RU2737378C2 - Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента - Google Patents
Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента Download PDFInfo
- Publication number
- RU2737378C2 RU2737378C2 RU2018106332A RU2018106332A RU2737378C2 RU 2737378 C2 RU2737378 C2 RU 2737378C2 RU 2018106332 A RU2018106332 A RU 2018106332A RU 2018106332 A RU2018106332 A RU 2018106332A RU 2737378 C2 RU2737378 C2 RU 2737378C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- binding
- domain
- igg1
- stradomer
- complement system
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 580
- 230000004154 complement system Effects 0.000 title claims abstract description 295
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title abstract description 63
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title abstract description 63
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 82
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title description 7
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 title 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 title 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 320
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 99
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 44
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 claims abstract description 29
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 claims abstract description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 83
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 claims description 80
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 claims description 79
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 claims description 72
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 claims description 69
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 65
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 37
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 31
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 claims description 21
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 17
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 14
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 13
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 11
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims description 9
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 56
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 44
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003592 biomimetic effect Effects 0.000 description 139
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 98
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 97
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 96
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 96
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 87
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 80
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 76
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 73
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 61
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 59
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 58
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 53
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 51
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 45
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 44
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 43
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 43
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 42
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 42
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 38
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 38
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 38
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 36
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 34
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 32
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 31
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 31
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 29
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 26
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 25
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 25
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 24
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 24
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 22
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 22
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 22
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 21
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 21
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 21
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 20
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 19
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 19
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 17
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 17
- 241000894007 species Species 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 15
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 14
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 13
- 208000000733 Paroxysmal Hemoglobinuria Diseases 0.000 description 13
- 102100036050 Phosphatidylinositol N-acetylglucosaminyltransferase subunit A Human genes 0.000 description 13
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 13
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 13
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 13
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 201000003045 paroxysmal nocturnal hemoglobinuria Diseases 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 11
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 11
- 230000008102 immune modulation Effects 0.000 description 11
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 11
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 11
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- 206010018372 Glomerulonephritis membranous Diseases 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- -1 for example Proteins 0.000 description 10
- 201000008350 membranous glomerulonephritis Diseases 0.000 description 10
- 231100000855 membranous nephropathy Toxicity 0.000 description 10
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 206010018370 Glomerulonephritis membranoproliferative Diseases 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000004451 Membranoproliferative Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 9
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 9
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 9
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 9
- 208000035913 Atypical hemolytic uremic syndrome Diseases 0.000 description 8
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 8
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 8
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 8
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 7
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 6
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 6
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 6
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 6
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 6
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 6
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 description 6
- GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N geranyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N 0.000 description 6
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 6
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 5
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 5
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 5
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 5
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 5
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 5
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 5
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 5
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 208000037908 antibody-mediated disorder Diseases 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 5
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 description 5
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 description 5
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 5
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 208000030939 Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 4
- 108010034753 Complement Membrane Attack Complex Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 4
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 4
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 208000002903 Thalassemia Diseases 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 4
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 4
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 208000010325 limbic encephalitis Diseases 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 201000008265 mesangial proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 4
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 4
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- GEXZEPOJCXVEOI-SCGRZTRASA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group NCC(O)=O.OC(=O)[C@@H]1CCCN1.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 GEXZEPOJCXVEOI-SCGRZTRASA-N 0.000 description 3
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 3
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 3
- 206010057645 Chronic Inflammatory Demyelinating Polyradiculoneuropathy Diseases 0.000 description 3
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 108010028773 Complement C5 Proteins 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 3
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 3
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 201000010743 Lambert-Eaton myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 3
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 3
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 3
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 3
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 3
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 3
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 3
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 3
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 3
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 3
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 3
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 3
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 3
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 3
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 3
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 3
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 2
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 2
- 102000012002 Aquaporin 4 Human genes 0.000 description 2
- 108010036280 Aquaporin 4 Proteins 0.000 description 2
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 2
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 2
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 2
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- 229940124292 CD20 monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 201000002829 CREST Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 2
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 2
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000009660 Cholinergic Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 2
- 102100033775 Collagen alpha-5(IV) chain Human genes 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 2
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 2
- 108010078015 Complement C3b Proteins 0.000 description 2
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 2
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000019707 Cryoglobulinemic vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 2
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 2
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 208000004332 Evans syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 description 2
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 2
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 2
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 2
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 208000031814 IgA Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000209 Isaacs syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000011200 Kawasaki disease Diseases 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 2
- 108010015372 Low Density Lipoprotein Receptor-Related Protein-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100021922 Low-density lipoprotein receptor-related protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 2
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 2
- 206010028424 Myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102000004868 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090001041 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010028885 Necrotising fasciitis Diseases 0.000 description 2
- 208000003521 Nervous System Paraneoplastic Syndromes Diseases 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 206010072359 Neuromyotonia Diseases 0.000 description 2
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000021155 Paediatric autoimmune neuropsychiatric disorders associated with streptococcal infection Diseases 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010048705 Paraneoplastic cerebellar degeneration Diseases 0.000 description 2
- 206010069587 Paraneoplastic encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 206010034620 Peripheral sensory neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 2
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 2
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 2
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 208000004732 Systemic Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 2
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 208000034841 Thrombotic Microangiopathies Diseases 0.000 description 2
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 2
- 208000035056 Tick-Borne disease Diseases 0.000 description 2
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 description 2
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 description 2
- 208000003441 Transfusion reaction Diseases 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 2
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 208000017773 candidemia Diseases 0.000 description 2
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 2
- 206010061811 demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 2
- 208000001031 fetal erythroblastosis Diseases 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 201000005206 focal segmental glomerulosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 231100000852 glomerular disease Toxicity 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 2
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 201000008319 inclusion body myositis Diseases 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000003367 kinetic assay Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 201000011649 lymphoblastic lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 2
- 210000003584 mesangial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 2
- 208000001725 mucocutaneous lymph node syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001538 myasthenic effect Effects 0.000 description 2
- 201000007970 necrotizing fasciitis Diseases 0.000 description 2
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 2
- 229940116176 remicade Drugs 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 2
- 201000005572 sensory peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 2
- 201000005671 spondyloarthropathy Diseases 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 2
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 2
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L (2-dodecoxy-2-oxoethyl)-[6-[(2-dodecoxy-2-oxoethyl)-dimethylazaniumyl]hexyl]-dimethylazanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].CCCCCCCCCCCCOC(=O)C[N+](C)(C)CCCCCC[N+](C)(C)CC(=O)OCCCCCCCCCCCC XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 1
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 description 1
- NDAUXUAQIAJITI-LBPRGKRZSA-N (R)-salbutamol Chemical compound CC(C)(C)NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- RMTXUPIIESNLPW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroxy-3-(pentadeca-8,11-dienyl)benzene Natural products CCCC=CCC=CCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O RMTXUPIIESNLPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QARRXYBJLBIVAK-UEMSJJPVSA-N 3-[(8e,11e)-pentadeca-8,11-dienyl]benzene-1,2-diol;3-[(8e,11e)-pentadeca-8,11,14-trienyl]benzene-1,2-diol;3-[(8e,11e,13e)-pentadeca-8,11,13-trienyl]benzene-1,2-diol;3-[(e)-pentadec-8-enyl]benzene-1,2-diol;3-pentadecylbenzene-1,2-diol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.CCCCCC\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.CCC\C=C\C\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.C\C=C\C=C\C\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.OC1=CC=CC(CCCCCCC\C=C\C\C=C\CC=C)=C1O QARRXYBJLBIVAK-UEMSJJPVSA-N 0.000 description 1
- IYROWZYPEIMDDN-UHFFFAOYSA-N 3-n-pentadec-8,11,13-trienyl catechol Natural products CC=CC=CCC=CCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O IYROWZYPEIMDDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethyl-1-[3-(2,4,5-trichlorophenoxy)propoxy]-1,6-dihydro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound CC1(C)N=C(N)N=C(N)N1OCCCOC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 9-anthroic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=CC2=C1 XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003678 AMPA Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000078 AMPA Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000015957 Acquired Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010000890 Acute myelomonocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011452 Adrenoleukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 101100107610 Arabidopsis thaliana ABCF4 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010055128 Autoimmune neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 206010050245 Autoimmune thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010061666 Autonomic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000606126 Bacteroidaceae Species 0.000 description 1
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000023665 Barrett oesophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 102100030802 Beta-2-glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000218645 Cedrus Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 201000009047 Chordoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 description 1
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 1
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 1
- 102100040499 Contactin-associated protein-like 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 208000009798 Craniopharyngioma Diseases 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 206010063075 Cryptogenic cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical group CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010037897 DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin Proteins 0.000 description 1
- 206010011903 Deafness traumatic Diseases 0.000 description 1
- 102100035784 Decorin Human genes 0.000 description 1
- 108090000738 Decorin Proteins 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 108010055622 Dermatophagoides farinae antigen f 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 201000003066 Diffuse Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000024134 Diffuse cutaneous systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102100023431 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Human genes 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 206010014489 Elliptocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 1
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 108010021470 Fc gamma receptor IIC Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 208000028387 Felty syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 208000025499 G6PD deficiency Diseases 0.000 description 1
- 101710087459 Gamma-gliadin Proteins 0.000 description 1
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002966 Giant Cell Tumor of Bone Diseases 0.000 description 1
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 241001336711 Glomera <orchid> Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 208000006050 Hemangiopericytoma Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 description 1
- 208000001825 Hereditary elliptocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102100022132 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit gamma Human genes 0.000 description 1
- 108091010847 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000749877 Homo sapiens Contactin-associated protein-like 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000685877 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020631 Hypergammaglobulinaemia benign monoclonal Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000028622 Immune thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010021750 Infantile Spasms Diseases 0.000 description 1
- 208000035899 Infantile spasms syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000006877 Insect Bites and Stings Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 1
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 102100034870 Kallikrein-8 Human genes 0.000 description 1
- 101710176225 Kallikrein-8 Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 201000005099 Langerhans cell histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000589246 Legionellaceae Species 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006792 Lennox-Gastaut syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010024227 Lepromatous leprosy Diseases 0.000 description 1
- 201000003088 Limited Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000024140 Limited cutaneous systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102100029206 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010058143 Lupus vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007054 Medullary Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000009030 Member 1 Subfamily D ATP Binding Cassette Transporter Human genes 0.000 description 1
- 108010049137 Member 1 Subfamily D ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 206010060880 Monoclonal gammopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000017281 Morvan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 101001038974 Mycobacterium leprae (strain TN) Nucleoid-associated protein Lsr2 Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000003926 Myelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033835 Myelomonocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010028570 Myelopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 102000034570 NR1 subfamily Human genes 0.000 description 1
- 108020001305 NR1 subfamily Proteins 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000341511 Nematodes Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 1
- 102000019315 Nicotinic acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108050006807 Nicotinic acetylcholine receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 208000002946 Noise-Induced Hearing Loss Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 1
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- QSLJIVKCVHQPLV-PEMPUTJUSA-N Oxandrin Chemical compound C([C@@H]1CC2)C(=O)OC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@](C)(O)[C@@]2(C)CC1 QSLJIVKCVHQPLV-PEMPUTJUSA-N 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100026918 Phospholipase A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000007641 Pinealoma Diseases 0.000 description 1
- 206010035669 Pneumonia aspiration Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 208000009052 Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000033826 Promyelocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108700014121 Pyruvate Kinase Deficiency of Red Cells Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 206010071141 Rasmussen encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 208000004160 Rasmussen subacute encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101100068851 Rattus norvegicus Glra1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000003782 Raynaud disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 206010050455 Refractoriness to platelet transfusion Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010038540 Renal tubular necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 201000007981 Reye syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010039207 Rocky Mountain Spotted Fever Diseases 0.000 description 1
- 241001303601 Rosacea Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 101100068078 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GCN4 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000010208 Seminoma Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000037549 Shiga toxin-associated hemolytic uremic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010016797 Sickle Hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006045 Spondylarthropathies Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010042135 Stomatitis necrotising Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000194018 Streptococcaceae Species 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 241000620457 Telestes souffia Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003911 Thyrotropin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000253 Thyrotropin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004012 Tofacitinib Substances 0.000 description 1
- 102100032120 Toll/interleukin-1 receptor domain-containing adapter protein Human genes 0.000 description 1
- 241000159241 Toxicodendron Species 0.000 description 1
- 241000159243 Toxicodendron radicans Species 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 241000869417 Trematodes Species 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- 241000224526 Trichomonas Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N Tyramine Natural products NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026838 U1 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 201000006791 West syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000027207 Whipple disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003697 abatacept Drugs 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021917 activation of membrane attack complex Effects 0.000 description 1
- 208000026784 acute myeloblastic leukemia with maturation Diseases 0.000 description 1
- 208000011912 acute myelomonocytic leukemia M4 Diseases 0.000 description 1
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N albuterol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037927 alloimmune thrombocytopaenia Diseases 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003356 anti-rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 201000009807 aspiration pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 229960003270 belimumab Drugs 0.000 description 1
- 108010023562 beta 2-Glycoprotein I Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 201000007180 bile duct carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 description 1
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 208000007287 cheilitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 210000000860 cochlear nerve Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010062119 complement 1q receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000033815 complement binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091009760 complement binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013632 covalent dimer Substances 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 208000002445 cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024389 cytopenia Diseases 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 201000002893 dermoid cyst of ovary Diseases 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 229960000284 efalizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 230000001037 epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037828 epithelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 229960004945 etoricoxib Drugs 0.000 description 1
- MNJVRJDLRVPLFE-UHFFFAOYSA-N etoricoxib Chemical compound C1=NC(C)=CC=C1C1=NC=C(Cl)C=C1C1=CC=C(S(C)(=O)=O)C=C1 MNJVRJDLRVPLFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 208000003816 familial cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002714 fluticasone Drugs 0.000 description 1
- MGNNYOODZCAHBA-GQKYHHCASA-N fluticasone Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@@H](C)[C@@](C(=O)SCF)(O)[C@@]2(C)C[C@@H]1O MGNNYOODZCAHBA-GQKYHHCASA-N 0.000 description 1
- 231100000854 focal segmental glomerulosclerosis Toxicity 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229950005309 fostamatinib Drugs 0.000 description 1
- GKDRMWXFWHEQQT-UHFFFAOYSA-N fostamatinib Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(NC=2N=C(NC=3N=C4N(COP(O)(O)=O)C(=O)C(C)(C)OC4=CC=3)C(F)=CN=2)=C1 GKDRMWXFWHEQQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000009454 functional inhibition Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000011223 gene expression profiling Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000005086 glomerual capillary Anatomy 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 208000008605 glucosephosphate dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000002344 gold compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002222 hemangioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000009601 hereditary spherocytosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000008298 histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 1
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000009177 immunoglobulin therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 231100000268 induced nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 208000037799 influenza C Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002519 isoleucine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000005067 joint tissue Anatomy 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 1
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229950008204 levosalbutamol Drugs 0.000 description 1
- 230000002197 limbic effect Effects 0.000 description 1
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000037829 lymphangioendotheliosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012804 lymphangiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 201000000564 macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000005857 malignant hypertension Diseases 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008590 mechanical hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 229960005108 mepolizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 description 1
- DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N minocycline Chemical compound C([C@H]1C2)C3=C(N(C)C)C=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N 0.000 description 1
- 229960001664 mometasone Drugs 0.000 description 1
- QLIIKPVHVRXHRI-CXSFZGCWSA-N mometasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(Cl)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CCl)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O QLIIKPVHVRXHRI-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 201000005328 monoclonal gammopathy of uncertain significance Diseases 0.000 description 1
- 230000003232 mucoadhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 1
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001611 myxosarcoma Diseases 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003535 nephritogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009925 nephrosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000009928 nephrosis Diseases 0.000 description 1
- 231100001027 nephrosis Toxicity 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029974 neurofibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 201000008585 noma Diseases 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 230000000010 osteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000005368 osteomalacia Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000004971 ovarian teratoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960000464 oxandrolone Drugs 0.000 description 1
- 229960000402 palivizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 208000004019 papillary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 208000030940 penile carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008174 penis carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 1
- 201000002628 peritoneum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 210000001986 peyer's patch Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 208000024724 pineal body neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004123 pineal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000557 podocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000001061 polyostotic fibrous dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000008171 proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 208000020615 rectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940041666 rectal gel Drugs 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 229940100618 rectal suppository Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 201000004700 rosacea Diseases 0.000 description 1
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 description 1
- 201000003804 salivary gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 201000008407 sebaceous adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000007321 sebaceous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000022465 secondary glomerular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004296 sodium metabisulphite Substances 0.000 description 1
- NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M sodium polyacrylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C=C NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 201000010965 sweat gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 201000003067 thrombocytopenia due to platelet alloimmunization Diseases 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000016523 tick-borne infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960001350 tofacitinib Drugs 0.000 description 1
- UJLAWZDWDVHWOW-YPMHNXCESA-N tofacitinib Chemical compound C[C@@H]1CCN(C(=O)CC#N)C[C@@H]1N(C)C1=NC=NC2=C1C=CN2 UJLAWZDWDVHWOW-YPMHNXCESA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 description 1
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O tyraminium Chemical compound [NH3+]CCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 108010064245 urinary gonadotropin fragment Proteins 0.000 description 1
- DQTMTQZSOJMZSF-UHFFFAOYSA-N urushiol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O DQTMTQZSOJMZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003824 ustekinumab Drugs 0.000 description 1
- 208000012991 uterine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 229950000815 veltuzumab Drugs 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантным мультимеризованным формам Fc иммуноглобулина, и может быть использовано в медицине в терапии нефрита, артрита и серповидно-клеточной анемии. Гибридные белки существуют в виде гомодимерных и высокоупорядоченных мультимерных фракций, называемых страдомерами. Пептидный гомодимер состоит из двух идентичных мономеров, при этом каждый мономер содержит в направлении от N- к C-концу: (а) лидерную последовательность, (b) по меньшей мере один домен Fc IgG1, содержащий шарнирную область IgG1, домен СН2 IgG1 и домен IgG3, и (c) по меньшей мере один домен мультимеризации шарнирной области IgG2. При этом домен Fc IgG1 характеризуется полиморфизмом EEM или DEL IgG1 человека, тремя точечными мутациями S267E, H268F и S324T и дополнительными точечными мутациями, выбранными из N297A, или G236R, или G236R и E233P последовательности домена Fc IgG1 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3. Изобретение обеспечивает получение гибридных белков, способных к мультимеризации и преимущественному связыванию с компонентом системы комплемента C1q. 5 н. и 13 з.п. ф-лы, 63 ил., 12 табл., 14 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/196478, поданной 24 июля 2015 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
ОПИСАНИЕ ТЕКСТОВОГО ФАЙЛА, ПРЕДОСТАВЛЕННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ
[0002] Содержимое текстового файла, предоставленного в электронном виде, полностью включено в настоящий документ посредством ссылки: копия перечня последовательностей в машиночитаемом формате (название файла: GLIK_015_01WO_SeqList_ST25.txt, дата регистрации: 22 июля 2016 года, размер файла 193 килобайта).
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0003] Настоящее изобретение в целом относится к областям иммунологии, аутоиммунитета, воспаления и иммунологии опухолей. Более конкретно, настоящее изобретение относится к биологически активным молекулам биомиметиков, содержащим домены Fc иммуноглобулинов, которые проявляют измененное связывание с рецептором Fc и сохраненное или усиленное связывание с элементами системы комплемента, к композициям, содержащим указанные биомиметики, а также к способам получения и применения указанных биомиметиков. Настоящее изобретение также относится к лечению или предотвращению патологических состояний, таких как опосредованные комплементом заболевания, аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, заболевания крови и различные виды рака.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0004] Система комплемента является частью иммунной системы, которая вовлечена в лизис клеток-мишеней и фагоцитоз антигенов. В настоящее время известны три основных пути комплемента: классический путь, альтернативный путь и путь связывания лектина. Классический путь системы комплемента активируется при связывании белка C1q с одной или несколькими молекулами интактного иммуноглобулина IgM или по меньшей мере двумя молекулами интактного иммуноглобулина IgG1, IgG2 или IgG3 (Janeway’s Immunobiology, 8th Ed., Murphy ed., Garland Science, 2012, Chapter 10). Активация системы комплемента приводит к комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC). Было показано, что изменения в области Fc моноклональных антител повышают или снижают аффинность связывания комплемента (Moore et al., MAbs. 2(2): 181-9 (2010). Однако указанная работа была выполнена применительно к моноклональному антителу и поэтому зависела, по крайней мере, частично, от специфичности Fab в отношении мишени, также в ней не была рассмотрена авидность связывания.
[0005] Чрезмерная активация и/или осаждение комплемента могут оказывать вредное влияние и могут быть связаны со многими заболеваниями, включая миастению гравис, гемолитический уремический синдром (HUS) и пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH). В мозге субъектов пожилого возраста были обнаружены существенно повышенные концентрации компонента системы комплемента C1q (Stephan et al., J. Neuroscience, 14 August 2013, 33(33): 13460-13474). Система комплемента существенно вовлечена в патофизиологию миастении гравис, обусловленной выработкой антител к рецептору ацетилхолина (Tűzűn and Christadoss, Autoimmun Rev. 2013 Jul;12(9):904-11. doi: 10.1016/j.autrev.2013.03.003). Ряд результатов иммунологических, генетических исследований и биохимических исследований белков указывают на то, что система комплемента играет важную роль в этиологии возрастной дегенерации желтого пятна (Weber et al., Dtsch Arztebl Int., 2014 Feb; 111(8): 133-138. doi:10.3238/arztebl.2014.0133). Существуют убедительные доказательства того, что классический и альтернативный пути системы комплемента патологически активируются при ревматоидном артрите, а также в животных моделях ревматоидного артрита (Okroj et al., Ann Med. 2007;39(7):517-30).
[0006] Классический, альтернативный и лектиновый пути активируются последовательно, и все три пути вовлечены в системное заболевание. Активация системы комплемента связана с патофизиологией системных аутоиммунных заболеваний. Давно было установлено, что активация посредством классического пути вовлечена в патофизиологию заболеваний, обусловленных иммунными комплексами, таких как криоглобулинемический васкулит и системная красная волчанка (Chen et al., Journal of Autoimmunity, 2009; doi:10.1016/j.jaut.2009.11.014). Активация системы комплемента посредством альтернативного и лектинового путей обнаруживается у пациентов с нефритом, вызванным пурпурой Шенлейна-Геноха, и обусловленной IgA нефропатией (Hisano et al., Am J Kidney Dis 2005;45:295e302). Важность системы комплемента при мембранозной нефропатии, одной из наиболее распространенных причин взрослого нефротического синдрома, хорошо описана. Мембранозная нефропатия характеризуется клубочковыми субэпителиальными иммунными отложениями. Исследования нефрита Хеймана, экспериментальной модели мембранозной нефропатии, показали, что эти отложения локально активируют систему комплемента с последующим повреждением подоцитов, что в результате приводит к реорганизации цитоскелета, потере щелевых диафрагм и протеинурии (Beck et al., The Role of Complement in Membranous Nephropathy. Semin Nephrol 2013 Nov;33(6):531-42).
[0007] Активация системы комплемента чрезвычайно сложный процесс, при этом даже спустя много десятилетий после того как, согласно представлениям, механизм данного процесса был полностью установлен, все еще продолжают обнаруживать новые компоненты каскада. Первым этапом в каскаде классического пути активации системы комплемента является связывание C1q с антителом. (Nature. 1988 Apr 21;332(6166):738-40; The binding site for C1q on IgG. Duncan AR, Winter G.).
[0008] Связывание неагрегированного антитела с C3 или C3b, по-видимому, происходит без активации комплемента в плазме крови, но, как полагают, поддерживается в основном комплексами продукта активации C3b2 с IgG (Mol Immunol. 2006 Jan;43(1-2):2-12. Complement amplification revisited. Lutz HU, Jelezarova E). Однако во время активации альтернативного пути системы комплемента иммунными агрегатами, содержащими антитело IgG, альфа-цепь C3b может ковалентно связываться в одном или двух местах с частью Fd тяжелой цепи IgG (т.е. с частью тяжелой цепи, которая входит в состав фрагмента Fab) (Biochem J. May 1, 1981; 195(2): 471-480). The binding of complement component C3 to antibody-antigen aggregates after activation of the alternative pathway in human serum. K J Gadd and K B Reid)). Традиционно, компоненты системы комплемента C4a, C3a, C5a и комплекс атаки мембраны, как правило, называли продуктами расщепления комплемента или анафилотоксинами. Однако данные, представленные в литературных источниках, ясно указывают на то, что в некоторых случаях C4a (Xie et al., International Immunopharmacology 12 (2012) 158-168), C3a (Coulthard and Woodruff, J Immunol 2015; 194:3542-3548) и C5a (Nishise et al., Therapeutic Apheresis and Dialysis 13(6):509-514 и Gerard et al., J. Biol Chem. 280(48):39677-39680, December 2, 2005) являются противовоспалительными и не связаны с распространением каскада.
[0009] Преобладающим терапевтическим средством, доступным в настоящее время коммерчески для лечения заболеваний, опосредованных комплементом, является антитело к C5, экулизумаб, которое связывается с C5 и ингибирует его расщепление на C5a и C5b-9, частично ингибируя протекание нисходящих реакций каскада системы комплемента и связанные с ними воспалительные и тромботические реакции. Однако указанное антитело не оказывает прямого воздействия на предшествующие реакции с участием компонентов системы комплемента, например, C1q, C1R, C1S, C1-подобного комплекса, или на C4, C4a, C4b, C2, C1, C4b2, C2b, C4b2a, C3, C3a или C3b, которые являются компонентами лектинового пути, классического пути и альтернативного пути, реакции которых предшествуют реакциям с участием компонента C5 системы комплемента, и которые могут быть предпочтительными мишенями для лечения заболевания. Напротив, нормальные иммуноглобулины и моноклональные антитела связываются с C1q и другими мишенями, которые вовлечены в реакции, предшествующие реакциям с участием С5. Следовательно, в данной области техники существует потребность в улучшенных способах лечения заболеваний, опосредованных комплементом, посредством связывания компонентов каскада системы комплемента, участвующих в начальных реакциях активации, и последующей модуляции каскада системы комплемента. В настоящее время существует дополнительная потребность в усовершенствованных способах лечения заболеваний, опосредованных комплементом, с применением соединения, содержащего область Fc иммуноглобулина, которая связывается с гексамерным C1q с авидностью, а не только с аффинностью, которая при этом не связывается со значительной авидностью с низкоаффинными рецепторами Fc.
[00010] Нативная область Fc иммуноглобулина IgG1 связывается в природных условиях более чем с десятком лигандов, одним из которых является фактор системы комплемента C1q. Другие лиганды области Fc IgG1 включают, но не ограничиваются ими, канонические рецепторы Fc, неонатальный рецептор FcRn, железо, белок A, FcRL1-6, TRIM21 и DC-SIGN. Растворимый гомодимерный IgG1 естественным образом связывается с C1q с аффинностью, которая является слишком низкой, чтобы быть функциональной (CA Diebolder et. al. Complement Is Activated by IgG Hexamers Assembled at the Cell Surface. Science Mar 2014; 343(6176):1260-1263), и с высокой скоростью диссоциации (Gaboriaud et. al. The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties. J. Biol. Chem. 2003 Nov 21;278(47):46974-82). Однако в том случае, если IgG1 связан с антигеном-мишенью посредством своего Fab, происходит конформационное изменение (M. Oda et. al. Evidence of allosteric conformational changes in the antibody constant region upon antigen binding. Int. Immunol. (2003) 15 (3): 417-426), и аффинность связывания с C1q увеличивается.
[00011] Кроме того, поскольку IgG1 накапливается в месте скопления антигена, множество областей Fc иммуноглобулина могут быть представлены C1q, что приводит к более авидному связыванию в месте связывания антигена. Поскольку C1q является гексамером с шестью сайтами связывания Fc (KB Reid. Chemistry and molecular genetics of C1q. Behring Inst Mitt. 1989 Jul;(84):8-19), то связывание агрегированного IgG1 является высокоавидным (Diebolder, 2014). Следовательно, прочно связанный IgG1 связывается с C1q не только с аффинностью гомодимерного иммуноглобулина, но также с авидностью, что приводит к комплемент-зависимой цитотоксичности, в дополнение к доступности для сшивания рецепторов Fc, что в результате приводит к антитело-зависимой цитотоксичности (ADCC) и антитело-зависимому фагоцитозу клеток (ADCP). Полученный функциональный ответ связывания кластеров области Fc, связанной с гексамерным C1q, представляет собой сигнал активации классического пути системы комплемента с образованием C1qC1rC1s и расщеплением C4 на C4a и C4b. Растворимые агрегаты IgG1, которые обнаруживаются в природных условиях в очень низких концентрациях (Soltis and Hasz. Spontaneous aggregation of native immunoglobulins in hypoalbuminemic serum. J Clin Lab Immunol. 1982 Oct;9(1):13-7), и в объединенном внутривенном иммуноглобулине человека (IVIG) (A. Herrera et. al. Immunoglobulin composition of three commercially available intravenous immunoglobulin preparations. J. All Clin Immunol, 84(1):556-561), представляют собой поливалентную область Fc IgG1, не связанную с ее лигандами, включая низкоаффинные рецепторы Fc и C1q. Растворимые (т.е. не связанные с клеткой) агрегаты IgG1, следовательно, способны к авидному связыванию с гексамерным C1q. Связывание растворимого C1q с растворимыми агрегатами IgG1 (т.е. не связанными с клеткой) может ингибировать последующую активацию каскада системы комплемента, включая ингибирование CDC.
[00012] Объединенный IVIG человека, который объединен из образцов десятков тысяч доноров крови, содержит очень небольшую и переменную долю (0,1-5%) агрегатов IgG1, которые имитируют природное действие растворимых агрегатов нативного IgG1. IVIG связывается с C1q и, как было показано, может быть использован в клинических условиях при опосредованных комплементом заболеваниях, таких как миастения гравис. Однако применение IVIG связано со всеми сопутствующими рисками, которые опосредованы тем, что он является продуктом крови, не вырабатывается рекомбинантно, имеет слабо контролируемые количества агрегатов IgG1 и состоит в основном из неактивных фракций для лечения заболеваний, опосредованных комплементом. Более того, лечение с применением IVIG также часто приводит к нежелательной провоспалительной реакции за счет связывания с низкоаффинными рецепторами Fc (Andresen et. al. Product equivalence study comparing various human immunoglobulin-G formulations. J Clin Pharmacol 2000; 40:722-730 и Ghielmetti et. al. Gene expression profiling of the effects of intravenous immunoglobulin in human whole blood. Mol Immunol 43 (2006) 939-949). Существует потребность в новых, единообразных терапевтических препаратах, полученных с помощью рекомбинантных способов, которые имитируют природный процесс, характерный для агрегированной растворимой области Fc IgG1, действующей в качестве акцептора системы комплемента, посредством авидного связывания с C1q, избегая при этом нежелательных провоспалительных реакций благодаря преимущественному связыванию с компонентами системы комплемента, по сравнению с другими природными лигандами, включая низкоаффинные рецепторы Fc.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00013] Настоящее изобретение относится к биологически активным гибридным белковым молекулам биомиметиков, содержащим один или более доменов Fc иммуноглобулина человека и один или более доменов мультимеризации, причем домен Fc гибридного белка содержит одну или более точечных мутаций. Согласно одному аспекту настоящего изобретения молекулы биомиметиков предпочтительно связываются с одним или более компонентами системы комплемента, по сравнению с нормальной неагрегированной областью Fc иммуноглобулина человека. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предпочтительное связывание с одним или более компонентами системы комплемента достигается посредством домена Fc биомиметика, обладающего сниженной способностью к связыванию с каноническими рецепторами Fc, по сравнению с нормальной неагрегированной областью Fc иммуноглобулина или, в другом варианте, нормальной агрегированной областью Fc иммуноглобулина. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биологически активные гибридные белковые молекулы биомиметиков содержат страдомерные блоки. В настоящем изобретении предложены композиции, содержащие биологически активные гибридные белковые молекулы биомиметиков и способы их применения.
[00014] Согласно одному аспекту в настоящем изобретении предложен страдомерный блок, содержащий по меньшей мере один домен Fc IgG1, содержащий одну или более точечных мутаций, соответствующих по меньшей мере одному из положений 267, 268 и/или 324 домена Fc IgG1. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок также содержит по меньшей мере один домен мультимеризации. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 267 мутирована с заменой серина (Ser, S) на любую другую аминокислоту. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 267 мутирована с заменой на глутаминовую кислоту (Glu; E). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 268 мутирована с заменой гистидина (His; H) на любую другую аминокислоту. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 268 мутирована с заменой на фенилаланин (Phe; F). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 324 мутирована с заменой серина на любую другую аминокислоту. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 324 мутирована с заменой на треонин (Thr; T). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации S267E, H268F и S324T.
[00015] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок содержит домен Fc IgG1, содержащий аминокислотную последовательность, содержащую точечные мутации в положениях 267, 268 и/или 324 и дополнительно содержащую по меньшей мере одну точечную мутацию в положении 233 и/или 234, и/или 235, и/или 236, и/или 238, и/или 265, и/или 297, и/или 299, и/или 328. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 297 мутирована с заменой аспарагина (Asn; N) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 297 мутирована с заменой на аланин (Ala; A). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 299 мутирована с заменой треонина (T) на любую другую аминокислоту, за исключением серина или цистеина. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 299 мутирована с заменой на аланин (Ala; A). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 238 мутирована с заменой пролина (Pro; P) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 238 мутирована с заменой на аспарагиновую кислоту (Asp; D). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 233 мутирована с заменой глутаминовой кислоты (Glu; E) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 233 мутирована с заменой на пролин (Pro; P). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 236 мутирована с заменой глицина (Gly; G) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 236 мутирована с заменой на аргинин (Arg; R). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 236 удалена. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 234 мутирована с заменой лейцина (Leu; L) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 234 мутирована с заменой на валин (Val; V) или аланин (Ala; A). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 235 мутирована с заменой лейцина (Leu; L) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 235 мутирована с заменой на аланин (Ala; A). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 265 мутирована с заменой аспарагиновой кислоты (Asp; D) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 265 мутирована с заменой на аланин (Ala; A). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 265 мутирована с заменой на триптофан (Trp; W). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 297 мутирована с заменой аспарагина (Asn; N) на любую другую аминокислоту. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 297 мутирована с заменой на аланин (Ala; A). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 297 мутирована с заменой на глутамин (Gln; Q). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 299 мутирована с заменой треонина (Thr; T) на любую другую аминокислоту, за исключением серина (Ser; S) или цистеина (Cys; C). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 299 мутирована с заменой на аланин. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 298 мутирована с заменой на любую аминокислоту, за исключением пролина. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 328 мутирована с заменой лейцина (Leu; L) на любую другую аминокислоту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения аминокислота в положении 328 мутирована с заменой на фенилаланин (Phe; F).
[00016] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 267, 268, 297 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации S267E, H268F, N297A и S324T.
[00017] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 234, 235, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации L234V, L235A, S267E, H268F и S324T.
[00018] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 234, 235, 267, 268, 297 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации L234V, L235A, S267E, H268F, N297A и S324T.
[00019] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 234, 235, 267, 268 и 324 и делецию аминокислоты в положении 236. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, L234A, L235A, S267E, H268F и S324T и делецию аминокислоты в положении 236.
[00020] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 234, 235, 267, 268, 297 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, L234A, L235A, S267E, H268F, N297A и S324T.
[00021] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 265, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации D265A, S267E, H268F и S324T.
[00022] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 238, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации P238D, S267E, H268F и S324T.
[00023] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 238, 267, 268, 297 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации P238D, S267E, H268F, N297A и S324T.
[00024] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 236, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации G236R, S267E, H268F и S324T.
[00025] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 236, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, G236R, S267E, H268F и S324T.
[00026] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 236, 267, 268, 324 и 328. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, G236R, S267E, H268F, S324T и L328F.
[00027] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 238, 265, 267, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации P238D, D265G, S267E, H268F и S324T. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации P238D, D265W, S267E, H268F и S324T.
[00028] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 267, 268, 324 и 328. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации S267E, H268F, S324T и L328F.
[00029] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 234, 235, 267, 268, 297, 324 и 328 и делецию аминокислоты в положении 236. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, L234V, L235A, S267E, H268F, N297A, S324T и L328F и делецию аминокислоты в положении 236.
[00030] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 268 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, H268F и S324T.
[00031] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 268, 297 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T и точечную мутацию в положении 297, отличную от N297A или N297Q.
[00032] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечную мутацию в положениях 233, 268, 299 и 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T и точечную мутацию в положении 299, отличную от T299S и T299C. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T и T299A.
[00033] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 268, 324 и 267. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T и точечную мутацию в положении 267, отличную от точечной мутации S267E.
[00034] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 268, 324, 267 и 297. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T, точечную мутацию в положении 267, отличную от точечной мутации S267E, и точечную мутацию в положении 297, отличную от точечной мутации N297A и N297Q. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит мутации в положениях 233, 268, 324, 267 и 297. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T, точечную мутацию в положении 267, отличную от точечной мутации S267E, точечную мутацию в положении 297, отличную от точечной мутации N297A и N297Q, и точечную мутацию в положении 299, отличную от точечных мутаций T299S и T299C. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения мутация в положении 299 представляет собой T299A.
[00035] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 268, 324, 267 и 236. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T, точечную мутацию в положении 267, отличную от S267E, и точечную мутацию в положении 236, отличную от G236R.
[00036] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 268, 324, 267, 236 и 297. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T, точечную мутацию в положении 267, отличную от S267E, точечную мутацию в положении 236, отличную от G236R, и точечную мутацию в положении 297, отличную от N297A и N297Q.
[00037] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации в положениях 233, 268, 324, 267, 236 и 299, причем точечная мутация в положении 299 представляет собой точечную мутацию, отличную от T299S и T299C. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации E233P, H268F, S324T, точечную мутацию в положении 267, отличную от S267E, точечную мутацию в положении 236, отличную от G236R, и T299A.
[00038] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации по меньшей мере в одном из положений 267, 268 и/или 324 и дополнительно содержит точечную мутацию в трех или более из положений 233, 235, 236, 267, 268, 297, 299 и/или 324. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен Fc страдомерного блока содержит точечные мутации по меньшей мере в одном из положений 267, 268 и/или 324 и дополнительно содержит точечную мутацию в трех или более из положений 233, 235, отличную от L235H, 236, отличную от 236R, 267, отличную от S267E, 268, 297, отличную от N297A, или, в другом варианте, 299 и/или 324.
[00039] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер содержит домен мультимеризации, причем указанный домен мультимеризации выбран из группы, состоящей из шарнирной области IgG2, изолейциновой молнии и домена GPP, и способен мультимеризовать указанные страдомерные блоки. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен мультимеризации создает мультимеры указанных страдомерных блоков. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения мультимеры указанных страдомерных блоков представляют собой высокоупорядоченные мультимеры.
[00040] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомер содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, лидерную последовательность; домен Fc, содержащий шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1; и шарнирную область IgG2, причем страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения лидерная последовательность отщепляется при экспрессии. Следовательно, согласно другому варианту, в настоящем изобретении предложен страдомер, содержащий, в направлении от амино- к карбоксильному концу, домен Fc, содержащий шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1; и шарнирную область IgG2, причем страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10-16, 18-63 и 65-77, или ее функциональный вариант.
[00041] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомер содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, лидерную последовательность; шарнирную область IgG2; и домен Fc, содержащий шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1, причем страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения лидерная последовательность отщепляется при экспрессии. Следовательно, согласно другому варианту, в настоящем изобретении предложен страдомер, содержащий, в направлении от амино- к карбоксильному концу, шарнирную область IgG2; и домен Fc, содержащий шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1, причем указанный страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 64, или ее функциональный вариант.
[00042] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомер содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, лидерную последовательность; шарнирную область IgG2; и домен Fc, содержащий CH2 IgG1 и CH3 IgG1, причем указанный страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения лидерная последовательность отщепляется при экспрессии. Следовательно, согласно другому варианту, в настоящем изобретении предложен страдомер, содержащий, в направлении от амино- к карбоксильному концу, шарнирную область IgG2; и домен Fc, содержащий CH2 IgG1 и CH3 IgG1, причем указанный страдомер содержит одну или более точечных мутаций согласно настоящему изобретению.
[00043] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомерный блок также содержит одну или более аминокислотных линкерных последовательностей. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения линкер является расщепляемым. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения линкер является чувствительным к протеазе. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения линкер расщепляется протеазой, которая преимущественно является внутриклеточной. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения линкер расщепляется протеазой, которая преимущественно присутствует в аппарате Гольджи и эндоплазматическом ретикулуме. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения линкер расщепляется фурином. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения линкер расщепляется протеазой, которая является преимущественно органоспецифической протеазой, такой как, например, протеаза нейропсин, которая обнаруживается в мозге. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения линкер расщепляется протеазой, которая является преимущественно опухолеспецифической протеазой, такой как, например, металлопротеиназа 9 и урокиназный активатор плазминогена.
[00044] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок преимущественно связывается с комплементом, по сравнению с FcγRI, FcγRII, включая FcγRIIa и/или FcγRIIb, и/или FcγRIII. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок проявляет сниженное связывание с низкоаффинным рецептором Fcγ. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок проявляет сниженное связывание с FcγRI, FcγRII, включая FcγRIIa и/или FcγRIIb, и/или FcγRIII, по сравнению со страдомером с аналогичной структурой, который не содержит точечной мутации в одном или более положениях 267, 268 и/или 324.
[00045] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомерный блок содержит мутацию в 297, 298 или 299 и сохраняет связывание с C1q, ингибирует CDC и сохраняет связывание с FcγRI или с низкоаффинным рецептором Fcγ, включая FcγRIIa, FcγRIIb и/или FcγRIII.
[00046] Согласно одному аспекту в настоящем изобретении предложен кластерный страдомер, содержащий два или более страдомерных блоков, раскрытых в настоящем документе. Например, в некоторых вариантах, в настоящем изобретении предложен кластерный страдомер, содержащий два или более страдомерных блоков, содержащих домен Fc IgG1, содержащий аминокислотную последовательность, содержащую точечные мутации в положениях 267, 268 и/или 324. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения два или более страдомерных блоков дополнительно содержат по меньшей мере одну точечную мутацию в положении 233 и/или 234, и/или 235, и/или 236, и/или 238, и/или 265, и/или 297, и/или 299, и/или 328. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения два или более страдомерных блоков содержат делецию аминокислоты в положении 236.
[00047] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомеры, предложенные в настоящем изобретении, используют для лечения или предотвращения заболеваний и расстройств, включая, но не ограничиваясь ими, опосредованные комплементом заболевания, аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, аллергии, опосредованные B-клетками заболевания, опосредованные антителами заболевания, нарушения со стороны почек и заболевания крови.
[00048] В некоторых вариантах опосредованное антителами заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Гудпасчера; отторжения трансплантата плотного органа; нейромиелита зрительного нерва; нейромиотонии; лимбического энцефалита; синдрома фибриллярной хореи Морвана; миастении гравис; миастенического синдрома Ламберта-Итона; вегетативной невропатии; болезни Альцгеймера; атеросклероза; болезни Паркинсона; синдрома мышечной скованности или гиперэкплексии; рецидивирующего спонтанного аборта; синдрома Хьюза; системной красной волчанки; аутоиммунной мозжечковой атаксии; заболеваний соединительной ткани, включая склеродерму, синдром Шегрена; полимиозита; ревматоидного артрита; узелкового полиартериита; синдрома Тибьержа-Вейсенбаха; эндокардита; тиреоидита Хашимото; смешанного заболевания соединительной ткани; каналопатий; педиатрических аутоиммунных нейропсихиатрических расстройств, связанных со стрептококковыми инфекциями (PANDAS); клинических состояний, связанных с антителами к рецепторам N-метил-D-аспартата, в частности NR1, контактин-ассоциированному белку 2, рецепторам AMPA, GluR1/GluR2, глутаматдекарбоксилазе, рецепторам Gly-альфа-1a, рецептору ацетилхолина, VGCC типа P/Q, VGKC, MuSK, рецепторам GABAB; аквапорину-4; и пузырчатки. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения аутоиммунное заболевание представляет собой артрит.
[00049] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения опосредованное системой комплемента заболевание выбрано из группы, состоящей из миастении гравис, гемолитического уремического синдрома (HUS), атипичного гемолитического уремического синдрома (aHUS), пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH), нейромиелита зрительного нерва, опосредованного антителами отторжения аллотрансплантатов, нефропатии, включая мембранозную нефропатию и нефрит, включая мембранопролиферативный гломерулонефрит (MPGN) и волчаночный нефрит.
[00050] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения заболевание крови представляет собой анемию, такую как, серповидно-клеточные заболевания, включая гемоглобин SS, гемоглобин SC, гемоглобин Sβ0 талассемии, гемоглобин Sβ+ талассемию, гемоглобин SD и гемоглобин SE талассемию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения воспалительное заболевание представляет собой возрастную макулярную дегенерацию, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз или болезнь Паркинсона.
[00051] Согласно некоторым вариантам реализации страдомеры согласно настоящему изобретению вводят субъекту, нуждающемуся в этом. Согласно другим вариантам реализации страдомеры согласно настоящему изобретению вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, чрескожно, с помощью подкожного имплантата, или внутримышечно.
[00052] Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложены страдомеры, которые можно применять в лечении или предотвращении связанной с аутоиммунным заболеванием потери зрения или потери слуха, например, индуцированной шумом или связанной с возрастом потери слуха. Согласно другому варианту реализации в настоящем изобретении предложены страдомеры, которые можно применять в снижении воспаления или аутоиммунных реакций, связанных с имплантацией устройства, например, кохлеарного имплантата или других слуховых аппаратов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
[00053] На Фигуре 1 показано связывание страдомера GL-2045 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa или FcRn, согласно результатам измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[00054] На Фигуре 2 представлен радиальный график максимальных единиц ответа (RUмакс) для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q и ингибирования CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G997. Каждый радиальный график в этих описаниях был получен с помощью визуальной оценки кривых связывания, полученных на основании показателей интерферометрии биослоя Octet.
[00055] На Фигуре 3 представлены результаты оценки связывания страдомера G997 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa и FcRn, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00056] На Фигуре 4А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G998. На Фигуре 4B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G997 и G998.
[00057] На Фигуре 5 представлены результаты оценки связывания страдомера G998 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa и FcRn, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00058] На Фигуре 6А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G1022 и G1033. На Фигуре 6B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G1022 и G1033.
[00059] На Фигуре 7А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и универсального страдомера G1032. На Фигуре 7В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и универсального страдомера G1032.
[00060] На Фигуре 8А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и универсального страдомера G1023. На Фигуре 8В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и универсального страдомера G1023.
[00061] На Фигуре 9А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1006. На Фигуре 9В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1006.
[00062] На Фигуре 10А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1027. На Фигуре 10B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1027.
[00063] На Фигуре 11А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1003. На Фигуре 11В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1003.
[00064] На Фигуре 12А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G989. На Фигуре 12В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G989.
[00065] На Фигуре 13 представлены результаты оценки связывания страдомера G989 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa и FcRn, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00066] На Фигуре 14А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G990. На Фигуре 14В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G990.
[00067] На Фигуре 15 представлены результаты оценки связывания страдомера G990 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa и FcRn, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00068] На Фигуре 16А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G994. На Фигуре 16В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G994.
[00069] На Фигуре 17 представлены результаты оценки связывания страдомера G994 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa и FcRn, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00070] На Фигуре 18А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G996. На Фигуре 18В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G996.
[00071] На Фигуре 19 (верхний ряд панелей) представлены результаты оценки связывания страдомера G996 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa или FcRn, согласно результатам измерения с помощью интерферометрии биослоя. На Фигуре 19 (нижний ряд панелей) также представлены результаты оценки связывания страдомера G996 с FcγRIIb, FcγRIII и FcγRIV мыши.
[00072] На Фигуре 20А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1042. На Фигуре 20B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1042.
[00073] На Фигуре 21 представлены результаты оценки связывания страдомера G1042 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa и FcγRIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00074] На Фигуре 22А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1043. На Фигуре 22В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1043.
[00075] На Фигуре 23 представлены результаты оценки связывания страдомера G1043 с FcγRI, FcγRIIb, Fcγ или FcγRIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00076] На Фигуре 24А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1046. На Фигуре 24B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1046.
[00077] На Фигуре 25 представлены результаты оценки связывания страдомера G1046 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa или FcγRIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00078] На Фигуре 26А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1050. На Фигуре 26В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1050.
[00079] На Фигуре 27 представлены результаты оценки связывания страдомера G1050 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa и FcγRIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00080] На Фигуре 28А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и универсального страдомера G1049. На Фигуре 28B представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и универсального страдомера G1049.
[00081] На Фигуре 29 представлены результаты оценки связывания страдомера G1049 с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa и FcγRIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[00082] На Фигуре 30А представлен радиальный график значений RUмакс для каждого рецептора Fc, данные ИФА для оценки связывания с C1q, а также данные по ингибированию CDC для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1025. На Фигуре 30В представлен радиальный график значений RU через 300 с (RU300s) для каждого рецептора Fc для G045c и страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G1025.
[00083] На Фигуре 31A представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, исходного страдомера GL-2045, G993, G997, G998, G996 и G994 с C1q, согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА. На Фигуре 31B приведены логарифмически преобразованные данные и значения ЭК50 для каждого из исследованных страдомеров. Значения ЭК50 представлены в мкг/мл.
[00084] На Фигуре 32 представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, исходного страдомера GL-2045, G994, G996, G997 и G998 с компонентом системы комплемента С3, согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА. На верхней панели представлены логарифмически преобразованные величины поглощения и на нижней панели представлены величины поглощения без логарифмического преобразования.
[00085] На Фигуре 33 представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, исходного страдомера GL-2045, G997, G998 и G994 с компонентом системы комплемента C3b, согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА.
[00086] На Фигуре 34 представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, исходного страдомера GL-2045, G996, G997, G998 и G994 с компонентом системы комплемента C4, согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА
[00087] На Фигуре 35 представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, исходного страдомера GL-2045, G996, G997, G998 и G994 с компонентом системы комплемента C5, согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА.
[00088] На Фигурах 36А и 36B представлены последовательности полиморфных форм IgG1 человека, DEL (Фигура 36А; SEQ ID NO: 3) и EEM (Фигура 36B; SEQ ID NO: 2).
[00089] На Фигуре 37 показано значительное уменьшение протеинурии у животных, которым вводили исследуемые страдомеры, в животной модели нефрита.
[00090] На Фигурах 38А и 38В представлены результаты гистологического исследования пораженного контрольного животного, которому вводили фосфатно-солевой буфер (ФСБ), после индукции гломерулонефрита антителом к Thy 1 (Фиг. 38А), и животного, которое получило 40 мг/кг G998 (Фиг. 36B). На Фигуре 38А (G) относится к клубочкам с утолщенной базальной мембраной; (В) относится к базофильным канальцам и интерстициальным инфильтратам; и стрелка указывает на расширенные канальцы с белковой жидкостью. На Фиг. 36В представлены непораженные клубочки и канальцы у животного, которого лечили с использованием G998.
[00091] На Фигуре 39 в графической форме представлены результаты гистологического исследования тканей почек у животных, получавших ФСБ в качестве контрольной обработки (группа 2) или 40 мг/кг G0998 (группа 4).
[00092] На Фигуре 40 представлены данные о концентрации азота мочевины крови (АМК) у контрольных животных, получавших ФСБ, здоровых контрольных животных, которые не получали антитело к Thy1, и животных, которые получили G994 (40 мг/кг), G998 (40 мг/кг или 80 мг/кг) или G1033 (40 мг/кг). Значения P, представленные на графике, указаны в сравнении с пораженными контрольными животными, получавшими ФСБ.
[00093] На Фигуре 41 представлены результаты оценки протеинурии (мг/24 часа) у контрольных животных, которые получили только антитело к Fx1a, животных, которые получили антитело к Fx1a и G998 на 0-й день, и животных, которые получили антитело к Fx1a на 0-й день и G998 на 1-й день.
[00094] На Фигуре 42 представлены уровни (мкг/мл) G994, G998 или G1033 у крыс после введения однократной дозы указанного соединения в зависимости от времени.
[00095] На Фигуре 43 представлены результаты исследования активности системы комплемента в крови крыс после введения однократной дозы G994 (левая панель), G998 (средняя панель) или G1033 (правая панель).
[00096] На Фигурах 44А и 44B показана корреляция между концентрациями лекарственного препарата (мкг/мл на осях х) и активностью системы комплемента (% по оси у) для каждого из G994 (левые панели), G998 (средние панели) и G1033 (правые панели). На Фиг. 44A представлены все точки данных, собранные в исследовании для каждого страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента. На Фиг. 44 большее внимание уделено нижней части кривой (более низкие концентрации лекарственного препарата).
[00097] На Фигуре 45 представлены результаты оценки концентраций лекарственного препарата (мкг/мл) G994, G998 или G1033 у яванских макак после введения однократной дозы соединения с предпочтительным связыванием с системой комплемента в момент времени 0, согласно результатам измерения через 0, 1, 2, 4, 12, 24, 48, 72, 144, 216 и 312 часов после введения дозы.
[00098] На Фигуре 46 представлены результаты оценки активности системы комплемента (% гибели клеток) в зависимости от времени после введения однократной дозы G994 (левая панель), G998 (средняя панель) или G1033 (правая панель).
[00099] На Фигурах 47А и 47В показана корреляция между уровнем лекарственного препарата и активностью системы комплемента для каждого из испытываемых соединений в исследовании. На Фиг. 47A представлены все точки данных, собранные в ходе эксперимента, и на Фиг. 47B представлена первая часть кривой с более низкими концентрациями лекарственного препарата. Для G994 значение отрезка на оси абсцисс составляет 144 и 168 мкг/мл для 2% и 4% сыворотки. Значения R2 для корреляции составляют 0,866 и 0,835. Для G998 значение отрезка на оси абсцисс составляет 425 и 347 мкг/мл, и значения R2 составляют 0,925 и 0,743 для 2% и 4% сыворотки. Для G1033 значение отрезка на оси абсцисс составляет 346 и 379 мкг/мл со значениями R2 0,584 и 0,714.
[000100] На Фигурах 48А-G представлены гели, показывающие, что, аналогично исходному соединению GL-2045, на основании которого было сконструировано испытываемое производное соединение страдомера (G994 или G998), производные соединения страдомеров образуют мультимеры. Соединения GL-2045, G994, G1103, G1088, G1089, G1104, G1082, G1105 и G1106 представлены на Фиг. 48А. Соединения GL-2045, G994, G1102, G1100, G1101, G1125, G1108, G1109 и G1084 представлены на Фиг. 48B. Соединения GL-2045, G998 и G1107 представлены на Фиг. 48C. Соединения GL-2045, G994, G1110, G1111, G1112, G1114, G1115, G1116, G1117, G1118 и G1119 представлены на Фиг. 48D. Соединения GL-2045, G994, G1120, G1121, G1122, G1123, G1124, G1128, G1129, G1130, и G1131 представлены на Фиг. 48E. Соединения GL-2045, G998, G1071d2, G1068, G1094, G1092, G1096, G1093 и G1095 представлены на Фиг. 48F. Соединения GL-2045, G998, G1069, G1070, G1132, G1075 и G1075 представлены на Фиг. 48G.
[000101] На Фигуре 49 представлены результаты оценки связывания отрицательного контроля G001, который представляет собой Fc IgG1, страдомера GL-2045 или страдомера, предпочтительно связывающегося с системой комплемента, G994, G998 или G1033 с компонентом системы комплемента С3 (верхняя левая панель), C3b (верхняя правая панель), С5 (нижняя левая панель) или С4 (нижняя правая панель), согласно результатам измерения поглощения при возрастающих концентрациях страдомера методом ИФА.
[000102] На Фигуре 50A-50C представлены результаты оценки связывания страдомера G1103, G1088, G1089, G1104, G1082, G1105 и G1106 с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[000103] На Фигуре 51A-51C представлены результаты оценки связывания страдомера G1102, G1100, G1101, G1125, G1108, G1109 и G1084 с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[000104] На Фигуре 52A-52G представлены результаты оценки связывания страдомера G1100, G1111, G1112, G1113, G1114, G1115, G1116, G1117, G1118, G1119, G1120, G1121, G1122, G1123, G1124, G1128, G1129, G1130 и G1131 с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[000105] На Фигуре 53A-53C представлены результаты оценки связывания страдомера G1071d2, G1068, G1094, G1092, G1096, G1107, G1093 и G1095 с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[000106] На Фигуре 54A-54B представлены результаты оценки связывания страдомера G1069, G1070, G1132, G1074 и G1075 с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя (ForteBio Octet).
[000107] На Фигуре 55A представлены данные по индукции ИЛ-1Rα из выделенных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) после 20 часов обработки контрольным носителем (0 мкг/мл G019, G994 или G1033) или введения доз G019, G994 и G1033, варьирующихся от 0,02 мкг/мл до 2000 мкг/мл. В качестве положительного контроля использовали G019, который связывается со всеми каноническими рецепторами.
[000108] На Фигуре 55B представлены данные по индукции ФНО-α из выделенных МКПК после 4 часов обработки контрольным носителем (0 мкг/мл G019, G994 или G1033) или введения доз G019, G994 и G1033, варьирующихся от 0,02 мкг/мл до 2000 мкг/мл. В качестве положительного контроля использовали G019, который связывается со всеми каноническими рецепторами.
[000109] На Фигуре 56 представлены данные по связыванию C1q страдомерами с предпочтительным связыванием с системой комплемента, согласно результатам измерения методом ИФА.
[000110] На Фигуре 57 представлен средний диаметр лодыжки крыс линии Lewis в модели коллаген-индуцированного артрита (КИА), получивших G994, G998, G1033, контрольный ФСБ, дексаметазон, или необработанных контрольных животных.
[000111] На Фигуре 58A-58B представлены данные по связыванию C1q для некоторых соединений с предпочтительным связыванием с системой комплемента, показанных на Фигуре 56, G1088, G1129, G1082, G1092 и G1102 (Фиг. 58A), а также G1069, G1114 G1075 (Фиг. 58B).
[000112] На Фигуре 59 представлены результаты оценки связывания страдомера G999 и G996 с FcγRI, FcγRIIb и FcγRIIIa, согласно данным измерения с помощью интерферометрии биослоя.
[000113] На Фигуре 60 представлены данные по ингибированию CDC для G999 и G996. CD20 обозначает добавление антитела к CD20. «6%» обозначает добавление 6% сывороточного комплемента. Контроль включает клетки с добавлением только G996 (50 и 100 мкг/мл), клетки с добавлением сыворотки («+ 6%») и клетки с добавлением сыворотки и антитела («клетки + CD20 + 6%»).
[000114] На Фигуре 61 представлены данные по ингибированию CDC для G994. CD20 обозначает добавление антитела к CD20. «6%» обозначает добавление 6% сывороточного комплемента. Контроль включает клетки с добавлением только G996 (50 и 100 мкг/мл), клетки с добавлением сыворотки («+ 6%») и клетки с добавлением сыворотки и антитела («клетки + CD20 + 6%»).
[000115] На Фигуре 62 представлены данные по ингибированию CDC для G998. CD20 обозначает добавление антитела к CD20. «6%» обозначает добавление 6% сывороточного комплемента. Контроль включает клетки с добавлением только G996 (50 и 100 мкг/мл), клетки с добавлением сыворотки («+ 6%») и клетки с добавлением сыворотки и антитела («клетки + CD20 + 6%»).
[000116] На Фигуре 63 представлены данные по ингибированию CDC для G1033. CD20 обозначает добавление антитела к CD20. «6%» обозначает добавление 6% сывороточного комплемента. Контроль включает клетки с добавлением только G996 (50 и 100 мкг/мл), клетки с добавлением сыворотки («+ 6%») и клетки с добавлением сыворотки и антитела («клетки + CD20 + 6%»).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[000117] Подход к рациональному молекулярному дизайну соединений, модулирующих иммунную систему, описанных в настоящем документе, включает создание с помощью рекомбинантных и/или биохимических способов иммунологически активного биомиметика(ов), который проявляет сохраненное, предпочтительное или усиленное связывание с системой комплемента. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению усиливают связывание с системой комплемента за счет увеличения степени связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с рецепторами Fc. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению проявляют уменьшенное связывание с одним или более FcγR или не связываются с ними. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению проявляют уменьшенное связывание с FcRn или не связываются с ними. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению связываются с системой комплемента и проявляют уменьшенное связывание с определенными FcγR, а также FcRn, или не связываются с ними. Композиции согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, например, опосредованных комплементом заболеваний и связанных с комплементом заболеваний. Композиции согласно настоящему изобретению также способны к мультимеризации. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненную или усиленную мультимеризацию по сравнению с описанными ранее биомиметиками.
[000118] В WO 2008/151088 раскрыто применение соединенных доменов Fc иммуноглобулинов для создания упорядоченно мультимеризованных биомиметиков Fc иммуноглобулина hIVIG (биологически активные упорядоченные мультимеры известные как страдомеры), которые содержат короткие последовательности, включая сайты рестрикции и аффинные метки, между отдельными компонентами страдомера, которые предназначены для лечения патологических состояний, включая аутоиммунные заболевания и другие воспалительные состояния. См. WO 2008/151088 и патент США №8680237, содержание каждого из которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. В WO 2012/016073 раскрыты страдомеры, в которых отдельные компоненты соединены непосредственно, а не разделены сайтами ферментов рестрикции или аффинными метками. См. WO 2012/016073 и публикацию заявки на патент США 2013/0156765, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. В WO 2012/016073 также конкретно раскрыт мультимеризующийся страдомер (GL-2045), содержащий домен Fc IgG1 и домен мультимеризации из шарнирной области IgG2, присоединенный непосредственно к его С-концу, который проявляет улучшенную мультимеризацию и связывание с системой комплемента по сравнению с N-концевой связанной конструкцией (G019, описанной в WO2008/151088). Страдомерные блоки, описанные в настоящем документе, содержат одну или более точечных мутаций в области Fc GL-2045, что приводит к усиленному связыванию с системой комплемента и/или селективному или повышенному связыванию комплемента, по сравнению со связыванием с каноническим рецептором Fc-гамма, при сопоставлении с ранее описанными молекулами.
[000119] G045c и G019 были описаны ранее (см. WO 2012/016073). G045c имеет следующую структуру: шарнирная область IgG1 - CH2 IgG1 CH3 IgG1 - шарнирная область IgG2, и G045c представлен в последовательностях SEQ ID NO: 7 и 8.
[000120] В настоящей заявке термины «G045c», «GL-2045» используются взаимозаменяемо. G045c имеет следующую структуру: шарнирная область IgG1 - CH2 IgG1 CH3 IgG1 - шарнирная область IgG2. В настоящей заявке термин «страдомер на основе G045c» и т.п. относится к страдомеру, имеющему структуру: шарнирная область IgG1- CH2 IgG1 CH3 IgG1 - шарнирная область IgG2 (SEQ ID NO: 7 или 8). G019 имеет следующую структуру: шарнирная область IgG2- шарнирная область IgG1 - CH2 IgG1 - CH3 IgG1. В настоящей заявке термин «страдомер на основе G019» и т.п. относится к страдомеру, имеющему структуру: шарнирная область IgG2 - шарнирная область IgG1- CH2 IgG1 - CH3 IgG1 (SEQ ID NO: 9). Специалист в данной области техники поймет, что аминокислотные последовательности GL-2045 и G019 содержат N-концевую лидерную последовательность (SEQ ID NO: 1), которая отщепляется при экспрессии зрелого белка.
[000121] Мутации в областях Fc полноразмерных молекул антител имеют предсказуемые результаты в отношении характеристик и функции антител. См., например, Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 276; 6591 (2001). В частности, в работе Moore et al. показано, что тройная мутация S267E, H268F и/или S324T в области Fc моноклонального антитела достоверно увеличивает степень связывания моноклонального антитела с комплементом, по сравнению со связыванием с каноническим рецептором Fcγ или FcRn (Mabs 2:2; 18 (2010)). Однако авторы настоящего изобретения раскрыли соединения, в которых мутации S267E, H268F и/или S324T в области Fc мультимеризующегося страдомера, включая тройную мутацию S267E/H268F/S324T, фактически и совершенно неожиданно связаны с отсутствием связывания с C1q и, следовательно, не увеличивают степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническими рецепторами Fcγ или FcRn (например, G999, G1024, G1030, G1031, G1040, G1044 и G1048).
[000122] Общепризнанно, что специфические мутации в моноклональных антителах, которые увеличивают связывание с C1q (например, S267E, H268F и/или S324T, описанные в Moore et. al.), тем самым увеличивают CDC (Moore et. al. 2010). Авторы настоящего изобретения описывают в настоящем документе многочисленные соединения, которые, путем включения вышеупомянутых мутаций, применительно к мультимеризующемуся страдомеру, связаны не только с отсутствием увеличения CDC, но также с отсутствием изначально присущей CDC вообще. Помимо этого, учитывая, что указанные мутации связаны с повышением CDC, применительно к моноклональному антителу, авторы настоящего изобретения раскрыли в настоящем документе, что соединения согласно настоящему изобретению, содержащие вышеупомянутые мутации, фактически ингибируют CDC в зависимости от концентрации (например, G994, G998 и многие другие, Фигуры 61-63).
[000123] Кроме того,о в отношении антитела было установлено, что точечная мутация, введенная в положении 297 домена Fc, уменьшает связывание с высокоаффинными и низкоаффинными каноническими рецепторами Fcγ (Robert L. Shields, et al. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and Design of IgG1 Variants with Improved Binding to the FcγR. J. Biol. Chem., Feb 2001; 276: 6591 - 6604). Аналогично, в отношении моноклонального антитела было показано, что точечная мутация, введенная в положении 299 домена Fc, различным образом влияет на связывание с FcγR (например, уменьшает связывание с FcγRIIIa и сохраняет связывание с FcγRIIa) и дополнительно ингибирует связывание с C1q (Sazinsky et al. Aglycosylated immunoglobulin G1 variants productively engage activating Fc receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Dec 23; 105(51): 20167-20172; PCT/US2008/085757). Применительно к конкретным мультимеризующимся страдомерам точечные мутации в положении 297 домена Fc приводили к уменьшению связывания с низкоаффинными каноническими рецепторами Fcγ. Тем не менее, в некоторых страдомерах мутация в положении 299 действительно приводила к ожидаемому уменьшению связывания с FcγR, однако при этом обеспечивала сохранение или усиление связывания Fc со всеми каноническими FcγR.
[000124] Кроме того, было показано, что двойная мутация в положениях 236 и 328 (Tai et al., Blood 119; 2074 (2012)) или мутация в положении 233 (Shields, et al. J. Biol. Chem., 276(9):6591 (2001)) уменьшает связывание антитела или Fc иммуноглобулина с каноническими FcγR. Также было показано, что двойная мутация в положениях 236 и 328 устраняет связывание антитела или иммуноглобулина с FcγRI (Tai et al. 2012); однако авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что в случае мультимеризующегося страдомера и мутации, усиливающей связывание с системой комплемента, в положении 267 и/или 268, и/или 324, в некоторых мультимеризующихся страдомерах связывание с FcγRI сохраняется непредсказуемым образом. Помимо этого, как ожидается, двойная мутация в положениях 233 и 236 (Е233P и G236R) уменьшит связывание со всеми каноническими рецепторами Fc; однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что несколько комбинаций мутаций, включая мутации в указанных двух положениях, приводили к связыванию с одним или более рецепторами Fc, которое сохранялось непредсказуемым образом или увеличивалось, по сравнению с соответствующим немутированным страдомером. Кроме того,, ожидалось, что мутация в положении 328 (L328F) увеличит связывание только с FcγRIIb (Chu et al., Molecular Immunology 45; 3926 (2008)); однако авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что страдомер, содержащий мутацию в положении 328, применительно к страдомеру, содержащему дополнительные мутации по меньшей мере в положениях 267, 268 и 324, проявляет повышенное связывание с одним или более другими каноническими рецепторами Fc-гамма непредсказуемым образом. Помимо этого, ожидалось, что мутация в положении 238 увеличит связывание с FcγRIIb и уменьшит связывание с FcγRI и FcγRIIa (Mimoto et al., Protein Engineering, Design, and Selection p. 1-10 (2013)), в то время как мутация в положении 265, как ожидалось, уменьшит связывание со всеми каноническими FcγR. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что, применительно к мультимеризующемуся страдомеру и мутации, усиливающей связывание с системой комплемента, в положении 267 и/или 268, и/или 324, мутации в положениях 238 и 265 приводили к прочному связыванию с FcγRIIa в некоторых мультимеризующихся страдомерах. Следовательно, авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что мутации, описанные в литературе, которые модифицируют функции антитела, например, чтобы уменьшить или устранить каноническое связывание моноклонального антитела или изменить связывание с C1q, не оказывают аналогичного влияния в случае мультимеризующегося страдомера.
[000125] Более того, даже в случае страдомера, действие мутаций так же непредсказуемо. Например, как описано в настоящем документе, в том случае, если два страдомера идентичны друг другу, за исключением одной или более мутаций в одном или более конкретных положений, даже если при мутации происходит замена структурно сходными аминокислотами, два страдомера могут иметь весьма различные функциональные характеристики. Кроме того, в WO 2012/016073 раскрыто, что, несмотря на тот факт, что GL-2045 и G019 содержат аналогичные компоненты и фактически являются идентичными молекулами, за исключением положения шарнирной области IgG2 по отношению к домену Fc IgG1, указанные молекулы неожиданно обладают весьма различными видами активности в отношении связывания с системой комплемента. Обе молекулы способны к мультимеризации и связыванию с рецепторами Fc. Неожиданным фактом явилось то, что GL-2045 проявляет прочное связывание со всеми рецепторами Fc, а также связывается с системой комплемента и ингибирует комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC), в то время как G019 не связывается с комплементом или не ингибирует CDC. Аналогичным образом, в том случае, если аналогичные мутации введены в GL-2045 и G019, результат может быть совершенно различным и, фактически, противоположным. В качестве примера, соединения 996 и 999 несут тройную мутацию, раскрытую в Moore, et al., которая, как ожидается, увеличит связывание с C1q (S267E/H268F/S324T), а также дополнительную мутацию G236R. Однако, применительно к GL-2045, указанная мутация сохраняет преимущественное связывание с C1q, по сравнению с каноническими рецепторами Fcγ (G996), тогда как G019 не связывается с C1q (G999). Данное расхождение функционального влияния хорошо охарактеризованной мутации подчеркивает непредсказуемость действия мутаций, введенных в мультимеризующийся страдомер.
[000126] Кроме того, в то время как моноклональные антитела обладают аффинностью в отношении FcγR и компонентов-мишеней системы комплемента, которая может быть повышена или подавлена путем введения мутаций, страдомеры представляют поливалентную область Fc рецепторам Fcγ и комплементу, и, следовательно, в большей степени опираются на авидность для связывания со своими мишенями. Напротив, моноклональные антитела не способны к авидному связыванию посредством своих доменов Fc. Эти особенности подчеркивают тот факт, что страдомеры и моноклональные антитела принципиально отличаются не только структурой, но и функцией и возможностями применения.
[000127] Следовательно, влияние любой мутации или набора мутаций в пределах любой области молекулы на активность мультимеризующегося страдомера не может быть предсказано на основании литературных данных, касающихся моноклональных антител. Соответственно, влияние мутаций аминокислот, которые, как известно в данной области техники, оказывают специфичное действие на антитела, таких как мутации, которые будут, например, увеличивать или уменьшать связывание с конкретным FcγR, применительно к антителу, обладающему антигенной специфичностью, не может быть предсказано для страдомеров. Аналогичным образом, точечные мутации L234A и L235A были описаны, как уменьшающие связывание Fc с C1q (См. WO 2015/132364; Arduin et al, Molecular Immunology, 65(2):456-463 (2015); Boyle et al, Immunity, 42(3):580-590 (2015)). Однако авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что введение указанных мутаций в биомиметики согласно настоящему изобретению приводит к сохранению или усилению связывания с C1q (например, G1033 и G1032).
[000128] Авторы настоящего изобретения выявили иммунологически активные биомиметики, в которых степень связывания с системой комплемента увеличивается, по сравнению со связыванием с рецептором Fc, при сопоставлении с исходным биомиметиком (например, GL-2045 или G019). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с C1q. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению связываются с компонентами системы комплемента, включая, но не ограничиваясь ими, C1q, C1r, C1s, C4, C4a, C3, C3a, C4b2a3b, C3b, C5, C5a, C5b, C6, C7, C8 и/или С9, и могут, следовательно, выступать в качестве «акцептора комплемента». В настоящей заявке термин «акцептор комплемента» относится к явлению связывания с C1q или с другим компонентом, вовлеченным в реакции каскада системы комплемента, предшествующие активации, и предотвращению последующей активации системы комплемента. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению связываются с компонентами системы комплемента, которые вступают в каскад реакций раньше, чем комплекс атаки мембраны C5b-9. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению связываются с компонентами системы комплемента, которые вступают в каскад реакций раньше, чем С5а. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют уменьшенное связывание с С5а и комплексом атаки мембраны. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют уменьшенное связывание с FcγRI и/или FcγRIIa, и/или FcγRIIb, и/или FcγRIII и сохраняют или усиливают связывание с системой комплемента. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют уменьшенное связывание с FcRn и сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и уменьшенное связывание с каноническими FcγR, а также уменьшенное связывание с FcRn. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и селективное связывание с одним или более из канонических Fcγ (например, связываются с FcγRI, но не с FcγRIIb, или связываются с FcγRIIb, но не FcγRI) или усиленное связывание с системой комплемента и селективное связывание с FcRn.
[000129] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения преимущество биомиметиков и композиций согласно настоящему изобретению заключается в усиленном связывании с компонентами пути активации системы комплемента, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1. Степень усиленного связывания с компонентами путей активации системы комплемента, по отношению к врожденному иммуноглобулину IgG1, может в действительности быть довольно значительной, практически сопоставимой или превосходящей связывание компонентов пути активации системы комплемента с агрегированным IgG1, который может присутствовать в организме человека при определенных обстоятельствах. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения преимущество биомиметиков и композиций согласно настоящему изобретению заключается в сохранении связывания с компонентами пути активации системы комплемента, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1, с уменьшением связывания с рецепторами Fc и другими лигандами.
[000130] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения преимущество биомиметиков и композиций согласно настоящему изобретению заключается в преимущественном связывании с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническими рецепторами Fc, наблюдаемым для врожденного иммуноглобулина IgG1, внутривенного иммуноглобулина (IVIG), плазмы крови человека, обогащенной агрегатами иммуноглобулина, или исходной композиции биомиметиков, которые не содержат точечных мутаций. Такое предпочтительное связывание может быть охарактеризовано, но не ограничивается этим, усиленной ассоциацией, уменьшенной диссоциацией, признаками авидности или аналогичной степенью связывания при более низкой концентрации. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения преимущество биомиметиков и композиций согласно настоящему изобретению заключается в усиленном связывании с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническими рецепторами Fc, наблюдаемым для врожденного иммуноглобулина IgG1, внутривенного иммуноглобулина (IVIG), плазмы крови человека, обогащенной агрегатами иммуноглобулинов, или исходной композиции биомиметиков, которые не содержат точечных мутаций. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению ингибируют комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению ингибируют CDC со сниженным связыванием или функционально отсутствующим связыванием с FcγRI и/или FcγRIIa, и/или FcγRIIb, и/или FcγRIII. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению связываются с компонентом(ми) системы комплемента C1q и/или С4, и/или С4a, и/или С3, и/или С3a, и/или С5, и/или С5a. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению связываются с C3b. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению связываются с молекулой системы комплемента, например, C1q, С3 или C3b, предотвращая или уменьшая активацию системы комплемента и предотвращая или уменьшая последующие функциональные реакции, опосредованные комплементом, такие как лизис клеток, воспаление или тромбоз. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению связаны с повышенными уровнями С4а, С3а и/или С5а, и указанные повышенные уровни связаны с противовоспалительными или противотромботическими клиническими профилями.
[000131] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения дополнительное преимущество биомиметиков, связывающихся с системой комплемента, и композиций согласно настоящему изобретению заключается в усилении мультимеризации по отношению к интактным иммуноглобулинам и/или описанным ранее композициям, связывающимся с системой комплемента. В другом варианте реализации дополнительное преимущество биомиметиков, связывающихся с системой комплемента, и композиций согласно настоящему изобретению заключается в снижении или отсутствии связывания со всеми или некоторыми каноническими FcγR. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения дополнительное преимущество биомиметиков, связывающихся с системой комплемента, и композиций согласно настоящему изобретению заключается в сходном или усиленном связывании с системой комплемента, по сравнению с интактными иммуноглобулинами, усиленной мультимеризации, а также уменьшенном связывании с одним или более каноническими FcγR, по сравнению с интактными иммуноглобулинами или мутированным исходным соединением. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения дополнительное преимущество биомиметиков, связывающихся с системой комплемента, и композиций согласно настоящему изобретению заключается в усиленном связывании с системой комплемента, усиленной мультимеризации, а также уменьшенном связывании с FcγRIIIa. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIII. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с неонатальным рецептором Fc (FcRn), но не с любым другим каноническим низкоаффинным FcγR в какой-либо значительной степени (например, страдомер G1033, описанный в настоящем документе). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcRn и FcγRI, но не с любым активирующим низкоаффинным каноническим FcγR в какой-либо значительной степени (например, страдомеры G994 и G998, описанные в настоящем документе). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcγRI и/или FcγRIIb, но не с любым другим каноническим FcγR (например, страдомер G994, описанный в настоящем документе). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcRn и FcγRI, однако имеют уменьшенное связывание с низкоаффинными активирующими рецепторами FcγRIIa и/или FcγRIIIa (например, страдомеры G997, G1003 и G1022, описанные в настоящем документе). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcγRIIb, однако имеют уменьшенное связывание с другими каноническими FcγR, содержащими FcγRI, FcγRIIa или FcγRIIIa (например, страдомеры G996 и G1003, описанные в настоящей заявке).
[000132] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и сохраняют связывание с FcγRIIb, но не с любым другим каноническим низкоаффинным FcγR (например, G994 и G998). Следовательно, в одном аспекте, преимущество биомиметиков и композиций согласно настоящему изобретению заключается в сохранении или усилении связывания с системой комплемента с относительно уменьшенным или отсутствующим связыванием с FcγR, или преимущество заключается в связывании с выбранными активирующими или ингибирующими FcγR, в каждом случае относительно нативного неагрегированного иммуноглобулина IgG1 и/или относительно исходного биомиметика. Следовательно, согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента, по отношению к врожденному иммуноглобулину IgG1 или исходному биомиметику.
[000133] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению могут иметь модифицированные эффекторные функции, такие как комплемент-зависимая цитотоксичность, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком или композицией. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с молекулами системы комплемента, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1, IVIG или исходным биомиметиком или композицией. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции проявляют сохраненное или усиленное связывание с C1q, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1, IVIG или исходным биомиметиком или композицией. Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложены биомиметики, которые способны связываться с C1q, C4, C4a, C3, C3a, C3b, C5 или C5a, чтобы уменьшить или предотвратить последующие функциональные реакции, опосредованные системой комплемента, такие как комплемент-зависимая цитотоксичность или лизис клеток. Согласно другим вариантам реализации в настоящем изобретении предложены биомиметики, которые проявляют сохраненное или усиленное связывание с C1q, а также эквивалентную или усиленную CDC с измененным связыванием с каноническими рецепторами Fc, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1, IVIG или исходным биомиметиком.
[000134] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и аналогичное связывание с FcRn со сниженным связыванием с одним или более каноническими рецепторами Fc, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и более длительный период полувыведения, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения, и не желая быть связанными соответствием какой-либо конкретной теории, авторы настоящего изобретения полагают, что биомиметики согласно настоящему изобретению имеют более длительный функциональный период полувыведения, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком, что стало возможным благодаря интернализации под действием FcRn, обеспечивающей более позднее высвобождение и замедленное или пролонгированное биологическое действие биомиметика. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента и более короткий период полувыведения, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики и композиции согласно настоящему изобретению проявляют сохраненный или усиленный клиренс комплемента, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1 или исходным биомиметиком. Следовательно, согласно некоторым вариантам реализации, в настоящем изобретении предложены биомиметики с уменьшенным периодом полувыведения, по сравнению с врожденным иммуноглобулином IgG1, IVIG или исходным биомиметиком, которые дополнительно способны связываться с C1q или другими компонентами системы комплемента, чтобы уменьшить или предотвратить образование комплекса атаки мембраны и последующие функциональные реакции, опосредованные комплементом, такие как лизис клеток.
[000135] Компонент C1q содержит шесть головок, соединенных коллагеноподобными стержнями с центральным остовом (Reid K. B. M. & Porter, R. R. Biochem. J. 155, 19-23 (1976)), и выделенные головки относительно слабо связываются с частью Fc антитела с аффинностью 100 мкМ (Hughes-Jones, N. C. & Gardner, B. Molec Immun. 16, 697-701 (1979)). Связывание антитела с несколькими эпитопами на антигенной поверхности приводит к агрегации антитела. Подобная агрегация облегчает связывание нескольких из головок молекулы C1q, что приводит к повышенной аффинности приблизительно 10 нМ (Burton, D. R. Molec. Immun. 22, 161-206 (1985)). Напротив, мультимеризующиеся страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, и универсальные мультимеризующиеся страдомеры согласно настоящему изобретению представляют поливалентную Fc компоненту C1q, обеспечивая тем самым авидное связывание компонентов системы комплемента со страдомерным блоком, входящим в состав мультимеризованного страдомера, при этом Fc преимущественно связывается с компонентами системы комплемента, по сравнению с одним или более каноническими рецепторами Fc. Следовательно, мультимеризующиеся страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, и универсальные страдомеры согласно настоящему изобретению могут проявлять сохраненную или повышенную аффинность и/или авидность связывания с C1q и выступают в роли акцептора комплемента, даже в том случае, если указанные страдомеры не содержат Fab (и, следовательно, не содержат часть FD области Fc) и не могут связываться с несколькими эпитопами на антигенной поверхности, в отличие от агрегированных антител. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мультимеризующиеся страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, согласно настоящему изобретению представляют 4, 5, 6, 7, 8 или более функциональных Fc гексамерному C1q, что приводит к авидному связыванию с низкой скоростью диссоциации и функциональному ингибированию CDC. Аналогичным образом, мультимеризующиеся страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, и универсальные страдомеры согласно настоящему изобретению могут проявлять сохраненную или повышенную аффинность и/или авидность связывания с C4, C4a, C3, C3a, C3b, C5 или C5a, выступая в качестве акцептора комплемента. Следовательно, биомиметики согласно настоящему изобретению, сходно с участком Fc агрегатов в IVIG или агрегированными антителами, могут связываться с компонентами системы комплемента C1q, C4, C4a, C3, C3a, C3b, C5 или C5a, в то время как участок Fc интактного выделенного иммуноглобулина имеет низкую аффинность связывания и не обладает авидностью в отношении указанных компонентов системы комплемента.
[000136] Как сообщалось, конкретные одиночные, двойные или тройные мутации в положении 267, 268 и/или 324 домена Fc моноклональных антител и, в частности, тройная мутация S267E/H268F/S324T увеличивают степень связывания моноклонального антитела с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническим рецептором Fcγ или FcRn (Moore et al., MAbs 2; 181 (2010)), также ранее полагали, что повышенное связывание с системой комплемента зависит от предшествующего связывания Fab антитела с антигеном-мишенью, за которым следует связывание с C1q. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что мутация в положении S267E, H268F и/или S324T, включая тройную мутацию S267E/H268F/S324T, применительно к мультимеризующемуся страдомеру, непредсказуемо уменьшала связывание с системой комплемента, увеличивала связывание с системой комплемента или селективно сохраняла связывание с системой комплемента, что свидетельствует о том, что описанные эффекты указанных мутаций в моноклональном антителе не могут являться основанием для предсказания их действия применительно к мультимеризующемуся страдомеру. Кроме того, в тех случаях, когда было показано неожиданное связывание мультимеризующихся страдомеров согласно настоящему изобретению с системой комплемента, это происходило несмотря на отсутствие Fab в мультимеризующемся страдомере. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, согласно настоящему изобретению связывается с C1q независимо от нацеливания Fab к антигену. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения, в отличие от моноклонального антитела, мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, согласно настоящему изобретению связывается с C1q без связывания страдомера с клеткой. Следовательно, согласно одному аспекту в настоящем изобретении предложены мультимеризующиеся страдомеры, содержащие точечные мутации в положениях S267E, H268F и/или S324T. Следовательно, в настоящем изобретении предложены мультимеризующиеся страдомеры, содержащие точечные мутации в положениях S267E, H268F и/или S324T, которые эффективно связываются с C1q и ингибируют CDC (например, 1102). Однако, помимо этого, в настоящем изобретении также предложены мультимеризующиеся страдомеры, содержащие точечные мутации в положениях S267E, H268F и/или S324T, которые не способны к эффективному связыванию с C1q или ингибированию CDC (например, G1106. G999, G1024, G1030, G1031, G1040, G1044 и G1048). Следовательно, точечные мутации S267E, H268F и/или S324T, которые увеличивают связывание с C1q в моноклональном антителе, оказывают непредсказуемое действие применительно к мультимеризующемуся страдомеру, в частности, в отношении дополнительных мутаций. Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении также предложены мультимеризующиеся страдомеры, содержащие точечные мутации в положениях S267E, H268F и S324T, а также точечные мутации в одном или более из положений 233, 234, 235, 236, 238, 265, 297, 299, 328 и/или делецию аминокислоты в положении 236.
[000137] Согласно одному аспекту в настоящем изобретении предложены биомиметики, которые проявляют сохраненное или усиленное связывание с системой комплемента, причем указанные биомиметики содержат домен Fc, содержащий точечную мутацию в положении 267 и/или 268, и/или 324. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения область Fc содержит одну или более из следующих точечных мутаций: S267E и/или H268F, и/или S324T. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения область Fc содержит следующие точечные мутации: S267E, H268F и S324T.
[000138] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения связывающий комплемент биомиметик содержит домен Fc, причем указанный домен Fc содержит точечную мутацию в положении 267 и/или 268, и/или 324, и при этом указанный домен Fc дополнительно содержит точечную мутацию в положении 297, 298 и/или 299. Домены Fc, содержащие мутацию в положении 297, 298 и/или 299, упоминаются в настоящем документе как «агликозилированные мутированные варианты» или «мутированные варианты без гликозилирования», поскольку мутации в указанных положениях изменяют нормальный характер гликозилирования Fc IgG. Применительно к моноклональному антителу, в котором указанные мутации были впервые охарактеризованы, агликозилированные мутированные варианты уменьшают или устраняют связывание нормальной Fc иммуноглобулина с каноническими FcγR вследствие измененного характера гликозилирования. Однако, применительно к мультимеризующемуся страдомеру, действие указанных мутаций не является предсказуемым. В некоторых мультимеризующихся страдомерах связывание с FcγR уменьшается, по сравнению с исходным биомиметиком (например, G998). Однако в некоторых других мультимеризующихся страдомерах связывание с FcγR сохраняется или усиливается в агликозилированных мутированных вариантах, по сравнению с немутированными исходными соединениями (например, G1068).
[000139] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения связывающий комплемент биомиметик содержит домен Fc, причем указанный домен Fc содержит точечную мутацию в положении 267 и/или 268, и/или 324, и при этом указанный домен Fc дополнительно содержит точечную мутацию в положении 233 и/или 234, и/или 235, и/или 236, и/или 238, и/или 265, и/или 297, и/или 299.
[000140] В настоящей заявке термин «a» или «an», при использовании в сочетании с термином «содержащий» в формуле изобретения и/или описании, может означать «один», но это также согласуется со значением «один или более», «по меньшей мере один» и «один или более чем один».
[000141] В настоящей заявке термины «биомиметик», «биомиметическая молекула», «биомиметическое соединение» и родственные термины относятся к соединению, изготовленному человеком, которое имитирует функцию другого соединения, такого как объединенный внутривенный иммуноглобулин человека («hIVIG»), моноклональное антитело или фрагмент Fc антитела. «Биологически активные» биомиметики представляют собой соединения, обладающие различными видами биологической активности, которые аналогичны или сходны с таковыми для природных аналогов. Под термином «природный» подразумевают молекулу или ее часть, которая обычно обнаруживается в организме. Термин «природный» также означает по существу природный. «Иммунологически активные» биомиметики представляют собой биомиметики, проявляющие иммунологическую активность, которая аналогична или сходна с таковой для природных иммунологически активных молекул, таких как антитела, цитокины, интерлейкины и другие иммунологические молекулы, известные в данной области техники. В предпочтительных вариантах реализации биомиметики согласно настоящему изобретению представляют собой страдомеры, определенные в настоящем документе. В настоящей заявке термин «исходный биомиметик» относится к немутированным биомиметикам, используемым в качестве основы для соединений, описанных в настоящем документе (например, GL-2045 и G019).
[000142] В настоящей заявке термин «комплемент» относится к любому из небольших белков каскада комплемента, которые иногда называют в литературе системой комплемента или каскадом системы комплемента. В настоящей заявке термины «связывание комплемента» или «связывание с комплементом» относятся к связыванию любого из компонентов системы комплемента. Компоненты каскада системы комплемента известны в данной области техники и описаны, например, в Janeway’s Immunobiology, 8th Ed., Murphy ed., Garland Science, 2012. В настоящее время известны три основных пути системы комплемента: классический путь, альтернативный путь и путь связывания лектина. Классический путь системы комплемента активируется при связывании белка C1q с одной или более молекулами интактного иммуноглобулина IgM или по меньшей мере двумя молекулами интактного иммуноглобулина IgG1, IgG2 или IgG3. Активация системы комплемента приводит к комплемент-зависимому цитолизу. Чрезмерная активация системы комплемента может быть вредной и связана с несколькими заболеваниями, включая миастению гравис, гемолитический уремический синдром (HUS) и пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH). В настоящей заявке термин «предпочтительно связывающий комплемент» относится к связыванию одного или более компонентов системы комплемента в большей степени, по сравнению со связыванием с другими рецепторами (например, FcγR или FcRn). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению представляют собой страдомеры с предпочтительным связыванием с комплементом. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению представляют собой универсальные страдомеры. В настоящей заявке термин «универсальные страдомеры» относится к страдомерам, которые связываются с одним или более компонентами системы комплемента, а также связываются с любым из канонических рецепторов Fc и/или неонатальным рецептором FcRn.
[000143] В настоящей заявке термины «опосредованное комплементом заболевание» и «связанное с комплементом заболевание» относятся к заболеваниям и состояниям, в которых система комплемента играет определенную роль. Например, опосредованные комплементом заболевания включают заболевания, связанные с нарушениями активации системы комплемента. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения опосредованные комплементом заболевания можно излечить, предотвратить или уменьшить путем ингибирования каскада системы комплемента. Связанные с комплементом заболевания известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, миастению гравис, гемолитический уремический синдром (HUS), атипичный гемолитический уремический синдром (aHUS), гемолитический уремический синдром, вызванный шига-токсином E. coli (STEC-HUS), системную тромботическую микроангиопатию (TMA), пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH), нейромиелит зрительного нерва, рецидивирующий нейромиелит зрительного нерва (NMO), опосредованное антителами отторжение аллотрансплантатов, синдром Барракера-Симонса, астму, волчанку, аутоиммунное заболевание сердца, рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, травму, вызванную реперфузией при ишемии, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, повреждения спинного мозга, дегенерацию желтого пятна, ассоциированную с фактором H (Y402H), возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD), наследственный ангионевротический и мембранопролиферативный гломерулонефрит (MPGN), мембранозную нефропатию, ревматоидный артрит (РА), острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), активацию системы комплемента во время сердечно-легочного шунтирования, дерматомиозит, пузырчатку, волчаночный нефрит, гломерулонефрит и васкулит, IgA-опосредованную нефропатию, острую почечную недостаточность, криоглобулинемию, синдром, вызванный антителами к фосфолипидам, увеит, диабетическую ретинопатию, гемодиализ, хронический окклюзионный легочной дистресс-синдром (ХОБЛ) и аспирационную пневмонию. Связанные с комплементом заболевания также могут включать различные другие аутоиммунные, воспалительные, иммунологические, неврологические, ревматические заболевания или заболевания, ассоциированные с инфекционными агентами.
[000144] Под «непосредственно соединены» подразумевают две последовательности, соединенные друг с другом без промежуточных или посторонних последовательностей, например, аминокислотные последовательности, полученные в результате введения сайтов, распознаваемых ферментами рестрикции, в ДНК или клонирования фрагментов. Специалист в данной области техники поймет, что термин «непосредственно соединены» включает добавление или удаление аминокислот до тех пор, пока способность к мультимеризации по существу не изменяется.
[000145] Под термином «гомологичный» подразумевают идентичность по всей длине последовательности конкретной нуклеиновой или аминокислотной последовательности. Например, «80% гомология» означает, что конкретная последовательность приблизительно на 80% идентична заявленной последовательности и может содержать вставки, делеции, замены и сдвиги открытой рамки считывания. Специалист в данной области техники поймет, что сопоставление последовательностей может быть сделано так, чтобы учитывать вставки и делеции для определения идентичности по всей длине последовательности.
[000146] В настоящем описании нумерация остатков в тяжелой цепи IgG приведена в соответствии с системой нумерации ЕС, описанной в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), включенной в явной форме в настоящую заявку посредством ссылки. «Индекс ЕС в соответствии с Кабат (Kabat)» относится к нумерации остатков антитела IgG1 человека в соответствии с системой ЕС. См. Фигуры 36A и 36B.
[000147] Существует две полиморфные формы IgG1 человека, обозначаемые как полиморфы DEL и EEM. Полиморфная форма DEL содержит D в положении 356 и L в положении 358; полиморфная форма EEM содержит E в положении 356 и M в положении 358 (нумерация в соответствии с Кабат, см. Фигуры 36А и 36B). Страдомеры согласно настоящему изобретению могут содержать полиморфные формы DEL или EEM IgG1. Следовательно, даже если предложение для конкретного мутированного варианта явно приведено применительно к полиморфной форме DEL, специалист в данной области техники поймет, что такие же мутации могут быть введены в полиморфную форму EEM с получением аналогичных результатов. Например, соединения G994 и G998 были сконструированы с включением обеих полиморфных форм DEL и EEM, затем была проведена оценка их функциональных различий. Какие-либо функциональные различия не были обнаружены. В частности, связывание с C1q и ингибирование CDC были по существу одинаковы для каждой полиморфной формы соответствующих соединений.
[000148] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения иммунологически активные биомиметики согласно настоящему изобретению представляют собой страдомеры. Иммунологически активные соединения согласно настоящему изобретению представляют собой мультимеры гомодимеров. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения каждый гомодимер обладает способностью связываться с комплементом. Следовательно, в мультимеризованной форме иммунологически активные биомиметики содержит по меньшей мере два гомодимера, каждый из которых обладает способностью связываться с системой комплемента.
[000149] В следующих подразделах представлено определение структурных блоков биомиметиков согласно настоящему изобретению, как структурное, так и функциональное, и затем приводится определение самих биомиметиков. Однако вначале следует отметить, что, как указано выше, каждый из биомиметиков согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один домен Fc и один домен мультимеризации. Каждый из домена Fc и домена мультимеризации по меньшей мере представляет собой димерный полипептид (или димерную область более крупного полипептида), который содержит две пептидные цепи или два плеча (мономеры), которые связываются с образованием функционального рецептора Fc или сайта связывания комплемента и домена мультимеризации, способного мультимеризовать полученный гомодимер. Следовательно, функциональная форма отдельных фрагментов и доменов, обсуждаемых в настоящем документе, как правило существует в димерной (или мультимерной) форме. Мономеры отдельных фрагментов и доменов, обсуждаемых в настоящем документе, представляют собой одиночные цепи или плечи, которые должны связаться со второй цепью или плечом, чтобы сформировать функциональную димерную структуру.
Фрагмент Fc
[000150] В настоящей заявке термин «фрагмент Fc» используется для описания участка белка или свернутой структуры белка, которая обычно обнаруживается на карбоксильном конце иммуноглобулинов. Фрагмент Fc может быть выделен из фрагмента Fab моноклонального антитела с помощью ферментативного расщепления, например, папаином, однако этот процесс является неполным и имеет недостатки (см. Mihaesco C and Seligmann M. Papain Digestion Fragments Of Human IgM Globulins. Journal of Experimental Medicine, Vol 127, 431- 453 (1968)). В сочетании с фрагментом Fab (содержащим антигенсвязывающий домен) фрагмент Fc составляет голоантитело, то есть полное антитело в настоящем документе. Фрагмент Fc состоит из карбоксильных концевых участков тяжелых цепей антитела. Каждая из цепей во фрагменте Fc содержит приблизительно 220-265 аминокислот в длину, и цепи часто связаны посредством дисульфидной связи. Фрагмент Fc часто содержит одну или более независимых структурных складок или функциональных субдоменов. В частности, фрагмент Fc содержит домен Fc, определяемый в настоящий документ в качестве минимальной структуры, которая связывается с рецептором Fcγ. Выделенный фрагмент Fc состоит из двух мономерных фрагментов Fc (например, двух карбокси-концевых частей тяжелых цепей антитела; дополнительно определенных в настоящем документе), которые димеризованы. При связывании двух мономерных фрагментов Fc полученный в результате фрагмент Fc способен связываться с системой комплемента и/или рецептором Fc.
Неполный фрагмент Fc
[000151] «Неполный фрагмент Fc» представляет собой домен, содержащий неполный фрагмент области Fc антитела, при этом сохраняющий достаточную структуру, чтобы обладать активностью, аналогичной таковой фрагмента Fc, включая активность в отношении связывания с рецептором Fc и/или с системой комплемента. В этой связи в неполном фрагменте Fc может отсутствовать вся шарнирная область или ее часть, весь домен СН2 или его часть, весь домен СН3 или его часть и/или весь домен СН4 или его часть, в зависимости от изотипа антитела, из которого получен домен Fc. Другой пример неполного фрагмента Fc включает молекулу, содержащую домены СН2 и СН3 IgG1. В этом примере неполный фрагмент Fc не содержит шарнирного домена, присутствующего в IgG1. Неполные фрагменты Fc состоят из двух мономеров неполных фрагментов Fc. Как дополнительно определено в настоящем описании, при связывании двух указанных мономеров неполных фрагментов Fc полученный в результате неполный фрагмент Fc способен связываться с рецептором Fc и/или с системой комплемента.
Домен Fc
[000152] В настоящей заявке термин «домен Fc» описывает минимальную область (применительно к более крупному полипептиду) или наименьшую свернутую структуру белка (применительно к выделенному белку), которая может связываться или может быть связана рецептором Fc (FcR). Во фрагменте Fc и неполном фрагменте Fc домен Fc представляет собой минимальный связывающий участок, который обеспечивает связывание молекулы с рецептором Fc. В то время как домен Fc может быть ограничен дискретным гомодимерным полипептидом, который связывается рецептором Fc, очевидно, что домен Fc может представлять собой часть или полный фрагмент Fc, а также часть или целый неполный фрагмент Fc. При использовании термина «домены Fc» в настоящем изобретении специалист в данной области техники поймет, что указанный термин означает более одного домена Fc. Домен Fc состоит из двух мономеров домена Fc. Как дополнительно определено в настоящем документе, домен Fc, полученный при ассоциации двух указанных мономеров домена Fc, способен связываться с рецептором Fc и/или связываться с системой комплемента. Следовательно, домен Fc представляет собой димерную структуру, которая может связываться с комплементом и/или рецептором Fc. Страдомеры, описанные в настоящем документе, содержат домен Fc, содержащий одну или более мутаций, которые изменяют способность страдомера связываться с комплементом и/или рецептором Fc.
Неполный домен Fc
[000153] В настоящей заявке термин «неполный домен Fc» описывает часть домена Fc. Неполные домены Fc содержат отдельные домены константных областей тяжелой цепи (например, домены CH1, CH2, CH3 и CH4) и шарнирные области различных классов и подклассов иммуноглобулинов. Следовательно, неполные домены Fc человека согласно настоящему изобретению содержат домен CH1 IgG1, домен СН2 IgG1, домен СН3 IgG1 и шарнирные области IgG1 и IgG2. Соответствующие неполные домены Fc у других видов будут зависеть от иммуноглобулинов, присутствующих у этих видов, и их названия. Предпочтительно неполные домены Fc согласно настоящему изобретению содержат CH1, CH2 и шарнирные области IgG1 и шарнирную область IgG2. Неполный домен Fc согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать комбинацию более чем одного из указанных доменов и шарнирных областей. Однако отдельные неполные домены Fc согласно настоящему изобретению и их комбинации не обладают способностью связываться с FcR. В этой связи неполные домены Fc и их комбинации содержат неполную последовательность домена Fc. Неполные домены Fc могут быть соединены друг с другом с образованием пептида, который способен связываться с системой комплемента и/или рецептором Fc, формируя тем самым домен Fc. В настоящем изобретении неполные домены Fc используют совместно с доменами Fc в качестве строительных блоков для создания биомиметиков согласно настоящему изобретению, определенных в настоящем документе. Каждый неполный домен Fc состоит из двух мономеров неполного домена Fc. Ассоциация двух указанных мономеров неполного домена Fc приводит к формированию неполного домена Fc.
[000154] Как было указано выше, каждый из фрагментов Fc, неполных фрагментов Fc и неполных доменов Fc представляет собой димерный белок или домен. Следовательно, каждая из указанных молекул состоит из двух мономеров, которые соединяются с образованием димерного белка или домена. Несмотря на то, что характеристики и активность гомодимерных форм были описаны выше, ниже обсуждаются мономерные пептиды.
Мономер фрагмента Fc
[000155] В настоящей заявке «мономер фрагмента Fc» представляет собой отдельную белковую цепь, которая, при связывании с другим мономером фрагмента Fc, образует фрагмент Fc. Мономер фрагмента Fc, следовательно, представляет собой карбокси-концевую часть одной из тяжелых цепей антитела, которые составляют фрагмент Fc голоантитела (например, непрерывную часть тяжелой цепи, которая содержит шарнирную область, домен СН2 и домен СН3 IgG). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мономер фрагмента Fc содержит по меньшей мере одну цепь шарнирной области (мономер шарнирной области), одну цепь домена СН2 (мономер домена СН2) и одну цепь домена СН3 (мономер домена СН3), которые соединены непосредственно с образованием пептида. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения СН2, СН3 и шарнирные домены получены из различных изотипов. В конкретном варианте реализации мономер фрагмента Fc содержит шарнирный домен IgG2 и домены СН2 и СН3 IgG1.
Мономеры домена Fc
[000156] В настоящей заявке термин «мономер домена Fc» описывает одноцепочечный белок, который, при соединении с другим мономером домена Fc, формирует домен Fc, который может связываться с системой комплемента. Соединение двух мономеров домена Fc приводит к формированию одного домена Fc.
[000157] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мономеры домена Fc согласно настоящему изобретению не содержат посторонних последовательностей, в отличие от мономеров домена Fc, описанных ранее в WO 2008/151088. Напротив, мономеры домена Fc согласно настоящему изобретению соединены непосредственно с лидерной последовательностью (например, SEQ ID NO: 1) на одном конце (например, N-конце мономера Fc) и доменом мультимеризации (например, SEQ ID NO: 4, 5 или 6) на другом конце (например, C-конце мономера Fc). Специалист в данной области техники поймет, что, несмотря на то, что конструкции разрабатываются с лидерной последовательностью, указанная последовательность затем отщепляется. Следовательно, в предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения зрелый белок не содержит лидерной последовательности.
[000158] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мономер домена Fc содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, домен Fc, содержащий шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и СН3 IgG1 и шарнирную область IgG2, (основание G045c), причем указанный мономер содержит одну или более точечных мутаций в домене Fc. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения мономер домена Fc содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, домен Fc, содержащий шарнирную область IgG2, шарнирную область IgG1, CH2 IgG1 и CH3 IgG1 (основание G019), причем указанный мономер Fc содержит одну или более точечных мутаций в домене Fc. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения мономер домена Fc содержит, в направлении от амино- к карбоксильному концу, домен Fc, содержащий шарнирную область IgG2, CH2 IgG1 и CH3 IgG1 (основание G051), причем указанный мономер Fc содержит одну или более точечных мутаций в домене Fc.
Страдомеры
[000159] В конкретных вариантах реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению включают страдомеры. Страдомеры согласно настоящему изобретению представляют собой биомиметические соединения, способные связываться с комплементом, которые предпочтительно проявляют значительно улучшенное связывание с системой комплемента. В предпочтительном варианте реализации страдомеры согласно настоящему изобретению проявляют повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с одним или более каноническими рецепторами Fc. Страдомер может иметь четыре различные физические конформации: последовательную, кластерную, коровую или фрагмента Fc. Как будет очевидно, фрагменты Fc, неполные фрагменты Fc, домены Fc и неполные домены Fc, описанные выше, можно применять для конструирования различных конформаций страдомеров. Кроме того, существуют отдельные мономеры домена Fc и мономеры неполного домена Fc, также рассмотренные выше, которые получают в первую очередь с образованием гомодимерных страдомерных блоков, и затем мультимеризуют посредством включения домена мультимеризации (например, шарнирной области IgG2), чтобы получить мультимерные структуры, которые представляют собой кластерные страдомеры согласно настоящему изобретению. Конкретные страдомеры подробно описаны в WO 2008/151088 и WO 2012/016073, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Степень связывания с рецептором Fcγ и/или FcRn может быть дополнительно повышена с помощью дополнительных мутаций в одном или более положениях 233 и/или 234, и/или 235, и/или 236, и/или 238, и/или 265, и/или 297, и/или 299.
Мономер страдомерного блока
[000160] В настоящей заявке термин «мономер страдомерного блока» относится к отдельной, непрерывной пептидной молекуле, которая, при соединении по меньшей мере со вторым мономером страдомерного блока, образует гомодимерный страдомерный блок, содержащий по меньшей мере один домен Fc. В то время как в предпочтительных вариантах реализации страдомерные блоки состоят из двух связанных мономеров страдомера, страдомер также может содержать три или более мономеров страдомера.
[000161] Мономер страдомерного блока может содержать аминокислотную последовательность, которая будет формировать один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или более доменов Fc при связывании с другим мономером страдомерного блока с образованием «страдомерного блока». Мономер страдомерного блока может дополнительно содержать аминокислотную последовательность, которая будет формировать один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать или более неполных доменов Fc при связывании с другим мономером страдомерного блока с образованием страдомерного блока.
[000162] Области мономеров страдомерных блоков, которые будут формировать домены Fc и неполные домены Fc, применительно к страдомерному блоку, могут располагаться в направлении от карбокси-конца к амино-концу последовательных участков молекулы мономера страдомерного блока. Расположение отдельных мономеров домена Fc и мономеров неполного домена Fc, содержащего мономер страдомерного блока, не имеет решающего значения. Однако расположение должно допускать образование двух функциональных доменов Fc при соединении двух мономеров страдомерного блока. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер согласно настоящему изобретению содержит непосредственную связь между N-концом мономера Fc IgG1 и С-концом лидерного пептида (SEQ ID NO: 1), и С-концом области Fc IgG1 и N-концом домена мультимеризации шарнирной области IgG2 (SEQ ID NO: 4).
[000163] В качестве поясняющего примера, специалист в данной области техники поймет, что молекулы страдомеров согласно настоящему изобретению, содержащие указанные точечные мутации, могут быть сконструированы путем получения полинуклеотидной молекулы, которая кодирует мономер домена Fc с желаемыми точечными мутациями и область мультимеризации. Указанная молекула полинуклеотида может быть вставлена в вектор экспрессии, который может быть использован для трансформации популяции бактерий или трансфекции популяции клеток млекопитающих. Мономеры страдомерного блока затем могут быть получены путем культивирования трансформированных бактерий или трансфекции клеток млекопитающих при соответствующих условиях культивирования. Например, клональная клеточная линия, продолжающая пул стабильно трансфецированных клеток, может быть получена путем отбора клеток с использованием генетицина/G418. В другом варианте, клетки могут быть трансфецированы ДНК, кодирующей страдомер согласно настоящему изобретению (например, ДНК, кодирующей страдомер в соответствии с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 10-77), под контролем промотора ЦМВ. Экспрессированные мономеры страдомера затем могут формировать функциональные страдомерные блоки и страдомеры при самоагрегации мономеров страдомера или блоков или соединении мономеров страдомера с использованием связей между мономерами страдомера. Экспрессированные страдомеры затем могут быть очищены из культуральной среды клеток с помощью аффинной хроматографии с использованием, например, колонок с белком A или белком G. Специалист в данной области техники поймет, что лидерный пептид, включенный в конструкцию нуклеиновой кислоты, используется только для облегчения выработки пептидов мономеров страдомерного блока и отщепляется при экспрессии зрелого белка. Следовательно, биологически активные биомиметики согласно настоящему изобретению не содержат лидерный пептид.
Кластерный страдомер
[000164] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер, используемый в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой кластерный страдомер. «Кластерный страдомер» является биомиметиком, который имеет радиальную форму с центральным фрагментом «голова» и двумя или более «ножками», в котором каждая ножка содержит один или более доменов Fc, которые способны связываться по меньшей мере с одним рецептором Fc-гамма и/или с системой комплемента. Кластерный страдомер также известен как «мультимеризующийся страдомер» вследствие наличия домена мультимеризации, что приводит к мультимеризации страдомера. Следовательно, последовательные страдомеры, которые содержат несколько доменов Fc на одной молекуле мономера страдомера, все еще могут быть классифицированы как кластерный страдомер или мультимеризующийся страдомер до тех пор, пока молекула также содержит по меньшей мере один домен мультимеризации. Каждый кластерный страдомер состоит из более чем одного гомодимерного белка, каждый из которых называется «кластерный страдомерный блок». Каждый кластерный страдомерный блок состоит по меньшей мере из одной области, которая мультимеризуется, и области «ножки», которая содержит по меньшей мере один функциональный домен Fc. Мультимеризующаяся область создает «головку» кластерного страдомера после мультимеризации с другим кластерным страдомерным блоком. Область ножки может быть способна связываться с таким количеством молекул системы комплемента, которое соответствует количеству доменов Fc в каждой ножке. Например, область ножки может связываться с таким количеством молекул C1q, которое соответствует количеству доменов Fc в каждой области ножки. Следовательно, кластерный страдомер представляет собой биомиметическое соединение, способное связываться с двумя или более молекулами C1q, предотвращая тем самым последующие реакции опосредованного комплементом лизиса. Особенно активные биомиметики согласно настоящему изобретению могут связывать все шесть головок молекулы C1q.
[000165] Мультимеризующаяся область может представлять собой пептидную последовательность, которая вызывает дальнейшую мультимеризацию димерных белков или, в другом варианте, мультимеризующаяся область может быть гликозилирована, что усиливает мультимеризацию димерных белков. Примеры пептидных мультимеризующихся областей включают шарнирную область IgG2, домен CH2 IgE, изолейциновую молнию, повтор глицин-пролин-пролин коллагена («GPP») и цинковые пальцы. Изменения гликозилирования, независимо от того, возникают ли они в результате замены аминокислот или условий культивирования, также могут влиять на мультимеризацию биомиметиков согласно настоящему изобретению. Влияние гликозилирования на мультимеризацию пептидов хорошо описано в данной области техники (например, Role of Carbohydrate in Multimeric Structure of Factor VIII/V on Willebrand Factor Protein. Harvey R. Gralnick, Sybil B. Williams and Margaret E. Rick. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 80, No. 9, [Part 1 : Biological Sciences] (May 1, 1983), pp. 2771-277 '4; Multimerization and collagen binding of vitronectin is modulated by its glycosylation. Kimie Asanuma, Fumio Arisaka and Haruko Ogawa. International Congress Series Volume 1223, December 2001, Pages 97-101).
[000166] Мультимеризующаяся область может представлять собой пептидную последовательность, которая вызывает димеризацию или мультимеризацию пептидов и содержит шарнирную область IgG2, домен СН2 IgE, изолейциновую молнию, GPP коллагена и цинковый палец. Общеизвестно, что шарнирная область IgG2 человека может образовывать ковалентные димеры (Yoo, E.M. et al. J. Immunol. 170, 3134-3138 (2003); Salfeld Nature Biotech. 25, 1369-1372 (2007)). Образование димера IgG2 потенциально опосредовано структурой шарнирной области IgG2 посредством связей C-C (Yoo et al 2003), это свидетельствует о том, что шарнирная структура по отдельности может опосредовать образование димеров. Однако количество димеров IgG2, обнаруженных в сыворотке крови человека, ограничено. По оценкам, количество IgG2, существующего в виде димера из гомодимеров, составляет менее 10% от общего IgG2 (Yoo et al. 2003). Более того, отсутствуют количественные данные о мультимеризации IgG2, помимо димера из гомодимеров. (Yoo et al. 2003). Иными словами, не было установлено, что нативный IgG2 формирует мультимеры более высокого порядка в сыворотке крови человека. Страдомеры, содержащие шарнирную область IgG2 (т.е. G045c и G019, описанные в WO 2012/016073), присутствуют в высокоупорядоченных мультимерах и, в отличие от нативного IgG2 в сыворотке крови человека, в котором взаимодействия шарнирной области IgG2 являются вариабельными и динамическими, было показано, что G045c формирует высокостабильные мультимеры, существование которых подтверждено результатами электрофореза в ДСН-ППАГ в невосстанавливающих условиях, с помощью аналитического ультрацентрифугирования и результатами 3-месячных исследований стабильности при 100% влажности и 37°C. Кроме того, неожиданным фактом также является то, что количество мультимеров в препаратах страдомеров, содержащих шарнирную область IgG2, значительно выше, чем приблизительно 10% димеров IgG2 в сыворотке крови человека, при этом мультимеры IgG2 не были обнаружены в сыворотке крови человека. Например, процент страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, которые представляют собой мультимеры, включая димеры, тримеры, тетрамеры и мультимеры более высокого порядка из гомодимеров, превышает 20% и может превышать 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или даже 90%.
[000167] Аминокислотная последовательность мономера шарнирной области IgG2 человека имеет следующий вид: ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO: 4). Мутация любого одного из 4 цистеинов в SEQ ID NO: 4 может быть связана со значительно уменьшенной мультимеризацией страдомера. Мономер шарнирной области IgG2 содержит два участка C-X-X-C. Следовательно, мономеры страдомера согласно настоящему изобретению могут содержать полную последовательность мономера шарнирной области IgG2 из 12 аминокислот или любой или оба из четырех аминокислотных коровых участков, наряду с мономерами домена Fc. В то время как X-X коровых структур могут представлять собой любую аминокислоту, в предпочтительном варианте реализации последовательность X-X представляет собой V-E или P-P. Специалист в данной области техники поймет, что мономер шарнирной области IgG2 может состоять из любой части последовательности шарнирной области, в дополнение к коровым структурам из четырех аминокислот, включая всю последовательность шарнирной области IgG2 и некоторые или все из последовательностей мономеров домена СН2 и СН3 IgG2. Не желая быть связанными какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения полагают, что домен мультимеризации шарнирной области IgG2 может формировать мультимеры путем взаимодействия с любой частью мономера страдомера. Иными словами, шарнирная область IgG2 одного мономера страдомера может связываться с шарнирной областью IgG2 другого мономера страдомера, формируя тем самым димер из гомодимера или мультимеры более высокого порядка, сохраняя при этом повышенное функциональное связывание с рецепторами Fc, по сравнению с природной областью Fc IgG1. В другом варианте, домен шарнирной области IgG2 одного мономера страдомера может связываться с шарнирной областью IgG1 другого мономера страдомера, формируя тем самым димер из гомодимера или мультимеры более высокого порядка, сохраняя при этом повышенное функциональное связывание с рецепторами Fc, по сравнению с природной областью Fc IgG1. Также возможно, что шарнирная область IgG2 одного мономера страдомера связывается с другой частью домена Fc IgG1, т.е. с доменом СН2 или СН3 другого мономера страдомера, с образованием димера из гомодимеров или мультимеров более высокого порядка при сохранении повышенного функционального связывания с рецепторами Fc, по сравнению с природной областью Fc IgG1.
[000168] Лейциновые и изолейциновые молнии также можно применять в качестве мультимеризующейся области. Известно, что лейциновые и изолейциновые молнии (суперспиральные домены) облегчают образование димеров, тримеров и тетрамеров белков (Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993); O'Shea et al. Science 243:538 (1989)). Кластерные страдомеры могут быть получены, используя природную склонность изолейциновой молнии формировать тример.
[000169] Несмотря на то, что специалист в данной области техники поймет, что могут быть использованы различные типы лейциновых и изолейциновых молний, в предпочтительном варианте реализации используется изолейциновая молния из транскрипционного регулятора GCN4, модифицированная, как описано в литературе Morris et al., Mol. Immunol. 44:3112-3121 (2007); Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)): GGGSIKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGERGHGGG (SEQ ID NO: 5). Указанная последовательность изолейциновой молнии представляет собой лишь одну из нескольких возможных последовательностей, которые могут быть использованы для мультимеризации мономеров домена Fc. Несмотря на то, что может быть использована полная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 5, подчеркнутая часть последовательности представляет собой коровую последовательность изолейциновой молнии, которая может быть использована в кластерном страдомере согласно настоящему изобретению. Следовательно, мономеры страдомеров согласно настоящему изобретению могут содержать полную аминокислотную последовательность изолейциновой молнии или коровую последовательность из 28 аминокислот, наряду с одним или более мономерами домена Fc. Специалист в данной области техники также поймет, что изолейциновая молния может состоять из любой части молнии в дополнение к 28-аминокислотной коровой структуре и, следовательно, может содержать более 28 аминокислот, но не полную последовательность.
[000170] GPP представляет собой аминокислотную последовательность, обнаруженную в коллагене человека, которая вызывает связывание белок коллагена:белок. Несмотря на то, что специалист в данной области техники поймет, что различные типы повторов GPP могут быть использованы в качестве домена мультимеризации, в предпочтительном варианте реализации используется повтор глицин-пролин-пролин, описанный в литературе (Fan et al FASEB Journal 3796 vol. 22 2008) (SEQ ID NO: 6). Указанная последовательность повтора глицин-пролин-пролин является лишь одной из нескольких возможных последовательностей, которые могут быть использованы для мультимеризации мономеров домена Fc. Несмотря на то, что может быть использована вся последовательность, представленная в SEQ ID N O: 6, повторы различной длины также можно использовать для мультимеризации мономеров домена Fc. Аналогичным образом, повторы, содержащие различные аминокислоты в повторах GPP, также могут быть заменены.
[000171] Следует понимать, что страдомеры и другие молекулы биомиметиков, описанные в настоящем документе, могут быть получены из любого из различных видов, включая человека. Действительно, домены Fc, или неполные домены Fc, в любой из молекул биомиметиков согласно настоящему изобретению могут быть получены из иммуноглобулина более чем из одного (например, из двух, трех, четырех, пяти или более) вида. Однако, как правило, их получают из одного вида. Кроме того, следует понимать, что любой из способов, описанных в настоящем документе (например, способов лечения), можно применять у любого вида. Как правило, все компоненты биомиметика, которые применяют у вида, представляющего интерес, будут получены из указанного вида. Однако также могут быть использованы биомиметики, в которых все компоненты получены из различных видов или более чем из одного вида (включая и исключая вид, у которого применяют соответствующий способ).
[000172] Конкретные домены CH1, CH2, CH3 и СН4 и шарнирные области, которые содержат домены Fc и неполные домены Fc страдомеров и других биомиметиков согласно настоящему изобретению, могут быть независимо выбраны, исходя из подкласса иммуноглобулина, а также организма, из которого они получены. Соответственно, страдомеры и другие биомиметики, раскрытые в настоящем документе, могут содержать домены Fc и неполные домены Fc, которые независимо получены из различных типов иммуноглобулинов, таких как IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgA1, IgD, IgE и IgM человека, IgG2a мыши или IgA или IgB собаки. Аналогичным образом, каждый домен Fc и неполный домен Fc может быть получен из различных видов, предпочтительно видов млекопитающих, включая приматов, отличных от человека (например, обезьян, бабуинов и шимпанзе), человека, мышь, крысу, крупный рогатый скот, лошадей, кошек, собак, свиней, кроликов, коз, овец, оленей, хорьков, грызунов, морских свинок, хомяков, летучих мышей, птиц (например, кур, индеек и уток), рыб и рептилий, для получения видоспецифичных или химерных молекул страдомеров.
[000173] Отдельные домены Fc и неполные домены Fc также могут быть гуманизированы. Специалист в данной области техники понимает, что различные области Fc и неполные домены Fc будут обеспечивать различные типы функциональных возможностей. Например, FcRn специфично связывается с иммуноглобулинами IgG, но незначительно связывается с другими классами иммуноглобулинов. Специалист в данной области техники также понимает, что различные вредные последствия могут быть связаны с использованием определенных доменов Ig, такие как анафилаксия, связанная с инфузиями IgA. Биомиметики, раскрытые в настоящем изобретении, как правило, должны быть сконструированы так, чтобы избежать перечисленных последствий, хотя при определенных обстоятельствах такие эффекты могут быть желательными.
[000174] В область настоящего изобретения также включены страдомеры, содержащие домены Fc и неполные домены Fc, содержащие аминокислоты, которые отличаются от природных аминокислотных последовательностей домена Fc или неполного домена Fc. Предпочтительные домены Fc для включения в биомиметические соединения согласно настоящему изобретению обладают измеримой специфичной аффинностью связывания с системой комплемента. Первичные аминокислотные последовательности и структуры многочисленных доменов Fc и мономеров доменов Fc, полученные с помощью рентгеновской кристаллографии, доступны в данной области техники. См., например, Woof JM, Burton DR. Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures. Nat Rev Immunol. 2004 Feb;4(2):89-99. Типичные домены Fc, способные связываться с рецепторами Fcγ, включают домены Fc из IgG1 человека (SEQ ID NO: 2 или 3). Указанные нативные последовательности были подвергнуты интенсивному исследованию структуры и функции, включая картирование функциональных последовательностей с помощью сайт-направленного мутагенеза. На основании результатов указанных предварительных исследований структуры и функции и доступных данных кристаллографии специалист в данной области техники может разработать функциональные варианты последовательности домена Fc, сохраняя при этом способность связываться с системой комплемента. Например, остатки цистеина могут быть добавлены, чтобы усилить образование дисульфидных связей между мономерами, или удалены, чтобы изменить взаимодействие между гомодимерами страдомера. Кроме того, специалист в данной области техники может разработать функциональные варианты последовательности домена Fc, сохраняя при этом повышенную способность связываться с системой комплемента, или может разработать функциональные варианты последовательности домена Fc с еще более повышенной способностью к связыванию с системой комплемента.
[000175] Замены аминокислот могут быть обнаружены по всей последовательности домена Fc или могут быть определены для конкретных неполных доменов Fc, которые составляют домен Fc. Функциональные варианты домена Fc, используемые в страдомерах и других биомиметиках согласно настоящему изобретению, будут иметь по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с нативным доменом Fc. Аналогичным образом, функциональные варианты неполных доменов Fc, используемые в страдомерах и других биомиметиках согласно настоящему изобретению, будут иметь по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с нативным неполным доменом Fc.
[000176] Специалист в данной области техники понимает, что в область настоящего изобретения также включено применение функциональных вариантов мономеров домена Fc в конструировании мономеров фрагмента Fc, мономеров неполного фрагмента Fc, мономеров страдомера и других мономеров согласно настоящему изобретению. Функциональные варианты мономеров домена Fc будут иметь по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с последовательностью мономера нативного домена Fc.
[000177] Аналогичным образом, в область настоящего изобретения также включено применение функциональных вариантов мономеров неполного домена Fc в конструировании мономеров фрагмента Fc, мономеров неполного фрагмента Fc, мономеров домена Fc, мономеров страдомера и других мономеров согласно настоящему изобретению. Функциональные варианты мономеров неполного домена Fc будут иметь по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с последовательностью мономера нативного неполного домена Fc.
[000178] Замены аминокислот могут уменьшать, увеличивать или оставлять без изменения аффинность связывания страдомера с FcRn или каноническими рецепторами Fcγ. Предпочтительно такие изменения аминокислот будут представлять собой консервативные замены аминокислот, однако, подходящие изменения включают делеции, добавления и другие замены. Консервативные замены аминокислот, как правило, включают изменения в пределах следующих групп: глицин и аланин; валин, изолейцин и лейцин; аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота; аспарагин, глутамин, серин и треонин; лизин, гистидин и аргинин; и фенилаланин и тирозин. Кроме того, замена аминокислоты может повысить прочность мультимеризации, например, путем добавления остатков цистеина.
[000179] В настоящей заявке термин «функциональный вариант» относится к последовательности, гомологичной эталонной последовательности, которая способна опосредовать такие же биологические эффекты, как и эталонная последовательность (в случае полипептида), или которая кодирует полипептид, который способен опосредовать такие же биологические эффекты, как и полипептид, кодируемый эталонной последовательностью (в случае полинуклеотида). Например, функциональный вариант любого из описанных в настоящем документе биомиметиков будет иметь определенную степень гомологии или идентичности, и будет способен к иммуномодуляции моноцитов или АПК. Функциональные варианты последовательности включают полинуклеотиды и полипептиды. Идентичность последовательностей обычно оценивают с помощью BLAST 2.0 (Basic Local Alignment Search Tool) с использованием параметров по умолчанию: Фильтр - активирован, оценочная матрица BLOSUM62, размер слова -3, значение E - 10, штраф за пропуск - 11,1 и сопоставления - 50. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения функциональный вариант включает аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, или по меньшей мере 99% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в настоящем документе.
[000180] Помимо состава аминокислотной последовательности нативных доменов Fc, содержание углеводов в области Fc, как известно, играет важную роль в структуре домена Fc. См., например, Robert L. Shields, et al. Lack of Fucose on Human IgG1 N-Linked Oligosaccharide Improves Binding to Human FcγRIII and Antibody-dependent Cellular Toxicity. J. Biol. Chem., Jul 2002; 277: 26733 - 26740 (doi:10.1074/jbc.M202069200); Ann Wright and Sherie L. Morrison. Effect of C2- Associated Carbohydrate Structure on Ig Effector Function: Studies with Chimeric Mouse-Human IgG1 Antibodies in Glycosylation Mutants of Chinese Hamster Ovary Cells. J. Immunol, Apr 1998; 160: 3393 - 3402. Содержание углеводов можно контролировать с использованием, например, конкретных систем экспрессии белка, включая конкретные клеточные линии или ферментативную модификацию в условиях in vitro. Следовательно, в область настоящего изобретения включены страдомеры, содержащие домены Fc с нативным содержанием углеводов голоантитела, из которого были получены домены, а также биомиметические соединения с измененным содержанием углеводов. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения мультимерные компоненты страдомера характеризуются различным характером гликозилирования по сравнению с гомодимерным компонентом аналогичного страдомера. Согласно одному из вариантов реализации страдомер, связывающийся с системой комплемента, содержит мутации, которые не изменяют характер гликозилирования, но уменьшают или устраняют связывание с каноническими рецепторами Fc и/или связывание с рецептором FcRn.
Предпочтительные варианты реализации страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента
[000181] Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, описанные в настоящем документе, обеспечивают повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с рецепторами Fc. Следовательно, страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, описанные в настоящем документе, упоминаются в некоторых вариантах реализации как «страдомеры с предпочтительным связыванием с системой комплемента» или «страдомеры, связывающие комплемент». Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению представляют собой «универсальные страдомеры», которые связываются с одним или более компонентами каскада системы комплемента, а также связываются с любым из FcγR.
[000182] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 13), в настоящем документе обозначен как G997. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G997 неожиданно проявляет сильное связывание с C1q и ингибирование CDC, при этом он сохраняет связывание с FcγRI, ингибирующим рецептором FcγRII и FcRn, а также значительно уменьшенное связывание с активирующими рецепторами FcγRIIa и FcγRIIIa.
[000183] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 267, 268, 297 и 324 (SEQ ID NO: 14 или 15), в настоящем документе обозначен как G998. Мультимеризующийся страдомер, содержащий мутацию Fc N297A (но не содержащий мутаций в положении 267, 268 или 324), связывается с C1q без высокой аффинности и авидности, проявляет умеренное ингибирование CDC и не имеет заметного связывания с FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIIIa. Напротив, авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что введение дополнительных мутаций Fc S267E, H268F и/или S324T, применительно к страдомеру на основе GL-2045, содержащему мутацию N297A (страдомер, обозначенный G998), дополнительно существенно усиливает связывание с C1q и ингибирование CDC. Еще более удивительным фактом явилось то, что полученное соединение активно связывается с FcγRIIb. Следовательно, в некоторых вариантах реализации, G998 неожиданно проявляет еще более сильное связывание с C1q и ингибирование CDC, чем исходный страдомер G045c, а также полностью сохраняет связывание с FcRn и в основном сохраняет связывание с FcγRI, по сравнению с исходным G045c, а также частично сохраняет связывание с ингибирующим рецептором FcγRIIb со значительно уменьшенным связыванием с активирующими рецепторами FcγRIIa и FcγRIIIa. Чтобы подчеркнуть непредсказуемость указанных мутаций, в тех случаях, когда ряд аналогичных мутаций вводят в страдомер с N-концевым доменом мультимеризации (G019), по сравнению со страдомером с C-концевым доменом мультимеризации (GL-2045), такое предпочтительное связывание с C1q полностью устранено (см. соединение G999). Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен страдомер, содержащий точечные мутации в положениях 267, 268, 297 и 324, и дополнительно содержащий мутации в положениях 253, 310 и 435. Согласно другим вариантам реализации в настоящем изобретении предложены страдомеры, содержащие мутации в положениях 233, 234, 235, 253, 267, 268, 297, 299, 310, 324 и 435, а также делецию аминокислоты в положении G236. Следовательно, согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен страдомер, содержащий следующие мутации: I253A, S267E, H268F, N297A, H310A, S324T и H435A; или страдомер, содержащий следующие мутации: E233P, L234V, L235A, I253A, S267E, H268F, N297A, T299A, H310A, S324T и H435A, а также делецию G236. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения полученные страдомеры сохраняют связывание с C1q и ингибирование CDC, аналогично страдомеру в соответствии с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 14 или 15, и проявляют сниженное связывание с FcγRIIb и/или FcγRI, по сравнению со страдомером в соответствии с последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 14 или 15.
[000184] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 234, 235, 267, 268, 297 и 324 (SEQ ID NO: 21 или 22), в настоящем документе обозначен как G1033. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1033 (например, применительно к мутациям N297A и L234A/L235A) неожиданно сохраняет некоторую степень связывания с FcγRI и FcγRIIa, помимо сильного связывания с C1q и ингибирования CDC.
[000185] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 236, 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 10 или 11), в настоящем документе обозначен как G994. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G994 сохраняет прочное связывание с FcγRI и FcRn и минимальное связывание с FcγRIIb, при этом не проявляет значительного связывания с активирующими рецепторами FcγRIIa и FcγRIIIa. Полученные результаты были особенно неожиданными, исходя из данных в работе Shields et al. (Shields, et al. J. Biol. Chem., 276(9):6591 (2001)), в которой описано, что мутации в положениях 233 или 236 приводят к устранению связывания с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa и FcRn. Эти результаты также подчеркивают непредсказуемость данной точечной мутации применительно к страдомеру. Мультимеризующийся страдомер, содержащий мутации Fc E233P и G236R (но не содержащий мутации в положении 267, 268 или 324), связывается с C1q без высокой аффинности и авидности, но не вызывает существенного ингибирования CDC и не проявляет существенного связывания с FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIIIa. Напротив, авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что введение дополнительных мутаций Fc S267E, H268F и/или S324T, применительно к страдомеру, содержащему мутации E233P и G236R (страдомер, обозначенный G994), дополнительно повышает связывание с C1q и ингибирование CDC, при этом сохраняет некоторую степень связывания с FcγRIIb.
[000186] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 234, 235, 267, 268, 297 и 324 и делецию G236 (SEQ ID NO: 19), в настоящем документе обозначен как G1022. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1022 неожиданно связывается с C1q, ингибирует CDC и сохраняет прочное связывание с FcγRIIa и незначительное связывание с FcγRIIb, однако неожиданно не сохраняет связывание с высокоаффинными FcγRI.
[000187] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 234, 235, 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 63), в настоящем документе обозначен как G1032. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1032 неожиданно связывается с C1q и ингибирует CDC, сохраняя при этом прочное связывание со всеми каноническими рецепторами Fc, и проявляет умеренно прочное связывание с FcRn.
[000188] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 234, 235, 267, 268 и 324 и делецию G236 (SEQ ID NO: 62), в настоящем документе обозначен как G1023. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1023 неожиданно связывается с C1q и ингибирует CDC, сохраняя при этом прочное связывание со всеми каноническими рецепторами Fc.
[000189] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 265, 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 18), в настоящем документе обозначен как G1006. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1006 неожиданно связывается с C1q и ингибирует CDC, сохраняя при этом прочное связывание с FcRn и FcγRI и умеренное связывание с FcγRIIa, несмотря на присутствие мутации в положении 265, которая, как можно было бы ожидать, уменьшает связывание со всеми каноническими рецепторами Fc.
[000190] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 238, 267, 268, 297 и 324 (SEQ ID NO: 20), в настоящем документе обозначен как G1027. В некоторых вариантах реализации G1027 неожиданно связывается с C1q и ингибирует CDC, но при этом сохраняет способность к связыванию с каноническим рецептором Fc, несмотря на мутации в положениях 238 и 297, и сохраняет прочное связывание с FcγRI и FcRn и незначительное связывание с FcγRIIa и FcγRIIb.
[000191] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 236, 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 12), в настоящем документе обозначен как G996. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G996 неожиданно связывается с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIb, помимо связывания с C1q и ингибирования CDC. Также неожиданным фактом явилось то, что G996 не связывался с каноническими рецепторами у мыши, что делает его идеальным соединением для оценки истинного ингибирования CDC у грызунов. В отличие от G996 мультимеризующийся страдомер, содержащий мутацию Fc G236R (но не содержащий мутации в положении 267, 268 или 324), обозначен как G990 и связывается с C1q без высокой аффинности и авидности, но не вызывает заметного ингибирования CDC. G990 также не проявляет значимого связывания с FcγRIIa, FcγRIIb или FcγRIIIa. Авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что введение дополнительных мутаций Fc S267E, H268F и/или S324T, применительно к G990, дополнительно усиливает связывание с C1q и ингибирование CDC. Еще более удивительным фактом явилось то, что G996 связывается с FcγRIIb с высокой авидностью.
[000192] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 236, 267, 268, 324 и 328 (SEQ ID NO: 23), в настоящем документе обозначен как G1042. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1042 неожиданно прочно связывается с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIb. Следовательно, добавление мутации в положении 328 (при сравнении G1042 с G994, содержащим точечные мутации в положениях 233, 236, 267, 268 и 324) неожиданно привело к прочному связыванию с обоими рецепторами, FcγRIIa и FcγRIIb, несмотря на тот факт, что, как ожидалось, мутация в положении 328 должна была увеличить связывание только с FcγRIIb.
[000193] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации P238D, D265G, S267E, H268F и S324T (SEQ ID NO: 24), в настоящем документе обозначен как G1043. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1043 неожиданно прочно связывается с FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRI, несмотря на тот факт, что мутации в положениях 238 и 265, как ожидалось, должны были уменьшить связывание с FcγRIIa и FcγRI.
[000194] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации P238D, D265W, S267E, H268F и S324T (SEQ ID NO: 25), в настоящем документе обозначен как G1046. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1046 неожиданно прочно связывается с FcγRI, а также проявляет повышенное связывание с FcγRIIa. Полученный результат был неожиданным, поскольку мутация в положении 238, как ожидалось, должна была увеличить связывание с FcγRIIb, но не связывание с FcγRIIa.
[000195] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 234, 235, 267, 268, 297, 324 и 328, и делецию аминокислоты в положении 236 (SEQ ID NO: 26), в настоящем документе обозначен как G1050. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1050 прочно связывается с FcγRIIa и FcγRIIb. Неожиданным фактом явилось то, но связывание с низкоаффинным FcγRII было сохранено, в то время как связывание с высокоаффинным FcγRI отсутствовало.
[000196] Страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации P238D, S267E, H268F и S324T (SEQ ID NO: 27), в настоящем документе обозначен как G1025. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1025 неожиданно прочно связывается с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIb. Полученный результат был неожиданным, поскольку мутация в положении 238, как ожидалось, должна была уменьшить связывание с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIIa, однако уменьшилось только связывание с FcγRIIIa. Еще более неожиданным фактом явилось то, что при введении аналогичного набора мутаций в страдомер с N-связанным доменом мультимеризации (G1024), в отличие от С-связанного страдомера GL-2045, указанное предпочтительное связывание с системой комплемента было полностью устранено. Полученные результаты еще раз подчеркивают непредсказуемый характер указанных мутаций применительно к мультимеризующемуся страдомеру.
[000197] Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложены страдомеры, содержащие остов G019 (шарнирная область IgG2 - шарнирная область IgG1 - СН2 IgG1 СН3 IgG1, в направлении от амино- к карбоксильному концу) и содержащие одну или более точечных мутаций в домене Fc. Полученный страдомер, содержащий точечные мутации в положениях 267, 268 и 324 (SEQ ID NO: 17), в настоящем документе обозначен как G1003. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1003 неожиданно связывался с C1q и устойчиво ингибировал CDC, в то время как исходный страдомер проявляет минимальное связывание с C1q и не ингибирует CDC, несмотря на то, что исходное соединение G019 образует мультимеры более высокого порядка, способные к авидному взаимодействию с рецепторами.
[000198] Страдомер на основе G019, содержащий точечные мутации в положениях 267, 268, 324 и 328 (SEQ ID NO: 64), в настоящем документе обозначен как G1049. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G1049 неожиданно проявлял прочное связывание со всеми каноническими FcγR, наряду с ингибированием системы комплемента и способностью к связыванию с C1q.
[000199] Авторы настоящего изобретения обнаружили неожиданный факт, что при введении определенных мутаций Fc, которые, как было описано, увеличивают аффинность моноклонального антитела в отношении системы комплемента, в область Fc мультимеризующегося страдомера, который существенно не связывается с FcγRIIb, полученное соединение восстанавливает связывание с FcγRIIb. Например, каждый из G994, G996 и G998 связывается с FcγRIIb, в некоторых случаях с проявлением авидности, несмотря на то, что соответствующие страдомеры, содержащие аналогичную мутацию, за исключением мутаций S267E, H268F и S324T, не проявляют авидного связывания с FcγRIIb.
[000200] Дополнительные страдомеры были созданы на основе каждого из страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994 и G998. В первом наборе страдомеров, полученных из G994, мутации G994 E233P, H268F и S324T были сохранены, остаток в положении 267 представлял собой остаток дикого типа (серин), и различные мутации также были введены в положение 236: аргинин (как в G994) или аминокислота, аналогичная аргинину. Полученные страдомеры были названы G1103, G1088, G1089, G1104, G1082, G1105 и G1106. Степень, с которой указанные страдомеры связываются с FcγR и компонентом комплемента C1q, существенно варьировалась и была непредсказуемой, это свидетельствует о том, что мутация в положении 236 страдомера G994 оказывает непредсказуемое действие. Во втором наборе страдомеров, полученных из G994, мутации G994 E233P, H268F и S324T были сохранены, остаток в положении 236 представлял собой остаток дикого типа (глицин), и различные мутации также были введены в положение 267: глутаминовая кислота (как в G994) или аминокислота, аналогичная глутаминовой кислоте. Полученные страдомеры были названы G1102, G1100, G1101, G1125, G1108, G1109 и G1084. Аналогичным образом, степень, с которой страдомеры связываются с FcγR и компонентом системы комплемента C1q, существенно варьировалась и была непредсказуемой, это указывает на то, что, сходно с положением 236, мутация в положении 267 страдомера G994 оказывает непредсказуемое действие. В следующем наборе страдомеров на основе G994 комбинации мутаций в положениях 236 и 267 были испытаны и названы G1110, G1111, G1112, G1114, G1115, G1116, G1117, G1118, G1119, G1120, G1121, G1122, G1123, G1124, G1128, G1129, G1130 и G1131. Профили связывания указанных страдомеров с FcγR и системой комплемента были непредсказуемыми.
[000201] Также были получены и испытаны производные G998. В первом наборе производных G998 мутации G998 H268F и S324T были сохранены, остаток в положении 267 представлял собой остаток дикого типа (серин) или был заменен аминокислотой, сходной с серином, и также была добавлена мутация в положении 299 (T299A). Полученные соединения были названы G1071d2, G1068, G1094, G1092, G1096, G1107, G1093 и G1095. Мутация T299A была сконструирована так, чтобы устранить сайт дегликозилирования. Степень, с которой указанная мутация снижает связывание с FcγR, была непредсказуемой, применительно к структуре страдомера и другим мутациям. Кроме того, были получены производные G998, содержащие мутации H268F, S324T и N297A (для дегликозилирования) G998, но различные мутации в положении 267. Полученные соединения были названы G1069, G1070, G1132, G1074 и G1075 и также проявляли непредсказуемые профили связывания с FcγR и системой комплемента. Неожиданным фактом явилось то, что только одно из соединений этой группы (G1069) сохраняло связывание с системой комплемента при одновременном устранении связывания с FcγR. Указанное соединение, следовательно, представляло собой соединение с предпочтительным связыванием с системой комплемента.
[000202] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G994, G998, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027, G996 или другой мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, вводят субъекту, который имеет острое состояние, такое как, например, острый гемолиз (например, гемолитическую болезнь новорожденных), аутоиммунная гемолитическая анемия, медикаментозная гемолитическая анемия, приобретенная гемолитическая анемия, трансфузионные реакции/аллоиммунная гемолитическая анемия, инфекционная гемолитическая анемия (например, анемии, которые связаны с переносимыми клещами заболеваниями, включая бактериальные (болезнь Лайма, тиф, пятнистая лихорадка Скалистых гор, туляремия, эрлихоз), вирусные (менингоэнцефалит и геморрагическая лихорадка) и протозойные (пироплазмоз) клещевые инфекции; или те, которые связаны с москитными инфекционными заболеваниями, такими как малярия, включая гемоглобинурийную лихорадку, лихорадку денге, чикунгунью, лихорадку вируса Зика или вируса Эбола), ассоциированные с токсинами гемолитические анемии (например, токсинами из змеиного яда, токсичными химическими веществами или токсинами клещей), злокачественную гипертензию, ожоги или синдром Рея. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, G998, G994, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027, G996 вводят субъекту, нуждающемуся в этом, с помощью внутривенного введения.
[000203] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, G998, G994, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027, G996 вводят субъекту, который имеет хроническое заболевание или состояние. Хронические заболевания и состояния включают, например, заболевания почек, дегенерацию желтого пятна, хронический гемолиз (например, пароксизмальную ночную гемоглобинурию), механический гемолиз (например, из-за искусственного сердечного клапана, устройства для искусственного кровообращения или другого устройства, используемого в кровеносных сосудах, гемодиализа с использованием или без целлофановых мембран, преэклампсии или эклампсии или тромботической тромбоцитопенической пурпуры), наследственный сфероцитоз, овалоцитоз, дефицит пируваткиназы, дефицит G6PD, серповидно-клеточную анемию, талассемию, наследственную гемолитическую анемию, гемолитический уремический синдром, комплекс иммунных расстройств с вовлечением системы комплемента (например, гепатит В, гепатит C, смешанную криоглобулинемию, лепроматозную лепру и бактериемический шок), первичный билиарный цирроз печени, целиакию, множественную миелому и вызванный крапивницей васкулит. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения G994 вводят субъекту, нуждающемуся в этом, с помощью подкожного введения.
[000204] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения мультимеризующийся страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, G998, G994, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027 и G996 вводят субъекту, который имеет заболевание почек. Заболевания почек включают, но не ограничиваются ими, мембранопролиферативный гломерулонефрит, мезангиальный пролиферативный гломерулонефрит, идиопатический пролиферативный гломерулонефрит, очаговый склерозирующий гломерулонефрит, очаговый сегментарный гломерулосклероз, заболевание тонкой базальной мембраны, нефрит, волчаночный нефрит, фибриллярный гломерулонефрит, иммунотактоидный гломерулонефрит, болезнь Брайта, болезнь Бергера/IgA-опосредованную нефропатию, нефросклероз, нефроз, нефротический синдром, мембранозную нефропатию, мембранозный нефрит, постинфекционный гломерулонефрит, тубулярный некроз, медикаментозную нефротоксичность и синдром Гудпасчера.
[000205] Таким образом, авторы настоящего изобретения обнаружили, что могут быть получены отдельные страдомеры, которые обладают активностью, направленной на преимущественное связывание с системой комплемента, проявляя прочное связывание с C1q и уменьшенное связывание с FcγR, по сравнению с исходным страдомером, содержащим нативную последовательность домена Fc, однако активность, которой обладает каждый отдельный страдомер по отношению к связыванию с C1q и FcγR, не может быть предсказана на основании данных о влиянии указанной мутации в моноклональном антителе.
[000206] Аминокислотные последовательности типичных страдомеров, включенных в область настоящего изобретения, приведены в таблице 1. Мутированные аминокислоты указаны в таблице (текст, выделенный серым цветом).
Таблица 1. Типичные страдомеры, связывающиеся с системой комплемента
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты | Аминокислотная последовательность |
G994 (DEL) |
10 | E233P G236R S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G994 (EEM) | 11 | E233P G236R S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G996 | 12 | G236R S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G997 | 13 | S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G998 (DEL) |
14 | S267E H268F N297A S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G998 (EEM) |
15 | S267E H268F N297A S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G989 | 16 | E233P G236R |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1003 | 17 | S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGERKCCVECPPCPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
G1006 | 18 | D265A S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVAVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1022* | 19 | E233P L234V L235A S267E H268F N297A S324T Делеция G236 |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1027 | 20 | P238D S267E H268F N297A S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGDSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1033 (DEL) |
21 | L234A L235A S267E H268F N297A S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1033 (EEM) |
22 | L234A L235A S267E H268F N297A S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1042 | 23 | E233P G236R S267E H268F S324T L328F |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1043 | 24 | P238D D265G S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGDSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVGVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1046 | 25 | P238D D265W S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGDSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVWVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1050 | 26 | E233P L234V L235A S267E H268F N297A S324T L328F Делеция G236 |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1025 | 27 | P238D S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGDSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1088 | 28 | E233P G236Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLQGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1089 | 29 | E233P G236R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1082 | 30 | E233P G236H H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLHGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1105 | 31 | E233P G236N H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLNGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1106 | 32 | E233P G236K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLKGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1100 | 33 | E233P S267R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1108 | 34 | E233P, S267N H268F S324T | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVNFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1084 | 35 | E233P S267K H268F S324T | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1110 | 36 | E233P G236D S267R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLDGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1112 | 37 | E233P G236R S267R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1113 | 38 | E233P G236R S267D H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1115 | 39 | E233P G236E S267R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLEGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1116 | 40 | E233P G236H S267K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLHGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1118 | 41 | E233P G236Q S267Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLQGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1119 | 42 | E233P G236R S267K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1120 | 43 | E233P G236R S267Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1121 | 44 | E233P G236D S267K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLDGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1122 | 45 | E233P G236H S267Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLHGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1123 | 46 | E233P G236Q S267R H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLQGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1124 | 47 | E233P G236K S267K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLKGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1128 | 48 | E233P G236K S267N H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLKGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVNFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1129 | 49 | E233P G236N S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLNGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1130 | 50 | E233P G236N S267K H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLNGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1131 | 51 | E233P G236R S267N H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVNFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1071d2 | 52 | H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1096 | 53 | S267R H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1093 | 54 | S267K H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1095 | 55 | S267N H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVNFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1069 | 56 | H268F S324T N297A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1070 | 57 | S267K H268F S324T N297A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1132 | 58 | S267R H268F S324T N297A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVRFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1074 | 59 | S267D H268F S324T N297A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1075 | 60 | S267Q H268F S324T N297A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
*Для страдомеров G1022, G1023 и G1050 делеция G в положении 236 показана как зачеркивание/жирный шрифт.
Таблица 2. Универсальные страдомеры
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты | Аминокислотная последовательность |
G990 | 61 | G236R | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLRGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1023* | 62 | E233P L234V L235A S267E H268F S324T Делеция G236 |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1032 | 63 | L234A L235A S267E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1049 | 64 | S267E H268F S324T L328F |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGERKCCVECPPCPEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
G1103 | 65 | E233P G236E H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLEGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1104 | 66 | E233P G236D H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLDGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1102 | 67 | E233P S267Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1101 | 68 | E233P S267D H268F S324T | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1125 | 69 | E233P S267H H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVHFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1109 | 70 | E233P S267E H268F S324T | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1111 | 71 | E233P G236D S267Q H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLDGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1114 | 72 | E233P G236Q S267D H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLQGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1117 | 73 | E233P G236D S267D H268F S324T |
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPPLLDGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1068 | 74 | S267E H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1094 | 75 | S267Q H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVQFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1092 | 76 | S267D H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVDFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
G1107 | 77 | S267H H268F S324T T299A | METDTLLLWVLLLWVPGSTGEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVHFEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSAYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVTNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKERKCCVECPPCP |
[000207] Связывающие комплемент белки, такие как моноклональное антитело экулизумаб (антитело к C5), были использованы в данной области техники для блокирования пути системы комплемента в качестве способа лечения заболеваний, опосредованных комплементом. Биомиметики согласно настоящему изобретению обеспечивают повышенное связывание с компонентами системы комплемента, например, C1q, посредством определенных мутаций доменов Fc. Например, биомиметики согласно настоящему изобретению содержат точечную мутацию в положении 267 и/или 268, и/или 324 домена Fc IgG1. Биомиметики, связывающиеся с системой комплемента, согласно настоящему изобретению также проявляют измененное связывание с FcRn, FcγRI, FcγRII, и/или FcγRIII, по сравнению с доменами Fc IgG1 дикого типа, как правило, путем, который невозможно предсказать на основании литературных данных, описывающих мутации, содержащиеся в биомиметиках согласно настоящему изобретению. Следовательно, согласно одному варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению представляет собой страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, которые способны к мультимеризации и проявляют повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с одним или более каноническими FcγR и/или FcRn, при сопоставлении с нормальным неагрегированным иммуноглобулином. Согласно другому варианту биомиметики согласно настоящему изобретению представляют собой страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, которые способны к мультимеризации и проявляют повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с одним или более каноническими FcγR и/или FcRn, при сопоставлении с нормальным агрегированным иммуноглобулином. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению представляют собой страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, которые способны к мультимеризации и проявляют повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с одним или более каноническими FcγR и/или FcRn, при сопоставлении с моноклональным антителом, содержащим аналогичные мутации в своем домене Fc. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения биомиметики согласно настоящему изобретению имеют измененный период полувыведения, по сравнению с нативным IgG, IVIG или исходным страдомером.
[000208] В настоящей заявке термины «FcγR» и «рецептор Fcγ» включают всех членов семейств Fcγ RI, RII и RIII. Рецептор Fcγ включает низкоаффинные и высокоаффинные рецепторы Fcγ, включая, но не ограничиваясь ими, FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) человека и его изотипы и аллотипы FcγRIIa LR, FcγRIIa HR, FcγRIIb и FcγRIIc; FcγRIII (CD 16) и его изотипы FcγRIIIa и FcγRIIIb. Специалист в данной области техники поймет, что в настоящем документе описание гомологов FcγR и FcγR, таких как те, которые описаны в Davis, et al. (2004) “Differential B cell expression of mouse Fc receptor homologs,” Int. Immunol., 16(9):1343-1353, будет применимо к будущим FcγR и связанным с ними изотипам и аллотипам, которые еще не были обнаружены.
[000209] Специфичное связывание обычно определяется как количество меченого лиганда, которое затем может быть замещено избытком немеченого лиганда при исследовании связывания. Однако это не исключает других способов оценки специфичного связывания, которые хорошо известны в данной области техники (например, Mendel CM, Mendel DB, 'Non-specific' binding. The problem, and a solution. Biochem J. 1985 May 15;228(l):269-72). Специфичное связывание может быть измерено различными способами, хорошо известными в данной области техники, такими как технология поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (коммерчески доступная от BIACORE®) или интерферометрия биослоя (коммерчески доступная от ForteBio®) для описания констант ассоциации и диссоциации иммунологически активных биомиметиков (Asian K, Lakowicz JR, Geddes C. Plasmon light scattering in biology and medicine: new sensing approaches, visions and perspectives. Current Opinion in Chemical Biology 2005, 9:538-544).
[000210] «Иммунологическая активность агрегированного нативного IgG» относится к свойствам мультимеризованного IgG, которые влияют на функционирование иммунной системы при воздействии агрегатов IgG на иммунную систему. Специфичные свойства нативного мультимеризованного IgG включают измененное специфичное связывание с FcγR, сшивание FcγR на поверхностях иммунных клеток или эффекторную функциональную способность мультимеризованного IgG, такую как антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC), фагоцитоз (ADCP) или фиксация системы комплемента (см., например, Nimmerjahn F, Ravetch JV. The anti-inflammatory activity of IgG: the intravenous IgG paradox. J Exp Med. 2007; 204:11-15; Augener W, Friedman B, Brittinger G. Are aggregates of IgG the effective part of high-dose immunoglobulin therapy in adult idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP) Blut. 1985;50:249-252; Arase N, Arase H, Park SY, Ohno H, Ra C, Saito T. Association with FcRgamma is essential for activation signal through NKR-Pl (CD161) in natural killer (NK) cells and NKl.1+ T cells. J Exp Med. 1997;186:1957-1963; Teeling JL, Jansen- Hendriks T, Kuijpers TW, et al. Therapeutic efficacy of intravenous immunoglobulin preparations depends on the immunoglobulin G dimers: studies in experimental immune thrombocytopenia. Blood. 2001;98: 1095-1099; Anderson CF, Mosser DM. Cutting edge: biasing immune responses by directing antigen to macrophage Fc gamma receptors. J Immunol. 2002; 168:3697-3701; Jefferis R, Lund J. Interaction sites on human IgG-Fc for FcγR: current models. Immunology Letters. 2002;82:57; Banki Z, Kacani L, Mullauer B, et al. Cross-Linking of CD32 Induces Maturation of Human Monocyte - Derived Dendritic Cells Via NF- {kappa} B Signaling Pathway. J Immunol. 2003;170:3963-3970; Siragam V, Brine D, Crow AR, Song S, Freedman J, Lazarus AH. Can antibodies with specificity for soluble antigens mimic the therapeutic effects of intravenous IgG in the treatment of autoimmune disease? J Clin Invest. 2005;l 15:155- 160). Эти свойства обычно оценивают путем сравнения со свойствами гомодимерного IgG.
[000211] Несмотря на то, что, как было обнаружено, мультимеры более высокого порядка эффективны при изменении иммунного ответа, как описано в настоящем документе, гомодимеры также являются эффективными иммуномодуляторами. Не желая быть связанными соответствием какой-либо конкретной теории, авторы настоящего изобретения полагают, что гомодимеры модулируют авидное связывание высокоупорядоченных мультимеров с течением времени и могут формировать более упорядоченные мультимеры в условиях in vivo. Не желая быть связанными соответствием какой-либо конкретной теории, авторы настоящего изобретения также полагают, что мультимеры согласно настоящему изобретению медленно диссоциируют от связанной мишени и интернализуются в иммунных клетках, экспрессирующих такие мишени, возможно, изменяя статус активации или скорость созревания указанной иммунной клетки в течение длительного периода времени или, возможно, навсегда. Результаты экспериментов по исследованию мультимеризации, описанные в настоящем документе, свидетельствуют о том, что в остальном смысле чистая популяция гомодимеров способна к мультимеризации в присутствии небольших количеств крови или фетальной бычьей сыворотки. Соответственно, в то время как высокоупорядоченные мультимеры более эффективны, чем гомодимерная фракция, в модулировании иммунного ответа, гомодимерная фракция естественно соединенных страдомеров согласно настоящему изобретению также может быть эффективным иммуномодулятором, частично путем мультимеризации гомодимера в присутствии небольших количеств крови или сыворотки. В этой связи под термином «высокоупорядоченные мультимеры» подразумевают мультимеры, помимо гомодимеров, которые образуются в растворе до инъекции субъекту, а также мультимеры, помимо гомодимеров, которые образуются в условиях in vivo.
[000212] Термины «иммуномодулирующая активность», «модуляция иммунного ответа», «модуляция иммунной системы» и «иммунная модуляция» означают изменение иммунных систем путем изменения видов активности, способностей и относительного количества одной или более иммунных клеток, включая созревание клетки определенного типа с сохранением этого типа или с превращением в другой тип клеток. Например, иммунная модуляция может представлять собой подавление или активацию иммунного ответа. Например, согласно одному аспекту иммунная модуляция может означать индукцию нечувствительности или толерантности в Т-клетке или В-клетке. В настоящей заявке термин «толерантность» относится к состоянию Т-клетки или В-клетки или иммунного ответа в целом, при котором Т-клетка или В-клетка или другая иммунная клетка не реагирует на свой когнатный антиген или антиген, эпитоп или другой сигнал, на который она обычно реагирует. В качестве другого примера, иммунная модуляция B-клеток памяти может приводить к селективному апоптозу определенных B-клеток памяти с сопутствующим снижением выработки конкретных антител. В качестве другого примера, виды иммуномодулирующей активности могут приводить к уменьшению уровней провоспалительных цитокинов или цитокинов, уровни которых обычно повышаются при аутоиммунных заболеваниях, таких как ИЛ-6 и ИЛ-8. В качестве другого примера, виды иммуномодулирующей активности могут приводить к активации NKT-клеток с последующей секрецией и расщеплением ФРО-бета. Блокирующие рецепторы иммунных клеток для предотвращения активации рецептора также включены в термин «иммунная модуляция» и могут отдельно упоминаться как «ингибиторная иммунная модуляция». В другом аспекте иммунная модуляция может представлять собой усиление или активацию иммунного ответа. Например, иммунная модуляция может означать активацию Т-клеток или В-клеток. В качестве другого примера, иммунная модуляция незрелых моноцитов может приводить к увеличению популяций более зрелых моноцитов, дендритных клеток, макрофагов или остеокластов, все из которых получены из незрелых моноцитов. В качестве другого примера, иммунная модуляция NK-клеток может приводить к усиленной антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC). В качестве другого примера, иммуномодулирующая активность может привести к увеличению популяции клеток с фенотипами, которые в ином случае не могут экспрессироваться на высоких уровнях, таких как клетки. Например, рецепторы иммунных клеток могут быть связаны с иммунологически активными биомиметиками и активировать внутриклеточную передачу сигналов, чтобы индуцировать различные изменения иммунных клеток, которые отдельно упоминаются как «активирующая иммунная модуляция».
[000213] Модуляция дендритных клеток может способствовать или ингибировать представление антигена Т-клеткам, например, путем индукции экспрессии CD86 и/или CD1a на поверхности дендритных клеток. CD1a представляет собой гликопротеин, родственный ГКГС класса I, который экспрессируется на поверхности клеток, представляющих антиген, в частности, дендритных клеток. CD1a участвует в представлении липидных антигенов Т-клеткам. CD86 также экспрессируется на поверхности клеток, представляющих антиген, и обеспечивает костимулирующий сигнал для Т-клеток. CD86 является лигандом для CD28 и CTLA-4 на поверхности Т-клеток для передачи активирующих и ингибирующих сигналов, соответственно. Следовательно, уровень экспрессии CD86 и его когнатных рецепторов определяет, будет ли индуцироваться устойчивость или специфичный иммунный ответ. В предпочтительном варианте реализации страдомеры согласно настоящему изобретению способны модулировать иммунный ответ, частично путем индукции экспрессии CD86 и CD1a на поверхности антигенпрезентирующих клеток, в частности, дендритных клеток. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения модулированная дендритная клетка взаимодействует с иммунными клетками, специфичными в отношении антигена антигенспецифичного страдомера.
[000214] Модуляция созревания моноцита относится к дифференцировке моноцита в зрелую АПК, макрофаг или остеокласт. Дифференцировку можно модулировать, чтобы увеличить скорость или направление созревания и/или увеличить количество дифференцируемых моноцитов. В другом варианте, дифференцировка может быть уменьшена с точки зрения скорости дифференцировки и/или количества клеток, подвергающихся дифференцировке.
[000215] В настоящей заявке термин «выделенный» полипептид или пептид, относится к полипептиду или пептиду, который либо не имеет встречающегося в природе аналога, либо был отделен или очищен от компонентов естественной среды, например, в тканях, таких как поджелудочная железа, печень, селезенка, яичник, яичко, мышечная ткань, ткань суставов, нервная ткань, ткань желудочно-кишечного тракта или ткань молочной железы или опухолевая ткань (например, ткань рака молочной железы) или жидкостей организма, таких как кровь, сыворотка или моча. Как правило, полипептид или пептид считается «выделенным», если он составляет по меньшей мере 70% по сухой массе, не содержит белков и других природных органических молекул, с которыми он связан в природных условиях. Предпочтительно препарат полипептида (или пептида) согласно настоящему изобретению составляет по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% по сухой массе полипептида (пептида), соответственно, согласно настоящему изобретению. Поскольку полипептид или пептид, который химически синтезирован, по своей природе отделен от компонентов естественной среды, то синтетический полипептид или пептид является «выделенным».
[000216] Выделенный полипептид (или пептид) согласно настоящему изобретению может быть получен, например, путем экстракции из природного источника (например, из тканей или жидкостей организма); путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид или пептид; или путем химического синтеза. Полипептид или пептид, который вырабатывается в клеточной системе, отличной от источника, из которого он происходит в природных условиях, является «выделенным», поскольку он обязательно не будет содержать компонентов естественной среды. В предпочтительном варианте реализации выделенный полипептид согласно настоящему изобретению содержит только последовательности, соответствующие мономеру области Fc IgG1 и домену мультимеризации шарнирной области IgG2 (SEQ ID NO: 4), изолейциновому домену мультимеризации (SEQ ID NO: 5) или GPP (SEQ ID NO: 6) и не содержит дополнительных последовательностей, которые могут способствовать клонированию или очистке белка (т.е. введенных сайтов ферментов рестрикции или меток для очистки). Степень выделения или чистоты может быть измерена любым подходящим способом, например, с помощью колоночной хроматографии, электрофореза в полиакриламидном геле или методом ВЭЖХ.
Фармацевтические композиции
[000217] Введение композиций страдомеров, описанных в настоящем документе, будет осуществлено любым обычным путем, перорально, парентерально или местно. Типичные пути введения включают, но не ограничиваются ими, пероральный, назальный, буккальный, ректальный, вагинальный, офтальмологический, подкожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, внутриартериальный, внутриопухолевый, спинальный, интратекальный, внутрисуставной, внутриартериальный, субарахноидальный, подъязычный, через слизистую оболочку полости рта, бронхиальный, лимфатический, внутриутробный, подкожный, внутриопухолевый, посредством интеграции на имплантируемом устройстве, таком как шов или имплантируемое устройство, такое как имплантируемый полимер, интрадуральный, внутрикортикальный или дермальный. Подходящие композиции обычно вводят в виде фармацевтически приемлемых композиций, описанных в настоящем документе. В предпочтительном варианте реализации выделенный страдомер вводят внутривенно или подкожно.
[000218] В настоящей заявке термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические агенты и замедляющие всасывание агенты и тому подобное. Использование подходящих сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев, когда любые стандартные среды или агент несовместимы с векторами или клетками согласно настоящему изобретению, в область настоящего изобретения включено применение указанного агента в терапевтических композициях. В композиции также могут быть включены дополнительные ингредиенты.
[000219] Композиции страдомеров согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемые соли включают кислотно-аддитивные соли (образованные со свободными аминогруппами белка) и те, которые образуются с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или такими органическими кислотами как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и тому подобное. Соли, образованные со свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или трехвалентного железа, и таких органических оснований как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобное.
[000220] Стерильные растворы для инъекций готовят путем введения страдомера в требуемом количестве в подходящем растворителе с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, при необходимости, с последующей стерилизацией путем фильтрации. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стерильные инъекционные растворы изготавливают для внутримышечного, подкожного или внутривенного введения. Обычно дисперсии получают путем включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными способами получения являются методики вакуумной сушки и сушки вымораживанием, которые позволяют получить порошок активного ингредиента с любым дополнительным желаемым ингредиентом из уже стерилизованного путем фильтрования раствора.
[000221] Кроме того, согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложена композиция страдомера, подходящая для перорального введения, которая обеспечена в фармацевтически приемлемом носителе с добавлением инертного разбавителя или без него. Носитель должен быть ассимилируемым или съедобным и включает жидкие, полутвердые, то есть пасты, или твердые носители. За исключением тех случаев, когда любые стандартные среды, агент, разбавитель или носитель вредны для реципиента или для терапевтической эффективности препарата страдомера, содержащегося в них, допускается их применение в композиции для перорального введения для реализации способов согласно настоящему изобретению. Примеры носителей или разбавителей включают жиры, масла, воду, солевые растворы, липиды, липосомы, смолы, связующие вещества, наполнители и т.п. или их комбинации. В настоящей заявке термин «пероральное введение» включает пероральное, буккальное, энтеральное или внутрижелудочное введение.
[000222] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композицию страдомеров комбинируют с носителем любым удобным и целесообразным способом, т.е. путем растворения, суспендирования, эмульгирования, смешивания, инкапсуляции, микрокапсуляции, абсорбции и тому подобного. Подходящие процедуры являются стандартными для специалистов в данной области техники.
[000223] Согласно конкретному варианту реализации композицию страдомеров в порошковой форме комбинируют или тщательно перемешивают с полутвердым или твердым носителем. Смешивание можно осуществлять любым удобным способом, таким как дробление. Стабилизаторы также могут быть добавлены в процессе смешивания, чтобы защитить композицию от потери терапевтической активности, т.е. денатурации в желудке. Примеры стабилизаторов для использования в композиции, предназначенной для перорального введения, включают буферы, антагонисты секреции желудочных кислот, аминокислоты, такие как глицин и лизин, углеводы, такие как декстроза, манноза, галактоза, фруктоза, лактоза, сахароза, мальтоза, сорбит, маннит, ингибиторы протеолитических ферментов и т.п. Более предпочтительно стабилизатор для композиции, предназначенной для перорального введения, также может включать антагонисты секреции желудочных кислот.
[000224] Кроме того, композиция страдомеров, предназначенная для перорального введения, которая комбинирована с полутвердым или твердым носителем, может быть дополнительно приготовлена в виде твердых или мягких желатиновых капсул, таблеток или пилюль. Более предпочтительно желатиновые капсулы, таблетки или пилюли покрыты энтеросолюбильным покрытием. Энтеросолюбильные покрытия предотвращают денатурацию композиции в желудке или верхнем отделе кишечника, где рН является кислым. См., например, патент США №5629001. При попадании в тонкий кишечник покрытие растворяется при основных значениях показателя рН, что обеспечивает высвобождение композиции для взаимодействия с клетками кишечника, например, с M-клетками Пейеровых бляшек.
[000225] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения композицию страдомеров в виде порошка комбинируют или тщательно смешивают с материалами, которые создают наночастицу, инкапсулирующую иммунологически активный биомиметик, или к которой прикреплен иммунологически активный биомиметик. Каждая наночастица будет иметь размер меньше или равный 100 мкм. Наночастица может обладать мукоадгезивными свойствами, которые обеспечивают всасывание иммунологически активного биомиметика в желудочно-кишечном тракте, который в ином случае не обладал бы биологической доступностью для перорального применения.
[000226] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения порошковую композицию комбинируют с жидким носителем, таким как вода или физиологический раствор, с добавлением стабилизирующего агента или без него.
[000227] Конкретный состав страдомера, который может быть использован, представляет собой раствор иммунологически активного биомиметического белка в гипотоническом буфере на основе фосфата, который не содержит калия, причем состав буфера включает: 6 мМ моногидрата дигидрофосфата натрия, 9 мМ гептагидрата моногидрофосфата натрия, 50 мМ хлорида натрия, pH=7,0±0,1. Концентрация иммунологически активного биомиметического белка в гипотоническом буфере может составлять от 10 мкг/мл до 100 мг/мл. Указанный состав можно вводить посредством любого пути введения, например, но не ограничиваясь этим, внутривенным путем.
[000228] Кроме того, композиция страдомеров для местного введения, которую комбинируют с полутвердым носителем, также может быть изготовлена в виде кремовой или гелевой мази. Предпочтительным носителем для образования гелевой мази является гелевый полимер. Предпочтительные полимеры, которые используют для получения гелевой композиции согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, карбопол, карбоксиметилцеллюлозу и полимеры плюроновых кислот. В частности, порошковую композицию мультимера Fc комбинируют с водным гелем, содержащим полимеризующий агент, такой как карбопол 980, с содержанием активного агента от 0,5 до 5% масс./об. для нанесения на кожу для лечения болезни кожи или подкожных тканей. В настоящей заявке термин «местное введение» включает нанесение на поверхность дермы, эпидермиса, подкожной клетчатки или слизистой оболочки.
[000229] Кроме того, композиция страдомеров может быть изготовлена в виде полимера для подкожной или субдермальной имплантации. Предпочтительный состав для имплантируемого полимера, содержащего лекарственный препарат, представляет собой агент, который обычно рассматривается как безопасный, и может содержать, например, сшитый декстран (Samantha Hart, Master of Science Thesis, “Elution of Antibiotics from a Novel Cross-Linked Dextran Gel: Quantification” Virginia Polytechnic Institute and State University, June 8, 2009), декстран-тирамин (Jin, et al. (2010) Tissue Eng. Part A. 16(8):2429-40), декстран-полиэтиленгликоль (Jukes, et al. (2010) Tissue Eng. Part A., 16(2):565-73) или декстран-глутаровый альдегид (Brondsted, et al. (1998) J. Controlled Release, 53:7-13). Специалисту в данной области техники известно, что многие аналогичные полимеры и гидрогели могут быть образованы путем включения страдомера, закрепленного внутри полимера или гидрогеля, и контроля размера пор до достижения желаемого диаметра.
[000230] После изготовления растворы вводят способом, совместимым с дозированной лекарственной формой, и в таком количестве, которое терапевтически эффективно, чтобы привести к улучшению или устранению симптомов. Составы могут быть легко введены в виде множества лекарственных форм, таких как пищевые растворы, капсулы для высвобождения лекарственного препарата и т.п. Некоторое изменение дозировки может быть сделано в зависимости от состояния пациента. Лицо, ответственное за введение препарата, может, в любом случае, определить соответствующую дозу для отдельного субъекта. Кроме того, препараты для введения человеку соответствуют стандартам стерильности, общей безопасности и чистоты, согласно требованиям Центра экспертизы и изучения биологических препаратов Управления по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA).
[000231] Очевидно, что путь введения зависит от местоположения и характера заболевания, которое лечат, и может включать, например, интрадермальный, чрескожный, субдермальный, парентеральный, назальный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, подкожный, чрескожный, интратрахеальный, внутрибрюшинный, внутриопухолевый, перфузионный, с помощью лаважа, прямой инъекции и пероральный пути введения.
[000232] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, трансдермально, ректально, с помощью подкожного имплантата или внутримышечно. В конкретных вариантах реализации страдомер вводят внутривенно, подкожно или внутримышечно. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят в дозе от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 1000 мг/кг. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят в дозе от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг. Согласно другому варианту реализации страдомер вводят в дозе от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг. Согласно другому варианту реализации страдомер вводят в дозе от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг. Согласно другому варианту реализации страдомер вводят в дозе от приблизительно 5 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг. Страдомер можно вводить по меньшей мере один раз в сутки, раз в неделю, раз в две недели или ежемесячно. Можно использовать двухфазную схему дозирования, в которой первая фаза дозирования включает дозу от приблизительно 0,1% до приблизительно 300% второй фазы дозирования.
[000233] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят до, во время или после введения одного или более дополнительных фармацевтических и/или терапевтических агентов. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения дополнительный фармацевтически активный агент содержит стероид; биологический анти-аутоиммунный лекарственный препарат, такой как моноклональное антитело, гибридный белок или антицитокин; небиологический анти-аутоиммунный лекарственный препарат; иммунодепрессант; антибиотик; и противовирусный агент; цитокин; или агент, который в ином случае может действовать как иммуномодулятор. Согласно другому варианту реализации стероид представляет собой преднизон, преднизолон, кортизон, дексаметазон, мометазон, тестостерон, эстроген, оксандролон, флутиказон, будесонид, бекламетазон, альбутерол или левалбутерол. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения моноклональное антитело представляет собой экулизумаб, инфликсимаб, адалимумаб, ритуксимаб, тоцилизумаб, голимумаб, офатумумаб, LY2127399, белимумаб, велтузумаб, меполизумаб, нецитумумаб, ниволюмаб, динутуксимаб, секукинумаб, эволокумаб, блинатумомаб, пембролизумаб, рамуцирумаб, ведолизумаб, силтуксимаб, обинутузумаб, адотрастузумаб, раксибакумаб, пертузумаб, брентуксимаб, ипилумумаб, деносумаб, канакинумаб, устекинумаб, катумаксомаб, ранибизумаб, панитумумаб, натализумаб, бевацизумаб, цетуксимаб, эфализумаб, омализумаб, тоитумомаб-I131, алемтузумаб, гемтузумаб, трастузумаб, паливизумаб, базиликсумаб, даклизумаб, абциксимаб, муронономаб или цертолизумаб. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения гибридный белок представляет собой этанерцепт или абатацепт. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения антицитокиновый биологический препарат представляет собой анакинра. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения противоревматический небиологический препарат представляет собой циклофосфамид, метотрексат, азатиоприн, гидроксихлорокин, лефлуномид, миноциклин, органические соединения золота, фостаматиниб, тофацитиниб, эторикоксиб или сульфасалазин. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения иммунодепрессант представляет собой циклоспорин A, такролимус, сиролимус, мофетил микофенолята, эверолимус, OKT3, антитимоцитарный глобулин, базиликсимаб, даклизумумамб или алемтузумаб. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят перед, во время или после введения химиотерапевтического агента. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер и дополнительный терапевтический агент проявляют терапевтическое синергическое действие при совместном введении. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят перед введением дополнительного терапевтического средства. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят одновременно с введением дополнительного терапевтического агента. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят после введения дополнительного терапевтического агента.
[000234] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят в ковалентно прикрепленной к имплантируемому устройству форме. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомер прикреплен к шовному материалу. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер прикреплен к трансплантату или стенту. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер прикреплен к сердечному клапану, искусственному ортопедическому суставу или имплантированному электрическому проводу. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер прикреплен и внедрен в имплантируемый матрикс. В предпочтительном варианте реализации страдомер прикреплен и внедрен в имплантируемый гидрогель. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения гидрогель состоит из декстрана, поливинилового спирта, полиакрилата натрия или акрилатных полимеров. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят прикрепленным к гидрогелю с размерами пор, достаточно большими, чтобы обеспечить проникновение иммунных клеток для взаимодействия с неподвижным страдомером, и затем их возвращение в кровоток. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения размер пор гидрогеля составляет от 5 до 50 мкм. В предпочтительном варианте реализации размер пор гидрогеля составляет 25-30 микрон.
[000235] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят для лечения людей, приматов, отличных от человека (например, обезьян, бабуинов и шимпанзе), мышей, крыс, коров, лошадей, кошек, собак, свиней, кроликов, коз, оленей, овец, хорьков, грызунов, морских свинок, хомяков, летучих мышей, птиц (например, кур, индюков и уток), рыб и рептилий с использованием видоспецифичных или химерных молекул страдомера. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения человек является взрослым индивидуумом или ребенком. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят для предотвращения опосредованного комплементом заболевания. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер вводят для предотвращения связанных с вакциной аутоиммунных состояний у животных-компаньонов и домашнего скота.
[000236] В настоящей заявке термин «парентеральное введение» включает любую форму введения, при которой соединение всасывается у субъекта без участия всасывания через кишечник. Примеры парентеральных способов введения, которые используются в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное, внутриопухолевое, внутриглазное, назальное или внутрисуставное введение.
[000237] Кроме того, страдомер согласно настоящему изобретению может быть необязательно введен перед, во время или после введения другого фармацевтического агента. Например, неожиданным фактом явилось то, что сопутствующее введение страдомера согласно настоящему изобретению и преднизолона обеспечивает синергически превосходные результаты, по сравнению с теми, которые наблюдают при использовании композиции страдомеров или преднизолона по отдельности (WO 2012/016073).
[000238] Ниже приведены конкретные примеры различных категорий фармацевтических препаратов и предпочтительные пути введения, как указано, для конкретных иллюстративных заболеваний:
[000239] Буккальная или субъязычная растворяемая таблетка: стенокардия, узелковый полиартериит.
[000240] Внутривенный, внутримышечный или подкожный путь введения: миастения гравис, гемолитический уремический синдром (HUS), атипичный гемолитический уремический синдром (aHUS), пароксизмальная ночная гемоглобинурия (PNH), мембранозная нефропатия, нейромиелит зрительного нерва, опосредованное антителами отторжение аллотрансплантатов, мембранопролиферативный гломерулонефрит (MPGN), волчаночный нефрит, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, миозит с тельцами включения, парапротеинемическая демиелинизирующая полиневропатия, связанная с секрецией IgM, некротизирующий фасцит, пемфигус, гангрена, дерматомиозит, гранулема, лимфома, сепсис, апластическая анемия, полиорганная недостаточность, множественная миелома и моноклональная гаммапатия неизвестного значения, хроническая воспалительная демиелинизирующая полирадикулоневропатия, воспалительные миопатии, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура, миозит, анемия, неоплазия, гемолитическая анемия, энцефалит, миелит, миелопатия, особенно связанная с лимфотропным вирусом Т-клеток человека 1, лейкоз, рассеянный склероз и неврит зрительного нерва, астма, эпидермальный некролиз, миастенический синдром Ламберта-Итона, миастения гравис, невропатия, увеит, синдром Гийена-Барре, болезнь «трансплантат против хозяина», синдром мышечной скованности, паранеопластическая мозжечковая дегенерация с антителами к Yo, паранеопластический энцефаломиелит и сенсорная невропатия с антителами к Hu, системный васкулит, системная красная волчанка, аутоиммунная диабетическая невропатия, острая идиопатическая дизавтономная невропатия, синдром Фогт-Коянаги-Харада, мультифокальная моторная невропатия, синдром периферического моторного нейрона, связанный с анти-/GM1, демиелинизация, мембранопролиферативный гломерулонефрит, кардиомиопатия, болезнь Кавасаки, ревматоидный артрит и синдром Эванса IM - ITP, CIDP, MS, дерматомиозит, миастения гравис, мышечная дистрофия. В настоящей заявке термин «внутривенное введение» включает все методики для доставки соединения или композиции согласно настоящему изобретению в системный кровоток с помощью внутривенной инъекции или инфузии.
[000241] Кожный гель, лосьон, крем или пластырь: витилиго, опоясывающий лишай, акне, хейлит.
[000242] Ректальный суппозиторий, гель или инфузия: язвенный колит, геморроидальное воспаление.
[000243] Оральная форма в виде пилюли, пастилки, инкапсулированная форма или форма с энтеросолюбильным покрытием: болезнь Крона, спру-целиакия, синдром раздраженной толстой кишки, воспалительные заболевания печени, пищевод Барретта.
[000244] Интракортикальная форма: эпилепсия, болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона.
[000245] Интраабдоминальная инфузия или имплантат: эндометриоз.
[000246] Интравагинальный гель или суппозиторий: бактериальный, трихомонадный или грибковой вагинит.
[000247] Медицинские приборы: покрытие на стенте коронарных артерий, протезы суставов.
Способы терапевтического применения страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента
[000248] Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или предотвращения заболевания или состояния, такого как опосредованное комплементом заболевание или состояние, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, страдомера, содержащего домен Fc IgG1 и домен мультимеризации, причем указанный страдомер проявляет повышенную степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с рецептором Fc. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер проявляет снижение или отсутствие связывания с FcγR и/или снижение или отсутствие связывания с FcRn и проявляет усиленное или предпочтительное связывание с системой комплемента. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомер проявляет усиленное или предпочтительное связывание с C1q.
[000249] На основании рационального дизайна и результатов проверок в условиях in vitro и in vivo страдомеры согласно настоящему изобретению будут служить в качестве важных биофармацевтических препаратов для лечения воспалительных заболеваний и расстройств, в частности, опосредованных комплементом заболеваний и расстройств; а также для изменения иммунной функции в различных других ситуациях, таких как биологическая иммунная терапия аллергии, рака, аутоиммунных заболеваний, инфекционных заболеваний и воспалительных заболеваний. Медицинские состояния, подходящие для лечения с использованием иммунологически активных биомиметиков, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, раскрытых в настоящем документе, включают любое заболевание, вызванное или связанное с активацией системы комплемента или эффекторными функциями, опосредованными комплементом, включая повышенную или нецелесообразную активность системы комплемента. Подходящие медицинские состояния включают те состояния, которые в настоящее время лечат или лечили ранее с использованием лекарственных препаратов, связывающихся с системой комплемента, таких как экулизумаб. Экулизумаб связывается с белком системы комплемента C5 (белок системы комплемента, который вступает в реакции после С1 и C1q в классическом пути активации системы комплемента), ингибируя его расщепление и последующий опосредованный комплементом лизис клеток. Биомиметики согласно настоящему изобретению обеспечивают безопасную и эффективную альтернативу другим комплементсвязывающим лекарственным препаратам, известным в данной области техники. Например, в некоторых вариантах реализации, биомиметики согласно настоящему изобретению связываются с C1q, первой субъединицей в комплексе С1 классического пути активации системы комплемента. Медицинские состояния, подходящие для лечения с использованием иммунологически активных биомиметиков, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, включают, но не ограничиваются ими, миастению гравис, гемолитический уремический синдром (HUS), атипичный гемолитический уремический синдром (aHUS), пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH), нейромиелит зрительного нерва, опосредованное антителами отторжение аллотрансплантатов, дегенерацию желтого пятна, серповидно-клеточную анемию и мембранопролиферативный гломерулонефрит (MPGN). Дополнительные медицинские состояния, подходящие для лечения с использованием иммунологически активных биомиметиков, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, описанных в настоящем документе, включают те состояния, которые в настоящее время обычно лечат с использованием неспецифичной иммуносупрессивной терапии, включая hIVIG, или состояния, при которых hIVIG, как установлено, обеспечивает клинические преимущества, такие как аутоиммунные цитопении, хроническая воспалительная демиелинизирующая полиневропатия, синдром Гийена-Барре, миастения гравис, аутоиммунное заболевание, направленное на фактор VIII, дерматомиозит, васкулит и увеит (см., F. G. van der Meche, P. I. Schmitz, N. Engl. J. Med. 326, G1123 (1992); P. Gajdos et al, Lancet i, 406 (1984); Y. Sultan, M. D. Kazatchkine, P. Maisonneuve, U. E. Nydegger, Lancet ii, 765 (1984); M. C. Dalakas et al., N. Engl. J. Med. 329, 1993 (1993); D. R. Jayne, M. J. Davies, C. J. Fox, C. M. Black, C. M. Lockwood, Lancet 337, 1137 (1991); P. LeHoang, N. Cassoux, F. George, N. Kullmann, M. D. Kazatchkine, Ocul. Immunol. Inflamm. 8, 49 (2000)), и те виды рака или воспалительные патологические состояния, при которых моноклональное антитело может быть использовано или уже используется в клинической практике. Подходящими также являются состояния, которые можно эффективно лечить с помощью соединений, являющихся предметом настоящего изобретения, которые включают воспалительные заболевания с дисбалансом сетей цитокинов, аутоиммунное нарушение, опосредованное патогенными аутоантителами или аутоагрессивными Т-клетками, или острую или хроническую фазу хронического рецидивирующего аутоиммунного, противовоспалительного или инфекционного заболевания или процесса.
[000250] Помимо этого другие медицинские состояния, имеющие воспалительный компонент с вовлечением системы комплемента, будут иметь положительный клинический результат при лечении с использованием страдомеров, такие как боковой амиотрофический склероз, болезнь Хантингтона, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инфаркт миокарда, инсульт, гепатит В, гепатит С, связанное с вирусом иммунодефицита человека воспаление, адренолейкодистрофия и эпилептические расстройства, особенно те, которые, как полагают, связаны с поствирусным энцефалитом, включая синдром Расмуссена, синдром Веста и синдром Леннокса-Гасто.
[000251] Общий подход к терапии с использованием выделенных страдомеров, описанных в настоящем документе, заключается во введении субъекту, имеющему заболевание или состояние, терапевтически эффективного количества выделенного иммунологически активного биомиметика для осуществления лечения. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения заболевания или состояния могут быть в общих чертах классифицированы как воспалительные заболевания с дисбалансом сетей цитокинов, аутоиммунное нарушение, опосредованное патогенными аутоантителами или аутоагрессивными Т-клетками, или острая или хроническая фаза хронического заболевания или рецидивирующего процесса.
[000252] В настоящей заявке термин «лечить» и «лечение» относится к введению субъекту терапевтически эффективного количества страдомера согласно настоящему изобретению так, что субъект имеет улучшение заболевания или состояния, или симптома заболевания или состояния. Улучшение представляет собой любое улучшение или восстановление заболевания или состояния, или симптома заболевания или состояния. Улучшение представляет собой наблюдаемое или измеримое улучшение или может представлять собой улучшение общего состояния субъекта. Следовательно, специалист в данной области техники поймет, что лечение может улучшить болезненное состояние, но может не обеспечить полного излечения указанного заболевания. В частности, улучшение у субъектов может включать одно или более из следующих: уменьшение воспаления; уменьшение уровней лабораторных маркеров воспаления, таких как С-реактивный белок; уменьшение аутоиммунитета, о чем свидетельствует одно или более из следующих: улучшение уровней аутоиммунных маркеров, таких как аутоантитела или количество тромбоцитов, лейкоцитов или эритроцитов, уменьшение сыпи или пурпуры, уменьшение слабости, онемения или покалывания, повышение уровня глюкозы у пациентов с гипергликемией, уменьшение боли, воспаления, отека или разрушения суставов, уменьшение спазмов и частоты и объема диареи, уменьшение стенокардии, уменьшение воспаления тканей или уменьшение частоты приступов; уменьшение опухолевой нагрузки, увеличение времени до прогрессирования опухоли, уменьшение боли при раке, повышение выживаемости или улучшение качества жизни; или замедление прогрессирования или улучшение остеопороза.
[000253] В настоящей заявке термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству, которое приводит к улучшению или восстановлению симптомов заболевания или состояния.
[000254] В настоящей заявке термин «профилактика» может означать полное предотвращение симптомов заболевания, задержку начала симптомов заболевания или уменьшение степени тяжести последующих симптомов заболевания.
[000255] В настоящей заявке термин «субъект» обозначает любого субъекта-млекопитающего, которому страдомеры согласно настоящему изобретению вводят в соответствии со способами, описанными в настоящем документе. В конкретном варианте реализации способы согласно настоящему изобретению используют для лечения субъекта-человека. Способы согласно настоящему изобретению также могут быть использованы для лечения приматов, не относящихся к человеку (например, обезьян, бабуинов и шимпанзе), мышей, крыс, коров, лошадей, кошек, собак, свиней, кроликов, коз, оленей, овец, хорьков, грызунов, морских свинок, хомяков, летучих мышей, птиц (например, кур, индеек и уток), рыб и рептилий для получения видоспецифичных или химерных молекул страдомеров.
[000256] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению обеспечивают превосходную безопасность и эффективность по сравнению с другими комплементсвязывающими молекулами. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению проявляют превосходную безопасность и эффективность по сравнению с антителом к С5, экулизумабом.
[000257] Было установлено, что ингибирование системы комплемента уменьшает заболевания, опосредованные антителами (см., например, Stegall et al. Terminal Complement Inhibition Decreases Antibody-Mediated Rejection in Sensitized Renal Transplant Recipients. American Journal of Transplantation 2011 Nov; 11(1):2405-2413-Epub 2011 Sept 22; DOI: 10.1111/j.1600-6143.2011.03757.x). Страдомеры согласно настоящему изобретению также могут быть использованы для лечения заболевания или состояния, опосредованного антителами. Аутоантитела опосредуют многие известные аутоиммунные заболевания и, вероятно, играют роль в других многочисленных аутоиммунных заболеваниях. Установленные заболевания, опосредованные антителами, при которых могут быть использованы страдомеры согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничивается ими, нефрит, опосредованный антителами к базальной мембране клубочков, включая синдром Гудпасчера; антитела к антигенам донора (специфичные в отношении антигенов донора аллоантитела) при трансплантации плотных органов; антитело к аквапорину-4 при нейромиелите зрительного нерва; антитела к VGKC при нейромиотонии, лимбическом энцефалите и синдроме Морвана; антитела к никотиновым рецепторам ацетилхолина и антитела к MuSK при миастении гравис; антитела к VGCC при миастеническом синдроме Ламберта-Итона; антитела к AMPAR и GABA(B)R при лимбическом энцефалите, часто связанном с опухолями; антитела к GlyR при синдроме мышечной скованности или гиперэкплексии; антитела к фософлипидам, кардиолипину и β2-гликопротеину I при рецидивирующем самопроизвольном аборте, синдроме Хьюза и системной красной волчанке; антитела к глутаматдекарбоксилазе при синдроме мышечной скованности, аутоиммунной мозжечковой атаксии или лимбическом энцефалите; антитела к NMDA-рецепторам в недавно описанном синдроме, поражающем лимбические и подкорковые функции с выраженным двигательным расстройством, часто у молодых людей и детей, который обычно связан с тератомой яичников, но может не быть паранеопластическим; антитела к двухцепочечной ДНК, одноцепочечной ДНК, РНК, SM и C1q при системной красной волчанке; антитела к антигенам ядра и ядрышка при заболеваниях соединительной ткани, включая склеродермию, синдром Шегрена и полимиозит, включая антитела к Ro, La, Scl70, Jo-1; антитела к ревматоидному фактору при ревматоидном артрите; антитела к поверхностному антигену гепатита при узелковом полиартериите; антитела к центромерам при синдроме CREST; антитела к стрептококковым антигенам при эндокардите или при риске его развития, антитела к тиреоглобулину, антитела к тиреопероксидазе, и антитела к рецепторам TSH при тиреоидите Хашимото; антитела к U1 RNP при смешанном заболевании соединительной ткани и системной красной волчанке; и антитела к десмогелину и кератиноцитам при пузырчатке.
[000258] Страдомеры согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения состояний, включая, но не ограничиваясь ими, застойную сердечную недостаточность (CHF), васкулит, розовые угри, угри, экзему, миокардит и другие заболевания миокарда, системную красную волчанку, сахарный диабет, спондилопатии, синовиальные фибробласты и строму костного мозга; потерю костной ткани; болезнь Паджета, остеокластому; множественную миелому; рак молочной железы; дисфункциональный остеогенез; недостаточность питания, заболевания периодонта, болезнь Гоше, гистиоцитоз клеток Лангерганса, повреждение спинного мозга, острый септический артрит, остеомаляцию, синдром Кушинга, моноостотическую фиброзную остеодисплазию, полиостотическую фиброзную дисплазию, реконструкцию периодонта и переломы костей; саркоидоз; остеолитический рак костной ткани, рак легких, рак почек и рак прямой кишки; метастазы костной ткани, контроль болевых ощущений в костной ткани и гуморальную злокачественную гиперкальциемию, анкилозирующий спондилит и другие спондилоартропатии; отторжение трансплантата, вирусные инфекции, гематологические неоплазии и состояния, сходные с неопластическими, например, лимфому Ходжкина; неходжкинскую лимфому (лимфому Беркитта, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому/хронический лимфоцитарный лейкоз, грибовидный микоз, лимфому из клеток мантийной зоны, фолликулярную лимфому, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, лимфому из клеток маргинальной зоны, лейкоз волосковых клеток и лимфоплазмоцитарный лейкоз), опухоли клеток-предшественников лимфоцитов, включая острый B-клеточный лимфобластный лейкоз/лимфому и острый T-клеточный лимфобластный лейкоз/лимфому, тимому, опухоли зрелых Т- и NK-клеток, включая лейкозы периферических Т-клеток, T-клеточный лейкоз/T-клеточные лимфомы у взрослых и лейкоз из больших зернистых лимфоцитов, гистиоцитоз клеток Лангерганса, миелоидные неоплазии, такие как острые миелобластные лейкозы, включая ОМЛ с созреванием, ОМЛ без дифференцировки, острый промиелоцитарный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз и острый моноцитарный лейкоз, миелодиспластические синдромы и хронические миелопролиферативные заболевания, включая хронический миелолейкоз, опухоли центральной нервной системы, например, опухоли головного мозга (глиому, нейробластому, астроцитому, медуллобластому, эпендимому и ретинобластому), плотные опухоли (рак носоглотки, базальноклеточный рак, рак поджелудочной железы, рак желчного протока, саркому Капоши, рак яичек, рак матки, рак влагалища или рак шейки матки, рак яичников, первичный рак печени или рак эндометрия, опухоли сосудистой системы (ангиосаркому и гемангиоперицитому)) или другие виды рака.
[000259] В настоящей заявке термин «рак» относится или описывает физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется неконтролируемым размножением клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому (включая липосаркому, остеогенную саркому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, лейомиосаркому, хордому, лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, рабдомиосаркому, фибросаркому, миксосаркому, хондросаркому), нейроэндокринные опухоли, мезотелиому, синовиому, шванному, менингиому, аденокарциному, меланому, а также лейкоз и лимфоидные злокачественные опухоли. Более конкретные примеры подходящих видов рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, аденокарциному легких и плоскоклеточный рак легких, мелкоклеточную карциному легких, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудочно-кишечного тракта или рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или карциному матки, карциному слюнных желез, рак почек или почечный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, карциному прямой кишки, карциному полового члена, рак яичек, рак пищевода, опухоли желчных путей, опухоль Юинга, базальноклеточную карциному, аденокарциному, карциному потовых желез, карциному сальных желез, папиллярную карциному, папиллярную аденокарциному, цистаденокарциному, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, карциному клеток почек, гепатому, карциному желчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, опухоль яичек, карциному легких, карциному мочевого пузыря, эпителиальную карциному, глиому, астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, гемангиобластому, невриному слухового нерва, олигодендроглиому, менингиому, меланому, нейробластому, ретинобластому, лейкоз, лимфому, множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, миелодиспластическое заболевание, болезнь тяжелых цепей, нейроэндокринные опухоли, шванному и другие карциномы, а также рак головы и шеи.
[000260] Страдомеры согласно настоящему изобретению можно применять для лечения аутоиммунных заболеваний. В настоящей заявке термин «аутоиммунное заболевание» относится к разнообразной группе, включающей более чем 80 заболеваний и состояний. Основная проблема при всех этих заболеваниях и состояниях заключается в том, что иммунная система организма атакует сам организм. Аутоиммунные заболевания затрагивают все основные системы организма, включая соединительную ткань, нервы, мышцы, эндокринную систему, кожу, кровь, дыхательную систему и желудочно-кишечный такт. Аутоиммунные заболевания включают, например, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, миастению гравис и диабет 1 типа.
[000261] Заболевание или состояние, которое поддается лечению с использованием композиций и способов согласно настоящему изобретению, может представлять собой гематоиммунологический процесс, включая, но не ограничиваясь ими, серповидно-клеточную анемию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, аллоиммунную/аутоиммунную тромбоцитопению, приобретенную идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, аутоиммунную нейтропению, аутоиммунную гемолитическую анемию, эритроцитарную аплазию, связанную с парвовирусом В19, приобретенную аутоиммунную реакцию на фактор VIII, приобретенную болезнь фон Виллебранда, множественную миелому и моноклональную гаммапатию неизвестного значения, сепсис, апластическую анемию, истинную эритроцитарную аплазию, синдром Даймонда-Блэкфана, гемолитическую болезнь новорожденных, иммуно-опосредованную нейтропению, рефрактерность к тромбоцитарной трансфузии, неонатальную посттрансфузионную пурпуру, гемолитический уремический синдром, системный васкулит, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру или синдрома Эванса.
[000262] Заболевание или состояние также может представлять собой нейроиммунологический процесс, включая, но не ограничиваясь ими, синдромом Гийена-Барре, хроническую воспалительную демиелинизирующую полирадикулоневропатию, парапротеинемическую демиелинизирующую полиневропатию, связанную с секрецией IgM, миастенический синдром Ламберта-Итона, миастению гравис, мультифокальную моторную невропатию, синдром периферических мотонейронов, связанный с анти/GM1, демиелинизацию, рассеянный склероз и неврит зрительного нерва, синдром мышечной скованности, паранеопластическую мозжечковую дегенерацию с антителами к Yo, паранеопластический энцефаломиелит, сенсорную невропатию с антителами к Hu, эпилепсию, энцефалит, миелит, миелопатию, в частности, связанную с лимфотропным Т-клеточным вирусом 1 человека, аутоиммунную диабетическую невропатию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона или острую идиопатическую дизавтономную невропатию.
[000263] Заболевание или состояние также может представлять собой воспаление или аутоиммунное заболевание, связанное с потерей слуха или потерей зрения. Например, заболевание или состояние может представлять собой аутоиммунную потерю слуха, такую как индуцированная шумом потеря слуха или возрастная потеря слуха, или может быть связано с имплантацией устройств, таких как слуховые аппараты (например, кохлеарные имплантаты). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены субъекту перед, одновременно или после имплантации устройства.
[000264] Заболевание или состояние также может представлять собой ревматическое заболевание, включая, но не ограничиваясь ими, болезни Кавасаки, ревматоидный артрит, синдром Фелти, ANCA-положительный васкулит, спонтанный полимиозит, дерматомиозит, антифосфолипидные синдромы, периодические самопроизвольные выкидыши, системную красную волчанку, ювенильный идиопатический артрит, синдром Рейно, синдром CREST или увеит.
[000265] Заболевание или состояние также может представлять собой дерматоиммунологическое заболевание, включая, но не ограничиваясь ими, токсический эпидермальный некролиз, гангрену, гранулему, аутоиммунные кожные пузырчатки, включая обыкновенную пузырчатку, буллезный пемфигоид, эксфолиативную пузырчатку, витилиго, синдром стрептококкового токсического шока, склеродермию, системный склероз, включая диффузный и ограниченный кожный системный склероз или атопический дерматит (в частности, зависящий от стероидов).
[000266] Заболевание или состояние также может представлять собой иммунологическое заболевание опорно-двигательного аппарата, включая, но не ограничиваясь ими, миозит с тельцами включения, некротизирующий фасциит, воспалительные миопатии, миозит, миопатию, вызванную антителами к декорину (антиген BJ), паранеопластическую некротическую миопатию, связанную с Х-хромосомой вакуолизированную миопатию, пеницилламин-индуцированный полимиозит, атеросклероз, ишемическую болезнь сердца или кардиомиопатию.
[000267] Заболевание или состояние также может представлять собой иммунологическое заболевание желудочно-кишечного тракта, включая, но не ограничиваясь ими, пернициозную анемию, аутоиммунный хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, целиакию, герпетиформный дерматит, криптогенный цирроз печени, реактивный артрит, болезнь Крона, болезнь Уиппла, язвенный колит или склерозирующий холангит.
[000268] Заболевание или состояние также может представлять собой реакцию «трансплантат против хозяина», опосредованное антителами отторжение трансплантата, отторжение трансплантата после трансплантации костного мозга, воспаление после инфекционного заболевания, лимфому, лейкоз, неоплазию, астму, сахарный диабет 1 типа с антителами к бета-клеткам, синдром Шегрена, смешанное заболевание соединительной ткани, болезнь Аддисона, синдром Фогта-Коянаги-Харада, мембранопролиферативный гломерулонефрит, синдром Гудпасчера, болезнь Грейвса, тиреоидит Хашимото, гранулематоз Вегенера, микрополиартерит, синдром Чарджа-Стросса, узелковый полиартрит или полиорганную недостаточность.
[000269] В настоящей заявке термин «аллергия» включает все иммунные реакции, опосредованные IgE, а также те реакции, которые имитируют IgE-опосредованные реакции. Аллергические реакции индуцируются аллергенами, включая белки, пептиды, углеводы, а также их комбинации, которые вызывают иммунный IgE-опосредованный ответ или ответ, сходный с IgE-опосредованным ответом. Типичные аллергические реакции включают аллергические реакции на орехи, аллергические реакции на пыльцу и аллергические реакции на укусы насекомых. Типичные аллергены включают урушиол в ядовитом плюще и дубе; антиген домашних пылевых клещей; компоненты пыльцы березы Bet v 1 и Bet v 2; 15 кД антиген в сельдерее; антиген яблок Mal d 1; Pru р3 в персиках; аллерген пыльцы тимофеевки луговой Phl p 1; Lol p 3, Lol p I или Lol p V в плевеле; Cyn d 1 в свинорое; аллергены пылевых клещей der p1, der p2 или der f1; эпитопы альфа-глиадина и γ-глиадина в глютене; фосфолипазу пчелиного яда A2; эпитопы Ara h 1, Ara h 2 и Ara h 3 в арахисе.
[000270] Заболевание или состояние может представлять собой заболевание клубочков и/или нефрит. Мезангиальная пролиферация является общим признаком многих заболеваний клубочков человека, включая IgA-опосредованную нефропатию, восстановление после инфекционного гломерулонефрита, а также ряд вторичных заболеваний клубочков, таких как волчаночный нефрит, пурпура Шенлейна-Геноха, ревматоидный артрит, цирроз печени, синдром Альпорта и диабетическая нефропатия. Заболевание характеризуется различной степенью мезангиальной гиперклеточности и расширением мезангиального матрикса. В случаях прогрессирующих заболеваний указанные клеточные изменения могут привести к сужению капилляров клубочков, склерозу и капсульным спайкам в результате повреждения, вызванного различными иммунологическими, токсическими, метаболическими, механическими и воспалительными медиаторами. Несмотря на то, что были разработаны некоторые экспериментальные модели, наиболее широко используемая модель для исследования мезангиальной пролиферации представляла собой анти-тимоцитную (анти-Thy-1) модель (Yamamoto and Wilson, “Quantitative and qualitative studies of antibody-induced mesangial cell damage in the rat.” Kidney International 32; 514-24 (1987); Jefferson JA et al, “Experimental mesangial proliferative glomerulonephritis (the anti Thy-1.1 model).” J. Nephrol 12; 297-307 (1999)). Другая модель для исследований нефропатии включает иммунизацию животных с использованием эпителиальной фракции проксимальных канальцев (Fx1A) (Probetex, Сан-Антонио, Техас, США). Иммунизация крыс с использованием Fx1A индуцирует иммунный сложный «мембранозный» нефрит, который характеризуется субэпителиальными иммунными отложениями и протеинурией, имеющими очевидное сходство с заболеванием человека (Heymann W. et al., Proc Soc. Exp. Biol. Med. 100:660-64 (1959); Edgington TS et al., J Exp. Med. 127; 555 (1968)). Fx1A содержит большой гликопротеин gp330 (мегалин), нефритогенный антиген, вырабатываемый эпителиальными клетками клубочков. Введение антитела к Fx1A приводит к нефриту, который характеризуется двумя фазами: 1) гетерологичная фаза, представляющая собой острый нефрит, индуцированный экзогенно введенным антителом, и 2) хроническая аутологичная фаза, которая характеризуется реакцией хозяина на экзогенный (гетерологичный) иммуноглобулин овцы, введенный в клубочковые структуры. Модель мембранозной нефропатии, индуцированной антителами к Fx1A, приводит к образованию субэпителиальных отложений и протеинурии. Модель пассивного нефрита Хеймана и вовлечение комплемента в этой модели были рассмотрены в другом месте (Jefferson et al. “Experimental Models of Membranous Nephropathy,” Drug Discov. Today Dis. Models 7(1-2): 27-33 (2010)).
[000271] Настоящее изобретение дополнительно включает способы и композиции, эффективные для лечения заболеваний, вызванных инфекционными агентами. Инфекционные агенты включают, но не ограничиваются ими, бактериальные, микологические, паразитарные и вирусные агенты. Примеры подходящих инфекционных агентов включают: Staphylococcus, метициллин-устойчивый Staphylococcus Aureus, Escherichia Coli, Streptococcaceae, Neisseriaaceae, Cocci, Enterobacteriaceae, Enterococcus, Vancomycin-Resistant Enterococcus, Cryptococcus, Histoplasmosis, Aspergillus, Pseudomonadaceae, Vibrionaceae, Campylobacter, Pasteurellaceae, Bordetella, Francisella, Brucella, Legionellaceae, Bacteroidaceae, Gram-Negative Bacilli, Clostridium, Corynebacterium, Propionibacterium, грамотрицательные бациллы, Anthrax, Actinomyces, Nocardia, Mycobacterium, Treponema, Borrelia, Leptospira, Mycoplasma, Ureaplasma, Rickettsia, Chlamydiae, Candida, системные микозы, оппортунистические микозы, Protozoa, Nematodes, Trematodes, Cestodes, Adenoviruses, Herpesviruses (включая, например, вирус простого герпеса, вирус Эпштейна-Барр, вирус опоясывающего герпеса), поксвирусы, паповавирусы, вирусы гепатита (включая, например, вирус гепатита B и вирус гепатита C), вирусы папилломы, ортомиксовирусы (включая, например, грипп A, грипп B и грипп C), парамиксовирусы, коронавирусы, пикорнавирусы, реовирусы, тогавирусы, флавивирусы, буньявирусы, рабдовирусы, ротавирус, респираторный синцитиальный вирус, вирус иммунодефицита человека и ретровирусы. Типичные инфекционные заболевания включают, но не ограничиваются ими, кандидоз, кандидемии, аспергиллез, стрептококковую пневмонию, стрептококковые заболевания кожи и ротоглотки, вызванный грамотрицательными бактериями сепсис, туберкулез, мононуклеоз, грипп, респираторное заболевание, вызванное респираторным синцитиальным вирусом, малярию, шистосомоз и трипаносомоз. Настоящее изобретение включает способы и композиции, эффективные для лечения инфекционных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, заболевания, вызванные бактериальными, микологическими, паразитарными и вирусными агентами. Типичные инфекционные заболевания включают, но не ограничиваются ими, кандидоз, кандидемии, аспергиллез, стрептококковую пневмонию, стрептококковые заболевания кожи и ротоглотки, вызванный грамотрицательными бактериями сепсис, туберкулез, мононуклеоз, грипп, респираторное заболевание, вызванное респираторным синцитиальным вирусом, малярию, шистосомоз и трипаносомоз.
[000272] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения страдомеры согласно настоящему изобретению можно применять в системе прайминга, когда кровь получают от пациента и кратковременно приводят в контакт со страдомером(ами) в течение периода времени приблизительно от получаса до приблизительно трех часов перед введением обратно пациенту. В этой форме клеточной терапии собственные эффекторные клетки пациента подвергаются воздействию страдомера, который закреплен на матриксе, в условиях ex vivo, чтобы модулировать эффекторные клетки путем воздействия страдомера на эффекторные клетки. Кровь, включая модулированные эффекторные клетки, затем вливают обратно пациенту. Такая система прайминга может иметь многочисленные клинические и терапевтические применения.
[000273] Страдомеры, раскрытые в настоящем документе, также можно легко применять для изменения реакции иммунной системы в различных ситуациях, чтобы воздействовать на специфичные изменения в профилях иммунного ответа. Изменение или модулирование иммунного ответа у субъекта относится к увеличению, уменьшению или изменению соотношения или компонентов иммунного ответа. Например, выработка цитокинов или уровни секреции могут быть увеличены или уменьшены по желанию путем нацеленного воздействия на систему комплемента, наряду с соответствующей комбинацией FcγR со страдомером, который сконструирован для связывания с системой комплемента, и взаимодействия с указанными рецепторами. Выработка антител также может быть увеличена или уменьшена; соотношение двух или более цитокинов или рецепторов иммунных клеток может быть изменено; или может быть индуцирована выработка дополнительных типов цитокинов или антител.
[000274] В предпочтительном варианте иммунный ответ субъекта с аутоиммунным или воспалительным заболеванием изменен путем введения терапевтически эффективного количества страдомера, описанного в настоящем документе, указанному субъекту, при этом терапевтически эффективное количество страдомера изменяет иммунный ответ у указанного субъекта. В наилучшем варианте указанное вмешательство позволяет излечить заболевание или состояние у субъекта. Измененный иммунный ответ может представлять собой повышенную или пониженную реакцию и может включать измененные уровни цитокинов, включая уровни любого из ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-8, ИЛ-23, ИЛ-7, ИЛ-4, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-17, ФНО-альфа и ИФН-альфа. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения уровень ИЛ-6 или ИЛ-8 снижается в ответ на терапию. В особенно предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения уровни ИЛ-6 и ИЛ-8 снижаются в ответ на терапию. Однако настоящее изобретение не ограничено каким-либо конкретным механизмом действия описанных биомиметиков. Измененный иммунный ответ может представлять собой измененный уровень аутоантител у субъекта. Измененный иммунный ответ может представлять собой измененный уровень аутоагрессивных Т-клеток у субъекта.
[000275] Например, уменьшение количества вырабатываемого ФНО-альфа при аутоиммунных заболеваниях может оказывать терапевтическое действие. На практике такое терапевтическое действие можно применять при терапии антителом к ФНО-альфа (например, ремикейдом (REMICADE®)), клиническая эффективного которого доказана для лечения бляшечного псориаза, ревматоидного артрита, псориатического артрита, болезни Крона, язвенного колита и анкилозирующего спондилоартрита. Указанные аутоиммунные заболевания имеют различную этиологию, однако обладают общими ключевыми иммунологическими компонентами патологических процессов, связанных с воспалением и активностью иммунных клеток. Страдомер, предназначенный для снижения выработки ФНО-альфа, будет также эффективен при лечении указанного и других аутоиммунных заболеваний. Измененный профиль иммунного ответа также может представлять собой прямую или косвенную модуляцию, чтобы снизить выработку антител, например, аутоантител, нацеленных на собственные ткани субъекта, или измененных уровней аутоагрессивных Т-клеток у субъекта. Например, рассеянный склероз представляет собой аутоиммунное заболевание с участием аутореактивных Т-клеток, которое можно лечить с помощью терапии интерфероном-бета. См., например, Zafranskaya M, et al., Interferon-beta therapy reduces CD4+ and CD8+ T-cell reactivity in multiple sclerosis, Immunology 2007 May;121(l):29-39-Epub 2006 Dec 18. Страдомер, сконструированный для снижения уровней аутореактивных Т-клеток, будет также эффективен при лечении рассеянного склероза и других аутоиммунных заболеваний с участием аутореактивных Т-клеток.
[000276] Страдомеры согласно настоящему изобретению можно применять для модуляции экспрессии костимулирующих молекул из иммунных клеток, включая дендритные клетки, макрофаги, остеокласты, моноциты или NK-клетки, или для ингибирования дифференцировки и созревания указанных клеток иммунной системы или секреции цитокинов, включая интерлейкин-12 (ИЛ-12), или увеличения секреции цитокинов, включая интерлейкин-10 (ИЛ-10) или интерлейкин-6 (ИЛ-6) или ИЛ-1-RA. Специалист в данной области техники также может проверить эффективность иммунологически активных биомиметиков, подвергая иммунную клетку воздействию иммунологически активного биомиметика и измеряя модуляцию функции иммунных клеток, причем указанная иммунная клетка представляет собой дендритную клетку, макрофаг, остеокласт или моноцит. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения иммунная клетка подвергается воздействию иммунологически активного биомиметика в условиях in vitro, включая дополнительный этап определения количества рецепторов клеточной поверхности или выработки цитокинов, причем изменение количества рецепторов клеточной поверхности или выработки цитокинов указывает на модуляцию функции иммунных клеток. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения иммунная клетка подвергается воздействию иммунологически активного биомиметика в условиях in vivo в животной модели аутоиммунного заболевания, включая дополнительный этап оценки степени улучшения при аутоиммунном заболевании.
[000277] Страдомеры согласно настоящему изобретению также можно применять в качестве компонента устройства. Например, в некоторых вариантах реализации страдомеры согласно настоящему изобретению можно наносить на устройство, такое как медицинский имплантат. Например, страдомеры могут быть нанесены на коронарный стент или как часть терапии наночастицами для усиления проникновения и увеличения продолжительности высвобождения лекарственного препарата, например, для интраофтальмологического применения при увеите или дегенерации желтого пятна. Страдомеры согласно настоящему изобретению также можно применять в качестве компонента диагностики. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения специалист в данной области техники может персонализировать терапию путем определения того, какому пациенту применение страдомера принесет наибольшую пользу. Например, специалист в данной области техники может подвергнуть иммунные клетки пациента воздействию иммунологически активного биомиметика и измерить модуляцию активации иммунных клеток или созревания с помощью проточной цитометрии или цитокинового профиля, чтобы определить пациентов с надлежащим терапевтическим ответом.
[000278] Все литературные источники, приведенные в настоящем документе, полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1 - Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента
[000279] Для создания страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, применяли различные подходы. Были получены страдомеры, в которых в область Fc была введена по меньшей мере одна точечная мутация, усиливающая связывание с системой комплемента. В частности, следующие мутации были сделаны в положениях 267, 268 и 324 домена Fc страдомера GL-2045, описанного в WO 2012/016073: S267E, H268F и S324T. В некоторых страдомерах были сделаны дополнительные мутации, чтобы дополнительно увеличить степень связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническим FcγR, путем изменения связывания с FcγR и/или связывания с FcRn. Аминокислотные последовательности типичных страдомеров приведены выше в таблице 1 и таблице 2.
[000280] Для каждого созданного страдомера был определен уровень связывания с каноническими FcγR, FcRn при рН=7,4, связывания с компонентом C1q и ингибирования CDC, по сравнению с исходным страдомером, G045c (шарнирная область IgG1 - CH2 IgG1 СН3 IgG1 - шарнирная область IgG2). Кроме того, оценивали связывание некоторых соединений с другими компонентами каскада системы комплемента.
[000281] Была проведена оценка связывания страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, или исходного страдомера G045c с FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIa или FcRn. Значения RU для диссоциации были измерены с помощью интерферометрии биослоя с использованием прибора ForteBio Octet. Белки рецепторов, содержащие полигистидиновую метку, были связаны с наконечником сенсора в 1× буфере для кинетического анализа (ForteBio), после этого измеряли скорость прямой реакции рецептор/белок путем переноса наконечника сенсора в 1× буфер для кинетического анализа, содержащий выбранный очищенный страдомер. Скорость обратной реакции измеряли путем переноса наконечника сенсора в 1× буфер для кинетического анализа, и значение RU рассчитывали на основании измеренного максимального связывания с использованием программного обеспечения ForteBio. Метод интерферометрии биослоя позволяет детектировать связывание лиганда, иммобилизованного на поверхности наконечника биосенсора, с анализируемым веществом в растворе. Связывание вызывает увеличение поглощения на наконечнике биосенсора, что приводит к сдвигу длины волны (который детектируют как единицу ответа «RU»). Максимальный уровень связывания (RUмакс) представляет собой максимально возможное количество образца, связанного при достижении равновесия, которое насыщает количество лиганда на поверхности сенсора. RU 300 представляет собой связывание остаточного образца после 300 секунд диссоциации, и указанный показатель можно использовать для описания скорости диссоциации исследуемого продукта от исследуемого лиганда.
[000282] Для того чтобы охарактеризовать соединения в настоящем документе представлены результаты оценки максимального связывания с помощью интерферометрии биослоя (RUмакс) по сравнению с 5 рецепторами Fc, результаты оценки связывания с C1q методом ИФА, также ингибирования CDC. Чтобы проиллюстрировать различия в скорости диссоциации также представлены значения RU через 300 с для связывания соединений в сравнении со связыванием с 5 рецепторами Fc. Для показателей RUмакс и RU 300 в каждом случае абсолютное значение визуально определяли на основании графика ассоциации и диссоциации, полученного с помощью ForteBio, затем ответ нормировали по 0-10 шкале, где 0 обозначает отсутствие ответа и 10 обозначает максимальный ответ, наблюдаемый для данного рецептора или лиганда для всех испытываемых соединений в конкретный момент времени, RUмакс или RU 300, соответственно.
[000283] Для оценки связывания с C1q 96-луночный планшет покрывали C1q (Sigma, каталожный номер C1740, 1 мкг/мл) в течение ночи в ФСБ. После нанесения покрытия планшеты промывали 3 раза с использованием стандартного буфера для промывки (1× ФСБ + 0,05% твин-20) и блокировали блокирующим буфером (1% БСА + 1× ФСБ + 0,05% твин-20) в течение 2 ч при комнатной температуре. После блокирования планшеты инкубировали с соединением, разведенным в блокирующем буфере, из расчета 100 мкл/лунку и промывали 3 раза с использованием стандартного буфера для промывки. C1q- связанное соединение детектировали путем инкубации с биотинилированным мышиным антителом к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD Biosciences), разбавленным в соотношении 1:5000, и стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech) (100 мкл/лунку) в течение 1 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой с использованием промывочного буфера, затем окрашивание проявляли в течение 15 мин с использованием стандартного метода на основе TMB в соответствии с протоколом производителя. Поглощение регистрировали при 450 нм.
[000284] Результаты оценки связывания G045c с примерным рецептором Fc представлены на Фигуре 1.
[000285] G997 представляет собой страдомер, содержащий три мутации (S267E/H268F/S324T), введенные в остов G045c. Как показано на Фигуре 2, полученный страдомер проявляет повышенное связывание с C1q, по сравнению с исходным G045c, а также незначительно сниженное связывание с FcγRIIa и FcγRIIIa, по сравнению с G045c, и не оказывает влияния на ингибирование CDC. Результаты оценки связывания G997 с рецептором Fc представлены на Фигуре 3.
[000286] Дале конструировали G998. G998 содержит дополнительную мутацию в положении аминокислоты 297, по сравнению с G997. В частности, G998 содержит четыре мутации (S267E/H268F/S324T/N297A), вставленные в остов G045c. Тройная мутация в G998 восстанавливала сильное связывание с C1q и ингибирование CDC; связывание с активирующими рецепторами FcγRIIa и FcγRIIIa было устранено, и связывание с FcγRIIb было уменьшено, в то время как связывание с FcRn не уменьшалось, по сравнению с исходным страдомером G045c (Фигура 4A). Также неожиданным фактом явилось то, что связывание G998 с FcγRI было полностью сохранено, несмотря на мутацию N297A. Результаты сравнения значений RU300 для связывания G997, G998 и G045c с каноническими FcγR и FcRn представлены на Фигуре 4B. Учитывая агликозилирование, которое имеет место при введении мутации N297A, сохранение связывания G997 с ингибирующим рецептором FcγRIIb оказалось неожиданным фактом. Несмотря на то, что связывание с FcγRIIb было значительно уменьшено, исходя из значений RUмакс для G998 по сравнению с G997, G998 очень медленно диссоциирует от FcγRIIb, согласно значениям RU300 (Фигура 4В). Результаты оценки связывания G998 с рецептором Fc представлены на Фигуре 5.
[000287] Также были созданы конкретные соединения G1033 и G1022. В частности, G1033 содержит 6 мутаций (S267E/H268F/S324T/N297A/L234A/L235A), введенных в остов G045c; и G1022 содержит 7 мутаций (S267E/H268F/S324T/N297A/E233P/L234V/L235A и делецию G236), введенных в остов G045c. Результаты определения RUмакс для связывания G1033 и G1022 с каноническими рецепторами FcγR и FcRn, связывания с C1q и ингибирования CDC представлены на Фигуре 6А. G1033 связывается с C1q и FcRn и ингибирует CDC, без заметного связывания с FcγRIIb или FcγRIIIa. Неожиданным фактом явилось то, что, несмотря на дегликозилирование указанного соединения из-за мутации N297A, сохраняется незначительное связывание с FcγRI и FcγRIIa. G1022 связывается с C1q и ингибирует CDC без какого-либо заметного связывания с FcγRI или FcγRIIIa; сохраняется незначительное связывание указанного соединения с FcγRIIb и умеренное связывание с FcγRIIa и FcRn. Устранение связывания G1022 с FcγRI явилось неожиданным фактом вследствие природной авидности, даже при низкой аффинности, страдомеров по отношению к высокоаффинному рецептору FcγRI. Следовательно, устранение связывания с FcγRI в результате введения комбинации мутаций в G1022 было неожиданным на основании сохраненного связывания с FcγRI в других страдомерах, которые содержат указанные мутации. Например, комбинация мутаций в G998 (S267E/H268F/S324T/N297A) не приводит к потере связывания с FcγRI. Особенно неожиданным фактом явилось то, что связывание с FcγRI может быть устранено в страдомере, в котором сохраняется связывание с низкоаффинными рецепторами Fc и ингибирование CDC. Сравнение значений RU300 для связывания G045c, G1022 и G1033 с каноническими рецепторами FcγR и FcRn представлено на Фигуре 6В.
[000288] G1032 содержит 5 мутаций (S267E/H268F/S324T/L234A/L235A), введенных в остов G045c. Значения RUмакс для связывания с FcγR, RUмакс для связывания с FcRn, связывания с C1q и ингибирования CDC представлены на Фигуре 7А, и значения RU300 для связывания с FcR представлены на Фигуре 7В. Неожиданным фактом явилось то, что, несмотря на связывание G1032 с C1q и ингибирование CDC, прочное связывание сохранялось для всех канонических рецепторов Fc, несмотря на мутации L234A и L235A; умеренно прочное связывание сохранялось для FcRn.
[000289] G1023 содержит 6 мутаций (S267E/H268F/S324T/E233P/L234V/L235A) и делецию G в положении 236. Значения RUмакс для связывания с FcγR, RUмакс для связывания с FcRn, связывания с C1q и ингибирования CDC представлены на Фигуре 8A, и значения RU300 для связывания с FcR представлены на Фигуре 8В. G1023 связывался с C1q и ингибировал CDC, при этом сохранял прочное связывание со всеми каноническими рецепторами Fc, и сохранял умеренно прочное связывание с FcRn. Неожиданным фактом явилось то, что, несмотря на связывание G1023 с C1q и ингибирование CDC вследствие мутаций E223, L234V и L235A и делеции G236 (и при отсутствии дегликозилирования в результате мутации N297A), сохранялось прочное связывание со всеми каноническими рецепторами Fc.
[000290] G1006 содержит 4 мутации (S267E/H268F/S324T/D265A). Значения RUмакс для связывания с FcγR, RUмакс для связывания с FcRn, связывания с C1q и ингибирования CDC представлены на Фигуре 9A, и значения RU300 для связывания с FcR представлены на Фигуре 9В. Указанный страдомер связывался с C1q и ингибировал CDC, при этом сохранялось связывание с FcγRI, FcγRIIa и, в меньшей степени, FcγRIIb. Полученные результаты оказались неожиданными, поскольку, несмотря на то, что мутация D265A была охарактеризована как уменьшающая связывание со всеми каноническими рецепторами Fc, сохранялось прочное связывание с FcγRI и сохранялось умеренное связывание с FcγRIIa. Связывание с FcγRIIIa было устранено, и сохранялось умеренно прочное связывание с FcRn (Фигура 9А).
[000291] G1027 содержит 5 мутаций (P238D/S267E/H268F/S324T/N297A). Значения RUмакс для связывания G1027 с FcγR, RUмакс для связывания с FcRn, связывания с C1q и ингибирования CDC представлены на Фигуре 10A, и значения RU300 для связывания с FcR представлены на Фигуре 10В. Указанный страдомер связывался с C1q и ингибировал CDC, сохранял прочное связывание с FcγRI, проявлял уменьшенное связывание с FcγRIIa и FcγRIIb и умеренное связывание с FcRn, при этом связывание с FcγRIIIa отсутствовало. Неожиданным фактом явилось то, что связывание указанного страдомера с каноническими рецепторами Fc не было устранено, несмотря на мутации P238D и N297A.
[000292] G1003 конструировали на основе G019 (шарнирная область IgG2 - шарнирная область IgG1 - СН2 IgG1 СН3 IgG1) с введением 3 мутаций: S267E/H268F/S324T. Результаты для указанного страдомера представлены на Фигурах 11A и 11B. Указанный страдомер связывался с C1q и ингибировал CDC. Кроме того, страдомер проявлял прочное связывания с FcγRI и FcγRIIb; уменьшенное связывание с FcγRIIa; и умеренно прочное связывание с FcRn. Исходный страдомер G019 проявлял минимальное связывание с C1q и незначительное ингибирование CDC. Следовательно, тот факт, что введение тройной мутации в указанный исходный страдомер приводит к получению соединения с аналогичной общей структурой и профилем мультимеризации, как и у исходного G019, но способного к связыванию с C1q и эффективному ингибированию CDC, было особенно неожиданным. Еще более удивительным является тот факт, что одни и те же мутации (S267E/H268F/S324T), введенные в остов GL-2045 (с получением G998), продемонстрировали значительно различающуюся активность в отношении связывания. G997 и G1003 содержат аналогичные домены с одинаковыми мутациями и обладают сходными характеристиками связывания, хотя исходные соединения (G045c и G019, соответственно) существенно различаются в отношении связывания с C1q и ингибирования CDC. Результаты сравнения еще больше подчеркивают непредсказуемость данного набора мутаций применительно к мультимеризующемуся страдомеру.
[000293] G989 сконструирован на основе G045c, содержит 2 мутации (E233P/G236R) и был создан, чтобы уменьшить связывание с каноническими рецепторами. Однако неожиданным фактом явилось то, что указанный страдомер проявлял не только уменьшенное связывание с каноническими рецепторами, но также не был способен связываться с C1q и ингибировать CDC (Фигуры 12A, 12B и 13).
[000294] Следовательно, был создан G990, который также сконструирован на основе G045c, но содержит только одну мутацию (G236R). Неожиданным фактом явилось то, что мутация G236R по отдельности снижала связывание с каноническими рецепторами и обеспечивала сохранение минимального связывания с C1q (Фигуры 14А, 14В и 15).
[000295] На основании полученных неожиданных результатов была предпринята попытка дополнительно увеличить связывание с C1q путем создания G994. G994 был создан на основе G045c и содержит 5 мутаций: E233P/G236R/S267E/H268F/S324T. Однако неожиданным фактом явилось то, что, хотя в G994 была восстановлена утраченная способность страдомера G989, на основе которого он был создан, связываться с системой комплемента и ингибировать CDC, добавление тройной мутации S267E/H268F/S324T привело к восстановлению связывания с FcγRI и FcγRIIb (Фигуры 16A, 16B и 17). Следовательно, как сообщается, добавление тройной мутации увеличивает связывание страдомера с системой комплемента и одновременно увеличивает связывание с каноническими рецепторами Fc.
[000296] Соответственно, G994 затем использовали в качестве платформы, чтобы сохранить связывание с C1q и ингибирование CDC, и достичь специфичности в отношении связывания с системой комплемента, по сравнению со связыванием с каноническими рецепторами. В частности, был создан G996, который сконструирован на основе G045c и содержит 4 мутации (G236R/S267E/H268F/S324T). Неожиданным фактом явилось то, что G996 приобрел способность к дополнительному связыванию с FcγRIIa и FcγRIIb, но не способность к связыванию с активирующим рецептором FcγRIIIa. Следовательно, G996 связывается с C1q, ингибирует CDC и связывается со всеми рецепторами Fc, кроме FcγRIIIa (Фигуры 18A, 18B и 19, верхние панели). Однако также неожиданным фактом явилось то, что G996 не проявлял связывания с каноническими рецепторами у мыши, что делает его наиболее подходящим соединением для оценки истинного ингибирования CDC у грызунов (Фигура 19, три нижние панели).
[000297] G1042 создан на основе G045 и содержит 6 мутаций (E233P, G236R, S267E, H268F, S324T и L328F). Следовательно, G1042 отличается от G994 присутствием мутации L328F, которая, как ожидается, увеличит связывание с FcγRIIb. Неожиданным фактом явилось то, что G1042 не только прочно связывался с FcγRIIb, но также с FcγRI и FcγRIIa (Фигуры 20А, 20В и 21).
[000298] G1043 и G1046 были созданы на основе G045c и содержат 5 мутаций: P238D/D265G/S267E/H268F/S324T и P238D/D265W/S267E/H268F/S324T, соответственно. Для обоих указанных страдомеров добавление мутации P238D к другим мутациям неожиданно привело к связыванию с FcγRIIa (Фигуры 22-25). Оба страдомера, как ожидалось, должны были иметь повышенное связывание с FcγRIIb и сниженное связывание с FcγRIIa вследствие мутации в положении 238; однако неожиданным фактом явилось то, что G1043 проявлял связывание с FcγRIIa и FcγRIIb (Фигуры 22А, 22В и 23), и G1046 проявлял связывание с FcγRIIa, но не с FcγRIIb (Фигуры 24А, 24B и 25).
[000299] G1050 создан на основе G045c и содержит 8 мутаций и делецию в положении 236 (E233P/L234V/L235A/S267E/H268F/N297A/S324T/S328F и делеция в положении 236). Указанные мутации, как ожидалось, должны были уменьшить или устранить связывание с FcγRIIa и FcγRIII (вследствие мутации в E233P/L234V/L235A и делеции в положении 236), но сохранить связывание с FcγRIIb (вследствие мутации в положении 328); однако неожиданным фактом явилось то, что G1050 проявлял связывание с FcγRIIa и FcγRIIb, но не связывался с FcγRI или FcγRIII (Фигуры 26А, 26В и 27).
[000300] G1049 создан на основе остова G019 и содержит 4 мутации (S267E/H268F/S324T/L328F). Следовательно, по сравнению с G1003, G1049 содержит дополнительную мутацию в L328F, которая, как ожидалось, должна была увеличить связывание только с FcγRIIb. Однако неожиданным фактом явилось то, что G1049 проявлял сильное связывание со всеми каноническими рецепторами FcγR (Фигуры 28А, 28В и 29) и, также неожиданно, проявлял сильное связывание с C1q и ингибирование CDC, в отличие от G019. Следовательно, особенно неожиданным фактом явилось то, что сильное связывание с C1q и ингибирование CDC может быть достигнуто с помощью точечных мутаций в страдомере, содержащем остов G019.
[000301] G1025 создан на основе G045c и содержит 4 мутации (P238D/S267E/H268F/S324T). Мутация в положении 238, как ожидалось, должна была увеличить связывание с FγRIIb и уменьшить связывание с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIIa; однако неожиданным фактом явилось то, что уменьшилось только связывание с FcγRIIIa, и страдомер сохранил прочное связывание с FcγRIIb, FcγRI и FcγRIIa (Фигуры 30А и 30В).
[000302] Обобщенные результаты исследования представлены в таблице 3.
Таблица 3. Обобщенные данные по активности страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента
Связывание с FcγRI | Связывание с FcγRIIa | Связывание с FcγRIIb | Связывание с FcγRIIIa | Связывание с FcRn | Связывание с C1q | Ингибирование CDC | |
G994 | *** | - | * | - | *** | *** | * |
G996 | *** | *** | *** | - | *** | *** | * |
G997 | *** | ** | *** | *** | *** | *** | * |
G998 | *** | - | * | - | *** | *** | * |
G1003 | *** | * | *** | ** | *** | *** | * |
G1006 | *** | ** | * | - | *** | *** | * |
G1023 | *** | *** | *** | *** | *** | *** | * |
G1022 | - | ** | * | - | *** | *** | * |
G1025 | *** | *** | *** | - | *** | *** | * |
G1027 | *** | * | * | - | *** | *** | * |
G1032 | *** | *** | *** | *** | *** | *** | * |
G1033 | * | * | - | - | *** | *** | * |
G1042 | *** | *** | *** | - | *** | *** | * |
G1043 | *** | * | ** | - | *** | *** | * |
G1046 | *** | * | * | - | *** | *** | (*) |
G1049 | *** | *** | *** | ** | *** | *** | * |
G1050 | - | *** | *** | - | *** | *** | * |
(*) Указывает на предельную активность
(-) Указывает на отсутствие связывания
ПРИМЕР 2 - Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, проявляют сохраненное или усиленное связывание с C1q
[000303] Результаты сравнения связывания с C1q среди страдомеров G994, G996, G997 и G998, по сравнению с исходным GL-2045 или отрицательным контролем Fc, G001, представлены на Фигуре 31. На Фигуре 31А представлены величины поглощения при увеличении концентрации указанных страдомеров, и на Фигуре 31B представлены данные после логарифмического преобразования и значения ЭК50 для каждого из испытанных страдомеров. Значения ЭК50 представлены в мкг/мл. В совокупности представленные данные указывают на то, что страдомеры G997, G998, G996 и G994 проявляют превосходное связывание с C1q по сравнению с G001 (контрольная область Fc IgG1), а также превосходное связывание с C1q по сравнению с испытанным страдомером GL-2045.
[000304] В совокупности результаты исследования свидетельствуют о том, что страдомеры согласно настоящему изобретению способны связываться с C1q и проявляют минимальное или отсутствующее связывание с FcγRI, FcγRII и/или FcγRIII.
ПРИМЕР 3 - Связывание страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, с компонентом C3
[000305] Исследование проводили с целью оценки связывания страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, с компонентом С3.
[000306] 96-луночные планшеты покрывали компонентом системы комплемента С3 (Quidel, каталожный номер A401; 1 мкг/мл в ФСБ) в течение ночи при 4°C и затем промывали 3 раза с использованием 300 мкл 1×ФСБ + 0,1% твин-20. Планшеты блокировали в 1×ФСБ + 2% БСА + 0,05% твин-20 в течение 2 ч при комнатной температуре. Испытываемое соединение (GL-2045, G001, G997, G998, G994 или G996) инкубировали со связанным С3 в диапазоне концентрации от 100 мкг/мл и 1:1 до 0,78125 мкг/мл в блокирующем буфере в течение 2 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1×ФСБ, 0,1% твин-20). Соединение, взаимодействующее с C3, детектировали с использованием биотинилированного мышиного антитела к IgG1 человека, (каталожный номер 555869, BD) + стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech), разбавленный 1:5000 (ea.) в ФСБ-БСА-Т, которые смешивали в соотношении 1:10 и 1:50 из расчета по 100 мкл/лунку, инкубировали при комнатной температуре 1 ч с последующей четырехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Окрашивание проявляли с использованием субстрата ТМВ, который вносили в количестве 100 мкл на лунку, в течение 20 мин, реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1 М H2SO4, и поглощение регистрировали при 450/650 нм.
[000307] Результаты исследования представлены на Фигуре 32. Отрицательный контроль G001 и страдомер G996 не связывались с С3. G997 проявил промежуточный уровень связывания с С3 по сравнению с отрицательным контролем и исходным страдомером GL-2045. G994, GL-2045 и G998 проявили самый высокий уровень связывания с C3.
ПРИМЕР 4 - Связывание страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, с компонентами C3b, С4 и С5
[000308] Проводили исследования с целью оценки связывания страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, с компонентами C3b, C4 и C5.
[000309] Для оценки связывания с C3b 96-луночные планшеты покрывали компонентом системы комплемента C3b (каталожный номер GWB-8BA994, GenWay Biotech; 1 мкг/мл в ФСБ). По 100 мкл компонента системы комплемента C3b добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение ночи при 4°C с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Планшеты блокировали в блокирующем буфере (1× ФСБ + 2% БСА + 0,05% твин-20) 2 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Испытываемое соединение (G001, GL-2045, G997, G998 или G994) подвергали взаимодействию с C3b в течение 4 ч при комнатной температуре в диапазоне концентраций от 100 мкг/мл и в разведении в соотношении 1:1 до 0,78125 мкг/мл в блокирующем буфере с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Связанное соединение детектировали с использованием мышиного антитела к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD) + стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech), разбавленный в соотношении 1:5000 (ea.) в 100 мкл блокирующего буфера, в течение 1 ч при комнатной температуре. Окрашивание проявляли с использованием субстрата ТМВ в течение 20 мин, реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1 М H2SO4, и поглощение регистрировали при 450/650 нм.
[000310] Для оценки связывания с C4 96-луночные планшеты покрывали компонентом системы комплемента C4 (каталожный номер A402, Quidel; 1 мкг/мл в ФСБ). По 100 мкл компонента системы комплемента C4 добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение ночи при 4°C с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Планшеты блокировали в блокирующем буфере (1× ФСБ + 2% БСА + 0,05% твин-20) 2 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Испытываемое соединение (G001, GL-2045, G996, G997, G998 или G994) подвергали взаимодействию с C4 в течение 4 ч при комнатной температуре в диапазоне концентраций от 100 мкг/мл и разведении в соотношении 1:1 до 0,78125 мкг/мл в блокирующем буфере с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Связанное соединение детектировали с использованием мышиного антитела к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD) + стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech), разбавленный в соотношении 1:5000 (ea.) в 100 мкл блокирующего буфера, в течение 1 ч при комнатной температуре. Окрашивание проявляли с использованием субстрата ТМВ в течение 20 мин, реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1 М H2SO4, и поглощение регистрировали при 450/650 нм.
[000311] Для оценки связывания с C5 96-луночные планшеты покрывали компонентом системы комплемента C5 (каталожный номер A403, Quidel; 1 мкг/мл в ФСБ). По 100 мкл компонента системы комплемента C5 добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение ночи при 4°C с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Планшеты блокировали в блокирующем буфере (1× ФСБ + 2% БСА + 0,05% твин-20) 2 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Испытываемое соединение (G001, GL-2045, G996, G997, G998 или G994) подвергали взаимодействию с C5 в течение 4 ч при комнатной температуре в диапазоне концентраций от 100 мкг/мл и разведении в соотношении 1:1 до 0,78125 мкг/мл в блокирующем буфере с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Связанное соединение детектировали с использованием мышиного антитела к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD) + стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech), разбавленный в соотношении 1:5000 (ea.) в 100 мкл блокирующего буфера, в течение 1 ч при комнатной температуре. Окрашивание проявляли с использованием субстрата ТМВ в течение 20 мин, реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1 М H2SO4, и поглощение регистрировали при 450/650 нм.
[000312] Результаты исследований представлены на Фигуре 33 (компонент системы комплемента C3b), Фигуре 34 (компонент системы комплемента С4) и Фигуре 35 (компонент системы комплемента С5). Отрицательный контроль G001 не связывался с C3b, C4 или C5. Исходный страдомер GL-2045 связывался с C5, но не проявлял связывания с C3b или C4. Напротив, каждый из страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994, G997 и G998 связывался с С4, а также с C5.
ПРИМЕР 5 - Лечение нефрита с использованием страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, в модели нефрита, индуцированного антителами к Thy 1
[000313] Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, оценивали в модели нефрита, индуцированного антителами к Thy-1 (индуцированный антителами к Thy 1 мезангиальный пролиферативный гломерулонефрит). В этой модели антитело к тимоцитам (ATS) взаимодействует с поверхностным антигеном Thy-1, присутствующим на мезангиальных клетках крыс (Yamamoto 1987 и Jefferson 1999). Введение ATS индуцирует комплемент-зависимый мезангиолиз с последующим быстрым развитием мезангиального пролиферативного гломерулонефрита, который достигает максимума в течение 5 дней после инъекции, и затем разрешается в течение долгого времени.
[000314] Заболевание индуцировали на 0-й день путем инъекции мышиного антитела к CD90 крысы (Thy1.1) (Cedar Lane) у крыс линии Wistar (n=8), чтобы вызвать гломерулонефрит. На 0, 2, 4 и 6 день животным вводили 40 мг/кг G998, 80 мг/кг G998, 80 мг/кг G994 или 80 мг/кг G1033. Контрольные, непораженные животные не получали антитело к Thy 1 или иное лечение. Положительный контроль, такролимус, ежедневно вводили в дозе 1 мг/кг внутримышечно, начиная с -9 дня перед инъекцией антисыворотки. Дозирование на 0 день осуществляли за 4 часа перед инъекцией антисыворотки. Образцы мочи собирали перед дозированием и на 3, 5, 7 и 9 день после инъекции антисыворотки. Почки собирали у крыс при завершении исследования и фиксировали в 10% формалине для гистологического анализа. Сыворотку собирали для анализа АМК сыворотки крови.
[000315] Результаты исследования представлены на Фигурах 37, 38A, 38B, 39 и 40; и в таблице 4. На Фигуре 37 в таблице ниже графика приведены значения P относительно контрольных мышей, получавших ФСБ. Каждое из трех испытываемых соединений G994, G998 и G1033 значительно снижало протеинурию. На Фигурах 38A и 38B представлены результаты гистологического анализа пораженных контрольных мышей, получавших ФСБ (Фигура 38А), и мышей, получавших 40 мг/кг G998 (Фигура 38B). В таблице 4 и на Фигуре 39 представлены результаты количественного гистологического исследования каждого из животных в контрольной группе, получавшей ФСБ (представлены как группа 2 в таблице 3), и в группе, получавшей 40 мг/кг G998 (представлены как группа 4 в таблице 3). Результаты, приведенные в таблице 4, представлены в графической форме на Фигуре 39.
Таблица 4. Результаты количественного гистологического исследования в модели нефрита, индуцированного антителами к Thy-1
CKD-GLI-1 | ||||||
Почки | ||||||
Группа | Животные | Гломерулонефрит | Дегенерация канальцев | Делатация канальцев | CD-68 гломерулы |
CD-68 Интерстиций канальцев |
2 | 2-9 | 4 | 3 | 3 | 3 | 3 |
2-10 | 4 | 2 | 2 | 3 | 2 | |
2-11 | 2 | 0 | 0 | 3 | 1 | |
2-12 | 3 | 2 | 2 | 3 | 3 | |
2-13 | 4 | 3 | 2 | 4 | 4 | |
2-14 | 4 | 1 | 1 | 4 | 2 | |
2-15 | 4 | 4 | 3 | 4 | 4 | |
2-16 | 4 | 3 | 2 | 4 | 3 | |
Среднее Станд. откл. среднего |
3,63 0,74 |
2,25 1,28 |
1,88 0,99 |
3,50 0,53 |
2,75 1,04 |
|
4 | 4-25 | 1 | 0 | 0 | 3 | 1 |
4-26 | 1 | 1 | 0 | 4 | 1 | |
4-27 | 0 | 1 | 0 | 3 | 1 | |
4-28 | 0 | 1 | 0 | 4 | 1 | |
4-29 | 0 | 0 | 0 | 3 | 1 | |
4-30 | 0 | 0 | 0 | 4 | 1 | |
4-31 | 0 | 0 | 0 | 3 | 1 | |
4-32 | 3 | 1 | 0 | 3 | 1 | |
Среднее Станд. откл. среднего |
0,63 1,06 |
0,50 0,53 |
0,00 0,00 |
3,38 0,52 |
1,00 0,00 |
|
t-тест | 2,20447⋅10-5 | 0,00570721 | 0,00106271 | 0,641986775 | 0,002007834 |
0= исследованный образец, без результатов, 1- минимально, 2 - незначительно, 3 -умеренно, 4 - выраженный, P - присутствует, - = не присутствует.
[000316] На 9-й день собирали сыворотку крови от каждого животного и исследовали для оценки содержания азота мочевины крови (АМК). У каждого из животных, которые получали лечение с использованием страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, уровень АМК значительно снизился по сравнению с пораженными контрольными животными, получавшими ФСБ, что указывает на повышенную скорость клубочковой фильтрации и, следовательно, улучшение течения заболевания (Фигура 40).
ПРИМЕР 6 - Лечение нефрита с использованием страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, в модели пассивного нефрита Хеймана
[000317] Заболевание индуцировали у крыс на 0-й день путем инъекции антисыворотки Fx1a (каталожный номер PTX-002S, Probetex). G998 вводили на 0-й день в дозе 60 мг/кг за два часа до инъекции антисыворотки (0-й день дозирования) или в 1-й день через один день после инъекции антисыворотки (1-й день дозирования), дозирование продолжали 2 р./неделю в течение 3-х недель. Контрольные мыши получали только носитель для антисыворотки Fx1a. Мочу собирали перед дозированием и на 1, 2 и 3 неделе после инъекции антисыворотки, и оценивали протеинурию.
[000318] Результаты исследования представлены на Фигуре 41. К 21-му дню обе группы G998 показали значительное снижение протеинурии по сравнению с контрольными животными (р = 0,0220 для 0-го дня в группе G998 и р = 0,0145 для 1-го дня в группе G998).
ПРИМЕР 7 - Уровни лекарственных препаратов и функциональный период полувыведения соединений страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, у крыс
[000319] Исследование проводили для оценки периода полувыведения страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994, G998 и G1033 у крыс после введения однократной дозы. Функциональный период полувыведения измеряли путем оценки активности системы комплемента в образцах крови, взятых в различных временных точках. Образцы крови также измеряли для оценки уровней целевого лекарственного препарата, фактора системы комплемента C1q, а также оценки связанной с C1q фракции лекарственного препарата.
[000320] Крысы линии Sprague-Dawley (4 животных на группу) получали внутривенно однократную дозу 60 мг/кг соединения G994, G998 или G1033. Образцы крови (1,2-1,4 мл) собирали от каждого животного путем ретро-орбитального забора крови в предварительно охлажденные пробирки с гепарином до начала дозирования и через 1, 4 и 8 часов после введения испытываемого соединения. Образцы крови также собирали на 1, 2, 4, 7 и 10 день.
[000321] Уровни лекарственных препаратов измеряли в образцах плазмы крови с помощью ИФА. В количественном исследовании методом ИФА область Fc IgG1 в соединениях G994, G998, G1033 реагировала с антителом к Fc IgG человека (каталожный номер MA1-83240, Thermo), которое было адсорбировано на поверхности планшета. После удаления несвязанных белков образца путем промывания, вносили биотинилированное антитело к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD), конъюгированное со стрептавидином-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech). ПХ-конъюгированное антитело образует комплекс с предварительно связанным IgG1. Комплекс количественно исследовали путем добавления хромогенного субстрата (ТМВ, каталожный номер 555214, BD). Количество G994, G998 и G1033 в образцах сыворотки крови интерполировали из стандартной кривой, полученной для этого же соединения, смешанного в сыворотке обезьяны, и корректировали на разбавление образца.
[000322] Активность системы комплемента измеряли в образцах плазмы крови крыс с использованием набора для количественного исследования комплемент-зависимого лизиса клеток в условиях in vitro. В общих чертах, CD-20-экспрессирующие клетки Will2 повторно инкубировали при 37°C с моноклональным антителом к CD20 в течение 20 мин в культуральных средах, после чего клетки осаждали и ресуспендировали в свежих средах. Клетки повторно распределяли в 96-луночные планшеты, и затем к суспензии клеток добавляли плазму крови крыс из различных временных точек, и планшеты инкубировали при 37°C в течение 3 ч. Реагент для количественного исследования CytoTox (Promega) вносили в каждую лунку, и планшеты инкубировали в темноте в течение 15 мин при комнатной температуре. Люминесценцию регистрировали на люминометре Promega GloMax, и рассчитывали процент гибели клеток. Активность системы комплемента измеряли при различных концентрациях плазмы в количественном исследовании, и значения для 2% и 4% плазмы использовали для анализа.
[000323] Процент активности системы комплемента в каждом образце рассчитывали относительно активности системы комплемента в образцах перед введением дозы после вычитания значений для контрольного образца, не содержащего антитела.
[000324] Результаты исследования представлены на Фигурах 42-45. На Фигуре 42 представлены данные для периода полувыведения G994, G998 и G1033. G994 имел значительно более длительный период полувыведения, чем два других соединения, испытанных в этом же эксперименте. Соединение G994 устраняло активность комплемента в крови крыс в течение длительного периода времени. Активности системы комплемента после введения дозы G994 оставалась низкой до 96 часов (4 дня) и составляла приблизительно 50% от нормальных уровней на 10 день. Соединения G998 и G1033 имели несколько более короткий период полувыведения у крыс. Через 2 дня после введения соединения G998 активность системы комплемента составляла приблизительно 50% от активности перед введением дозы. Для соединения G1033 функциональный период полувыведения составлял от 2 до 4 дней.
[000325] На Фигуре 43 представлены данные по активности системы комплемента в крови крыс после введения однократной дозы G994, G998 или G1033. Активность системы комплемента выражена как процент гибели клеток, согласно результатам измерения при 2% или 4% концентрации плазмы в количественном исследовании. На Фигурах 44А и 44B представлена корреляция между уровнями лекарственного препарата и активностью комплемента для каждого из соединений страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994, G998 и G1033. На Фигуре 44A представлены все точки данных, собранные в исследовании, и на Фигуре 44B представлены точки данных для низких концентраций лекарственного препарата (0-250 мкг/мл для G994 и G998, и 0-150 мкг/мл для G1033). Уровни лекарственных препаратов, необходимые для устранения активности системы комплемента в крови крыс, оценивали на основании измеренных отрезков на оси абсцисс. Для G994 значение отрезка на оси абсцисс составляет 164 и 170 мкг/мл для 2% и 4% сыворотки. Значения R2 для корреляции составляют 0,696 и 0,558. Для G998 значение отрезка на оси абсцисс составляет 158 и 193 мкг/мл при значении R2 0,519 и 0,560 для 2% и 4% сыворотки. Для G1033 значение отрезка на оси абсцисс составляет 88 и 109 мкг/мл при значении R2 0,612 и 0,648.
[000326] На основании расчетных значений отрезков на оси абсцисс установлено, что для устранения активности системы комплемента необходимо приблизительно 100-200 мкг/мл соединения G994 и G998. Для соединения G1033 приблизительное количество, необходимое для устранения активности системы комплемента, составляет 100 мкг/мл.
ПРИМЕР 8 - Фармакокинетическое исследование у яванских макак
[000327] Период полувыведения G994, G998 или G1033 у яванских макак исследовали после введения однократной дозы соединений страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента.
[000328] Яванским макакам (3 животных на группу) подкожно вводили однократную дозу 28 мг/кг соединения G994 G998 или G1033. Образцы крови (приблизительно 3 мл) собирали в пробирки для отделения сыворотки у каждого животного перед введением дозы и через 1, 2, 4, 12, 24, 48, 72, 144, 216, и 312 часов после введения дозы. Уровни лекарственного препарата измеряли в образцах сыворотки крови с помощью ИФА. В данном количественном исследовании с помощью ИФА Fc IgG1 в соединениях G994, G998, G1033 реагирует с антителом к Fc IgG человека (каталожный номер MA1-83240, Thermo), которое было адсорбировано на поверхность планшетов. После удаления несвязанных белков образца путем промывки, добавляли биотинилированное антитело к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD), конъюгированное со стрептавидином-ПХ (ПХ, каталожный номер 7100-05, Southern Biotech). ПХ-конъюгированное антитело образует комплекс с ранее связанным IgG1. Комплекс количественно исследовали путем добавления хромогенного субстрата (TMB, каталожный номер 555214, BD). Количество G994, G998 и G1033 в образцах сыворотки крови интерполировали из стандартных кривых, полученных для этого же соединения, смешанного в сыворотке обезьян, и корректировали на разбавление образца.
[000329] Активность системы комплемента измеряли в образцах сыворотки крови яванских макак с использованием количественного исследования комплемент-зависимой гибели клеток в условиях in vitro. В общих чертах, CD-20-экспрессирующие клетки Will2 инкубировали при 37°C с моноклональным антителом к CD-20 в течение 20 мин в культуральных средах, после чего клетки осаждали и ресуспендировали в свежих средах. Клетки распределяли в 96-луночные планшеты, затем образцы сыворотки крови, собранные в различные моменты времени, добавляли к суспензии клеток, и планшеты инкубировали при 37°C в течение 3 ч. Реагент для количественного исследования CytoTox (Promega) вносили в каждую лунку, и планшеты инкубировали в темноте в течение 15 мин при комнатной температуре. Люминесценцию регистрировали на люминометре Promega GloMax, и рассчитывали процент гибели клеток. Активность системы комплемента измеряли при различных концентрациях плазмы в количественном исследовании, и значения для 2% и 4% плазмы использовали для анализа.
[000330] Процент активности системы комплемента в образце рассчитывали по сравнению с активностью системы комплемента в образцах перед введением дозы после вычитания значения для контрольного образца, не содержащего антитела.
[000331] Результаты исследования представлены на Фигурах 45-47. На Фигуре 45 представлен уровень лекарственного препарата для каждого из испытанных страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, после введения однократной дозы соединения. G994 достиг значительно более низких пиковых концентраций, однако имел значительно более длительный период полувыведения, чем соединения G998 и G1033. На Фигуре 46 представлены результаты оценки активности системы комплемента (% гибели клеток) в зависимости от времени после введения однократной дозы G994 (левая панель), G998 (средняя панель) или G1033 (правая панель). Фигуры 47А и 47В показывают корреляцию между уровнем лекарственного препарата и активностью системы комплемента для каждого из испытываемых соединений в исследовании. На Фигуре 47A представлены все точки данных, собранные в эксперименте, и на Фигуре 47B показана первая часть кривой с более низкими концентрациями лекарственного препарата.
[000332] Также проводили исследования, направленные на определение уровней C4a, C3a и C5a, что свидетельствует об активации системы комплемента после введения однократной дозы соединений G994, G998 и G1033. Концентрации каждого из C4a, C3a и C5a будут определены из образцов сыворотки крови, собранных, как описано выше, с использованием коммерчески доступного набора для ИФА. Результаты этих исследований покажут снижение активации системы комплемента в зависимости от времени после однократного введения G994, G998 или G1033, согласно результатам определения по уменьшению концентрации С4а, С3а и/или С5а.
[000333] Анализ остаточной активности системы комплемента после введения однократный дозы соединения с предпочтительным связыванием с системой комплемента свидетельствует о том, что соединение G994 устраняет активность комплемента в крови яванских макак в течение длительного периода времени. Активность системы комплемента после введения дозы G994 оставалась на низком уровне до 312 часов (13 дней). Соединения G998 и G1033 имели несколько более короткий период полувыведения у яванских макак. Для соединения G998 приблизительно 50% от уровня активности системы комплемента перед введением дозы сохранялось на 6 день. Для соединения G1033 функциональный период полувыведения, по-видимому, составлял от 9 до 13 дней. Для всех соединений активность комплемента сохранялась в крови в течение приблизительно 4 часов. Не желая быть связанными соответствием какой-либо теории, авторы настоящего изобретения полагают, что этот результат может быть обусловлен относительно медленным поглощением соединений после подкожного дозирования.
[000334] Анализ корреляции между уровнями лекарственного препарата и активностью системы комплемента (Фигура 47B) использовали для оценки уровней лекарственных препаратов, необходимых для устранения активности системы комплемента в крови яванских макак. На основании расчетных значений отрезка на оси абсцисс установлено, что для устранения активности системы комплемента необходимо приблизительно 150 мкг/мл соединения G994. Для соединения G998 и G1033 приблизительное значение составляет 300-400 мкг/мл.
[000335] Уровни C1q измеряли в образцах сыворотки крови от яванских макак, получавших G994, G998 или G1033, как описано выше. Количественные измерения проводили с помощью ИФА, специфичного для C1q. Образцы сыворотки крови также исследовали с помощью совместной иммунопреципитации, чтобы определить фракцию C1q, который связан с соединениями. Для того чтобы определить фракцию C1q, связанного с лекарственным препаратом, C1q-ИФА проводили с использованием захватывающего антитела к C1q с последующим связыванием детектирующего антитела к части IgG1 человека лекарственных препаратов с предпочтительным связыванием с системой комплемента. Это позволяет захватить и количественно оценить комплекс лекарственного препарата с C1q. Далее проводится исследование супернатанта из ИФА, упомянутого выше, в ИФА-C1q с использованием антитела к C1q в качестве захватывающего и детектирующего антитела для количественного определения несвязанного C1q в образцах.
ПРИМЕР 9 - Связывание страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994, G996 и G1033 с компонентами С3, C3b, С4 и С5
[000336] Дополнительные исследования проводили для оценки связывания страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, с компонентами С3, С4, C3b и C5. Девяноста шести луночные планшеты покрывали компонентом системы комплемента (каталожный номер A401, Quidel, 1 мкг/мл для С3; каталожный номер GWB-8BA994, Genway Biotech, 1 мкг/мл для C3b; каталожный номер A402, Quidel, 1 мкг/мл для C4, и A403, Quidel, 1 мкг/мл для C5) в 100 мкл ФСБ на лунку в течение ночи при 4°C с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Планшеты блокировали в блокирующем буфере (1× ФСБ + 2% БСА + 0,05% твин-20) 2 ч при комнатной температуре с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Соединение подвергали взаимодействию с компонентом системы комплемента в течение 2 ч при комнатной температуре в диапазоне концентраций от 100 мкг/мл и в разведении в соотношении 1:1 в блокирующем буфере с последующей трехкратной промывкой (300 мкл 1× ФСБ, 0,1% твин-20). Связанное соединение детектировали с использованием биотинилированного мышиного антитела к IgG1 человека (каталожный номер 555869, BD) + стрептавидин-ПХ (каталожный номер 7100-05, Southern Biotech), разбавленный в соотношении 1:5000 в 100 мкл блокирующего буфера, в течение 1 часа при комнатной температуре. Развитие окрашивания проявляли с использованием реагента TMB в течение 20 мин при комнатной температуре, реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1 М H2SO4, и поглощение регистрировали при 450/650 нм.
[000337] Результаты исследования представлены на Фигуре 49. Все страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, G994, G998 и G1033 связывались с каждым из факторов системы комплемента С3, C3b, С4 и С5. Помимо этого G1033 проявлял значительно более активное связывание с указанными факторами системы комплемента в прямом анализе связывания, по сравнению с GL-2045 или другими страдомерами с предпочтительным связыванием с системой комплемента, G994 и G998.
ПРИМЕР 10. Индукция выработки цитокинов страдомерами, предпочтительно связывающимися с системой комплемента, G994, G996 и G1033
[000338] Дополнительные исследования проводили для оценки индукции цитокинов под действием G994 и G1033 из выделенных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК). По 100 мл крови человека собирали в пробирки для сбора крови, покрытые гепарином. Аликвоты образцов крови объемом 10 мл переносили в 50 мл конические пробирки и разбавляли 10 мл ФСБ с последующим осторожным перемешиванием. По 20 мл образца разбавленной крови наносили на 15 мл Ficoll-Paque PLUS в 50 мл конических пробирках и центрифугировали при 400 g в течение 30-40 мин при температуре 18-20°С. После центрифугирования верхний слой удаляли с помощью пипетки Пастера, оставляя интактный лимфоцитарный слой на границе раздела. Лимфоцитарный слой переносили в чистую 50 мл коническую пробирку и добавляли 30 мл ФСБ. Разбавленный лимфоцитарный слой центрифугировали при 60-100g в течение 10 мин при температуре 18-20°C. После центрифугирования супернатант удаляли, и клетки промывали в 30 мл ФСБ и снова центрифугировали. Клеточный осадок ресуспендировали в 1-2 мл среды RPMI с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС). Клетки подсчитывали, распределяли на аликвоты в пробирки по 5×106 клеток/пробирку и инкубировали с исследуемым материалом (G019, G994 или G1033) в течение 4 или 24 ч. Уровни цитокинов через 4 и 20 ч определяли с помощью коммерческих наборов для ИФА.
[000339] Результаты данного исследования представлены на Фигуре 55А и 55В. Ни G1033, ни G994 не индуцировали выработку провоспалительного цитокина, ФНО-α (Фигура 55B). Аналогичным образом, ни одно из указанных двух соединений не индуцировало выработку противовоспалительного цитокина ИЛ-1Rα (Фигура 55A). Полученный результат, вероятно, объясняется неспособностью G1033 и G994 связываться с каноническими FcγR, поскольку G019 (который связывается с каноническими рецепторами, но не с комплементом) индуцировал оба цитокина.
ПРИМЕР 11 - Использование страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, для лечения установленного артрита
[000340] Исследование коллаген-индуцированного артрита (КИА) проводили с целью определения эффективности G994, G998 и G1033 в ингибировании отека, который развивается при установленном артрите, индуцированном коллагеном типа II, у самок крыс линии Lewis. Крысам вводили внутрикожно/подкожно (в/к или п/к) свиной коллаген типа II, чтобы индуцировать артрит. Затем крысам вводили внутривенно (в/в) на 11, 13 и 14 день фосфатно-солевой буферный раствор (контроль ФСБ), G994 (40 мг/крысу), G998 (40 мг/крысу) или G1033 (40 мг/крысу). В качестве положительного контроля на 11-16 день ежедневно (QD) перорально вводили эталонное соединение дексаметазон (Декс, 0,075 мг/кг). Исследование проводили с маской схемы лечения, которая была снята после завершения исследования. Оценка эффективности была основана на измерениях лодыжки штангенциркулем (Фигура 57).
[000341] Результаты указанных исследований свидетельствуют о том, что соединения страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, G994, G998 и G1033, уменьшают воспаление в модели КИА у крыс линии Lewis.
ПРИМЕР 12 - Страдомеры, полученные из G994 или G998
[000342] Дополнительные страдомеры были получены с использованием последовательности G994 в качестве основной последовательности, чтобы оценить функцию мутаций в конкретных остатках, а также идентифицировать и проверить дополнительные страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента. G994 (SEQ ID NO: 10 или 11) представляет собой страдомер на основе G045c, содержащий точечные мутации в положениях 233, 236, 267, 268 и 324. В частности, G994 содержит следующие мутации: E223P, G236R, S267E, H268F и S324T.
[000343] Для исследования функции мутаций в положении 236 создавали страдомеры, в которых аминокислота дикого типа (серин) присутствовала в положении 267, положение 236 было мутировано с заменой аргинином (как в G994) или остатком, сходным с аргинином, также присутствовали остальные мутации G994 (E233P, H268F и S324T). Созданные соединения представлены ниже в таблице 5:
Таблица 5. Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, содержащие остов G994 и дополнительные мутации в положении 236
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
1103 | 65 | E233P, G236E, 267S, H268F, S324T |
1088 | 28 | E233P, G236Q, 267S, H268F, S324T |
1089 | 29 | E233P, G236R, 267S, H268F, S324T |
1104 | 66 | E233P, G236D, 267S, H268F, S324T |
1082 | 30 | E233P, G236H, 267S, H268F, S324T |
1105 | 31 | E233P, G236N, 267S, H268F, S324T |
1106 | 32 | E233P, G236K, 267S, H268F, S324T |
[000344] Неожиданным фактом явилось то, что мутация в положении 236 с заменой на аргинин или аминокислоту, сходную с аргинином, изменяла связывание с каноническими рецепторами и связывание с системой комплемента по сравнению с G994. Мутация в положении 236 с заменой на глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту (G1103 и 1104, соответственно) приводила к высоким уровням связывания с каноническими рецепторами FcγR, сохранению высокого уровня связывания с C1q и ингибированию CDC. Следовательно, соединения G1103 и G1104 можно рассматривать как универсальные страдомеры с повышенным каноническим связыванием и связыванием с C1q, по сравнению с исходным страдомером (G045c). Напротив, мутация в положении 236 с заменой на глутамин, гистидин или аспарагин (G1088, 1082 и 1105, соответственно) приводила к снижению канонического связывания, сохраняя при этом высокий уровень связывания с C1q и ингибирование CDC. Соединения 1088, 1082 и 1105, следовательно, можно рассматривать как страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, с аналогичной терапевтической применимостью, как и G994, G998 и G1033. Мутация в положении 236 с заменой на лизин (G1106) устраняла связывание с C1q и каноническое связывание, за исключением FcγRI, и привела к неспособности ингибировать CDC.
[000345] Для исследования функции мутаций в положении 267 создавали страдомеры, в которых аминокислота дикого типа (глицин) присутствовала в положении 236, положение 236 были мутировано с заменой на глутаминовую кислоту (как в G994) или остаток, аналогичный глутаминовой кислоте, также присутствовали остальные мутации G994 (E233P, H268F и S324T). Созданные соединения представлены ниже в таблице 6.
Таблица 6. Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, содержащие остов G994 и дополнительные мутации в положении 267
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
1102 | 67 | E233P 236G, S267Q, H268F, S324T |
1100 | 33 | E233P 236G, S267R, H268F, S324T |
1101 | 68 | E233P 236G, S267D, H268F, S324T |
1125 | 69 | E233P 236G, S267H, H268F, S324T |
1108 | 34 | E233P 236G, S267N, H268F, S324T |
1109 | 70 | E233P 236G, S267E, H268F, S324T |
1084 | 35 | E233P 236G, S267K, H268F, S324T |
[000346] Мутация в положении 267 с заменой на аспарагин (G1108) привела к снижению канонического связывания, сохраняя при этом высокую степень связывания с C1q и ингибирование CDC. Поэтому G1108 можно рассматривать как страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, с аналогичной терапевтической применимостью, как и G994, G998 и G1033. Однако мутация в положении 267 с заменой на глутамин, аспарагиновую кислоту, гистидин или глутаминовую кислоту (G1102, 1101, 1125 и 1109, соответственно) приводила к повышению канонического связывания, сохраняя при этом высокую степень связывания с C1q и ингибирование CDC. Следовательно, G1102 1101, 1125 и 1109 можно рассматривать как универсальные страдомеры с повышенным связыванием с C1q, по сравнению с исходным страдомером. В другом варианте, мутация в положении 267 с заменой на аргинин или лизин (1100 и 1084, соответственно) приводила к снижению как канонического связывания, так и снижению связывания с C1q, и неспособности ингибировать CDC.
[000347] Для исследования функции комбинации мутаций в положениях 236 и 267 создавали страдомеры, в которых положение 236 было мутировано с заменой на аргинин (как в G994) или аминокислоту, структурно сходную с аргинином, и положение 267 было мутировано с заменой на глутаминовую кислоту (как в G994) или аминокислоту, структурно сходную с глутаминовой кислотой, также присутствовали остальные мутации G994 (E233P, H268F и S324T). Созданные соединения представлены ниже в таблице 7.
Таблица 7. Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, содержащие остов G994 и дополнительные мутации в положениях 236 и 267
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
G1110 | 36 | E233P, G236D, S267R, H268F, S324T |
G1111 | 71 | E233P, G236D, S267Q, H268F, S324T |
G1112 | 37 | E233P, G236R, S267R, H268F, S324T |
G1113 | 38 | E233P, G236R, S267D, H268F, S324T |
G1114 | 72 | E233P, G236Q, S267D, H268F, S324T |
G1115 | 39 | E233P, G236E, S267R, H268F, S324T |
G1116 | 40 | E233P, G236H, S267K, H268F, S324T |
G1117 | 73 | E233P, G236D, S267D, H268F, S324T |
G1118 | 41 | E233P, G236Q, S267Q, H268F, S324T |
G1119 | 42 | E233P, G236R, S267K, H268F, S324T |
G1120 | 43 | E233P, G236R, S267Q, H268F, S324T |
G1121 | 44 | E233P, G236D, S267K, H268F, S324T |
G1122 | 45 | E233P, G236H, S267Q, H268F S324T |
G1123 | 46 | E233P, G236Q, S267R, H268F, S324T |
G1124 | 47 | E233P, G236K, S267K, H268F, S324T |
G1128 | 48 | E233P, G236K, S267N, H268F, S324T |
G1129 | 49 | E233P, G236N, S267E, H268F, S324T |
G1130 | 50 | E233P, G236N, S267K, H268F, S324T |
G1131 | 51 | E233P, G236R, S267N, H268F, S324T |
[000348] Неожиданным фактом явилось то, что одновременные мутации в обоих положениях 236 и 267 оказывали различное действие по сравнению с мутациями в любом положении независимо друг от друга. Комбинация G263N/S267E, применительно к E233P/H268F/S324T (G1129), привела к снижению связывания с FcγRIIIa и сохранению или улучшению связывания с FcγRI, FcγRIIa и FcγRIIb. Следовательно, G1129 можно рассматривать как страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента. Комбинация G236D/S267Q, G236Q/S267D и точечные мутации G236D/S267D (G1111, G1114 и G1117, соответственно) привели к увеличению канонического связывания, по сравнению с исходным страдомером или G994, а также привели к поддержанию высокой степени связывания с C1q и ингибированию CDC. Следовательно, G1111, G1114 и G1117 можно рассматривать как универсальные страдомеры с потенциальной возможностью усиления терапевтической эффективности по сравнению с исходным страдомером G045c. В другом варианте, все комбинации G236D/S267R, G236R/S267R, G236E/S267R, G236H/S267K, G236R/S267K, G236R/S267Q, G236D/S267K, G236H/S267Q, G236Q/S267R, G236N/S267K или G236R/S267N (G1110, G1112, G1115, G1116, G1119, G1120, G1121, G1122, G1123, G1130 и G1131, соответственно) привели к уменьшению канонического связывания и уменьшению связывания с C1q, а также уменьшению ингибирования CDC. В некоторых случаях, таких как комбинация G236K/S267K и G236K/S267N (G1124 и G1128, соответственно), точечные мутации усиливали связывание с каноническими рецепторами и уменьшали связывание с C1q.
[000349] Дополнительные страдомеры также получали с использованием последовательности G998 в качестве основной последовательности и мутации в положении 299 (T299A), чтобы оценить функцию мутаций в конкретных остатках, применительно к указанному страдомеру. G998 (SEQ ID NO: 14 или 15) представляет собой страдомер, содержащий остов G045c и точечные мутации в положениях 267, 268, 297 и 324. В частности, G998 содержит следующие мутации: S267E, H268F, N297A и S324T. Консенсусный сайт гликозилирования представляет собой NXT, в котором N представляет остаток 297. Остаток в положении 297 ковалентно соединяет остатки сахаров. Мутация T299A дополнительных страдомеров, описанных в настоящем документе, была предназначена для получения агликозилированного белка; мутация аминокислоты в положении 299 предназначена для устранения консенсусного сайта гликозилирования так, что белок не будет гликозилирован, но будет содержать интактный остаток 297. Соответственно, соединения, представленные в таблице 8 ниже (в которых аминокислоту в положении 267 заменяли глутаминовой кислотой (как в G998) или аминокислотной последовательностью, аналогичной глутаминовой кислоте, или остаток не подвергали мутированию и он представлял собой остаток серина дикого типа; аминокислоты в положении 268 и 324 мутировали, как в G998; аминокислота в положении 297 не подвергалась мутированию, и мутация с заменой треонина аланином была добавлена в положении 299), были созданы и испытаны.
Таблица 8. Страдомеры, содержащие остов G998, мутацию в положении 299 и дополнительные мутации в положении 267
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
1071d2 | 52 | 267S, H268F, S324T, T299A |
1068 | 74 | S267E, H268F, S324T, T299A |
1094 | 75 | S267Q, H268F, S324T, T299A |
1092 | 76 | S267D, H268F, S324T, T299A |
1096 | 53 | S267R, H268F, S324T, T299A |
1107 | 77 | S267H, H268F, S324T, T299A |
1093 | 54 | S267K, H268F, S324T, T299A |
1095 | 55 | S267N, H268F, S324T, T299A |
[000350] Неожиданным фактом явилось то, что включение мутации T299A, которая должна привести к устранению канонического связывания, затронуло только связывание с FcγR, что было характерно для мутации S267R (G1096) или S267K (G1093). В обоих соединениях, G1096 и G1093, связывание с C1q также была снижено, и ни одно из соединений не обладало способностью ингибировать CDC, вероятно, вследствие отсутствия связывания с C1q. Другие соединения, содержащие мутации T299A (1071d2, G1068, G1094, G1092 и G1107), проявляли усиленное связывание с FcγR и C1q. Следовательно, G1068, G1094, G1092 и G1107 можно рассматривать как универсальные страдомеры с потенциальной возможностью усиления терапевтической эффективности по сравнению с исходным страдомером G045c. Неожиданным фактом явилось то, что сильное связывание с C1q не обязательно коррелирует с ингибированием CDC, поскольку 1712d2 не мог ингибировать CDC. G1095 содержит мутации T299A и S267N, комбинация которых привела к незначительно сниженному связыванию с каноническими рецепторами, сохраняя при этом связывание с C1q и ингибирование CDC. Поэтому G1095 можно рассматривать как страдомер, предпочтительно связывающийся с системой комплемента, с аналогичной терапевтической применимостью, как и G994, G998 и G1033.
[000351] Дополнительные страдомеры на основе G998 создавали и испытывали, чтобы дополнительно оценить функцию мутаций 267, применительно к указанным страдомерам. Указанные мутированные варианты содержат мутации в положениях 268, 324 и 297, как в G998, и содержат остаток серина дикого типа или аминокислотную замену в положении 267, как показано в таблице 9 ниже. Указанные страдомеры не содержат мутацию в положении 299.
Таблица 9. Страдомеры, содержащие остов G998, мутацию в положении 299 и дополнительные мутации в положении 267
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
1069 | 56 | S267S, H268F, S324T, N297A |
1070 | 57 | S267K, H268F, S324T, N297A |
1132 | 58 | S267R, H268F, S324T, N297A |
1074 | 59 | S267D, H268F, S324T, N297A |
1075 | 60 | S267Q, H268F, S324T, N297A |
[000352] Как и ожидалось, страдомеры в таблице 9 проявляли сниженное связывание с каноническими рецепторами, вследствие мутации N297A, приводящей к агликозилированию. Неожиданным фактом явилось то, что остаток серина дикого типа в положении 267 (G1069), S267D или точечные мутации S267Q (G1074 и G1075, соответственно) также приводили к усилению связывания с C1q и снижению канонического связывания. Следовательно, G1069, G1074 и G1075 можно рассматривать как страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, с аналогичной терапевтической применимостью, как и G994, G998 и G1033. Мутации S267K (G1070) и S267R (1132) привели к снижению не только связывания с FcγR, но также снижению связывания с C1q и неспособности ингибировать CDC.
[000353] Соединения, полученные из G994 и G998, разделяли на геле, чтобы оценить мультимеризацию. По 3 мкг каждого образца разделяли при 150 В в течение приблизительно 1,2 ч. Вносили 20 мМ иодацетамида, и затем образцы инкубировали в течение 10 мин перед нанесением на гель. Результаты представлены на Фигурах 48A-G и свидетельствуют о том, что, аналогично G994 и G998, соединения G1103, G1088, G1089, G1104, G1082, G1105, G1106, G1102, G1100, G1101, G1125, G1108, G1109, G1084, G1107, G1110, G1111, G1112, G1114, G1115, G1116, G1117, G1118, G1119, G1120, G1121, G1122, G1123, G1124, G1128, G1129, G1130, G1131, G1071d2, G1068, G1094, G1092, G1096, G1093, G1095, G1069, G1070, G1132, G1075 и G1075 образуют мультимеры.
[000354] Для каждого страдомера в таблицах 5-9 уровень связывания с каноническим рецептором FcγR, связывания с компонентом системы комплемента C1q и степень ингибирования CDC определяли в соответствии со способами, описанными в примере 1. Полученные результаты обобщены в таблицы 10.
Таблица 10. Обобщенные данные по активности страдомеров, полученных из G994 или G998
Связывание с FcγRI | Связывание с FcγRIIa | Связывание с FcγRIIb | Связывание с FcγRIIIa | Связывание с C1q | Ингибирование CDC (ЭК50, мкг/мл) | |
G1103 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1088 | *** | ** | * | ** | Высокое | 5 |
G1089 | ** | - | * | - | Низкое | 100 |
G1104 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1082 | *** | ** | - | *** | Высокое | 5 |
G1105 | *** | ** | ** | ** | Высокое | 5 |
G1106 | *** | - | - | - | Низкое | 100 |
G1102 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 7,5 |
G1100 | *** | - | - | *** | Низкое | НИ |
G1101 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1125 | *** | ** | ** | ** | Высокое | 5 |
G1108 | *** | * | * | *** | Высокое | 5 |
G1109 | *** | *** | *** | *** | Высокое | НД |
G1084 | *** | - | - | * | Низкое | НИ |
G1110 | *** | - | - | - | Низкое | 25 |
G1111 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1112 | * | - | - | - | Низкое | НИ |
G1113 | НД | НД | НД | НД | НД | НД |
G1114 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1115 | *** | - | - | *** | Низкое | 50 |
G1116 | ** | - | - | - | Низкое | НИ |
G1117 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 5 |
G1118 | *** | ** | ** | ** | Низкое | 10 |
G1119 | * | - | - | - | Низкое | НИ |
G1120 | ** | - | - | - | Низкое | 100 |
G1121 | ** | - | - | - | Низкое | 100 |
G1122 | *** | *** | ** | ** | Низкое | 5 |
G1123 | ** | - | - | * | Низкое | НИ |
G1124 | *** | *** | *** | *** | Низкое | 10 |
G1128 | *** | *** | *** | *** | Низкое | 10 |
G1129 | *** | *** | *** | * | Высокое | 5 |
G1130 | *** | *** | *** | - | Низкое | 10 |
G1131 | *** | - | - | *** | Низкое | 15 |
G1071d2 | *** | *** | *** | *** | Высокое | НИ |
G1068 | *** | *** | *** | * | Высокое | 10 |
G1094 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 12,5 |
G1092 | *** | *** | *** | *** | Высокое | 10 |
G1096 | ** | - | - | ** | Низкое | НИ |
G1107 | *** | *** | *** | ** | Высокое | 12,5 |
G1093 | *** | - | - | - | Низкое | НИ |
G1095 | *** | ** | ** | ** | Высокое | 15 |
G1069 | *** | - | - | * | Высокое | 10 |
G1070 | *** | - | - | - | Низкое | НИ |
G1132 | *** | - | - | - | Низкое | НИ |
G1074 | *** | ** | ** | * | Высокое | 10 |
G1075 | *** | - | - | - | Высокое | 15 |
НИ= Нет ингибирования
НД = Нет данных
ПРИМЕР 13 - Страдомеры со сниженным связыванием с C1q и каноническими рецепторами FcγR
[000355] Были созданы дополнительные соединения, содержащие тройную мутацию S267E/H268F/S324T, чтобы получить дополнительные страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента.
[000356] G1001 (SEQ ID NO: 78) создан на основе остова G019 и содержит четыре мутации (S267E/H268F/S324T/N297A). Неожиданным фактом явилось то, что, применительно к исходному соединению G019, устранение гликозилирования путем введения мутации N297A в G1003, чтобы получить G1001, неожиданно связанно с потерей связывания с C1q в дополнение к ожидаемой потере канонического связывания, даже в присутствии тройной мутации S267E/H268F/S324T (Moore et. al.). Полученный неожиданный результат не наблюдали для исходного соединения G045c, когда устранение гликозилирования путем введения мутации N297A в G997, чтобы получить G998, связанно с ожидаемой потерей канонического связывания, при этом сохраняется полное связывание с C1q и ингибирование CDC. В этой связи, несмотря на то, что G998 и G1001 содержат аналогичные домены с одинаковыми мутациями и отличаются только положением шарнирной области IgG2, они проявляют по существу аналогичное связывание с каноническим рецептором Fc, но значительно различающееся связывание с C1q и ингибирование CDC. Эти сравнения еще больше подчеркивают непредсказуемость данного набора мутаций применительно к мультимеризующемуся страдомеру.
[000357] G999 (SEQ ID NO: 79) представляет собой страдомер на основе G019, содержащий четыре точечные мутации (G236R, S267E, H268F и S324T), который проявляет сниженное связывание с C1q и неспособность ингибировать CDC. Полученный результат является неожиданным, поскольку, как описано выше, G999 отличается от G996 только местом расположения шарнирной области IgG2 относительно области Fc. Однако указанные два соединения проявляют противоположные способности в отношении связывания C1q и ингибирования CDC (G999 не способен ни к связыванию, ни к ингибированию, в то время как G996 проявляет высокую степень связывания с C1q и ингибирует CDC). Это сравнение еще раз подчеркивает непредсказуемость данного набора мутаций применительно к мультимеризующемуся страдомеру.
[000358] G1024 (SEQ ID NO: 80) представляет собой страдомер на основе G019, содержащий 4 точечные мутации (P238D, S267E, H268F, S324T).
[000359] G1030 (SEQ ID NO: 81) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 7 точечных мутаций и делецию в 236 (E233P, L234V, L235A, G236Del, N297A, S267E, H268F, S324T).
[000360] G1031 (SEQ ID NO: 82) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 6 точечных мутаций (E233P, G236R, D265A, S267E, H268F, S324T, N297A).
[000361] G1040 (SEQ ID NO: 83) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 8 точечных мутаций и делецию в положении 236 (E233P, L234V, L235A, G236Del, S267E, H268F, S324T, L328F, N297A).
[000362] G1044 (SEQ ID NO: 84) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 5 точечных мутаций (P238D, D265C, S267E, H268F, S324T).
[000363] G1045 (SEQ ID NO: 85) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 5 точечных мутаций (P238D, D265P, S267E, H268F, S324T).
[000364] G1048 (SEQ ID NO: 86) представляет собой страдомер на основе G019, содержащий 5 точечных мутаций (G236R, L328F, S267E, H268F, S324T).
[000365] G1047 (SEQ ID NO: 87) представляет собой страдомер на основе GL-2045, содержащий 5 точечных мутаций (P238D, L328F, S267E, H268F, S324T).
Таблица 11. Страдомеры с уменьшенным связыванием с C1q и каноническими рецепторами FcγR
Страдомер | SEQ ID NO | Мутированные аминокислоты |
G1001 | 78 | S267E, H268F, S324T, N297A |
G999 | 79 | G236R, S267E, H268F, S324T |
G1024 | 80 | P238D, S267E, H268F, S324T |
G1030 | 81 | E233P, L234V, L235A, G236Del, N297A, S267E, H268F, S324T |
G1031 | 82 | E233P, G236R, S267E, H268F, S324T, N297A |
G1040 | 83 | E233P, L234V, L235A, G236Del, S267E, H268F, S324T, L328F, N297A |
G1044 | 84 | P238D, D265C, S267E, H268F, S324T |
G1045 | 85 | P238D, D265P, S267E, H268F, S324T |
G1048 | 86 | G236R, L328F, S267E, H268F, S324T |
G1047 | 87 | P238D, L328F, S267E, H268F, S324T |
[000366] Неожиданным фактом явилось то, что, несмотря на присутствие тройной мутации S267E/H268F/S324T, страдомеры, перечисленные в таблице 11, не связывались с C1q и не ингибировали CDC, что, таким образом, дополнительно подчеркивает непредсказуемость данного набора точечных мутаций применительно к мультимеризующемуся страдомеру. Результаты эксперимента, в котором определяли связывание с FcγR и FcRn, связывание с C1q и ингибирование CDC, представлены в таблице 12.
Таблица 12. Обобщенные данные по активности страдомеров с уменьшенным связыванием с C1q и каноническими рецепторами FcγR
Связывание с FcγRI | Связывание с FcγRIIa | Связывание с FcγRIIb | Связывание с FcγRIIIa | Связывание с FcRn (pH=7,4) | Связывание с C1q* | Ингибирование CDC | |
G1001 | *** | ** | - | - | *** | НД | (*) |
G999 | *** | - | ** | - | *** | НД | - |
G1024 | *** | *** | *** | - | *** | - | - |
G1030 | - | - | - | - | *** | - | - |
G1031 | - | - | - | - | ** | - | - |
G1040 | *** | *** | *** | - | *** | НД | - |
G1044 | *** | (*) | - | - | *** | НД | - |
G1045 | *** | - | - | - | *** | - | - |
G1048 | *** | *** | *** | *** | *** | НД | - |
G1047 | *** | *** | *** | * | *** | НД | - |
ПРИМЕР 14 - Использование страдомеров, предпочтительно связывающихся с системой комплемента, для лечения серповидно-клеточной анемии
[000367] Страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, G994, G998, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027 и G996 оценивали в мышиной модели серповидно-клеточной анемии, подробно описанной в Turhan et all (2004) Blood 103:2397 и Chang et al (2008) Blood 111:915. В общих чертах, самцов мышей линии SCD, в возрасте 12-16 недель (мыши Townes SS, гомозиготные по Hbatm1(HBA)Tow и гомозиготные по Hbbtm2(HBG1,HBB*)Tow (генотип M21)) рандомизировано распределяли в группы и вводили (внутривенно) физиологический раствор, IVIG (400 мг/кг), hIgG1 (400 мг/кг), альбумин (400 мг/кг) или страдомер (G045c, G994, G998 G1003 и G1033, 60 мг/кг) за 20 мин до хирургической подготовки. Адгезиия и качение нейтрофилов, а также агрегаты тромбоцитов и нейтрофилов исследовали в кремастерных венулах. Плазму крови собирали после терминального сбора крови для исследования маркеров, включая sE-селектин, sP-селектин, sVCAM-1 и sICAM-1.
[000368] Результаты исследования демонстрируют, что G994, G998, G1033, G1022, G1032, G1023, G1006, G1027 и G996 значительно уменьшают SSRBC-WBC взаимодействия/WBC/мин, значительно увеличивают поток качения на WBC/мин или фракционный процент, и значительно улучшают кумулятивное выживание для обработанной группы по сравнению с контролем. Следовательно, страдомеры, предпочтительно связывающиеся с системой комплемента, эффективно излечивают серповидно-клеточную анемию.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Гликник Инк.
Блок, Дэвид С.
Олсен, Хенрик
<120> ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКОВ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ
СОЗДАНИЯ УПОРЯДОЧЕНО МУЛЬТИМЕРИЗОВАННЫХ КОМПОЗИЦИЙ
ОБЛАСТЕЙ FC ИММУНОГЛОБУЛИНОВ С УСИЛЕННЫМ
СВЯЗЫВАНИЕМ С СИСТЕМОЙ КОМПЛЕМЕНТА
<130> GLIK-015/01WO 310975-2150
<150> US 62/196,478
<151> 2015-07-24
<160> 87
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Лидерная последовательность
<400> 1
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 2
<211> 232
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 2
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 3
<211> 232
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 3
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 4
<211> 12
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 4
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 5
<211> 41
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 5
Gly Gly Gly Ser Ile Lys Gln Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu
1 5 10 15
Ser Lys Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu
20 25 30
Ile Gly Glu Arg Gly His Gly Gly Gly
35 40
<210> 6
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Домен мультимеризации GPP
<400> 6
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
<210> 7
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 8
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 8
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 9
<211> 263
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 9
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Val Pro Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
35 40 45
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
50 55 60
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
65 70 75 80
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
85 90 95
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
100 105 110
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
115 120 125
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
130 135 140
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
165 170 175
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
180 185 190
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
195 200 205
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
210 215 220
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
225 230 235 240
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 10
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 11
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 12
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 12
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 13
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 13
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 14
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 14
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 15
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 15
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 16
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 16
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 17
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 17
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
35 40 45
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
50 55 60
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
65 70 75 80
Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
85 90 95
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
100 105 110
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
115 120 125
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala
130 135 140
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
145 150 155 160
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
165 170 175
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
180 185 190
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
195 200 205
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
210 215 220
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
225 230 235 240
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
245 250 255
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 18
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 18
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Ala Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 19
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 19
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 20
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 20
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 21
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 21
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 22
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 22
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 23
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 23
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 24
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 24
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Gly Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 25
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 25
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Trp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 26
<211> 263
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 26
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
35 40 45
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
50 55 60
Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
65 70 75 80
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
85 90 95
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
100 105 110
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr
115 120 125
Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
130 135 140
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
145 150 155 160
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
165 170 175
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
180 185 190
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
195 200 205
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
210 215 220
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
225 230 235 240
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys Cys
245 250 255
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 27
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 27
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 28
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 28
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gln Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 29
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 29
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 30
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 30
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu His Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 31
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 31
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asn Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 32
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 32
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Lys Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 33
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 33
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 34
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 34
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asn Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 35
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 35
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 36
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 36
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 37
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 37
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 38
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 38
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 39
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 39
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Glu Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 40
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 40
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu His Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 41
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 41
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gln Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 42
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 42
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 43
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 43
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 44
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 44
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 45
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 45
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu His Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 46
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 46
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gln Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 47
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 47
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Lys Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 48
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 48
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Lys Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asn Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 49
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 49
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asn Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 50
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asn Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 51
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 51
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asn Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 52
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 52
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 53
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 53
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 54
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 54
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 55
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 55
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asn Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 56
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 56
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 57
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 57
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Lys Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 58
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 58
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Arg Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 59
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 59
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 60
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 60
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 61
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 61
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 62
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 63
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 63
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 64
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 64
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
35 40 45
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
50 55 60
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
65 70 75 80
Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
85 90 95
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
100 105 110
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
115 120 125
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala
130 135 140
Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
145 150 155 160
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
165 170 175
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
180 185 190
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
195 200 205
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
210 215 220
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
225 230 235 240
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
245 250 255
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 65
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 65
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Glu Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 66
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 66
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 67
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 67
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 68
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 68
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 69
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 69
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val His Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 70
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 71
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 71
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 72
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 72
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Gln Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 73
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 73
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 74
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 74
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 75
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 75
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Gln Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 76
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 76
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Asp Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 77
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 77
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val His Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 78
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 78
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
35 40 45
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
50 55 60
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
65 70 75 80
Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
85 90 95
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
100 105 110
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
115 120 125
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala
130 135 140
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
145 150 155 160
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
165 170 175
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
180 185 190
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
195 200 205
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
210 215 220
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
225 230 235 240
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
245 250 255
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 79
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 79
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
35 40 45
Pro Glu Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
50 55 60
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
65 70 75 80
Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
85 90 95
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
100 105 110
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
115 120 125
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala
130 135 140
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
145 150 155 160
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
165 170 175
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
180 185 190
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
195 200 205
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
210 215 220
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
225 230 235 240
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
245 250 255
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 80
<211> 263
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 80
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Val Pro Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
35 40 45
Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
50 55 60
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
65 70 75 80
Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
85 90 95
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
100 105 110
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
115 120 125
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu
130 135 140
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
165 170 175
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
180 185 190
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
195 200 205
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
210 215 220
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
225 230 235 240
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 81
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 81
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 82
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 82
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Ala Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 83
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 83
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 84
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 84
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Cys Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 85
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 85
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Pro Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<210> 86
<211> 263
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 86
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Val Pro Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gly Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
35 40 45
Glu Leu Leu Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
50 55 60
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
65 70 75 80
Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
85 90 95
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
100 105 110
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
115 120 125
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Phe
130 135 140
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
165 170 175
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
180 185 190
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
195 200 205
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
210 215 220
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
225 230 235 240
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260
<210> 87
<211> 264
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 87
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe
35 40 45
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
50 55 60
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
65 70 75 80
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
100 105 110
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
115 120 125
Thr Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
130 135 140
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
145 150 155 160
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
165 170 175
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
180 185 190
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
195 200 205
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
225 230 235 240
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Arg Lys Cys
245 250 255
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
260
<---
Claims (25)
1. Пептидный гомодимер для связывания с компонентом системы комплемента C1q, состоящий из двух идентичных мономеров, при этом каждый мономер содержит в направлении от амино- к карбоксильному концу:
(a) лидерную последовательность;
(b) по меньшей мере один домен Fc IgG1; и
(с) по меньшей мере один домен мультимеризации шарнирной области IgG2;
при этом домен Fc IgG1 содержит шарнирную область IgG1, домен СН2 IgG1 и домен IgG1 CH3, при этом домен Fc IgG1 содержит полиморфизм EEM или DEL IgG1 человека и при этом домен Fc IgG1 содержит точечные мутации S267E, H268F и S324T и дополнительно содержит:
(i) точечную мутацию N297A;
(ii) точечную мутацию G236R; или
(iii) точечные мутации G236R и E233P последовательности домена Fc IgG1 SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3.
2. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен Fc IgG1 содержит точечные мутации S267E, H268F, N297A и S324T.
3. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен Fc IgG1 содержит точечные мутации G236R, S267E, H268F и S324T.
4. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен Fc IgG1 содержит точечные мутации E233P, G236R, S267E, H268F и S324T.
5. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен мультимеризации создает мультимеры указанных пептидных гомодимеров.
6. Пептидный гомодимер по п. 5, отличающийся тем, что указанные мультимеры указанных пептидных гомодимеров представляют собой высокоупорядоченные мультимеры.
7. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный пептидный гомодимер проявляет уменьшенное связывание с низкоаффинным рецептором Fcγ.
8. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный домен Fc IgG1 дополнительно содержит мутацию в положении 298 или 299, и тем, что пептидный гомодимер связывается с C1q, ингибирует CDC и сохраняет связывание с FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и/или FcγRIII.
9. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный пептидный гомодимер проявляет уменьшенное связывание с FcγRI, FcγRII и/или FcγRIII по сравнению с пептидным гомодимером, имеющим аналогичную структуру, который не содержит точечную мутацию в одном или более положениях 233, 236, 267, 268, 297 и/или 324.
10. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что указанный пептидный гомодимер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 11, 12, 13, 14 и 15.
11. Пептидный гомодимер по п. 1, отличающийся тем, что лидерная последовательность отщепляется при экспрессии.
12. Молекула для связывания комплемента, содержащая два или более пептидных гомодимера по любому из пп. 1-11.
13. Применение пептидного гомодимера по любому из пп. 1-11 или молекулы по п. 12 для лечения или предотвращения нефрита.
14. Применение по п. 13, отличающееся тем, что указанный пептидный гомодимер или указанную молекулу вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, чрескожно, с помощью подкожного имплантата или внутримышечно.
15. Применение пептидного гомодимера по любому из пп. 1-11 или молекулы по п. 12 для лечения или предотвращения артрита.
16. Применение по п. 15, отличающееся тем, что указанный пептидный гомодимер или указанную молекулу вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, чрескожно, с помощью подкожного имплантата или внутримышечно.
17. Применение пептидного гомодимера по любому из пп. 1-11 или молекулы по п. 12 для лечения или предотвращения серповидно-клеточной анемии.
18. Применение по п. 17, отличающееся тем, что указанный пептидный гомодимер или указанную молекулу вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, чрескожно, с помощью подкожного имплантата или внутримышечно.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562196478P | 2015-07-24 | 2015-07-24 | |
US62/196,478 | 2015-07-24 | ||
PCT/US2016/043746 WO2017019565A2 (en) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced complement binding |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020138007A Division RU2020138007A (ru) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018106332A RU2018106332A (ru) | 2019-08-26 |
RU2018106332A3 RU2018106332A3 (ru) | 2019-11-13 |
RU2737378C2 true RU2737378C2 (ru) | 2020-11-27 |
Family
ID=57885189
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020138007A RU2020138007A (ru) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента |
RU2018106332A RU2737378C2 (ru) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020138007A RU2020138007A (ru) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20180244772A1 (ru) |
EP (2) | EP3325011B3 (ru) |
JP (2) | JP6937737B2 (ru) |
KR (2) | KR20240042137A (ru) |
CN (2) | CN116063510A (ru) |
AU (2) | AU2016297862C1 (ru) |
BR (1) | BR112017028550A2 (ru) |
CA (1) | CA2991254A1 (ru) |
CY (1) | CY1123719T1 (ru) |
DK (1) | DK3325011T6 (ru) |
ES (1) | ES2846024T7 (ru) |
FI (1) | FI3325011T6 (ru) |
HK (1) | HK1254447A1 (ru) |
HU (1) | HUE053062T2 (ru) |
IL (2) | IL256879B2 (ru) |
LT (1) | LT3325011T (ru) |
MX (2) | MX2018000587A (ru) |
PL (1) | PL3325011T6 (ru) |
PT (1) | PT3325011T (ru) |
RU (2) | RU2020138007A (ru) |
SI (1) | SI3325011T1 (ru) |
TW (2) | TWI729993B (ru) |
WO (1) | WO2017019565A2 (ru) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3026420A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Gliknik Inc. | Cysteine-optimized stradomers |
US20190389941A1 (en) | 2016-07-22 | 2019-12-26 | Gliknik Inc. | Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced fc receptor binding |
EP3551227A4 (en) | 2016-12-09 | 2020-07-29 | Gliknik Inc. | METHOD FOR TREATING INFLAMMABLE DISEASES WITH MULTI-VALUE FC COMPOUNDS |
BR112019009484A2 (pt) | 2016-12-09 | 2019-07-30 | Gliknik Inc | otimização de fabricação de gl-2045, um stradomer multimerizador |
DK3723791T3 (da) | 2017-12-14 | 2024-04-08 | CSL Behring Lengnau AG | Rekombinante igg-fc-multimere til behandling af neuromyelitis optica |
BR112022003713A2 (pt) | 2019-09-13 | 2022-08-09 | CSL Behring Lengnau AG | Multímeros de fc de igg recombinantes para o tratamento de doenças renais mediadas por imunocomplexo |
WO2021193870A1 (ja) * | 2020-03-26 | 2021-09-30 | デンカ株式会社 | Fc領域の一部を欠損した抗体を含む試薬 |
CN114478741B (zh) * | 2021-12-31 | 2023-03-07 | 苏州大学 | contactin 6蛋白突变体及其编码基因、表达载体与应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011091078A2 (en) * | 2010-01-19 | 2011-07-28 | Xencor, Inc. | Antibody fc variants with enhanced complement activity |
WO2012016073A2 (en) * | 2010-07-28 | 2012-02-02 | Gliknik Inc. | Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions |
RU2549676C2 (ru) * | 2007-06-01 | 2015-04-27 | Юниверсити Оф Мэрилэнд, Балтимор | СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ КОНСТАНТНОЙ ОБЛАСТИ ИММУНОГЛОБУЛИНА СВЯЗЫВАЮЩИЕ Fc-РЕЦЕПТОР |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3101690B2 (ja) * | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・2・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
CA2110899C (en) | 1991-06-21 | 2006-08-08 | Jacob G. Michael | Orally administrable therapeutic proteins and method of making |
US6194551B1 (en) * | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US20060235208A1 (en) * | 2002-09-27 | 2006-10-19 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized properties |
US20150071948A1 (en) * | 2003-09-26 | 2015-03-12 | Gregory Alan Lazar | Novel immunoglobulin variants |
US20100184959A1 (en) * | 2007-03-19 | 2010-07-22 | Medimmune Limited | Polypeptide Variants |
JP6167040B2 (ja) * | 2010-11-05 | 2017-07-19 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | Fcドメイン中に突然変異を有する、安定したヘテロ二量体抗体の設計 |
ES2623912T3 (es) * | 2010-12-23 | 2017-07-12 | Janssen Biotech, Inc. | Mutantes FC de anticuerpo activo resistente a proteasa |
NZ630020A (en) * | 2012-03-08 | 2016-08-26 | Halozyme Inc | Conditionally active anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof |
AU2013305885B2 (en) * | 2012-08-20 | 2017-12-21 | Gliknik Inc. | Molecules with antigen binding and polyvalent Fc gamma receptor binding activity |
US9714291B2 (en) * | 2012-10-05 | 2017-07-25 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Heterodimer protein composition |
KR20160130463A (ko) | 2014-03-05 | 2016-11-11 | 유씨비 바이오파마 에스피알엘 | 다량체 Fc 단백질 |
-
2016
- 2016-07-22 IL IL256879A patent/IL256879B2/en unknown
- 2016-07-22 PT PT168311660T patent/PT3325011T/pt unknown
- 2016-07-22 BR BR112017028550A patent/BR112017028550A2/pt active Search and Examination
- 2016-07-22 RU RU2020138007A patent/RU2020138007A/ru unknown
- 2016-07-22 WO PCT/US2016/043746 patent/WO2017019565A2/en active Application Filing
- 2016-07-22 KR KR1020247008871A patent/KR20240042137A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-07-22 HU HUE16831166A patent/HUE053062T2/hu unknown
- 2016-07-22 IL IL309260A patent/IL309260A/en unknown
- 2016-07-22 MX MX2018000587A patent/MX2018000587A/es unknown
- 2016-07-22 EP EP16831166.0A patent/EP3325011B3/en active Active
- 2016-07-22 CN CN202211181358.XA patent/CN116063510A/zh active Pending
- 2016-07-22 KR KR1020187001187A patent/KR102649702B1/ko active IP Right Grant
- 2016-07-22 CN CN201680042311.1A patent/CN107847599B/zh active Active
- 2016-07-22 JP JP2018501267A patent/JP6937737B2/ja active Active
- 2016-07-22 FI FIEP16831166.0T patent/FI3325011T6/fi active
- 2016-07-22 LT LTEP16831166.0T patent/LT3325011T/lt unknown
- 2016-07-22 PL PL16831166.0T patent/PL3325011T6/pl unknown
- 2016-07-22 EP EP20207511.5A patent/EP3828204A1/en active Pending
- 2016-07-22 RU RU2018106332A patent/RU2737378C2/ru active
- 2016-07-22 AU AU2016297862A patent/AU2016297862C1/en active Active
- 2016-07-22 DK DK16831166.0T patent/DK3325011T6/da active
- 2016-07-22 SI SI201631063T patent/SI3325011T1/sl unknown
- 2016-07-22 ES ES16831166T patent/ES2846024T7/es active Active
- 2016-07-22 CA CA2991254A patent/CA2991254A1/en active Pending
- 2016-07-25 TW TW105123519A patent/TWI729993B/zh active
- 2016-07-25 TW TW110118740A patent/TWI812951B/zh active
-
2018
- 2018-01-15 MX MX2022008337A patent/MX2022008337A/es unknown
- 2018-01-24 US US15/878,509 patent/US20180244772A1/en active Pending
- 2018-10-23 HK HK18113532.8A patent/HK1254447A1/zh unknown
-
2021
- 2021-01-13 CY CY20211100019T patent/CY1123719T1/el unknown
- 2021-06-25 JP JP2021106156A patent/JP7122440B2/ja active Active
-
2022
- 2022-08-31 AU AU2022224791A patent/AU2022224791A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2549676C2 (ru) * | 2007-06-01 | 2015-04-27 | Юниверсити Оф Мэрилэнд, Балтимор | СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ КОНСТАНТНОЙ ОБЛАСТИ ИММУНОГЛОБУЛИНА СВЯЗЫВАЮЩИЕ Fc-РЕЦЕПТОР |
WO2011091078A2 (en) * | 2010-01-19 | 2011-07-28 | Xencor, Inc. | Antibody fc variants with enhanced complement activity |
WO2012016073A2 (en) * | 2010-07-28 | 2012-02-02 | Gliknik Inc. | Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MOORE G.L. et al., Engineered Fc Variant Antibodies with Enhanced Ability to Recruit Complement and Mediate Effector Functions, MAbs., 2010, v. 2, n. 2, p.181 - 189. * |
ORLANDO M., Modification of proteins and low molecular weight substances with hydroxyethyl starch (HES), Inauguraldissertation, Giesen, 2003, p.166. CHEN X. et al., Fusion protein linkers: property, design and functionality, Advanced drug delivery reviews, 2013, v. 65, n. 10, p.1357-1369. MAEDA Y. et al., Engineering of functional chimeric protein G-Vargula Luciferase, Analytical biochemistry, 1997, v. 249, n. 2, p.147-152. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220056087A1 (en) | FUSION PROTEINS OF NATURAL HUMAN PROTEIN FRAGMENTS TO CREATE ORDERLY MULTIMERIZED IMMUNOGLOBULIN Fc COMPOSITIONS | |
RU2737378C2 (ru) | Гибридные белки фрагментов белков человека для создания упорядоченно мультимеризованных композиций областей fc иммуноглобулинов с усиленным связыванием с системой комплемента | |
US20190389941A1 (en) | Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced fc receptor binding | |
AU2017200515A1 (en) | Fusion proteins of natural human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin Fc compositions |