RU2761640C2 - Антитела к pd-1 и их применение - Google Patents

Антитела к pd-1 и их применение Download PDF

Info

Publication number
RU2761640C2
RU2761640C2 RU2019116653A RU2019116653A RU2761640C2 RU 2761640 C2 RU2761640 C2 RU 2761640C2 RU 2019116653 A RU2019116653 A RU 2019116653A RU 2019116653 A RU2019116653 A RU 2019116653A RU 2761640 C2 RU2761640 C2 RU 2761640C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
antibody
cancer
Prior art date
Application number
RU2019116653A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019116653A3 (ru
RU2019116653A (ru
Inventor
Джордж Роберт 3 МЭБРИ
Стивен САЗИНСКИ
Original Assignee
Джоунс Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джоунс Терапьютикс, Инк. filed Critical Джоунс Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2019116653A publication Critical patent/RU2019116653A/ru
Publication of RU2019116653A3 publication Critical patent/RU2019116653A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2761640C2 publication Critical patent/RU2761640C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты антитела, связывающиеся с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1). Также предложены нуклеиновая кислота, экспрессионный вектор и клетка-хозяин, используемые в способе получения анти-PD-1 антитела по изобретению. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции и применению антител по изобретению для получения лекарственного средства. Антитела используются в способах лечения млекопитающих. Например, антитела можно использовать для лечения рака, усиления иммунного ответа, увеличения активации Т-клетки, уменьшения размера опухоли или повышения у млекопитающего уровня цитокинов IFNγ и IL-2. 15 н. и 82 з.п. ф-лы, 9 ил., 4 табл., 7 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] В заявке испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 62/416,602, поданной 2 ноября 2016 года, которая включена посредством ссылки во всей ее полноте с любой целью.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1). Также предлагаются способы лечения, включающие введение анти-PD-1 антител.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Белок запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1) является ингибирующим членом семейства рецепторов CD28, которое также включает CD28, CTLA-4, ICOS и BTLA. PD-1 экспрессируется на поверхности активированных В-клеток, Т-клеток и миелоидных клеток. PD-1 содержит мембранопроксимальный иммунорецепторный ингибирующий мотив на основе тирозина (ITIM) и мембранодистальный мотив переключения на основе тирозина (ITSM). PD-1, хотя и является структурно сходным с CTLA-4, лишен мотива MYPPY, который является критическим для связывания В7-1 и В7-2. Кроме того, хотя CD28, ICOS и CTLA-4 (другие члены семейства CD28) все имеют неспаренный остаток цистеина, дающий возможность гомодимеризации, предполагается, что PD-1 существует в виде мономера, не имея неспаренного остатка цистеина, характерного для других членов семейства CD28. Рецептор PD-1 имеет два лиганда, PD-лиганд-1 (PD-L1) и PD-L2. Термин «PD-L1» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD274 и B7H1. PD-L1 представляет собой белок из 290 аминокислот с внеклеточным IgV-подобным доменом, внеклеточным IgC-подобным доменом, трансмембранным доменом и высококонсервативным внутриклеточным доменом из приблизительно 30 аминокислот. PD-L1 конститутивно экспрессируется на многих клетках, например антигенпрезентирующих клетках (например, дендритных клетках, макрофагах и В-клетках), а также на гемопоэтических и негемопоэтических клетках (например, эндотелиальных клетках сосудов, островках Лангерганса и иммунологически привилегированных областях). Термин «PD-L2» относится к лиганду рецептора PD-1, также известному как CD273 и B7-DC. У людей PD-L2 имеет внеклеточный IgV-подобный домен, внеклеточный IgC-подобный домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен из приблизительно 30 аминокислот. PD-L2 имеет более ограниченную экспрессию, чем PD-L1, с его экспрессией в значительной степени ограниченной гемопоэтическими клетками, включая макрофаги, дендритные клетки, некоторые субпопуляции В-клеток и тучные клетки костного мозга.
[0004] PD-1 функционирует как иммунная контрольная точка и предотвращает активацию Т-клеток. Антагонисты PD-1 активируют иммунную систему для атаки опухолей и продемонстрировали успех в лечении рака, а в некоторых случаях и с меньшей токсичностью, чем другие химиотерапевтические лекарственные средства. Антагонисты PD-1 могут также использоваться в схемах лечения в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами. Одобренные в настоящее время антагонисты PD-1 включают анти-PD-1 антитела, Opdivo® и Keytruda®, и анти-PD-1 антитело, Tecentriq™.
[0005] Сохраняется необходимость в дополнительных антагонистах PD-1 для лечения рака и других заболеваний и расстройств.
Сущность изобретения
[0006] Предлагаются антитела, которые связываются с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитела связываются с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитела блокируют связывание PD-L1 и/или PD-L2 с PD-1.
[0007] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело связывается с эпитопом, содержащим аминокислоты с 126 по 136 PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления аминокислоты с 126 по 136 пронумерованы в соответствии с SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с PD-1 человека с SEQ ID NO: 382 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с одним или более вариантами PD-1, выбранными из I126A, L128A, A132L, I134A и E136A.
[0008] В некоторых вариантах осуществления антитело:
a) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I126A ECD-Fc (SEQ ID NO: 389); и/или
b) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 L128A ECD-Fc (SEQ ID NO: 390); и/или
c) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 A132L ECD-Fc (SEQ ID NO: 391); и/или
d) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 I134A ECD-Fc (SEQ ID NO: 392); и/или
e) связывается с ECD-Fc PD-1 человека с SEQ ID NO: 401 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с вариантом PD-1 E136A ECD-Fc (SEQ ID NO: 393).
[0009] В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc PD-1 мыши с SEQ ID NO: 403 с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 мыши H129P ECD-Fc (SEQ ID NO: 394). В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с ECD-Fc варианта PD-1 крысы P129H (SEQ ID NO: 397) с по меньшей мере в 10 раз большей аффинностью, чем данное антитело связывается с PD-1 крысы ECD-Fc (SEQ ID NO: 405).
[0010] В различных вариантах осуществления аффинность определяется биослойной интерферометрией.
[0011] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи (VL), которая идентична на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
[0012] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; или
ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; или
iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27; или
iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35; или
v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; или
vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123; или
vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291; или
viii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[0013] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем:
i) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8; или
ii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16; или
iii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; или
iv) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32; или
v) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40; или
vi) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108 и 116; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112 и 120; или
vii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, и 284; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280 и 288; или
viii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 292, 300, 308 и 316; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 296, 304, 312 и 320.
[0014] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывает PD-1, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем:
i) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или
ii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; или
iii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; или
iv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; или
v) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40; или
vi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или
vii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56; или
viii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; или
ix) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72; или
x) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80; или
xi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88; или
xii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96; или
xiii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; или
xiv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112; или
xv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120; или
xvi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128; или
xvii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136; или
xviii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144; или
xix) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152; или
xx) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160; или
xxi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168; или
xxii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176; или
xxiii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184; или
xxiv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192; или
xxv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200; или
xxvi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208; или
xxvii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216; или
xxviii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 224; или
xxix) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 228 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 232; или
xxx) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 240; или
xxxi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 248; или
xxxii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 252 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256; или
xxxiii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 260 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264; или
xxxiv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 272; или
xxxv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 280; или
xxxvi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 288; или
xxxvii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 292 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296; или
xxxviii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 300 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 304; или
xxxix) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 308 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 312; или
xl) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 316 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 320.
[0015] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое конкурирует с антителом, представленным в настоящем документе, за связывание с PD-1 человека, причем антитело связывается с PD-1 человека и PD-1 мыши, и при этом антитело ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L1 человека, ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L2 человека, ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L1 мыши и ингибирует связывание PD-1 мыши с PD-L2 мыши.
[0016] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 человека с аффинностью (KD) менее чем 5 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывается с PD-1 мыши с аффинностью (KD) менее чем 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления аффинность определяют с использованием биослойной интерферометрии.
[0017] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело человека, химерное антитело или гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой фрагмент антитела, выбранный из фрагмента Fab, Fab', Fv, scFv или (Fab')2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, представляет собой антитело IgG1 или IgG4.
[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления PD-1 человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 382. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 мыши. В некоторых вариантах осуществления PD-1 мыши содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 383. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, связывает PD-1 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления PD-1 яванского макака содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384.
[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L2.
[0020] В некоторых вариантах осуществления введение антитела, представленного в настоящем документе, млекопитающему повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2. В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящем документе, повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 по меньшей мере в 2 раза. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень хемокина измеряется через 24 часа после введения антитела.
[0021] В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, приводит к активации Т-клеток у млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе, уменьшает размер опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0022] В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается вектор, который содержит нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая содержит вектор. В некоторых вариантах осуществления предлагается клетка-хозяин, которая продуцирует антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается способ получения анти-PD-1 антитела, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, подходящих для экспрессии антитела. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает выделение антитела, продуцируемого клеткой-хозяином.
[0023] В некоторых вариантах осуществления предложена фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0024] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0025] В некоторых вариантах осуществления предложен способ усиления иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0026] В некоторых вариантах осуществления предложен способ увеличения активации Т-клетки у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, предоставленного в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0027] В некоторых вариантах осуществления предложен способ уменьшения размера опухоли у млекопитающего с раковым заболеванием, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0028] В любом из представленных в настоящем документе вариантов осуществления млекопитающее может быть человеком.
[0029] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых таких вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0030] В некоторых вариантах осуществления предлагается использование антитела, представленного в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство предназначено для введения с по меньшей мере одним дополнительным лекарственным средством. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0031] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0032] В некоторых вариантах осуществления в настоящем раскрытии для лечения рака предлагается применение антитела, представленного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, представленное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, и по меньшей мере одного дополнительного лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS-антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0033] В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, предоставленное в настоящем документе, или фармацевтическая композиция, содержащая антитело, представленное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель для применения при лечении рака. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0034] В некоторых вариантах осуществления предлагается способ повышения уровня по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2 у млекопитающего, включающий введение млекопитающему антитела, представленного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2. В некоторых вариантах осуществления уровень цитокина измеряется через 24 после введения антитела. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления человек болен раком. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
[0035] В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ усиливается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления активация Т-клеток увеличивается после введения анти-PD-1 антитела. В некоторых вариантах осуществления размер опухоли уменьшается после введения анти-PD-1 антитела.
[0036] В некоторых вариантах осуществления млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1 антителом. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой анти-ICOS антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противораковую вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, вакцины против опухолевых клеток, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
[0037] В некоторых вариантах осуществления образец рака, полученный от млекопитающего, был определен как экспрессирующий PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец демонстрирует 1+, 2+ или 3+ окрашивание PD-1 иммуногистохимическим (ИГХ) анализом. В некоторых вариантах осуществления было определено, что образец имеет повышенный уровень PD-L1. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 определяют с использованием ИГХ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0038] На фиг. 1 проиллюстрированы концентрации IFNγ после того, как спленоцитарные Т-клетки мыши, активированные анти-CD3 и анти-CD28-антителами, приводили в контакт с анти-PD-1-антителами. IgG1 мыши и IgG2a крысы использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD-1-антитела.
[0039] На фиг. 2 проиллюстрирована EC50 увеличения IL-2 в образцах цельной крови, активированных стафилококковым энтеротоксином B (СЭВ) после инкубации с анти-PD1 антителами. Ниволумаб (Ниво) и пембролизумаб (Пембро) использовали в качестве контрольных анти-PD1 антител. Проиллюстрированы эффекты антител 12228 (28), 13406 (6), 13407 (7), 13408 (8) и 13409 (9).
[0040] На фиг. 3А-3В проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание мышиных лигандов с PD-1 мыши. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-L2 мыши с PD-1 мыши был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.
[0041] На фиг. 4A-1, 4A-2, 4B-1, 4B-2 и 4C проиллюстрирована способность анти-PD-1-антител, раскрытых в настоящем документе, блокировать связывание лигандов человека с PD-1 человека. Для оценки влияния антител на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека был использован анализ Octet на приборе Forte-Bio.
[0042] На фиг. 5 показано уменьшение размеров опухолей на мышиной модели опухоли при введении анти-PD-1-антитела, раскрытого в настоящем документе. Мышам C57BL6/J подкожно в бок инъецировали клетки MC38. IgG1 мыши (MOPC-21) и IgG2a крысы (2A3) использовали в качестве контролей. RMP1-14 использовали в качестве положительного контроля анти-PD1-антитела.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НЕКОТОРЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0043] Предлагаются антитела, которые связывают PD-1. Также предлагаются тяжелые цепи и легкие цепи антител, которые способны образовывать антитела, связывающие PD-1. Кроме того, предлагаются антитела, тяжелые цепи и легкие цепи, содержащие одну или более конкретных определяющих комплементарность областей (CDR). Предлагаются полинуклеотиды, кодирующие антитела к PD-1. Также предлагаются полинуклеотиды, кодирующие тяжелые цепи или легкие цепи антител. Предлагаются способы получения и/или очистки антител к PD-1. Предлагаются способы лечения с использованием антител к PD-1. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, способы лечения рака. Предлагаются способы обнаружения PD-1. Такие способы включают способы идентификации индивидуума, которому может получать пользу от лечения анти-PD-1 антителом, мониторинга лечения индивидуума анти-PD-1 антителом и улучшения терапевтической эффективности анти-PD-1 антитела у индивидуума.
[0044] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие предмет изобретения.
[0045] Все ссылки, цитируемые в настоящем документе, включая патентные заявки, патентные публикации и учетные номера базы данных Genbank, включены в настоящий документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки во всей ее полноте.
[0046] Описанные способы и процедуры, или на которые в настоящем документе делается ссылка, как правило, широко распространены и обычно используются с использованием обычной методологии специалистами в данной области техники, например широко используемые методологии, описанные в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); серия METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames и G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow и D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti и J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); и Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993); и их обновленные версии.
I. Определения
[0047] Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим описанием, имеют значения, которые традиционно подразумеваются средними специалистами в данной области техники. Кроме того, если контекст не требует иного или контекстом явно не указано, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. В случае любого противоречия в определениях между различными источниками или ссылками, будет главенствующим определение, представленное в данном документе.
[0048] Понятно, что варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, включают «состоящий» и/или «состоящие по существу из» вариантов осуществления. В контексте данного документа слова в единственном числе означают также и множественное число, если не указано иное. Применение термина «или» в данном документе не означает представления, что альтернативные варианты являются взаимоисключающими.
[0049] В данной заявке использование «или» означает «и/или», если это особо не оговорено или подразумевается специалистом в данной области техники. В контексте пункта патентной формулы, зависящего от другого зависимого пункта, использование «или» относится к более чем одному предшествующему независимому или зависимому пункту.
[0050] Как понятно специалисту в данной области техники, упоминание «около» со значением или параметром в данном документе включает (и описывает) варианты осуществления, относятся к этому значению или параметру, как таковые. Например, описание, относящееся к «около X», включает описание «X».
[0051] Термины «молекула нуклеиновой кислоты», «нуклеиновая кислота» и «полинуклеотид» могут использоваться взаимозаменяемо и относятся к полимеру нуклеотидов. Такие полимеры нуклеотидов могут включать природные и/или искусственные нуклеотиды и включать в себя, но не ограничиваться ими, ДНК, РНК и ПНК. «Нуклеотидная последовательность» относится к линейной последовательности нуклеотидов, которые включают в себя молекулу нуклеиновой кислоты или полинуклеотид.
[0052] Термины «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислотных остатков и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры аминокислотных остатков могут содержать природные или искусственные аминокислотные остатки и включают в себя, но не ограничиваются ими, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. В определение включены как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Термины также включают пост-экспрессионные модификации полипептида, например гликозилирование, сиалирование, ацетилирование, фосфорилирование и тому подобное. Кроме того, для целей настоящего изобретения термин «полипептид» относится к белку, который включает в себя модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по природе), в нативной последовательности, при условии, что белок поддерживает желаемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например путем сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например в результате мутаций хозяев, которые продуцируют белки, или ошибок вследствие ПЦР-амплификации.
[0053] «PD-1» и «белок запрограммированной смерти клетки 1», в контексте настоящего описания, относятся к любому нативному PD-1, который является результатом экспрессии и процессинга PD-1 в клетке. Термин включает PD-1 из любого источника позвоночных, включая млекопитающих, например приматы (например, люди и яванские макаки) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное. Термин также включает встречающиеся в природе варианты PD-1, например сплайс-варианты или аллельные варианты. Аминокислотная последовательность типичного белка-предшественника PD-1 человека (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) показана в SEQ ID NO: 1. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 человека приведена в SEQ ID NO: 382. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 мыши (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 2. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 мыши приведена в SEQ ID NO: 383. Аминокислотная последовательность типового белка-предшественника PD-1 яванского макака (с сигнальной последовательностью, аминокислоты 1-20) приведена в SEQ ID NO: 3. Аминокислотная последовательность типового зрелого PD-1 яванского макака приведена в SEQ ID NO: 384.
[0054] Термин «специфически связывается» с антигеном или эпитопом является термином, который хорошо известен в данной области техники, и способы определения такого специфического связывания также хорошо известны в данной области техники. Термин применим, когда говорят, что молекула проявляет «специфическое связывание» или «преимущественное связывание», если она реагирует или ассоциируется чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфически связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом PD-1, представляет собой антитело, которое связывает этот эпитоп с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами PD-1 или эпитопами не-PD-1. Понятно также, что после прочтения этого определения, например, антитело (или фрагмент или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может или не может специфически или предпочтительно связываться со второй мишенью. В частности, термин «специфическое связывание» или «предпочтительное связывание» не обязательно включает (хотя может включать) исключительное связывание. В большинстве случаев, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание. Термин «специфичность» относится к способности связывающего белка селективно связывать антиген.
[0055] Термин «по существу чистый», в контексте настоящего документа, относится к веществу, которое по меньшей мере на 50% является чистым (то есть не содержит загрязнений), более предпочтительно по меньшей мере на 90% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% является чистым, еще более предпочтительно по меньшей мере на 98% является чистым и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 99% является чистым.
[0056] Термин «эпитоп», в контексте настоящего документа, относится к сайту на целевой молекуле (например, антигене, таком как белок, нуклеиновой кислоте, углеводе или липиде), с которым связывается антигенсвязывающая молекула (например, антитело, фрагмент антитела или каркасный белок, содержащий области связывания антител). Эпитопы часто включают в себя химически активную поверхностную группировку молекул, например боковые цепи аминокислот, полипептидов или углеводов, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также характеристики удельного заряда. Эпитопы могут быть образованы как из смежных, так и/или расположенных рядом несмежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента) целевой молекулы. Эпитопы, образованные из смежных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента), обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичным складыванием, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп может включать, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере 3, по меньшей мере 5 или 8-10 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов). В некоторых примерах эпитоп имеет в длину менее чем 20 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов), менее чем 15 остатков или менее чем 12 остатков. Два антитела могут связывать один и тот же эпитоп в антигене, если они демонстрируют конкурентное связывание с антигеном. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по определенному минимальному расстоянию до остатка CDR на антигенсвязывающей молекуле. В некоторых вариантах осуществления эпитоп может быть идентифицирован по указанному выше расстоянию и дополнительно ограничен теми остатками, которые вовлечены в образование связи (например, водородной связи) между остатком антитела и остатком антигена. Эпитоп также может быть идентифицирован с помощью различных сканирований, например сканирование аланином или аргинином может указывать на один или более остатков, с которыми может взаимодействовать антигенсвязывающая молекула. Если явно не обозначено, набор остатков в качестве эпитопа не исключает других остатков из того, чтобы быть частью эпитопа для конкретного антитела. Скорее присутствие такого набора обозначает минимальный ряд (или набор видов) эпитопов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления набор остатков, идентифицированных как эпитоп, обозначает минимальный эпитоп релевантности для антигена, а не исключительный список остатков для эпитопа на антигене.
[0057] «Нелинейный эпитоп» или «конформационный эпитоп» содержит несмежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из остатков будет несмежным с другими отмеченными остатками эпитопа; однако, один или более остатков также могут быть смежными с другими остатками.
[0058] «Линейный эпитоп» содержит смежные полипептиды, аминокислоты и/или сахара в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфическое к эпитопу. Следует отметить, что в некоторых вариантах осуществления не каждый из остатков в пределах линейного эпитопа должен быть непосредственно связан (или вовлечен в связь) с антителом. В некоторых вариантах осуществления линейные эпитопы могут возникать вследствие иммунизаций пептидом, который эффективно состоит из последовательности линейного эпитопа, или из структурных участков белка, которые относительно отделены от остальной части белка (так что антитело может взаимодействовать по меньшей мере преимущественно), только с этой секцией последовательности.
[0059] Термин «антитело» в данном документе используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифичные (например, привлекающие T-клетки биспецифические активаторы) и триспецифичные антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют желаемую антигенсвязывающую активность.
[0060] Термин антитело включает, но не ограничивается ими, фрагменты, которые способны связываться с антигеном, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab', ди-scFv, sdAb (однодоменное антитело) и (Fab')2 (включая химически связанный F(ab')2). При расщеплении антител папаином образуются два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых «Fab»-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий участок, и остаточный «Fc»-фрагмент, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает фрагмент F(ab')2, который имеет два антигенсвязывающих участка и все еще способен к перекрестному связыванию антигена. Термин антитело также включает, но не ограничивается ими, химерные антитела, гуманизированные антитела и антитела различных видов, таких как мышь, человек, яванский макак и т.д. Кроме того, для всех конструкций антител, представленных в настоящем документе, также рассматриваются варианты, имеющие последовательности, полученные от других организмов. Таким образом, если раскрыта версия антитела человека, специалист в данной области поймет, как преобразовать антитело на основе человеческой последовательности в последовательность мыши, крысы, кошки, собаки, лошади и т.д. Фрагменты антител также включают либо ориентацию одноцепочечного scFv, тандемного ди-scFv, диател, тандемного три-sdcFv, минител и т.д. Фрагменты антител также включают нанотела (sdAb, антитело, имеющее один мономерный домен, такой как пара вариабельных доменов тяжелых цепей без легкой цепи). Фрагмент антитела может относиться к специфическим видам в некоторых вариантах осуществления (например, scFv человека или scFv мыши), что обозначает последовательности по меньшей мере части областей, не относящихся к CDR, а не источника конструкции.
[0061] Термин «моноклональное антитело» относится к антителу по существу гомогенной популяции антител, то есть составляющие популяцию отдельные антитела, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают в себя разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, образец моноклонального антитела может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела, получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495, или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК, например, описанными в патенте США № 4816567. Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, полученных с использованием методик, описанных, например, в McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554.
[0062] Термин «CDR» обозначает определяющую комплементарность область, как определено по меньшей мере одним способом идентификации для специалиста в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления CDR могут быть определены в соответствии с любой из номенклатур Чотиа, Кабата, комбинации номенклатур Кабата и Чотиа, определения AbM, определения контакта и/или комбинации определений Кабата, Чотиа, AbM и/или контактной области. Иллюстративные CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) встречаются в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 31-35В Н1, 50-65 Н2 и 95-102 Н3. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Определение AbM может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, H26-H35B H1, 50-58 H2 и 95-102 H3. Определение контакта может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 30-36 L1, 46-55 L2, 89-96 L3, 30-35 H1, 47-58 H2 и 93-101 H3. Определение Чотиа может включать, например, CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) в аминокислотных остатках 24-34 L1, 50-56 L2, 89-97 L3, 26-32…34 H1, 52-56 H2 и 95-102 H3. CDR также могут быть предоставлены в том виде, как показано на одной или более сопровождающих фигурах. За исключением CDR1 в VH, CDR обычно содержат аминокислотные остатки, которые образуют гипервариабельные петли. Различные CDR в пределах антитела могут быть обозначены их соответствующим числом и типом цепи, включая, без ограничения, следующие: a) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3; b) CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 и CDRH3; c) LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3, HCDR-1, HCDR-2 и HCDR-3; или d) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 и HCDR3; т.д. Термин «CDR» используется в данном документе также с целью охватывать HVR или «гипервариабельную область», включая гипервариабельные петли. Типовые гипервариабельные петли встречаются у аминокислотных остатков 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3). (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987).)
[0063] Термин «вариабельная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три CDR тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи содержит по меньшей мере HCDR1 тяжелой цепи, (FR) 2 каркаса, HCDR2, FR3 и HCDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.
[0064] Термин «константная область тяжелой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три константных домена тяжелой цепи, CH1, CH2 и CH3. Конечно, неизменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область тяжелой цепи», если не указано иное. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи включают γ, δ и α. Неограничивающие типовые константные области тяжелой цепи также включают ε и μ. Каждая тяжелая константная область соответствует изотипу антитела. Например, антитело, содержащее константную область γ, представляет собой антитело IgG, антитело, содержащее константную область δ, представляет собой антитело IgD и антитело, содержащее константную область α, представляет собой антитело IgA. Кроме того, антитело, содержащее константную область μ, представляет собой антитело IgM, и антитело, содержащее константную область ε, представляет собой антитело IgE. Определенные изотипы могут быть далее подразделены на подклассы. Например, антитела IgG включают, но не ограничиваются ими, антитела IgG1 (содержащие константную область γ1), IgG2 (содержащие константную область γ2), IgG3 (содержащие константную область γ3) и IgG4 (содержащие константную область γ4); антитела IgA включают, но не ограничиваются ими, антитела IgA1 (содержащие константную область α1) и антитела IgA2 (содержащие константную область α2); и антитела IgM включают, но не ограничиваются ими, IgM1 и IgM2.
[0065] Термин «тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь содержит по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи. Термин «полноразмерная тяжелая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.
[0066] Термин «вариабельная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей по меньшей мере три легких цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит три CDR и по меньшей мере FR2 и FR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи содержит по меньшей мере легкую цепь LCDR1, каркас (FR) 2, LCDR2, FR3 и LCDR3. Например, вариабельная область легкой цепи может содержать легкую цепь CDR1, каркас (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4.
[0067] Термин «константная область легкой цепи», в контексте настоящего документа, относится к области, содержащей константный домен легкой цепи CL. Неограничивающие типовые константные области легкой цепи включают λ и κ. Конечно, не изменяющие функции делеции и изменения в пределах доменов включены в объем термина «константная область легкой цепи», если не указано иное.
[0068] Термин «легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь содержит по меньшей мере часть константной области легкой цепи. Термин «полноразмерная легкая цепь», в контексте настоящего документа, относится к полипептиду, содержащему вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее.
[0069] «Акцепторный человеческий каркас» для целей настоящего изобретения представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркас вариабельного домена тяжелой цепи (VH), полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, как определено ниже. Акцепторный человеческий каркас, полученный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусного человеческого каркаса, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать изменения аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления число замен аминокислот составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых вариантах осуществления акцепторный человеческий каркас VL идентичен по последовательности каркасной последовательности иммуноглобулина человека VL или консенсусной каркасной последовательности человека.
[0070] «Аффинность» относится к силе общей суммы нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антителом) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y обычно может быть представлена константой диссоциации (KD). Аффинность может быть измерена общепринятыми способами, известными в данной области техники (такими как, например, ELISA KD, KinExA, интерферометрией биослоя (BLI) и/или устройства поверхностного плазмонного резонанса (например, устройство BIAcore®), включая те, которые описаны в настоящем документе).
[0071] Термин «KD», в контексте настоящего документа, относится к константе равновесной диссоциации взаимодействия антитело-антиген.
[0072] В некоторых вариантах осуществления «KD», «Kd», «Kd» или «значение Kd» антитела измеряется с использованием анализов поверхностного плазмонного резонанса с использованием BIACORE®-2000 или BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США) при 25°С с чипами CM5 с иммобилизованными антигенами при ~10 единицах ответа (response units - RU). Вкратце, биосенсорные чипы с карбоксиметилированным декстраном (CM5, BIACORE, Inc.) активируют гидрохлоридом N-этил-N’-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ ацетатом натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/минуту, чтобы получить приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После инъекции антигена вводят 1 М этаноламин для блокировки непрореагировавших групп. Для измерения кинетики серийные разведения полипептида, например полноразмерного антитела, вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активным веществом TWEEN-20™ (PBST) при 25°C при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (kon) и скорости диссоциации (koff) рассчитываются с использованием простой мономолекулярной модели связывания Ленгмюра (BIACORE® Evaluation версия программы 3.2) путем одновременного подбора сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесная константа диссоциации (Kd) рассчитывается как соотношение koff/kon. См., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 106 M-1с-1 с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, то скорость ассоциации может быть определена с помощью методики гашения флуоресценции, который измеряет увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25°С 20 нМ антиантигенного антитела в PBS, pH 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеренных в спектрометре, таком как спектрофотометр, оборудованный установкой для метода остановленного потока (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-AMINCO™ серии 8000 (ThermoSpectronic) с кюветой с мешалкой.
[0073] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями Kd) является по существу одинаковой, например, менее чем около 50%, менее чем около 40%, менее чем около 30%, менее чем около 20% и/или менее чем около 10% в зависимости от эталонного/компараторного значения.
[0074] В некоторых вариантах осуществления разница между упомянутыми двумя значениями (например, значениями Kd) существенно отличается, например, на более чем около 10%, более чем около 20%, более чем около 30%, более чем около 40% и/или более чем около 50% в зависимости от значения для эталонной/компараторной молекулы.
[0075] «Поверхностный плазмонный резонанс» обозначает оптическое явление, которое позволяет анализировать биоспецифические взаимодействия в реальном времени путем обнаружения изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIAcore™ (BIAcore International AB, компания GE Healthcare, г. Упсала, Швеция и г. Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США). Для дальнейших описаний см. Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26.
[0076] «Биослойная интерферометрия» относится к оптическому аналитическому способу, который анализирует интерферограмму света, отраженного от слоя иммобилизованного белка на кончике биосенсора и внутреннего слоя сравнения. Изменения в количестве молекул, связанных с кончиком биосенсора, вызывают сдвиги в интерферограмме, которые могут быть измерены в режиме реального времени. Неограничивающим примером устройства для биослойной интерферометрии является система ForteBio Octet® RED96 (Pall Corporation). См., например, Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.
[0077] Термин «kon», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном. В частности, константы скорости (kon и koff) и равновесные константы диссоциации измеряют с использованием IgG (двухвалентных) с одновалентным антигеном PD-1. «Kon», «kon», «константа скорости ассоциации» или «ka» используются в настоящем документе взаимозаменяемо. Значение указывает на скорость связывания связывающего белка с его антигеном-мишенью или скорость образования комплекса между антителом и антигеном, представленную уравнением: Антитело(«Ab»)+Антиген(«Ag»)→Ab-Ag. Термин «koff», в контексте настоящего документа, относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. Koff также обозначается как «koff» или «константа скорости диссоциации». Это значение указывает на скорость диссоциации антитела от его антигена-мишени или разделения комплекса Ab-Ag с течением времени на свободные антитело и антиген, как показано уравнением:
Ab+Ag←Ab-Ag.
[0078] Термин «биологическая активность» относится к любому одному или более биологическим свойствам молекулы (независимо от того, представлены ли они в естественном виде так, как были обнаружены in vivo, или предоставлены или включены рекомбинантным способом). Биологические свойства включают, но не ограничиваются ими, связывание рецептора, индукцию пролиферации клеток, ингибирование роста клеток, индукцию других цитокинов, индукцию апоптоза и ферментативную активность. В некоторых вариантах осуществления биологическая активность белка PD-1 включает, например, стимулирование апоптоза в антиген-специфических Т-клетках, уменьшение апоптоза в регуляторных Т (Treg) клетках, ингибирование активации Т-клеток, ингибирование пролиферации Т-клеток и облегчение Т-клеточной анергии или истощение.
[0079] Антитело «с созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одной или более CDR по сравнению с родительским антителом, которое не обладает такими изменениями, такими изменениями, приводящими к улучшению аффинности антитела к антигену.
[0080] Термин «химерное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором участок тяжелой и/или легкой цепи получен из конкретного источника или вида, в то время как по меньшей мере часть остатка тяжелой и/или легкой цепи получены из другого источника или вида. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело относится к антителу, содержащему по меньшей мере одну вариабельную область от первого вида (такого как мышь, крыса, яванский макак и т.д.) и по меньшей мере одну константную область от второго вида (такого как человек, яванский макак и т.д.). В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область мыши и по меньшей мере одну константную область человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область яванского макака и по меньшей мере константную область человека. В некоторых вариантах осуществления все вариабельные области химерного антитела относятся к первому виду и все константные области химерного антитела относятся ко второму виду. Химерная конструкция также может представлять собой функциональный фрагмент, как отмечено выше.
[0081] Термин «гуманизированное антитело», в контексте настоящего документа, относится к антителу, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасной области нечеловеческой вариабельной области была заменена соответствующей аминокислотой из вариабельной области человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело содержит по меньшей мере одну человеческую константную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fab, scFv, (Fab')2 и т.д. Термин гуманизированный также обозначает формы нечеловеческих (например, мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность иммуноглобулина, не относящегося к человеку. Гуманизированные антитела могут включать иммуноглобулин человека (реципиентное антитело), в которых остатки определяющей комплементарность области (CDR) реципиента замещены остатками из CDR вида, не относящегося к человеку (донорское антитело), такого как мышь, крыса или кролик, имеющий желаемую специфичность, аффинность и способность. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) иммуноглобулина человека заменены соответствующими остатками, не относящимися к человеку. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дальнейшего уточнения и оптимизации характеристик антитела. В общем, гуманизированное антитело может содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все области CDR соответствуют доменам иммуноглобулина, не относящегося к человеку, и все или по существу все области FR являются последовательностями консенсусной последовательности иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Fc) иммуноглобулина, обычно иммуноглобулина человека. Другие формы гуманизированных антител имеют одну или более CDR (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 и/или CDR H3), которые изменены по отношению к исходному антителу, которые также называются одной или более CDR «полученными из» одной или более CDR из исходного антитела. Следует иметь в виду, что гуманизированная последовательность может быть идентифицирована по ее первичной последовательности и необязательно обозначает способ, с помощью которого было создано антитело.
[0082] Термин «CDR-привитое антитело», в контексте настоящего документа, относится к гуманизированному антителу, в котором одна или более определяющих комплементарность областей (CDR) первого (не принадлежащего человеку) вида, были привиты к каркасным областям (FR) второго (принадлежащего человеку) вида.
[0083] Термин «антитело человека», в контексте настоящего документа, охватывает антитела, продуцируемые у людей, антитела, продуцируемые у животных, отличных от человека, которые содержат гены иммуноглобулина человека, например мыши XenoMouse®, и антитела, отобранные с использованием методов in vitro, например с использованием фагового дисплея (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581), причем репертуар антител основан на последовательности иммуноглобулина человека. Термин «антитело человека» обозначает семейство последовательностей, которые являются последовательностями человека. Таким образом, этот термин обозначает не способ, с помощью которого было создано антитело, а семейство родственных последовательностей.
[0084] «Функциональная Fc-область» обладает «эффекторной функцией» нативной последовательности Fc-области. Типовые «эффекторные функции» включают связывание с Fc-рецептором; связывание C1q; CDC (комплементзависимая цитотоксичность); АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора; BCR) и т.д. Такие эффекторные функции обычно требуют, чтобы Fc-область была объединена с доменом связывания (например, вариабельным доменом антитела), и может быть оценена с использованием различных анализов.
[0085] «Нативная последовательность Fc-области» включает аминокислотную последовательность идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, встречающейся в природе. Нативные последовательности Fc-областей человека включают нативную последовательность Fc-области IgG1 человека (аллотипы не A и A); нативную последовательность Fc-области IgG2 человека; нативную последовательность Fc-области IgG3 человека и нативную последовательность Fc-области IgG4 человека, а также существующие в природе варианты указанных последовательностей.
[0086] «Вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления «вариантная Fc-область» содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области благодаря по меньшей мере одной модификации аминокислоты, но при этом сохраняет по меньшей мере одну эффекторную функцию нативной последовательности Fc-области. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативной последовательностью Fc-области или с Fc-областью родительского полипептида, например от около одной до около десяти аминокислотных замен и, предпочтительно, от около одной до около пяти аминокислотных замен в нативной последовательности Fc-области или в последовательности Fc-области родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариантная Fc-область в данном документе будет иметь по меньшей мере на около 80% идентичности с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида, по меньшей мере на около 90% идентичности с указанной последовательностью, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 96%, по меньшей мере на около 97%, по меньшей мере на около 98% или по меньшей мере на около 99% идентичности с указанной последовательностью.
[0087] Термины «Fc-рецептор» или «FcR» используются для описания рецептора, который связывается с Fc-областью антитела. В некоторых вариантах осуществления FcγR представляет собой нативный FcR человека. В некоторых вариантах осуществления FcR представляет собой рецептор, который связывает антитело IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, в том числе аллельные варианты и формы данных рецепторов, которые подверглись альтернативному сплайсингу. Рецепторы FcγRII включают FcγRIIA («активирующий рецептор») и FcγRIIB («ингибирующий рецептор»), которые содержат аналогичные аминокислотные последовательности, отличающиеся преимущественно цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). Ингибирующий рецептор FcγRIIB содержит в цитоплазматическом домене иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM). (См., например, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Обзор FcR приведен в публикациях Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994) и de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Другие FcR, в том числе те из них, которые будут обнаружены в будущем, охватываются в настоящей заявке термином «FcR».
[0088] Термин «Fc-рецептор» или «FcR» также включает неонатальный рецептор, FcRn, отвечающий за перенос материнских IgG в плод (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) и регуляция гомеостаза иммуноглобулинов. Способы измерения связывания с FcRn являются известными (см., например, Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004); WO 2004/92219 (Hinton et al.).
[0089] «Эффекторные функции» относятся к биологической активности, присущей Fc-области антитела, которая варьируется в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают: связывание с C1q и комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC); фагоцитоз; отрицательную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора) и активацию B-клеток.
[0090] «Эффекторные клетки человека» представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют один или более FcR и осуществляют эффекторные функции. В некоторых вариантах осуществления такие клетки экспрессируют по меньшей мере FcγRIII и осуществляют эффекторную (-ые) функцию (-и) АЗКЦ (ADCC). Примеры лейкоцитов человека, которые опосредуют АЗКЦ (ADCC), включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), клетки естественные киллеры (NK), моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы. Эффекторные клетки могут быть выделены из нативного источника, например из крови.
[0091] «Антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность» или «ADCC» относится к форме цитотоксичности, при которой секретированный Ig, связанный с Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на определенных цитотоксических клетках (например, клетках NK, нейтрофилах и макрофагах), позволяет этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с антиген-несущей клеткой-мишенью, а затем убивают клетку-мишень цитотоксинами. Первичные клетки для опосредования АЗКЦ (ADCC), клетки NK, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках суммирована в таблице 3 на странице 464 публикации Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Для оценки активности АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы можно проводить анализ АЗКЦ (ADCC) in vitro, описанный в патенте США № 5500362 или 5821337 или патенте США № 6737056 (Presta). Пригодные эффекторные клетки для таких анализов включают МКПК и клетки NK. Альтернативно или дополнительно, активность АЗКЦ (ADCC) интересующей молекулы может быть оценена in vivo, например, на модели животного, как, например, раскрыто в Clynes et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656 (1998). Дополнительные варианты полипептидов с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной активностью АЗКЦ (ADCC) описаны, например, в патенте США № 7923538 и патенте США 7994290.
[0092] «Комплементзависимая цитотоксичность» или «CDC» относится к лизису клетки-мишени в присутствии комплемента. Активация классического пути комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с антителами (соответствующего подкласса), которые связаны с их распознаваемым антигеном. Для оценки активации комплемента может быть выполнен анализ CDC, например, как описано в Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996). Полипептидные варианты с измененными аминокислотными последовательностями Fc-области (полипептиды с вариантной Fc-областью) и повышенной или пониженной способностью связывания C1q описаны, например, в патенте США № 6194551 B1, в патенте США № 7923538, в патенте США № 7994290 и WO 1999/51642. Также, см., например, Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
[0093] Полипептидный вариант с «измененной» аффинностью связывания FcR или активностью АЗКЦ (ADCC) представляет собой вариант, который имеет либо повышенную, либо пониженную активность связывания FcR и/или активность АЗКЦ (ADCC) по сравнению с родительским полипептидом или с полипептидом, содержащим нативную последовательность Fc-области. Полипептидный вариант который «демонстрирует повышенное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с лучшей аффинностью, чем родительский полипептид. Полипептидный вариант, который «демонстрирует пониженное связывание» с FcR, связывает по меньшей мере один FcR с более низкой аффинностью, чем родительский полипептид. Такие варианты, которые демонстрируют пониженное связывание с FcR, могут обладать незначительным или не обладать заметным связыванием с FcR, например, 0-20% связывания с FcR по сравнению с нативной последовательностью Fc-области IgG.
[0094] Полипептидный вариант, который «опосредует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность АЗКЦ (ADCC) в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно», чем родительское антитело, представляет собой полипептидный вариант, который более эффективно опосредует АЗКЦ (ADCC) in vitro или in vivo, когда количества полипептидного варианта и родительского антитела, применяемые в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа АЗКЦ (ADCC) in vitro, раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности АЗКЦ (ADCC), например модель на животных и т.д.
[0095] Термин «по существу аналогичный» или «по существу одинаковый», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень сходства между двумя или более числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет рассматривать разницу между этими двумя или более значениями как малую или нулевую биологическую и/или статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеряемой указанным значением. В некоторых вариантах осуществления два или более по существу одинаковых значения отличаются не более чем на около любое из 5%, 10%, 15%, 20%, 25% или 50%.
[0096] Фраза «существенно различающийся», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень различия между двумя числовыми значениями, так что специалист в данной области техники будет считать, что различие между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в контексте биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления два по существу различных числовых значения отличаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%.
[0097] Термин «существенно уменьшенный», в контексте настоящего документа, обозначает достаточно высокую степень уменьшения между числовым значением и эталонным числовым значением, так что специалист в данной области техники сочтет, что разница между этими двумя значениями имеет статистическую значимость в пределах контекста биологической характеристики, измеренной указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления существенно уменьшенные числовые значения уменьшаются более чем на около любое из 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с эталонным значением.
[0098] Термин «лидерная последовательность» относится к последовательности аминокислотных остатков, расположенных на N-конце полипептида, которая облегчает секрецию полипептида из клетки млекопитающего. Лидерная последовательность может быть отщеплена при экспорте полипептида из клетки млекопитающего, образуя зрелый белок. Лидерные последовательности могут быть природными или синтетическими, и могут быть гетерологичными или гомологичными белку, к которому они присоединены.
[0099] Полипептид с «нативной последовательностью» включает полипептид, имеющий ту же аминокислотную последовательность, что и полипептид, встречающийся в природе. Таким образом, полипептид с нативной последовательностью может иметь аминокислотную последовательность встречающегося в природе полипептида от любого млекопитающего. Такой полипептид с нативной последовательностью может быть выделен из природного источника или может быть получен рекомбинантным или синтетическим путем. Термин полипептид «с нативной последовательностью», в частности, охватывает встречающиеся в природе укороченные или секретируемые формы полипептида (например, последовательность внеклеточного домена), встречающиеся в природе вариантные формы (например, которые подверглись альтернативному сплайсингу) и встречающиеся в природе аллельные варианты полипептида.
[00100] «Вариант» полипептида означает биологически активный полипептид, имеющий по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен, как части идентичности последовательности. Такие варианты включают, например, полипептиды, в которых один или более аминокислотных остатков добавлены или удалены на N- или C-конце полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 80% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 90% идентичности аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах осуществления вариант будет иметь по меньшей мере около 95% идентичности аминокислотной последовательности с полипептидом с нативной последовательностью.
[00101] В контексте настоящего документа, термины «процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология» в отношении последовательности пептида, полипептида или антитела определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения гэпов, если необходимо, для достижения наибольшего процента идентичности последовательности и не принимая во внимание какие-либо консервативные замены как часть идентичной последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть выполнено различными способами, известными специалисту в данной области техники, например, с помощью общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGN™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут выбрать подходящие параметры для определения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.
[00102] Замена аминокислоты может включать, но не ограничивается этим, замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Иллюстративные замены приведены в таблице 1. Аминокислотные замены могут быть введены в интересующее антитело, и продукты подвергнутые скринингу для желаемой активности, например, сохраненного/улучшенного связывания антигена, пониженной иммуногенности или улучшенной АЗКЦ (ADCC) или CDC.
ТАБЛИЦА 1
Исходный остаток Типовые замещения
Ala (A) Val; Leu; Ile
Arg (R) Lys; Gln; Asn
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg
Asp (D) Glu; Asn
Cys (C) Ser; Ala
Gln (Q) Asn; Glu
Glu (E) Asp; Gln
Gly (G) Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Норлейцин
Leu (L) Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe
Lys (K) Arg; Gln; Asn
Met (M) Leu; Phe; Ile
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
Pro (P) Ala
Ser (S) Thr
Thr (T) Val; Ser
Trp (W) Tyr; Phe
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Норлейцин
[00103] Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[00104] Неконсервативные замены влекут за собой замену представителя одного из данных классов на представителя другого класса.
[00105] Термин «вектор» используется для описания полинуклеотида, который может быть сконструирован таким образом, чтобы содержать клонированный полинуклеотид или полинуклеотиды, которые могут реплицироваться в клетке-хозяине. Вектор может включать один или более из следующих элементов: точку начала репликации, одну или более регуляторных последовательностей (таких как, например, промоторы и/или энхансеры), которые регулируют экспрессию интересующего полипептида, и/или один или более селективные маркерные гены (такие как, например, гены устойчивости к антибиотикам и гены, которые могут быть использованы в колориметрических анализах, например, β-галактозидаза). Термин «экспрессионный вектор» относится к вектору, который используется для экспрессии интересующего полипептида в клетке-хозяине.
[00106] «Клетка-хозяин» относится к клетке, которая может быть или стала реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими клетками или эукариотическими клетками. Типовые эукариотические клетки включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или клетки животных, не относящихся к приматам; клетки грибов, таких как дрожжи; растительные клетки; и клетки насекомых. Неограничивающие типовые клетки млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки NSO, клетки PER.C6® (Crucell), клетки 293 и CHO и их производные, например клетки 293-6E и DG44, соответственно. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и потомство необязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или по комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом (-ами), представленным (-и) в настоящем документе.
[00107] Термин «выделенный», в контексте настоящего документа, относится к молекуле, которая была отделена по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми она обычно встречается или продуцируется в природе. Например, полипептид называется «выделенным», когда он отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован. В случае, когда полипептид секретируется клеткой после экспрессии, физическое отделение супернатанта, содержащего полипептид, от клетки, которая его продуцирует, считается «выделением» полипептида. Подобным образом, полинуклеотид называют «выделенным», когда он не является частью более крупного полинуклеотида (такого как, например, геномная ДНК или митохондриальная ДНК, в случае ДНК-полинуклеотида), в котором он обычно находится в природе, или отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был продуцирован, например в случае полинуклеотида РНК. Таким образом, ДНК-полинуклеотид, который содержится в векторе внутри клетки-хозяина, может называться «выделенным».
[00108] Термины «индивидуум» или «субъект» используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения животного; например млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления предлагаются способы лечения млекопитающих, включая, но не ограничиваясь ими, людей, грызунов, обезьян, кошачьих, собак, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, овец, коз, лабораторных животных-млекопитающих, сельскохозяйственных животных-млекопитающих, спортивных животных-млекопитающих и домашних животных-млекопитающих. В некоторых примерах «индивидуум» или «субъект» относится к индивидууму или субъекту, нуждающемуся в лечении заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления субъектом, который должен получать лечение, может быть пациент, определяющий тот факт, что субъект был идентифицирован как имеющий расстройство, относящееся к лечению, или имеющий достаточный риск заболевания данным расстройством.
[00109] Термин «заболевание» или «расстройство», в контексте настоящего документа, относится к состоянию, при котором лечение необходимо и/или желательно.
[00110] «Рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, являются взаимозаменяемыми терминами, которые относятся к любому аномальному росту клеток или тканей или пролиферации у животного. Термины «рак» и «опухоль», в контексте настоящего документа, охватывают солидную и гематологическую злокачественную/лимфатическую опухоль, а также охватывают злокачественный, предзлокачественный и доброкачественный рост, такой как дисплазия. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные неограничивающие примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, рак гипофиза, рак пищевода, астроцитому, саркому мягких тканей, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки, рак печени, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, рак головного мозга, рак эндометрия, рак яичка, холангиокарциному, карциному желчного пузыря, рак желудка, меланому, мезотелиому и различные типы рака головы и шеи.
[00111] Термин «лечение», в контексте настоящего документа, относится к подходу для получения полезных или желаемых клинических результатов. Термин «лечение», в контексте настоящего документа, охватывает любое введение или применение лекарственного средства для лечения заболевания у млекопитающего, включая человека. Для целей настоящего раскрытия полезные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, любое одно или более из: ослабление одного или более симптомов, уменьшение степени заболевания, предотвращение или задержку распространения (например, метастазирования, например, метастазирования в легкое или в лимфатический узел) заболевания, предотвращение или задержка рецидива заболевания, задержка или замедление прогрессирования заболевания, ослабление болезненного состояния, ингибирование заболевания или прогрессирования заболевания, ингибирование или замедление заболевания или его прогрессирования, задержка его развития и ремиссию (частичную или полную). Термин «лечение» также включает уменьшение патологических последствий пролиферативного заболевания. Способы, представленные в настоящем документе, предусматривают любой один или более из этих аспектов лечения. В соответствии с вышеизложенным, термин «лечение» не требует стопроцентного устранения всех аспектов расстройства.
[00112] «Улучшение» означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению со случаем отсутствия введения анти-PD-1 антитела. «Улучшение» также включает сокращение или уменьшение продолжительности симптома.
[00113] В контексте рака термин «лечение» включает любое или все из: ингибирования роста раковых клеток, ингибирования репликации раковых клеток, уменьшения общей опухолевой нагрузки и ослабления одного или более симптомов, связанных с заболеванием.
[00114] Термин «биологический образец» означает количество вещества из живого или ранее живого существа. Такие вещества включают, но не ограничиваются ими, кровь (например, цельную кровь), плазму, сыворотку, мочу, амниотическую жидкость, синовиальную жидкость, клетки эндотелия, лейкоциты, моноциты, другие клетки, органы, ткани, костный мозг, лимфоузлы и селезенку.
[00115] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-1» или «экспрессирует PD-1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-1HIGH», означает, что уровень PD-1 таков, что специалист в данной области техники может сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью анти-PD-1-терапевтического средства, такого как антитело, представленное в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-1» представляет собой уровень, при котором 1% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления «высокий уровень» в отношении PD-1 составляет 1% или более окрашивания, например 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток в образце опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua).
[00116] Образец, который «экспрессирует PD-1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-1» или является «PD-1 позитивным», означает, что 1% или более клеток в образце демонстрируют окрашивание на PD-1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-1). Образец с умеренным или сильным окрашиванием клеток для PD-1 также рассматривается как «PD-1HIGH».
[00117] Образец, который имеет «низкий уровень PD-L1» или экспрессирует «PD-L1 на низком уровне» или имеет значение «PD-L1LOW», означает, что уровень PD-L1 ниже порогового уровня экспрессии рака, который обычно указывается для лечения с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором менее чем 5% клеток в опухоли демонстрируют окрашивание мембран на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления «низкий уровень» в отношении PD-L1 составляет менее 5% окрашивания, например, 4%, 3%, 2%, 1% или 0% клеток опухоли демонстрируют окрашивание. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель Aqua). Можно также сказать, что образец, который не экспрессирует обнаруживаемый PD-L1, «экспрессирует низкий уровень PD-L1». Таким образом, отсутствие детектируемого PD-L1 охвачено термином «низкий».
[00118] Образец, который имеет «повышенный уровень PD-L1» или «экспрессирует PD-L1 на повышенном уровне» или имеет значение «PD-L1HIGH», означает, что уровень PD-L1 является таким, что специалист в данной области техники сможет сделать вывод о том, что рак можно лечить с помощью терапии PD-1. В некоторых вариантах осуществления «повышенный уровень PD-L1» представляет собой уровень, при котором 50% клеток в опухоли или более имеют мембранное окрашивание PD-L1, например, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% клеток опухоли демонстрируют окрашивание мембраны. В некоторых вариантах осуществления уровни PD-L1 могут быть измерены с помощью хромогенного ИГХ анализа или иммунофлуоресцентного ИГХ анализа (показатель AQUA).
[00119] Образец, который «экспрессирует PD-L1» или имеет «позитивное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 позитивным», означает, что 1% или более клеток имеют окрашивание мембраны на PD-L1. В некоторых вариантах осуществления образец, который является PD-L1 позитивным, проявляет по меньшей мере слабое, умеренное и/или сильное окрашивание клеток (на основе мембранной экспрессии PD-L1).
[00120] Образец, который «не имеет экспрессии PD-L1» или имеет «отрицательное окрашивание на PD-L1» или является «PD-L1 отрицательным », означает, что экспрессия PD-L1 на поверхности клеток образца не обнаруживается с помощью ИГХ, такого как хромогенный ИГХ анализ или иммунофлуоресцентный ИГХ анализ (показатель Aqua). Отрицательный PD-L1 образец также рассматривается как «PD-L1LOW».
[00121] В некоторых вариантах осуществления может быть использован любой способ измерения уровня PD-L1. В некоторых вариантах осуществления это может включать использование теста PD-L1 ИГХ 22C3 pharmDx (Dako, Inc., г. Карпинтерия, штат Калифорния, США), который является клинически подтвержденным и одобренным FDA тестом для оценки экспрессии PD-L1 в НМРЛ. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx представляет собой качественный иммуногистохимический анализ с использованием моноклонального анти-PD-L1 антитела мыши (клон 22C3), который может быть использован для обнаружения белка PD-L1 в зафиксированных в формалине и залитых парафином (FFPE) тканях немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ). Анализ может быть выполнен в системе Autostainer Link 48 и визуализирован с использованием системы EnVision FLEX. Экспрессия белка PD-L1 определяется с использованием пропорционального опухолевого показателя (TPS), который представляет собой процент жизнеспособных опухолевых клеток, демонстрирующих частичное или полное окрашивание мембран. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1 позитивным, если TPS ≥1% жизнеспособных опухолевых клеток проявляет окрашивание мембраны с любой интенсивностью. В некоторых вариантах осуществления образец считается PD-L1HIGH, если TPS ≥50% жизнеспособных опухолевых клеток демонстрирует окрашивание мембраны с любой интенсивностью. ИГХ PD-L1 22C3 pharmDx указывается в качестве средства при идентификации пациентов с НМРЛ для лечения с помощью KEYTRUDA® (пембролизумаб). Дополнительные подробности о системе оценки и ответа на пембролизумаб описаны Garon et al. (N Engl J Med 2015;372:2018-28).
[00122] Термин «контроль» относится к композиции, которая, как известно, не содержит аналит («отрицательный контроль») или содержащей аналит («положительный контроль»). Положительный контроль может содержать известную концентрацию аналита. «Контроль», «положительный контроль» и «калибратор» могут использоваться в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения композиции, содержащей известную концентрацию аналита. «Положительный контроль» может использоваться для определения характеристик анализа и является полезным индикатором пригодности реагентов (например, аналитов).
[00123] «Предварительно определенный предел» и «предварительно определенный уровень» обычно относятся к граничному значению анализа, которое используется для оценки результатов диагностической/прогностической/терапевтической эффективности путем сравнения результатов анализа с предварительно определенным пределом/уровнем, где предварительно определенный предел/уровень уже связан или ассоциирован с различными клиническими параметрами (например, тяжесть заболевания, прогрессия/отсутствие прогрессии/улучшение и т.д.). Хотя настоящее раскрытие может обеспечить примерные заранее определенные уровни, хорошо известно, что граничные значения могут варьироваться в зависимости от природы иммуноанализа (например, используемых антител и т.д.). Кроме того, специалист в данной области техники может приспособить раскрытие, приведенное в настоящем документе, для других иммуноанализов для получения специфичных для иммуноанализа предельных значений для данных других иммуноанализов на основе настоящего раскрытия. Принимая во внимание, что точное значение предварительно определенного предела/уровня может варьироваться между анализами, корреляции, как описано в настоящем документе (если таковые имеются), могут быть в целом применимы.
[00124] Термины «ингибирование» или «ингибировать» относятся к уменьшению или прекращению любого фенотипического свойства или к снижению или прекращению частоты возникновения, степени или вероятности этого свойства. «Снизить» или «ингибировать» означает уменьшить, снизить или остановить активность, функцию и/или количество по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 20% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления «снизить» или «ингибировать» означает способность вызывать общее уменьшение на 75%, 85%, 90%, 95% или более. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, ингибируется или уменьшается в течение периода времени относительно контрольной дозы (такой как плацебо) в течение того же периода времени. Термин «эталонный», в контексте настоящего документа, относится к любому образцу, стандарту или уровню, которые используются для целей сравнения. Эталонный образец может быть получен из здорового и/или нездорового образца. В некоторых примерах эталонный образец может быть получен из необработанного образца. В некоторых примерах эталонный образец получен от не заболевшего необработанного образца индивидуума-субъекта. В некоторых примерах эталонный образец получен от одного или более здоровых индивидуумов, которые не являются субъектом или пациентом.
[00125] Термин «задержка развития заболевания», в контексте настоящего документа, означает задержку, препятствование, замедление, торможение, стабилизацию, подавление и/или откладывание развития заболевания (такого как рак). Эта задержка может быть различной продолжительности, в зависимости от истории болезни и/или индивидуума, который подлежит лечению. Как очевидно для специалиста в данной области техники, достаточная или значительная задержка может, по сути, включать предотвращение, поскольку у индивидуума не развивается заболевание. Например, поздняя стадия рака, такая как развитие метастазирования, может быть отсрочена.
[00126] «Предотвращение», в контексте настоящего документа, включает предоставление профилактических мероприятий в отношении возникновения или рецидива заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но заболевание еще не было диагностировано. Если не указано иное, термины «уменьшить», «ингибировать» или «предотвратить» не обозначают и не требуют полного предотвращения в течение всего времени.
[00127] В контексте настоящего документа термин «подавлять» функцию или действие означает уменьшение функции или активности по сравнению с другими такими же условиями, за исключением интересующего условия или параметра или, альтернативно, по сравнению с другим условием. Например, антитело, которое подавляет рост опухоли, снижает скорость роста опухоли по сравнению со скоростью роста опухоли в отсутствие антитела.
[00128] «Терапевтически эффективное количество» вещества/молекулы, агониста или антагониста может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и вес индивидуума, а также способность вещества/молекулы, агониста или антагониста вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также является таким, при котором любые токсичные или вредные эффекты вещества/молекулы, агониста или антагониста перевешиваются терапевтически полезными эффектами. Терапевтически эффективное количество может быть доставлено за одно или более введений. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического результатов.
[00129] «Профилактически эффективное количество» относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическая доза используется у субъектов до или на более ранней стадии заболевания, профилактически эффективное количество будет меньше чем терапевтически эффективного количества.
[00130] Термины «фармацевтический состав» и «фармацевтическая композиция» относятся к препарату, который находится в такой форме, которая позволяет биологической активности активного(-ых) ингредиента(-ов) быть эффективной, и которая не содержит никаких дополнительных компонентов, которые неприемлемо токсичны для субъекта, которому будет вводиться состав. Такие составы могут быть стерильными.
[00131] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному составу или носителю, общепринятому в данной области техники для применения с терапевтическим агентом, которые вместе составляют «фармацевтическую композицию» для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель нетоксичен для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и совместим с другими ингредиентами состава. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемого состава.
[00132] «Стерильная» композиция является асептической или практически не содержит живых микроорганизмов и их спор.
[00133] Термин «IDO-ингибитор» относится к агенту, способному ингибировать активность индоламин 2,3-диоксигеназы (IDO) и, таким образом, обращать IDO-опосредованную иммуносупрессию. IDO-ингибитор может ингибировать IDO1 и/или IDO2 (INDOL1). IDO-ингибитор может быть обратимым или необратимым IDO-ингибитором. «Обратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое обратимо ингибирует активность фермента IDO на каталитическом сайте или на некаталитическом сайте, а «необратимый IDO-ингибитор» представляет собой соединение, которое необратимо ингибирует активность фермента IDO путем образования ковалентной связи с ферментом. Неограничивающие типовые IDO-ингибиторы включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp.), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech, Inc.).
[00134] «Т-клеточная терапия с химерным антигенным рецептором» или «CAR-T-терапия» относится к терапевтическому агенту, содержащему генетически модифицированную Т-клетку для экспрессии рецептора, который распознает антиген, экспрессируемый опухолевой клеткой. Антиген может представлять собой антиген, специфически экспрессируемый опухолью, или антиген, экспрессируемый как раковыми клетками, так и здоровой тканью. В некоторых вариантах осуществления CAR-T-терапия представляет собой адоптивную CAR-T-терапию, в которой Т-клетки пациента удаляются и модифицируются для экспрессии химерного антигенного рецептора, а затем возвращаются пациенту. См., например, Dai et al., 2016, J Natl Cancer Inst, 108 (7): djv439, doi: 10.1093/jnci/djv439; Gill et al., 2015, Blood Rev, pii: S0268-960X(15)00080-6, doi: 10.1016/j.blre.2015.10.003; Gill et al., 2015, Immunol Rev, 263(1):68-89. doi: 10.1111/imr.12243.
[00135] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (совместное) и последующее или последовательное введение в любом порядке.
[00136] Термин «одновременно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда по меньшей мере часть введения перекрывается во времени или когда введение одного терапевтического агента происходит в течение короткого периода времени относительно введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агентов вводят с временным интервалом не более чем около определенного количества минут.
[00137] Термин «последовательно» используется в данном документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или когда введение одного или более агентов начинается до введения одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов вводят с временным разделением, превышающим определенное количество минут.
[00138] Термин «в сочетании с», в контексте настоящего документа, относится к применению одного способа лечения в дополнение к другому способу лечения. Таким образом, «в сочетании с» относится к применению одного способа лечения до, во время или после применения другого способа лечения для индивидуума.
[00139] Термин «листок-вкладыш» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно использования таких терапевтических продуктов.
[00140] «Готовое изделие» представляет собой любое изделие (например, упаковку или контейнер) или набор, содержащий по меньшей мере один реагент, например лекарственное средство для лечения заболевания или расстройства (например, рака), или зонд для специфического обнаружение биомаркера, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления готовое изделие или набор рекламируются, распространяются или продаются как единица для выполнения способов, описанных в настоящем документе.
[00141] Термины «метка» и «детектируемая метка» обозначают фрагмент, присоединенный к антителу или его аналиту для обнаружения взаимодействия (например, связывания) между членами пары специфического связывания. Меченый член пары специфического связывания относится к «обнаруживаемо меченному». Таким образом, термин «меченый связывающий белок» относится к белку с внедренной меткой, которая обеспечивает идентификацию связывающего белка. В некоторых вариантах осуществления метка представляет собой обнаруживаемый маркер, который может продуцировать сигнал, который можно обнаружить с помощью визуальных или инструментальных средств, например, включения радиоактивно меченной аминокислоты или присоединения к полипептиду биотинильных фрагментов, которые могут быть обнаружены с помощью маркированного авидина (например, стрептавидин, содержащий флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые могут быть обнаружены оптическими или колориметрическими методами). Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются ими, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho или 153Sm); хромогены, флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидаза хрена, люцифераза, щелочная фосфатаза); хемилюминесцентные маркеры; биотинильные группы; предварительно определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, последовательности пар лейциновой молнии, сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металлов, эпитопные метки) и магнитные агенты, такие как хелаты гадолиния. Типичные примеры меток, обычно используемых для иммуноанализов, включают фрагменты, которые продуцируют свет, например, соединения акридиния, и фрагменты, которые продуцируют флуоресценцию, например флуоресцеин. В связи с этим сам фрагмент может быть не детектируемо мечен, но может стать обнаруживаемым при реакции с еще одним фрагментом.
[00142] Термин «конъюгат» относится к антителу, которое химически связано со вторым химическим фрагментом, таким как терапевтический или цитотоксический агент. Термин «агент» включает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу или экстракт, полученный из биологических материалов. В некоторых вариантах осуществления терапевтические или цитотоксические агенты включают, но не ограничиваются ими, коклюшный токсин, таксол, цитохалазин B, грамицидин D, бромид этидия, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, дауномицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин, и их аналоги или гомологи. При использовании в контексте иммуноанализа конъюгатное антитело может представлять собой детектируемо меченое антитело, используемое в качестве детектирующего антитела.
II. Анти-PD-1 антитела
[00143] Предлагаются новые антитела, направленные против PD-1. Анти-PD-1 антитела включают, но не ограничиваются ими, гуманизированные антитела, химерные антитела, мышиные антитела, человеческие антитела и антитела, содержащие CDR тяжелой цепи и/или легкой цепи, обсуждаемые в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления предлагается выделенное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления предлагается моноклональное антитело, которое связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело представляет собой анти-PD-1 антитело-антагонист. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело, представленное в настоящем документе, ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в настоящем документе, усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта.
[00144] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00145] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00146] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00147] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00148] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00149] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00150] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00151] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00152] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00153] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00154] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, выбранных из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00155] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну тяжелую цепь, содержащую вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и по меньшей мере одну легкую цепь, содержащую вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит две тяжелые цепи, причем каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и две легкие цепи, причем каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В контексте настоящего описания считается, что одноцепочечное Fv (scFv) или любое другое антитело, которое содержит, например, одну полипептидную цепь, содержащую все шесть CDR (три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи), имеет тяжелую цепь и легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три тяжелых цепи CDR. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь представляет собой область анти-PD-1 антитела, которое содержит три легких цепи CDR.
[00156] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00157] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00158] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00159] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00160] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00161] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86,94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00162] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00163] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00164] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00165] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00166] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, включая (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00167] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит шесть CDR, как описано выше, и связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00168] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, которое конкурирует с анти-PD-1 антителом, описанным в настоящем документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует за связывание с любым из антител, представленных в настоящем документе, может быть получено и/или использовано.
[00169] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
[00170] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
[00171] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
[00172] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:31.
[00173] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.
[00174] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63.
[00175] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.
[00176] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.
[00177] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.
[00178] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.
[00179] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.
[00180] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VH, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.
[00181] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00182] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00183] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00184] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00185] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00186] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00187] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00188] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00189] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00190] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00191] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности CDR VL, выбранные из (a) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00192] В некоторых вариантах осуществления любой из шести CDR, представленных в настоящем документе, может быть объединен в качестве составных участков с любым из других CDR, предоставленных в настоящем документе, для получения в конструкции в общей сложности шести CDR. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления два CDR из первого антитела (например, HCDR1 и HCDR2) могут быть скомбинированы с четырьмя CDR из второго антитела (HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3). В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка в одной или более CDR могут быть заменены для получения их варианта. В некоторых вариантах осуществления два или менее остатка могут быть заменены в 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR.
[00193] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00194] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00195] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00196] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00197] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00198] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00199] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00200] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263, и 271; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00201] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00202] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, и 183; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00203] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит (I) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH CDR, выбранные из (a) HCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; и (II) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL CDR, выбранные из (d) LCDR1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00204] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1 антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющего по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.
[00205] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
[00206] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
[00207] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
[00208] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.
[00209] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39.
[00210] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119.
[00211] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287.
[00212] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271.
[00213] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231.
[00214] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183.
[00215] В некоторых вариантах осуществления VH содержит: (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319.
[00216] В некоторых вариантах осуществления предлагается анти-PD-1 антитело, причем антитело содержит вариабельный домен легкой цепи (VL), имеющий по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VL, идентичная на по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1 антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VL в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации этой последовательности.
[00217] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00218] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00219] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00220] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00221] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (b) LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (c) LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00222] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00223] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00224] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00225] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00226] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00227] В некоторых вариантах осуществления VL содержит: (a) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (b) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (c) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00228] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124 , 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, и последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), имеющую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотой последовательность SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления последовательность VH, имеющая идентичность по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, и последовательность VL, имеющая идентичность, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, но анти-PD-1-антитело, содержащее данную последовательность, сохраняет способность связываться с PD-1. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316. В некоторых вариантах осуществления от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320. В некоторых вариантах осуществления замены, вставки или делеции происходят в областях за пределами CDR (то есть в FR). Необязательно, анти-PD-1-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316 и последовательность VL SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, включая посттрансляционные модификации одной или обеих последовательностей.
[00229] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
[00230] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00231] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
[00232] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
[00233] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.
[00234] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109 и 117; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94, 102, 110 и 118; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95, 103, 111 и 119; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113 и 121; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50, 58, 66, 74, 82, 90, 98, 106, 114 и 122; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 51, 59, 67, 75, 83, 91, 99, 107, 115 и 123.
[00235] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 189, 197, 205, 213, 221, 229, 237, 245, 253, 261, 269, 277 и 285; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174, 182, 190, 198, 206, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278 и 286; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175, 183, 191, 199, 207, 215, 223, 231, 239, 247, 255, 263, 271, 279 и 287; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281 и 289; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178, 186, 194, 202, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282 и 290; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179, 187, 195, 203, 211, 219, 227, 235, 243, 251, 259, 267, 275, 283 и 291.
[00236] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 285, 237, 245, 253, 261 и 269; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 286, 238, 246, 254, 262 и 270; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 287, 239, 247, 255, 263 и 271; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 289, 241, 249, 257, 265 и 273; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 290, 242, 250, 258, 266 и 274; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 291, 243, 251, 259, 267 и 275.
[00237] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 189, 197, 205, 213, 221 и 229; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 190, 198, 206, 214, 222 и 230; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 191, 199, 207, 215, 223 и 231; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 193, 201, 209, 217, 225 и 233; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 194, 202, 210, 218, 226 и 234; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 195, 203, 211, 219, 227 и 235.
[00238] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 277, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173 и 181; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 278, 126, 134, 142, 150, 158, 166, 174 и 182; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 279, 127, 135, 143, 151, 159, 167, 175 и 183; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 281, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177 и 185; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 282, 130, 138, 146, 154, 162, 170, 178 и 286; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 283, 131, 139, 147, 155, 163, 171, 179 и 187.
[00239] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит (а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 293, 301, 309 и 317; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 302, 310 и 318; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 303, 311 и 319; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 297, 305, 313 и 321; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 298, 306, 314 и 322; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 299, 307, 315 и 323.
[00240] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит VH, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе, и VL, как в любом из вариантов осуществления предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 8, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 16, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24 соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 32, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 40, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 44 и SEQ ID NO: 48, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 56, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 60 и SEQ ID NO: 64, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 72, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 80, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 84 и SEQ ID NO: 88, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 96, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 104, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 108 и SEQ ID NO: 112, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 120, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 124 и SEQ ID NO: 128, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 136, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 140 и SEQ ID NO: 144, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 148 и SEQ ID NO: 152, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 160, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 164 и SEQ ID NO: 168, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 176, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 180 и SEQ ID NO: 184, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 188 и SEQ ID NO: 192, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 200, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 204 и SEQ ID NO: 208, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 216, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 224, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 228 и SEQ ID NO: 232, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 240, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 248, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 252 и SEQ ID NO: 256, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 260 и SEQ ID NO: 264, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 268 и SEQ ID NO: 272, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 276 и SEQ ID NO: 280, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 284 и SEQ ID NO: 288, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 292 и SEQ ID NO: 296, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 300 и SEQ ID NO: 304, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 308 и SEQ ID NO: 312, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO: 316 и SEQ ID NO: 320, соответственно, включая посттрансляционные модификации данных последовательностей.
[00241] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитела конкурируют с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, за связывание с эпитопом на PD-1.
[00242] В некоторых вариантах осуществления конкурентные анализы могут использоваться для идентификации моноклонального антитела, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе (таким как 12228, 13406, 13407, 13408 и 13409) за связывание с PD-1. Конкурентные анализы можно использовать для определения того, связывают ли два антитела один и тот же эпитоп, распознавая идентичные или стерически перекрывающиеся эпитопы, или одно антитело конкурентно ингибирует связывание другого антитела с антигеном. В некоторых вариантах осуществления такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом, который связан антителом, описанным в данном документе. Типичные конкурентные анализы включают, но не ограничиваются ими, обычные анализы, такие как те, которые представлены в Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.). Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N.J.). В некоторых вариантах осуществления считается, что два антитела связываются с одним и тем же эпитопом, если каждое блокирует связывание другого на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое конкурирует с анти-PD-1-антителом, описанным в данном документе, представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует с химерным, гуманизированным или человеческим анти-PD-1-антителом, как описано в данном документе.
[00243] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, которые связываются с любым одним или более эпитопами, которые представлены в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложены антитела, которые связывают и перекрывают эпитоп, с которым связываются настоящие антитела. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с одним из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с двумя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предложено антитело, которое конкурирует по меньшей мере с тремя из антител, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с перекрывающимся эпитопом в качестве антитела, описанного в приведенных в данном документе примерах. В некоторых вариантах осуществления весь эпитоп связан и/или заблокирован конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления часть эпитопа связана и/или заблокирована конкурирующим антителом. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывается по меньшей мере с частью эпитопа антитела, представленного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления паратоп конкурирующего антитела связывает мишень, а другой участок структуры конкурирующего антитела препятствует по меньшей мере части эпитопа антитела, представленного в данном документе.
Иллюстративные химерные антитела
[00244] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567 и Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельную область, не являющуюся человеческой (например, вариабельную область, полученную от мыши, крысы, хомяка, кролика или не являющегося человеком примата, такого как обезьяна) и человеческую константную область. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело с «переключенным классом», в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
[00245] Неограничивающие иллюстративные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи антитела, выбранного из, например, антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. Дополнительные неограничивающие примерные химерные антитела включают химерные антитела, содержащие тяжелую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 и/или легкую цепь CDR1, CDR2 и CDR3 антитела, выбранного из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, и связывается с PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело содержит вариабельные области, описанные выше, связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления введение анти-PD-1-антител, описанных в данном документе, стимулирует активность иммунной клетки, уменьшает подавление модуляции иммунной клетки или увеличивает ответ Т-клеток у субъекта.
[00246] В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220,228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192. 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320, причем антитело связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или, по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92, 100, 108, 116, 124, 132, 140, 148, 156, 164, 172, 180, 188, 196, 204, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 или 316; и легкую цепь, содержащую последовательность вариабельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96, 104, 112, 120, 128, 136, 144, 152, 160, 168, 176, 184, 192, 200, 208, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 или 320; причем антитело связывает PD-1.
[00247] Иллюстративные химерные анти-PD-1-антитела также включают в себя химерные антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 антителом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190 или его фрагмента. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления химерное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00248] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.
[00249] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают химерное анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
Иллюстративные гуманизированные антитела
[00250] В некоторых вариантах осуществления предложены гуманизированные антитела, которые связывают PD-1. Гуманизированные антитела полезны в качестве терапевтических молекул, потому что гуманизированные антитела уменьшают или устраняют иммунный ответ человека по сравнению с нечеловеческими антителами, что может приводить к иммунному ответу на терапевтическое антитело (такое как ответная реакция в виде антител человека против антител мыши (HAMA)) и снижению эффективности терапии.
[00251] В некоторых вариантах осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, не относящееся к человеку антитело гуманизируют для снижения иммуногенности для людей, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского не относящегося к человеку антитела. Обычно гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых CDR (или их части) получены из не относящегося к человеку антитела, а FR (или их части) получены из последовательностей антител человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе заменены соответствующими остатками не относящегося к человеку антитела (например, антитела, из которого получены остатки CDR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.
[00252] Гуманизированные антитела и способы их получения рассматриваются, например, в Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13: 1619-1633, и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., (1988) Nature 332:323-329; Queen et al., (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA 86: 10029-10033; патентах США № 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321 и 7087409; Kashmiri et al., (2005) Methods 36:25-34; Padlan, (1991) Mol. Immunol. 28:489-498 (описание «изменение поверхности»); Dall'Acqua et al., (2005) Methods 36:43-60 (описание «перестановки FR»); и Osbourn et al., (2005) Methods 36:61-68 и Klimka et al., (2000) Br. J. Cancer, 83:252-260 (описание подхода «управляемого отбора» к перестановке FR).
[00253] Каркасные области человека, которые могут быть использованы для гуманизации, включают, но не ограничиваются ими: каркасные области, выбранные с использованием способа «наилучшего соответствия» (см., например, Sims et al. (1993) J. Immunol. 151:2296); каркасные области, полученные из консенсусной последовательности антител человека определенной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (см., например, Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; и Presta et al. (1993) J. Immunol, 151:2623); зрелые каркасные области человека (соматически мутированные) или каркасные области зародышевой линии человека (см., например, Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13:1619-1633) и каркасные области, полученные при скрининге FR-библиотек (см., например, Baca et al., (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 и Rosok et al., (1996) J. Biol. Chem. 271 :22611-22618).
[00254] Иллюстративные гуманизированные анти-PD-1-антитела, включают в себя антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, описанным в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено гуманизированное анти-PD-1-антитело, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное анти-PD-1-антитело конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
Иллюстративные антитела человека
[00255] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, предложенное в данном документе, представляет собой антитело человека. Антитела человека могут быть получены с использованием различных методик, известных в данной области техники. Антитела человека описаны в основном в van Dijk and van de Winkel, (2001) Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-374 и Lonberg, (2008) Curr. Opin. Immunol. 20:450-459. В некоторых вариантах осуществления антитело человека не является встречающимся в природе антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело человека представляет собой моноклональное антитело; таким образом, в некоторых вариантах осуществления каждое из антител человека в наборе может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене.
[00256] Антитела человека могут быть получены введением иммуногена трансгенному животному, которое было модифицировано для продукции интактных антител человека или интактных антител с вариабельными областями человека в ответ на антигенную стимуляцию. Такие животные обычно содержат все или часть локусов иммуноглобулинов человека, которые заменяют эндогенные локусы иммуноглобулинов или которые присутствуют внехромосомно или случайным образом интегрированы в хромосомы животного. У таких трансгенных мышей эндогенные локусы иммуноглобулина обычно инактивированы. Обзор способов получения антител человека от трансгенных животных см. в Lonberg, (2005) Nat. Biotech. 23: 1117-1125. См. также, например, патенты США № 6075181 и 6150584, описывающие технологию XENOMOUSE™; патент США № 5770429, описывающий технологию HUMAB®; патент США № 7041870, описывающий технологию K-M MOUSE®, и публикацию заявки на патент США № US 2007/0061900, описывающую технологию VELOCIMOUSE®. Вариабельные области человека из интактных антител, генерируемых такими животными, можно дополнительно модифицировать, например, путем объединения с другой константной областью человека.
[00257] Антитела человека также могут быть получены с помощью гибридомных способов. Описаны клеточные линии миеломы человека и гетеромиеломы человека-мыши для продуцирования моноклональных антител человека. (См., например, Kozbor (1984) J. Immunol, 133: 3001; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) и Boerner et al, (1991) J. Immunol., 147:86). Антитела человека, полученные с помощью технологии гибридомных B-клеток человека, также описаны в Li et al., (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562. Дополнительные способы включают способы, описанные, например, в патенте США № 7,189,926 (описывающем получение моноклональных антител-IgM человека из линий гибридомных клеток) и Ni, (2006) Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (описывающей гибридомы человек-человек). Технология гибридом человека (технология Триома) также описана Vollmers and Brandlein, (2005) Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, (2005) Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-191.
[00258] Антитела человека также могут быть получены путем выделения последовательностей клона вариабельного домена Fv, выбранного из библиотек фагового дисплея, полученных от человека. Такие последовательности вариабельного домена затем можно комбинировать с желаемым константным доменом человека. Методики отбора антител человека из библиотек антител описаны ниже.
[00259] Антитела могут быть выделены путем скрининга комбинаторных библиотек на наличие антител с желаемой активностью или активностями. Например, в данной области техники известны различные способы создания библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек на наличие антител, обладающих желаемыми характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в Hoogenboom et al. в Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554; Clackson et al., (1991) Nature 352: 624-628; Marks et al., (1992) J. Mol. Biol 222: 581-597; Marks and Bradbury, в Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., (2004) J. Mol. Biol. 338(2): 299-310; Lee et al., (2004) J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093; Fellouse, (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472; и Lee et al., (2004) J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 и PCT публикации WO 99/10494.
[00260] В некоторых способах фагового дисплея репертуары генов VH и VL по отдельности клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем могут быть подвергнуты скринингу на антигенсвязывающий фаг, как описано в Winter et al., (1994) Ann. Rev. Immunol., 12:433-455. Фаг обычно содержит фрагменты антител, либо в виде одноцепочечных фрагментов Fv (scFv), либо в виде фрагментов Fab. Библиотеки из иммунизированных источников предоставляют высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. Альтернативно, наивный репертуар может быть клонирован (например, от человека), чтобы обеспечить единый источник антител к широкому спектру неаутоантигенов, а также аутоантигенов без какой-либо иммунизации, как описано в Griffiths et al., (1993) EMBO J 12:725-734. Наконец, наивные библиотеки также могут быть созданы синтетически путем клонирования неупорядоченных сегментов V-гена из стволовых клеток и использования ПЦР-праймеров, содержащих случайную последовательность, для кодирования высоко вариабельных областей CDR3 и для осуществления перегруппировки in vitro, как описано в Hoogenboom and Winter (1992), J. Mol. Biol, 227:381-388. Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки антител человека, включают в себя, например: патент США № 5750373 и патентные публикации США № 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.
[00261] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 1, 2, 3, 382, 383 или 384. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека связывается с PD-1 и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00262] Типичные анти-PD-1-антитела человека также включают антитела, которые конкурируют за связывание с PD-1 с антителом человека или его фрагментом, описанными в данном документе. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено анти-PD-1-антитело человека, которое конкурирует за связывание с PD-1 с антителом или его фрагментом, выбранным из антитела 11606; антитела 11613; антитела 11645; антитела 12191; антитела 12195; антитела 12220; антитела 12228; антитела 12535; антитела 12536; антитела 12541; антитела 12543; антитела 12544; антитела 12545; антитела 12549; антитела 12550; антитела 12553; антитела 12554; антитела 12562; антитела 12563; антитела 12564; антитела 12565; антитела 12571; антитела 12572; антитела 12576; антитела 12583; антитела 12584; антитела 13396; антитела 13398; антитела 13399; антитела 13401; антитела 13402; антитела 13403; антитела 13404; антитела 13405; антитела 13406; антитела 13407; антитела 13408; антитела 13409; антитела 11624 и антитела 12190. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и/или PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и PD-L2. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека конкурирует за связывание с PD-1 с антителом, описанным в данном документе, и усиливает иммунный ответ у субъекта и/или увеличивает активацию Т-клеток у субъекта после введения антитела субъекту.
[00263] В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит вариабельную область из антитела человека, которая связывает PD-1, и константную область из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления предложено химерное анти-PD-1-антитело человека, причем антитело содержит CDR из антитела человека, которое связывает PD-1, и каркас из другого антитела человека. В некоторых вариантах осуществления антитело не является встречающимся в природе антителом человека.
[00264] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело человека содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело человека, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь к человека.
[00265] В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело человека, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
[00266] Как отмечено в данном документе, термин «антитело человека» обозначает род возможных последовательностей для конструкции антитела, а не источник антитела.
Иллюстративные константные области антител
[00267] В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит одну или более константных областей человека. В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи человека имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека. В некоторых вариантах осуществления константная область легкой цепи человека имеет изотип, выбранный из κ и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в данном документе, содержит константную область IgG4 человека и легкую цепь κ человека.
[00268] В настоящем описании и формуле изобретения, если явно не указано или не известно специалисту в данной области, нумерация остатков в тяжелой цепи иммуноглобулина соответствует индексу ЕС, как в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), специально включенному в данный документ посредством ссылки. «Индекс EU, как у Кабата» относится к нумерации остатков антитела IgG1 EU человека.
[00269] Как отмечено выше, желательна ли эффекторная функция или нет, может зависеть от конкретного способа лечения, для которого предназначено антитело. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления когда желательна эффекторная функция, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления когда эффекторная функция нежелательна, выбирают анти-PD-1-антитело, содержащее константную область тяжелой цепи IgG4 человека или IgG2 человека.
[00270] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариант Fc-области, имеющий по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с Fc-областью IgG дикого типа или антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет две или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет три или более аминокислотных замен в Fc-области антитела дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области имеет по меньшей мере одну, две или три или более аминокислотных замен Fc-области, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 80% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 90% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант Fc-области в данном документе будет иметь по меньшей мере около 95% гомологию с нативной последовательностью Fc-области и/или с Fc-областью родительского полипептида. В некоторых вариантах осуществления в константной области тяжелой цепи отсутствует C-концевой остаток лизина (K). В некоторых таких вариантах осуществления тяжелая цепь или константная область тяжелой цепи может называться «desK». В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи, в которой отсутствует С-концевой лизин, представляет собой IgG, такой как IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
[00271] В некоторых вариантах осуществления антитело, предложенное в данном документе, изменено для увеличения или уменьшения степени, до которой антитело является гликозилированным. Добавление или удаление сайтов гликозилирования антитела может быть удобно осуществлено путем изменения аминокислотной последовательности так, что один или более сайтов гликозилирования создаются или удаляются.
[00272] Когда антитело содержит область Fc, присоединенный к ней углевод может быть изменен. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двухантенный олигосахарид, который обычно присоединяется посредством N-связи к Asn297 домена CH2 области Fc. См., например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать в себя различные углеводы, например маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в «стволе» структуры двухантенного олигосахарида. В некоторых вариантах осуществления могут быть выполнены модификации олигосахарида в антителе для создания вариантов антитела с определенными улучшенными свойствами.
[00273] В некоторых вариантах осуществления предлагаются варианты антител, имеющие углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, присоединенная (прямо или косвенно) к области Fc. Например, количество фукозы в таких антителах может составлять от 1 до 80%, от 1 до 65%, от 5 до 65% или от 20 до 40%. Количество фукозы определяется путем расчета среднего количества фукозы в углеводной цепи при Asn297 относительно суммы всех гликоструктур, связанных с Asn 297 (например, сложных, гибридных и содержащих повышенное количество маннозы структур), измеренных путем MALDI-TOF масс-спектрометрии, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному около положения 297 в области Fc (нумерация остатков в области Fc согласно EU); однако Asn297 также может быть расположен около на ±3 аминокислоты выше или ниже положения 297, то есть между положениями 294 и 300, из-за незначительных вариаций последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут иметь улучшенную функцию ADCC. См., например, патентные публикации США US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «фукозо-дефицитным» вариантам антител, включают в себя: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают в себя клетки Lec13 CHO с дефицитом фукозилирования белка (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); заявка на патент США US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams et al., особенно в примере 11), и нокаутные клеточные линии, такие как нокаутные клетки СНО по гену альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, (см., например, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107).
[00274] Варианты антител дополнительно снабжают разделенными пополам олигосахаридами, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к области Fc антитела, делится пополам с помощью GlcNAc. Такие варианты антител могут иметь пониженное фукозилирование и/или улучшенную функцию ADCC. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.) и US 2005/0123546 (Umana et al.). Также предлагаются варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к области Fc. Такие варианты антител могут иметь улучшенную функцию CDC. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.) и WO 1999/22764 (Raju, S.).
[00275] Варианты антител также снабжены лидерными дополнениями на аминоконце цепи. Например, один или более аминокислотных остатков лидерной аминоконцевой последовательности присутствуют на аминоконце любой одной или более тяжелых или легких цепей антитела. Типичное лидерное дополнение на аминоконце цепи включает в себя или состоит из трех аминокислотных остатков, VHS, присутствующих в одной или обеих легких цепях варианта антитела.
[00276] Время полужизни in vivo или в сыворотке крови человека полипептидов, связывающих с высокой аффинностью FcRn, можно анализировать, например, у трансгенных мышей, людей или приматов, не являющихся человеком, которым вводят полипептиды с вариантом области Fc. См. также, например, Petkova et al. International Immunology 18(12):1759-1769 (2006).
[00277] В некоторых вариантах осуществления вариант антитела опосредует ADCC в присутствии эффекторных клеток человека более эффективно, чем родительское антитело. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vitro, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. В некоторых вариантах осуществления вариант антитела существенно более эффективен при опосредовании ADCC in vivo, когда количества варианта полипептида и родительского антитела, использованные в анализе, по существу одинаковы. Как правило, такие полипептиды можно обнаружить с применением анализа ADCC in vitro, раскрытого в настоящем документе, однако можно также применять другие анализы или методы определения активности ADCC, например модель на животных и т.д.
Иллюстративные конъюгаты антител
[00278] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело конъюгировано с другой молекулой. В некоторых вариантах осуществления дополнительная молекула может быть детектируемым маркером, таким как метка. В некоторых вариантах дополнительная молекула может представлять собой терапевтическую молекулу, такую как цитотоксическое средство. В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство могут быть конъюгированы с антителом. В данном документе метка представляет собой фрагмент, который облегчает обнаружение антитела и/или облегчает обнаружение молекулы, с которой связывается антитело. Неограничивающие иллюстративные метки включают, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, флуоресцентные группы, ферментные группы, хемилюминесцентные группы, биотин, эпитопные метки, металлсвязывающие метки и т.д. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую метку в соответствии с конкретным применением.
[00279] Используемое в данном документе цитотоксическое средство представляет собой фрагмент, который уменьшает пролиферативную способность одной или более клеток. Клетка обладает пониженной пролиферативной способностью, когда клетка становится менее способной к пролиферации, например, потому что клетка подвергается апоптозу или иным образом умирает, клетка не проходит через клеточный цикл и/или не может делиться, клетка дифференцируется и т.д. Неограничивающие типичные цитотоксические средства включают в себя, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, токсины и химиотерапевтические средства. Специалист в данной области техники может выбрать подходящее цитотоксическое средство в соответствии с предполагаемым применением. В некоторых вариантах осуществления цитотоксическое средство представляет собой по меньшей мере одно из антиметаболитов, алкилирующих агентов, антибиотиков, факторов роста, цитокинов, антиангиогенных средств, антимитотических средств, антрациклинов, токсинов или апоптотического средства.
[00280] В некоторых вариантах осуществления метка и/или цитотоксическое средство конъюгированы с антителом с использованием химических способов in vitro. Неограничивающие иллюстративные химические способы конъюгации известны в данной области техники и включают услуги, методы и/или реагенты, коммерчески доступные, например, от Thermo Scientific Life Science Research Productions (ранее Pierce; г. Рокфорд, штат Иллинойс, США), Prozyme (г. Хэйворд, Калифорния, США), SACRI Antibody Services (г. Калгари, Канада), AbD Serotec (г. Роли, штат Северная Каролина, США) и т.п. В некоторых вариантах осуществления когда метка и/или цитотоксическое средство представляют собой полипептид, метка и/или цитотоксическое средство могут быть экспрессированы из одного и того же экспрессионного вектора по меньшей мере с одной цепью антитела для получения полипептида, содержащего метку и/или цитотоксическое средство, слитое с цепью антитела. Специалист в данной области техники может выбрать подходящий способ конъюгирования метки и/или цитотоксического средства с антителом в соответствии с предполагаемым применением.
[00281] В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть ковалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгация может быть нековалентной. В некоторых вариантах осуществления конъюгирование может осуществляться посредством специфического связывающего взаимодействия, например посредством связывания вторичного антитела.
Иллюстративные лидерные последовательности
[00282] Для того чтобы некоторые секретируемые белки экспрессировались и секретировались в больших количествах, может быть желательным использование лидерной последовательности из гетерологичного белка. В некоторых вариантах осуществления использование гетерологичных лидерных последовательностей может быть выгодным тем, что полученный зрелый полипептид может оставаться неизменным, поскольку лидерная последовательность удаляется в ER во время процесса секреции. Добавление гетерологичной лидерной последовательности может быть полезным для экспрессии и секреции некоторых белков.
[00283] Некоторые иллюстративные лидерные последовательности описаны, например, в онлайн базе данных лидерных последовательностей, поддерживаемой факультетом биохимии Национального университета Сингапура. См. Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005) и публикацию РСТ № WO 2006/081430.
III. Экспрессия и продуцирование антител
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие анти-PD-1-антитела
[00284] В данном документе представлены молекулы нуклеиновых кислот, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют одну или более цепей анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит как полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, так и полинуклеотид, который кодирует легкую цепь, анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления первая молекула нуклеиновой кислоты содержит первый полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, а вторая нуклеиновая кислота содержит второй полинуклеотид, который кодирует легкую цепь.
[00285] В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из одной молекулы нуклеиновой кислоты или из двух отдельных молекул нуклеиновых кислот в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах, например, когда антитело представляет собой scFv, один полинуклеотид кодирует один полипептид, содержащий как тяжелую цепь, так и легкую цепь, связанные вместе.
[00286] В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 3 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере 6 из CDR, предложенных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь анти-PD-1-антитела, содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует лидерную последовательность, которая при трансляции находится на N-конце тяжелой цепи или легкой цепи. Как обсуждалось выше, лидерная последовательность может быть нативной лидерной последовательностью тяжелой или легкой цепи, или может быть другой гетерологичной лидерной последовательностью.
[00287] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, которая кодирует любую из аминокислотных последовательностей для антител в приведенной в данном документе таблице последовательностей. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеиновой кислоте, кодирующей любую из аминокислотных последовательностей для антител в таблице последовательностей, приведенной в данном документе, например идентична по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой кислоту, которая гибридизуется с любой одной или более последовательностями нуклеиновой кислоты, представленными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в нормальных условиях. В некоторых вариантах осуществления гибридизация происходит в очень жестких условиях, таких как: по меньшей мере около 6X SSC и 1% SDS при 65°C, с первой промывкой в течение 10 минут при около 42°C с около 20% (об./об.) формамида в 0,1X SSC и с последующей промывкой 0,2X SSC и 0,1% SDS при 65°C.
[00288] Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть сконструированы с использованием методов рекомбинантной ДНК, известных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота представляет собой экспрессионный вектор, который подходит для экспрессии в выбранной клетке-хозяине.
[00289] Предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Также предложены векторы, содержащие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела. Такие векторы включают, но не ограничиваются ими, ДНК-векторы, фаговые векторы, вирусные векторы, ретровирусные векторы и т.д. В некоторых вариантах осуществления вектор содержит первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются из вектора в виде двух отдельных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются как часть одного полипептида, такого как, например, когда антитело является scFv.
[00290] В некоторых вариантах осуществления первый вектор содержит полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и второй вектор содержит полинуклеотид, который кодирует легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления первый вектор и второй вектор трансфицируют в клетки-хозяева в близких количествах (таких как близкие молярные количества или близкие массовые количества). В некоторых вариантах осуществления мольное или массовое соотношение находятся между 5:1 и 1:5 первого вектора и второго вектора трансфицируемых в клетки-хозяева. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение между 1:1 и 1:5 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления используется массовое соотношение 1:2 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь.
[00291] В некоторых вариантах осуществления выбран вектор, который оптимизирован для экспрессии полипептидов в клетках СНО или СНО-производных, или в клетках NSO. Типичные векторы описаны, например, в Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004).
Клетки-хозяева
[00292] В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессироваться в клетках прокариотов, таких как клетки бактерий; или в клетках эукариотов, таких как клетки грибов (такие как дрожжи), клетки растений, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Такая экспрессия может быть выполнена, например, в соответствии с процедурами, известными в данной области техники. Иллюстративные клетки эукариотов, которые можно использовать для экспрессии полипептидов, включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, включая клетки COS 7; клетки 293, включая клетки 293-6E; клетки CHO, включая CHO-S, DG44, клетки СНО Lec13 и клетки СНО FUT8; клетки PER.C6® (Crucell) и клетки NSO. В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи анти-PD-1-антитела и/или легкие цепи анти-PD-1-антитела могут экспрессировать в дрожжах. См., например, патентную публикацию США № US 2006/0270045 A1. В некоторых вариантах осуществления конкретная эукариотическая клетка-хозяин выбирается на основании ее способности производить желательные посттрансляционные модификации тяжелых цепей анти-PD-1-антитела и/или легких цепей анти-PD-1-антитела. Например, в некоторых вариантах осуществления клетки СНО продуцируют полипептиды, которые имеют более высокий уровень сиалилирования, чем тот же полипептид, продуцируемый в клетках 293.
[00293] Введение одной или более нуклеиновых кислот в желаемую клетку-хозяина может быть осуществлено любым способом, включая, но не ограничиваясь ими, трансфекцию, опосредованную фосфатом кальция, трансфекцию, опосредованную DEAE-декстраном, трансфекцию, опосредованную катионными липидами, электропорацию, трансдукцию, инфекцию и т.д. Неограничивающие иллюстративные способы описаны, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Нуклеиновые кислоты могут быть временно или стабильно трансфицированы в желаемых клетках-хозяевах в соответствии с любым подходящим способом.
[00294] Также предусмотрены клетки-хозяева, содержащие любой из полинуклеотидов или векторов, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления предоставляется клетка-хозяин, содержащая анти-PD-1-антитело. Любые клетки-хозяева, способные сверхэкспрессировать гетерологичные ДНК, могут быть использованы с целью выделения генов, кодирующих антитело, полипептид или интересующий белок. Неограничивающие примеры клеток-хозяев млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки COS, HeLa и CHO. См. также публикацию PCT № WO 87/04462. Подходящие клетки-хозяева немлекопитающих включают прокариоты (такие как E. coli или B. subtillis) и дрожжи (такие как S. cerevisae, S. pombe или K. lactis).
Очистка антител
[00295] Анти-PD-1-антитела могут быть очищены любым подходящим способом. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, использование аффинных матриц или хроматографию гидрофобного взаимодействия. Подходящие аффинные лиганды включают ECD ROR1 и лиганды, которые связывают константные области антител. Например, для связывания константной области и очистки анти-PD-1-антитела можно использовать колонку с белком A, белком G, белком A/G или аффинную колонку с антителом. Гидрофобная интерактивная хроматография, например бутильная или фенильная колонка, также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Ионообменная хроматография (например, анионообменная хроматография и/или катионообменная хроматография) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. Хроматография в смешанном режиме (например, обращенная фаза/анионный обмен, обращенная фаза/катионный обмен, гидрофильное взаимодействие/анионный обмен, гидрофильное взаимодействие/катионный обмен и т.д.) также может подходить для очистки некоторых полипептидов, таких как антитела. В данной области техники известны многие способы очистки полипептидов.
Бесклеточное продуцирование антител
[00296] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело продуцируется в бесклеточной системе. Неограничивающие иллюстративные бесклеточные системы описаны, например, в Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003).
Композиции
[00297] В некоторых вариантах осуществления изобретения предлагаются антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления антитело получают в бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления антитело является очищенным. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, представляет собой антитело человека. В некоторых вариантах предлагается среда для культивирования клеток, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления предлагается жидкость для культивирования клеток-хозяина, содержащая анти-PD-1-антитело.
[00298] В некоторых вариантах осуществления предлагаются композиции, содержащие антитела, полученные способами, описанными выше. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело, полученное в бесклеточной системе. В некоторых вариантах композиция содержит очищенное антитело. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.
[00299] В некоторых вариантах осуществления предлагается композиция, содержащая анти-PD-1-антитело в концентрации более чем около любая из 10 мг/мл, 20 мг/мл, 30 мг/мл, 40 мг/мл, 50 мг/мл, 60 мг/мл, 70 мг/мл, 80 мг/мл, 90 мг/мл, 100 мг/мл, 125 мг/мл, 150 мг/мл, 175 мг/мл, 200 мг/мл, 225 мг/мл или 250 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит химерное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гуманизированное антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит антитело человека, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе.
IV. Терапевтические композиции и способы
Способы лечения заболеваний с использованием анти-PD-1-антител
[00300] Предложены антитела и композиции, содержащие антитела, для использования в способах лечения человека или животных. Также предложены способы лечения заболевания, включающие введение анти-PD-1-антител. Неограничивающие иллюстративные заболевания, которые можно лечить анти-PD-1-антителами, включают, но не ограничиваются раком.
[00301] В некоторых вариантах осуществления предложен способ лечения рака, причем клетки в образце опухоли экспрессируют PD-L1. В некоторых таких вариантах осуществления опухоль может считаться PD-L1-положительной или экспрессировать PD-L1. Экспрессия PD-L1 может быть определена с помощью ИГХ анализа, например, как обсуждено в данном документе. В некоторых вариантах осуществления считается, что опухоль экспрессирует PD-L1, когда образец опухоли демонстрирует окрашивание 1+, 2+ или 3+ PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли демонстрирует 2+ или 3+ окрашивание PD-L1 посредством ИГХ. В некоторых вариантах осуществления образец опухоли субъекта анализируют на экспрессию PD-L1, и субъекта отбирают для лечения антителом, описанным в данном документе, если образец опухоли демонстрирует экспрессию PD-L1. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают, если образец опухоли демонстрирует повышенную экспрессию PD-L1.
[00302] В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1HIGH. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-L1LOW. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1HIGH/PD-L1LOW. В некоторых вариантах осуществления субъекта выбирают для лечения анти-PD-1-антителом, представленным в данном документе, если опухоль субъекта представляет собой PD-1HIGH/PD-L1HIGH.
[00303] Анти-PD-1-антитело можно вводить субъектам при необходимости. Специалисты в данной области техники могут определить частоту введения, например, лечащий врач, на основании соображений о состоянии, которое лечат, возраста субъекта, которого лечат, тяжести состояния, которое лечат, общего состояния здоровья субъекта, которого лечат и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один или более раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту один раз в месяц, реже одного раза в месяц, например, каждые два месяца или каждые три месяца. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу анти-PD-1-антитела вводят менее одного раза в месяц, например, один раз каждые три недели, один раз каждые две недели или один раз каждую неделю. Эффективная доза анти-PD-1-антитела вводится субъекту по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза анти-PD-1-антитела может вводиться большее количество раз, в том числе в течение периодов по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере шести месяцев или по меньшей мере года.
[00304] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.
[00305] Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для усиления иммунного ответа и/или увеличения активации Т-клеток у субъекта.
[00306] Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.
Фармацевтические композиции
[00307] В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие анти-PD-1-антитела, предложены в композициях с широким разнообразием фармацевтически приемлемых носителей (см., например, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). Доступны различные фармацевтически приемлемые носители, которые включают носители, адъюванты и разбавители. Кроме того, также доступны различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН и буферные агенты, регуляторы тоничности, стабилизаторы, смачивающие агенты и тому подобное. Неограничивающие типичные носители включают физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации.
[00308] В некоторых вариантах осуществления предлагается фармацевтическая композиция, содержащая анти-PD-1-антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит антитело, полученное в клетке-хозяине или бесклеточной системе, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель.
[00309] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения (включая профилактику) рака. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса субъекта, которого лечат, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени распространенности состояния, которое лечат, или возраста субъекта, которого лечат. В общем, анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,05 мг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить в количестве в диапазоне около 5 мг/кг массы тела или ниже, например менее 4, менее 3, менее 2 или менее 1 мг/кг.
[00310] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела могут присутствовать в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. Например, в некоторых вариантах осуществления доза для человека весом 20 кг может находиться в диапазоне от около 1 мг до около 100 мг. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 2 мг до 200 мг анти-PD-1-антитела. В некоторых вариантах осуществления доза может находиться в диапазоне от 10 мг до 400 мг анти-PD-1-антитела.
Способы введения
[00311] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела можно вводить in vivo различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, внутривенный, внутриартериальный, парентеральный, внутриопухолевый, внутрибрюшинный или подкожный. Соответствующий состав и способ введения могут быть выбраны в соответствии с предполагаемым применением
Комбинированная терапия
[00312] Анти-PD-1-антитела можно вводить отдельно или с другими способами лечения. Они могут быть введены до, по существу одновременно и/или после других способов лечения, например хирургического вмешательства, химиотерапии, лучевой терапии или введения биологического средства, такого как другое терапевтическое антитело. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят в комбинации с другим противораковым средством.
[00313] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят одновременно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средства вводят с временным интервалом не более около 60 минут, например не более около 30, 15, 10, 5 или 1 минуты. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят последовательно со вторым терапевтическим средством. Например, два или более терапевтических средств вводят с временным разделением более чем около 15 минут, например около 20, 30, 40, 50 или 60 минут, 1 день, 2 дня, 3 дня 1 неделя, 2 недели или 1 месяц или дольше.
[00314] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят со вторым терапевтическим способом лечения. Таким образом, введение антитела, представленного в данном документе, может производиться в сочетании с другой системой лечения.
[00315] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-ICOS-терапией. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с антителом, которое связывает индуцибельный Т-клеточный костимулятор (ICOS). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с выделенным антителом, которое связывает ICOS, причем анти-ICOS-антитело является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ T эффекторные (Teff) клетки). В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, является агонистом CD4+ T-клеток (таких как CD4+ Teff) и истощает T-регуляторные (Treg) клетки. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, истощает клетки Treg, но не истощает клетки Teff. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, индуцирует передачу сигнала pAKT на CD4+ T-клетки и истощает клетки Treg. В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ICOS, содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 326; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 327; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 328; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 329; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 330; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 331; или
ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 334; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 335; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 336; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 338; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 339; или
iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 343; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 344; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 345; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 346; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 347; или
iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 350; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 351; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 352; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 353; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 354; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 355; или
v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 358; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 360; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 362; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 363; или
vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 366; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 367; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 368; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 369; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 370; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 371; или
vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374; (b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375; (c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 376; (d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 377; (e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378; и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.
В некоторых вариантах осуществления предлагается антитело, которое связывается с ICOS, причем антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), при этом:
i) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 324 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 325; или
ii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 332 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 333; или
iii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 340 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 341; или
iv) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 348 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 349; или
v) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 356 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 357; или
vi) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 364 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 365; или
vii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 372 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 373.
[00316] Обычно анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 10 мкг/кг массы тела до около 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 50 мкг/кг массы тела до около 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 100 мкг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-ICOS-антитела можно вводить в количестве в диапазоне от около 0,5 мг/кг массы тела до около 20 мг/кг массы тела на дозу.
[00317] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с агонистическим анти-OX40-антителом (таким как Medi6469, MedImmune; MOXR0916/RG7888, Roche). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят с анти-CTLA4-антителом (таким как ипилимумаб, YERVOY®, BMS).
[00318] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство. Типичные химиотерапевтические средства, которые могут быть скомбинированы с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, капецитабин, циклофосфамид, дакарбазин, темозоломид, циклофосфамид, доцетаксел, доксорубицин, даунорубицин, цисплатин, карбоплатин, эпирубицин, эрибулин, 5-ФУ, гемцитабин, иринотекан, иксабепилон, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, наб-паклитаксел, ABRAXANE® (связанный с белками паклитаксел), пеметрексед, винорелбин и винкристин. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят по меньшей мере с одним ингибитором киназы. Неограничивающие типичные ингибиторы киназы включают эрлотиниб, афатиниб, гефитиниб, кризотиниб, дабрафениб, траметиниб, вемурафениб и кобиметаниб.
[00319] В некоторых вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой ингибитор IDO. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO описаны, например, в US 2016/0060237 и US 2015/0352206. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы IDO включают индоксимод (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp), 1-метил-D-триптофан (New Link Genetics) и GDC-0919 (Genentech).
[00320] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в комбинации с иммуномодулирующим лекарственным средством (IMiD). Неограничивающие иллюстративные IMiD включают талидомид, леналидомид и помалидомид.
[00321] В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковую вакцину. Противораковые вакцины были исследованы как потенциальный подход для переноса антигена и активации дендритных клеток. В частности, вакцинация в сочетании с иммунологическими контрольными точками или агонистами для костимуляторных путей показала доказательства преодоления толерантности и генерирования повышенного противоопухолевого ответа. Был протестирован ряд противораковых вакцин, в которых используются различные подходы для стимулирования иммунного ответа против опухоли (см., например, Emens LA, Expert Opin Emerg Drugs 13(2): 295-308 (2008)). Были разработаны подходы для усиления ответа В-клеток, Т-клеток или профессиональных антигенпрезентирующих клеток против опухолей. Иллюстративные типы противораковых вакцин включают, но не ограничиваются ими, вакцины на основе пептидов, в которых применяют нацеливание на отдельные опухолевые антигены, которые могут доставляться в виде пептидов/белков или в виде генно-инженерных ДНК-векторов, вирусов, бактерий или тому подобного; и подходы клеточной биологии, например, для разработки противораковых вакцин против менее четко определенных мишеней, включая, но не ограничиваясь ими, вакцины, разработанные из дендритных клеток, полученных от пациентов, аутологичных опухолевых клеток или лизатов опухолевых клеток, аллогенных опухолевых клеток и тому подобное.
[00322] Таким образом, в определенных вариантах осуществления анти-PD-1-антитела, представленные в данном документе, можно использовать в комбинации с противораковой вакциной. Типичные противораковые вакцины включают, но не ограничиваются ими, вакцины из дендритных клеток, онколитические вирусы, вакцины из опухолевых клеток и т.д. В некоторых вариантах осуществления такие вакцины усиливают противоопухолевый ответ. Примеры противораковых вакцин, которые можно использовать в комбинации с анти-PD-1-антителами, представленными в данном документе, включают, но не ограничиваются ими, вакцину MAGE3 (например, для лечения меланомы и рака мочевого пузыря), вакцину MUC1 (например, для лечения рака молочной железы), EGFRv3 (например, Rindopepimut, например, для лечения рака головного мозга, включая мультиформную глиобластому), или ALVAC-CEA (например, для лечения рака CEA+).
[00323] Неограничивающие типичные противораковые вакцины также включают Sipuleucel-T, который получают из аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), которые включают в себя антигенпрезентирующие клетки (см., например, Kantoff PW et al., N Engl J Med 363:411-22 (2010)). В поколении Sipuleucel-T МКПК пациента активируются ex vivo с помощью PA2024, рекомбинантного белка слияния фосфатазы простатической кислоты (антиген простаты) и колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов (активатор иммунных клеток). Другой подход к потенциальной противораковой вакцины заключается в создании иммунного ответа против специфических пептидов, мутированных в опухолевой ткани, такой как меланома (см., например, Carreno BM et al., Science 348:6236 (2015)). Такие мутированные пептиды могут в некоторых вариантах осуществления называться неоантигенами. В качестве неограничивающего примера использования неоантигенов в противоопухолевых вакцинах, неоантигены в опухоли, для которых предсказано связывание с основным белком комплекса гистосовместимости HLA-A*02:01, идентифицированы для отдельных пациентов с раковым заболеванием, таким как меланома. Дендритные клетки пациента созревают ex vivo, затем инкубируются с неоантигенами. Затем активированные дендритные клетки вводят пациенту. В некоторых вариантах осуществления после введения противораковой вакцины обнаруживается устойчивый Т-клеточный иммунитет против неоантигена.
[00324] В некоторых таких вариантах осуществления противораковая вакцина разработана с использованием неоантигена. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой ДНК-вакцину. В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой сконструированный вирус, содержащий раковый антиген, такой как PROSTVAC (рилимоген галвасирепвек/рилимоген глафоливек). В некоторых вариантах осуществления противораковая вакцина, такая как GVAX, включает в себя сконструированные опухолевые клетки, и представляет собой вакцину с опухолевыми клетками трансфицированными геном гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) (см., например, Nemunaitis, 2005, Expert Rev Vaccines, 4: 259-74).
[00325] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, описанное в данном документе, вводят до, одновременно и/или после противораковой вакцины. В некоторых вариантах осуществления противораковые вакцины, разработанные с использованием неоантигенов, используют в комбинации с анти-PD-1-антителами, описанными в данном документе. В некоторых таких вариантах осуществления комбинация используется для лечения рака с высокой мутационной нагрузкой, такого как меланома, рак легких, рак мочевого пузыря или колоректальный рак.
[00326] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело, представленное в данном документе, вводят в сочетании с терапией химерным антигенным рецептором с Т-клетками (терапия CAR-T).
Диагностическое использование
[00327] В данном документе представлены способы использования анти-PD-1-антител, полипептидов и полинуклеотидов для выявления, диагностики и мониторинга заболевания, расстройства или состояния, связанного с экспрессией эпитопа анти-PD-1-антитела (либо увеличенной, либо уменьшенной относительно нормального образца и/или несоответствующей экспрессией, такой как наличие экспрессии в ткани(-ях) и/или клетке(-ах), в которых обычно отсутствует экспрессия эпитопа). В данном документе представлены способы определения того, будет ли пациент отвечать на терапию анти-PD-1-антителом.
[00328] В некоторых вариантах осуществления способ включает определение наличия у пациента клеток, которые экспрессируют PD-1, с использованием анти-PD-1-антител. В некоторых вариантах осуществления способ обнаружения включает приведение в контакт образца с антителом, полипептидом или полинуклеотидом и определение того, отличается ли уровень связывания от уровня эталонного или сравнительного образца (такого как контроль). В некоторых вариантах осуществления способ может быть полезен для определения, являются ли антитела или полипептиды, описанные в данном документе, подходящим лечением для субъекта.
[00329] В некоторых вариантах осуществления клетки или лизат клетки/ткани приводят в контакт с анти-PD-1-антителом, и определяют связывание между антителом и клеткой. Когда тестируемые клетки проявляют активность связывания по сравнению с контрольной клеткой того же типа ткани, это может указывать на то, что субъект получит пользу от лечения анти-PD-1-антителом. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из тканей человека. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки взяты из крови человека.
[00330] Могут быть использованы различные способы, известные в данной области техники, для выявления специфического связывания антитело-антиген. Типичные иммуноанализы, которые могут быть проведены, включают флуоресцентный поляризационный иммуноанализ (FPIA), флуоресцентный иммуноанализ (FIA), иммуноферментный анализ (EIA), нефелометрический иммуноферментный анализ ингибирования(NIA), иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA). Индикаторный фрагмент или группа-метка может быть присоединена к рассматриваемым антителам и выбирается так, чтобы удовлетворить потребности различных применений способа, которые часто продиктованы наличием оборудования для анализа и совместимых процедур иммуноанализа. Подходящие метки включают, без ограничения, радионуклиды (например, 125I, 131I, 35S, 3H или 32P), ферменты (например, щелочную фосфатазу, пероксидазу хрена, люциферазу или β-галактозидазу), флуоресцентные фрагменты или белки (например флуоресцеин, родамин, фикоэритрин, GFP или BFP) или люминесцентные фрагменты (например, наночастицы Qdot™, поставляемые Quantum Dot Corporation, г. Пало-Альто, Калифорния, США). Общие методики, которые должны использоваться при выполнении различных иммуноанализов, отмеченных выше, известны средним специалистам в данной области техники.
[00331] В целях диагностики включающий антитела полипептид может быть мечен детектируемым фрагментом, включая, но не ограничиваясь ими, радиоизотопы, флуоресцентные метки и различные фермент-субстратные метки, известные в данной области техники. Способы конъюгирования меток с антителами известны в данной области техники.
[00332] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитела не нужно метить, и их присутствие можно обнаружить с использованием второго меченого антитела, которое связывается с первым анти-PD-1-антителом.
[00333] В некоторых вариантах осуществления анти-PD-1-антитело можно использовать в любом известном способе анализа, таком как анализах конкурентного связывания, прямом и непрямом сэндвич-анализах и анализах иммунопреципитации. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
[00334] Антитела и полипептиды против PD-1 также можно использовать для диагностических анализов in vivo, таких как визуализация in vivo. Как правило, антитело или полипептид метят радионуклидом (таким как 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H или любой другой радионуклидной меткой, включая те, что указаны в данном документе), так что интересующие клетки или ткани могут быть локализованы с использованием иммуносцинтиграфии.
[00335] Антитело также можно использовать в качестве окрашивающего реагента в лаборатории патологии с использованием методик, хорошо известных в данной области техники.
[00336] В некоторых вариантах осуществления первое антитело используется для диагностики, а второе антитело используется в качестве терапевтического. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела являются разными. В некоторых вариантах осуществления первое антитело является нечеловеческим антителом, а терапевтическое антитело является антителом человека. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела могут одновременно связываться с антигеном посредством связывания с отдельными эпитопами.
Наборы/Готовые изделия
[00337] В данном документе также представлены наборы, лекарственные средства, композиции и стандартные лекарственные формы для использования в любом из способов, описанных в данном документе.
[00338] Наборы могут включать один или более контейнеров, содержащих анти-PD-1-антитело (или стандартные лекарственные формы и/или изделия). В некоторых вариантах осуществления предложена стандартная дозировка, причем стандартная дозировка содержит заранее определенное количество композиции, содержащей анти-PD-1-антитело, с одним или более дополнительными агентами или без них. В некоторых вариантах осуществления такая стандартная дозировка поставляется в одноразовом предварительно заполненном шприце для инъекции. В некоторых вариантах осуществления композиция, содержащаяся в стандартной дозировке, может включать физиологический раствор, сахарозу или тому подобное; буфер, такой как фосфат или тому подобное; и/или быть составлена в стабильном и эффективном диапазоне рН. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть представлена в виде лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен после добавления подходящей жидкости, например стерильной воды. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более веществ, которые ингибируют агрегацию белка, включая, но не ограничиваясь ими, сахарозу и аргинин. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит гепарин и/или протеогликан.
[00339] В некоторых вариантах осуществления количество анти-PD-1-антитела, используемого в стандартной дозе, может быть любым из количеств, предложенных в данном документе для различных описанных способов и/или композиций.
[00340] В некоторых вариантах осуществления наборы дополнительно содержат инструкции по применению для лечения рака в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе. Набор может дополнительно содержать описание выбора подходящего индивидуума или лечения. Инструкции, поставляемые в наборах, обычно представляют собой письменные инструкции на этикетке или вкладыше в упаковку (например, лист бумаги, входящий в комплект), но машиночитаемые инструкции (например, инструкции, хранящиеся на магнитном или оптическом диске) также приемлемы. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит другое терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело, например, как описано в данном документе, или анти-CTLA4-антитело.
[00341] Наборы находятся в подходящей упаковке. Подходящая упаковка включает, но не ограничивается ими, флаконы, бутылки, банки, гибкую упаковку (например, герметичные майларовые или пластиковые пакеты) и тому подобное. Наборы могут дополнительно содержать дополнительные компоненты, такие как буферы и интерпретирующая информация. Таким образом, настоящая заявка также предлагает изделия, которые включают флаконы (такие как герметичные флаконы), бутылки, банки, гибкую упаковку и тому подобное.
ПРИМЕРЫ
[00342] Приведенные ниже примеры предназначены исключительно для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Примеры не предназначены для представления того, что приведенные ниже эксперименты являются всеми или единственными проведенными экспериментами. Были предприняты усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), но следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой средневесовую молекулярную массу, температура выражена в градусах Цельсия, а давление равно атмосферному давлению или близко к нему.
Пример 1. Получение анти-PD-1-антител
[00343] Восемь наивных синтетических дрожжевых библиотек человека, каждая из которых имеет ~109 разнообразия, были сконструированы, созданы и размножены, как описано ранее (see, e.g., WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; Xu et al., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70) В течение первых 2 этапов отбора была проведена методика сортировки магнитными гранулами с использованием системы Miltenyi MAC, по существу как описано (Siegel et al., J Immunol Methods. 2004 Mar;286(1-2):141-53) Вкратце, дрожжевые клетки (~1010 клеток/библиотеку) инкубировали с 3 мл 10 нМ биотинилированного антигена слияния человеческого PD-1-Fc в течение 15 минут при комнатной температуре в промывочном буфере PBS для FACS с 0,1% BSA (биотинилирование проводили с использованием набора EZ-Link сульфо-NHS-биотинилирования, Thermo Scientific, кат. №21425). После однократной промывки 50 мл ледяного промывочного буфера осадок клеток ресуспендировали в 40 мл промывочного буфера и 500 мкл стрептавидиновых микроносителей (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-048-101) добавляли к дрожжам и выдерживали в течение 15 мин при 4°С. Затем дрожжи осаждали, ресуспендировали в 5 мл промывочного буфера и загружали на колонку MACS LS (Miltenyi Biotec, г. Бергиш-Гладбах, Германия, кат. № 130-042-401). После загрузки 5 мл на колонку, ее промывали 3 раза 3 мл промывочного буфера FACS. Колонку затем удаляли из магнитного поля и дрожжи элюировали 5 мл питательной среды и затем выращивали в течение ночи. Следующие три раунда сортировки были выполнены с использованием проточной цитометрии. Приблизительно 1×108 дрожжей осаждали, трижды промывали промывочным буфером и инкубировали с 200, 100 или 10 нМ биотинилированного PD-1 человека или 10 нМ или 1 нМ биотинилированного антигена слияния человека PD-1-Fc от 10 минут до 2 часов при комнатной температуре. Время инкубации зависит от концентрации антигена. Затем дрожжи дважды промывали и окрашивали козьим анти-человеческим F(ab')2 каппа-FITC, разведенным 1:100 (Southern Biotech, г. Бирмингем, штат Алабама, США, кат. № 2062-02) и либо стрептавидином-Alexa Fluor 633 (Life Technologies, Гранд Айленд, г. Нью-Йорк, США, кат. № S21375), разведенным 1:500, или экстравидином-фикоэртирином (Sigma-Aldrich, г. Сент-Луис, кат. № E4011), разведенным 1:50, вторичными реагентами в течение 15 мин при 4°C. После промывки дважды ледяным промывочным буфером клеточные осадки ресуспендировали в 0,4 мл промывочного буфера и переносили в сортировочные пробирки с крышками-фильтрами. Сортировку проводили с использованием сортировщика FACS ARIA (BD Biosciences) и определяли сортировочные гейты для отбора только клонов, связывающих PD-1, для двух раундов. В зависимости от популяций третий раунд был отрицательной сортировкой, чтобы уменьшить количество связующих реагентов или дальнейшее положительное обогащение. После последнего раунда сортировки дрожжи высевали и отбирали отдельные колонии для определения характеристик.
[00344] Популяция связывания раунда 5 или раунда 6 использовалась для диверсификации легкой цепи. Плазмиду тяжелой цепи экстрагировали и трансформировали в библиотеку легкой цепи с разнообразием 1×106. Отборы осуществляли, как описано выше, с одним раундом сортировки MACS и тремя раундами сортировки FACS с использованием различных концентраций биотинилированного антигена.
Созревание аффиности
[00345] Оптимизацию связывания наивных пробных перестановочных клонов легкой цепи проводили с использованием диверсификации CDRH1 и CDRH2.
[00346] Отбор CDRH1 и CDRH2: CDRH3 из клонов, отобранных в результате процедуры диверсификации легких цепей (пробные перестановочные клоны легкой цепи), были рекомбинированы в предварительно созданную библиотеку с вариантами CDRH1 и CDRH2 с разнообразием 1×108, и отбор проводился с использованием антигена PD-1, как описано выше. Давление аффинности применяли путем титрования биотинилированного антигена до субнаномолярных концентраций и инкубации с дрожжами, презентующими антитела.
Продуцирование и очистка антител
[00347] Клоны дрожжей выращивали до насыщения и затем индуцировали в течение 48 ч при 30°С при встряхивании. После индукции дрожжевые клетки осаждали и супернатанты собирали для очистки. IgG очищали с использованием колонки с белком А и элюировали уксусной кислотой, рН 2,0. Fab-фрагменты были получены путем расщепления папаином и очищены на KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences, кат. № 17-5458-01).
Измерения аффинности анти-PD-1-антител
[00348] Аффинность антител к PD-1 определяли путем измерения их KD с помощью ForteBio или MSD-SET. Измерения аффинности ForteBio выполняли, в целом, как описано ранее (Estep et al., MAbs. 2013 Mar-Apr; 5(2):270-8). Вкратце, измерения аффинности ForteBio выполняли, нагружая IgG онлайн на сенсоры AHQ. Сенсоры уравновешивали офлайн в буфере для анализа в течение 30 минут и затем контролировали в режиме онлайн в течение 60 секунд для установления исходного уровня. Сенсоры с нагруженными IgG подвергали воздействию 100 нМ антигена в течение 5 минут, после чего их переносили в буфер для анализа на 5 минут для измерения скорости диссоциации. Кинетику анализировали с использованием модели связывания 1:1.
[00349] Измерения равновесной аффинности выполняли, как описано ранее (Estep et al., 2013). Равновесное титрование в растворе (SET) проводили в PBS + 0,1% BSA, не содержащем IgG (PBSF), с постоянно поддерживаемой концентрацией антигена на уровне 50 пМ и инкубировали с 3-5-кратными серийными разведениями антител, начиная с 10 нМ. Антитела (20 нМ в PBS) наносили на стандартные планшеты для связывания MSD-ECL в течение ночи при 4°C или при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем планшеты блокировали в течение 30 минут при встряхивании при 700 об/мин, после чего трижды промывали промывочным буфером (PBSF + 0,05% Tween 20). Образцы SET наносили и инкубировали на планшетах в течение 150 секунд при встряхивании при 700 об/мин с последующей одной промывкой. Антиген, захваченный на планшете, детектировали с меченным сульфотагом стрептавидином в концентрации 250 нг/мл в PBSF путем инкубации на планшете в течение 3 минут. Планшеты трижды промывали промывочным буфером и затем считывали на приборе MSD Sector Imager 2400, используя 1x считывающий буфер T с поверхностно-активным веществом. Процент свободного антигена наносили на график как функцию титрованного антитела в Prism и подбирали квадратное уравнение для определения KD. Для повышения производительности в ходе экспериментов MSD-SET, включая подготовку образцов SET, использовались роботы для работы с жидкостями. В таблице 1 приведены результаты измерений аффинности с помощью ForteBio.
Таблица 1
Антитело PD-1 человека моновалентная аффиность (KD) PD-1 мыши моновалентная аффиность (KD)
mAb 1 (12228) 49 нМ 6,3 нМ
mAb 2 (13405) 73 нМ 7,2 нМ
mAb 3 (13406) 3,2 нМ 3,5 нМ
mAb 4 (13407) 3,9 нМ 3,2 нМ
mAb 5 (13408) 1,2 нМ 5,3 нМ
Пример 2. Ответ активированных спленоцитов мыши на анти-PD-1-антитела
[00350] Когда Т-клетки мыши, полученные из спленоцитов, активируются анти-CD3-антителами и анти-CD28-антителами, они экспрессируют молекулу клеточной поверхности и секретируют растворимую молекулу интерферона-гамма (IFNγ). Блокирующие антитела к PD-1 вызывают увеличение выработки IFNγ. Спленоциты мыши были получены и инкубированы с растворимыми анти-CD3 и анти-CD28 антителами. Через 5 дней их смешивали с равным количеством Т-клеток, очищенных из свежеприготовленных спленоцитов и анти-PD-1-антител в различных концентрациях. Положительные и отрицательные контрольные антитела RMP1-14, 2A3 и C1.18.4 были приобретены у BioXCell. Через 24 часа супернатанты собирали и концентрации IFNγ измеряли мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов. Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IFNγ аналогично эталонным антителам. См. Фиг 1. По меньшей мере антитела 12191, 13396, 13398, 13399, 12195, 13406, 13407, 13408 и 13409 значительно повышали экспрессию IFNγ. Антитела 13396, 13399, 12195, 13406, 13407 и 13408 вызывали наибольшее увеличение экспрессии IFNγ.
Пример 3. Активированные периферические мононуклеарные клетки крови человека отвечают на анти-PD-1-антитела
[00351] Было показано, что образцы цельной крови, активированные стафилококковым энтеротоксином B (SEB), реагируют на блокаду иммунной контрольной точки с использованием анти-PD-1-антитела, что измерено по увеличению секреции IL-2 (см., например, EP2170959B1). Анти-PD-1-антитела готовили в диапазоне концентраций и добавляли в лунки 96-луночных планшетов. Цельную кровь от четырех доноров разводили 1:10 в полной среде RPMI и добавляли в те же лунки. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут перед добавлением 50 мкл SEB на лунку в концентрации 40 мкг/мл до конечной концентрации 10 мкг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 4 дней и супернатанты собирали для измерения секретируемого IL-2 мультиплексным анализом с гранулами для определения цитокинов (CBA). Анти-PD-1-антитела, раскрытые в данном документе, были способны увеличивать выработку IL-2 из данных культур до того же уровня, что и контрольные анти-PD-1-антитела. На Фиг. 2 показано значение EC50 данного увеличения для каждого протестированного антитела в четырех образцах, взятых у здоровых доноров.
Пример 4. Блокирование антителами связывания мышиного PD-L1 и мышиного PD-L2 с мышиным PD-1
[00352] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека, хотя ни одно это антитело не связывается с PD-1 мыши, ни блокирует взаимодействие PD-1 мыши с PD-L1 мыши или PD-L2 мыши. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 мыши и PD-1 мыши и между PD-L2 мыши и PD-1 мыши. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc мыши разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимое изотипическое антитело мыши для использования в качестве блокирующего реагента разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 мыши был нанесен на сенсоры, затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание либо PD-L1 мыши, либо PD-L2 мыши. На фиг. 3 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов мыши с PD-1 мыши. Напротив, ни пембролизумаб, ни ниволумаб не связывались с PD-1 мыши и не блокировали связывание лиганда мыши с PD-1 мыши.
Пример 5. Блокирование антителами связывания PD-L1 человека и PD-L2 человека с PD-1 человека
[00353] PD-L1 и PD-L2 являются двумя природными лигандами для PD-1, и взаимодействие любого лиганда с PD-1 может подавлять активирующий ответ в Т-клетках. Было показано, что одобренные терапевтические антитела, такие как ниволумаб и пембролизумаб, блокируют это взаимодействие и подавляют ответы Т-клеток человека. Анализ Octet на приборе Forte-Bio был использован для оценки влияния анти-PD-1-антител, раскрытых в данном документе, на взаимодействие между PD-L1 человека и PD-1 человека и между PD-L2 человека и PD-1 человека. Антитела разбавляли до 10 мкг/мл, включая антитело изотипического контроля для использования в вычитании фона. Слияние PD-1-Fc человека разбавляли до желаемых концентраций (например, 100 нМ). Растворимый Fc человека, предназначенный для использования в качестве блокирующего реагента, разбавляли до 250 мкг/мл. PD-1 человека был нанесен на сенсоры, и затем был нанесен Fc человека. Добавляли анти-PD-1-антитела и, наконец, измеряли связывание PD-L1 человека или PD-L2 человека. На фиг. 4 показано, что протестированные анти-PD-1-антитела были способны блокировать связывание обоих лигандов человека с PD-1 человека, подобно пембролизумабу и ниволумабу.
Пример 6. Прививание опухолей in vivo
[00354] Способность анти-PD-1-антител снижать рост опухоли на мышиной модели исследовали путем подкожной инъекции клеток MC38 в бока мышей C57BL6/J. Мышей рандомизировали в группы со средним размером опухоли приблизительно 100 мм3 на день 11 и внутрибрюшинно инъецировали 200 мкг анти-PD-1-антитела 13407. Повторные дозы вводили в дни 14, 18 и 21. Контрольные антитела, IgG1 мыши (MOPC-21), IgG2a крысы (2A3) и положительный контрольный антитело крысы против PD-1 (RMP1-14) были приобретены у BioXcell. Размеры опухолей измеряли два раза в неделю, и эксперимент прекращали через 24 дня. Масса опухолей в конце эксперимента показана на фиг. 5 и указывает, что анти-PD-1-антитело 13407 снижало рост опухоли у мышей в той же степени, что и эталонное анти-PD-1-антитело.
Пример 7. Картирование эпитопов антител
[00355] Гены, кодирующие различные варианты PD-1, фрагменты PD-L1, PD-L2 и Fab антител, были синтезированы и оптимизированы по кодонам Atum inc. Сигнальная последовательность легкой цепи каппа человека (MGTPAQLLFLLLLWLPDTTG; SEQ ID NO: 400) была присоединена на 5'-конец всех генов. Гены были клонированы в экспрессионный вектор млекопитающих, а последовательность проверена до экспрессии белка.
[00356] Рекомбинантные белки экспрессировали в экспрессионной системе Expi293™ (Thermo Fisher Scientific) с использованием набора производителя для сред, трансфекционного реагента, питающих слоев и клеток. Клетки трансфицировали в соотношении 1 мкг/мл плазмидной ДНК к среде с использованием Expifectamine™ в соответствии с протоколом производителя. Клетки культивировали во встряхиваемых колбах в инкубаторе, который поддерживали при температуре 37°С и 5% СО2. Через 5 дней культуры собирали центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 минут с последующей фильтрацией с использованием фильтра 0,2 мкм.
[00357] Собранные супернатанты подвергали аффинной очистке. Белки содержали либо гексагистидиновый маркер, либо Fc маркер, который обеспечивал либо аффинную очистку Ni, либо аффинную очистку белком А.
[00358] Аффинную очистку с Ni осуществляли на колонках HisTrap™ Excel IMAC (GE Healthcare Life Sciences) с использованием 43 мМ фосфата натрия, 0,5 М хлорида натрия, рН 7,4 в качестве связующего буфера. Связанный белок промывали связывающим буфером с последующим промыванием связывающим буфером, содержащим 20 мМ имидазол. Стадии элюирования осуществляли с помощью связывающего буфера, содержащего 90 мМ, 150 мМ и 250 мМ имидазол. Аффинную очистку с белком A проводили на колонках HiTrap MabSelect Sure (GE Healthcare Life Sciences) с использованием PBS, pH 7,4 в качестве связующего буфера. Стадии элюирования проводили для элюирования связанного белка с использованием 0,1 М цитратного буфера при рН 4,0, рН 3,5 и рН 2,0. Все кислотные элюируемые фракции нейтрализовали 1М Tris, рН 9,0, используя 20% об./об. Все элюированные фракции анализировали с помощью SEC-ВЭЖХ для определения фракций выше целевой чистоты (> 90% мономеров). Для результатов очистки, которые не давали фракций выше целевой чистоты, проводили препаративную эксклюзионную хроматографию с использованием хроматографической колонки Superdex200 для достижения целевой чистоты. Перед замораживанием очищенные белки обменивали в конечный буфер (либо 20 мМ гистидин, 150 мМ NaCl, pH 6,0, либо 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,5), сохраняя их при pH по меньшей мере на 1 единицу отклоняясь от предсказанного pI целевого белка.
[00359] Все белковые взаимодействия оценивали на приборе ForteBio OctetRED96. Белки разводили в буферном составе (PBS + 0,1% BSA, 0,02% Tween 20, 0,05% азида натрия) для кинетических исследований с объемом образца 220 мкл/лунку. Концентрации лигандов были нормализованы до 10 мкг/мл, а концентрации аналитов - до 100 нМ. Блокирующий реагент использовали в концентрации 250 мкг/мл. Время уравновешивания сенсора было установлено на 60 секунд, а время загрузки образца было установлено на 300 секунд. Время блокировки Fc человека было установлено на 300 с. Анализ времени ассоциации был установлен на 300 с, а времени диссоциации - на 600 с.
[00360] в данном методе представляющие интерес антитела ориентируют и захватывают на биосенсорах, дериватизированных античеловеческими (антимышиными) антителами к Fc. Затем анализируют связывание представляющих интерес белков-мишеней в растворе с нагруженными антителами сенсорами.
[00361] Для взаимодействий, в которых белки содержат домены Fc сходных видов, включена дополнительная стадия блокирования, чтобы минимизировать прямое связывание белка-мишени с биосенсором, не зависимым от захваченного антитела.
[00362] События связывания были подтверждены с помощью Y (да), если аффинность к варианту PD-1 или PD-1 другого вида была в пределах приблизительно 5-кратного увеличения по сравнению с аффинностью к PD-1 человека дикого типа. Аффинность, которая была уменьшена >10 раз и <100 раз, обозначена как «Уменьшенная». Аффинность, уменьшенная >100 раз, обозначена как N (нет). Взаимодействия, которые не были оценены, указаны как НО (не определены).
[00363] Варианты PD-1 человека получали в виде слияний внеклеточного домена (ECD)-Fc с C-концевыми метками His6 и использовали для анализа связывания лигандов PD-1, а также Fab-фрагментов ниволумаба, пембролизумаба и 13407. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Обобщенные данные связывания PD-1
Виды PD-1 Вариант PD-1 (слияния ECD-Fc) Слияние PD-L1 Fc Слияние PD-L2 Fc Fab ниво Fab пембро 13407 Fab
Человек Дикий тип Да Да Да Да Да
D85G НО НО Да Нет Да
R86L НО НО Да Да Да
D85G/R86L НО НО Да Нет Да
N33-Q167 Да Да Нет Да Да
K78A Нет Нет Да Да Да
I126A Нет Да Да Да Уменьшенная
L128A Уменьшенная Да Да Да Уменьшенная
A132L Да Да Да Да Нет
I134A Нет Да Да Да Нет
E136A Нет Да Да Да Уменьшенная
Мышь Дикий тип Да Да Нет Нет Да
H129P НО НО Нет Нет Нет
Крыса Дикий тип НО НО Нет Нет Нет
P129H НО НО Нет Нет Да
Собака Дикий тип НО НО Нет Нет Нет
Яванский макак Дикий тип Да Да Да Да Да
[00364] Аминокислотные замены, о которых сообщалось, что они влияют на связывание пембролизумаба, были оценены на связывание с панелью молекул (Na et al., 2017, Cell Res., 27: 147-150). Связывание пембролизумаба с PD-1 устраняется заменой D85G, тогда как связывание ниволумаба и 13407 не затрагивается. Связывание ниволумаба с PD-1 также уменьшается при оценке по сравнению с усеченным по N-концу вариантом N33-Q167. Данные результаты показывают, что 13407 вступает в контакт с аминокислотами, которые значительно отличаются от тех, с которыми связываются пембролизумаб и ниволумаб.
[00365] Были получены дополнительные варианты, которые были предварительно оценены для лигандов PD-L1 и PD-L2 (
Figure 00000001
et al., 2008, PNAS, 105: 10483-10488). Данные аминокислотные замены в основном не влияли на связывание ниволумаба и пембролизумаба, в то время как аффинность связывания 13407 была значительно снижена заменами I126A, L128A и E136A и устранена заменами A132L и I134A. Данные показывают профиль связывания для 13407, аналогичный профилю PD-L1.
[00366] Панель Fab-фрагментов также оценивали на связывание с дополнительными видами PD-1. Пембролизумаб и ниволумаб не связываются с PD-1 мыши, крысы или собаки. Напротив, 13407 связывается с мышиным PD-1. Удивительно, но 13407 не связывается с PD-1 крысы, несмотря на высокую гомологию между PD-1 крысы и мыши. Был создан вариант PD-1 мыши, в котором остаток 129 заменен соответствующим остатком из последовательности крысы (H129P), и было обнаружено, что это устраняет связывание 13407. Когда в последовательность крысы была введена реципрокная мутация, P129H, то 13407 связался с вариантом. Примечательно, что в последовательности PD-1 собаки, с которой 13407 не связывается, в этой позиции отсутствует пролин.
[00367] Таким образом, 13407 связывает эпитоп PD-1, отличный от эпитопов, связываемых с ниволумабом и пембролизумабом.
[00368] Данное раскрытие может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не как ограничивающие раскрытие. Объем раскрытия, таким образом, обозначен прилагаемой формулой изобретения, а не вышеприведенным описанием, и поэтому все изменения, которые входят в содержание и диапазон эквивалентности формулы изобретения, следовательно, предназначены для охвата данным документом.
Таблица последовательностей
SEQ ID NO Описание Последовательность
1 PD-1 человека, аминокислотная последовательность; UniProtKB/Swiss-Prot: Q15116;01-AUG-2016 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
382 Зрелый PD-1 человека, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
401 PD-1 человека, внеклеточный домен (ECD)-Fc-His6 ldspdrpwnp ptfspallvv tegdnatftc sfsntsesfv lnwyrmspsn qtdklaafpe drsqpgqdcr frvtqlpngr dfhmsvvrar rndsgtylcg aislapkaqi keslraelrv terraevpta hpspsprpag qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
385 PD-1 человека D85G ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
386 PD-1 человека R86L ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
402 PD-1 человека D85G/R86L ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafpeG Lsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
387 PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His6 npptfspall vvtegdnatf tcsfsntses fvlnwyrmsp snqtdklaaf pedrsqpgqd crfrvtqlpn grdfhmsvvr arrndsgtyl cgaislapka qikeslrael rvterraevp tahpspsprp agqfqggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
388 PD-1 человека K78A ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdAlaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
389 PD-1 человека I126A ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga Aslapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
390 PD-1 человека L128A ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga isAapkaqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
391 PD-1 человека A132L ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkLqik eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
392 PD-1 человека I134A ECD-Fc-His6 dspdrpwnpp tfspallvvt egdnatftcs fsntsesfvl nwyrmspsnq tdklaafped rsqpgqdcrf rvtqlpngrd fhmsvvrarr ndsgtylcga islapkaqAk eslraelrvt erraevptah pspsprpagq fqtlvggsgg DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGKGSG HHHHHH
393 PD-1 человека EI136A ECD-Fc-His6 dttgdspdrp wnpptfspal lvvtegdnat ftcsfsntse sfvlnwyrms psnqtdklaa fpedrsqpgq dcrfrvtqlp ngrdfhmsvv rarrndsgty lcgaislapk aqikAslrae lrvterraev ptahpspspr pagqfqtlvg gsggDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG KGSGHHHHHH
2 PD-1 мыши; UniProtKB/Swiss-Prot: Q02242;01-AUG-2016 MWVRQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSE
ARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL
383 Зрелый PD-1 мыши, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) SGWLLEVPNG PWRSLTFYPA WLTVSEGANA TFTCSLSNWS EDLMLNWNRL SPSNQTEKQA AFCNGLSQPV QDARFQIIQL PNRHDFHMNI LDTRRNDSGI YLCGAISLHP KAKIEESPGA ELVVTERILE TSTRYPSPSP KPEGRFQGMV IGIMSALVGI PVLLLLAWAL AVFCSTSMSE ARGAGSKDDT LKEEPSAAPV PSVAYEELDF QGREKTPELP TACVHTEYAT IVFTEGLGAS AMGRRGSADG LQGPRPPRHE DGHCSWPL
403 PD-1 мыши ECD-Fc-His6 levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislhpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
394 PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His6 levpngpwrs ltfypawltv seganatftc slsnwsedlm lnwnrlspsn qtekqaafcn glsqpvqdar fqiiqlpnrh dfhmnildtr rndsgiylcg aislPpkaki eespgaelvv teriletstr ypspspkpeg rfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
3 PD-1 яванского макака; UniProtKB/Swiss-Prot: B0LAJ3;01-AUG-2016 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA
TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL
PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE
VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI
GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
384 Зрелый PD-1 яванского макака (без сигнальной последовательности) PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
404 PD-1 яванского макака ECD-Fc-His6 LESPDR PWNAPTFSPA LLLVTEGDNA TFTCSFSNAS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTRL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH
395 PD-1 крысы; NCBI Ref. NP_001100397.1; 02-OCT-2017 MWVQQVPWSF TWAVLQLSWQ SGWLLEVLNK PWRPLTFSPT WLTVSEGANA TFTCSFSNWS EDLKLNWYRL SPSNQTEKQA AFCNGYSQPV RDARFQIVQL PNGHDFHMNI LDARRNDSGI YLCGAISLPP KAQIKESPGA ELVVTERILE TPTRYPRPSP KPEGQFQGLV IVIMSVLVGI PVLLLLAWAL AAFCSTGMSE AREAGRKEDP PKEAHAAAPV PSVAYEELDF QGREKTPEPA PCVHTEYATI VFTEGLDASA IGRRGSADGP QGPRPPRHED GHCSWPL
396 Зрелый PD-1 крысы, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) LEVLNKPWRP LTFSPTWLTV SEGANATFTC SFSNWSEDLK LNWYRLSPSN QTEKQAAFCN GYSQPVRDAR FQIVQLPNGH DFHMNILDAR RNDSGIYLCG AISLPPKAQI KESPGAELVV TERILETPTR YPRPSPKPEG QFQGLVIVIM SVLVGIPVLL LLAWALAAFC STGMSEAREA GRKEDPPKEA HAAAPVPSVA YEELDFQGRE KTPEPAPCVH TEYATIVFTE GLDASAIGRR GSADGPQGPR PPRHEDGHCS WPL
405 PD-1 крысы ECD-Fc-His6 levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislppkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
397 PD-1 крысы P129H ECD-Fc-His6 levlnkpwrp ltfsptwltv seganatftc sfsnwsedlk lnwyrlspsn qtekqaafcn gysqpvrdar fqivqlpngh dfhmnildar rndsgiylcg aislHpkaqi kespgaelvv teriletptr yprpspkpeg qfqggsggDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGKGSGHH HHHH
398 PD-1 собаки, аминокислотная последовательность; NCBI Ref. NP_001301026.1 MGSRRGPWPL VWAVLQLGWW PGWLLDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENA TFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGLV IGVTSVLVGV LLLLLLTWVL AAVFPRATRG ACVCGSEDEP LKEGPDAAPV FTLDYGELDF QWREKTPEPP APCAPEQTEY ATIVFPGRPA SPGRRASASS LQGAQPPSPE DGPGLWPP
399 Зрелый PD-1 собаки, аминокислотная последовательность (без сигнальной последовательности) LDSPDRPWSP LTFSPAQLTV QEGENATFTC SLADIPDSFV LNWYRLSPRN QTDKLAAFQE DRIEPGRDRR FRVTRLPNGR DFHMSIVAAR LNDSGIYLCG AIYLPPNTQI NESPRAELSV TERTLEPPTQ SPSPPPRLSG QLQGLVIGVT SVLVGVLLLL LLTWVLAAVF PRATRGACVC GSEDEPLKEG PDAAPVFTLD YGELDFQWRE KTPEPPAPCA PEQTEYATIV FPGRPASPGR RASASSLQGA QPPSPEDGPG LWPP
406 PD-1 собаки ECD-Fc-His6 LDSPDR PWSPLTFSPA QLTVQEGENATFTCSLADIP DSFVLNWYRL SPRNQTDKLA AFQEDRIEPG RDRRFRVTRL PNGRDFHMSI VAARLNDSGI YLCGAIYLPP NTQINESPRA ELSVTERTLE PPTQSPSPPP RLSGQLQGGS GGDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGKG SGHHHHHH
4 12228
Последовательность VH		 QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYYMHWVRQA PGQGLEWMGI INPSGGSTSY AQKFQGRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARGG TYYDYTYWGQ GTLVTVSS
5 12228
HCDR1		 YTFTSYYMH
6 12228
HCDR2		 IINPSGGSTSYAQKFQG
7 12228
HCDR3		 ARGGTYYDYTY
8 12228
Последовательность VL		 DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASQSIS SWLAWYQQKP GKAPKLLIYE ASSLESGVPS RFSGSGSGTE FTLTISSLQP DDFATYYCQQ YNSFPPTFGG GTKVEIK
9 12228
LCDR1		 RASQSISSWLA
10 12228
LCDR2		 EASSLES
11 12228
LCDR3		 QQYNSFPPT
12 13406
Последовательность VH		 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDQYYMH
WVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTAYAQKFQGRVT
MTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
13 13406
HCDR1		 YTFDQYYMH
14 13406
HCDR2		 IINPSGGSTAYAQKFQG
15 13406
HCDR3		 ARGGTYYDYTY
16 13406
Последовательность VL		 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGK
APKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYY
CQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
17 13406
LCDR1		 RASQSISSWLA
18 13406
LCDR2		 EASSLES
19 13406
LCDR3		 QQYNSFPPT
20 13407
Последовательность VH		 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFPSYYMHWVRQAPGQGL
EWMGIINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT
AVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
21 13407
HCDR1		 YTFPSYYMH
22 13407
HCDR2		 IINPEGGSTAYAQKFQG
23 13407
HCDR3		 ARGGTYYDYTY
24 13407
Последовательность VL		 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKP
GKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDF
ATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
25 13407
LCDR1		 RASQSISSWLA
26 13407
LCDR2		 EASSLES
27 13407
LCDR3		 QQYNSFPPT
28 13408
Последовательность VH		 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQ
APGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTST
VYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
29 13408
HCDR1		 YTFSDYYMH
30 13408
HCDR2		 IINPSGGVTAYAQKFQG
31 13408
HCDR3		 ARGGTYYDYTY
32 13408
Последовательность VL		 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQ
QKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
LQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
33 13408
LCDR1		 RASQSISSWLA
34 13408
LCDR2		 EASSLES
35 13408
LCDR3		 QQYNSFPPT
36 13409
Последовательность VH		 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFESYYMHWVRQ
APGQGLEWMGIINPSGGVTAYAQKFQGRVTMTRDTSTST
VYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTYYDYTYWGQGTLVTVSS
37 13409
HCDR1		 YTFESYYMH
38 13409
HCDR2		 IINPSGGVTAYAQKFQG
39 13409
HCDR3		 ARGGTYYDYTY
40 13409
Последовательность VL		 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQ
QKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
LQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
41 13409
LCDR1		 RASQSISSWLA
42 13409
LCDR2		 EASSLES
43 13409
LCDR3		 QQYNSFPPT
44 13396 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPDAGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
45 13396
HCDR1		 YTFTSYYMH
46 13396
HCDR2		 IINPDAGSTAYAQKFQG
47 13396 HCDR3 ARDQGHYYGMGV
48 13396 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
49 13396 LCDR1 RASQSISSWLA
50 13396 LCDR2 EASSLES
51 13396 LCDR3 QQHNSYPPT
52 13398 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGEYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSEGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
53 13398
HCDR1		 YTFGEYYMH
54 13398
HCDR2		 IINPSEGSTGYAQKFQG
55 13398 HCDR3 ARDQGHYYGMGV
56 13398 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
57 13398 LCDR1 RASQSISSWLA
58 13398 LCDR2 EASSLES
59 13398 LCDR3 QQHNSYPPT
60 13399 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSDYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSAGSTGYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
61 13399
HCDR1		 YTFSDYYMH
62 13399
HCDR2		 IINPSAGSTGYAQKFQG
63 13399 HCDR3 ARDQGHYYGMGV
64 13399 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
65 13399 LCDR1 RASQSISSWLA
66 13399 LCDR2 EASSLES
67 13399 LCDR3 QQHNSYPPT
68 13401 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIDPSKGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
69 13401
HCDR1		 YTFNSYYMS
70 13401
HCDR2		 IIDPSKGSTAYAQKFQG
71 13401 HCDR3 ARHEYGMDV
72 13401 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
73 13401 LCDR1 RASQSISSWLA
74 13401 LCDR2 EASSLES
75 13401 LCDR3 QQYNSFPPT
76 13402 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTHYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPEGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
77 13402
HCDR1		 YTFTHYYMS
78 13402
HCDR2		 MINPEGGSTAYAQKFQG
79 13402 HCDR3 ARHEYGMDV
80 13402 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
81 13402 LCDR1 RASQSISSWLA
82 13402 LCDR2 EASSLES
83 13402 LCDR3 QQYNSFPPT
84 13403 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDSYYMSWVRQAPGQGLEWMGMINPSVGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
85 13403
HCDR1		 YTFDSYYMS
86 13403
HCDR2		 MINPSVGSTAYAQKFQG
87 13403 HCDR3 ARHEYGMDV
88 13403 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
89 13403 LCDR1 RASQSISSWLA
90 13403 LCDR2 EASSLES
91 13403 LCDR3 QQYNSFPPT
92 13404 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYAMSWVRQAPGQGLEWMGIIFPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
93 13404
HCDR1		 YTFASYAMS
94 13404
HCDR2		 IIFPGGGSTSYAQKFQG
95 13404 HCDR3 ARHEYGMDV
96 13404 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
97 13404 LCDR1 RASQSISSWLA
98 13404 LCDR2 EASSLES
99 13404 LCDR3 QQYNSFPPT
100 13405 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFASYYMGWVRQAPGQGLEWMGIINPAGGSTAYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
101 13405
HCDR1		 YTFASYYMG
102 13405
HCDR2		 IINPAGGSTAYAQKFQG
103 13405 HCDR3 ARHEYGMDV
104 13405 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
105 13405 LCDR1 RASQSISSWLA
106 13405 LCDR2 EASSLES
107 13405 LCDR3 QQYNSFPPT
108 12191 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDQGHYYGMGVWGQGTTVTVSS
109 12191
HCDR1		 YTFTSYYMH
110 12191
HCDR2		 IINPGGGSTSYAQKFQG
111 12191 HCDR3 ARDQGHYYGMGV
112 12191 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQHNSYPPTFGGGTKVEIK
113 12191 LCDR1 RASQSISSWLA
114 12191 LCDR2 EASSLES
115 12191 LCDR3 QQHNSYPPT
116 12195 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHEYGMDVWGQGTTVTVSS
117 12195
HCDR1		 YTFTSYYMS
118 12195
HCDR2		 IINPSGGSTSYAQKFQG
119 12195 HCDR3 ARHEYGMDV
120 12195 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPPTFGGGTKVEIK
121 12195 LCDR1 RASQSISSWLA
122 12195 LCDR2 EASSLES
123 12195 LCDR3 QQYNSFPPT
124 12535 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGKSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
125 12535
HCDR1		 FTFSHYLMS
126 12535
HCDR2		 AISGSGKSTYYADSVKG
127 12535 HCDR3 AKVYYGMPY
128 12535 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
129 12535 LCDR1 RASQGIDSWLA
130 12535 LCDR2 AASSLQS
131 12535 LCDR3 QQASDVPWT
132 12536 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYLMSWVRQAPGKGLEWVSAIGGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
133 12536
HCDR1		 FTFSQYLMS
134 12536
HCDR2		 AIGGSGASTYYADSVKG
135 12536 HCDR3 AKVYYGMPY
136 12536 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
137 12536 LCDR1 RASQGIDSWLA
138 12536 LCDR2 AASSLQS
139 12536 LCDR3 QQASDVPWT
140 12541 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSYMMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGRDTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
141 12541
HCDR1		 FTFRSYMMS
142 12541
HCDR2		 AISGSGRDTYYADSVKG
143 12541 HCDR3 AKVYYGMPY
144 12541 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
145 12541 LCDR1 RASQGIDSWLA
146 12541 LCDR2 AASSLQS
147 12541 LCDR3 QQASDVPWT
148 12543 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYMMSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
149 12543
HCDR1		 FTFSQYMMS
150 12543
HCDR2		 GISGSGGETYYADSVKG
151 12543 HCDR3 AKVYYGMPY
152 12543 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
153 12543 LCDR1 RASQGIDSWLA
154 12543 LCDR2 AASSLQS
155 12543 LCDR3 QQASDVPWT
156 12544 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
157 12544
HCDR1		 FTFSSYLMS
158 12544
HCDR2		 AISGSGSSTYYADSVKG
159 12544 HCDR3 AKVYYGMPY
160 12544 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
161 12544 LCDR1 RASQGIDSWLA
162 12544 LCDR2 AASSLQS
163 12544 LCDR3 QQASDVPWT
164 12545 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYLMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
165 12545
HCDR1		 FTFSHYLMS
166 12545
HCDR2		 AISGSGGQTYYADSVKG
167 12545 HCDR3 AKVYYGMPY
168 12545 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
169 12545 LCDR1 RASQGIDSWLA
170 12545 LCDR2 AASSLQS
171 12545 LCDR3 QQASDVPWT
172 12549 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYSMSWVRQAPGKGLEWVSAISGGGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
173 12549
HCDR1		 FTFSQYSMS
174 12549
HCDR2		 AISGGGGQTYYADSVKG
175 12549 HCDR3 AKVYYGMPY
176 12549 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
177 12549 LCDR1 RASQGIDSWLA
178 12549 LCDR2 AASSLQS
179 12549 LCDR3 QQASDVPWT
180 12550 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSLYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGQTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
181 12550
HCDR1		 FTFSLYAMS
182 12550
HCDR2		 AISGSGGQTYYADSVKG
183 12550 HCDR3 AKVYYGMPY
184 12550 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
185 12550 LCDR1 RASQGIDSWLA
186 12550 LCDR2 AASSLQS
187 12550 LCDR3 QQASDVPWT
188 12553 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
189 12553
HCDR1		 GTFGEYAIS
190 12553
HCDR2		 LIIPIFGTAQYAQKFQG
191 12553 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
192 12553 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
193 12553 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
194 12553 LCDR2 WASTRES
195 12553 LCDR3 QQSYSLPFT
196 12554 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPAFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
197 12554
HCDR1		 GTFSSYAIS
198 12554
HCDR2		 LIIPAFGTANYAQKFQG
199 12554 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
200 12554 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
201 12554 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
202 12554 LCDR2 WASTRES
203 12554 LCDR3 QQSYSLPFT
204 12562 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGEANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
205 12562
HCDR1		 GTFSSYAIS
206 12562
HCDR2		 VIIPIFGEANYAQKFQG
207 12562 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
208 12562 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
209 12562 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
210 12562 LCDR2 WASTRES
211 12562 LCDR3 QQSYSLPFT
212 12563 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
213 12563
HCDR1		 GTFGSYAIS
214 12563
HCDR2		 VIIPIFGTANYAQKFQG
215 12563 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
216 12563 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
217 12563 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
218 12563 LCDR2 WASTRES
219 12563 LCDR3 QQSYSLPFT
220 12564 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSQYAISWVRQAPGQGLEWMGVIIPSFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
221 12564
HCDR1		 GTFSQYAIS
222 12564
HCDR2		 VIIPSFGTANYAQKFQG
223 12564 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
224 12564 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
225 12564 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
226 12564 LCDR2 WASTRES
227 12564 LCDR3 QQSYSLPFT
228 12565 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGEYAISWVRQAPGQGLEWMGLIIPIFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGASDGETGRLDLWGRGTLVTVSS
229 12565
HCDR1		 GTFGEYAIS
230 12565
HCDR2		 LIIPIFGTAQYAQKFQG
231 12565 HCDR3 ARGASDGETGRLDL
232 12565 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSLPFTFGGGTKVEIK
233 12565 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
234 12565 LCDR2 WASTRES
235 12565 LCDR3 QQSYSLPFT
236 12571 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGSSAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFGTAAYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
237 12571
HCDR1		 GTFGSSAIS
238 12571
HCDR2		 GIIPLFGTAAYAQKFQG
239 12571 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
240 12571 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
241 12571 LCDR1 RASQSVSSYLA
242 12571 LCDR2 DASNRAT
243 12571 LCDR3 QQGYALPIT
244 12572 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
245 12572
HCDR1		 GTFSEYAIS
246 12572
HCDR2		 GIIPIFGTAVYAQKFQG
247 12572 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
248 12572 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
249 12572 LCDR1 RASQSVSSYLA
250 12572 LCDR2 DASNRAT
251 12572 LCDR3 QQGYALPIT
252 12576 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAVYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
253 12576
HCDR1		 GTFSSYAIS
254 12576
HCDR2		 GIIPIFGTAVYAQKFQG
255 12576 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
256 12576 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
257 12576 LCDR1 RASQSVSSYLA
258 12576 LCDR2 DASNRAT
259 12576 LCDR3 QQGYALPIT
260 12583 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSSVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTATYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
261 12583
HCDR1		 GTFSSSVIS
262 12583
HCDR2		 GIIPIFGTATYAQKFQG
263 12583 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
264 12583 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
265 12583 LCDR1 RASQSVSSYLA
266 12583 LCDR2 DASNRAT
267 12583 LCDR3 QQGYALPIT
268 12584 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGGTFDSYVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGFGVANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
269 12584
HCDR1		 GTFDSYVIS
270 12584
HCDR2		 GIIPGFGVANYAQKFQG
271 12584 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
272 12584 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
273 12584 LCDR1 RASQSVSSYLA
274 12584 LCDR2 DASNRAT
275 12584 LCDR3 QQGYALPIT
276 11613 последовательность VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVYYGMPYWGQGTLVTVSS
277 11613
HCDR1		 FTFSSYAMS
278 11613
HCDR2		 AISGSGGSTYYADSVKG
279 11613 HCDR3 AKVYYGMPY
280 11613 последовательность VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASDVPWTFGGGTKVEIK
281 11613 LCDR1 RASQGIDSWLA
282 11613 LCDR2 AASSLQS
283 11613 LCDR3 QQASDVPWT
284 11645 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGPGYSSSWYLDVWGQGTMVTVSS
285 11645
HCDR1		 GTFSSYAIS
286 11645
HCDR2		 GIIPIFGTASYAQKFQG
287 11645 HCDR3 ARDGPGYSSSWYLDV
288 11645 последовательность VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGYALPITFGGGTKVEIK
289 11645 LCDR1 RASQSVSSYLA
290 11645 LCDR2 DASNRAT
291 11645 LCDR3 QQGYALPIT
292 11606 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAGGYSYSWGGSNIWGQGTMVTVSS
293 11606
HCDR1		 YTFTSYYMH
294 11606
HCDR2		 IINPSGGSTSYAQKFQG
295 11606 HCDR3 ARAGGYSYSWGGSNI
296 11606 последовательность VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDGSFPYTFGGGTKVEIK
297 11606 LCDR1 RASQSISSWLA
298 11606 LCDR2 KASSLES
299 11606 LCDR3 QQDGSFPYT
300 12220 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS
301 12220
HCDR1		 YTFTSYYMH
302 12220
HCDR2		 IINPGGGSTSYAQKFQG
303 12220 HCDR3 ARDPRYTTLTGSYYYGMDV
304 12220 последовательность VL DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAVNFPPITFGGGTKVEIK
305 12220 LCDR1 RASQDISSWLA
306 12220 LCDR2 AASSLQS
307 12220 LCDR3 QQAVNFPPIT
308 11624 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREASWLPGSLDVWGKGTTVTVSS
309 11624
HCDR1		 YTFTGYYMH
310 11624
HCDR2		 WINPNSGGTKYAQKFQG
311 11624 HCDR3 AREASWLPGSLDV
312 11624 последовательность VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYDNFPITFGGGTKVEIK
313 11624 LCDR1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
314 11624 LCDR2 WASTRES
315 11624 LCDR3 QQYDNFPIT
316 12190 последовательность VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDPRYTTLTGSYYYGMDVWGQGTTVTVSS
317 12190
HCDR1		 YTFTSYYMH
318 12190
HCDR2		 IINPGGGSTSYAQKFQG
319 12190 HCDR3 ARDPRYTTLTGSYYYGMDV
320 12190 последовательность VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSANTPPWTFGGGTKVEIK
321 12190 LCDR1 RASQSISSYLN
322 12190 LCDR2 AASSLQS
323 12190 LCDR3 QQSANTPPWT
324 37A10 вариабельная область тяжелой цепи E V Q L V E S G G G L V K P G G S L K L S C A A S G F T F S D Y W M D W V R Q A P G K G L E W V G N I D E D G S I T E Y S P F V K G R F T I S R D N V K N T L Y L Q M N S V K S E D T A T Y Y C T R W G R F G F D S W G Q G T L V T V S S
325 37A10 вариабельная область легкой цепи D I V M T Q S P S S L A V S A G D R V T I N C K S S Q S L L S G S F N Y L T W Y Q Q K T G Q A P K L L I F Y A S T R H T G V P D R F M G S G S G T D F T L T I N S F Q T E D L G D Y Y C H H H Y N A P P T F G P G T K L E L R
326 37A10 VH CDR1 G F T F S D Y W M D
327 37A10 VH CDR2 N I D E D G S I T E Y S P F V K G
328 37A10 VH CDR3 W G R F G F D S
329 37A10 VL CDR1 K S S Q S L L S G S F N Y L T
330 37A10 VL CDR2 Y A S T R H T
331 37A10 VL CDR3 H H H Y N A P P T
332 37A10S713 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
333 37A10S713 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
334 37A10S713 VH CDR1 GFTFSDYWMD
335 37A10S713 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG
336 37A10S713 VH CDR3 WGRFGFDS
337 37A10S713 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
338 37A10S713 VL CDR2 YASTRHT
339 37A10S713 VL CDR3 HHHYNAPPT
340 37A10S714 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
341 37A10S714 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
342 37A10S714 VH CDR1 GFTFSDYWMD
343 37A10S714 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG
344 37A10S714 VH CDR3 WGRFGFDS
345 37A10S714 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
346 37A10S714 VL CDR2 YASTRET
347 37A10S714 VL CDR3 HHHYNAPPT
348 37A10S715 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
349 37A10S715 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
350 37A10S715 VH CDR1 GFTFSDYWMD
351 37A10S715 VH CDR2 NIDEDGSITEYSPFVKG
352 37A10S715 VH CDR3 WGRFGFDS
353 37A10S715 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
354 37A10S715 VL CDR2 YASTRQT
355 37A10S715 VL CDR3 HHHYNAPPT
356 37A10S716 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
357 37A10S716 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
358 37A10S716 VH CDR1 GFTFSDYWMD
359 37A10S716 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG
360 37A10S716 VH CDR3 WGRFGFDS
361 37A10S716 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
362 37A10S716 VL CDR2 YASTRHT
363 37A10S716 VL CDR3 HHHYNAPPT
364 37A10S717 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
365 37A10S717 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRET GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
366 37A10S717 VH CDR1 GFTFSDYWMD
367 37A10S717 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG
368 37A10S717 VH CDR3 WGRFGFDS
369 37A10S717 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
370 37A10S717 VL CDR2 YASTRET
371 37A10S717 VL CDR3 HHHYNAPPT
372 37A10S718 вариабельная область тяжелой цепи EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDESGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSS
373 37A10S718 вариабельная область легкой цепи DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRQT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI K
374 37A10S718 VH CDR1 GFTFSDYWMD
375 37A10S718 VH CDR2 NIDESGSITEYSPFVKG
376 37A10S718 VH CDR3 WGRFGFDS
377 37A10S718 VL CDR1 KSSQSLLSGSFNYLT
378 37A10S718 VL CDR2 YASTRQT
379 37A10S718 VL CDR3 HHHYNAPPT
380 37A10S713 тяжелая цепь IgG1 человека EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DYWMDWVRQA PGKGLVWVSN IDEDGSITEY SPFVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCTRWG RFGFDSWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
381 37A10S713 легкая цепь κ человека DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLL SGSFNYLTWY QQKPGQPPKL LIFYASTRHT GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCHHHYNAPP TFGPGTKVDI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> JOUNCE THERAPEUTICS, INC.
<120> АНТИТЕЛА К PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 01140-0006-00PCT
<150> США 62/416 602
<151> 02.11.2016
<160> 406
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 288
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 2
<211> 288
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 2
Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp
20 25 30
Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met
50 55 60
Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala
65 70 75 80
Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln
85 90 95
Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp
100 105 110
Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val
130 135 140
Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala
165 170 175
Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val
180 185 190
Phe Cys Ser Thr Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp
195 200 205
Asp Thr Leu Lys Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala
210 215 220
Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro
225 230 235 240
Thr Ala Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly
245 250 255
Leu Gly Ala Ser Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln
260 265 270
Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 3
<211> 288
<212> Белок
<213> Macaca fascicularis
<400> 3
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 4
<211> 118
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 5
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 6
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 6
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 7
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 7
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 8
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 9
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 10
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 10
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 11
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 11
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 12
<211> 118
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 13
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 13
Tyr Thr Phe Asp Gln Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 14
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 15
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 15
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 17
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 18
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 18
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 19
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 20
<211> 118
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 21
Tyr Thr Phe Pro Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 22
Ile Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 23
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 25
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 26
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 27
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 27
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 28
<211> 118
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 29
Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 30
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 30
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 31
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 31
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 33
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 34
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 34
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 35
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 36
<211> 118
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 37
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 37
Tyr Thr Phe Glu Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 38
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 39
Ala Arg Gly Gly Thr Tyr Tyr Asp Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 40
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 41
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 42
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 42
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 43
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 44
<211> 119
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 45
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 46
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 46
Ile Ile Asn Pro Asp Ala Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 12
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 47
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1 5 10
<210> 48
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 49
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 50
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 50
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 51
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 52
<211> 119
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 53
Tyr Thr Phe Gly Glu Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 54
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 54
Ile Ile Asn Pro Ser Glu Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 12
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 55
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1 5 10
<210> 56
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 57
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 58
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 58
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 59
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 60
<211> 119
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 61
Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 62
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 62
Ile Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 63
<211> 12
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 63
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1 5 10
<210> 64
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 65
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 66
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 66
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 67
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 68
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 69
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 69
Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 70
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 70
Ile Ile Asp Pro Ser Lys Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 71
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 71
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 72
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 73
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 74
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 74
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 75
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 76
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 77
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 77
Tyr Thr Phe Thr His Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 78
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 78
Met Ile Asn Pro Glu Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 79
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 79
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 80
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 81
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 81
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 82
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 83
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 83
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 84
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 85
Tyr Thr Phe Asp Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 86
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 86
Met Ile Asn Pro Ser Val Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 87
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 87
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 88
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 88
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 89
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 89
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 90
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 90
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 91
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 91
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 92
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 93
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 93
Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 94
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 94
Ile Ile Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 96
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 97
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 97
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 98
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 99
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 99
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 100
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 101
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 101
Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr Tyr Met Gly
1 5
<210> 102
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 102
Ile Ile Asn Pro Ala Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 103
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 103
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 104
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 104
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 105
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 105
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 106
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 106
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 107
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 107
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 108
<211> 119
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 108
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 109
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 109
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 110
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 110
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 111
<211> 12
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 111
Ala Arg Asp Gln Gly His Tyr Tyr Gly Met Gly Val
1 5 10
<210> 112
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 112
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 113
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 113
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 114
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 114
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 115
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 115
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 116
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 117
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 118
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 118
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 119
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 119
Ala Arg His Glu Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 120
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 121
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 122
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 122
Glu Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 123
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 123
Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 124
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 124
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 125
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 125
Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser
1 5
<210> 126
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 126
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 127
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 127
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 128
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 128
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 129
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 130
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 130
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 131
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 132
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 132
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 133
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 133
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Leu Met Ser
1 5
<210> 134
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 134
Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 135
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 135
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 136
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 137
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 137
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 138
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 138
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 139
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 139
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 140
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 140
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 141
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 141
Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Met Met Ser
1 5
<210> 142
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 142
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 143
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 143
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 144
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 145
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 145
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 146
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 146
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 147
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 147
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 148
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 148
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 149
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 149
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Met Met Ser
1 5
<210> 150
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 150
Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 151
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 151
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 152
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 152
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 153
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 153
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 154
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 154
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 155
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 155
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 156
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 156
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 157
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Leu Met Ser
1 5
<210> 158
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 158
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 159
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 159
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 160
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 160
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 161
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 161
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 162
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 162
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 163
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 163
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 164
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 164
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 165
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 165
Phe Thr Phe Ser His Tyr Leu Met Ser
1 5
<210> 166
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 166
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 167
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 167
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 168
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 169
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 169
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 170
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 170
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 171
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 171
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 172
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 172
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 173
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Ser Met Ser
1 5
<210> 174
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 174
Ala Ile Ser Gly Gly Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 175
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 175
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 176
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 176
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 177
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 177
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 178
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 178
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 179
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 179
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 180
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 180
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 181
Phe Thr Phe Ser Leu Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 182
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 182
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 183
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 183
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 184
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 184
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 185
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 185
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 186
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 186
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 187
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 187
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 188
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 189
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 189
Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 190
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 190
Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 191
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 191
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 192
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 192
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 193
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 193
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 194
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 194
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 195
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 195
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 196
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 197
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 197
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 198
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 198
Leu Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 199
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 199
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 200
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 200
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 201
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 201
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 202
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 202
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 203
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 203
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 204
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 205
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 205
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 206
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 206
Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 207
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 207
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 208
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 208
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 209
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 209
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 210
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 210
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 211
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 211
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 212
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 213
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 213
Gly Thr Phe Gly Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 214
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 214
Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 215
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 215
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 216
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 216
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 217
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 217
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 218
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 218
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 219
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 219
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 220
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 220
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 221
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 221
Gly Thr Phe Ser Gln Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 222
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 222
Val Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 223
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 223
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 224
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 224
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 225
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 225
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 226
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 226
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 227
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 227
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 228
<211> 121
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 228
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 229
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 229
Gly Thr Phe Gly Glu Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 230
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 230
Leu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 231
<211> 14
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 231
Ala Arg Gly Ala Ser Asp Gly Glu Thr Gly Arg Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 232
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 232
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 233
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 233
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 234
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 234
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 235
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 235
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 236
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 236
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Ser
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 237
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 237
Gly Thr Phe Gly Ser Ser Ala Ile Ser
1 5
<210> 238
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 238
Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Ala Ala Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 239
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 239
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 240
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 240
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 241
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 241
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 242
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 242
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 243
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 243
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 244
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 244
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 245
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 245
Gly Thr Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 246
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 246
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 247
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 247
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 248
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 248
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 249
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 249
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 250
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 250
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 251
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 251
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 252
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 252
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 253
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 253
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 254
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 254
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 255
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 255
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 256
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 256
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 257
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 257
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 258
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 258
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 259
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 259
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 260
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 260
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 261
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 261
Gly Thr Phe Ser Ser Ser Val Ile Ser
1 5
<210> 262
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 262
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 263
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 263
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 264
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 264
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 265
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 265
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 266
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 266
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 267
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 267
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 268
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 268
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asp Ser Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 269
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 269
Gly Thr Phe Asp Ser Tyr Val Ile Ser
1 5
<210> 270
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 270
Gly Ile Ile Pro Gly Phe Gly Val Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 271
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 271
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 272
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 272
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 273
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 273
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 274
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 274
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 275
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 275
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 276
<211> 116
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 276
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 277
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 277
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 278
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 278
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 279
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 279
Ala Lys Val Tyr Tyr Gly Met Pro Tyr
1 5
<210> 280
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 280
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 281
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 281
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 282
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 282
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 283
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 283
Gln Gln Ala Ser Asp Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 284
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 284
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 285
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 285
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 286
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 286
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 287
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 287
Ala Arg Asp Gly Pro Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Leu Asp Val
1 5 10 15
<210> 288
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 288
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 289
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 289
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 290
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 290
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 291
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 291
Gln Gln Gly Tyr Ala Leu Pro Ile Thr
1 5
<210> 292
<211> 122
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 292
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 293
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 293
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 294
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 294
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 295
<211> 15
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 295
Ala Arg Ala Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Asn Ile
1 5 10 15
<210> 296
<211> 107
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 296
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 297
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 297
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 298
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 298
Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 299
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 299
Gln Gln Asp Gly Ser Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 300
<211> 126
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 300
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 301
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 301
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 302
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 302
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 303
<211> 19
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 303
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 304
<211> 108
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 304
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 305
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 305
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 306
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 306
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 307
<211> 10
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 307
Gln Gln Ala Val Asn Phe Pro Pro Ile Thr
1 5 10
<210> 308
<211> 120
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 308
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val Trp Gly Lys
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 309
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 309
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 310
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 310
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 311
<211> 13
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 311
Ala Arg Glu Ala Ser Trp Leu Pro Gly Ser Leu Asp Val
1 5 10
<210> 312
<211> 113
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 312
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 313
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 313
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 314
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 314
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 315
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 315
Gln Gln Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr
1 5
<210> 316
<211> 126
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 316
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 317
<211> 9
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 317
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 318
<211> 17
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 318
Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 319
<211> 19
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 319
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Thr Thr Leu Thr Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 320
<211> 108
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 320
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 321
<211> 11
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 321
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 322
<211> 7
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 322
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 323
<211> 10
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 323
Gln Gln Ser Ala Asn Thr Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 324
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 324
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Val Lys Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 325
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 325
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Met Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Ser Phe Gln Thr Glu Asp Leu Gly Asp Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg
100 105 110
<210> 326
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 326
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 327
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 327
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 328
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 328
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 329
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 329
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 330
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 330
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 331
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 331
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 332
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 332
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 333
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 333
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 334
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 334
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 335
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 335
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 336
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 336
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 337
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 337
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 338
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 338
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 339
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 339
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 340
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 340
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 341
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 341
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 342
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 342
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 343
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 343
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 344
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 344
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 345
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 345
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 346
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 346
Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr
1 5
<210> 347
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 347
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 348
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 348
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 349
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 349
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 350
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 350
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 351
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 351
Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 352
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 352
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 353
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 353
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 354
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 354
Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr
1 5
<210> 355
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 355
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 356
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 356
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 357
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 357
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 358
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 358
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 359
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 359
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 360
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 360
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 361
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 361
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 362
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 362
Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 363
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 363
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 364
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 364
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 365
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 365
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 366
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 366
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 367
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 367
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 368
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 368
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 369
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 369
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 370
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 370
Tyr Ala Ser Thr Arg Glu Thr
1 5
<210> 371
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 371
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 372
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 372
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 373
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 373
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 374
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 374
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp
1 5 10
<210> 375
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 375
Asn Ile Asp Glu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 376
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 376
Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser
1 5
<210> 377
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 377
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr
1 5 10 15
<210> 378
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 378
Tyr Ala Ser Thr Arg Gln Thr
1 5
<210> 379
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 379
His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 380
<211> 447
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 380
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 381
<211> 218
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Гуманизированное антитело
<400> 381
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly
20 25 30
Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr
85 90 95
Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 382
<211> 268
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 382
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145 150 155 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165 170 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180 185 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195 200 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210 215 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225 230 235 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245 250 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260 265
<210> 383
<211> 268
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 383
Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr
1 5 10 15
Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn
35 40 45
Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn
50 55 60
Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala
100 105 110
Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile
115 120 125
Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly
130 135 140
Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala Leu Val Gly Ile
145 150 155 160
Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val Phe Cys Ser Thr
165 170 175
Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp Asp Thr Leu Lys
180 185 190
Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala Tyr Glu Glu Leu
195 200 205
Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro Thr Ala Cys Val
210 215 220
His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu Gly Ala Ser
225 230 235 240
Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln Gly Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260 265
<210> 384
<211> 268
<212> Белок
<213> Macaca fascicularis
<400> 384
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145 150 155 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165 170 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180 185 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195 200 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210 215 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225 230 235 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245 250 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260 265
<210> 385
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека D85G ECD-Fc-His6
<400> 385
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Gly Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 386
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека R86L ECD-Fc-His6
<400> 386
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Leu Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 387
<211> 376
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека N33-Q167 ECD-Fc-His6
<400> 387
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
1 5 10 15
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
35 40 45
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
50 55 60
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
65 70 75 80
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
85 90 95
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
100 105 110
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
115 120 125
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
145 150 155 160
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
165 170 175
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
180 185 190
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
195 200 205
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
210 215 220
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
225 230 235 240
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
245 250 255
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
260 265 270
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
275 280 285
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
290 295 300
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
305 310 315 320
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
325 330 335
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
340 345 350
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
355 360 365
Ser Gly His His His His His His
370 375
<210> 388
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека K78A ECD-Fc-His6
<400> 388
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Ala Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 389
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека I126A ECD-Fc-His6
<400> 389
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ala Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 390
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека L128A ECD-Fc-His6
<400> 390
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Ala Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 391
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека A132L ECD-Fc-His6
<400> 391
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Leu Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 392
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека I134A ECD-Fc-His6
<400> 392
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ala Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 393
<211> 390
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека E136A ECD-Fc-His6
<400> 393
Asp Thr Thr Gly Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe
1 5 10 15
Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr
20 25 30
Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg
35 40 45
Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp
50 55 60
Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro
65 70 75 80
Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp
85 90 95
Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln
100 105 110
Ile Lys Ala Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala
115 120 125
Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln
130 135 140
Phe Gln Thr Leu Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys
145 150 155 160
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
165 170 175
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
180 185 190
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
195 200 205
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
210 215 220
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
245 250 255
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
260 265 270
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
275 280 285
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
290 295 300
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
305 310 315 320
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
325 330 335
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
340 345 350
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
355 360 365
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly
370 375 380
His His His His His His
385 390
<210> 394
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 мыши H129P ECD-Fc-His6
<400> 394
Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala
1 5 10 15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20 25 30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln
50 55 60
Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His
65 70 75 80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser
115 120 125
Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 395
<211> 287
<212> Белок
<213> Rattus norvegicus
<400> 395
Met Trp Val Gln Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp
20 25 30
Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala
65 70 75 80
Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln
85 90 95
Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val
130 135 140
Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro
145 150 155 160
Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly Leu Val Ile Val Ile Met Ser Val
165 170 175
Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Ala
180 185 190
Phe Cys Ser Thr Gly Met Ser Glu Ala Arg Glu Ala Gly Arg Lys Glu
195 200 205
Asp Pro Pro Lys Glu Ala His Ala Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala
210 215 220
Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu
245 250 255
Asp Ala Ser Ala Ile Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Gln Gly
260 265 270
Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 396
<211> 263
<212> Белок
<213> Rattus norvegicus
<400> 396
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1 5 10 15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20 25 30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50 55 60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65 70 75 80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115 120 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130 135 140
Leu Val Ile Val Ile Met Ser Val Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Ala Phe Cys Ser Thr Gly Met Ser Glu
165 170 175
Ala Arg Glu Ala Gly Arg Lys Glu Asp Pro Pro Lys Glu Ala His Ala
180 185 190
Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly
195 200 205
Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Ala Pro Cys Val His Thr Glu Tyr Ala
210 215 220
Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly Leu Asp Ala Ser Ala Ile Gly Arg Arg
225 230 235 240
Gly Ser Ala Asp Gly Pro Gln Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp
245 250 255
Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260
<210> 397
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 крысы P129H ECD-Fc-His6
<400> 397
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1 5 10 15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20 25 30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50 55 60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65 70 75 80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115 120 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 398
<211> 288
<212> Белок
<213> Canis lupus familiaris
<400> 398
Met Gly Ser Arg Arg Gly Pro Trp Pro Leu Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Trp Pro Gly Trp Leu Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala
100 105 110
Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu
115 120 125
Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val
130 135 140
Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro
145 150 155 160
Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly Leu Val Ile Gly Val Thr Ser Val
165 170 175
Leu Val Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Trp Val Leu Ala Ala
180 185 190
Val Phe Pro Arg Ala Thr Arg Gly Ala Cys Val Cys Gly Ser Glu Asp
195 200 205
Glu Pro Leu Lys Glu Gly Pro Asp Ala Ala Pro Val Phe Thr Leu Asp
210 215 220
Tyr Gly Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro
225 230 235 240
Ala Pro Cys Ala Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro
245 250 255
Gly Arg Pro Ala Ser Pro Gly Arg Arg Ala Ser Ala Ser Ser Leu Gln
260 265 270
Gly Ala Gln Pro Pro Ser Pro Glu Asp Gly Pro Gly Leu Trp Pro Pro
275 280 285
<210> 399
<211> 264
<212> Белок
<213> Canis lupus familiaris
<400> 399
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala
1 5 10 15
Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20 25 30
Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu
50 55 60
Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65 70 75 80
Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu
100 105 110
Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro
115 120 125
Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly
130 135 140
Leu Val Ile Gly Val Thr Ser Val Leu Val Gly Val Leu Leu Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Thr Trp Val Leu Ala Ala Val Phe Pro Arg Ala Thr Arg Gly
165 170 175
Ala Cys Val Cys Gly Ser Glu Asp Glu Pro Leu Lys Glu Gly Pro Asp
180 185 190
Ala Ala Pro Val Phe Thr Leu Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe Gln Trp
195 200 205
Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Ala Pro Cys Ala Pro Glu Gln Thr
210 215 220
Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Gly Arg Pro Ala Ser Pro Gly Arg
225 230 235 240
Arg Ala Ser Ala Ser Ser Leu Gln Gly Ala Gln Pro Pro Ser Pro Glu
245 250 255
Asp Gly Pro Gly Leu Trp Pro Pro
260
<210> 400
<211> 20
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 400
Met Gly Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 401
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека, внеклеточный домен (ECD)-Fc-His6
<400> 401
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala
1 5 10 15
Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20 25 30
Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln
50 55 60
Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg
65 70 75 80
Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100 105 110
Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro
115 120 125
Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 402
<211> 386
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 человека D85G/R86L ECD-Fc-His6
<400> 402
Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser
20 25 30
Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser
35 40 45
Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Gly Leu Ser Gln Pro
50 55 60
Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp
65 70 75 80
Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr
85 90 95
Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr
115 120 125
Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu
130 135 140
Val Gly Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His
370 375 380
His His
385
<210> 403
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 мыши ECD-Fc-His6
<400> 403
Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala
1 5 10 15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20 25 30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln
50 55 60
Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His
65 70 75 80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser
115 120 125
Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 404
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 яванского макака ECD-Fc-His6
<400> 404
Leu Glu Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Ala Pro Thr Phe Ser Pro Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20 25 30
Ser Asn Ala Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln
50 55 60
Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65 70 75 80
Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100 105 110
Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro
115 120 125
Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 405
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 крысы ECD-Fc-His6
<400> 405
Leu Glu Val Leu Asn Lys Pro Trp Arg Pro Leu Thr Phe Ser Pro Thr
1 5 10 15
Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe
20 25 30
Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Lys Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Tyr Ser Gln
50 55 60
Pro Val Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile Val Gln Leu Pro Asn Gly His
65 70 75 80
Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Pro Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
100 105 110
Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Pro
115 120 125
Thr Arg Tyr Pro Arg Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Gln Phe Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<210> 406
<211> 384
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PD-1 собаки ECD-Fc-His6
<400> 406
Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Ser Pro Leu Thr Phe Ser Pro Ala
1 5 10 15
Gln Leu Thr Val Gln Glu Gly Glu Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu
20 25 30
Ala Asp Ile Pro Asp Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Leu Ser Pro
35 40 45
Arg Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Gln Glu Asp Arg Ile Glu
50 55 60
Pro Gly Arg Asp Arg Arg Phe Arg Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg
65 70 75 80
Asp Phe His Met Ser Ile Val Ala Ala Arg Leu Asn Asp Ser Gly Ile
85 90 95
Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Tyr Leu Pro Pro Asn Thr Gln Ile Asn Glu
100 105 110
Ser Pro Arg Ala Glu Leu Ser Val Thr Glu Arg Thr Leu Glu Pro Pro
115 120 125
Thr Gln Ser Pro Ser Pro Pro Pro Arg Leu Ser Gly Gln Leu Gln Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
145 150 155 160
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
165 170 175
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
180 185 190
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
195 200 205
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
210 215 220
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
225 230 235 240
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
245 250 255
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
260 265 270
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
275 280 285
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
290 295 300
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
305 310 315 320
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
325 330 335
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
340 345 350
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
355 360 365
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly His His His His His His
370 375 380
<---

Claims (185)

1. Антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1 (PD-1), причем антитело содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:27; или
ii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; или
iii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19; или
iv) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35; или
v) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43; или
vi) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51; или
vii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59; или
viii) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67; или
ix) a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115; или
x) a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123.
2. Антитело по п. 1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем:
i) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24; или
ii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8; или
iii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16; или
iv) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32; или
v) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40; или
vi) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48; или
vii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56; или
viii) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 60; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64; или
ix) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 108; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 112; или
x) VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 116; и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120.
3. Антитело по п. 1 или 2, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем:
i) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; или
ii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или
iii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; или
iv) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32; или
v) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40; или
vi) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или
vii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56; или
viii) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64; или
ix) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112; или
x) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120.
4. Антитело, которое связывается с белком запрограммированной смерти клеток 1
(PD-1), причем антитело содержит:
i) (a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;
и (f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.
5. Антитело по п. 4, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем:
VH идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 и VL идентична по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24.
6. Антитело по п. 4 или 5, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), причем: VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
7. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело связывается с PD-1 человека с аффинностью (KD) менее чем 5 нМ.
8. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело связывается с PD-1 мыши с аффинностью (KD) менее 10 нМ.
9. Антитело по п. 7 или 8, аффинность которого определяют с использованием биослойной интерферометрии.
10. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело является моноклональным антителом.
11. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело представляет собой антитело человека, химерное антитело или гуманизированное антитело.
12. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело представляет собой фрагмент антитела, выбранный из фрагмента Fab, Fab ', Fv, scFv или (Fab')2.
13. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело является полноразмерным антителом.
14. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело связывает PD-1 человека.
15. Антитело по п. 14, причем PD-1 человека содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 382.
16. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело связывает PD-1 мыши.
17. Антитело по п. 16, причем PD-1 мыши содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 383.
18. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело связывает PD-1 яванского макака.
19. Антитело по п. 18, причем PD-1 яванского макака содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 384.
20. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело ингибирует связывание PD-1 с PD-L1.
21. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело ингибирует связывание PD-1 с PD-L2.
22. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем антитело ингибирует связывание PD-1 с PD-L1 и ингибирует связывание PD-1 с PD-L2.
23. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем введение антитела млекопитающему повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2.
24. Антитело по п. 23, причем антитело повышает уровень по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2, по меньшей мере в 2 раза.
25. Антитело по п. 24, причем уровень цитокина измеряют через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела.
26. Антитело по любому из пп. 23–25, причем по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ.
27. Антитело по любому из пп. 23–26, причем по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2.
28. Антитело по любому из пп. 23–27, причем уровень хемокина измеряют через 24 часа после введения антитела.
29. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем введение антитела млекопитающему усиливает иммунный ответ у млекопитающего.
30. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем введение антитела млекопитающему приводит к активации Т-клеток у млекопитающего.
31. Антитело по любому из предшествующих пунктов, причем введение антитела млекопитающему уменьшает размер опухоли у млекопитающего, больного раком.
32. Антитело по любому из пп. 23–31, причем млекопитающее представляет собой человека.
33. Антитело по п. 32, причем человек болен раком.
34. Антитело по п. 33, причем рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
35. Антитело по п. 34, причем рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
36. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из предшествующих пунктов.
37. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 36.
38. Клетка-хозяин для продуцирования антитела по любому из пп. 1-35, содержащая вектор по п. 37.
39. Способ получения анти-PD-1-антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 38 в условиях, подходящих для экспрессии антитела.
40. Способ по п. 39, дополнительно включающий выделение антитела, продуцируемого клеткой-хозяином.
41. Фармацевтическая композиция для лечения рака у млекопитающего, содержащая анти-PD-1-антитело по любому из пп. 1–35 и фармацевтически приемлемый носитель.
42. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41.
43. Способ по п. 42, в котором рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
44. Способ по п. 43, в котором рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
45. Способ усиления иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41.
46. Способ увеличения активации Т-клетки у млекопитающего, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41.
47. Способ уменьшения размера опухоли у млекопитающего, больного раком, включающий введение эффективного количества анти-PD-1-антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41.
48. Способ по любому из пп. 42–47, в котором млекопитающее представляет собой человека.
49. Способ по любому из пп. 42–48, в котором млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство.
50. Способ по п. 49, в котором дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1-антителом.
51. Способ по п. 49 или 50, в котором дополнительное терапевтическое средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела.
52. Способ по п. 51, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело.
53. Способ по п. 49 или 50, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковую вакцину.
54. Способ по п. 53, в котором противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученный методами генной инженерии, противоопухолевой вакцины, полученный методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
55. Применение антитела по любому из пп. 1–35 для изготовления лекарственного средства для лечения рака.
56. Применение по п. 55, в котором рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
57. Применение по п. 56, в котором рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
58. Применение по любому из пп. 55–57, в котором лекарственное средство предназначено для введения по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством.
59. Применение по п. 58, в котором дополнительное терапевтическое средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела.
60. Применение по п. 59, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело.
61. Применение по п. 58, в котором дополнительный терапевтический агент представляет собой противораковую вакцину.
62. Применение по п. 61, в котором противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, противоопухолевой вакцины, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
63. Применение антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41 для лечения рака.
64. Применение по п. 63, в котором рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
65. Применение по п. 64, в котором рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
66. Применение антитела по любому из пп. 1–35 или фармацевтической композиции по п. 41 и по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства для лечения рака.
67. Применение по п. 66, в котором дополнительное терапевтическое средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела.
68. Применение по п. 67, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело.
69. Применение по п. 66, в котором дополнительный терапевтический агент представляет собой противораковую вакцину.
70. Применение по п. 69, в котором противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, противоопухолевой вакцины, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
71. Применение по любому из пп. 66–70, в котором рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
72. Применение по п. 71, в котором рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
73. Антитело по любому из пп. 1–35 или фармацевтическая композиция по п. 41 для применения в лечении рака.
74. Антитело по п. 73, причем рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
75. Антитело по п. 74, причем рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
76. Способ повышения уровня по меньшей мере одного цитокина, выбранного из IFNγ и IL-2, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему антитела по любому из пп. 1–35.
77. Способ по п. 76, в котором уровень цитокина измеряют через 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 14 часов, 16 часов, 18 часов, 20 часов, 22 часа, 24 часа, 36 часов или 48 часов после введения антитела.
78. Способ по п. 76 или 77, в котором по меньшей мере один цитокин представляет собой IFNγ.
79. Способ по любому из пп. 76–78, в котором по меньшей мере один цитокин представляет собой IL-2.
80. Способ по любому из пп. 76–78, в котором уровень цитокина измеряют через 24 часа после введения антитела.
81. Способ по любому из пп. 76–80, в котором млекопитающее представляет собой человека.
82. Способ по п. 81, в котором человек болен раком.
83. Способ по п. 82, в котором рак выбран из меланомы, немелкоклеточного рака легких (НМРЛ), почечно-клеточного рака (ПКР), рака желудка, рака мочевого пузыря, диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДКВЛ), лимфомы Ходжкина, рака яичников, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), мезотелиомы и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
84. Способ по п. 83, в котором рак выбран из меланомы, рака желудка, плоскоклеточного рака головы и шеи (ПРГШ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) и трижды негативного рака молочной железы (ТНРМЖ).
85. Способ по любому из пп. 76–84, в котором иммунный ответ усиливается после введения анти-PD-1-антитела.
86. Способ по любому из пп. 76–85, в котором активация Т-клеток увеличивается после введения анти-PD-1-антитела.
87. Способ по любому из пп. 76–86, в котором размер опухоли уменьшается после введения анти-PD-1-антитела.
88. Способ по любому из пп. 76–87, в котором млекопитающему вводят по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство.
89. Способ по п. 88, в котором дополнительное терапевтическое средство вводят одновременно или последовательно с анти-PD-1-антителом.
90. Способ по любому из пп. 88 или 89, в котором дополнительное терапевтическое средство выбрано из анти-ICOS-антитела и анти-CTLA4-антитела.
91. Способ по п. 90, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой анти-ICOS-антитело.
92. Способ по любому из пп. 88 или 89, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковую вакцину.
93. Способ по п. 92, в котором противораковая вакцина выбрана из ДНК-вакцины, вирусной вакцины, полученной методами генной инженерии, противоопухолевой вакцины, полученной методами генной инженерии, и противораковой вакцины, разработанной с использованием неоантигенов.
94. Способ или применение по любому из пп. 42-72, в котором образец рака определен как экспрессирующий PD-1.
95. Способ по п. 94, в котором образец демонстрирует окрашивание 1+, 2+ или 3+ PD-1 иммуногистохимическим (ИГХ) анализом.
96. Способ или применение по любому из пп. 42-72, 94 или 95, в котором образец определен как таковой, который имеет повышенный уровень PD-L1.
97. Способ по п. 96, в котором уровни PD-L1 определяют с использованием ИГХ анализа.
RU2019116653A 2016-11-02 2017-11-01 Антитела к pd-1 и их применение RU2761640C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662416602P 2016-11-02 2016-11-02
US62/416,602 2016-11-02
PCT/US2017/059481 WO2018085358A1 (en) 2016-11-02 2017-11-01 Antibodies to pd-1 and uses thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021135457A Division RU2021135457A (ru) 2016-11-02 2017-11-01 Антитела к pd-1 и их применение

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019116653A RU2019116653A (ru) 2020-12-03
RU2019116653A3 RU2019116653A3 (ru) 2021-04-30
RU2761640C2 true RU2761640C2 (ru) 2021-12-13

Family

ID=60543661

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019116653A RU2761640C2 (ru) 2016-11-02 2017-11-01 Антитела к pd-1 и их применение

Country Status (29)

Country Link
US (3) US10654929B2 (ru)
EP (2) EP3535298B1 (ru)
JP (2) JP7086066B2 (ru)
KR (1) KR20190088480A (ru)
CN (1) CN110392694B (ru)
AR (1) AR110017A1 (ru)
AU (1) AU2017355401A1 (ru)
BR (1) BR112019008494A2 (ru)
CA (1) CA3039992A1 (ru)
CY (1) CY1124730T1 (ru)
DK (1) DK3535298T3 (ru)
ES (1) ES2898025T3 (ru)
HR (1) HRP20211703T1 (ru)
HU (1) HUE057559T2 (ru)
IL (1) IL266259A (ru)
LT (1) LT3535298T (ru)
MA (1) MA46708B1 (ru)
MD (1) MD3535298T2 (ru)
MX (1) MX2019004834A (ru)
MY (1) MY195110A (ru)
PL (1) PL3535298T3 (ru)
PT (1) PT3535298T (ru)
RS (1) RS62589B1 (ru)
RU (1) RU2761640C2 (ru)
SG (1) SG11201903857UA (ru)
SI (1) SI3535298T1 (ru)
TW (2) TW202321301A (ru)
WO (1) WO2018085358A1 (ru)
ZA (1) ZA201902455B (ru)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
EP3313883B1 (en) * 2015-06-23 2023-12-06 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Novel pd-1 immune modulating agents
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
CN116640214A (zh) 2016-08-09 2023-08-25 科马布有限公司 分离抗体及其应用
EP3535298B1 (en) 2016-11-02 2021-09-08 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to pd-1 and uses thereof
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
JP2020505009A (ja) 2017-01-05 2020-02-20 カール メディカル リミテッド Ｐｄ１−４１ｂｂｌ融合タンパク質およびその使用方法
WO2018127916A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A pd1-cd70 fusion protein and methods of use thereof
KR102581439B1 (ko) 2017-01-05 2023-09-21 카 메디컬 리미티드 Sirp알파-41bbl 융합 단백질 및 이의 이용 방법
US11299530B2 (en) 2017-01-05 2022-04-12 Kahr Medical Ltd. SIRP alpha-CD70 fusion protein and methods of use thereof
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
HUE058233T2 (hu) 2017-08-03 2022-07-28 Amgen Inc Interleukin-21-muteinek és kezelési eljárások
WO2019122882A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
US10723798B2 (en) 2017-12-22 2020-07-28 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to LILRB2
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
US11564995B2 (en) * 2018-10-29 2023-01-31 Wisconsin Alumni Research Foundation Peptide-nanoparticle conjugates
TWI809286B (zh) 2019-07-05 2023-07-21 日商小野藥品工業股份有限公司 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療
US20220332825A1 (en) 2019-08-08 2022-10-20 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific protein
CN110669108A (zh) * 2019-09-06 2020-01-10 中国药科大学 一种多肽及其应用
CN110590959B (zh) * 2019-09-19 2021-01-05 北京伟杰信生物科技有限公司 重组犬pd-1融合蛋白及其制备方法与应用
WO2021091960A1 (en) 2019-11-05 2021-05-14 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating cancer with anti-pd-1 antibodies
CN110964111B (zh) * 2019-12-25 2020-07-24 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-l1单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
CN111175489B (zh) * 2020-01-03 2021-03-30 山西大学 磁珠评价免疫检查点分子阻断性抗体阻断活性方法
CN115087488A (zh) * 2020-02-14 2022-09-20 震动疗法股份有限公司 与ccr8结合的抗体和融合蛋白及其用途
CN116194471A (zh) * 2020-06-23 2023-05-30 卡德门企业有限公司 抗pd-1抗体和融合蛋白
WO2022068919A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 正大天晴康方(上海)生物医药科技有限公司 结合pd-1抗体的肽及其应用
KR102450914B1 (ko) 2022-03-23 2022-10-06 재단법인 경북아이티융합 산업기술원 차량 간 통신 기반 차량 무선 업데이트 방법 및 시스템
WO2024077069A1 (en) * 2022-10-05 2024-04-11 Chulalongkorn University Monoclonal antibodies against human programmed cell death protein 1 (pd-1)
CN116854820B (zh) * 2023-06-26 2024-02-06 华中科技大学同济医学院附属协和医院 Pd-1非阻断性清除抗体及其用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010105256A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Adimab, Inc. Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
WO2015175334A2 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 Bavarian Nordic, Inc. Combination therapy for treating cancer with a recombinant poxvirus expressing a tumor antigen and an immune checkpoint molecule antagonist or agonist
WO2016106159A1 (en) * 2014-12-22 2016-06-30 Enumeral Biomedical Holding, Inc. Anti-pd-1 antibodies
RU2599417C2 (ru) * 2005-05-09 2016-10-10 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
WO1999051642A1 (en) 1998-04-02 1999-10-14 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
ES2434961T5 (es) 1998-04-20 2018-01-18 Roche Glycart Ag Ingeniería de glicosilación de anticuerpos para mejorar la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP3031917A1 (en) 1999-04-09 2016-06-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
IL149809A0 (en) 1999-12-15 2002-11-10 Genentech Inc Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
CN103333860B (zh) 2000-10-06 2015-07-08 协和发酵麒麟株式会社 产生抗体组合物的细胞
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
NZ581474A (en) 2001-08-03 2011-04-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003084570A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
WO2003085118A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production de composition anticorps
EP1498485A4 (en) 2002-04-09 2006-09-06 Kyowa Hakko Kogyo Kk CELLS WITH MODIFIED GENOM
CA2481658A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to fcy receptor iiia
AU2003236020B2 (en) 2002-04-09 2009-03-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in GDP-fucose transport
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
ATE481985T1 (de) 2002-07-03 2010-10-15 Ono Pharmaceutical Co Immunpotenzierende zusammensetzungen
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DK1572744T3 (da) 2002-12-16 2010-09-20 Genentech Inc Immunoglobulinvarianter og deres anvendelser
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
US8268582B2 (en) 2003-10-22 2012-09-18 Keck Graduate Institute Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy
ME03330B (me) 2003-11-05 2019-10-20 Roche Glycart Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom za vezivanje fc receptora i efektornom funkcijom
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
US7527791B2 (en) 2004-03-31 2009-05-05 Genentech, Inc. Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
JP2008528033A (ja) 2005-01-27 2008-07-31 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド ポリペプチドの分泌を検出するためのリーダー配列およびその産生のための方法
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
US8679490B2 (en) 2005-11-07 2014-03-25 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
EP1973951A2 (en) 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AR060871A1 (es) 2006-05-09 2008-07-16 Genentech Inc Union de polipeptidos con supercontigos optimizados
SI2395018T1 (sl) * 2006-06-06 2016-06-30 Crucell Holland B.V. Humane vezne molekule, z ubijalsko aktivnostjo proti stafilokokom in njihova uporaba
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
US7994290B2 (en) 2007-01-24 2011-08-09 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Effector function enhanced recombinant antibody composition
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
PL2170959T3 (pl) 2007-06-18 2014-03-31 Merck Sharp & Dohme Przeciwciała przeciwko ludzkiemu receptorowi programowanej śmierci PD-1
AU2008298603B2 (en) 2007-09-14 2015-04-30 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
PL2350129T3 (pl) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc Kompozycje antagonistów PD-1 i sposoby stosowania
US9783578B2 (en) 2010-06-25 2017-10-10 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
EP3336225B1 (en) 2010-07-16 2020-02-19 Adimab, LLC Antibody libraries
EP2830663B1 (en) * 2012-03-30 2019-02-06 Sorrento Therapeutics Inc. Fully human antibodies that bind to vegfr2
BR122022015975B1 (pt) 2012-05-15 2024-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Anticorpos monoclonais, kit para o tratamento de um indivíduo afligido com um câncer, processo para medir pd-l1 membranoso em células tumorais isoladas e uso do anticorpo ou uma porção que se liga ao antígeno do mesmo
EP2911669B1 (en) 2012-10-26 2024-04-10 The University of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
WO2014124217A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University A selective high-affinity immune stimulatory reagent and uses thereof
WO2014150646A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Bristol-Myers Squibb Company Ido inhibitors
CA2905798C (en) 2013-03-15 2023-01-24 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
WO2014179664A2 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
CN107011441B (zh) 2013-09-13 2020-12-01 百济神州(广州)生物科技有限公司 抗pd1抗体及其作为治疗剂与诊断剂的用途
ME03527B (me) * 2013-12-12 2020-04-20 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antitijelo, njegov fragment koji se vezuje na antigen, i njegova medicinska primjena
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
US9982053B2 (en) * 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
US10800830B2 (en) 2014-08-08 2020-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High affinity PD-1 agents and methods of use
LT3221356T (lt) 2014-11-20 2020-11-25 F. Hoffmann-La Roche Ag T ląstelę aktyvinančios bispecifinės antigeną surišančios molekulės prieš folr1 ir cd3
HUE059788T2 (hu) 2015-10-02 2022-12-28 Symphogen As PD-1 elleni antitestek és készítmények
CN105153315B (zh) * 2015-10-09 2019-04-02 重庆精准生物技术有限公司 免疫抑制受体联合肿瘤抗原嵌合受体及其应用
US10294299B2 (en) 2016-01-22 2019-05-21 MabQuest SA Immunological reagents
CN105601752B (zh) * 2016-02-01 2019-08-23 海门郝怡雅医药科技有限公司 一种多基因重组嵌合抗原受体分子
KR102273634B1 (ko) 2016-09-21 2021-07-07 씨스톤 파마슈티컬즈 예정 사멸 1(pd-1)에 대한 신규한 단일클론성 항체
EP3535298B1 (en) 2016-11-02 2021-09-08 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to pd-1 and uses thereof
IL276675B2 (en) 2018-02-23 2023-10-01 Eucure Beijing Biopharma Co Ltd Anti-PD-1 antibodies and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2599417C2 (ru) * 2005-05-09 2016-10-10 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
WO2010105256A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Adimab, Inc. Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
WO2015175334A2 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 Bavarian Nordic, Inc. Combination therapy for treating cancer with a recombinant poxvirus expressing a tumor antigen and an immune checkpoint molecule antagonist or agonist
WO2016106159A1 (en) * 2014-12-22 2016-06-30 Enumeral Biomedical Holding, Inc. Anti-pd-1 antibodies

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JU YEON LEE et al., Structural basis of checkpoint blockade by monoclonal antibodies in cancer immunotherapy, NATURE COMMUNICATIONS, 31 Oct 2016, vol. 7:13354. *
OHAEGBULAM K.C. et al., Human cancer immunotherapy with antibodies to the PD-1 and PD-L1 pathway, Trends in Molecular Medicine, 2015, Volume 21, Issue 1, pp.24-33. *

Also Published As

Publication number Publication date
MD3535298T2 (ro) 2022-01-31
HUE057559T2 (hu) 2022-06-28
TWI781120B (zh) 2022-10-21
CN110392694B (zh) 2023-08-04
MA46708A (fr) 2021-05-05
BR112019008494A2 (pt) 2019-07-09
PL3535298T3 (pl) 2021-12-27
US20200399374A1 (en) 2020-12-24
JP2022070873A (ja) 2022-05-13
US10654929B2 (en) 2020-05-19
MY195110A (en) 2023-01-10
JP7086066B2 (ja) 2022-06-17
AR110017A1 (es) 2019-02-13
CA3039992A1 (en) 2018-05-11
KR20190088480A (ko) 2019-07-26
EP3988569A1 (en) 2022-04-27
JP2019534008A (ja) 2019-11-28
HRP20211703T1 (hr) 2022-02-04
RU2019116653A3 (ru) 2021-04-30
TW202321301A (zh) 2023-06-01
RS62589B1 (sr) 2021-12-31
RU2019116653A (ru) 2020-12-03
SI3535298T1 (sl) 2022-01-31
WO2018085358A1 (en) 2018-05-11
IL266259A (en) 2019-06-30
PT3535298T (pt) 2021-11-25
ZA201902455B (en) 2020-11-25
ES2898025T3 (es) 2022-03-03
US11384147B2 (en) 2022-07-12
EP3535298A1 (en) 2019-09-11
CY1124730T1 (el) 2022-07-22
EP3535298B1 (en) 2021-09-08
CN110392694A (zh) 2019-10-29
DK3535298T3 (da) 2021-11-15
AU2017355401A1 (en) 2019-05-02
US20180118829A1 (en) 2018-05-03
US20230018445A1 (en) 2023-01-19
TW201819411A (zh) 2018-06-01
MX2019004834A (es) 2019-06-20
MA46708B1 (fr) 2021-10-29
LT3535298T (lt) 2021-12-27
SG11201903857UA (en) 2019-05-30
US11905329B2 (en) 2024-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11905329B2 (en) Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
US20210171635A1 (en) Antibodies to ICOS
US11359019B2 (en) Antibodies to LILRB2
US20220378909A1 (en) Methods of Treating Cancer with Anti-PD-1 Antibodies
WO2023235699A1 (en) Antibodies to lilrb4 and uses thereof