RU2757818C2 - Способы и композиции для трансплантации стволовых клеток - Google Patents
Способы и композиции для трансплантации стволовых клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2757818C2 RU2757818C2 RU2018105988A RU2018105988A RU2757818C2 RU 2757818 C2 RU2757818 C2 RU 2757818C2 RU 2018105988 A RU2018105988 A RU 2018105988A RU 2018105988 A RU2018105988 A RU 2018105988A RU 2757818 C2 RU2757818 C2 RU 2757818C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hspc
- e4orf1
- cells
- expanded
- huvec
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 20
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 title description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 247
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 171
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 101001105486 Homo sapiens Proteasome subunit alpha type-7 Proteins 0.000 claims abstract 21
- 102100021201 Proteasome subunit alpha type-7 Human genes 0.000 claims abstract 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 36
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 27
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 25
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 21
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 claims description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 claims description 9
- 101000813735 Homo sapiens ETS translocation variant 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 8
- 102100039579 ETS translocation variant 2 Human genes 0.000 claims description 7
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 3
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010053138 Congenital aplastic anaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004939 Fanconi anemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 claims 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 abstract description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 47
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 20
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 20
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 11
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 11
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 11
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 10
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 9
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 9
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 9
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 9
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 8
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- -1 for example Substances 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 7
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 210000003311 CFU-EM Anatomy 0.000 description 5
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 5
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical group NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 4
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 4
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 3
- 206010051396 Delayed engraftment Diseases 0.000 description 3
- 102000040848 ETS family Human genes 0.000 description 3
- 108091071901 ETS family Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 3
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 3
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 3
- QCAWEPFNJXQPAN-UHFFFAOYSA-N methoxyfenozide Chemical compound COC1=CC=CC(C(=O)NN(C(=O)C=2C=C(C)C=C(C)C=2)C(C)(C)C)=C1C QCAWEPFNJXQPAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101001052849 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase Fer Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 210000002361 Megakaryocyte Progenitor Cell Anatomy 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 102100024537 Tyrosine-protein kinase Fer Human genes 0.000 description 2
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 2
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 2
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 2
- 208000034737 hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 2
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N nevirapine Chemical compound C12=NC=CC=C2C(=O)NC=2C(C)=CC=NC=2N1C1CC1 NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 150000007660 quinolones Chemical class 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 2
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 2
- IXXFZUPTQVDPPK-ZAWHAJPISA-N (1r,2r,4r,6r,7r,8r,10s,13r,14s)-17-[4-[4-(3-aminophenyl)triazol-1-yl]butyl]-7-[(2s,3r,4s,6r)-4-(dimethylamino)-3-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-13-ethyl-10-fluoro-6-methoxy-2,4,6,8,10,14-hexamethyl-12,15-dioxa-17-azabicyclo[12.3.0]heptadecane-3,9,11,16-tet Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)[C@](C)(F)C(=O)O[C@@H]([C@]2(OC(=O)N(CCCCN3N=NC(=C3)C=3C=C(N)C=CC=3)[C@@H]2[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@]1(C)OC)C)CC)[C@@H]1O[C@H](C)C[C@H](N(C)C)[C@H]1O IXXFZUPTQVDPPK-ZAWHAJPISA-N 0.000 description 1
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 1-{2-(4-chlorobenzyloxy)-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl}imidazole Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 9-fluoro-3-methyl-10-(4-methylpiperazin-1-yl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-[1,4]oxazino[2,3,4-ij]quinoline-6-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C3N2C(C)COC3=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000004255 Butylated hydroxyanisole Substances 0.000 description 1
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013925 CD34 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050003733 CD34 antigen Proteins 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N CPD000469186 Natural products CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)NC(C(O)CN1C(CC2CCCCC2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 description 1
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 101100220044 Homo sapiens CD34 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000876829 Homo sapiens Protein C-ets-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000898093 Homo sapiens Protein C-ets-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000813738 Homo sapiens Transcription factor ETV6 Proteins 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101150097381 Mtor gene Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229940122313 Nucleoside reverse transcriptase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N PG(18:0/18:0) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N Penciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(CCC(CO)CO)C=N2 JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 description 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100035251 Protein C-ets-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100021890 Protein C-ets-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000235525 Rhizomucor pusillus Species 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N Stavudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1C=C[C@@H](CO)O1 XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- 102000017168 Sterol 14-Demethylase Human genes 0.000 description 1
- 108010013803 Sterol 14-Demethylase Proteins 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102100039580 Transcription factor ETV6 Human genes 0.000 description 1
- HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N Valacyclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N Valcyte Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COC(CO)COC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N Zalcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)CC1 WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N 0.000 description 1
- 206010061418 Zygomycosis Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 1
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 108700019030 adenovirus E4orf6 Proteins 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229960001830 amprenavir Drugs 0.000 description 1
- YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N amprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 1
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043253 butylated hydroxyanisole Drugs 0.000 description 1
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 1
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N carbapenem Chemical compound C1C=CN2C(=O)C[C@H]21 YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N cefaclor Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=C(Cl)CS[C@@H]32)C(O)=O)=O)N)=CC=CC=C1 QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N 0.000 description 1
- 229960005361 cefaclor Drugs 0.000 description 1
- 229960000603 cefalotin Drugs 0.000 description 1
- OLVCFLKTBJRLHI-AXAPSJFSSA-N cefamandole Chemical compound CN1N=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](O)C=3C=CC=CC=3)[C@H]2SC1 OLVCFLKTBJRLHI-AXAPSJFSSA-N 0.000 description 1
- 229960003012 cefamandole Drugs 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- VUFGUVLLDPOSBC-XRZFDKQNSA-M cephalothin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C([O-])=O)C(=O)CC1=CC=CS1 VUFGUVLLDPOSBC-XRZFDKQNSA-M 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960002656 didanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229960003913 econazole Drugs 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008686 ergosterol biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 1
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 229960001447 fomivirsen Drugs 0.000 description 1
- XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N fomivirsen Chemical compound C1C(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC(CO)C1OP(O)(=S)OCC1OC(N(C)C(=O)\N=C(\N)C=C)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC(C(C1)OP(S)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)OC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000002360 granulocyte-macrophage progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229960001936 indinavir Drugs 0.000 description 1
- CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N indinavir Chemical compound C([C@H](N(CC1)C[C@@H](O)C[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H]2C3=CC=CC=C3C[C@H]2O)C(=O)NC(C)(C)C)N1CC1=CC=CN=C1 CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000018337 inherited hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960002422 lomefloxacin Drugs 0.000 description 1
- ZEKZLJVOYLTDKK-UHFFFAOYSA-N lomefloxacin Chemical compound FC1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCNC(C)C1 ZEKZLJVOYLTDKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960003702 moxifloxacin Drugs 0.000 description 1
- FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N moxifloxacin Chemical compound COC1=C(N2C[C@H]3NCCC[C@H]3C2)C(F)=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C1N2C1CC1 FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N 0.000 description 1
- 201000007524 mucormycosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000884 nelfinavir Drugs 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N nelfinavir Chemical compound CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)N[C@H]([C@H](O)CN1[C@@H](C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229960000808 netilmicin Drugs 0.000 description 1
- ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N netilmycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@]([C@H](NC)[C@@H](O)CO1)(C)O)NCC)[C@H]1OC(CN)=CC[C@H]1N ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229960000689 nevirapine Drugs 0.000 description 1
- 229940042402 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002726 nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229960001699 ofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229960001179 penciclovir Drugs 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004291 polyenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229950008588 solithromycin Drugs 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 229960004954 sparfloxacin Drugs 0.000 description 1
- DZZWHBIBMUVIIW-DTORHVGOSA-N sparfloxacin Chemical compound C1[C@@H](C)N[C@@H](C)CN1C1=C(F)C(N)=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN(C3CC3)C2=C1F DZZWHBIBMUVIIW-DTORHVGOSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960001203 stavudine Drugs 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229940093257 valacyclovir Drugs 0.000 description 1
- 229960002149 valganciclovir Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N voriconazole Chemical compound C1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=NC=C1F BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N 0.000 description 1
- 229960004740 voriconazole Drugs 0.000 description 1
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/28—Vascular endothelial cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Настоящее раскрытие относится к области биотехнологии и иммунологи и раскрывает способ получения расширенной популяции HSPC и эндотелиальных клеток (EC), пригодных для трансплантации HSPC. Для осуществления способа проводят контактирование CD34+ HSPC с E4ORF1+ эндотелиальными клетками пупочной вены человека (E4ORF1+ HUVEC) в биореакторе в исходном соотношении EC/HSPC. Далее проводят наращивание HSPC путем культивирования HSPC и E4ORF1+ HUVEC в биореакторе в условиях, позволяющих наращивать HSPC в течение первого периода времени для получения расширенной клеточной популяции, содержащей HSPC и E4ORF1+ HUVEC в расширенном соотношении HSPC/EC. Затем осуществляют сбор расширенной клеточной популяции из биореактора. В полученной популяции HSPC и E4ORF1+ HUVEC одновременно присутствуют в одной и той же среде на протяжении всех стадий наращивания и сбора, ни в какой момент во время способа HSPC не удаляются из E4ORF1+ HUVEC и не контактируют с дополнительными EC. Во время осуществления способа отсутствует очистка для удаления E4ORF1+ HUVEC из HSPC. Таким образом поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и E4ORF1+ HUVEC во время стадий наращивания и сбора. Настоящее изобретение позволяет улучшить терапию стволовыми клетками и облегчить наращивание и приживление HSPC. 19 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.
Description
Ссылка на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на патент США №62/194460, поданной 20 июля 2015 г., содержание которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Включение посредством ссылки
Для целей только тех юрисдикций, которые разрешают включение посредством ссылки, все приведенные в настоящем раскрытии ссылки полностью включены посредством ссылки. Кроме того, инструкции и каталоги любых производителей для любых продуктов, приведенных или упомянутых в настоящем документе, включены посредством ссылки. Документы, включенные посредством ссылки в этот текст, или любые положения в нем, могут быть использованы в практике настоящего изобретения.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к способам и композициям для улучшения терапии стволовыми клетками и, в частности, к способам и композициям для облегчения наращивания и приживления гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников и иммунного восстановления гемопоэтической системы реципиента трансплантата стволовых клеток.
Введение
Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников (HSCT) представляет собой критический компонент лечения широкого спектра гематологических нарушений. Как правило, существует два типа HSCT: аутологичная и аллогенная трансплантация. Аутологичная трансплантация предусматривает инфузию собственных клеток реципиента после миелоаблативного лечения. Трансплантация аутологичных клеток сводит к минимуму риск заболевания трансплантат против хозяина (РТПХ) и приводит к уменьшению осложнений. Аллогенная трансплантация предусматривает инфузию донорских стволовых клеток, как правило, с использованием донора, который соответствует MHC реципиента. Однако трансплантаты совместимых неродственных доноров (MUD) также связаны с более сильной реакцией трансплантат против хозяина и, следовательно, приводят к более высокой смертности.
Существует три основных источника гемопоэтических стволовых клеток и/или клеток-предшественников (HSPC): костный мозг, периферическая кровь и пуповинная кровь. Пуповинная кровь (UCB) является практическим альтернативным источником для других источников гемопоэтических предшественников (например, костного мозга и мобилизованной периферической крови) для родственной и неродственной аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. К сожалению, однако, хотя пуповинная кровь легко доступна и демонстрирует более низкие показатели заболеваемости трансплантат против хозяина, она характеризуется замедленным приживлением мультилинейных клеток (например, нейтрофилов, тромбоцитов, эритроцитов), все из которых важны для успешного и клинически значимого восстановление иммунитета. Соответственно, хотя существует огромная перспектива для лечения гематологических нарушений с помощью полученных из пуповинной крови HSPC, медленная скорость гемопоэтического восстановления остается основным препятствием, Laughlin, et al., N. Eng. J. Med. 351:22; 2265-2275 (2004), и эффективность приживления все еще значительно меньше, чем с HSC из костного мозга или периферической крови. Rocha et al., N. Eng. J. Med. 351:22; 2276-2285 (2004).
Гемопоэтические стволовые клетки могут быть нарощены размножены в различных средах, содержащих смесь цитокинов. Способы наращивания стволовых клеток известны в настоящей области техники, включая в себя, например, патент США № 6326198, патент США № 6338942; патент США № 6335195. Kobayashi et al. и Butler et al. недавно описали получение прогемопоэтической сосудистой ниши, происходящей из первичных эндотелиальных клеток человека (EC) путем трансдукции с аденовирусным геном E4ORF1, который минимально активирует путь Akt/Mtor, что приводит к экспрессии прогемопоэтических сигналов выживания и пролиферации. Kobayashi et al., Nature Cell Biology 12, 1046-1056 (2010); Butler et al., Blood 120, 1344-1347 (2012). Типичные процедуры наращивания HSPC/EC предусматривают совместное культивирование HSPC на монослое EC, внесенных в небольшую колбу для культивирования клеток, с использованием исходных соотношений EC:HSPC от 6:1 до 3:1. Через 24-48 часов HSPC удаляют и наносят на дополнительный монослой EC во второй колбе и так далее до тех пор, пока не будет получено требуемое количество HSPC. Тем не менее, одним из значительных отклонений от таких основанных на колбах наращиваний является большое количество открытых событий, в том числе 1800 для типичной процедуры, которые резко увеличивают риск заражения.
Потребность в культуральных способах и системах in vitro, способных к клинически применимой амплификации человеческих CD34+ HSPC, а также других гемопоэтических элементов продолжается. Система, способная производить большие количества определенных элементов костного мозга, необходима для обеспечения достаточного количества этих элементов для применения в терапевтических целях у человека, например, в качестве трансплантации костного мозга, трансфузионных компонентов крови или генетической терапии. Описанные в настоящем документе способы отвечают этим и другим потребностям.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
Настоящее изобретение рассматривает и успешно разрешает эту давнюю потребность в настоящей области техники, обеспечивая беспрецедентные уровни наращивания HSPC путем совместного культивирования HSPC с эндотелиальными клетками в биореакторах с замкнутой системой с использованием исходных соотношений EC/HSPC по меньшей мере 25:1, 50:1, 100:1 или 500:1 и еще более предпочтительно 1000:1, 2000:1 или 3000:1. Существенно, что взаимодействие между HSPC и EC остается без изменений во время стадии наращивания, тем самым поддерживая непрерывную межклеточную связь между HSPC и EC, повышая эффективность и общий выход наращивания. Кроме того, количество открытых событий уменьшается по сравнению с открытым окружением клеточной культуры, таким как колбы для культивирования, тем самым значительно снижая риск заражения.
HSPC, размноженная в соответствии с описанными в настоящем документе способами, оказывают благоприятные фармакологические эффекты, особенно при введении реципиенту HSCT в комбинации с EC, причем поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и EC при наращивании и введении. Временное существование этих аллогенных эндотелиальных клеток в кровообращении и/или в ткани дает полезные результаты in vivo в HSCT, такие как усиленное мультилинейное приживление и большая продолжительность приживления, а также относительно быстрое начальное приживление, как измерено, например, по количеству нейтрофилов. Как продемонстрировано впервые в настоящем документе, это верно, даже если эндотелиальные клетки облучаются до совместного культивирования с HSC и не могут реплицироваться.
Соответственно, один аспект настоящего изобретения относится к способам трансплантации стволовых клеток у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающим: (а) наращивание кроветворных стволовых клеток или клеток- предшественников (HSPC) путем контактирования HSPC с эндотелиальными клетками (EC) в исходном соотношении EC/HSPC для первого периода времени в условиях, позволяющих наращивание HSPC, для получения расширенной клеточной популяции, содержащей HSPC и EC, в расширенном соотношении HSPC/EC; и (b) трансфузию расширенной клеточной популяции, полученной на стадии (а), субъекту; причем поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и EC на протяжении всей стадии наращивания и трансфузии.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к композициям, содержащим HSPC и EC, для применения в трансплантации стволовых клеток у нуждающегося в этом субъекта, причем трансплантация стволовых клеток предусматривает описанные в настоящем документе способы. Предпочтительно, EC находятся в непосредственной близости от HSPC на всех стадиях наращивания и трансфузии, как описано и показано в настоящем документе. Еще более предпочтительно, EC находятся в непрерывном контакте с HSPC во время по меньшей мере стадии наращивания.
Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 200:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 300:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 400:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 500:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 600:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 700:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1000:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 2000:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 3000:1.
Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от 10:1 до 1:10. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 10:1 до приблизительно 1:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 9:1 до приблизительно 2:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 8:1 до приблизительно 3:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 7:1 до приблизительно 4:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 6:1 до приблизительно 5:1.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к наборам или системам для выделения, наращивания, сохранения и введения HSPC и эндотелиальных клеток в соответствии с описанными в настоящем документе способами.
Краткое описание графических материалов
Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что графические материалы предназначены только для иллюстрации и не предназначены для любого ограничения объема идей настоящего изобретения.
На фиг. 1 показаны изображения фазовой микроскопии влияния радиационного воздействия на E4ORF1+ сконструированные ЕС. EC собирали в стандартных условиях культивирования и трансдуцировали с E4ORF1. Затем клетки разделяли на две колбы и далее культивировали до 100% конфлюэнтности. Один сосуд оставляли без манипуляций (левая панель), а другой сосуд облучали 1500 кГр от цезиевого облучателя (правая панель). Не было обнаружено различий между двумя колбами посредством фазовой микроскопии.
На фиг. 2 показаны изображения последовательной фазовой микроскопии облученных (нижние ряды) и необлученных (верхние ряды) E4ORF1+ сконструированных ЕС в течение одной недели в культуре. Две колбы клеток культивировали до неполной конфлюэнтности, после чего одну колбу (нижние панели) облучали 1500 сГр с использованием цезиевого облучателя. Обе колбы дополнительно культивировали в течение одной недели, а изображения фазовой микроскопии получали через 1, 5 и 7 дней после облучения.
На фиг. 3 показаны изображения фазовой микроскопии HSPC в совместной культуре с облученными (нижние ряды) и необлученными (верхние ряды) E4ORF1+ сконструированными EC. Очищенные HSPC (CD34+) из пуповинной крови совместно культивировали в 6-луночных планшетах с конфлюэнтными монослоями необлученных и облученных посредством 1500 сГР E4ORF1 EC. По завершению 11-дневного наращивания и последовательного пересевания клеток изображения фазовой микроскопии получали как из исходной культуральной лунки («материнская лунка», «левая колонка»), так и одной из конечных лунок («конечная лунка», «правая колонка»), полученной последовательным пересеванием.
На фиг. 4 показаны данные проточной цитометрии совместных культур HSPC с облученными (нижние панели) и необлученными E4ORF1+ сконструированными EC (верхние панели). Очищенные HSPC (CD34+) из пуповинной крови совместно культивировали в 6-луночных планшетах с конфлюэнтными монослоями либо облученных, либо необлученных E4ORF1 EC. По окончанию 11-дневного наращивания гемопоэтические клетки анализировали с помощью проточной цитометрии. В левой колонке показаны результаты клеток, окрашенных на экспрессию CD45 (поверхностный маркер гемопоэтических клеток). Правая панель показывает результаты клеток, дважды окрашенных на экспрессию CD34 (положительный маркер для HSPC) и CD38 (отрицательный маркер для HSPC).
На фиг. 5 представлены репрезентативные изображения фазовой микроскопии краткосрочного (левая панель) и долгосрочного (правая панель) совместного культивирования HSPC-E4ORF1+ сконструированных EC и полученного уменьшения EC. Очищенные HSPC (CD34+) из пуповинной крови совместно культивировали в 6-луночном планшете с конфлюэнтными монослоями EC. По мере того, как популяция HSPC наращивалась, неадгезивные клетки осторожно удаляли и помещали на больший и свежий слой EC. Оригинальную лунку, называемую «материнской лункой», снабжали дополнительными средами. Этот процесс повторяется приблизительно каждые 48 часов для всех совместно культивированных лунок. В течение 7 дней совместного культивирования E4ORF1+ сконструированные EC в материнской лунке исчерпывались (правая панель) по сравнению только с 1 днем совместного культивирования тех же наращивающихся HSPC, нанесенных на свежие E4ORF1 EC (левая панель).
На фиг. 6 показана количественная оценка наращивания всех гемопоэтических клеток в биореакторе с непрерывным контактом E4ORF1+ сконструированных EC и HSPC по сравнению с наращиванием только с цитокинами и с наращиванием с прерывистым контактом E4ORF1+ сконструированных EC и HSPC. Очищенные HSPC (CD34+) из пуповинной крови наращивали в колбе только с цитокинами, в колбе на монослоях E4ORF1+ сконструированных EC или в биореакторах с полыми волокнами, предварительно загруженных E4ORF1+ сконструированными EC. Наращивание только с цитокинами и наращивание на E4ORF1+ сконструированных EC в колбе требовали нарушения процесса культивирования для промывания и перенесения клеток во время наращивания. На 6-й день культивирования проводили подсчет клеток и подсчет популяции CD45+ клеток посредством проточной цитометрии.
На фиг. 7 представлена количественная оценка колониеобразующих анализов наращивания HSPC в биореакторе с непрерывным контактом E4ORF1+ сконструированных EC и HSPC по сравнению с наращиванием только с цитокинами и наращиванием с прерывистым контактом E4ORF1+ сконструированных EC и HSPC. Аббревиатура «КОЕ» относится к колониеобразующим единицам. Частоты колоний в нескольких полях зрения микроскопа использовали для экстраполяции количества КОЕ в общей расширенной популяции.
Подробное описание изобретения
Определения
В отношении настоящего раскрытия технические и научные термины, используемые в описаниях в настоящем документе, будут характеризоваться значениями, как правило, понимаемые специалистом в настоящей области техники, если специально не определено иначе. Соответственно, следующие термины характеризуются следующими значениями.
«Аллогенная» относится к происхождению, возникновению или принадлежности к одному и тому же виду, где представители генетически родственны или генетически неродственны, но генетически схожи. «Аллогенная трансплантация» относится к передаче клеток или органов от донора реципиенту, где реципиент является того же самого вида, что и донор.
«Аутологичная» относится к происхождению от одного или того же субъекта или пациента. «Аутологичная трансплантация» относится к сбору и повторной трансплантации собственных клеток или органов субъекта.
«Коммитированная миелоидная клетка-предшественник» или «миелоидная клетка-предшественник» или «МР» относится к мультипотентной или унипотентной клетке-предшественнику, способной в конечном счете развиваться в любую из терминально дифференцированных клеток миелоидной линии, но которые, как правило, не дифференцируются в клетки лимфоидной линии. Следовательно, «миелоидная клетка-предшественник» относится к любой клетке-предшественнику в миелоидной линии. Коммитированные клетки-предшественники миелоидной линии включают в себя олигопотентную CMP, GMP и MEP, как определено в настоящем документе, но также включают в себя унипотентные эритроидные клетки-предшественники, клетки-предшественники мегакариоцитов, клетки-предшественники гранулоцитов и клетки-предшественники макрофагов. Различные клеточные популяции миелоидных клеток-предшественников отличаются от других клеток их потенциалом дифференцировки и наличием характерного набора клеточных маркеров.
«Общая миелоидная клетка-предшественник» или «CMP» относится к клетке, характеризующейся способностью производить клетки-предшественники гранулоцитов/моноцитов (GMP) и клетки-предшественники мегакариоцитов/эритроидов (MEP). Эти клетки-предшественники ограничены или не обладают способностями к самообновлению, но способны производить миелоидные дендритные, миелоидные эритроидные, эритроидные клетки, мегакариоциты, гранулоциты/макрофаги, гранулоциты и макрофаги.
Используемое в настоящем документе «непрерывное взаимодействие» относится по меньшей мере к постоянной близости HSPC к EC в течение одной или нескольких стадий процесса, описанных в настоящем документе. «Близость» в этом контексте относится к объединенному присутствию HSPC и EC в той же среде, например, в культуральной среде, среде для трансфузии или в любой среде, используемой во время любой необязательной стадии между стадиями наращивания и трансфузии, такими как сбор расширенной популяции клеток или получение фармацевтической композиции, содержащей расширенную клеточную популяцию. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC и EC находятся в непрерывной близости во время объединенных стадий наращивания и трансфузии. Другими словами, HSPC и EC одновременно присутствуют в одной и той же среде на протяжении всей стадии наращивания и до тех пор, пока стадия трансфузии не будет завершена. Например, нигде во время стадии наращивания HSPC не удаляются из среды наращивания, например, для контакта HSPC с дополнительными EC. Кроме того, согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе способы не предусматривают какой-либо стадии очистки, посредством которой эндотелиальные клетки удаляются из расширенной клеточной популяции, содержащей размноженные HSPC до стадии трансфузии. Используемое в настоящем документе «непрерывное взаимодействие» может также относиться к непрерывному контакту между HSPC и ЕС в течение одной или нескольких стадий описанного в настоящем документе процесса. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC и EC находятся в непрерывном контакте во время стадии наращивания. В этом контексте термин «контакт» между HSPC и эндотелиальными клетками относится к пространственной связи, причем расстояние между HSPC и EC составляет ≤500 мкм. Согласно некоторым вариантам осуществления расстояние между HSPC и EC составляет ≤400 мкм. Согласно некоторым вариантам осуществления расстояние между HSPC и EC составляет ≤300 мкм. Согласно некоторым вариантам осуществления расстояние между HSPC и EC составляет ≤200 мкм. Согласно некоторым вариантам осуществления расстояние между HSPC и EC меньше или равно внутреннему размеру сосуда, в котором выполняется наращивание.
«Культивирование» относится к распространению клеток или организмов на средах различных видов или в них. «Совместное культивирование» относится к распространению двух или более отдельных типов клеток или организмов на средах различных видов или в них, например, согласно некоторым вариантам осуществления HSPC и эндотелиальные клетки могут быть совместно культивированы.
Термин «сконструированный», когда он используется по отношению к клеткам,
относится к клеткам, которые были сконструированы человеком для получения
указанного фенотипа (например, E4ORF1+) или для экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты или полипептида. Термин «сконструированные клетки» не предназначен для охвата встречающихся в природе клеток, но вместо этого предназначен для охвата, например, клеток, которые содержат рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, или клеток, которые иным образом были искусственно изменены (например, путем генетической модификации), например, так, чтобы они экспрессировали полипептид, который они иным образом не экспрессировали, или чтобы они экспрессировали полипептид на существенно более высоких уровнях, чем тот, который наблюдался в несконструированных эндотелиальных клетках.
Термин «наращивание» в контексте клеток относится к увеличению количества клеток определенного типа или типов из начальной популяции клеток, которые могут быть или не быть идентичными. Исходные клетки, используемые для наращивания, не обязательно должны быть такими же, как клетки, произведенные в результате наращивания. Например, нарощенные размноженные клетки могут быть получены путем роста и дифференциации исходной популяции клеток. Исключением из термина «наращивание» является ограничивающие анализы разбавления, используемые для характеристики потенциала дифференциации клеток.
«Генетическая модификация» или «генетически модифицированный» относится к любому добавлению, делеции или нарушению нормальных нуклеотидов клеток. Способы по настоящему изобретению предназначены для охвата любого способа генетической модификации экзогенного или чужеродного переноса гена (или переноса последовательности нуклеиновых кислот) в HSPC или эндотелиальные клетки. Термин «генетическая модификация» охватывает применение наполнителя доставки гена и включает в себя, без ограничения, трансдукцию (опосредованную вирусом передачу нуклеиновой кислоты реципиенту либо in vivo, либо in vitro), трансфекцию (захват клетками выделенной нуклеиновой кислоты), опосредуемый липосомами перенос и другие средства, хорошо известные в настоящей области техники.
«Болезнь трансплантат против хозяина» или «GVH» или «GVHD» относится к клеточному ответу, который возникает, когда лимфоциты другого класса MHC вводятся в организм хозяина, что приводит к реакции лимфоцитов против хозяина.
«Клетка-предшественник гранулоцитов/макрофагов» или «GMP» относится к клетке, полученной из общих миелоидных клеток-предшественников, и характеризуется ее способностью давать рост клеткам гранулоцитов и макрофагов, но которая как правило не приводит к образованию эритроидных клеток или мегакариоцитов миелоидной линии.
«Гемопоэтическое заболевание» относится к любому нарушению крови, включая в себя, без ограничения, гемопоэтические злокачественные опухоли, гемоглобинопатию и иммунодефицит.
«Гемопоэтическая стволовая клетка или клетка-предшественник», или «HSPC» охватывает HSC, как определено в настоящем документе, а также мультипотентные не самовосстанавливающиеся клетки-предшественники, которые способны в конечном счете дифференцироваться во все типы клеток гемопоэтической системы, и олигопотентные и унипотентные клетки-предшественники, способные дифференцироваться в определенные клеточные типы гемопоэтической системы. HSPC включают в себя CMP, MP, MEP и GMP, как определено в настоящем документе.
«Гемопоэтическая стволовая клетка» или «HSC» относится к клоногенной, самообновляющейся плюрипотентной клетке, способной в конечном счете дифференцироваться во все типы клеток гемопоэтической системы, включая в себя В-клетки, Т-клетки, клетки NK, лимфоидные дендритные клетки, миелоидные дендритные клетки, гранулоциты, макрофаги, мегакариоциты и эритроидные клетки. Как и в других клетках гемопоэтической системы, HSC, как правило, определяются наличием характерного набора клеточных маркеров.
Термин «выделенный» относится к продукту, соединению или композиции, которые отделены по меньшей мере от одного другого продукта, соединения или композиции, с которыми они связаны в своем природном состоянии, независимо от природы, или как получено синтетически.
«Маркерное фенотипирование» относится к идентификации маркеров или антигенов на клетках для определения их фенотипа (например, состояния дифференциации и/или клеточного типа). Это может быть сделано путем иммунофенотипирования, в котором используются антитела, которые распознают присутствующие на клетке антигены. Антитела могут быть моноклональными или поликлональными, но, как правило, выбирают так, чтобы они характеризовались минимальной перекрестной активностью с другими клеточными маркерами. Следует понимать, что определенные маркеры клеточной дифференцировки или клеточной поверхности уникальны для видов животных, от которых происходят клетки, тогда как другие клеточные маркеры будут общими для разных видов. Эти маркеры, определяющие эквивалентные типы клеток между видами, получают идентичную идентификацию маркера даже несмотря на наличие различий в структуре (например, аминокислотную последовательность). Клеточные маркеры включают в себя молекулы клеточных поверхностей, также упоминаемые в определенных ситуациях как маркеры дифференцировки клеток (CD) и маркеры экспрессии генов. Маркеры экспрессии генов представляют собой те наборы экспрессированных генов, которые указывают на тип клеток или состояние дифференцировки. Частично, профиль экспрессии генов будет отражать маркеры клеточной поверхности, хотя они могут включать неклеточные поверхностные молекулы.
«Мегакариоцитарная/эритроидная клетка-предшественник» или «MEP» относится к клетке, полученной из общих миелоидных клеток-предшественников, и характеризуется ее способностью производить эритроидные клетки и мегакариоциты, но которая, как правило, не приводит к образованию гранулоцитов, макрофагов или миелоидных дендритных клеток.
«Миелоаблативная» или «миелоаблация» относится к ухудшению или разрушению гемопоэтической системы, как правило, путем воздействия цитотоксическим средством или облучением. Миелоаблация охватывает полную миелоаблацию, вызванную высокими дозами цитотоксического средства или облучением всего тела, которое разрушает гемопоэтическую систему. Она также включает в себя менее полное миелоаблативное состояние, вызванное немиелоаблативным кондиционированием. Таким образом, немиелоаблативное кондиционирование представляет собой воздействие, которое не полностью разрушает гемопоэтическую систему субъекта.
«Самообновление» относится к способности клетки делиться и производить по меньшей мере одну дочернюю клетку с идентичными (например, самообновляющимися) характеристиками исходной клетки. Вторая дочерняя клетка может передавать определенный путь дифференциации. Например, самообновляющаяся гемопоэтическая стволовая клетка делится и образует одну дочернюю стволовую клетку и другую дочернюю клетку, коммитированную на дифференцировку в миелоидный или лимфоидный путь. Коммитированная клетка-предшественник, как правило, теряет способность к самообновлению и после деления клетки производит две дочерние клетки, которые проявляют более дифференцированный (т.е. ограниченный) фенотип.
В отношении клеток «сортировка» относится к разделению клеток на основе физических характеристик или наличия маркеров (например, сортировка с использованием бокового светорассеяния (SSC) и прямого светорассеивания (FSC), или сортировка флуоресцентно активированных клеток (FACS) с использованием меченых антител), или анализу клеток на основе наличия клеточных маркеров, например, FACS без сортировки.
«Стволовая клетка» относится к стволовым клеткам различных клеточных типов, таких как мышечные, эпителиальные, нервные и костные стволовые клетки. В частности, в настоящем изобретении рассматриваются HSPC.
Термины «субъект» и «пациент» используются в настоящем документе взаимозаменяемо и относятся, за исключением тех случаев, когда это указано, к млекопитающим, таким как люди и нечеловекообразные приматы, а также кролики, крысы, мыши, козы, свиньи и другие виды млекопитающих.
«По существу чистая клеточная популяция» относится к популяции клеток, имеющих указанную характеристику маркера клетки и потенциал дифференциации, которые составляют по меньшей мере приблизительно 50%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 75-80%, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 85-90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95% клеток от составляющих общую популяцию клеток. Таким образом, «по существу чистая клеточная популяция» относится к популяции клеток, которая содержит менее чем приблизительно 50%, предпочтительно менее чем приблизительно 20-25%, более предпочтительно менее чем приблизительно 10-15% и наиболее предпочтительно менее чем приблизительно 5% клеток, которые не демонстрируют указанную характеристику маркера и потенциал дифференциации в определенных условиях анализа.
«Терапевтический ген» относится ко всему гену или только функционально активному фрагменту гена. Терапевтический ген может быть способен компенсировать дефицит у пациента, который возникает из дефектного или отсутствующего эндогенного гена. Кроме того, терапевтический ген может быть таким, который противодействует образованию или функционированию инфекционного патогена, противодействует патологическим процессам, улучшает генетический состав хозяина, облегчает приживление или терапевтическую эффективность стволовых клеток.
«Ксеногенная» относится к получению или происхождению от различных видов, например, человека и грызунов, человека и свиньи, человека и шимпанзе и т.д.
«Ксеногенный трансплантат» относится к передаче клеток или органов от донора к реципиенту, где реципиент представляет собой вид, отличный от вида донора.
Наращивание гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников
В настоящем раскрытии описаны способы, композиции и системы или наборы для облегчения приживления HSPC. Согласно одному аспекту предусмотрены способы улучшения приживления HSPC у нуждающегося в этом пациента, которые предусматривают совместное культивирование и совместную инфузию HSPC с EC, одновременно поддерживая непрерывное взаимодействие между HSPC и EC. Как показано впервые в настоящем документе, поддержание непрерывного взаимодействия между HSPC и ЕС на протяжении всех стадий наращивания и трансфузии повышает эффективность наращивания и приживление полученных размноженных HSPC, тем самым улучшая скорость и полноту восстановления иммунной системы, а также следовательно, выживаемость пациентов с трансплантацией, получавших трансплантат HSPC.
Гемопоэтические стволовые клетки представляют собой плюрипотентные стволовые клетки, способные к самообновлению, и характеризуются способностью расти в пермиссивных условиях ко всем клеточным типам гемопоэтической системы. Самообновление HSC относится к способности клетки HSC делиться и производить по меньшей мере одну дочернюю клетку с тем же потенциалом самообновления и дифференцировки HSC; то есть деление клеток приводит к дополнительным HSC. Самообновление обеспечивает постоянный источник недифференцированных стволовых клеток для пополнения гемопоэтической системы. Фенотипы маркеров, применимые для идентификации HSC, будут такими, которые, как правило, известны в настоящей области техники. Для человеческих HSC фенотипы клеточных маркеров предпочтительно включают в себя CD34+ CD38- CD90(Thy1)+ Lin-. Для мышиных HSC иллюстративный фенотип маркера клетки представляет собой Sca-1+ CD90+ (смотрите, например, Spangrude, G. J. et al., Science 1:661-673 (1988)) или c-kit+ Thylo Lin- Sca-1+ (смотрите, Uchida, N. et al., J. Clin. Invest. 101(5):961-966 (1998)). Также могут быть применимы альтернативные маркеры HSC, такие как альдегиддегидрогеназа (смотрите Storms et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. 96:9118-23 (1999), AC133 (смотрите Yin et al., Blood 90:5002-12 (1997) и CD150 (SLAM) (смотрите Kiel Cell 2005, 121 (7) 1109-21).
HSC могут быть получены из различных источников, включающих в себя костный мозг, периферическую кровь, пуповинную кровь и другие источники, которые, как известно, содержат гемопоэтические и миелоидные клетки-предшественники, включая в себя печень, особенно фетальную печень. Периферическая и пуповинная кровь представляет собой богатый источник HSC. Клетки получают с использованием способов, известных и, как правило, применяемых в настоящей области техники. Например, способы получения клеток костного мозга описаны в Sutherland et al., Bone Marrow Processing and Purging: A Practical Guide (Gee, A. P. ed.), CRC Press Inc. (1991)). HSC также могут быть получены из первичных источников стволовых клеток, таких как эмбриональные стволовые клетки (Thomson et al., Science 282:1145 (1998)) и зародышевые клетки (Shamblott et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:13726 (1998)) с использованием соответствующих способов наращивания и дифференциации.
Клетки HSC получают из любых видов животных с гемопоэтической системой, как это в общем описано в настоящем документе. Предпочтительно подходящими животными являются млекопитающие, включая в себя, в качестве примера, а не ограничения, грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, лошадей, коров, приматов (например, человека) и тому подобное.
Один аспект настоящего изобретения относится к способам трансплантации стволовых клеток у нуждающегося в этом субъекта, которые предусматривают: (а) наращивание гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников (HSPC) путем контактирования HSPC с эндотелиальными клетками (EC) при исходном соотношении EC/HSPC в течение первого периода времени в условиях, позволяющих наращивание HSPC, для получения нарощенной расширенной клеточной популяции, содержащей HSPC и EC, в нарощенном расширенном соотношении HSPC/EC; и (b) трансфузию нарощенной расширенной клеточной популяции, полученной на стадии (а), субъекту; причем поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и EC на протяжении всех стадий наращивания и трансфузии
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к композициям, содержащим HSPC и EC, для применения в трансплантации стволовых клеток у нуждающегося в этом субъекта, причем трансплантация стволовых клеток предусматривает:(a) наращивание HSPC путем контактирования HSPC с EC в исходном соотношении EC/HSPC в течение первого периода времени в условиях, позволяющих наращивание HSPC, для получения нарощенной расширенной клеточной популяции, содержащей HSPC и EC, в нарощенном расширенном соотношении HSPC/EC; и (b) трансфузию нарощенной расширенной клеточной популяции, полученной на стадии (а), субъекту; причем поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и EC на протяжении всех стадий наращивания и трансфузии.
Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC представляют собой гемопоэтические стволовые клетки. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC являются аллогенными по отношению к субъекту. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC представляют собой HSPC пуповинной крови. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC являются аутологичными по отношению к субъекту.
Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC представляют собой полученные из костного мозга генетически модифицированные HSPC в стационарном состоянии.
Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления эндотелиальные клетки генетически модифицированы. Ранняя область 4 (E4) аденовируса содержит по меньшей мере 6 открытых рамок считывания (E4ORF). Было показано, что вся область E4 регулирует ангиогенез и способствует выживанию, но не пролиферации, эндотелиальных клеток (смотрите, например, Zhang et al. (2004), J. Biol. Chem. 279(12):11760-66). Использование всей области E4, как клинически, так и экспериментально, для индуцирования ангиогенеза или для содействия выживанию или пролиферации эндотелиальных клеток, может быть нежелательным, поскольку некоторые из E4ORF могут оказывать вредное воздействие. Например, известно, что ген E4ORF6 индуцирует апоптоз (Yamano et al. (1999) J. Virol. 73:10095-103). Кроме того, E4ORF являются иммуногенными, и поэтому введение всех E4ORF субъектам может быть нежелательным. Rafii et al. (WO2008089448) идентифицировали последовательности в области E4ORF, которые применимы для индуцирования ангиогенеза и для содействия выживанию и пролиферации эндотелиальных клеток.
Несколько представителей семейства E-двадцать шесть (ETS) факторов транскрипции (TF), включая в себя ETV2 (Lee et al., Cell stem cell, 2: 497-507 (2008); Sumanas et al., Blood, 111: 4500-4510 (2008)), FLU (Liu et al., Current Bio. 18: 1234-1240 (2008)) и ERG (McLaughlin et al., Blood, 98: 3332-3339 (2001)), были вовлечены в регуляцию сосудистого развития и ангиогенеза (De Val et al., Dev Cell, 16: 180-195 (2009); Sato et al., Cell Struct Funct, 26: 19-24 (200)). Эти TF непосредственно регулируют экспрессию генов, связанных с развитием и функцией EC. Взрослые EC конститутивно экспрессируют несколько факторов ETS, таких как FLU, ERG (изоформы 1 и 2), ETS1, ETS2, Elfl, Elkl, VEZF и ETV6, тогда как ETV2 временно экспрессируется во время эмбрионального развития и отсутствует во взрослых EC (Kataoka et al., Blood, 118: 6975-6986 (2011); Lelievre et al., The International Journal Of Biochemistry and Cell Biology, 33: 391-407 (2001)).
Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС конструируют для экспрессии полипептида E4ORF1 аденовируса (т.е. они представляют собой E4ORF1+ сконструированные эндотелиальные клетки). Согласно некоторым вариантам осуществления эндотелиальные клетки конструируют для экспрессии одного или нескольких факторов транскрипции семейства ETS, таких как перечисленные выше (т.е. они представляют собой ETS+ сконструированные эндотелиальные клетки). Согласно некоторым вариантам осуществления эндотелиальные клетки конструируют для экспрессии транскрипционного фактора ETV2 семейства ETS (т.е. они представляют собой ETV2+ сконструированные эндотелиальные клетки). Согласно некоторым вариантам осуществления EC представляют собой E4ORF1+ ETV2+ сконструированные эндотелиальные клетки. Согласно некоторым вариантам осуществления EC представляют собой E4ORF1+ ETS+ сконструированные эндотелиальные клетки. Согласно некоторым вариантам осуществления EC также представляют собой E4ORF6+. Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС содержат рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует фактор транскрипции семейства ETS. Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС содержат рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид ETV2. Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС содержат рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид E4ORF1 аденовируса. Согласно некоторым вариантам осуществления EC содержат рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид E4ORF6 аденовируса. Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты находится в форме плазмидного вектора. Согласно некоторым вариантам осуществления молекула нуклеиновой кислоты интегрируется в геномную ДНК сконструированных ЕС. Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС представляют собой дифференцированные ЕС. Согласно некоторым вариантам осуществления EC представляют собой взрослые EC. Согласно некоторым вариантам осуществления EC не представляют собой эмбриональные EC. Согласно некоторым вариантам осуществления EC представляют собой человеческие EC. Согласно некоторым вариантам осуществления EC представляют собой первичные EC. Согласно некоторым вариантам осуществления ЕС представляют собой EC пупочной вены человека (HUVEC).
Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 200:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 300:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 400:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 500:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 600:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 700:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 800:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 900:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1000:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1100:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1200:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1300:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере приблизительно 1400:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет приблизительно 1500:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет приблизительно 2000:1. Согласно некоторым вариантам осуществления исходное соотношение EC/HSPC составляет приблизительно 3000:1.
Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 24 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 12 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 1 день. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 2 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 3 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 4 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 5 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 6 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 7 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 8 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 9 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 10 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 11 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 12 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 13 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 14 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 15 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 16 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 17 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 18 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 19 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 20 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 21 день. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 22 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 23 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 24 дня. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 25 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 26 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 27 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления первый период времени составляет приблизительно 28 дней.
Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от 10:1 до 1:10. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от 9:1 до приблизительно 1:9. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 8:1 до приблизительно 1:8. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 7:1 до приблизительно 1:7. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 6:1 до приблизительно 1:6. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 5:1 до приблизительно 1:5. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 4:1 до приблизительно 1:4. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 3:1 до приблизительно 1:3. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно от 2:1 до приблизительно 1:2. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 10:1 до приблизительно 1:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 9:1 до приблизительно 2:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 8:1 до приблизительно 3:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 7:1 до приблизительно 4:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет от приблизительно 6:1 до приблизительно 5:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 10:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 9:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 8:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 7:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 6:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 5:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 4:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 3:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 2:1. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенное соотношение HSPC/EC составляет приблизительно 1:1.
Согласно некоторым вариантам осуществления кратность наращивания HSPC составляет от приблизительно 20 до приблизительно 30000 на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления кратность наращивания HSPC составляет от приблизительно 1000 до приблизительно 10000 на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 1000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 2000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 3000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 3500 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 4000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 5000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 6000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 7000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 8000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 9000 раз на стадии наращивания. Согласно некоторым вариантам осуществления HSPC наращиваются приблизительно в 10000 раз на стадии наращивания.
Согласно некоторым вариантам осуществления непрерывное взаимодействие между HSPC и EC содержит непрерывный контакт между HSPC и EC во время стадии наращивания и непрерывную близость HSPC и EC во время стадий наращивания и трансфузии. Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе способы дополнительно предусматривают сбор расширенной популяции клеток и получение фармацевтической композиции, содержащей расширенную популяцию клеток для применения на стадии трансфузии. Согласно некоторым вариантам осуществления непрерывное взаимодействие между HSPC и EC предусматривает непрерывную близость HSPC и EC во время объединенных стадий наращивания, сбора, подготовки фармацевтической композиции и трансфузии. Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе способы не предусматривают стадию очистки, посредством которой эндотелиальные клетки отделяются от размноженных HSPC перед трансфузией. Согласно некоторым вариантам осуществления не происходит воздействия или нарушения человеком наращивания в течение первого периода времени. Согласно некоторым вариантам осуществления дополнительные цитокины добавляют в течение первого периода времени. Согласно некоторым вариантам осуществления в течение первого периода времени добавляют 50 нг/мл тромбопоэтина (TPO), лиганда Flt3 (связанной с FMS тирозинкиназы 3) и фактора стволовых клеток (SCF). Согласно некоторым вариантам осуществления стадия наращивания содержит не более шести открытых событий.
Перед наращиванием HSPC и EC могут подвергаться селекции и очистке, которые могут предусматривать способы как положительной, так и отрицательной селекции для получения по существу чистой популяции клеток. Согласно одному аспекту сортировка флуоресцентно активированных клеток (FACS), также называемая проточной цитометрией, используется для сортировки и анализа различных популяций клеток. Клетки, содержащие клеточные маркеры, специфические для популяций HSPC или EC, помечают антителом или, как правило, смесью антител, которые связывают клеточные маркеры. Каждое антитело, направленное к другому маркеру, конъюгировано с обнаруживаемой молекулой, в частности флуоресцентным красителем, который можно отличить от других флуоресцентных красителей, связанных с другими антителами. Поток меченных или «окрашенных» клеток пропускают через источник света, который возбуждает флуорохром, и обнаруживается спектр излучения от клеток для определения наличия конкретного меченого антитела. При одновременном обнаружении различных флуорохромов, также упоминаемых в настоящей области техники как многоцветная сортировка флуоресцентно активированных клеток, клетки, отображающие различные наборы клеточных маркеров, могут быть идентифицированы и выделены из других клеток в популяции. Другие параметры FACS, включающие в себя, в качестве примера, а не ограничения, боковое светорассеяние (SSC), прямое светорассеяние (FSC) и окрашивание витальными красителями (например, с пропидиум иодидом) позволяют выбирать клетки на основе размера и жизнеспособности. Сортировка и анализ FACS HSPC описывается, среди прочего, в патентах США №5137809, 5750397, 5840580; 6465249; Manz, M.G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:11872-11877 (2002) и Akashi, K. et al., Nature 404(6774):193-197 (2000)). Общее руководство по сортировке флуоресцентно активированных клеток описано, например, в Shapiro, H.M., Practical Flow Cytometry, 4th Ed., Wiley-Liss (2003) и Ormerod, M.G., Flow Cytometry: A Practical Approach, 3rd Ed., Oxford University Press (2000).
Следует понимать, что очистка клеток также предусматривает комбинации описанных в настоящем документе способов. Типичная комбинация может предусматривать начальную процедуру, которая эффективна для удаления основной массы нежелательных клеток и клеточного материала, например, лейкафарез. Вторая стадия может предусматривать выделение клеток, экспрессирующих маркер, общий для одной или нескольких популяций клеток-предшественников, посредством иммуноадсорбции на антителах, связанных с субстратом. Например, магнитные гранулы, содержащие антитела к CD34, способны связывать и захватывать клетки HSC, CMP и GMP, которые, как правило, экспрессируют антиген CD34. Дополнительная стадия, обеспечивающая более высокое разрешение различных типов клеток, таких как сортировка FACS с антителами к набору специфических клеточных маркеров, может быть использована для получения по существу чистых популяций желаемых клеток. Другая комбинация может предусматривать начальное разделение с использованием магнитных гранул, связанных с антителами к CD34, с последующим дополнительным циклом очистки с помощью FACS.
Места для осуществления наращивания хорошо известны специалистам в настоящей области техники и включают в себя, например, открытое оборудование для культивирования клеток, такое как колбы для культивирования, и закрытое оборудование для культивирования клеток, такое как одноразовые биореакторы с замкнутой системой с модификацией или без модификации для адгезии клеток и мини-биореакторы с замкнутой системой, например, мини-биореакторы, содержащие полые волокна или другие системы или покрытия, обеспечивающие адгезию клеток, если это необходимо. Согласно некоторым вариантам осуществления местом осуществления является система для наращивания клеток Quantum®(Terumo BCT, Lakewood, CO).
Количество клеток, необходимое для достижения терапевтического эффекта, будет определяться эмпирически в соответствии с обычными процедурами для конкретной цели. Как правило, для введения клеток в терапевтических целях клетки вводят в фармакологически эффективной дозе. Термин «фармакологически эффективное количество» или «фармакологически эффективная доза» означает количество, достаточное для получения желаемого физиологического эффекта, или количество, способное достичь желаемого результата, особенно для приживления или выживания субъекта. Терапевтическая польза также включает в себя остановку или замедление прогрессирования основного заболевания или нарушения, независимо от того, реализовано ли улучшение. Фармакологически эффективная доза, как определено выше, будет также применяться к терапевтическим соединениям, используемым в комбинации с клетками, как дополнительно описано ниже.
Трансплантат гемопоэтических стволовых клеток может широко варьировать в зависимости от возраста, массы и состояния здоровья пациента, характера и тяжести показателя. Соответствующие диапазоны доз для HSPC варьируют в соответствии с этими соображениями. Согласно некоторым вариантам осуществления трансплантат будет содержать от приблизительно 1 × 106 до приблизительно 1,0 × 108 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит от приблизительно 1,0 × 106 до приблизительно 1,0 × 108 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 1,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 2,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 3,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 4,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 5,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 6,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 7,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 8,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 9,0 × 106 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 1,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 2,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 3,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 4,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 5,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 6,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 7,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 8,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 9,0 × 107 HSPC/кг массы субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления расширенная клеточная популяция содержит приблизительно 1,0 × 108 HSPC/кг массы субъекта.
Единица пуповинной крови представляет собой кровь, собранную из одной плаценты и пуповины. Количество ядросодержащих клеток в единице пуповинной крови варьирует. Кроме того, количество ядросодержащих клеток в единице пуповинной крови может быть меньше после замораживания и оттаивания. Таким образом, при введении HSPC рекомендуется указывать, до или после оттаивания единицы проводили измерения количества ядросодержащих клеток.
Трансплантация клеток пациенту осуществляется с помощью способов, обычно используемых в настоящей области техники. Предпочтительным способом введения является внутривенная инфузия. Как описано выше, количество трансфузированных клеток будет учитывать такие факторы, как пол, возраст, масса, типы заболевания или нарушения, стадия нарушения, процентная доля желаемых клеток в клеточной популяции (например, чистота клеточной популяция) и количество клеток, необходимых для получения терапевтического эффекта.
Клетки можно вводить в одной инфузии или путем последовательных инфузий в течение определенного периода времени, достаточного для создания терапевтического эффекта. Различные популяции клеток можно вводить, когда лечение включает последовательные инфузии. Фармацевтически приемлемый носитель, как дополнительно описано ниже, может быть использован для инфузии клеток пациенту. Они, как правило, содержат, например, забуференный физиологический раствор (например, забуференный фосфатом физиологический раствор) или базально-клеточную культуральную среду без добавок, или известную в настоящей области техники среду.
Описанные в настоящем документе способы трансплантации гемопоэтических стволовых клеток могут быть использованы для лечения различных нарушений. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение относится к недостаткам в гемопоэзе, вызванном заболеванием или миелоаблативным лечением. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой гемопоэтическое заболевание. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой нарушение, которое требует трансплантации гемопоэтических стволовых клеток костного мозга. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой инфекционный или генетический иммунодефицит. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой инфекционный иммунодефицит. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой ВИЧ. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой генетический иммунодефицит. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой гематологическое заболевание, включающее в себя инфекционные заболевания/генетические заболевания, влияющие на Т-клетки (например, ВИЧ, SCID, соответственно) и генетические заболевания, влияющие на эритроциты (гемоглобинопатии). Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой анемию. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой анемию Фанкони. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение представляет собой гемопоэтическую злокачественность. Используемый в настоящем документе термин «лечение» относится к терапевтическому или профилактическому лечению или к подавляющей мере заболевания, нарушения или нежелательного состояния. Лечение предусматривает введение исследуемых клеток в соответствующей форме до появления симптомов заболевания и/или после клинических проявлений или других проявлений заболевания или состояния, чтобы уменьшить тяжесть заболевания, остановить прогрессирование заболевания или устранить заболевание. Профилактика заболевания предусматривает продление или задержку возникновения симптомов нарушения или заболевания, предпочтительно у субъекта с повышенной восприимчивостью к нарушению. Согласно некоторым вариантам осуществления субъект представляет собой человека.
Кроме того, в настоящем раскрытии предусмотрены усовершенствованные способы HSCT в области трансплантации твердых органов, клеток или тканей. В качестве примера, но не как ограничение, в настоящем раскрытии дополнительно предусмотрены размноженные эндотелиальными клетками HSPC для применения в трансплантации сердца, печени, легкого, почек, островковых клеток, кожи, эндокринных органов или поджелудочной железы.
Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл через приблизительно от 15 дней до приблизительно 35 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл через приблизительно от 20 дней до приблизительно 30 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 20 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 21 день после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 22 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 23 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 24 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 25 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 26 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 27 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 28 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 29 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления количество тромбоцитов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 20000/мкл приблизительно через 30 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции.
Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл через приблизительно от 5 дней до приблизительно 20 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл приблизительно через 5 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 6 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 7 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 8 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 9 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 10 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл приблизительно через 11 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 12 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл приблизительно через 13 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 14 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл приблизительно через 15 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 16 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкл приблизительно через 17 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 18 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 19 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 100 мкМ приблизительно через 20 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл через приблизительно от 10 дней до приблизительно 25 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции.
Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 10 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 11 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 12 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 13 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 14 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 15 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 16 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 17 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 18 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 19 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 20 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 21 день после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 22 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 23 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 24 дня после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 25 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции.
Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 100 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 200 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 300 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 400 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 500 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 600 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 700 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 800 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 900 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции. Согласно некоторым вариантам осуществления абсолютное количество нейтрофилов в циркулирующей крови субъекта составляет по меньшей мере приблизительно 500 мкл приблизительно через 1000 дней после трансфузии субъекту расширенной клеточной популяции.
Дополнительное лечение
При использовании описанных в настоящем документе способов можно применять множество дополнительных способов лечения. Согласно одному аспекту дополнительные способы лечения включают в себя, среди прочего, противогрибковые средства, антибактериальные средства и противовирусные средства.
Согласно одному аспекту дополнительно вводимое средство представляет собой противогрибковое средство. Грибковые инфекции представляют собой серьезную проблему у пациентов, перенесших миелоаблативную терапию и HSCT. Реципиенты с задержкой приживления и пациенты, у которых развивается РТПХ, как правило, подвергаются высокому риску грибковых инфекций. Типы грибковых инфекций разнообразны и включают, среди прочего, кандидоз (например, с Candida krusei, Candida glabrata, Candida albicans, Candida tropicalis), аспергиллез (например, с Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus), мукормикоз (например, с Rhizobium arrhizus, Absidia corymbifera, Rhizomucor pusillus), криптококкоз, Histoplasma capsulatum и Coccidioides immitis.
Противогрибковые средства для дополнительного введения, как правило, представляют собой системное противогрибковое средство. Одним из применимых противогрибковых средств этого типа является амфотерицин В из семейства полиеновых макролидных антибиотиков. Амфотерицин В доступен в различных составах, в том числе в виде комплекса с дезоксихолатом; в коллоидной суспензии с холестеарилсульфатом и инкапсулированый в липосомы, изготовленные из соевого лецитина, холестерина и дистеароилфосфатидилглицерина, другие составы также известны в настоящей области техники.
Другим противогрибковым средством является флуцитозин, фторированный пиримидин. Дезаминирование флуцитозина грибом приводит к образованию 5-фторурацила, ингибитора антиметаболита и синтеза ДНК. Флуцитозин, как правило, применяется для криптококковых и кандидозных инфекций. Хотя он применяется отдельно, флуцитозин, как правило, применяют в комбинации с амфотерицином B.
Имидазолы и триазолы представляют собой широкий класс противогрибковых средств на основе азола. Считается, что имидазолы и триазолы ингибируют стерол-14-α- деметилазу, что приводит к нарушению биосинтеза эргостерина и нарушению активности на клеточной мембране, такой как перенос электронов. Азолевые противогрибковые средства эффективны против некоторых типов кандидоза, таких как Candida albicans, Candida glabrata и Candida neoformans. Типичные азольные противогрибковые средства, пригодные для системного введения, включают в себя, среди прочего, кетоконзаол, итраканазол, флуконазол, эконазол, вориконазол и тераконазол.
В дополнение к грибковым инфекциям, пациент с нейтропенией чувствителен к инфекции с различными бактериальными патогенами. Пациенты, подвергающиеся миелоаблативным схемам лечения и HSCT, характеризуются высокими показателями бактериальной инфекции как с грамположительными (например, Streptococcus и Staphylococcus aureus), так и грамотрицательными бактериями (например, E. coli и Pseudomonas aeruginosa). Септемия представляет собой обычное явление. Кроме того, замедленное приживление и нарушенное восстановление иммунных реакций против инкапсулированных бактерий, таких как Streptococcus pneumoniae или Haemophilus influenza, увеличивает заболеваемость РТПХ реципиентов трансплантатов.
Дополнительная антибактериальная терапия может использовать любые известные антибиотики, подходящие для конкретного бактериального патогена. К ним относятся как антибиотики широкого спектра действия, так и более направленные антибактериальные соединения. Различные классы подходящих антибактериальных средств с размноженными миелоидными клетками, включают в себя, в качестве примера, а не ограничения, хинолоны и фторхинолоны, β-лактамные антибиотики, аминогликозиды, тетрациклины, макролиды и различные их когенераторы. Иллюстративные хинолоновые соединения включают в себя ципрофлоксацин, офлоксацин, спарфлоксацин, ломефлоксацин и моксифлоксацин. Иллюстративные β-лактамные антибиотики включают в себя пенициллины (например, пенициллин G, пенициллин V), ампициллин, карбенициллин, метициллин, карбапенем и цефалоспорины (например, цефалотин, цефамандол, цефаклор, цефонид, цефотетан, цефатоксим, цефтазидим, цефтизоксим, цефепим). Иллюстративные аминогликозиды включают в себя неомицин, стрептомицин, канамицин, гентамицин, тобрамицин, амикацин и нетилмицин. Иллюстративные макролиды включают в себя эритромицин, кларитромицин, азитромицин и солитромицин. Другие антибиотики будут очевидны квалифицированному специалисту в настоящей области техники.
Вирусные инфекции также представляют собой проблему у миелоаблатированных пациентов и HSCT. Как правило, повышенный риск вирусной инфекции является следствием нарушения клеточного иммунитета, вызванного миелоаблативной терапией. Многие из этих инфекций возникают в результате реактивации скрытого вируса, существующего у серопозитивного пациента или в клетках серопозитивного донора. Обычно встречающиеся вирусы включают в себя, среди прочего, цитомегаловирус, вирус простого герпеса, вирус ветряной оспы, вирус герпеса-6, вирус Эпштейна Барра, аденовирусы и тому подобное. В качестве дополнения к клеточной инфузии выбранные противовирусные соединения представляют собой те, которые соответствуют вирусам, с которыми сталкивается пациент. Применимые противовирусные соединения включают в себя, например, ацикловир, цидофовир, ганцикловир, идоксуридин, пенцикловир, валганцикловир, валацикловир, видарабин, амантадин, римантадин, занамивир, фомивирсен, имиквимод и рибавирин. Терапевтические средства, направленные против ретровирусов, включают в себя, среди прочего, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (например, зидовудин, диданозин, ставудин, зальцитабин, ламивудин), ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (например, невирапин, эфавиренц,дельвирудин) и ингибиторы протеазы (например, саквинивир, индинавир, ритонавир, нелфинавир, ампренавир и лопинавир).
Противогрибковые, антибактериальные и противовирусные средства могут быть использованы в качестве профилактики для предотвращения возникновения инфекции или при появлении заболевания. Профилактика особенно показана для грибковых инфекций, распространенных у пациентов с ослабленным иммунитетом, а также для вирусных инфекций у пациентов с серопозитивными заболеваниями или у доноров серопозитивных трансплантатов. Соответственно, варианты осуществления для терапевтических целей предусматривают комбинации HSPC, MP-клеток и противогрибковых, антибактериальных или противовирусных соединений.
Согласно дополнительному варианту осуществления вспомогательное вводимое средство представляет собой цитокин или фактор роста, который усиливает дифференцировку и мобилизацию терминально дифференцированных миелоидных клеток, особенно гранулоцитов, макрофагов, мегакариоцитов и эритроидных клеток. Для улучшения развития гранулоцитов могут применяться цитокины C-CSF и GM-CSF. G-CSF эффективен в ускорении приживления и производства нейтрофилов в HSCT. Согласно другому варианту осуществления цитокин или фактор роста представляет собой тромбопоэтин. Введение ТРО усиливает приживление трансплантированных клеток-предшественников и способствует развитию мегакариоцитов и тромбоцитов (Fox, N et al., J. Clin. Invest. 110:389-394 (2002); Akahori, H. et al., Stem Cells 14(6):678-689 (1996)).
Для вспомогательной терапии могут применяться различные наполнители и вспомогательные вещества и пути введения, что будет очевидно специалисту в настоящей области техники. Репрезентативная технология составления представлена, в частности, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1995) и Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Ed, Kibbe, A.H. ed., Washington DC, American Pharmaceutical Association (2000).
Фармацевтические композиции, как правило, будут содержать фармацевтически приемлемый носитель и фармакологически эффективное количество соединений или их смесей, или их подходящих солей. Фармацевтическая композиция может быть составлена в виде порошков, гранул, растворов, суспензий, аэрозолей, твердых веществ, пилюль, таблеток, капсул, гелей, кремов для локального применения, суппозиториев, трансдермальных пластырей и других составов, известных в настоящей области техники.
Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает в себя любой из стандартных фармацевтически приемлемых носителей, известных специалистам в настоящей области разработки фармацевтических композиций. Таким образом, соединения, сами по себе, такие как присутствующие в виде фармацевтически приемлемых солей или в виде конъюгатов, могут быть получены в виде составов в фармацевтически приемлемых разбавителях; например, физиологическом растворе, фосфатном буферном солевом растворе (PBS), водном этаноле или растворе глюкозы, манните, декстране, пропиленгликоле, масле (например, растительных маслах, животных маслах, синтетических маслах и т.д.), микрокристаллической целлюлозе, карбоксиметилцеллюлозе, гидроксилпропилметилцеллюлозе, стеарате магния, фосфате кальция, желатине, полисорбате 80 или тому подобном или в виде твердых препаратов в подходящих вспомогательных веществах.
Фармацевтические композиции часто будут дополнительно содержать один или несколько буферов (например, нейтральный забуференный физиологический раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор), углеводы (например, глюкозу, маннозу, сахарозу или декстраны), маннит, белки, полипептиды или такие аминокислоты, как глицин, антиоксиданты (например, аскорбиновую кислоту, метабисульфит натрия, бутилированный гидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол и т.д.), бактериостаты, хелатирующие средства, такие как ЭДТА или глутатион, растворенные вещества, которые делают композицию изотонической, гипотонической или слабо гипертонической с кровью реципиента, суспендирующие средства, загущающие средства, консерванты, ароматизаторы, подслащивающие средства и красители.
Хотя любой подходящий носитель, известный специалистам в настоящей области техники, может быть использован в композициях, тип носителя, как правило, изменяется в зависимости от способа введения. Терапевтические композиции могут быть составлены для любого подходящего способа введения, включая в себя, например, пероральное, назальное, слизистое, ректальное, вагинальное, местное, внутривенное, внутрибрюшинное, внутрикожное, подкожное и внутримышечное введение.
Описанные в настоящем документе фармацевтические композиции могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, таких как герметичные ампулы или флаконы. Такие контейнеры, как правило, герметизируют таким образом, чтобы сохранить стерильность и стабильность состава до использования. Как правило, композиции могут храниться в виде суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных наполнителях, как указано выше. Альтернативно, фармацевтическая композиция может храниться в лиофилизированном состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя непосредственно перед применением.
Количество, вводимое хозяину, будет варьировать в зависимости от того, что вводится, назначения введения, такого как профилактика или лечение, состояние хозяина, способа введения, количества введений, интервала между введениями и т.п. Это может быть определено эмпирически специалистами в настоящей области техники и может быть скорректировано с учетом степени терапевтического ответа. Факторы, которые следует учитывать при определении соответствующей дозы, включают в себя, без ограничения, размер и массу субъекта, возраст и пол субъекта, тяжесть симптома, стадию заболевания, способ доставки средства, период полувыведения средств и эффективность средств. Стадия заболевания предусматривает рассмотрение того, является ли заболевание острым или хроническим, рецидивирующим или находится в ремиссионной фазе и прогрессирует ли оно.
Определение дозировок и времени введения для терапевтически эффективного количества соответствует навыкам среднего специалиста в настоящей области техники. Например, начальную эффективную дозу можно оценить из культуры клеток или других анализов in vitro. Затем дозу можно составить на животных моделях для получения циркулирующей концентрации или концентрации в тканях, включая в себя IC50, как определено посредством анализов клеточной культуры.
Наборы
Описанные в настоящем документе способы могут быть облегчены с помощью набора для повышения приживления HSPC. Наборы могут содержать клетки, включая в себя, без ограничения, HSPC, EC, включая в себя нарощенные размноженные и выделенные клетки и/или вспомогательные терапевтические соединения, средства для выделения или наращивания HSPC и EC, средства для введения клеток пациенту или любую их комбинацию. Наборы могут необязательно содержать любой или все из следующего: фармацевтически приемлемый носитель, физиологически приемлемый носитель, инструкции по применению, контейнер, сосуд для введения, антитела или любую их комбинацию. Как правило, к комплекту прилагается этикетка, и она включает в себя любой записанный материал, который может представлять собой электронную или машиночитаемую форму (например, диск, оптический диск, чип памяти или лента), предоставляющую инструкции или другую информацию по применению содержимого набора.
Практика настоящего изобретения будет использовать, если не указано иное, традиционные техники клеточной биологии, молекулярной биологии, культивирования клеток, иммунологии и т.п., которые находятся в компетенции специалиста в настоящей области техники. Эти способы полностью раскрыты в текущей литературе, и ссылка делается, в особенности, на Sambrook, Fritsch and Maniatis eds., “Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Springs Harbor Laboratory Press, 1989); серию Methods of Enzymology (Academic Press, Inc.) и Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow et al., eds., (1987).
ПРИМЕРЫ
Аспекты настоящего учения могут быть дополнительно поняты в свете следующих примеров, которые не следует истолковывать как ограничивающие объем настоящего учения каким-либо образом.
Пример 1. Наращивание HSPC с необлученными EC
Необлученные E4ORF1+ сконструированные ЕС характеризуются пролиферативной способностью, которая должна пересеваться при расщеплении 1:4 приблизительно 15-20 раз в традиционной основанной на колбах культуре. В этом способе необлученные E4ORF1+ сконструированные EC могут быть размножены до достаточных количеств в сосудах для культивирования с плоской поверхностью. Количество высеянных клеток будет зависеть от количества исходного материала и продолжительности наращивания. Например, для 10-дневного наращивания может потребоваться эквивалент 3-х планшетов с чашками на 6 лунок (каждая диаметром приблизительно 35 мм). E4ORF1+ EC культивируют в готовой питательной среде до конфлюэнтности в этих лунках. При конфлюэнтности среды заменяют кондиционированными средами. Через 24 часа в кондиционированных средах очищенные CD34+ клетки, например, из пуповинной крови (UCB), можно высевать на предварительно засеянные E4ORF1+ EC лунки с цитокинами, состоящими из 50 нг/мл каждого из тромбопоэтина (TPO), лиганда связанной с Fms тирозинкиназы 3 (Flt-3L) и фактора стволовых клеток (SCF). Через два дня среду собирают, клетки осаждают и повторно суспендируют в свежей содержащей цитокин среде и диспергируют в две дополнительные лунки, которые были предварительно кондиционированы как первая. Первая лунка, называемая «материнская лунка» или «материнская колба», также повторно питается дополнительными содержащими цитокины средами. Этот процесс повторяется через день до 10-го дня. На этой стадии все лунки содержат размноженные HSPC и E4ORF1+ EC. В некоторых случаях может быть использован биореактор, такой как биореактор с полыми волокнами. Полые волокна могут быть грунтованы, покрыты, кондиционированы (например, согласно инструкциям производителя) и засеяны приблизительно 5х107 E4ORF1+ EC в готовой питательной среде. Биореактор «питает» клетки и может допускать наращивание в течение 6 дней. В этот момент, когда в биореакторе наблюдается почти конфлюэнтность, среда заменяется кондиционирующей средой без цитокинов для замены сыворотки (например, фетальной бычьей сыворотки (FBS)), которая в противном случае могла бы привести к преждевременной дифференциации HSPC. Через 24 часа E4ORF1+ EC готовы принять HSPC. Образцы UCB могут храниться в замороженном виде в виде обедненного эритроцитами (RBC) продукта в диметилсульфоксиде (ДМСО). Этот клеточный материал промывают перед очисткой и наращиванием примитивной популяции CD34+. Чтобы достичь этого, образец оттаивают в бане при температуре 37°C. При визуальном осмотре оставшегося льда единицу объединяют в стерильных условиях с жидкостями устройства Miltenyi Prodigy или аналогичной системой. Клетки инкубируют в это время с ДНКазой, так как содержание нуклеиновой кислоты в любых нежизнеспособных клетках после оттаивания может привести к сгущению и вязкости. Устройство Miltenyi Prodigy или сопоставимое устройство способно промывать клетки для удаления криопротекторов и дальнейшего истощения образца на эритроциты. Все еще находясь в устройстве Miltenyi Prodigy, клетки инкубируют с микрогранулами CD34 для очистки HSPC. Наконец, выполняются стадии отмывания. Затем клетки CD34+, связанные с микрогранулами, вводят в устройство Miltenyi CliniMacs или аналогичное устройство для магнитной очистки меченых клеток CD34+. Ожидается восстановление 50-70% доступных CD34+ клеток.
Затем очищенную CD34+ фракцию вводят в 200 мкл среды наращивания HSPC, дополненной цитокинами, SCF, TPO и Flt3L в концентрации 50 нг/мл каждый. Затем эта среда вводится в биореактор в той же внутренней камере, что и E4ORF1+ сконструированные EC (день 0 наращивания). Во время наращивания среда наращивания HSPC (без цитокинов) непрерывно подается через внешнюю камеру со скоростью приблизительно 0,4 мл/мин для обмена метаболитов и циркулирует со скоростью приблизительно 30 мл/мин в цикле рециркуляции, который включает газообменный модуль, снабженный 90% N2, 5% O2 и 5% CO2. Кроме того, на 2-й день и 4-й день наращивания во внутреннюю камеру добавляют болюс объемом 200 мл среды наращивания HSPC, дополненной цитокинами, SCF, TPO и Flt3L со скоростью 50 нг/мл. Наращивание прекращается на 6-й день наращивания, после чего собирают весь клеточный материал.
Пример 2. Наращивание HSPC с облученными EC
E4ORF1+ сконструированные EC являются полностью компетентными для наращивания HSPC после получения митотического стимула инактивации, такого как излучение или митомицин C. Чтобы использовать клетки после митотической инактивации, стимулятор митотической инактивации вводят, когда клетки находятся в их конечном сосуде для культивирования в состоянии конфлюэнтности и разрешены 24 часа для восстановления в полной среде до перехода на кондиционированную среду. Для использования митотически инактивированных клеток в биореакторах, E4ORF1+ сконструированные EC или ETV2+ E4ORF1+ сконструированные EC, или E4ORF1+ E4ORF6+ сконструированные EC выращиваются до тех пор, пока не будет приблизительно 1 миллиард клеток. Клетки могут быть криоконсервированы после воздействия митотическим инактивирующим стимулом. Затем весь митотически инактивированный образец ЕС вводят в биореактор и ему позволяют прикрепляться в течение 24 часов. Кондиционирование среды следует после дополнительных 24 часов. Клетки CD34+, например, из UCB, затем вводят в тот же отсек биореактора, что и E4ORF1+ сконструированные EC, дополненные цитокинами (50 нг/мл TPO, Flt-3L, SCF). С этого момента клетки не отделены друг от друга. На 2 и 4 дни подают 200 мл болюса среды, дополненной цитокинами. Условия сбора и все остальные условия такие же, как в примере 1.
Пример 3. Анализы CFU
Колониеобразующие единицы или «КОЕ» представляют собой средство для оценки стволовости клеток в модели in vitro. Известное количество клеток высевают на колбу для культивирования с покрытием из метилцеллюлозы с определенной средой (т.е. Methocult). Через две недели презумптивными стволовыми клетками образуются колонии с определенными морфологиями. Эти колонии являются поддающимися количественной оценке и могут быть использованы для определения HPSC в данной популяции. Скорости наращивания HSPC были самыми высокими в биореакторе, за которым следовало основанное на колбах наращивание с E4ORF1+ EC и наращивание только с цитокинами, обеспечивающее наименьшее количество наращивания HSPC (смотрите фиг. 7).
Пример 4. Проточная цитометрия
Гемопоэтические клетки из свежей выделенной пуповинной крови (без манипуляций), из клеток, нарощенных размноженных только с помощью цитокинов в течение 6 дней, из клеток, нарощенных размноженных на E4ORF1+ EC в колбе в течение 6 дней, или из клеток, нарощенных размноженных на E4ORF1+ EC в полом волокне биореактора в течение 6 дней, анализировали с помощью проточной цитометрии. Популяции клеток окрашивали одновременно на CD34, CD45 и CD38. Каждый параметр был различим с помощью уникальных флуорофоров, конъюгированных с антителами, специфическими к этим клеточным поверхностным антигенам. CD45-клетки идентифицировали как E4ORF1+ сконструированные EC. CD45 представляет собой пан- гемопоэтический маркер. CD45+CD34+ клетки содержат более примитивную популяцию HSPC в общей популяции CD45+ по сравнению с CD45+ CD34- клетками. CD45+ CD34+ CD38- клетки содержат еще более примитивную популяцию HSPC. Скорости наращивания этих примитивных популяций были последовательно самыми высокими в биореакторе, за которым следовало наращивание на основе колб с E4ORF1+ сконструированными EC, а воздействие только цитокином обеспечивало наименьшее количество наращивания.
Пример 5. Трансплантация нарощенных размноженных HSPC
HSPC, нарощенные размноженные путем непрерывного контакта с E4ORF1+ сконструированными EC, могут давать превосходный пригодный для трансплантации продукт, например, по сравнению с HSPC, полученными с помощью наращиваний, где взаимодействие нарушается посредством последовательного пассирования и повторного высевания HSPC. Исключив это нарушение, HSPC, нарощенные размноженные в этом новом способе, могут привести к более быстрому приживлению лимфоидных, миелоидных и эритроидных линий, в результате чего соответствующие показатели крови возвращаются быстрее после миелоаблации. Это также должно улучшить долгосрочное приживление, поскольку предполагается, что использование E4ORF1+ сконструированных ЕС для наращивания предположительно будет удерживать долгосрочную репопуляцию стволовых клеток. Наращивание путем непрерывного контакта с E4ORF1+ сконструированными EC может также приводить к образованию достаточного материала HSPC для одного взрослого для получения трансплантата из одной единицы UCB от одного донора или даже множественных трансфузий трансплантата одному взрослому человеку, или для множественных трансфузий от одного донора UCB нескольким взрослым. Ожидаемое быстрое приживление может также приводить к ряду других преимуществ, включая в себя, возможное снижение периода госпитализации, более низкие показатели РТПХ всех классов, снижение уровня рецидива, снижение смертности, связанной с трансплантацией (TRM), снижение риска инфицирования, снижение числа случаев отказа от трансплантата, способности использовать небольшие количества пуповинной крови, которые в противном случае были бы непригодны для применения, увеличения доступа к донациям UCB для пуповинной крови редкого типа HLA, общее снижение стоимости лечения, увеличение продолжительности жизни для реципиентов трансплантатов и/или повышение качества жизни реципиентов трансплантата.
Вышеуказанные описания конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения были представлены в целях иллюстрации и описания. Они не должны быть исчерпывающими или ограничивать настоящее изобретение раскрытыми точными формами, и, очевидно, многие модификации и варианты возможны в свете вышеприведенного учения. Варианты осуществления были выбраны и описаны для лучшего объяснения принципов настоящего изобретения и его практического применения, чтобы тем самым дать возможность специалистам в настоящей области техники лучше всего использовать настоящее изобретение и различные варианты осуществления с различными модификациями, которые подходят для конкретного рассмотренного применения.
Все патенты, заявки на патенты, публикации и ссылки, приведенные в настоящем документе, явно включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка были конкретно и индивидуально указаны для включения посредством ссылки.
Claims (28)
1. Способ получения расширенной популяции гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников (HSPC) и эндотелиальных клеток (EC), пригодных для применения в трансплантации HSPC, при этом способ включает:
(i) контактирование CD34+ HSPC с E4ORF1+ эндотелиальными клетками пупочной вены человека (E4ORF1+ HUVEC) в биореакторе в исходном соотношении EC/HSPC,
(ii) наращивание HSPC путем культивирования HSPC и E4ORF1+ HUVEC в биореакторе в условиях, позволяющих наращивать HSPC в течение первого периода времени для получения расширенной клеточной популяции, содержащей HSPC и E4ORF1+ HUVEC в расширенном соотношении HSPC/EC, и
(iii) сбор расширенной клеточной популяции из биореактора,
в которой:
(а) HSPC и E4ORF1+ HUVEC одновременно присутствуют в одной и той же среде на протяжении всех стадий наращивания и сбора,
(b) ни в какой момент во время способа HSPC не удаляются из E4ORF1+ HUVEC и не контактируют с дополнительными EC, и
(c) отсутствует очистка для удаления E4ORF1+ HUVEC из HSPC, таким образом, что поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и E4ORF1+ HUVEC во время стадий наращивания и сбора,
тем самым получая расширенную популяцию HSPC и E4ORF1+ HUVEC, подходящих для применения в трансплантации HSPC.
2. Способ по п. 1, в котором исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере 25:1.
3. Способ по п. 1, в котором исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере 50:1.
4. Способ по п. 1, в котором исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере 100:1.
5. Способ по п. 1, в котором исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере 500:1.
6. Способ по п. 1, в котором исходное соотношение EC/HSPC составляет по меньшей мере 1000:1.
7. Способ по п. 1, в котором первый период времени составляет от 1 дня до 28 дней.
8. Способ по п. 1, в котором кратность наращивания HPSC составляет от 20 до 30,000 на стадии наращивания.
9. Способ по п. 1, в котором расширенное соотношение HSPC/EC составляет от 10:1 до 1:10.
10. Способ по п. 1, в котором HSPC представляют собой HSPC из костного мозга, периферической крови или пуповинной крови.
11. Способ по п. 1, при котором HSPC представляют собой HSPC из пуповинной крови.
12. Способ по п. 1, при котором E4ORF1+ HUVEC митотически инактивированы.
13. Способ по п. 1, при котором HUVEC E4ORF1+ представляют собой ETV2 +.
14. Способ по п. 1, при котором стадию наращивания проводят в отсутствие сыворотки.
15. Способ по п. 1, при котором биореактор представляет собой биореактор с замкнутой системой.
16. Способ по п. 1, в котором биореактор представляет собой биореактор с полыми волокнами.
17. Способ по п. 1, дополнительно включающий последующее введение расширенной смешанной популяции клеток HSPC и E4ORF1+ HUVEC субъекту, нуждающемуся в трансплантации HSPC, при этом поддерживается непрерывное взаимодействие между HSPC и E4ORF1 + HUVEC во время введения.
18. Способ по п. 17, при котором HSPC являются аллогенными по отношению к субъекту.
19. Способ по п. 17, при котором HSPC являются аутологичными по отношению к субъекту.
20. Способ по п. 17, при котором субъект характеризуется дефицитом гемопоэза, вызванным миелоаблативным лечением, или нарушением, выбранным из: гематологического заболевания, нарушения, которое требует трансплантации гемопоэтических стволовых клеток костного мозга, инфекционного иммунодефицита, влияющего на Т-клетки инфекционного заболевания, ВИЧ, генетического иммунодефицита, тяжелого комбинированного иммунодефицита, поражающего эритроциты генетического заболевания, анемии и анемии Фанкони.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562194460P | 2015-07-20 | 2015-07-20 | |
US62/194,460 | 2015-07-20 | ||
PCT/US2016/042872 WO2017015245A1 (en) | 2015-07-20 | 2016-07-19 | Methods and compositions for stem cell transplantation |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018105988A RU2018105988A (ru) | 2019-08-20 |
RU2018105988A3 RU2018105988A3 (ru) | 2020-01-21 |
RU2757818C2 true RU2757818C2 (ru) | 2021-10-21 |
Family
ID=57834594
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018105988A RU2757818C2 (ru) | 2015-07-20 | 2016-07-19 | Способы и композиции для трансплантации стволовых клеток |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20180214488A1 (ru) |
EP (2) | EP4202036A1 (ru) |
JP (2) | JP7089282B2 (ru) |
KR (1) | KR20180048617A (ru) |
CN (1) | CN108350419A (ru) |
AU (2) | AU2016297523B2 (ru) |
CA (1) | CA2993014A1 (ru) |
DK (1) | DK3325612T3 (ru) |
ES (1) | ES2939635T3 (ru) |
FI (1) | FI3325612T3 (ru) |
HK (1) | HK1258528A1 (ru) |
RU (1) | RU2757818C2 (ru) |
SG (1) | SG10201913752PA (ru) |
WO (1) | WO2017015245A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6861438B2 (ja) | 2015-07-20 | 2021-04-21 | アンジオクライン・バイオサイエンス・インコーポレイテッドAngiocrine Bioscience, Inc. | Ets転写因子を発現する改変内皮細胞 |
IL265352B2 (en) | 2016-09-13 | 2024-05-01 | Angiocrine Bioscience Inc | Blood brain barrier containing engineered endothelial cells |
WO2018170239A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | The Regents Of The University Of California | Methods of treating lysosomal disorders |
CN106929469B (zh) * | 2017-04-25 | 2020-08-07 | 徐子雁 | 间充质干细胞分化为表皮细胞的方法及试剂盒 |
WO2019183508A1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-09-26 | The Children's Medical Center Corporation | Endothelial cell factors and methods thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5599703A (en) * | 1993-10-28 | 1997-02-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | In vitro amplification/expansion of CD34+ stem and progenitor cells |
US20040151700A1 (en) * | 2001-10-30 | 2004-08-05 | Harlan David M. | Ex-vivo rescue of transplantable hematopoietic stem cells following myeloablative injury |
RU2017118935A (ru) * | 2014-10-31 | 2018-12-03 | Массачусетс Инститьют Оф Текнолоджи | Доставка биомолекул в клетки иммунной системы |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3875456T3 (de) | 1987-11-09 | 1998-06-10 | Becton Dickinson Co | Verfahren zur Analyse hämatopoietischer Zellen in einer Probe. |
US5061620A (en) | 1990-03-30 | 1991-10-29 | Systemix, Inc. | Human hematopoietic stem cell |
US5840580A (en) | 1990-05-01 | 1998-11-24 | Becton Dickinson And Company | Phenotypic characterization of the hematopoietic stem cell |
US6326198B1 (en) | 1990-06-14 | 2001-12-04 | Regents Of The University Of Michigan | Methods and compositions for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells |
DE4322570C1 (de) * | 1993-07-07 | 1994-06-16 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Stromale Zellinien aus menschlichem Knochenmark |
US5925567A (en) | 1995-05-19 | 1999-07-20 | T. Breeders, Inc. | Selective expansion of target cell populations |
US6335195B1 (en) | 1997-01-28 | 2002-01-01 | Maret Corporation | Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation |
US6100086A (en) * | 1997-04-14 | 2000-08-08 | Genzyme Corporation | Transgene expression systems |
EP1248519A4 (en) | 2000-01-18 | 2004-03-31 | Univ Leland Stanford Junior | EXPANSION OF STEM AND PROCUREMENT CELLS BY BETA-CATENIN |
AU2002225959A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-05-21 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Absolute lymphocyte recovery and cancer survival |
US7635477B2 (en) * | 2002-07-25 | 2009-12-22 | The General Hospital Corporation | Parathyroid hormone receptor activation and stem and progenitor cell expansion |
US8465732B2 (en) * | 2007-01-19 | 2013-06-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | Endothelial cells expressing adenovirus E4ORF1 and methods of use thereof |
EP2591093B1 (en) * | 2010-07-07 | 2018-11-28 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Endothelial cell production by programming |
ES2654994T3 (es) * | 2010-08-12 | 2018-02-15 | Fate Therapeutics, Inc. | Terapia mejorada con células madre y precursoras hematopoyéticas |
CN102643784B (zh) * | 2012-03-29 | 2016-05-25 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种造血干/祖细胞的体外扩增体系 |
EP2855665B8 (en) * | 2012-05-30 | 2019-09-25 | Cornell University | Generation of functional and durable endothelial cells from human amniotic fluid-derived cells |
RU2691062C2 (ru) * | 2013-01-15 | 2019-06-10 | Корнелл Юниверсити | Перепрограммирование эндотелия человека в гемопоэтических предшественников множественных линий дифференцировки с использованием определенных факторов |
JP2015109833A (ja) | 2013-11-08 | 2015-06-18 | 学校法人慶應義塾 | 線維芽細胞から血管内皮細胞を製造する方法 |
-
2016
- 2016-07-19 ES ES16828392T patent/ES2939635T3/es active Active
- 2016-07-19 DK DK16828392.7T patent/DK3325612T3/da active
- 2016-07-19 WO PCT/US2016/042872 patent/WO2017015245A1/en active Application Filing
- 2016-07-19 EP EP22206407.3A patent/EP4202036A1/en active Pending
- 2016-07-19 EP EP16828392.7A patent/EP3325612B1/en active Active
- 2016-07-19 SG SG10201913752PA patent/SG10201913752PA/en unknown
- 2016-07-19 JP JP2018503173A patent/JP7089282B2/ja active Active
- 2016-07-19 US US15/746,369 patent/US20180214488A1/en not_active Abandoned
- 2016-07-19 CN CN201680053238.8A patent/CN108350419A/zh active Pending
- 2016-07-19 KR KR1020187004650A patent/KR20180048617A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-07-19 RU RU2018105988A patent/RU2757818C2/ru active
- 2016-07-19 CA CA2993014A patent/CA2993014A1/en active Pending
- 2016-07-19 FI FIEP16828392.7T patent/FI3325612T3/fi active
- 2016-07-19 AU AU2016297523A patent/AU2016297523B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-17 HK HK19100883.9A patent/HK1258528A1/zh unknown
-
2022
- 2022-06-03 JP JP2022090788A patent/JP7473984B2/ja active Active
- 2022-07-07 AU AU2022204899A patent/AU2022204899A1/en active Pending
-
2023
- 2023-09-11 US US18/464,908 patent/US20230414671A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5599703A (en) * | 1993-10-28 | 1997-02-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | In vitro amplification/expansion of CD34+ stem and progenitor cells |
US20040151700A1 (en) * | 2001-10-30 | 2004-08-05 | Harlan David M. | Ex-vivo rescue of transplantable hematopoietic stem cells following myeloablative injury |
RU2017118935A (ru) * | 2014-10-31 | 2018-12-03 | Массачусетс Инститьют Оф Текнолоджи | Доставка биомолекул в клетки иммунной системы |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
AMARIGLIO N., et al., Donor- derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient, PLoS Med, 2009, 6(2), e1000029, DOI:10.1371/journal.pmed.1000029. * |
СУПОТНИЦКИЙ М.В. и др., Основные технологические процессы, используемые при производстве биомедицинских клеточных продуктов, Биопрепараты, 2015, 36-45. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2018521074A (ja) | 2018-08-02 |
AU2016297523B2 (en) | 2022-07-28 |
CN108350419A (zh) | 2018-07-31 |
CA2993014A1 (en) | 2017-01-26 |
SG10201913752PA (en) | 2020-03-30 |
FI3325612T3 (fi) | 2023-03-20 |
DK3325612T3 (da) | 2023-03-06 |
WO2017015245A1 (en) | 2017-01-26 |
KR20180048617A (ko) | 2018-05-10 |
JP7473984B2 (ja) | 2024-04-24 |
JP2022121446A (ja) | 2022-08-19 |
EP4202036A1 (en) | 2023-06-28 |
RU2018105988A3 (ru) | 2020-01-21 |
WO2017015245A8 (en) | 2022-11-03 |
JP7089282B2 (ja) | 2022-06-22 |
EP3325612A1 (en) | 2018-05-30 |
AU2022204899A1 (en) | 2022-07-28 |
RU2018105988A (ru) | 2019-08-20 |
US20230414671A1 (en) | 2023-12-28 |
AU2016297523A1 (en) | 2018-02-22 |
US20180214488A1 (en) | 2018-08-02 |
HK1258528A1 (zh) | 2019-11-15 |
ES2939635T3 (es) | 2023-04-25 |
EP3325612B1 (en) | 2022-12-14 |
EP3325612A4 (en) | 2018-12-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230414671A1 (en) | Methods and compositions for stem cell transplantation | |
EP2788476B1 (en) | Compositions and methods for enhanced generation of hematopoietic stem/progenitor cells | |
ES2538305T3 (es) | Métodos para expandir poblaciones de células mieloides y usos de las mismas | |
Friedman et al. | Umbilical cord mesenchymal stem cells: adjuvants for human cell transplantation | |
JP2007536936A (ja) | 幹細胞集団および使用方法 | |
JP2009526784A (ja) | 造血幹細胞の生着を増強するための方法および組成物 | |
WO2005083061A1 (en) | Stem cell populations and methods of use | |
JP2006525013A (ja) | 血液幹細胞の数の増幅のための装置および方法 | |
Maslova et al. | Enrichment of umbilical cord blood mononuclears with hemopoietic precursors in co-culture with mesenchymal stromal cells from human adipose tissue | |
TWI642781B (zh) | 具優異細胞保護及免疫調節之quadri-正之基質細胞 | |
CN107864627A (zh) | 包含粘附基质细胞的方法和组合物 | |
RU2360965C1 (ru) | СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПАЦИЕНТА ex vivo | |
Romanov et al. | Human umbilical cord mesenchymal stromal cells support viability of umbilical cord blood hematopoietic stem cells but not the “stemness” of their progeny in co-culture | |
US20160158288A1 (en) | Methods and compositions for expanding long-term hematopoietic stem cell populations | |
Tipnis et al. | Umbilical cord matrix derived mesenchymal stem cells can change the cord blood transplant scenario | |
Lewis | Development of a three-dimensional haematopoietic stem cell-permissive bone marrow niche model using magnetic levitation | |
US20220218759A1 (en) | Compositions and methods for improving treatment outcomes for patients having hematological malignancies using an expanded stem cell product | |
Ilesanmi | Achieving boosted expansion of transplantable hematopoietic stem cells by co-culture with autologous endothelial cells | |
Gur-Cohen et al. | Quantifying hematopoietic stem and progenitor cell mobilization | |
Hiwase | Characterisation of placental mesenchymal stromal cells and their role in cord blood transplantation. | |
Bellehsen et al. | Stem Cells: What Are They and Why Do We Need Them? |