RU2728033C1 - Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis - Google Patents

Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis Download PDF

Info

Publication number
RU2728033C1
RU2728033C1 RU2019140913A RU2019140913A RU2728033C1 RU 2728033 C1 RU2728033 C1 RU 2728033C1 RU 2019140913 A RU2019140913 A RU 2019140913A RU 2019140913 A RU2019140913 A RU 2019140913A RU 2728033 C1 RU2728033 C1 RU 2728033C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
xylanase
pichia pastoris
gene
transformant
yeast
Prior art date
Application number
RU2019140913A
Other languages
English (en)
Inventor
Анна Николаевна Калинина
Лариса Николаевна Борщевская
Татьяна Леонидовна Гордеева
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика)
Priority to RU2019140913A priority Critical patent/RU2728033C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2728033C1 publication Critical patent/RU2728033C1/ru

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения рекомбинантных штаммов дрожжей Pichia pastoris, способных продуцировать эндо-1,4-β-ксиланазу. Получен трансформант дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы, несущий в составе хромосомы ген, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу, из Paenibacillus brasilensis, и дополнительные копии гена НАС1 из Pichia pastoris. Изобретение позволяет расширить ассортимент высокоэффективных продуцентов ксиланаз. 2 ил, 3 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения трансформантов дрожжей Pichia pastoris, способных продуцировать ксиланазу.
Ксилан является основным структурным полисахаридом растительных клеткок и вторым после целлюлозы наиболее распространенным полисахаридом в природе [Biotech. Genet. Eng. Rev. 1995, 13, 100-131]. Это комплексный полисахарид, основная цепь которого состоит из β-(1-4) связанного ксилозного скелета с небольшим количеством β-(1-3) ответвлений [Macromol Rapid Commun., 2000, 21(9), 542-556. doi: 10.1002/1521-3927(20000601)21:9<542::AID-MARC542>3.0.СО;2-7].
Полная деградация ксилана требует комплекса ксиланолитических ферментов, включающих эндо-ксиланазу, ксилозидазу, глюкуронидазу, ацетилэстеразу и арабинофуранозидазу [Crit Rev Biotechnol., 2002, 22, 33-64, doi: 10.1080/07388550290789450].
Основную роль в разрушении ксилана играет эндо-ксиланаза (эндо-1,4-β-ксиланаза, ЕС 3.2.1.8), которая катализирует случайный гидролиз ксилана до ксилололигосахаридов.
Эндо-1,4-β-ксиланазу широко используют в различных отраслях промышленности. При кормопроизводстве введение ксиланаз уменьшает содержание некрахмальных полисахаридов, тем самым снижая вязкость корма в кишечнике животных и улучшая усвояемость и питательную ценность плохо разлагаемых кормов. [J. Anim. Sci., 2002, 80, 2773-2779; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 60-66; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 291-298]
Природными источниками ксиланаз являются различные микроорганизмы: бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты [FEMS Microbiology Reviews, 2005, 29 (1), 3-23].
Традиционно ферментные препараты, в состав которых входят ксиланазы, получают на основе нерекомбинантных или рекомбинантных штаммов грибов рода Trichoderma, Aspergillus или Penicillium. Однако грибные штаммы, помимо ксиланазы, продуцируют ряд других ферментов, относящихся к карбогидразам, а именно: целлюлазу, глюканазу, пектиназу и маннаназу, что не позволяет использовать их при производстве моноферментных препаратов.
Наиболее перспективным является создание продуцентов ферментов на основе рекомбинантных штаммов метилотрофных дрожжей Pichia pastoris. При использовании несбраживаемых источников углерода (глицерина, метанола и т.п.) дрожжи Pichia pastoris способны к росту с образованием биомассы высокой плотности, что позволяет получать значительные количества гетерологичного белка [Appl. Microbiol. Biotechnol, 2000, 54(6), 741-750]. При этом процесс культивирования метилотрофных дрожжей достаточно прост, поскольку их рост не блокируется продуктами метаболизма [FEMS Microbiol. Rev., 2000, 24: 45-66, doi: 10.1111/j.1574-6976.2000.tb00532.x].
Известны примеры создания продуцентов ксиланазы на основе дрожжей Pichia pastoris.
Показано [Protein Expression and Purification 57 (2008), 101-107], что ген reBlxA из Bacillus licheniformis, кодирующий ксиланазу А, эффективно экспрессируется в клетках дрожжей Pichia pastoris, при этом активность рекомбинантной ксиланазы в культуральной жидкости составляет 122.9 U/mg.
Известны также рекомбинантные штаммы Pichia pastoris, продуцирующие ксиланазу из Streptomyces sp. FA1 [CN 107142225 А] и ксиланазу из Neocallimastix frontalis [CN 104130951 A].
В работе [Биотехнология, 2018, 34 (6), 22-32], что эндо-1,4-β-ксиланаза из Paenibacillus brasilensis обладает промышленно ценными свойствами. На основе Р pastoris получены штаммы, секретирующие ксиланазу из Paenibacillus brasilensis, продуктивность которых при культивировании в пробирках составляет 1114 и 1728 ед/мл культуральной жидкости [RU 2701308, RU 2701642].
Однако, остается потребность в расширении арсенала штаммов P. pastoris с повышенной продукцией эндо-1,4-β-ксиланазы из Paenibacillus brasilensis.
Одним из подходов, позволяющих повысить продукцию целевых белков в Р. pastoris, является коэкспрессия генов-помощников, входящих в систему ответа клетки на несвернутый белок (UPR - unfolded protein response) [Экологическая генетика, 2017, 15(2), 21-30]. В качестве таких генов используют, в частности, ген, кодирующий протеиндисульфидизомеразу (Pdi), которая выступает в качестве шаперона, ингибируя агрегацию неправильно свернутых белков; ген НАС1, кодирующий активатор транскрипции генов UPR и другие. Так, в работе [Journal of proteomics, 91 (2013) 58-72] в состав хромосомы рекомбинантного штамма Р. pastoris, продуцирующего ксиланазу из Bacillus halodurans, был интегрирован ген НАС1 из P. pastoris, что привело к увеличению продуктивности на 38% по сравнению с исходным штаммом.
Однако, суперэкспрессия гена НАС1 в P. pastoris может не только увеличивать продукцию некоторых гетерологичных ферментов, но и снижать, а также не оказывать никакого эффекта [Microb. Cell Factories, 2010, 9, 49].
Таким образом, суперэкспресия гена НАС1 по-разному влияет на продукцию различных ферментов, и, при существующем состоянии знаний в данной области, вспомогательные (хелперные) функции гена НАС1, а также других генов-помощников, не могут быть предсказаны даже в случае доступности последовательности ДНК всего генома организма-хозяина [ЕА017803].
Сведений о влиянии суперэкспрессии гена НАС1 из P. pastoris на продукцию клетками P. pastoris ксиланазы из Paenibacillus brasilensis нами не выявлено.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих эндо-1,4-β-ксиланазу.
Задача решена путем получения трансформанта дрожжей P. pastoris, продуцирующего ксиланазу, несущего в составе хромосомы ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis, и дополнительные копии гена НАС1 из P. pastoris.
Получение заявляемого трансформанта заключается в совместной экспрессии гена xyl, кодирующего эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis [MK014302 GenBank] и дополнительных копий гена НАС1 из P. pastoris, кодирующего активатор транскрипции генов UPR [ХМ_002489994.1 GenBank].
Трансформация гена xyl в клетки дрожжей P. pastoris осуществляется с помощью экспрессионной кассеты, включающей целевой ген, промотор, работающий в дрожжах P. pastoris, сигнальный пептид для осуществления секреции фермента в культуральную жидкость, терминатор, маркерный ген и, предпочтительно, сайт для гомологичной интеграции в хромосому. Интеграцию осуществляют путем как гомологичной, так и негомологичной рекомбинации.
Трансформацию дополнительных копий гена НАС1 в клетки дрожжей Р. pastoris осуществляют с помощью экспрессионной кассеты, включающей целевой ген, промотор, работающий в дрожжах P. pastoris, терминатор, маркерный ген и, предпочтительно, сайт для гомологичной интеграции в хромосому. Интеграцию осуществляют путем как гомологичной, так и негомологичной рекомбинации.
Трансформация указанных генов может быть осуществлена в любой последовательности, любым подходящим методом, в частности, методом электоропорации [http://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/pich_man.pdf] или методом с использованием полиэтиленгликоля или протопластов [http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/K173001].
Получение заявляемого трансформанта может быть осуществлено также трансформацией в клетки штамма дрожжей P. pastoris, являющегося продуцентом эндо-1,4-β-ксиланазы из Paenibacillus brasilensis, дополнительных копий гена НАС1 из P. pastoris.
Конструирование экспрессионных кассет осуществляют стандартными методами генетической инженерии [Рыбчин В.Н. Основы генетической инженерии. - СПб.: СПбГТУ, 1999, Sambrook J., Maniatis Т., Fritsch Е. Molecular cloning: a laboratory manual. - N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989] с использованием генетических элементов, подходящих для работы с дрожжами Pichia pastoris. В качестве промоторов могут быть использованы AOX1, DAS, FLD1, ICL1, PHO89, THI11, ADH1, ENO1, GUT1, GAP, TEF1, PGK1, GCW14, G1, G6 или другие [Appl Microbiol Biotechnol (2014) 98: 5301-5317]. В качестве сигнальных пептидов используют α-фактор, PHO1, SUC2, PHA-E, KILM1, pGKL, CLY, CLY-L8, K28 pre-pro-toxin или другие [Appl Microbiol Biotechnol (2014) 98: 5301-5317]. В качестве селективных маркеров используют любые подходящие маркеры, например, гены резистентности к антибиотикам зеоцину, генетицину (G418) или бластицидину С, а также гены комплементирующие ауксотрофные мутации в геноме Pichia pastoris, например, HIS4, МЕТ2, ADE1, ARG4, URA3, URA5, GUT1 [Yeast 2005; 22: 249-270]. В качестве плечей для гомологичной интеграции используют, например, последовательности генов АОХ1, HIS4 [http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/V17520] или другие последовательности, гомологичные участкам хромосомы дрожжей Pichia pastoris.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами:
Фиг. 1 Экспрессионная кассета 1
Фиг. 2 Экспрессионная кассета 2
Изобретение подтверждено следующими примерами.
Пример 1. Конструирование трансформанта P. pastoris, продуцирующего эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
При конструировании интегративной кассеты для экспрессии гена xyl используют метод "фьюжн-пцр" [Gene., 1989, 15, 77(1), 61-68.]. В качестве источника гена xyl используют тотальную геномную ДНК Paenibacillus brasilensis X1 ВКПМ В-13092 [Биотехнология, 2018, 34 (6), 22-32]. Синтезируют ДНК гена xyl методом ПЦР с использованием праймеров XylP-f и XylP-r
XylP-f5'-gcgacagactactggcaaaat-3',
XylP-r5'-ttaccacaccgttacgttaga-3'.
Полученную последовательность ДНК встраивают в состав экспрессионной кассеты 1 (фиг. 1), в состав которой входят следующие генетические элементы:
1. Ген xyl Paenibacillus brasilensis, встроенный в единую рамку считывания с нуклеотидной последовательностью сигнального пептида α-фактора, под контролем АОХ1 промотора;
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1;
3. Дрожжевой селективный маркер kan, фланкированный сайтами lox 66 и lox 71, под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418);
4. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ2.
Указанную интегративную экспрессионную кассету трансформируют в штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392, полученный на основе штамма Pichia pastoris DSMZ 70877 интеграцией в хромосому кассеты Pcup-cre, состоящей из гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1 под контролем Pcup промотора из Saccharomyces cerevisiae.
Штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392 предварительно выращивают в жидкой питательной среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %) до концентрации 1×108 клеток на 1 мл. Клетки центрифугируют, промывают в ледяной стерильной воде, а затем в ледяном растворе 1 М сорбитола. Затем клетки инкубируют в 25 мМ растворе дитиотрейтола в течение 15 минут и промывают в ледяном растворе 1 М сорбитола. Обработанные таким образом клетки ресуспендируют в ледяном растворе 1 М сорбитола в концентрации 1-5×109 клеток на 1 мл. Аликвоту, объемом 40 мкл клеточной суспензии, переносят в охлажденный эппендорф, добавляют 400 нг ДНК экспрессионной интеграционной кассеты, и инкубируют во льду 5 минут. Смесь клеток и ДНК переносят в предварительно охлажденную кювету для электропорации. Электропорацию проводят при следующих условиях: 1,5 кВ, 400 Ом, 25 uF. После порации добавляют 1 мл ледяного раствора 1 М сорбитола.
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, агар - 2, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С. В качестве селективного агента добавляют антибиотик G418 в количестве 500 мкг/мл.
Для отбора наиболее продуктивных трансформантов проводят их культивирование в жидкой ферментационной питательной среде YP с добавлением метанола (3 мас. %) в 96-луночных планшетах при 30°С в течение 72 ч на качалке (250 об/мин). В качестве контроля используют штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392.
Определение активности ксиланазы в культуральной жидкости проводят с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428] в 96-луночном планшете следующим образом: в каждой лунке смешивают 25 мкл 1% раствора субстрата ксилана березы в 0,5 М ацетатном буфере (рН 6) и 25 мкл культуральной жидкости. Инкубацию проводят при 50°С 10 минут, после чего добавляют в лунку 50 мкл раствора ДНС. Планшет прогревают при 99°С 10 минут и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 546 нм. В качестве стандарта используют раствор глюкозы.
По результатам ферментации отбирают наиболее продуктивный трансформант Xyl66, который при культивировании в планшете синтезирует ксиланазу в количестве 308 ед/мл культуральной жидкости.
Для выщепления маркерного гена kanMX из экспрессионной кассеты, интегрированной в хромосому трансформанта Xyl66, проводят индукцию гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1, встроенного в хромосому штамма Pichia pastoris Y-4392 (Mut+, INS Pcup-cre) и находящегося под контролем промотора Pcup. Индукция происходит в присутствии ионов меди. Для этого клетки трансформанта №66 выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) до концентрации 1×108 клеток на 1 мл, после чего добавляют раствор сульфата меди до концентрации 0,3 М, инкубируют в течении 3 часов, после чего клетки высевают на агаризованную питательную среду YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). Отбирают колонии, не способные к росту в присутствии антибиотика G418.
Таким образом отобран трансформант Xyl66 с выщепленным маркерным геном kanMX, способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Paenibacillus brasilensis.
Пример 2 Получение трансформанта, несущего в составе хромосомы дополнительные копии гена НАС из Pichia pastoris
При конструировании интегративной кассеты для экспрессии гена НАС1 используют метод "фьюжн-пцр" [Gene., 1989, 15, 77(1), 61-68.]. В качестве источника гена НАС1 используют тотальную геномную ДНК Pichia pastoris ВКПМ Y-4392. Синтезируют ДНК гена НАС1 методом ПЦР с использованием праймеров HAC1-f и HAC1-r.
НАС1-f5'-atgcccgtagattcttctca-3',
HAC1-r5'-ctattcctggaagaatacaaagt-3'
Полученную последовательность ДНК встраивают в состав экспрессионной кассеты 1 (фиг. 2), в состав которой входят следующие генетические элементы:
1. Ген НАС1_Pichia pastoris под контролем GAP промотора;
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1;
3. Дрожжевой селективный маркер kan , фланкированный сайтами lox 66 и lox 71, под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418);
Указанную экспрессионную кассету интегрируют в состав хромосомы трансформанта Xyl66. Трансформацию экспрессионной кассеты, отбор наиболее активного трансформанта и выщепление маркерного гена проводят как описано выше.
Отобран трансформант Xyl66-НАС145, в состав хромосомы которого интегрированы ген xyl и дополнительные копии гена НАС1 из Pichia pastoris, способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Paenibacillus brasilensis в количестве 495 ед/мл КЖ при культивировании в планшете.
Пример 3. Получение ксиланазы путем культивирования трансформанта Xyl66-НАС145
Посевную культуру выращивают в пробирках (50 мл) с 10 мл жидкой питательной среды YPD с добавлением глюкозы (2 мас. %) при 30°С в течение 24 ч на качалке с 250 об/мин. Посев ферментационной среды осуществляют в соотношении 1/10.
Ферментацию проводят при 30°С на качалке (250 об/мин) в питательной среде состава (мас. %): дрожжевой экстракт - 0,5, пептон - 1, вода - остальное с добавлением глюкозы (1 мас. %) в пробирках (50 мл) с рабочим объемом 5 мл. Через 18 часов добавляют метанол (1 мас. %) Ферментацию продолжают в течение 72 часов, добавляя метанол (1 мас. %) через каждые 24 часа. После окончания ферментации определяют количество фермента ксиланазы в культуральной жидкости с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428].
Через 72 часа ферментации количество фермента составило 1780 ед/мл культуральной жидкости.

Claims (1)

  1. Трансформант дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы, несущий в составе хромосомы ген, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis, и дополнительные копии гена НАС1 из Pichia pastoris.
RU2019140913A 2019-12-11 2019-12-11 Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis RU2728033C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019140913A RU2728033C1 (ru) 2019-12-11 2019-12-11 Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019140913A RU2728033C1 (ru) 2019-12-11 2019-12-11 Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2728033C1 true RU2728033C1 (ru) 2020-07-28

Family

ID=72085659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019140913A RU2728033C1 (ru) 2019-12-11 2019-12-11 Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2728033C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA017803B1 (ru) * 2007-04-20 2013-03-29 Полимун Сайнтифик Иммунбиологише Форшунг Гмбх Система экспрессии
CN104130951A (zh) * 2014-08-07 2014-11-05 新疆农业大学 一种重组毕赤酵母工程菌和代谢的重组木聚糖酶及其制备
RU2701642C1 (ru) * 2018-12-19 2019-09-30 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA017803B1 (ru) * 2007-04-20 2013-03-29 Полимун Сайнтифик Иммунбиологише Форшунг Гмбх Система экспрессии
CN104130951A (zh) * 2014-08-07 2014-11-05 新疆农业大学 一种重组毕赤酵母工程菌和代谢的重组木聚糖酶及其制备
RU2701642C1 (ru) * 2018-12-19 2019-09-30 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Visser et al. Development of a mature fungal technology and production platform for industrial enzymes based on a Myceliophthora thermophila isolate, previously known as Chrysosporium lucknowense C1
EP3421597B1 (en) Chrysosporium lucknowense protein production system
CN105189730B (zh) 淀粉酶缺陷菌株
AU2008214663B2 (en) A recombinant host cell for the production of a compound of interest
EP2825651B1 (en) Recombination system
CN109790510A (zh) 在不存在诱导底物下丝状真菌细胞中的蛋白产生
US20230174999A1 (en) Systems and methods for high yielding recombinant microorganisms and uses thereof
US7163804B1 (en) Non-toxic non-toxigenic non-pathogenic fusarium expression system
Lichius et al. Genetic transformation of filamentous fungi: achievements and challenges
Oliveira et al. Development of stable flocculent Saccharomyces cerevisiae strain for continuous Aspergillus niger β-galactosidase production
RU2701308C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
US11718854B2 (en) Gene targets for improved enzyme production in fungi
RU2701642C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2728033C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2714113C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
Mochizuki et al. Overexpression and secretion of cellulolytic enzymes by δ-sequence-mediated multicopy integration of heterologous DNA sequences into the chromosomes of Saccharomyces cerevisiae
RU2728243C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2725475C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis
CN113699176A (zh) 高产溶血磷脂酶黑曲霉重组表达菌株的构建及应用
RU2720914C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий бета-глюканазу
RU2736441C1 (ru) Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу из Bacillus pumilus и бета-глюканазу из Paenibacillus jamilae
RU2736440C1 (ru) Дрожжи Komagataella kurtzmanii - рекомбинантный продуцент бета-глюканазы
RU2764793C1 (ru) Трансформант дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу, содержащий в составе хромосомы синтетический ген MANS
RU2639248C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент секретируемой ксилоглюканазы из гриба Aspergillus cervinus и способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы на основе этого штамма
RU2756330C1 (ru) Трансформант дрожжей Komagataella phaffii, продуцирующий фитазу Cronobacter turicensis

Legal Events

Date Code Title Description
QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20201214