RU2701642C1 - Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы - Google Patents

Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы Download PDF

Info

Publication number
RU2701642C1
RU2701642C1 RU2018145102A RU2018145102A RU2701642C1 RU 2701642 C1 RU2701642 C1 RU 2701642C1 RU 2018145102 A RU2018145102 A RU 2018145102A RU 2018145102 A RU2018145102 A RU 2018145102A RU 2701642 C1 RU2701642 C1 RU 2701642C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
xylanase
pichia pastoris
strain
gene
yeast
Prior art date
Application number
RU2018145102A
Other languages
English (en)
Inventor
Анна Николаевна Калинина
Лариса Николаевна Борщевская
Татьяна Леонидовна Гордеева
Аннета Михайловна Агранович
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority to RU2018145102A priority Critical patent/RU2701642C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2701642C1 publication Critical patent/RU2701642C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4394, продуцирующий ксиланазу. Указанный штамм имеет инактивированный ген АОХ1 и содержит ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis. Штамм продуцирует ксиланазу в количестве 1728 ед/мл культуральной жидкости. 4 ил., 2 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения рекомбинантного штамма дрожжей Pichia pastoris, способного продуцировать ксиланазу.
Ксилан является основным структурным полисахаридом растительных клеткок и вторым после целлюлозы наиболее распространенным полисахаридом в природе [Biotech. Genet. Eng. Rev. 1995, 13, 100-131]. Это комплексный полисахарид, основная цепь которого состоит из β-(1-4) связанного ксилозного скелета с небольшим количеством β- (1-3) ответвлений [Macromol Rapid Commun., 2000, 21(9), 542-556. doi: 10.1002/1521-3927(20000601)21:9<542::AID-MARC542>3.0.СО;2-7].
Основную роль в разрушении ксилана играет эндо-ксиланаза (эндо-1,4-β-ксиланаза, ЕС 3.2.1.8), которая катализирует случайный гидролиз ксилана до ксилололигосахаридов.
Ксиланазы широко используют в различных отраслях промышленности.
Так при кормопроизводстве введение ксиланаз уменьшает содержание некрахмальных полисахаридов, тем самым снижая вязкость корма в кишечнике животных и улучшая усвояемость и питательную ценность плохо разлагаемых кормов. [J. Anim. Sci, 2002, 80, 2773-2779; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 60 - 66; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 291-298]
Природными источниками ксиланаз являются различные микроорганизмы: бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты [FEMS Microbiology Reviews, 2005, 29 (1), 3-23].
Традиционно ферментные препараты, в состав которых входят ксиланазы, получают на основе нерекомбинантных или рекомбинантных штаммов грибов рода Trichoderma, Aspergillus или Penicillium. Однако грибные штаммы, помимо ксиланазы, продуцируют ряд других ферментов, относящихся к карбогидразам, а именно: целлюлазу, глюканазу, пектиназу и маннаназу, что не позволяет использовать их при производстве моноферментных препаратов.
Наиболее перспективным является создание продуцентов ферментов на основе рекомбинантных штаммов метилотрофных дрожжей Pichia pastoris, которые при использовании несбраживаемых источников углерода (глицерина, метанола и т.п.) способны к росту с образованием биомассы высокой плотности, что позволяет получать значительные количества гетерологичного белка [Appl. Microbiol Biotechnol, 2000, 54(6), 741-750]. При этом процесс культивирования метилотрофных дрожжей достаточно прост, поскольку их рост не блокируется продуктами метаболизма [FEMS Microbiol.Rev., 2000, 24:45-66, doi: 10.1111/j.1574-6976.2000.tb00532.x].
Известны рекомбинантные штаммы Pichia pastoris, продуцирующие ксиланазу из Streptomyces sp.FA1 [CN107142225А] и ксиланазу из Neocallimastix frontalis [CN104130951А] ксиланазу А из Bacillus licheniformis [Protein Expression and Purification 57 (2008), 101-107]
При этом, показано [Биотехнология, 2018, 34(4), 26-36], что гены ксиланаз различного происхождения экспрессируются в дрожжах Pichia pastoris с различной эффективностью
Известно также, что на уровень продукции гереторологических белков в клетках Pichia pastoris оказывают влияние мутации, присутствующие в составе хромосомы этих дрожжей.
Показано [Microb Cell Fact. 2012 Feb 13;11:22. doi: 10.1186/1475-2859-11-22], что штамм с делецией гена АОХ1 в хромосоме превосходит первоначальный штамм как в производительности, так и в эффективности экспрессии рекомбинантного белка пероксидазы хрена С1А.
Показано также [Molecular biology, 2000, V.16, 23-52], что деления гена АОХ1 в хромосоме дрожжей Pichia pastoris приводит к увеличению уровня продукции рекомбинантного белка. При этом уменьшается потребление метанола, что упрощает процесс ферментации и снижает себестоимость целевого белка [Gerd Gellissen, Production of Recombinant Proteins: Novel Microbial and Eukaryotic Expression Systems, 2005, John Wiley & Sons, p.150].
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих ксиланазу.
Задача решена путем конструирования штамма дрожжей Pichia pastoris Xy1-756 ВКПМ Y-4394 - продуцента ксиланазы, в составе хромосомы которого содержится ген xy1, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis, и инактивирован ген АОХ1.
Заявляемый штамм Pichia pastoris Xy1-756 получен путем интеграции экспрессионной кассеты, содержащей ген xy1 из Paenibacillus brasilensis, в состав хромосомы штамма Pichia pastoris ВКПМ Y-4392 и инактивации гена АОХ1
Штамм является продуцентом эндо-1,4-β-ксиланазы и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris Xy1-756 ВКПМ Y-4394.
Культурально-морфологические характеристики заявляемого штамма:
При культивировании при температуре 28°С в течение 48 часов на агаризованной среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, агар - 2, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %), клетки имеют овальную форму, 3 -4 мкм в диаметре. Клетки почкуются, при этом почкование истинное, многостороннее Истинного мицелия не образуют.
Споруляция происходит при инкубации культуры на агаризованной среде следующего состава (мас. %): хлорид калия - 1.0, ацетат натрия - 0.5, глюкоза - 1.0, агар - 2.0, вода - остальное. Аски имеют тетраэдрическую форму, включают 4 аскоспора.
На агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) колонии светло-бежевого цвета с ровным краем, матовой поверхностью, линзовидным профилем и пастообразной консистенцией.
При росте в жидкой среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, вода -остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %), при 28°С в течение 24 ч культивирования - жидкость мутная, осадок белый, коагуляции не наблюдается, пристеночных пленок не образует.
Физиолого-биохимические признаки:
Штамм способен к росту как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
В качестве единственного источника углерода способен использовать метанол, этанол, глюкозу, глицерин, лактат, сукцинат, не способен ассимилировать мальтозу, сахарозу, ацетат, крахмал, лактозу.
При культивировании в присутствии метанола штамм способен синтезировать ксиланазу.
Штамм не способен к росту на минимальной среде с добавлением 4% метанола.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами.
Фиг. 1 Экспрессионная кассета 1
Фиг.2 Кассета для инактивации гена А0Х1
Фиг. 3 Электрофорез гена xy1 Paenibacillus brasilensis.
Фиг. 4 Фингерпринт штамма Pichia pastoris Xy1-756 ВКПМ Y-4394
Изобретение подтверждено следующими примерами.
Пример 1. Конструирование заявляемого штамма.
Конструирование штамма осуществляют в 2 этапа.
Этап 1. Получение штамма дрожжей Pichia pastoris содержащего ген xyl кодирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
Используя метод "фьюжн-пцр" [Gene., 1989, 15, 77(1), 61-68] конструируют интегративную экспрессионную кассету 1 (фиг.1), содержащую следующие генетические элементы:
1. Ген xyl Paenibacillus brasilensis, встроенный в единую рамку считывания с нуклеотидной последовательностью сигнального пептида α-фактороа, под контролем АОХ1 промотора;
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1;
3. Дрожжевой селективный маркер kan, фланкированный сайтами 1ох 66 и 1ох 71, под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418) [Nature Biotechnology. - 1994. - Т. 12. -№. 2. - С.181];
4. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ2.
Указанную интегративную экспрессионную кассету методом электропорации [http://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/pich_man.pdf] трансформируют в штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4392, полученный на основе штамма Pichia pastoris DSMZ 70877 интеграцией в хромосому кассеты Pcup-cre, состоящей из гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1 под контролем Рcup промотора из Saccharomyces cerevisiae.
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С. В качестве селективного агента добавляют антибиотик G418 в количестве 500 мкг/мл.
Для отбора наиболее продуктивных трансформантов проводят их культивирование в жидкой ферментационной питательной среде YP с добавлением метанола (3 мас. %) в при 30°С в течение 72 ч на качалке (250 об/мин). В качестве контроля используют штамм Pichia pastoris Y-4392.
Определение активности ксиланазы в культуральной жидкости проводят с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428].
По результатам ферментации отбирают наиболее продуктивный трансформант №378, который при культивировании синтезирует наибольшее количество ксиланазы.
Для выщепления маркерного гена kanМХ из экспрессионной кассеты, интегрированной в хромосому трансформанта №378, проводят индукцию гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1 встроенного в хромосому штамма Pichia pastoris ВКПМ Y-4392 (Mut+, INS Pcup-cre) и находящегося под контролем промотора Рcup. Индукция происходит в присутствии ионов меди. Для этого клетки трансформанта №378 выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %), до концентрации 1×108 клеток на 1 мл, после чего добавляют раствор сульфата меди до концентрации 0,3 М, инкубируют в течении 3 часов, после чего клетки высевают на агаризованную питательную среду YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). Отбирают колонии, не способные к росту в присутствии антибиотика G418.
В результате отобран трансформант Pichia pastoris 378 с выщепленным маркерным геном kanМХ, способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Paenibacillus brasilensis.
Этап 2 Инактивация гена АОХ1
Конструируют кассету для инактивации гена АОХ1 (фиг.2) содержащую следующие генетические элементы:
1. Дрожжевой селективный маркер kan, фланкированный сайтами lох 66 и 1ох 71, под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418);
2. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ1.
Указанную кассету трансформируют в штамм Pichia pastoris 378 с использованием метода электропорации
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YPD с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С. В качестве селективного агента добавляют антибиотик G418 в количестве 500 мкг/мл.
Для отбора клонов с инактивированным геном АОХ1 используют агаризованную среду YNB (https://www.dia-m.ru/reactive.php?productid=253884) с добавлением метанола (4 мас. %). В качестве контроля используют трансформант Pichia pastoris 378.
Отбирают трансформант №756, не способный к росту на среде YNB в присутствии 4% метанола.
В отобранном трансформанте проводят выщепление маркерного гена kanМХ.
Отбирают колонии, не способные к росту в присутствии антибиотика G418.
Заявляемый штамм представляющий собой трансформант Pichia pastoris Xy1-756 с инактивированным геном АОХ1 способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Paenibacillus brasilensis, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris Ху1-756_ВКПМ Y-4394.
Наличие в хромосоме заявляемого штамма вставки гена xy1 Paenibacillus brasilensis подтверждают методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), для чего используют хромосомальную ДНК, выделенную из клеток заявляемого штамма и специфические праймеры Xy1P-f и Ху1Р-r
Figure 00000001
Figure 00000002
Режим реакции ПЦР:
95°С - 3 мин - 1 цикл
30 циклов:
95°С - 30 сек.
60°С - 30 сек.
72°С - 60 сек.
72°С - 5 мин. - 1 цикл
Для контроля величины амплифицированного фрагмента ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер GeneRuler 1 kb DNA Ladder (Fermentas) (линия 2, фиг. 3, размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п. н.). Наработка фрагмента ДНК размером 552 п. н. (линия 1 фиг. 3) свидетельствует о присутствии в хромосоме заявляемого штамма вставки гена xyl Paenibacillus brasilensis
Результаты ПЦР-фингерпринта [Applied and Environmental Microbiology, Oct, 1999, 4351-4356] штамма Pichia pastoris Хуl-756_ВКПМ Y-4394 представлены на фиг 4.
Фингерпринт проведен с использованием полимеразной цепной реакции (PCR) с использованием неспецифических праймеров М13 (линия 1 фиг. 4) и 1254 (линия 2 фиг. 4).
Праймер М13
Figure 00000003
режим реакции:
1 цикл
95°С -3 мин.
39 циклов
95°С -30 сек.
45°С -30 сек.
72°С- 2 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Праймер 1254
Figure 00000004
режим реакции:
1 цикл
95°С - 3мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
48°С - 30 сек.
72°С - 1 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Для контроля величины фрагментов ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер 1kb DNA GeneRuler (Fermentas) (линия 3, фиг. 4 размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п. н.).
Пример 2. Продукция ксиланазы заявляемым штаммом.
Посевную культуру выращивают в пробирках (50 мл) с 10 мл жидкой питательной среды YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) при 30°С в течение 24 ч на качалке с 250 об/мин. Посев ферментационной среды осуществляют в соотношении 1/10.
Ферментацию проводят при 30°С на качалке (250 об/мин) в питательной среде состава (мас. %): дрожжевой экстракт - 0,5, пептон - 1, вода - остальное с добавлением глюкозы (1 мас. %) в пробирках (50 мл) с рабочим объемом 5 мл. Через 18 часов добавляют метанол (1 мас. %) Ферментацию продолжают в течение 72 часов, добавляя метанол (1 мас. %) через каждые 24 часа. После окончания ферментации определяют количество фермента ксиланазы в культуральной жидкости с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428].
Через 72 часа ферментации количество фермента составило 1728 ед/мл культуральной жидкости.

Claims (1)

  1. Штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4394 с инактивированным геном АОХ1 и содержащий ген xyl, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу Paenibacillus brasilensis - продуцент ксиланазы.
RU2018145102A 2018-12-19 2018-12-19 Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы RU2701642C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145102A RU2701642C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145102A RU2701642C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2701642C1 true RU2701642C1 (ru) 2019-09-30

Family

ID=68170625

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018145102A RU2701642C1 (ru) 2018-12-19 2018-12-19 Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2701642C1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2728243C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2728033C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
CN119662437A (zh) * 2024-12-26 2025-03-21 江苏创健医疗科技股份有限公司 一种适用于Muts型毕赤酵母的发酵工艺

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104099311A (zh) * 2013-04-15 2014-10-15 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种重组表达木聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌及其应用
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104099311A (zh) * 2013-04-15 2014-10-15 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种重组表达木聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌及其应用
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRAINER F.W. ET AL. Recombinant protein expression in Pichia pastoris strains with an engineered methanol utilization. Microbial Cell Factories 2012, 11:22, p. 1-14. *
LI P. ET AL. Expression of Recombinant Proteins in Pichia Pastoris pathway. Appl Biochem Biotechnol (2007) 142:105-124. *
КАЛИНИНА А.Н И ДР. Сравнение ксиланаз различного происхождения в экспрессионной системе Pichia pastoris: экспрессия, биохимическая характеристика и биотехнологический потенциал. Биотехнология, 2018, Т.34, N. 4, с. 26-36. *
КАЛИНИНА А.Н И ДР. Сравнение ксиланаз различного происхождения в экспрессионной системе Pichia pastoris: экспрессия, биохимическая характеристика и биотехнологический потенциал. Биотехнология, 2018, Т.34, N. 4, с. 26-36. KRAINER F.W. ET AL. Recombinant protein expression in Pichia pastoris strains with an engineered methanol utilization. Microbial Cell Factories 2012, 11:22, p. 1-14. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2728243C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2728033C1 (ru) * 2019-12-11 2020-07-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт"-ГосНИИгенетика) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
CN119662437A (zh) * 2024-12-26 2025-03-21 江苏创健医疗科技股份有限公司 一种适用于Muts型毕赤酵母的发酵工艺

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107586789B (zh) 高产酸性蛋白酶黑曲霉重组表达菌株及其构建方法和应用
CN109790510A (zh) 在不存在诱导底物下丝状真菌细胞中的蛋白产生
CN107142225A (zh) 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌
RU2008107784A (ru) Генетическая конструкция для обеспечения экспрессии целевых гомологичных и гетерологичных генов в клетках мицелиального гриба penicillium verruculosum, используемого в качестве хозяина, способ получения штамма гриба penicillium verruculosum и способ получения ферментного препарата
RU2701308C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
CN102807958A (zh) 一种可分泌纤维素酶的菌株及其纤维素酶提取方法与应用
CN100347287C (zh) 一种重组多形汉逊酵母菌及其构建方法与应用
CN101532028A (zh) 一种高产糖化酶工业生产菌株的选育方法
RU2355754C1 (ru) ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica - ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ
CN103695388A (zh) α淀粉酶及表达α淀粉酶的黑曲霉菌株
KR101412468B1 (ko) 활성이 증진된 변이 베타-글루코시다제 및 이를 이용한 바이오 에탄올의 제조방법
RU2747782C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу Bacillus subtilis
CN109536558B (zh) 制备β-胡萝卜素的方法
Han et al. Effect of VIB gene on cellulase production of Trichoderma orientalis EU7-22
RU2725475C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis
CN107236680B (zh) 一种表达Streptomyces sp.FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌
KR101106061B1 (ko) 바이오 에탄올 생산능이 향상된 재조합 벡터 및 그 형질 전환체
RU2728243C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2764793C1 (ru) Трансформант дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу, содержащий в составе хромосомы синтетический ген MANS
RU2736441C1 (ru) Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу из Bacillus pumilus и бета-глюканазу из Paenibacillus jamilae
RU2730577C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae
CN105492612B (zh) 重组纤维素糖化酶混合物和重组酵母复合菌株及其用途
RU2714113C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
RU2701640C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii - продуцент бета-глюканазы
RU2728033C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20200828

QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20201214