулы А9 (CBM-N9) на каждой мышиной модели получали парафиновый образец ткани. Ткани печени и легких фиксировали раствором параформальдегида и делали срезы толщиной 1-2 мм. Срезы тканей залили парафином, нарезали пластинами толщиной 4 мкм, чтобы удалить парафин с помощью ксилола, и ксилол удалили этанолом с последующей промывкой водопроводной водой. Полученные ткани подвергали окрашиванию гематоксилином и эозином (окрашивание Н&Е) или иммуногистохимии.
(1) Окрашивание Н&Е: сначала ядра окрашивали (синий) раствором для окрашивания гематоксилином Харриса в течение 5 минут и затем окрашивали (розовый) раствором эозина.
(2) Иммуногистохимия маркеров воспаления: маркеры воспаления (CD82 и CD45) окрашивали специфическими антителами, и лимфоидные клетки окрашивали в коричневый цвет.
(3) Иммуногистохимия маркеров фиброза: коллаген окрашивали трихромным окрашиванием по Массону, или волокна ретикулина окрашивали ретикулином.
2-5) Тест функции печени
Аминотрансфераза аспарагиновой кислоты (AST, GOT) и аланинаминотрансфераза (ALT, GPT), общий билирубин и концентрации альбумина измеряли с использованием крови, взятой из мышиных моделей заболевания печени. Способ тестирования функции печени показан в таблице 1 ниже.
2-6) Анализ полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР в реальном времени)
Уровни экспрессии мРНК факторов воспаления или фиброза в извлеченной ткани печени измеряли с помощью ПЦР в реальном времени. РНК ткани печени выделяли с помощью реагента TRIzol (Центр молекулярных исследований, Цинциннати, Огайо), а одноцепочечную к ДНК синтезировали с использованием полимеразы BcaBEST (TakaraShuzo) с последующей полимеразной цепной реакцией.
Последовательности праймеров (SEQ ID NO: 1-30) воспалительных цитокинов и маркеров фиброза, используемых здесь, показаны в таблицах 2-4 ниже.
2-7) Вестерн-блоттинг
Клетки лизировали буферным раствором для экстракции белка, концентрацию белка в супернатанте определяли анализом Брэдфорда, и 30 мкг белка загружали в гель SDS-PAGE (полиакриламидный гель в присутствии додецилсульфата натрия) и затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Нитроцеллюлозную мембрану блокировали 5% содержащим BSA (бычий сывороточный альбумин) TBST (смесь трис-забуференного физиологического раствора и полисорбата 20) (10 мМ трис-HCl, 150 мМ NaCl и 0,1% (об./об.) твин-20, рН 7,6) при комнатной температуре в течение 1 часа. Б лоты инкубировали в течение ночи с первичными антителами, а затем инкубировали со вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, в течение 1 часа. Полосы визуализировали методом хемилюминесценции. Сбор и обработку данных проводили с помощью анализатора изображений (LAS-3000) и программного обеспечения IMAGE CAUSE (Fuji film, Япония).
2-8) Метод тестирования пролиферации клеток МТТ
Клетки высевали в 96-луночные планшеты из расчета 2×104 клеток/лунку, а затем подвергали воздействию TGFβ, который способствует пролиферации клеток, в течение 24 часов. Кроме того, в каждую лунку добавляли 0,1 мг МТТ с последующей выдержкой в течение 4 часов при 37°С. После этого культуральную среду удаляли, клетки лизировали диметилсульфоксидом, а затем измеряли оптическую плотность при 590 нм с использованием следующих устройств.
2-9) Электрофизиологический анализ
Ток целых клеток через клеточную мембрану в изолированных и культивируемых единичных клетках измеряли с использованием метода фиксации потенциала. Линейной изменение напряжения измеряли от -100 мВ до +100 мВ с использованием стеклянного микроэлектрода в клетках с фиксацией напряжения целой клетки, и полученный ток усиливали с помощью усилителя (ЕРС-10, HEKA, Lambrecht, Германия) с последующей записью с частотой дискретизации от 1 до 4 кГц.
Стандартный внешний раствор содержал 150 мМ NaCl, 6 мМ KCl, 1,5 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2, 10 мМ HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин этансульфоновая кислота) и 10 мМ глюкозы при рН 7,4 (титрованный NaOH), и раствор стеклянного микроэлектрода (пипетки) содержал 40 мМ KCl, 100 мМ K-аспартата, 2 мМ MgCl2, 0,1 мМ EGTA (этиленгликольтетрауксусная кислота), 4 мМ Na2ATP и 10 мМ HEPES при рН 7.2 (титрованный КОН). Концентрацию свободного Са2+ в растворе для пипетки доводили до 1 мкМ, добавляя соответствующее количество Са2+ в присутствии 5 мМ EGTA (рассчитано с помощью CaBuf; G. Droogmans, Leuven, Бельгия).
Ток KCa2.3 выделяли следующим способом. Среди токов, зарегистрированных при введении 1 мкМ Са2+ в клетки с фиксированным напряжением цельной клетки с использованием стеклянного электрода и применением 1-этил-2-бензимидазолинона (1-EBIO, 100 мкМ), активирующего ток KCa2.3, ток, ингибируемый а па ми ном (200 нМ), который является ингибитором каналов KCa2.3, был определен как ток KCa2.3, и зарегистрированный ток был разделен на емкость ячейки и нормализован.
2-10) Статистический анализ
Экспериментальные результаты выражали как среднее ± стандартное отклонение (SEM). Статистический анализ проводился с использованием t-критерия Стьюдента, и Р≤0,05 определяли как значимое различие.
3) Результаты экспериментов с использованием культивированных клеток
Эксперименты проводились для определения влияния соединений формул А1-А9 (CBM-N1 ~ N9) согласно настоящему изобретению на экспрессию канала KCa2.3 in vitro, а также для определения того, могут ли соединения формул А1-А9 (CBM-N1 ~ N9) подавлять фиброз.
3-1) Влияние факторов роста и CBM-N1 на каналы KCa2.1 и KCa3.1
На фиг. 1А показано влияние каждого из PDGF, TGFβ и CBM-N1 на экспрессию канала KCa2.3 или канала KCa3.1 в эндотелиальных клетках сосудов. Когда эндотелиальные клетки сосудов подвергались воздействию PDGF (20 нг/мл) или TGFβ (5 нг/мл) в течение 24 часов, экспрессия мРНК (левая панель) и белка (средняя панель) канала KCa2.3 увеличивались. С другой стороны, экспрессия канала KCa3.1 не увеличивалась из-за обработки PDGF (правая панель). Кроме того, когда клетки, в которых экспрессия белка канала KCa2.3 увеличивалась с помощью PDGF, обрабатывали CBM-N1 в течение 24 часов, экспрессия белка канала KCa2.3 значительно снижалась (средняя панель).
На фиг. 1В показано влияние CBM-N1 на экспрессию белка канала KCa2.3 в фибробластах (левая панель) или звездчатых клетках печени (правая панель). В результате уровень экспрессии стабильного канала KCa2.3 снижался в фибробластах после обработки CBM-N1 и снижался в звездчатых клетках печени в зависимости от концентрации.
На фиг. 1С показано влияние ингибирования экспрессии канала KCa2.3 в звездчатых клетках печени при воздействии CBM-N1 на ток KCa2.3. Плотность тока KCa2.3 при мембранном потенциале +50 мВ сравнивали между клетками, подвергнутыми воздействию CBM-N1 в течение 24 часов, и клетками, не подвергавшимися воздействию CBM-N1 Плотность тока KCa2.3 составляла 18,98±4,17 пА/пФ в клетках, не подвергавшихся воздействию CBM-N1. и 7.77±2,65 мВ/пФ в клетках, подвергнутых воздействию CBM-N1. То есть ток KCa2.3 был значительно снижен за счет ингибирования экспрессии канала KCa2.3 из-за CBM-N1. Как описано выше, снижение тока KCa2.3 в клетках, в которых экспрессия белка канала KCa2.3 была снижена с помощью CBM-N1, означает снижение экспрессии белка канала в клеточной мембране с помощью CBM-N1.
3-2) Ингибирующее действие CBM-N1 на фиброз
На фиг. 2 показано ингибирующее действие CBM-N1 на индуцированный TGFβ фиброз в фибробластах. Эффект индуцирования фиброза с помощью TGFβ определяли по уровням экспрессии маркеров фиброза (фиг. 2А) и эффекту индукции пролиферации клеток (фиг. 2В). Когда фибробласты подвергались действию TGFβ (5 нг/мл) в течение 24 часов, количество маркеров фиброза, таких как α-актин гладких мышц (α-SMA), белки коллагена 1α (Col1α) и коллагена 3α (Col3α), увеличивалось, и стимулировалась пролиферация клеток. Когда фибробласты подвергались действию TGFβ + CBM-N1 в течение 24 часов, уровни экспрессии маркеров фиброза снижались и пролиферация клеток подавлялась. Эти результаты показывают, что CBM-N1 ингибирует фиброз, вызванный фактором, вызывающим фиброз.
3-3) Влияние CBM-N1 и его производных (CBM-N2 - CBM-N9) на экспрессию канала KCa2.3 и пролиферацию клеток
На фиг. 3 показано влияние производных CBM-N1 на экспрессию белка канала KCa2.3 в звездчатых клетках печени. В частности, при воздействии на клетки CBM-N2, CBM-N5, CBM-N8 и CBM-N9 в течение 24 часов экспрессия канала KCa2.3 была значительно снижена.
На фиг. 4 показано влияние ингибирования экспрессии канала KCa2.3 CBM-N2 - CBM-N4 и CBM-N9 в звездчатых клетках печени на ток KCa2.3. В результате сравнения плотностей тока KCa2.3 при мембранном потенциале +50 мВ между клетками, в которых экспрессия канала KCa2.3 ингибируется воздействием соединения в течение 24 часов, и клетками, не подвергавшимися воздействию соединения, из-за воздействия CBM-N2 - CBM-N4 и CBM-N9 плотности тока KCa2.3 были значительно снижены в клетках, в которых экспрессия канала KCa2.3 была снижена.
На фиг. 5 показано влияние CBM-N2 - CBM-N5, CBM-N8 и CBM-N9 на TGFβ или PDGF-индуцированную пролиферацию клеток в фибробластах. Когда клетки подвергались воздействию фактора, вызывающего фиброз, такого как TGFβ (5 нг/мл) или PDGF (20 нг/мл) в течение 24 часов, пролиферация фибробластов значительно увеличивалась, а пролиферация клеток значительно снижалась под воздействием CBM-N2 - CBM-N5, CBM-N8 и CBM-N9.
4) Результаты, полученные на мышиных моделях с заболеванием печени
Эти эксперименты были выполнены для определения терапевтических эффектов соединений формул А1-А5 (CBM-N1 - CBM-N5) на мышиных моделях заболевания печени.
4-1) Гистологический или иммуногистологический анализ
На фиг. 6А показаны результаты окрашивания тканей печени Н&Е (гематоксилин-эозином), и часть, представленная пунктирной линией на верхней панели, была увеличена и показана на нижней панели. В труппе с индуцированным заболеванием (ТАА), ТАА-индуцированное воспаление возникает в области около центральной вены (CV), что может быть подтверждено клетками воспаления, имеющими большие ядра, сконцентрированные около CV (стрелки на фиг. 6А). В частности, по сравнению с группой здорового контроля в группе с вызванным заболеванием, количество воспалительных клеток значительно увеличилось, а в труппе, получавшей лекарственное средство (ТАА + CBM-N1), по сравнению с группой с вызванным заболеванием, количество воспалительных клеток значительно уменьшилось.
На фиг. 6В показаны результаты окрашивания маркера воспаления CD82 в ткани печени, в которых не наблюдали клеток, окрашенных в коричневый цвет, в ткани печени здорового контроля (Контроль), что указывает на отсутствие лимфоидных клеток. С другой стороны, в ткани печени группы, в которой заболевание вызвано ТАА (ТАА), между CV было обнаружено много клеток, окрашенных в коричневый цвет. Однако очень небольшое количество клеток, окрашенных в коричневый цвет, было обнаружено в ткани печени (ТАА + CBM-N1 (R) или ТАА + CBM-N1 (S)) в группе, получавшей лекарственное средство, обработанной ТАА и R-изомером или S-изомером CBM-N1.
На фиг. 6С показаны результаты окрашивания трихромом по Массону коллагеновых волокон в тканях печени, причем коллаген был окрашен в синий цвет. Ткань печени в здоровом контроле (контроль) демонстрирует здоровое состояние, в котором фиброз еще не прогрессировал, тогда как ткань печени в группе, вызванной заболеванием (ТАА), окрашена в синий цвет (указана стрелками) рядом с CV или между CV, демонстрируя прогрессирование фиброза. Однако в ткани печени в группе, получавшей лекарственное средство (ТАА + CBM-N1 (R), ТАА + CBM-N1 (S)), которой вводили ТАА и R-изомер или S-изомер CBM-N1, наблюдали очень незначительный фиброз вокруг CV.
На фиг. 6D показаны результаты окрашивания волокон ретикулина в тканях печени, при этом волокна ретикулина были окрашены в черный цвет. Волокна ретикулина не наблюдались в ткани печени из здорового контроля (контроль), тогда как в ткани печени в группе с вызванным заболеванием (ТАА), волокна ретикулина (обозначены стрелками) наблюдались вокруг CV и между CV. Кроме того, в ткани печени (ТАА + CBM-N1 (R) или (ТАА + CBM-N1 (S)) в группе, получавшей лекарственное средство, ТАА и R-изомер или S-изомер CBM-N1, волокна ретикулина очень слабо наблюдались только около CV.
4-2) Проверка функции печени с помощью анализов ALT и AST в крови
На фиг. 7А показаны результаты тестирования функции печени для здорового контроля, группы с вызванным ТАА заболеванием, и групп, которым вводили лекарственное средство, обработанных CBM-N1 - CBM-N5. В здоровом контроле (Контроль), группе с вызванным заболеванием (ТАА), и группах, которым вводили лекарственное средство (ТАА + CBM-N1, ТАА + CBM-N2, ТАА + CBM-N3, ТАА + СВМ-N4 и ТАА + CBM-N5), уровни ALT составляли 41,6±7,9 ед./л, 209,0±42,4 ед./л, 70,3±14,7 ед./л, 113,4±7,9 ед./л, 103,0±6,9 ед./л, 114,1±8,8 ед./л и 106,4±12,8 ед./л соответственно, а уровни AST в крови составляли 60,4±7,5 ед./л, 211,1±22,4 ед./л, 62,7±11,6 ед./л, 83,6±14,8 ед./л, 73,4±7,4 ед./л, 66,6±9,4 ед./л и 67,7±10,2 ед./л, соответственно.
Кроме того, на фиг. 7В показан результат тестирования группы с заболеванием, вызванным западной диетой, и в группе здорового контроля (контроль), группы, в которой заболевание было вызвано западной диетой (WD), и группы, в которой вводили лекарственное средство (WD + CBM-N1), уровни ALT составляли 38,7±9,7 ед./л, 189,8±37,6 ед./л и 87,2±24,7 ед./л, а уровни AST в крови составляли 47,4±18,2 ед./л, 173,5±31,5 ед./л и 71,4±19,8 ед./л соответственно.
Из результатов испытании можно видеть, что дисфункция печени, вызванная ТАА или западной диетой, значительно восстанавливается соединениями формул А1-А5 (50 мг/кг/день).
4-3) ГИДР в реальном времени на маркеры воспаления
На фиг. 8 показаны результаты сравнения экспрессии мРНК воспалительных цитокинов в здоровом контроле, группе с вызванным заболеванием, и группе, в которой вводили лекарственное средство. В качестве маркеров воспаления используется фактор некроза опухоли альфа (TNFα), хемоаттрактантный белок-1 (CCL2), интерлейкин-12 (IL12), трансформирующий фактор роста (TGF), IL1α, IL6 и макрофагальный белок воспаления-2 (MIP-2), которые усиливаются при воспалении. Уровень мРНК фактора воспаления увеличился в группе с вызванным заболеванием (ТАА) по сравнению со здоровым контролем (контроль), и снизился в группе, получавшей CBM-N1 (ТАА + СВМ-N1), по сравнению с группой с вызванным заболеванием (ТАА) (фиг. 8А).
Уровень мРНК фактора воспаления также снизился в группах, получавших СВМ-N2 - CBM-N5 (ТАА + CBM-N2, ТАА + CBM-N3, ТАА + CBM-N4 и ТАА + CBM-N5) по сравнению с группой с вызванным заболеванием (фиг. 8В). Следовательно, можно видеть, что соединения формул А1-А5 снижают экспрессию воспалительного цитокина, тем самым оказывая терапевтический эффект на воспалительное заболевание печени, вызванное ТАА.
Кроме того, на фиг. 8С показаны результаты сравнения экспрессии мРНК воспалительных цитокинов в здоровом контроле (контроль), труппе, в которой заболевание было вызвано западной диетой (WD), и группой, в которой вводили лекарственное средство (WD + CBM-N1). Здесь в качестве воспалительных цитокинов измеряли CCL2, IL6 и IL1α. Уровни экспрессии мРНК этих факторов воспаления увеличивались в группе с вызванным заболеванием по сравнению со здоровым контролем и снижались в труппе, получавшей лекарственное средство, по сравнению с труппой с вызванным заболеванием.
4-4) ПЦР в реальном времени на маркеры фиброза
На фиг. 9 показаны результаты сравнения уровней экспрессии мРНК маркеров фиброза в здоровом контроле, труппе с вызванным заболеванием, и труппе, в которой вводили лекарственное средство. В качестве маркеров фиброза использовали Col1α, Col3α, Col4α, α-SMA и рецептор 2 трансформирующего фактора роста (TGFR2). Маркеры фиброза увеличились в группе с вызванным заболеванием (ТАА), по сравнению со здоровым контролем (контроль), что указывает на прогрессирование фиброза из-за воспаления. Однако было подтверждено, что в группе, получавшей CBM-N1 (ТАА + CBM-N1), уровни этих факторов фиброза снизились.
4-5) Влияние на экспрессию белка маркера воспаления или белков маркера фиброза
На фиг. 10А показано влияние R-изомера и S-изомера CBM-N1 на экспрессию белков маркеров воспаления в мышиных моделях ТАА-опосредованного заболевания печени. По сравнению с контролем (контроль) уровни экспрессии белков TIMP-2 и CCR2 значительно увеличились в ткани печени группы с вызванным заболеванием (ТАА), что указывает на прогрессирование воспаления. Однако в группе, получавшей R-изомер или S-изомер CBM-N1 [ТАА + CBM-N1 (R), ТАА + CBM-N1 (S)], уровни экспрессии белков TIMP-2 и CCR2 снизились, подтверждая, что воспаление было подавлено.
На фиг. 10В показано влияние R-изомера или S-изомера CBM-N1 на экспрессию белков маркеров фиброза в мышиных моделях ТАА-опосредованного заболевания печени. По сравнению со здоровым контролем (контроль) уровни экспрессии белков α-SMA и Col 1 а значительно увеличились в ткани печени группы с вызванным заболеванием (ТАА), что указывает на прогрессирование фиброза. Однако уровни экспрессии белков a-SMA и Col1α значительно снизились в группе, получавшей R-изомер или S-изомер CBM-N1, что подтверждает ингибирование фиброза.
4-6) Влияние на экспрессию белка канала KCa2.3
На фиг. 11 показано влияние R-изомера или S-изомера CBM-N1 на экспрессию белка канала KCa2.3 в мышиных моделях ТАА-опосредованного заболевания печени. По сравнению со здоровым контролем (контроль) уровень экспрессии белка канала KCa2.3 значительно увеличился в ткани печени в группе с вызванным заболеванием (ТАА). Однако уровень экспрессии белка канала KCa2.3 значительно снизился в группе, получавшей R-изомер или S-изомер CBM-N1 Эти результаты показывают, что вызванное ТАА заболевание печени связано с увеличением экспрессии KCa2.3, а терапевтический эффект CBM-N1 связан со снижением экспрессии KCa2.3.
5) Результат эксперимента с CBM-N9 на мышиных моделях заболевания легких
Этот эксперимент был проведен для определения терапевтического эффекта соединения формулы А9 (CBM-N9) по настоящему изобретению на мышиных моделях индуцированного блеомицином заболеванием легких.
5-1) Гистологический или иммуногистологический анализ
На фиг. 12 показаны результаты окрашивания Н&Е в легочной ткани, иммуногистохимии на CD45 (общий антиген лейкоцитов, окрашивание LCA) и окрашивания трихромом Массона на коллаген. Было подтверждено, что степень воспаления и фиброза увеличивалась в группе с вызванным заболеванием (блеомицин) по сравнению со здоровым контролем, и снижалась в группе, получавшей CBM-N9 (блеомицин + CBM-N9), по сравнению с группой с вызванным заболеванием.
5-2) Анализ экспрессии белков маркеров воспаления или фиброза
На фиг. 13А показано влияние CBM-N9 на экспрессию маркеров воспаления на мышиных моделях заболеваний легких. Уровни экспрессии белков маркеров воспаления, таких как TIMP-2 и CCR2, в легочной ткани значительно увеличились в группе с вызванным заболеванием (блеомицин) по сравнению со здоровым контролем (контроль), что привело к прогрессированию воспаления. Уровни экспрессии белков TIMP-2 и CCR2 значительно снизились в группе, получавшей лекарственное средство CBM-N9 (блеомицин + CBM-N9), что подтверждает ингибирование воспаления.
На фиг. 13В показано влияние CBM-N9 на экспрессию белков-маркеров фиброза на мышиных моделях болезни легких. Уровни экспрессии белков маркеров фиброза, таких как α-SMA и Col1α, значительно увеличились в ткани легких группы с вызванным заболеванием (блеомицин) по сравнению со здоровым контролем (контроль), что указывает на прогрессирование фиброза легких. С другой стороны, уровни экспрессии белков TIMP-2 и CCR2 значительно снизились в группе, получавшей лекарственное средство (блеомицин + CBM-N9), подтверждая ингибирование фиброза.
Оценка и выводы
Как видно выше, когда в культуру клеток вводили соединения формул А1-А9 согласно настоящему изобретению in vitro в течение длительного времени (24 часа или 16 недель), эффект ингибирования фиброза проявлялся в снижении экспрессии белка канала KCa2.3. В частности, было подтверждено, что, когда культивируемые звездчатые клетки печени, фибробласты и эндотелиальные клетки сосудов подвергались воздействию соединений формул А1-А9 в течение 24 часов, экспрессия канала KCa2.3 в клеточной мембране ингибировалась, и экспрессия факторов, связанных с фиброзом (α-SMA, Col1α и т.д.), и пролиферация клеток с помощью факторов роста, вызывающих фиброз, подавлялись.
Кроме того, было подтверждено, что соединения формул А1-А9 согласно настоящему изобретению обладают ингибирующим действием на воспаление и фиброз в группе с вызванным заболеванием печени, даже в эксперименте in vivo на мышиных моделях. В частности, в результате введения соединений формул А1-А9 в мышиных моделях заболевания печени или легких в течение 16 недель значительно подавлялись воспаление и фиброз.
Между тем, как раскрыто в патентах Кореи № 10-1345860 и 10-1414831 и соответствующем ему патенте США № 9259412, соединения формул А1-А5 по настоящему изобретению обладают эффектами ингибирования активности канала KCa3.1 за счет фосфорилирования канала KCa3.1, индуцированного цАМФ Однако считается, что подавление активности канала KCa3.1 за счет увеличения цАМФ будет слабо влиять на лечение фиброза.
Настоящее изобретение относится к эффекту, проявляющемуся при воздействии соединений формул А1-А5 в течение короткого времени (в течение нескольких минут), и повышению из-за этих соединений уровня цАМФ, который достигает наивысшего уровня примерно за 20 минут, а затем его резкому снижению, при этом уровень цАМФ становится аналогичным уровню до введения лекарственного средства в течение трех часов (Endocrinology 144 (4): 1292-1300). Таким образом, это связано с тем, что эффект, вызванный цАМФ, проявляется только в течение короткого времени, например, не больше приблизительно одного часа, и, как в случае настоящего изобретения, вряд ли продлится в течение 24 часов или 16 недель.
Кроме того, как подтверждено на фиг. 1А настоящего изобретения, при воздействии фактора, индуцирующего фиброз, PDGF, в течение 24 часов, экспрессия канала KCa2.3 значительно увеличивалась, тогда как экспрессия канала KCa3.1 не увеличивалась. В соответствии с этим результатом можно сделать вывод, что при фиброзном процессе усиление экспрессии каналов KCa2.3 является очень важным условием, и эффект подавления фиброза соединениями формул А1-А9 согласно настоящему изобретению является результатом снижение экспрессии канала KCa2.3.
Между тем в настоящем изобретении из-за практических ограничений описанные выше эксперименты не проводились для всех соединений, принадлежащих к соединениям формулы А. Однако, принимая во внимание химическую активность соединений формулы А и метаболические механизмы in vivo, логично сделать вывод, что все соединения формулы А обладают фармакологическими эффектами, такими же или подобными соединениям формул А1-А9.
Claims (9)
1. Применение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения бензгидрилтиоацетамида, представленного приведенной ниже формулой А, или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента, и обладающей эффектом подавления экспрессии белка канала KCa2.3 в клеточной мембране,
[Формула А]
где в формуле A каждый из X1 ~ X10 независимо представляет собой водород (H) или фтор (F), все из которых могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга; Y представляет собой серу (S) или сульфоксид (S=O), * указывает на хиральное положение; R1 является любым из водорода, метильной группы, гидроксильной группы, фенильной группы и (тетрагидрофуран-2-ил)метила, для лечения фиброзного заболевания, выбранного из фиброза печени или фиброза легких.
2. Применение по п. 1, где в соединении формулы A каждый из X1 ~ X10 независимо представляет собой водород (H) или фтор (F), Y представляет собой серу (S), и R1 представляет собой водород (H).
3. Применение по п. 1, где в соединении формулы A каждый из X1 ~ X10 независимо представляет собой водород (H) или фтор (F), Y представляет собой сульфоксид (S=O), и R1 представляет собой водород (H).
4. Применение по п. 1, где соединение формулы A представляет собой любое соединение, выбранное из группы, состоящей из 2-(бензгидрилсульфинил)ацетамида, 2-(бензгидрилтио)-N-[(тетрагидрофуран-2-ил)метил]ацетамида, 2-(бензгидрилтио)-N-фенилацетамида, 2-(бензгидрилсульфинил)-N-метилацетамида, 2-(бензгидрилсулфинил)-N-[(тетрагидрофуран-2-ил)метил]ацетамида, 2-(бензгидрилтио)-ен-метилацетамида, 2-[бис(2-фторфенил)метансульфинил]ацетамида, 2-[бис(3-фторфенил)метансульфинил]ацетамида и 2-[бис(4-фторфенил)метансульфинил]ацетамида.
5. Применение по п. 1, где соединение формулы A представляет собой 2-(бензгидрилсульфинил)ацетамид (модафинил).
6. Применение по п. 1, где соединение формулы A представляет собой 2-[бис(4-фторфенил)метансульфинил]ацетамид (лауфлумид).
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180110442A KR102126389B1 (ko) | 2018-09-14 | 2018-09-14 | 벤즈히드릴티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR10-2018-0110442 | 2018-09-14 | ||
| PCT/KR2019/011834 WO2020055166A1 (ko) | 2018-09-14 | 2019-09-11 | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 섬유화 질환의 치료용 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2769364C1 true RU2769364C1 (ru) | 2022-03-30 |
Family
ID=69777998
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021105457A RU2769364C1 (ru) | 2018-09-14 | 2019-09-11 | Композиция для лечения фибротических заболеваний, содержащая бензгидрилтиоацетамид в качестве активного компонента |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210260018A1 (ru) |
| EP (1) | EP3851099A4 (ru) |
| JP (1) | JP7184241B2 (ru) |
| KR (1) | KR102126389B1 (ru) |
| CN (1) | CN113038942A (ru) |
| AU (1) | AU2019338896B2 (ru) |
| BR (1) | BR112021004766A2 (ru) |
| CA (1) | CA3112695C (ru) |
| MX (1) | MX2021003002A (ru) |
| RU (1) | RU2769364C1 (ru) |
| WO (1) | WO2020055166A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102277739B1 (ko) * | 2019-12-11 | 2021-07-15 | 셀라이온바이오메드 주식회사 | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 섬유화 질환의 치료용 조성물 |
| KR20230019795A (ko) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | 셀라이온바이오메드 주식회사 | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 비후성 반흔 및 켈로이드 치료용 조성물 |
| WO2023014003A1 (ko) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | 셀라이온바이오메드 주식회사 | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 비후성 반흔 및 켈로이드 치료용 조성물 |
| CN113750089B (zh) * | 2021-10-13 | 2023-09-19 | 南方医科大学南方医院 | 2-芳基-1,3二氢苯并咪唑衍生物在制备治疗慢性肝病的药物中的用途 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA009949B1 (ru) * | 2004-02-06 | 2008-04-28 | Сефалон, Инк. | Композиции модафинила |
| KR20130080364A (ko) * | 2012-01-04 | 2013-07-12 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규한 모다피닐 유도체 및 이를 포함하는 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| US20130295196A1 (en) * | 2011-01-20 | 2013-11-07 | Assistance Publique-Hopitaux De Paris | Lauflumide and the enantiomers thereof, method for preparing same and therapeutic uses thereof |
| WO2014138518A2 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-12 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Potent and selective inhibitors of monoamine transporters; method of making; and use thereof |
| US20140296333A1 (en) * | 2011-10-25 | 2014-10-02 | Ewha University-Industry Collaboration Foundation | COMPOSITION OF THE TREATMENT OF VASCULAR DISEASES OR KCa3.1 CHANNEL-MEDIATED DISEASES COMPRISING MODAFINIL OR DERIVATIVES THEREOF |
| EA201591775A1 (ru) * | 2013-03-15 | 2016-05-31 | Прометик Биосайнсиз Инк. | Замещенные ароматические соединения и связанный с ними способ лечения фиброза |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1520812A (en) | 1975-10-02 | 1978-08-09 | Lafon Labor | Benzhydrylsulphinyl derivatives |
| GB1584462A (en) | 1977-03-31 | 1981-02-11 | Lafon Labor | N-diaryl-malonamide and diarylmethyl-sulphinyl-acetamide derivatives and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2528038B2 (fr) * | 1982-06-04 | 1985-08-09 | Lafon Labor | Derives de benzhydrylsulfinylacetamide et leur utilisation en therapeutique |
| FR2593809B1 (fr) | 1986-01-31 | 1988-07-22 | Lafon Labor | Benzhydrylsulfinylacetamide, procede de preparation et utilisation en therapeutique |
| FR2606015B1 (fr) * | 1986-08-13 | 1989-05-19 | Lafon Labor | Derives du benzhydrylthiomethane, leurs procedes de preparation et leurs applications en therapeutique |
| FR2708201B1 (fr) * | 1993-06-30 | 1995-10-20 | Lafon Labor | Utilisation de dérivés d'acétamide pour la fabrication de médicaments. |
| CA2280309C (en) | 1999-08-13 | 2007-05-08 | William Norton Milgram | Use of adrafinil to treat behavioral problems in aged canines |
| US6870361B2 (en) | 2002-12-21 | 2005-03-22 | Agilent Technologies, Inc. | System with nano-scale conductor and nano-opening |
| JP4804922B2 (ja) | 2003-08-12 | 2011-11-02 | 三井化学株式会社 | 光硬化型樹脂組成物及びそれを用いたフラットパネルディスプレイ用シール剤 |
| KR101414831B1 (ko) * | 2011-10-25 | 2014-07-04 | 이화여자대학교 산학협력단 | 모다피닐 또는 이의 유도체를 포함하는 ＫＣａ3.1 채널 매개 질환 치료용 조성물 |
| ES2566430B1 (es) * | 2014-09-12 | 2017-01-26 | Instituto Aragones De Ciencias De La Salud | Esteres de di-benzoato y su uso terapéutico como moduladores negativos de canales de potasio KCa2/3 |
-
2018
- 2018-09-14 KR KR1020180110442A patent/KR102126389B1/ko active IP Right Grant
-
2019
- 2019-09-11 JP JP2021512409A patent/JP7184241B2/ja active Active
- 2019-09-11 RU RU2021105457A patent/RU2769364C1/ru active
- 2019-09-11 BR BR112021004766-2A patent/BR112021004766A2/pt unknown
- 2019-09-11 CA CA3112695A patent/CA3112695C/en active Active
- 2019-09-11 US US16/964,752 patent/US20210260018A1/en active Pending
- 2019-09-11 MX MX2021003002A patent/MX2021003002A/es unknown
- 2019-09-11 WO PCT/KR2019/011834 patent/WO2020055166A1/ko unknown
- 2019-09-11 EP EP19860298.9A patent/EP3851099A4/en active Pending
- 2019-09-11 CN CN201980059294.6A patent/CN113038942A/zh active Pending
- 2019-09-11 AU AU2019338896A patent/AU2019338896B2/en active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA009949B1 (ru) * | 2004-02-06 | 2008-04-28 | Сефалон, Инк. | Композиции модафинила |
| US20130295196A1 (en) * | 2011-01-20 | 2013-11-07 | Assistance Publique-Hopitaux De Paris | Lauflumide and the enantiomers thereof, method for preparing same and therapeutic uses thereof |
| US20140296333A1 (en) * | 2011-10-25 | 2014-10-02 | Ewha University-Industry Collaboration Foundation | COMPOSITION OF THE TREATMENT OF VASCULAR DISEASES OR KCa3.1 CHANNEL-MEDIATED DISEASES COMPRISING MODAFINIL OR DERIVATIVES THEREOF |
| KR20130080364A (ko) * | 2012-01-04 | 2013-07-12 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규한 모다피닐 유도체 및 이를 포함하는 염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| WO2014138518A2 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-12 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Potent and selective inhibitors of monoamine transporters; method of making; and use thereof |
| EA201591775A1 (ru) * | 2013-03-15 | 2016-05-31 | Прометик Биосайнсиз Инк. | Замещенные ароматические соединения и связанный с ними способ лечения фиброза |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3851099A4 (en) | 2023-03-08 |
| CN113038942A (zh) | 2021-06-25 |
| KR20200031436A (ko) | 2020-03-24 |
| WO2020055166A1 (ko) | 2020-03-19 |
| CA3112695C (en) | 2023-10-10 |
| AU2019338896B2 (en) | 2022-10-20 |
| JP7184241B2 (ja) | 2022-12-06 |
| CA3112695A1 (en) | 2020-03-19 |
| KR102126389B1 (ko) | 2020-06-25 |
| AU2019338896A1 (en) | 2021-04-08 |
| BR112021004766A2 (pt) | 2021-08-31 |
| EP3851099A1 (en) | 2021-07-21 |
| US20210260018A1 (en) | 2021-08-26 |
| MX2021003002A (es) | 2021-05-27 |
| JP2021536459A (ja) | 2021-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2769364C1 (ru) | Композиция для лечения фибротических заболеваний, содержащая бензгидрилтиоацетамид в качестве активного компонента | |
| US8609736B2 (en) | Telomerase activating compounds and methods of use thereof | |
| KR102277739B1 (ko) | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 섬유화 질환의 치료용 조성물 | |
| US11247970B2 (en) | Selective inhibition of gluconeogenic activity | |
| JP2006510676A (ja) | ＮＦ−κＢ阻害剤 | |
| EP3685838A1 (en) | Compound for treatment or prevention of obesity or diseases related to obesity, and application thereof | |
| US11202783B2 (en) | Use of aminoalkylbenzothiazepine derivatives | |
| JP2019513762A (ja) | 胆汁うっ滞及び線維症の処置方法 | |
| RU2378254C2 (ru) | Замещенное циклическое соединение, способ его получения и его лекарственное применение | |
| JP2022537146A (ja) | Ｓｗｅｌｌ１－ｌｒｒｃ８複合体調節物質 | |
| JP2005526768A (ja) | 炎症関連遺伝子を調節するデキサナビノール及びデキサナビノール類似体 | |
| KR20210065684A (ko) | 신규 화합물 | |
| CN112218635A (zh) | 用于保护心肌细胞的药物组合物 | |
| Ha et al. | EW-7197 Attenuates the Progression of Diabetic Nephropathy in db/db Mice through Suppression of Fibrogenesis and Inflammation | |
| JP2014532688A (ja) | ｐ３８を阻害するための薬物およびそれらの用途 | |
| KR20160097165A (ko) | 베이지 및 갈색 지방세포 분화 유도용 조성물 및 이의 방법 | |
| RU2768828C1 (ru) | Новое фармацевтическое применение соединений тиено[3,2-d]пиримидин-4-она | |
| KR100903974B1 (ko) | 2,4,5-삼중치환-1,3-티아졸 유도체 및 약제학적으로 허용가능한 그의 염, 그의 제조방법 및 그를 유효성분으로함유하는 ｓｐｃ 수용체 활성으로 유발되는 염증관련 질환치료제 | |
| US20230255921A1 (en) | Composition for treating kca3.1 channel-mediated diseases comprising phenylalkyl carbamate compound | |
| RU2802259C2 (ru) | Ингибитор сборки капсидного белка, содержащий n-гетероциклическое пятичленное кольцо, его фармацевтическая композиция и применение | |
| WO2023244619A2 (en) | Flavonoid compounds and methods and materials for using flavonoid compounds to treat fibrotic conditions | |
| WO2023051805A1 (zh) | 卤代氧化苯砷化合物及其应用 | |
| WO2023162872A1 (ja) | 抗がん剤及び抗がん剤のスクリーニング方法 | |
| CN116554144A (zh) | 一种sj系列芳基苯胺类化合物及其制备方法与医药用途 | |
| TW201943716A (zh) | 吳茱萸次鹼類似物及其應用 |