RU2701308C1 - Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы - Google Patents

Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы Download PDF

Info

Publication number
RU2701308C1
RU2701308C1 RU2018145098A RU2018145098A RU2701308C1 RU 2701308 C1 RU2701308 C1 RU 2701308C1 RU 2018145098 A RU2018145098 A RU 2018145098A RU 2018145098 A RU2018145098 A RU 2018145098A RU 2701308 C1 RU2701308 C1 RU 2701308C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
xylanase
pichia pastoris
strain
recombinant yeast
vkpm
Prior art date
Application number
RU2018145098A
Other languages
English (en)
Inventor
Анна Николаевна Калинина
Лариса Николаевна Борщевская
Татьяна Леонидовна Гордеева
Аннета Михайловна Агранович
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority to RU2018145098A priority Critical patent/RU2701308C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2701308C1 publication Critical patent/RU2701308C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4393, продуцирующий ксиланазу. Указанный штамм содержит ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis. Штамм продуцирует фермент в количестве 1114 ед./мл культуральной жидкости. 3 ил., 2 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения рекомбинантного штамма дрожжей Pichia pastoris, способного продуцировать ксиланазу.
Ксилан является основным структурным полисахаридом растительных клеткок и вторым после целлюлозы наиболее распространенным полисахаридом в природе [Biotech. Genet. Eng. Rev. 1995, 13, 100-131]. Это комплексный полисахарид, основная цепь которого состоит из β-(1-4) связанного ксилозного скелета с небольшим количеством β-(1-3) ответвлений [Macromol Rapid Commun., 2000, 21(9), 542-556. doi: 10.1002/1521-3927(20000601)21:9<542::AID-MARC542>3,0.СО:2-71.
Полная деградация ксилана требует комплекса ксиланолитических ферментов, включающих эндо-ксиланазу, ксилозидазу, глюкуронидазу, ацетилэстеразу и арабинофуранозидазу [Crit Rev Biotechnol., 2002, 22, 33-64, doi:10.1080/073885502907894501.
Основную роль в разрушении ксилана играет эндо-ксиланаза (эндо-1,4-β-ксиланаза, ЕС 3.2.1.8), которая катализирует случайный гидролиз ксилана до ксилололигосахаридов.
Ксиланазы широко используются в различных отраслях промышленности.
Так при кормопроизводстве введение ксиланаз уменьшает содержание некрахмальных полисахаридов, тем самым снижая вязкость корма в кишечнике животных и улучшая усвояемость и питательную ценность плохо разлагаемых кормов. [J. Anim. Sci., 2002, 80, 2773-2779; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 60- 66; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 291-298]
Природными источниками ксиланаз являются различные микроорганизмы: бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты [FEMS Microbiology Reviews, 2005, 29 (1), 3-23].
Традиционно ферментные препараты, в состав которых входят ксиланазы, получают на основе нерекомбинантных или рекомбинантных штаммов грибов рода Trichoderma, Aspergillus или Penicillium. Однако грибные штаммы, помимо ксиланазы, продуцируют ряд других ферментов, относящихся к карбогидразам, а именно: целлюлазу, глюканазу, пектиназу и маннаназу, что не позволяет использовать их при производстве моноферментных препаратов.
Наиболее перспективным является создание продуцентов ферментов на основе рекомбинантных штаммов метилотрофных дрожжей Pichia pastoris. При использовании несбраживаемых источников углерода (глицерина, метанола и т.п.) дрожжи Pichia pastoris способны к росту с образованием биомассы высокой плотности, что позволяет получать значительные количества гетерологичного белка [Appl. Microbiol. Biotechnol, 2000, 54(6), 741-750]. При этом процесс культивирования метилотрофных дрожжей достаточно прост, поскольку их рост не блокируется продуктами метаболизма [FEMS Microbiol.Rev., 2000, 24:45-66, doi: 10.1111/j.1574-6976.2000.tb00532.x].
Известны примеры создания продуцентов ксиланазы на основе дрожжей Pichia pastoris.
Показано [Protein Expression and Purification 57 (2008), 101-107], что ген reBlxA из Bacillus licheniformis, кодирующий ксиланазу А, эффективно экспрессируется в клетках дрожжей Pichia pastoris, при этом активность рекомбинантной ксиланазы в культуральной жидкости составляет 122.9 ед/мг.
Известны также рекомбинантные штаммы Pichia pastoris, продуцирующие ксиланазу из Streptomyces sp.FA1 [CN107142225А] и ксиланазу из Neocallimastix frontalis [CN104130951A].
В работе [Биотехнология, 2018, 34(6), в печати] описан ген xyl из Paenibacillus brasilensis кодирующий фермент эндо-1,4-β-ксиланазу (ЕС 3.2.1.8).
Поскольку гены ксиланаз различного происхождения экспрессируются в дрожжах Pichia pastoris с различной эффективностью [Биотехнология, 2018, 34(4), 26-36] выбор генов, кодирующих ксиланазу и эффективно работающих в дрожжах Pichia pastoris. важен для конструирования эффективных продуцентов.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих ксиланазу.
Задача решена путем конструирования штамма дрожжей Pichia pastoris 378 ВКПМ Y-4393 содержащего ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis и продуцирующего ксиланазу.
Рекомбинантный штамм Pichia pastoris 378 получен путем интеграции экспрессионной кассеты, содержащей ген xyl из Paenibacillus brasilensis, в состав хромосомы штамма Pichia pastoris ВКПМ Y-4392
Штамм является продуцентом эндо-1,4-β-ксиланазы и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris 378 ВКПМ Y-4393.
Культурально-морфологические характеристики заявляемого штамма: При культивировании при температуре 28°С в течение 48 часов на агаризованной среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, агар - 2, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %) клетки имеют овальную форму, 3 -4 мкм в диаметре. Клетки почкуются, при этом почкование истинное, многостороннее. Истинного мицелия не образуют.
Споруляция происходит при инкубации культуры на агаризованной среде следующего состава (мас. %): хлорид калия - 1.0, ацетат натрия - 0.5, глюкоза - 1.0, агар - 2.0, вода - остальное. Аски имеют тетраэдрическую форму, включают 4 аскоспора.
На агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) колонии светло-бежевого цвета с ровным краем, матовой поверхностью, линзовидным профилем и пастообразной консистенцией.
При росте в жидкой среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, вода -остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %), при 28°С в течение 24 ч культивирования - жидкость мутная, осадок белый, коагуляции не наблюдается, пристеночных пленок не образует.
Физиолого-биохимические признаки:
Штамм способен к росту как в аэробных, так и в анаэробных условиях. В качестве единственного источника углерода способен использовать метанол, этанол, глюкозу, глицерин, лактат, сукцинат, не способен ассимилировать мальтозу, сахарозу, ацетат, крахмал, лактозу.
При культивировании в присутствии метанола штамм способен синтезировать ксиланазу.
Штамм не способен к росту на минимальной среде с добавлением 4% метанола.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами.
Фиг. 1 Экспрессионная кассета 1
Фиг. 2 Электрофорез гена xyl Paenibacillus brasilensis.
Фиг. 3 Фингерпринт штамма Pichia pastoris ВКПМ 378 Y-4393
Изобретение подтверждено следующими примерами. Пример 1. Конструирование заявляемого штамма.
При конструировании интегративной экспрессионной кассеты используют метод "фьюжн-пцр" [Gene., 1989, 15, 77(1), 61-68.]. В качестве источника гена xyl используют тотальную геномную ДНК Paenibacillus brasilensis X1 ВКПМ В-13092 [Биотехнология, 2018, 34(6) в печати]. Синтезируют ДНК гена xyl методом ПЦР с использованием праймеров XylP-f и ХуlР-r
XylP-f 5'-gcgacagactactggcaaaat-3',
XylP-r 5'- ttaccacaccgttacgttaga-3'.
Полученную последовательность ДНК встраивают в состав экспрессионной кассеты 1 (фиг. 1), в состав которой входят следующие генетические элементы:
1. Ген xyl Paenibacillus brasilensis, встроенный в единую рамку считывания с нуклеотидной последовательностью сигнального пептида α-фактороа, под контролем АОХ1 промотора;
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1;
3. Дрожжевой селективный маркер kan, фланкированный сайтами lох 66 и lох 71,
под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418) [Nature Biotechnology. - 1994. - Т. 12. - №. 2. - С. 181];
4. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ2.
Указанную интегративную экспрессионную кассету трансформируют в штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392, полученный на основе штамма Pichia pastoris DSMZ 70877 интеграцией в хромосому кассеты Pcup-cre, состоящей из гена сrе, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1 под контролем Рсuр промотора из Saccharomyces cerevisiae.
Штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392 предварительно выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) до концентрации 1×108 клеток на 1 мл. Клетки центрифугируют, промывают в ледяной стерильной воде, а затем в ледяном растворе 1М сорбитола. Затем клетки инкубируют в 25 мМ растворе дитиотрейтола в течение 15 минут и промывают в ледяном растворе 1М сорбитола. Обработанные таким образом клетки ресуспендируют в ледяном растворе 1 М сорбитола в концентрации 1-5×109 клеток на 1 мл. Аликвоту, объемом 40 мкл клеточной суспензии, переносят в охлажденный эппендорф, добавляют 400 нг ДНК экспрессионной интеграционной кассеты, и инкубируют во льду 5 минут. Смесь клеток и ДНК переносят в предварительно охлажденную кювету для электропорации. Электропорацию проводят при следующих условиях: 1,5 кВ, 400 Ом, 25uF. После порации добавляют 1 мл ледяного раствора 1М сорбитола.
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С. В качестве селективного агента добавляют антибиотик G418 в количестве 500 мкг/мл.
Для отбора наиболее продуктивных трансформантов проводят их культивирование в жидкой ферментационной питательной среде YP с добавлением метанола (3 мас. %) в 96-луночных планшетах при 30°С в течение 72 ч на качалке (250 об/мин). В качестве контроля используют штамм Pichia pastoris Y-4392.
Определение активности ксиланазы в культуральной жидкости проводят с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428] в 96-луночном планшете следующим образом: в каждой лунке смешивают 25 мкл 1% раствора субстрата ксилана березы в 0,5 М ацетатном буфере (рН 6) и 25 мкл культуральной жидкости. Инкубацию проводят при 50°С 10 минут, после чего добавляют в лунку 50 мкл раствора ДНС. Планшет прогревают при 99°С 10 минут и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 546 нм. В качестве стандарта используют раствор глюкозы.
По результатам ферментации отбирают наиболее продуктивный трансформант №378, который при культивировании в планшете синтезирует ксиланазу в количестве 212 ед/мл культуральной жидкости.
Для выщепления маркерного гена kanМХ из экспрессионной кассеты, интегрированной в хромосому трансформанта №378, проводят индукцию гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1, встроенного в хромосому штамма Pichia pastoris Y-4392 (Mut+, INS Pcup-cre) и находящегося под контролем промотора Pcup. Индукция происходит в присутствии ионов меди. Для этого клетки трансформанта №378 выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). до концентрации 1×108 клеток на 1 мл, после чего добавляют раствор сульфата меди до концентрации 0,3 М, инкубируют в течении 3 часов, после чего клетки высевают на агаризованную питательную среду YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). Отбирают колонии, не способные к росту в присутствии антибиотика G418.
Отобранный трансформант №378 с выщепленным маркерным геном kanМХ, способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Paenibacillus brasilensis который депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris 378 ВКПМ Y-4393.
Наличие в хромосоме штамма вставки гена xyl Paenibacillus brasilensis подтверждают методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), для чего используют хромосомальную ДНК, выделенную из клеток штамма Pichia pastoris 378 ВКПМ Y-4393 и специфические праймеры XylP-f и ХуlР-r
XylP-f 5'-gcgacagactactggcaaaat-3',
XylP-r 5'- ttaccacaccgttacgttaga-3'
Режим реакции ПЦР:
95°С - 3 мин - 1 цикл
30 циклов:
95°С-30 сек.
60°С - 30 сек.
72°С - 60 сек.
72°С - 5 мин. - 1 цикл
Для контроля величины амплифицированного фрагмента ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер GeneRuler 1 kb DNA Ladder (Fermentas) (линия 2, фиг. 2, размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п. н.). Наработка фрагмента ДНК размером 552 п. н. (линия 1 фиг. 2) свидетельствует о присутствии в хромосоме штамма вставки гена xyl Paenibacillus brasilensis
Результаты ПЦР-фингерпринта [Applied and Environmental Microbiology, Oct, 1999, 4351-4356] штамма Pichia pastoris 378 ВКПМ Y-4393 представлены на фиг 3.
Фингерпринт проведен путем полимеразной цепной реакции (PCR) с использованием неспецифических праймеров М13 (линия 1 фиг. 3) и 1254 (линия 2 фиг. 3).
Праймер М13 gagggtggcggttct
режим реакции: 1 цикл 95°С - 3 мин.
39 циклов
95°°С - 30 сек.
45°С - 30 сек.
72°С - 2 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Праймер 1254 ccgcagccaa
режим реакции:
1 цикл 95°С - 3 мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
48°С - 30 сек.
72°С - 1 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Для контроля величины фрагментов ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер 1kb DNA GeneRuler (Fermentas) (линия 3, фиг. 3 размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п. н.).
Пример 2. Продукция ксиланазы заявляемым штаммом.
Посевную культуру выращивают в пробирках (50 мл) с 10 мл жидкой питательной среды YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) при 30°С в течение 24 ч на качалке с 250 об/мин. Посев ферментационной среды осуществляют в соотношении 1/10.
Ферментацию проводят при 30°С на качалке (250 об/мин) в питательной среде состава (мас. %): дрожжевой экстракт - 0,5, пептон - 1, вода - остальное с добавлением глюкозы (1 мас. %) в пробирках (50 мл) с рабочим объемом 5 мл. Через 18 часов добавляют метанол (1 мас. %) Ферментацию продолжают в течение 72 часов, добавляя метанол (1 мас. %) через каждые 24 часа. После окончания ферментации определяют количество фермента ксиланазы в культуральной жидкости с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428].
Через 72 часа ферментации количество фермента составило 1114 ед/мл культуральной жидкости.

Claims (1)

  1. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4393, содержащий ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis - продуцент ксиланазы.
RU2018145098A 2018-12-19 2018-12-19 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы RU2701308C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145098A RU2701308C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145098A RU2701308C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2701308C1 true RU2701308C1 (ru) 2019-09-25

Family

ID=68063397

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018145098A RU2701308C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2701308C1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2714113C1 (ru) * 2019-03-15 2020-02-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
RU2728243C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2796447C1 (ru) * 2022-09-12 2023-05-23 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) Штамм Komagataella phaffii T07/pPZL-4x-OA-xyl-AsOr, обладающий способностью продуцировать ксиланазу из грибов вида Aspergillus oryzae

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104099311A (zh) * 2013-04-15 2014-10-15 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种重组表达木聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌及其应用
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104099311A (zh) * 2013-04-15 2014-10-15 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种重组表达木聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌及其应用
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU M.Q. et al. Recombinant Bacillus amyloliquefaciens xylanase A expressed in Pichia pastoris and generation of xylooligosaccharides from xylans and wheat bran. Int J Biol Macromol. 2017 Dec; 105(Pt 1): 656-663. *
КАЛИНИНА А.Н. и др. Сравнение ксиланаз различного происхождения в экспрессионной системе Pichia pastoris: экспрессия, биохимическая характеристика и биотехнологический потенциал. Биотехнология, 2018. Т.34, N. 4, с. 26-36. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2714113C1 (ru) * 2019-03-15 2020-02-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
RU2728243C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2796447C1 (ru) * 2022-09-12 2023-05-23 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) Штамм Komagataella phaffii T07/pPZL-4x-OA-xyl-AsOr, обладающий способностью продуцировать ксиланазу из грибов вида Aspergillus oryzae

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107586789B (zh) 高产酸性蛋白酶黑曲霉重组表达菌株及其构建方法和应用
TW200909575A (en) Method for producing cellulase and hemicellulase having high hydrolytic activity
CN109790510A (zh) 在不存在诱导底物下丝状真菌细胞中的蛋白产生
WO2009108081A1 (en) Penicillium verruculosum filamentous fungus strain producer of a highly active complex of cellulases and accessory enzymes and a method of production of biocatalyst for cellulose and hemicellulose hydrolysis
CN102719379A (zh) 一株特基拉芽孢杆菌及其应用
RU2701308C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2001949C1 (ru) Штамм гриба TRICHODERMA REESEI - продуцент целлюлолитических ферментов
US10053680B2 (en) Strain and a method to produce cellulase and its use
RU2701642C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2195490C2 (ru) Штамм мицелиального гриба trichoderma longibrachiatum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы
CN102807958B (zh) 一种可分泌纤维素酶的菌株及其纤维素酶提取方法与应用
CN101532028A (zh) 一种高产糖化酶工业生产菌株的选育方法
RU2725475C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis
WO2003016525A9 (fr) Procede de production d&#39;alcool a partir d&#39;amidon
RU2728243C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
KR101412468B1 (ko) 활성이 증진된 변이 베타-글루코시다제 및 이를 이용한 바이오 에탄올의 제조방법
RU2714113C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
JP2015012852A (ja) 微細藻類バイオマスを原料とするバイオ燃料の製造方法
RU2728033C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2747782C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу Bacillus subtilis
RU2764793C1 (ru) Трансформант дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу, содержащий в составе хромосомы синтетический ген MANS
RU2736441C1 (ru) Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу из Bacillus pumilus и бета-глюканазу из Paenibacillus jamilae
RU2646132C1 (ru) Рекомбинантный штамм мицелиального гриба penicillium canescens cl14, продуцирующий компонент целллюлосомы clostridium thermocellum, и способ его культивирования
RU2287571C2 (ru) Штамм мицелиального гриба trichoderma longibrachiatum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, маннаназы и пектиназы
RU2730577C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20200828

QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20201214