RU2725475C1 - Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis - Google Patents

Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis Download PDF

Info

Publication number
RU2725475C1
RU2725475C1 RU2019130120A RU2019130120A RU2725475C1 RU 2725475 C1 RU2725475 C1 RU 2725475C1 RU 2019130120 A RU2019130120 A RU 2019130120A RU 2019130120 A RU2019130120 A RU 2019130120A RU 2725475 C1 RU2725475 C1 RU 2725475C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
xylanase
pichia pastoris
finnis
pyromyces
strain
Prior art date
Application number
RU2019130120A
Other languages
English (en)
Inventor
Анна Николаевна Калинина
Лариса Николаевна Борщевская
Татьяна Леонидовна Гордеева
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИ генетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИ генетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИ генетика)
Priority to RU2019130120A priority Critical patent/RU2725475C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2725475C1 publication Critical patent/RU2725475C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris, способный продуцировать ксиланазу. Штамм дрожжей Pichia pastoris содержит ген xylP, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Pyromyces finnis. Указанный штамм депонирован под номером ВКПМ Y-4622. Изобретение позволяет расширить арсенал рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих ксиланазу. 3 ил., 2 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения рекомбинантного штамма дрожжей Pichia pastoris, способного продуцировать ксиланазу.
Ксилан является основным структурным полисахаридом растительных клеткок и вторым после целлюлозы наиболее распространенным полисахаридом в природе [Biotech. Genet. Eng. Rev. 1995, 13, 100-131]. Это комплексный полисахарид, основная цепь которого состоит из β-(1-4) связанного ксилозного скелета с небольшим количеством β-(1-3) ответвлений [Macromol Rapid Commun., 2000, 21(9), 542-556. doi: 10.1002/1521-3927(20000601)21:9<542::AID-MARC542>3.0.CO;2-7].
Полная деградация ксилана требует комплекса ксиланолитических ферментов, включающих эндо-ксиланазу, ксилозидазу, глюкуронидазу, ацетилэстеразу и арабинофуранозидазу [Crit Rev Biotechnol, 2002, 22, 33-64, doi: 10.1080/073 88550290789450].
Основную роль в разрушении ксилана играет эндо-ксиланаза (эндо-1,4-β-ксиланаза, ЕС 3.2.1.8), которая катализирует случайный гидролиз ксилана до ксилололигосахаридов.
Ксиланазы широко используются в различных отраслях промышленности.
Так при кормопроизводстве введение ксиланаз уменьшает содержание некрахмальных полисахаридов, тем самым снижая вязкость корма в кишечнике животных и улучшая усвояемость и питательную ценность плохо разлагаемых кормов. [J. Anim. Sci., 2002, 80, 2773-2779; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 60-66; Br. Poult. Sci., 2003, 44, 291-298]
Природными источниками ксиланаз являются различные микроорганизмы: бактерии, грибы, дрожжи и актиномицеты [FEMS Microbiology Reviews, 2005, 29 (1), 3-23].
Традиционно ферментные препараты, в состав которых входят ксиланазы, получают на основе нерекомбинантных или рекомбинантньгх штаммов грибов рода Trichoderma, Aspergillus или Penicillium. Однако грибные штаммы, помимо ксиланазы, продуцируют ряд других ферментов, относящихся к карбогидразам, а именно: целлюлазу, глюканазу, пектиназу и маннаназу, что не позволяет использовать их при производстве моноферментных препаратов.
Анаэробные грибы семейства Neocallimastigomycota, выделенные из рубца животных, производят комплекс гидролитических ферментов, позволяющих разрушать клеточную стенку растений, высвобождая питательные вещества [Appl. Environ. Microbiol, 2000, 66(9), 3807-3813]. Кроме того, целлюлолитические ферменты анаэробных грибов обладают значительно большей удельной активностью, чем у аэробных грибов [Annals of microbiology, 2008,58(1), 115-119].
Для данной группы микроорганизмов описаны все известные ферменты гидролиза целлюлоз и гемицеллюлоз клеточных стенок растений, таких как 0-глюканы, маннаны и ксиланы [Appl. Environ. Microbiol., 1989, 55(5), 1066-1073], что подтверждает высокий потенциал анаэробных грибов в качестве источника высокоэффективных гидролитических ферментов. Однако, анаэробные грибы не могут быть использованы в промышленном производстве ферментов из-за их строго анаэробного и медленного роста. Создание рекомбинантных штаммов-продуцентов ферментов из анаэробных грибов на основе высокоэффективных дрожжевых экспрессионных систем является актуальной задачей.
Наиболее перспективным является создание продуцентов ферментов на основе рекомбинантньгх штаммов метилотрофных дрожжей Pichia pastoris. При использовании несбраживаемых источников углерода (глицерина, метанола и т.п.) дрожжи Pichia pastoris способны к росту с образованием биомассы высокой плотности, что позволяет получать значительные количества гетерологичного белка [Appl. Microbiol. Biotechnol., 2000, 54(6), 741-750]. При этом процесс культивирования метилотрофных дрожжей достаточно прост, поскольку их рост не блокируется продуктами метаболизма [FEMS Microbiol. Rev., 2000, 24:45-66, doi: 10.1111/j.l574-6976.2000.tb00532.x].
Известны примеры создания продуцентов ксиланазы на основе дрожжей Pichia pastoris.
Показано [Protein Expression and Purification 57 (2008), 101-107], что ген reBlxA из Bacillus licheniformis, кодирующий ксиланазу А, эффективно экспрессируется в клетках дрожжей Pichia pastoris, при этом активность рекомбинантной ксиланазы в культуральной жидкости составляет 122.9 ед/мг.
Известны также рекомбинантные штаммы Pichia pastoris, продуцирующие ксиланазу из Streptomyces sp.FA1 [CN107142225A] и ксиланазу из Neocallimastix frontalis [CN104130951A].
В работе [Биотехнология, 2019, 35, 4, 24-32] описан ген xylP из Pyromyces finnis кодирующий фермент эндо-1,4-β-ксиланазу (ЕС 3.2.1.8).
Поскольку гены ксиланаз различного происхождения экспрессируются в дрожжах Pichia pastoris с различной эффективностью [Биотехнология, 2018, 34(4), 26-36] выбор генов, кодирующих ксиланазу и эффективно работающих в дрожжах Pichia pastoris. важен для конструирования эффективных продуцентов.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала рекомбинантньгх микроорганизмов, продуцирующих ксиланазу.
Задача решена путем конструирования штамма дрожжей Pichia pastoris 98 ВКПМ Y-4622, содержащего ген xylP, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Pyromyces finnis и продуцирующего ксиланазу.
Рекомбинантный штамм Pichia pastoris XylP.fin получен путем интеграции экспрессионной кассеты, содержащей ген xylP из Pyromyces finnis, в состав хромосомы штамма Pichia pastoris ВКПМ Y-4392.
Штамм является продуцентом эндо-1,4-β-ксиланазы и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris XylP.fin ВКПМ Y-4622.
Культурально-морфологические характеристики заявляемого штамма:
При культивировании при температуре 28°С в течение 48 часов на агаризованной среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, агар - 2, вода - остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %) клетки имеют овальную форму, 3-4 мкм в диаметре. Клетки почкуются, при этом почкование истинное, многостороннее.
Истинного мицелия не образуют.
Споруляция происходит при инкубации культуры на агаризованной среде следующего состава (мас. %): хлорид калия - 1.0, ацетат натрия - 0.5, глюкоза - 1.0, агар - 2.0, вода - остальное. Аски имеют тетраэдрическую форму, включают 4 аскоспора.
На агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) колонии светло-бежевого цвета с ровным краем, матовой поверхностью, линзовидным профилем и пастообразной консистенцией.
При росте в жидкой среде YP (мас. %: дрожжевой экстракт - 1, пептон - 2, вода -остальное) с добавлением глюкозы (2 мас. %), при 28°С в течение 24 ч культивирования - жидкость мутная, осадок белый, коагуляции не наблюдается, пристеночных пленок не образует.
Физиолого-биохимические признаки:
Штамм способен к росту как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
В качестве единственного источника углерода способен использовать метанол, этанол, глюкозу, глицерин, лактат, сукцинат, не способен ассимилировать мальтозу, сахарозу, ацетат, крахмал, лактозу.
При культивировании в присутствии метанола штамм способен синтезировать ксиланазу.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами.
Фиг. 1 Экспрессионная кассета 1
Фиг. 2 Электрофорез гена xylP Pyromyces finnis.
Фиг. 3 Фингерпринт штамма Pichia pastoris ВКПМ XylP.fin Y-4622
Изобретение подтверждено следующими примерами.
Пример 1. Конструирование заявляемого штамма.
Синтетическую последовательность гена xylP встраивают в состав интегративной экспрессионной кассеты методом "фьюжн-пцр" [Gene., 1989, 15, 77(1), 61-68.].
Полученную последовательность ДНК встраивают в состав экспрессионной кассеты 1 (фиг. 1), в состав которой входят следующие генетические элементы:
1. Ген xylP Pyromyces finnis, встроенный в единую рамку считывания с нуклеотидной последовательностью сигнального пептида α-фактора, под контролем АОХ1 промотора;
2. Терминатор транскрипции ТТАОХ1;
3. Дрожжевой селективный маркер kan, фланкированный сайтами lox 66 и lox 71, под контролем дрожжевого TEF промотора и обуславливающий у дрожжей Pichia pastoris устойчивость к антибиотику генетицину (G418) [Nature Biotechnology. - 1994. - Т. 12. - №. 2. - С. 181];
4. Область интеграции - нуклеотидная последовательность гена АОХ2.
Указанную интегративную экспрессионную кассету трансформируют в штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4622, полученный на основе штамма Pichia pastoris DSMZ 70877 интеграцией в хромосому кассеты Pcup-cre, состоящей из гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1 под контролем Pcup промотора из Saccharomyces cerevisiae.
Штамм Pichia pastoris ВКПМ Y-4622 предварительно выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) до концентрации 1×108 клеток на 1 мл. Клетки центрифугируют, промывают в ледяной стерильной воде, а затем в ледяном растворе 1М сорбитола. Затем клетки инкубируют в 25 мМ растворе дитиотрейтола в течение 15 минут и промывают в ледяном растворе 1М сорбитола. Обработанные таким образом клетки ресуспендируют в ледяном растворе 1 М сорбитола в концентрации 1-5×109 клеток на 1 мл. Аликвоту, объемом 40 мкл клеточной суспензии, переносят в охлажденный эппендорф, добавляют 400 нг ДНК экспрессионной интеграционной кассеты, и инкубируют во льду 5 минут. Смесь клеток и ДНК переносят в предварительно охлажденную кювету для электропорации. Электропорацию проводят при следующих условиях: 1,5 кВ, 400 Ом, 25uF. После порации добавляют 1 мл ледяного раствора 1М сорбитола.
Селекцию трансформантов ведут на агаризованной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) в течение 5 суток при температуре 30°С. В качестве селективного агента добавляют антибиотик G418 в количестве 500 мкг/мл.
Для отбора наиболее продуктивных трансформантов проводят их культивирование в жидкой ферментационной питательной среде YP с добавлением метанола (3 мас. %) в 96-луночных планшетах при 30°С в течение 72 ч на качалке (250 об/мин). В качестве контроля используют штамм Pichia pastoris Y-4622.
Определение активности ксиланазы в культуральной жидкости проводят с использованием динитросалициловой кислоты (ДНС - метод) [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428] в 96-луночном планшете следующим образом: в каждой лунке смешивают 25 мкл 1% раствора субстрата ксилана березы в 0,5 М ацетатном буфере (рН 6) и 25 мкл культуральной жидкости. Инкубацию проводят при 50°С 10 минут, после чего добавляют в лунку 50 мкл раствора ДНС. Планшет прогревают при 99°С 10 минут и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 546 нм. В качестве стандарта используют раствор глюкозы.
По результатам ферментации отбирают наиболее продуктивный трансформант №98, который при культивировании в планшете синтезирует ксиланазу в количестве 534 ед/мл культуральной жидкости.
Для выщепления маркерного гена kanMX из экспрессионной кассеты, интегрированной в хромосому трансформанта №98, проводят индукцию гена cre, кодирующего рекомбиназу бактериофага Р1, встроенного в хромосому штамма Pichia pastoris Y-4622 (Mut+, INS Pcup-cre) и находящегося под контролем промотора Pcup.Индукция происходит в присутствии ионов меди. Для этого клетки трансформанта №378 выращивают в жидкой питательной среде YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). до концентрации 1×108 клеток на 1 мл, после чего добавляют раствор сульфата меди до концентрации 0,3 М, инкубируют в течении 3 часов, после чего клетки высевают на агаризованную питательную среду YP с добавлением глюкозы (2 мас. %). Отбирают колонии, не способные к росту в присутствии антибиотика G418.
Отобранный трансформант №98 с выщепленным маркерным геном kanMX, способный к синтезу фермента эндо-1,4-β-ксиланазы Pyromyces finnis, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Pichia pastoris XylP.fin ВКПМ Y-4622.
Наличие в хромосоме штамма вставки гена xylP Pyromyces finnis подтверждают методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), для чего используют хромосомальную ДНК, выделенную из клеток штамма Pichia pastoris XylP.fin ВКПМ Y-4622 и специфические праймеры XylPfin-f и XylPfin-r
XylPftn-f 5'-CAATCTTTCTGTTCTTCTGCTTCT-3',
XylPffin-r 5'-TTAGATGTAAACCTTAGCGTATGG-3'
Режим реакции ПЦР:
95°С - 3 мин - 1 цикл
30 циклов:
95°С - 30 сек.
54°С - 30 сек.
72°С - 60 сек.
72°С - 5 мин. - 1 цикл
Для контроля величины амплифицированного фрагмента ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер GeneRuler 1 kb DNA Ladder (Fermentas) (линия 2, фиг. 2, размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н.). Наработка фрагмента ДНК размером 672 п.н. (линия 1 фиг. 2) свидетельствует о присутствии в хромосоме штамма вставки гена xylP Pyromyces finnis
Результаты ПЦР-фингерпринта [Applied and Environmental Microbiology, Oct, 1999, 4351-4356] штамма Pichia pastoris XylP.fin ВКПМ Y-4622 представлены на фиг 3.
Фингерпринт проведен путем полимеразной цепной реакции с использованием неспецифических праймеров М13 (линия 1 фиг. 3) и 1254 (линия 2 фиг. 3).
Праймер М13 gagggtggcggttct
режим реакции:
1 цикл
95°С - 3 мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
45°С - 30 сек.
72°С - 2 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Праймер 1254 ccgcagccaa
режим реакции:
1 цикл
95°С - 3 мин.
39 циклов
95°С - 30 сек.
48°С - 30 сек.
72°С - 1 мин.
1 цикл
72°С - 5 мин
Для контроля величины фрагментов ДНК при электрофорезе использован молекулярный маркер 1kb DNA GeneRuler (Fermentas) (линия 3, фиг. 3 размер фрагментов снизу вверх 10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н.).
Пример 2. Продукция ксиланазы заявляемым штаммом.
Посевную культуру выращивают в пробирках (50 мл) с 10 мл жидкой питательной среды YP с добавлением глюкозы (2 мас. %) при 30°С в течение 24 ч на качалке с 250 об/мин. Посев ферментационной среды осуществляют в соотношении 1/10.
Ферментацию проводят при 30°С на качалке (250 об/мин) в питательной среде состава (мас. %): дрожжевой экстракт - 0,5, пептон - 1, вода - остальное с добавлением глюкозы (1 мас. %) в пробирках (50 мл) с рабочим объемом 5 мл. Через 18 часов добавляют метанол (1 мас. %) Ферментацию продолжают в течение 72 часов, добавляя метанол (1 мас. %) через каждые 24 часа. После окончания ферментации определяют количество фермента ксиланазы в культуральной жидкости с использованием ДНС метода [Anal. Chem., 1959, 31 (3), 426-428].
Через 72 часа ферментации количество фермента составила 1916 ед/мл культуральной жидкости.

Claims (1)

  1. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4622, содержащий ген xylP, кодирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Pyromyces finnis - продуцент ксиланазы.
RU2019130120A 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis RU2725475C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130120A RU2725475C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130120A RU2725475C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2725475C1 true RU2725475C1 (ru) 2020-07-02

Family

ID=71510279

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019130120A RU2725475C1 (ru) 2019-09-25 2019-09-25 Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2725475C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104388451A (zh) * 2014-12-10 2015-03-04 江南大学 耐热木聚糖酶(Xyl11M)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104388451A (zh) * 2014-12-10 2015-03-04 江南大学 耐热木聚糖酶(Xyl11M)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达
CN107142225A (zh) * 2017-07-06 2017-09-08 江南大学 一种强化表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КАЛИНИНА А.Н. И ДР. Сравнение ксиланаз различного происхождения в экспрессионной системе Pichia pastoris: экспрессия, биохимическая характеристика и биотехнологический потенциал. Биотехнология, 2018, Т.34, N 4, С.26-36. *
КАЛИНИНА А.Н. И ДР. Экспрессия гена ксиланазы из Pyromyces finnis в Pichia pastoris и характеристика рекомбинантного белка. Биотехнология, 2019, Т.35, N 4, С.24-32. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2361918C1 (ru) Штамм мицелиального гриба penicillium verruculosum - продуцент комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы и способ получения ферментного препарата комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы для гидролиза целлюлозы и гемицеллюлозы
CN103987838A (zh) 真菌细胞和发酵方法
WO2019128454A1 (zh) 一种新型木霉及其应用
US7163804B1 (en) Non-toxic non-toxigenic non-pathogenic fusarium expression system
RU2378372C2 (ru) Генетическая конструкция для обеспечения экспрессии целевых гомологичных и гетерологичных генов в клетках мицелиального гриба penicillium verruculosum, используемого в качестве хозяина, способ получения штамма гриба penicillium verruculosum и способ получения ферментного препарата
CN105368866A (zh) 改良ATMT在构建深绿木霉T23△Crel中的应用
RU2701308C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
RU2701642C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы
US10053680B2 (en) Strain and a method to produce cellulase and its use
RU2654564C1 (ru) Штамм мицелиального гриба TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM TW-14-220 - продуцент целлюлаз, бета - глюканаз и ксиланаз для кормопроизводства и способ получения кормового комплексного ферментного препарата
RU2725475C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы из Pyromyces finnis
CN101532028A (zh) 一种高产糖化酶工业生产菌株的选育方法
RU2728243C1 (ru) Штамм дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2714113C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий ксиланазу
KR101106061B1 (ko) 바이오 에탄올 생산능이 향상된 재조합 벡터 및 그 형질 전환체
JP2015012852A (ja) 微細藻類バイオマスを原料とするバイオ燃料の製造方法
RU2728033C1 (ru) Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий эндо-1,4-β-ксиланазу из Paenibacillus brasilensis
RU2195490C2 (ru) Штамм мицелиального гриба trichoderma longibrachiatum - продуцент комплекса карбогидраз, содержащего целлюлазы, бета-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и маннаназы
RU2764793C1 (ru) Трансформант дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу, содержащий в составе хромосомы синтетический ген MANS
RU2747782C1 (ru) Рекомбинантный штамм дрожжей Ogataea haglerorum, продуцирующий бета-маннаназу Bacillus subtilis
RU2646132C1 (ru) Рекомбинантный штамм мицелиального гриба penicillium canescens cl14, продуцирующий компонент целллюлосомы clostridium thermocellum, и способ его культивирования
CN111893107A (zh) 一株异源表达纤维素酶基因egⅳ的毕赤酵母工程菌株及应用
RU2736441C1 (ru) Штамм дрожжей Komagataella kurtzmanii, продуцирующий бета-глюканазу из Bacillus pumilus и бета-глюканазу из Paenibacillus jamilae
WO2012060389A1 (ja) シゾサッカロミセス属酵母の形質転換体およびその製造方法
Olaniyi et al. Production and partial purification of beta-mannanase from Aspergillus niger associated with Ilaje Lake, Ondo State, Nigeria

Legal Events

Date Code Title Description
QZ41 Official registration of changes to a registered agreement (patent)

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200828

Effective date: 20201214