RU2740503C1 - Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения - Google Patents

Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения Download PDF

Info

Publication number
RU2740503C1
RU2740503C1 RU2020121125A RU2020121125A RU2740503C1 RU 2740503 C1 RU2740503 C1 RU 2740503C1 RU 2020121125 A RU2020121125 A RU 2020121125A RU 2020121125 A RU2020121125 A RU 2020121125A RU 2740503 C1 RU2740503 C1 RU 2740503C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hydroxyquinazoline
derivatives
hours
ome
water
Prior art date
Application number
RU2020121125A
Other languages
English (en)
Inventor
Василий Николаевич Осипов
Александр Николаевич Балаев
Александр Викторович Громыко
Антон Владимирович Колотаев
Дереник Саркисович Хачатрян
Original Assignee
Федеральное Государственное Унитарное Предприятие "Институт Химических Реактивов И Особо Чистых Химических Веществ Национального Исследовательского Центра "Курчатовский Институт" (Ниц "Курчатовский Институт" - Иреа)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное Государственное Унитарное Предприятие "Институт Химических Реактивов И Особо Чистых Химических Веществ Национального Исследовательского Центра "Курчатовский Институт" (Ниц "Курчатовский Институт" - Иреа) filed Critical Федеральное Государственное Унитарное Предприятие "Институт Химических Реактивов И Особо Чистых Химических Веществ Национального Исследовательского Центра "Курчатовский Институт" (Ниц "Курчатовский Институт" - Иреа)
Priority to RU2020121125A priority Critical patent/RU2740503C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2740503C1 publication Critical patent/RU2740503C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
    • C07D239/86—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in position 4
    • C07D239/88—Oxygen atoms
    • C07D239/92—Oxygen atoms with hetero atoms directly attached to nitrogen atoms of the hetero ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к производным 3-гидроксихиназолин-4(3H)-она, представленной ниже общей формулы, которые могут использоваться в качестве ингибиторов гистондеацетилаз. В общей формуле производных 3-гидроксихиназолин-4(3H)-она R1 представляет собой галоген или ОМе; R2 представляет собой водород, ОMе; n=5, 6. Изобретение относится также к способу получения указанных соединений, который осуществляют по следующей схеме. Раствор производных 2-аминобензгидроксамовой кислоты, например, 2-амино-5-бром-N-гидроксибензамида или 2-амино-4,5-диметокси-N-гидроксибензамида, в пятикратном весовом избытке муравьиной кислоты кипятят в течение 4-6 часов. Затем реакционную массу выливают в смесь воды со льдом, подщелачивают до рН 7 и отфильтровывают выпавший осадок производного 3-гидроксихиназолина, который затем обрабатывают алкилирующим агентом, метил 6-бромгексаноатом или метил 7-бромгептаноатом, в диметилформамиде в присутствии карбоната калия при мольном соотношении производного 3-гидроксихиназолина к алкилирующему агенту и карбонату калия соответственно равном 1:1,1:1 и перемешивают при комнатной температуре в течение 4-6 часов. После этого полученный продукт алкилирования высаживают добавлением воды, отфильтровывают, промывают водой, высушивают, затем подвергают аминолизу 4-кратным мольным избытком гидроксиламина в безводном метаноле, осуществляемому при комнатной температуре в течение 20-26 часов до образования целевого продукта, выделяемого фильтрацией с последующей промывкой серным эфиром. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 12 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к производным 3-гидроксихиназолин-4(3H)-она, и касается непосредственно новых производных 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов, имеющих в составе гидроксамовую кислоту, которые могут использоваться в медицине для лечения ряда заболеваний посредством ингибирования гистоновых деацетилаз, например при лечении онкологических и нейродегенеративных заболеваний.
Как известно, гистондеацетилазы (HDAC) - это ферменты, катализирующие удаление ацетильной группы ε-N-ацетиллизина гистонов. Модифицируя гистоны и изменяя конформацию хроматина, гистондеацетилазы играют важную роль в регуляции экспрессии генов. Таким образом, HDAC является важной эпигенетической мишенью при терапии рака, а ингибиторы HDAC демонстрируют успешную картину как цитотоксические агенты. В нескольких исследованиях было показано, что ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC) являются новыми перспективными средствами для лечения нейродегенеративных заболеваний, особенно болезни Альцгеймера [Ziemka-Nalecz М., Jaworska J., Sypecka J., Zalewska Т. J Neuropathol. Exp. Neurol. 2018. Vol. 77, No 10. P. 855-870; De Simone A., Milelli A. ChemMedChem. 2019. Vol.14. No 11. P. 1067-1073; Cuadrado-Tejedor M, Perez-Gonzalez M, Garcia-Munoz C, et al. Front Aging Neurosci. 2019. Vol. 11. 149].
Большинство ингибиторов HDAC имеют трехкомпонентную структуру, состоящую из цинк-связывающего участка, линкера, способного занимать канал фермента, и фрагмента, взаимодействующего с аминокислотными остатками у входа в активный центр HDAC. Ингибиторы классических деацетилаз функционируют путем связывания иона цинка в активном центре фермента и, таким образом, инактивируют систему смены зарядов.
Известно, что эффективными ингибиторами гистондеацетилаз (HDAC) являются производные гидроксамовой кислоты, например, Вориностат (SAHA), Панобиностат (LBH589) и Белиностат. Они одобрены FDA USA для лечения Т-клеточной лимфомы кожи (CTCL) и множественной миеломы [Mottamal М, et al. Molecules. 2015; 20(3):3898-941].
Одной из перспективных стратегий в создании новых фармацевтических препаратов в настоящее время является проектирование и синтез гибридных соединений, состоящих из двух или более различных биоактивных фрагментов, и действующих через активацию/блокирование нескольких мишеней. Совмещение двух активных групп в одной молекуле может приводить к более выраженному терапевтическому эффекту, по сравнению с индивидуальными компонентами при комбинированном применении
Известно, что хиназолин является важным фармакологическим фрагментом. Хиназолиновый цикл присутствует как в различных природных соединениях, так и в молекулах многих лекарственных препаратов. Соединение в одной молекуле хиназолиновой и гидроксамовой фармакофорных групп может потенциально приводить к новым перспективным соединениям, что подтверждается многочисленными примерами.
Описан ряд соединений, содержащих хиназолиновый цикл и гидроксамовую кислоту, применяемых в качестве бифункциональных ингибиторов тирозинкиназ и гистондеацетилаз [WO 2009063054, А61K 31/517, 2009; WO 2008033749, А61K 31/517, 2008; WO 2018005799, А61K 31/517, 2018; US 2008221132, А61K 31/517, 2008; KR 101964810, А61K 31/517,2019; US 2018098990, А61K 31/517, 2018].
Одной из возможных позиций присоединения гидроксаматной группы является атом азота в 3-м положении хиназолинового цикла. Примером таких соединений является серия синтезированных новых N-гидроксибензамидов и N-гидроксипропенамидов, присоединенных по 3-му положению хиназолин-4(3H)-онов [Hieu D.T., Arm D.T., Tuan N.M. et al. Bioorganic Chemistry. - 2018. Vol. 76. - P. 258-267; KR 20190134180, A61K 31/517, 2019]. Несколько соединений из этой серии (например, соединения, представленные на рисунке) показали в несколько раз более высокую цитотоксическую активность, чем ингибитор HDAC - вориностат (SAHA), по отношению к трем линиям раковых клеток человека (рак толстой кишки SW620; рак простаты РС-3; рак легкого NCI-Н23) и ингибировали HDAC со значениями IC50 в субмикромолярном диапазоне:
Figure 00000001
В статье [Hieu D.T., Anh D.T., Hai Р.Т. et al. Chem Biodivers. 2019. 16(4): el 800502] описывается синтез и биологическая активность различных серий новых гидроксамовых кислот, присоединенных к 3-му положению хиназолин-4-(3H)-онов в качестве новых малых молекул, нацеленных на гистондеацетилазы. Биологическая оценка показала, что данные гидроксамовые кислоты обладают сильной цитотоксичностью в отношении трех линий раковых клеток человека (SW620, рак толстой кишки; РС-3, рак простаты; NCI-Н23, рак легкого). Большинство этих соединений проявляют более высокую цитотоксичность, чем SAHA.
Структурными аналогами заявляемых соединений являются производные хиназолин-4(3Н)-онов, в частности, N-гидрокси-6-(4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)гексанамид, являющийся ближайшим структурным аналогом заявляемых новых соединений [US 20020115826, А61K 31/121, 2002; US 2009181971, А61K 31/121, 2009]. Однако производные гидроксамовых кислот, присоединенные по атому кислорода в 3-м положении 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов, являющиеся объектом предлагаемого изобретения, ранее не описаны.
Известно несколько возможных путей синтеза гидроксамовых кислот, присоединенных по 3-му положению хиназолин-4(3Н)-онов. Один из них представляет собой трехстадийный синтез, осуществляемый с применением в качестве исходного продукта изатового ангидрида и с использованием на последней стадии процесса карбодиимидного метода для получения гидроксамовой кислоты из свободной карбоновой кислоты [US 2009181971, А61K 31/121, 2009] Данный процесс протекает по следующей схеме (Схема 1):
Figure 00000002
Недостатками этого метода являются как низкий выход конечного соединения на последней стадии (23%, общий выход продукта после всех стадий около 10%), так и использование дорогих реактивов, таких как N-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид и замещенные изатовые ангидриды.
Согласно другому методу, описанному в цитированной работе [Hieu D.T., Anh D.T., Hai Р.Т. et al. Chem Biodivers. 2019. 16(4): e1800502] гидроксамовые кислоты, производные хиназолин-4(3H)-она, получают из соответствующих замещенных хиназолин-4(3Н)-онов алкилированием метиловыми эфирами 6-бромгексановой кислоты или 7-бромгептановой кислоты, с последующим аминолизом полученных эфиров гидроксиламином. Процесс протекает по Схеме 2:
Figure 00000003
Недостатком данного метода является проведение гидроксиламинолиза на последней стадии в достаточно жестких водных условиях со средним выходом гидроксамовых кислот 60-70%.
Во всех рассмотренных выше способах получаются соединения, в которых углеродный линкер, связывающий гидроксаматную функцию и хиназолиновый цикл, присоединен непосредственно к атому азота в 3-м положении. Известны примеры соединений с линкером, присоединенным через кислород по 6-му положению [US 2008221132, А61K 31/40, 2008; US 2015284340, C07D 239/94, 2015], по 7-му положению хиназолинового цикла (US 2019322643, А61Р 35/00, 2019), а также соединения с линкером, присоединенным к атому кислорода в 8-м положении хиназолинового цикла [CN 110382490, А61K 31/517, 2019; Zhang K., Lai F., Lin S. et al. J. Med. Chem. 2019, 62, 15, 6992-7014].
Однако способы присоединения гидроксамовой кислоты через атом кислорода в 3-м положении хиназолинового цикла не известны, как и не известны соответствующие производные хиназолина и гидроксамовой кислоты.
Целью предлагаемого изобретения является расширение ассортимента эффективных препаратов, которые могут использоваться в качестве ингибиторов гистондеацетилаз различных изоформ и применяться для лечения онкологических, нейродегенеративных и других заболеваний, а также разработка нового экономичного и промышленно-осуществимого способа получения таких препаратов.
С этой целью предлагаются новые производные 3-гидроксихиназолин-4(3H)-онов, в качестве ингибиторов гистондеацетилаз, имеющие следующую общую формулу:
Figure 00000004
где R1 представляет собой галоген или ОМе
R2 представляет собой водород, ОМе,
n=5, 6.
Также предлагается способ получения производных 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов указанной выше общей формулы, осуществляемый по следующей схеме: раствор производных 2-аминобензгидроксамовой кислоты, например, 2-амино-5-бром-N-гидроксибензамида или 2-амино-4,5-диметокси-N-гидроксибензамида, в пятикратном весовом избытке муравьиной кислоты кипятят в течение 4-6 часов, затем реакционную массу выливают в смесь воды со льдом, подщелачивают до рН 7 и отфильтровывают выпавший осадок производного 3-гидроксихиназолина, который затем обрабатывают алкилирующим агентом, метил 6-бромгексаноатом или метил 7-бромгептаноатом, в диметилформамиде в присутствии карбоната калия при мольном соотношении производного 3-гидроксихиназолина к алкилирующему агенту и карбонату калия, соответственно равном 1:1,1:1, перемешивают при комнатной температуре в течение 4-6 часов, после чего полученный продукт алкилирования высаживают добавлением воды, отфильтровювают, промывают водой, высушивают, затем подвергают аминолизу 4-х кратным мольным избытком гидроксиламина в безводном метаноле в присутствии 2-х эквивалентов 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (DBU), осуществляемому при комнатной температуре в течение 20-26 часов до образования целевого продукта, выделяемого фильтрацией с последующей промывкой серным эфиром. Окончание реакции аминолиза определяют с помощью тонкослойной хроматографии.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующей схемой:
Figure 00000005
Используемые в качестве исходных соединений производные 2-аминобензгидроксамовых кислот могут быть получены по известному методу [Bodanszky М., Bodanszky A. The practice of peptide synthesis. - 2nd, rev. ed. - Springer, 1984. - 217 p. - ISBN-13:978-3-S40-S7S0S-4 - P. 116].
Предлагаемым способом синтезированы, в частности, следующие новые соединения:
6-[(6-бром-4-оксохиназолин-3(4//)-ил)окси]-К-гидроксигексанамид (соединение 1)
Figure 00000006
7-[(6-бром-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)окси] -N-гидроксигептанамид (соединение 2)
Figure 00000007
6-[(6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси]-N-гидроксигексанамид (соединение 3)
Figure 00000008
7-[(6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси]-N-гидроксигептанамид (соединение 4)
Figure 00000009
Новые соединения в отличие от ранее известных гидроксамовых кислот, присоединенных к атому азота в 3-м положении хиназолин-4(3Н)-онов, являются гидроксамовыми кислотами, присоединенными к атому кислорода в 3-м положении производных 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов. Ниже для сравнения приводятся формулы описанных ранее соединений и заявляемых соединений.
Figure 00000010
Заявляемого способ получения новых соединений имеет ряд преимуществ по сравнению со способами, применяемыми при получении структурных аналогов, а именно: повышение эффективности процесса синтеза производных 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов с гидроксамовой кислотой, присоединенной через атом кислорода в 3-м положении хиназолинового цикла, низкая трудоемкостью процесса, доступность реагентов. Также заявляемый способ обеспечивает получение целевых соединений с чистотой, удовлетворяющей требованиям фармацевтической промышленности.
Применяемые аналитические методы и оборудование.
Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе фирмы Shimadzu. Колонка: Grom-Sil 12J ODS-4HE, 5 мкм, 250x4.6 мм. Условия: линейный градиент АВ: 5% В (0 мин) 100% В (20 мин). А - 0.01% ТФУ в воде, В - 0.01% ТФУ в ацетонитриле. Спектры ESI-MS регистрировали на приборе "Agilent LC/MS 1200" при ионизации пробы электрораспылением в режиме регистрации положительных ионов. Пробы готовили в системе ацетонитрил/вода 1/1, концентрация 2 мг/мл. Условия анализа: поток 1 мл/мин, давление на нибулайзере 20 psi, температура 360°С, скорость потока осушающего газа 9 л/мин, напряжение 3500 В, целевая масса от 100 до 2000. Температуру плавления определяли на приборе марки "Melting Point М-565" (BUCHI). Спектры ЯМР 1Н получены на Фурье ЯМР-спектрометре Bruker A VANCE III NanoBay 300 МГц (для 1Н-ЯМР). Спектры регистрировали в режиме стабилизации по дейтерию, термостабилизация 25°С, внутренний стандарт - тетраметилсилан) в ДМСО-d6. Химические сдвиги приведены в миллионных долях (δ), КССВ - в герцах. ТСХ проводили на пластинах Merck TLC Silica gel 60 F254, проявление в УФ и нингидрином.
Ниже приводятся примеры осуществления изобретения.
Пример 1
Синтез 3-гидрокси-6,7-диметоксихиназолин-4(3H)-она
Figure 00000011
Раствор 2.54 г (12 ммоль) 2-амино-5,4-диметокси-N-гидроксибензамида в 10 мл муравьиной кислоты кипятят при перемешивании 5 часов. Реакционную смесь выливают в 30 мл воды со льдом, 10%-ным раствором гидрокарбоната натрия доводят рН раствора до 7. Отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×10 мл воды, сушат на воздухе. Выход 2.49 г (93.6%), бежевый порошок. Т. пл. 253 - 255°С. Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 97.5%. ESI-MS, m/z 223.1 [М+Н]+.
Пример 2
Синтез 6-бром-3-гидроксихиназолин-4(3H)-она
Figure 00000012
Раствор 2.31 г (10 ммоль) 2-амино-5-бром-N-гидроксибензамида в 10 мл муравьиной кислоты кипятят при перемешивании 5 часов. Реакционную смесь выливают в 30 мл воды со льдом, 10%-ным раствором гидрокарбоната натрия доводят рН раствора до 7. Отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×10 мл воды, сушат на воздухе. Выход 2.03 г (84.3%), бежевый порошок. Т. пл. 254 - 255°С. Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 98.1%. ESI-MS, m/z 242.2 [М+Н]+
Пример 3
Синтез метил 6-((6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гексаноата
Figure 00000013
К раствору 6-бром-3-гидроксихиназолин-4(3H)-она 242 мг (1 ммоль) в 5 мл диметилформамида прибавляют 138 мг (1 ммоль) мелкоизмельченного карбоната калия. Затем прибавляют 230 мг (1.1 ммоль) метил 6-бромгексаноата. Перемешивают 5 часов при комнатной температуре. К реакционной массе добавляют 10 мл воды, отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×5 мл воды, сушат на воздухе. Выход 3.43 г (93.0%), белый порошок. Т. пл. 62.2- 63.0°С. 1H ЯМР (ДМСО-d6, δ м. д., J, Гц) 8.66 (s, 1 Н) 8.25 (d, J=2.29, 1 Н) 8.00 (dd, J=8.71, 2.38, 1 Н) 7.68 (d, J=8.71, 1 Н) 4.25 (t, J=6.51, 2 Н) 3.59 (s, 3 Н) 2.34 (t, J=7.29, 2 H) 1.66 - 1.77 (m, 2 H) 1.54 - 1.65 (m, 2 H) 1.39 - 1.50 (m, 2 H). Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 97.4%, ESI-MS, m/z 370.2 [М+Н]+.
Пример 4
Синтез метил 7-((6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гептаноата
Figure 00000014
К раствору 6-бром-3-гидроксихиназолин-4(3H)-она 242 мг (1 ммоль) в 5 мл диметилформамида прибавляют 138 мг (1 ммоль) мелкоизмельченного карбоната калия. Затем прибавляют 246 мг (1.1 ммоль) метил 7-бромгептаноата. Перемешивают 5 часов при комнатной температуре. К реакционной массе добавляют 10 мл воды, отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×5 мл воды, сушат на воздухе. Выход 3.45 г (90.1%), белый порошок. Т. пл. 72.1- 73.9°С. 1H ЯМР (ДМСО-d6, δ м. д., J, Гц) 8.66 (s, 1 Н) 8.25 (d, J=2.29, 1 Н) 8.00 (dd, J=8.71, 2.29, 1 Н) 7.68 (d, J=8.71, 1 Н) 4.25 (t, J=6.51, 2 H) 3.58 (s, 3 H) 2.31 (t,.7=7.34, 2 H) 1.65 - 1.75 (m, 2 H) 1.50 - 1.60 (m, 2 H) 1.39 - 1.49 (m, 2 H) 1.29 -1.38 (m, 2 H). Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 95.1%, ESI-MS, m/z 384.1 [М+Н]+.
Пример 5
Синтез метил 6-((6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гексаноата
Figure 00000015
К раствору 3-гидрокси-6,7-диметоксихиназолин-4(3H)-она 222 мг (1 ммоль) в 5 мл диметилформамида прибавляют 138 мг (1 ммоль) мелкоизмельченного карбоната калия. Затем прибавляют 230 мг (1.1 ммоль) метил 6-бромгексаноата. Перемешивают 5 часов при комнатной температуре. К реакционной массе добавляют 10 мл воды, отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×5 мл воды, сушат на воздухе. Выход 3.23 г (92.4%), белый порошок. Т.пл. 111.6-112.0°С. Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 94.6%, ESI-MS, m/z 351.2 [М+Н]+. 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м. д., J, Гц) 8.49 (s, 1 Н), 7.46 (s, 1 Н), 7.18 (s, 1 Н), 4.23 (t, J=6.46, 2Н), 3.91 (s, 3Н), 3.87 - 3.90 (m, 3Н), 3.59 (s, 3Н), 2.34 (t, J=7.29, 2Н), 1.65 - 1.76 (m, 2 Н), 1.54 - 1.63 (m, 2 Н), 1.39 - 1.50 (m, 2Н).
Пример 6
Синтез метил 7-((6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гептаноата
Figure 00000016
К раствору 3-гидрокси-6,7-диметоксихиназолин-4(3H)-она 222 мг (1 ммоль) в 5 мл диметилформамида прибавляют 138 мг (1 ммоль) мелкоизмельченного карбоната калия. Затем прибавляют 246 мг (1.1 ммоль) метил 7-бромгептаноата. Перемешивают 5 часов при комнатной температуре. К реакционной массе добавляют 10 мл воды, отфильтровывают осадок, промывают на фильтре 2×5 мл воды, сушат на воздухе. Выход 3.36 г (92.4%), белый порошок. Т.пл. 63.5-65.9°С. Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 91.3%, ESI-MS, m/z 365.2 [М+Н]+. 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м.д., J, Гц) 8.50 (s, 1 Н) 7.47 (s, 1 Н) 7.18 (s, 1 Н) 4.23 (t, J=6.51, 2 Н) 3.91 (s, 3 Н) 3.89 (s, 3 Н) 3.58 (s, 3 Н) 2.31 (t, J=7.34, 2 Н) 1.64 - 1.75 (m, 2 Н) 1.51 - 1.60 (m, 2 Н) 1.39 - 1.48 (m, 2 Н) 1.28 - 1.38 (m, 2 Н).
Пример 7
Синтез 6-((6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси-N-гидроксигексанамида (соединение 1)
Figure 00000017
Металлический натрий 140 мг (6 ммоль) растворяют в 10 мл метанола, добавляют 270 мг (4 ммоль) мелкоизмельченного хлоргидрата гидроксиламина, перемешивают 30 минут. Отфильтровывают осадок, к фильтрату прибавляют раствор 369 мг (1 ммоль) 6-((6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гексаноата в 5 мл метанола. После перемешивания в течение 2-х минут к полученной смеси добавляют DBU (0.28 мл, 2.00 ммоль), выдерживают при комнатной температуре сутки (контроль прохождения реакции по ТСХ до исчезновения исходного эфира, элюент: хлороформ: метанол - 10: 1). Отфильтровывают выпавший осадок, промывают 10 мл серного эфира, сушат на воздухе. Выход 344 мг (93.2%), светло-бежевый порошок. Т. пл. 128 - 132°С. Спектр 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м. д., J, Гц) 10.36 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.25 (d, J=2.3, 1Н), 8.01 (dd, J=8.7, 2.4, 1H), 7.68 (d, J=8.7, 1H), 4.25 (t, J=6.5, 2H), 1.98 (t, J=7.2, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 2H), 1.62-1.51 (m, 2H), 1.47 - 1.38 (m, 2H). Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 96.1%, ESI-MS, m/z 372.0 [М+Н]+. Найдено, %: С, 55.88; Н, 6.34; N, 11.50. C17H23N3O6. Вычислено, %: С, 55.79; Н, 6.37; N, 11.44.
Пример 8
Синтез 7-[(6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси]-N-гидроксигептанамида (соединение 2)
Figure 00000018
Металлический натрий 140 мг (6 ммоль) растворяют в 10 мл метанола, добавляют 270 мг (4 ммоль) мелкоизмельченного хлоргидрата гидроксиламина, перемешивают 30 минут. Отфильтровывают осадок, к фильтрату прибавляют раствор 383 мг (1 ммоль) метил 7-((6-бром-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гептаноата в 5 мл метанола. После перемешивания в течение 2-х минут к полученной смеси добавляют DBU (0.28 мл, 2.00 ммоль), выдерживают при комнатной температуре сутки (контроль прохождения реакции по ТСХ до исчезновения исходного эфира, элюент хлороформ: метанол - 10:1). Отфильтровывают выпавший осадок, промывают 10 мл серного эфира, сушат на воздухе. Выход 336 мг (87.5%), светло-бежевый порошок. Т. пл. 141 - 143°С. Спектр 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м.д., J, Гц) 10.34 (с, 1Н), 8.66 (с, 1Н), 8.25 (д, J=2.3, 1H), 8.01 (д.д, J=8.7, 2.4, 1Н), 7.68 (д, J=8.7, 1Н), 4.25 (т, J=6.5, 2Н), 1.96 (т, J=7.3, 2Н), 1.78 - 1.63 (м, 2Н), 1.59 - 1.38 (м, 4Н), 1.36 - 1.23 (м, 2Н).. Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 96.9%, ESI-MS, m/z 385.9 [М+Н]+, 791.3 [2M+Na]+. Найдено, %: С, 45.42; Н, 4.36; N, 11.35. C17H23N3O6. Вычислено, %: С, 45.53; Н, 4.33; N, 11.42.
Пример 9
Синтез 6-((6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси-N-гидроксигексанамида (соединение 3)
Figure 00000019
Металлический натрий 140 мг (6 ммоль) растворяют в 10 мл метанола, добавляют 270 мг (4 ммоль) мелкоизмельченного хлоргидрата гидроксиламина, перемешивают 30 минут. Отфильтровывают осадок, к фильтрату прибавляют раствор 350 мг (1 ммоль) 6-((6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гексаноата в 5 мл метанола. После перемешивания в течение 2-х минут к полученной смеси добавляют DBU (0.28 мл, 2.00 ммоль), выдерживают при комнатной температуре сутки (контроль прохождения реакции по ТСХ до исчезновения исходного эфира, элюент хлороформ: метанол - 10:1). Отфильтровывают выпавший осадок, промывают 10 мл серного эфира, сушат на воздухе. Выход 296 мг (84.3%), светло-бежевый порошок. Т. пл. 75.6 -77.9°С. 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м.д., J, Гц) 8.49 (с, 1Н), 7.47 (с, 1Н), 7.18 (с, 1Н), 4.23 (т, J=6.5, 2Н), 3.91 (с, 3Н), 3.88 (с, 3Н), 1.98 (т, J=7.2, 2Н), 1.77 - 1.64 (м, 2Н), 1.63 - 1.48 (м, 2Н), 1.49 - 1.35 (м, 2Н). Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 99.5%, ESI-MS, m/z 703.4 [2М+Н]+, 352.1 [М+Н]+. Найдено, %: С, 54.69; Н, 6.02; N, 11.96. C16H21N3O6. Вычислено, %: С, 54.58; Н, 6.09; N, 12.02.
Пример 10
Синтез 7-[(6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси]-N-гидроксигептанамида (соединение 4)
Figure 00000020
Металлический натрий 140 мг (6 ммоль) растворяют в 10 мл метанола, добавляют 270 мг (4 ммоль) мелкоизмельченного хлоргидрата гидроксиламина, перемешивают 30 минут. Отфильтровывают осадок, к фильтрату прибавляют раствор 364 мг (1 ммоль) 6-((6,7-диметокси-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)окси)гептаноата в 5 мл метанола. После перемешивания в течение 2-х минут к полученной смеси добавляют DBU (0.28 мл, 2.00 ммоль), выдерживают при комнатной температуре сутки (контроль прохождения реакции по ТСХ до исчезновения исходного эфира, элюент хлороформ: метанол - 10: 1). Отфильтровывают выпавший осадок, промывают 10 мл серного эфира, сушат на воздухе. Выход 318 мг (87.3%), светло-бежевый порошок. Т. пл. 105 - 109°С. 1Н ЯМР (ДМСО-d6, δ м. д., J, Гц) 10.34 (с, 1Н), 8.66 (с, 1Н), 8.50 (с, 1Н), 7.47 (с, 1H), 7.18 (с, 1Н), 4.23 (т, J=6.5, 2Н), 3.91 (с, 3Н), 3.89 (с, 3Н), 1.96 (т, J=7.3, 2Н), 1.76 - 1.61 (м, 2Н), 1.58 - 1.37 (м 4Н), 1.37 - 1.24 (м, 2Н). Содержание основного продукта по данным ВЭЖХ 96.3%, ESI-MS, m/z 366.3 [М+Н]+. Найдено, %: С, 55.88; Н, 6.34; N, 11.50. C17H23N3O6. Вычислено, %: 55.79; Н, 6.37; N, 11.44.
Пример 11
Определение цитотоксической активности
Цитотоксическую активность заявляемых соединений определяли с помощью МТТ-теста. Концентрацию полумаксимального ингибирования (IC50) для синтезированных веществ определяли на клетках рака толстой кишки НТС116, карциномы легкого А549, рака предстательной железы РС-3, рака молочной железы MCF-7, рака почки SN12C
Для проведения исследования клетки опухолевых линий человека были нанесены в 96-луночный культуральный планшет (104 клеток в каждой лунке) и после 24 часов инкубации к клеткам были добавлены методом раститровки различные концентрации 14 исследуемых соединений в диапазоне 100±0.1 мкМ. В качестве контроля сравнения использовали препарат Вориностат (SAHA), являющийся гидроксамовой кислотой. Планшет с внесенными веществами помещали в СО2-инкубатор на 72 часа. После инкубации вносили в каждую лунку по 20 мкл рабочего раствора МТТ. Инкубировали планшет 3 часа в СО2-инкубаторе. После инкубации заменить в каждой лунке среду на 200 мкл ДМСО.
После растворения кристаллов формазана определяли оптическую плотность каждой лунки при 570 нм, вычитали измеренное фоновое поглощение при 620 нм с помощью планшетного фотометра. Значение концентрации, вызывающее 50% ингибирование роста популяции клеток (IC50) (Таблица 1), определяли на основе дозозависимых кривых и/или с помощью программного обеспечения (например, GraphPad Prism 5.0 или OriginPro 9.0)
Пример 12
Исследование влияния производных гидроксамовых кислот на активность ферментов HDAC1 и HDAC6.
Протокол проведения исследования.
Делают навески исследуемых веществ и приготовляют растворы с исходной концентрацией 5×10-3 М в подходящем растворителе (вода, спирт, ДМСО). Приготовляют стоковые растворы исследуемых веществ в растворителе для получения концентрационной зависимости с учетом того, что конечная концентрация вещества в инкубационной среде меньше в 4 раза (50 мкл раствора вещества в 200 мкл конечного объема пробы). В качестве эталонных веществ использовались препараты Вориностат (SAHA) и Трихостатин А.
Эксперимент выполнялся в 96-луночном планшете. Добавляют 50 мкл раствора исследуемых соединений в лунки планшета, согласно схеме соответствующего эксперимента.
Фермент HDAC разбавляют с использованием буфера HDAC-Glo ™ до желаемой концентрации.
Вносят 50 мкл фермента HDAC в каждую лунку 96-луночного планшета, где уже находятся растворы исследуемых соединений, полученные на предыдущей стадии. Оставляют не менее 3-х лунок без HDAC, для формирования буферного фона, не менее 3-х лунок с HDAC и растворителем, для получения максимального сигнала активности фермента.
Содержимое планшета перемешивают при комнатной температуре в течение 30-60 секунд, используя орбитальный шейкер при 500-700 об/мин, чтобы обеспечить однородность.
Смесь фермент/исследуемое вещество инкубируют при комнатной температуре в течение по меньшей мере 30 минут (но не более 2 часов).
Готовят реагент HDAC-Glo™: 10 мл буфера HDAC-Glo™ добавляют к субстрату HDAC-Glo и осторожно перемешивают. Затем в эту смесь добавляют 10 мкл реагента-проявителя и также осторожно перемешивают.
Равный объем реагента HDAC-Glo™ добавляют в каждую лунку планшета (100 мкл для 96-луночного).
Смешивают содержимое ячеек при комнатной температуре в течение 30-60 секунд, используя орбитальный шейкер при 500-700 об/мин, чтобы обеспечить однородность. Затем содержимое инкубируют при комнатной температуре в течение 15-45 минут.
По истечению необходимого времени инкубации измеряют люминесценцию на многофункциональном планшетном анализаторе En Vision.
Обработка полученных первичных данных, определение IC50
Так как амплитуды кривых могут различаться от повторения к повторению, полученные абсолютные значения хемилюминесценции нормировали для каждого отдельного повторения. За нулевое значение брали минимальное измеренное значение внутри одной серии разведений, за 100% - максимальное достигнутое значение. Нормированные три повторения вместе аппроксимировали кривой у=у(х), задающейся формулой 7.1
Figure 00000021
где, у - нормированная интенсивность люминесценции, х - десятичный логарифм
концентрации исследуемого вещества.
Параметры Bottom, Top, HillSlope и lgIC50 подбираются так, чтобы сумма квадратов отклонений экспериментальных точек от аппроксимирующей кривой была минимальна. Полученные значения IC50 (Таблица 1) и границ 95% доверительных интервалов использовали для анализа результатов работы. Обработка данных выполнена с использованием пакета GraphPad Prism 6.
Заявляемые соединения обладают цитотоксической активностью в микромолярном диапазоне на различных линиях опухолевых клеток. Активность ряда соединений по отношению ферментам HDAC6 превышает или сравнима с активностью известного ингибитора гистондеацетилазы - Вориностата (SAHA), при этом необходимо отметить высокую селективность всех соединений к ферменту HDAC6 по сравнению с HDAC1.
Figure 00000022

Claims (13)

1. Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов общей формулы
Figure 00000023
,
где R1 представляет собой галоген, ОМе,
R2 представляет собой водород, ОМе,
n=5, 6,
которые могут использоваться в качестве ингибиторов гистондеацетилаз различных изоформ и применяться для лечения, в частности, онкологических и нейродегенеративных заболеваний.
2. Способ получения производных 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-онов общей формулы
Figure 00000024
,
где R1 представляет собой галоген, ОМе,
R2 представляет собой водород, ОМе,
n=5, 6,
осуществляемый по следующей схеме: раствор производных 2-аминобензгидроксамовой кислоты, например, 2-амино-5-бром-N-гидроксибензамида или 2-амино-4,5-диметокси-N-гидроксибензамида, в пятикратном весовом избытке муравьиной кислоты кипятят в течение 4-6 часов, затем реакционную массу выливают в смесь воды со льдом, подщелачивают до рН 7 и отфильтровывают выпавший осадок производного 3-гидроксихиназолина, который затем обрабатывают алкилирующим агентом, метил 6-бромгексаноатом или метил 7-бромгептаноатом, в диметилформамиде в присутствии карбоната калия при мольном соотношении производного 3-гидроксихиназолина к алкилирующему агенту и карбонату калия соответственно равном 1:1,1:1, перемешивают при комнатной температуре в течение 4-6 часов, после чего полученный продукт алкилирования высаживают добавлением воды, отфильтровывают, промывают водой, высушивают, затем подвергают аминолизу 4-кратным мольным избытком гидроксиламина в безводном метаноле, осуществляемому при комнатной температуре в течение 20-26 часов до образования целевого продукта, выделяемого фильтрацией с последующей промывкой серным эфиром.
3. Способ получения по п. 2, осуществляемый с использованием 2 эквивалентов 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (DBU) на стадии аминолиза гидроксиламином.
RU2020121125A 2020-06-25 2020-06-25 Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения RU2740503C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020121125A RU2740503C1 (ru) 2020-06-25 2020-06-25 Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020121125A RU2740503C1 (ru) 2020-06-25 2020-06-25 Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2740503C1 true RU2740503C1 (ru) 2021-01-14

Family

ID=74183828

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020121125A RU2740503C1 (ru) 2020-06-25 2020-06-25 Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2740503C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2802463C1 (ru) * 2022-08-12 2023-08-29 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) Гидроксамовые кислоты, производные 4-аминохиназолина, обладающие противоопухолевой активностью

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2507198C1 (ru) * 2012-09-10 2014-02-20 Владимир Иванович Петров Производные хиназолина, обладающие ноотропной и антигипоксической активностью
RU2622638C1 (ru) * 2016-07-14 2017-06-19 Владимир Иванович Петров Производные хиназолин-4(3н)-она, обладающие нейро- и кардиопротекторной активностью

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2507198C1 (ru) * 2012-09-10 2014-02-20 Владимир Иванович Петров Производные хиназолина, обладающие ноотропной и антигипоксической активностью
RU2622638C1 (ru) * 2016-07-14 2017-06-19 Владимир Иванович Петров Производные хиназолин-4(3н)-она, обладающие нейро- и кардиопротекторной активностью

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.V. KOLOTAEV et al., Synthesis of new quinazoline-containing hydroxamic acids as potential HDAC/VEGFR inhibitors. Unusual rearrangements with pyrrolidone ring opening and dehydration of 3-N-hydroxyquinazoline fragment containing tetracycles, TETRAHEDRON LETTERS, 2019, V.60, N.51, 151315. *
М.А. САМОТРУЕВА и др., Синтез и иммунотропная активность карбонильных производных хиназолин-4(3H)-она, ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016, Т. 50, 6, c.12-14. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2802463C1 (ru) * 2022-08-12 2023-08-29 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) Гидроксамовые кислоты, производные 4-аминохиназолина, обладающие противоопухолевой активностью

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2308441T3 (es) Compuestos de imidazol para el tratamiento de trastornos neurodegenerativos.
RU2276140C2 (ru) Производные тетрагидропиридина и фармацевтическая композиция на их основе
ES2929200T3 (es) Tienopirroles sustituidos como inhibidores de PAD4
BG107889A (bg) Тетралонови производни като антитуморни средства
WO2010048477A2 (en) Improved process for preparation of coupled products from 4-amino-3-cyanoquinolines using stabilized intermediates
EA021838B1 (ru) Производные 2,5-пиперазиндиона в качестве ингибиторов apaf-1
KR20150000901A (ko) 히스톤 탈아세틸효소(hdacs) 억제제
KR20190016516A (ko) 페닐 프로판아미드 유도체와 이를 제조하는 방법, 및 이를 약학적으로 사용하는 방법
KR20080004500A (ko) 모르피난 유도체의 결정 및 그 제조법
CN110143925B (zh) 乙内酰脲异羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶6亚型选择性抑制剂及制备方法和应用
CN114716441A (zh) 新冠治疗药物帕罗韦德中的杂质化合物a及其制法及应用
CN114685382A (zh) 具有HDACs抑制活性的喹唑啉-4-胺衍生物及其制备方法与用途
NZ577293A (en) A new method for preparing 4,4'-(1-methyl-1,2-ethandiyl)-bis-(2,6-piperazinedione)
RU2740503C1 (ru) Производные 3-гидроксихиназолин-4(3Н)-она в качестве ингибиторов гистондеацетилазы и способ их получения
RU2722694C1 (ru) Способ получения N-((гидроксиамино)-оксоалкил)-2-(хиназолин-4-иламино)-бензамидов
RU2779981C1 (ru) Гидроксамовые кислоты, производные 4-аминохиназолин-7-карбоновой кислоты как ингибиторы гистондеацетилазы и способ их получения
KR101571915B1 (ko) Ｈｄａｃ 저해제로서의 술포닐피롤의 신규 제조 방법
RU2744750C1 (ru) Способ получения гидроксамовых кислот, производных 2-арил-2,3-дигидрохиназолин-4(1Н)-онов
EP3181549A1 (en) Process for the preparation of apremilast
CN114539267A (zh) 一种吴茱萸碱衍生物及其应用
CN113735830A (zh) 一类羟肟酸衍生物及其应用
CA2856607C (en) Crystalline forms of 2-(2-methylamino-pyrimidin-4-yl)-1h-indole-5-carboxylic acid [(s)-1-carbamoyl-2-(phenyl-pyrimidin-2-yl-amino)-ethyl]-amide
EA014773B1 (ru) Способ получения эрбумина периндоприла
CN112898271B (zh) N-(吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺类化合物及其制备方法和用途
CN114728965B (zh) 吡啶并杂环类化合物、其制备方法及用途

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210329

Effective date: 20210329