RU2724339C2 - Сенекривирок для лечения фиброза - Google Patents

Сенекривирок для лечения фиброза Download PDF

Info

Publication number
RU2724339C2
RU2724339C2 RU2016141281A RU2016141281A RU2724339C2 RU 2724339 C2 RU2724339 C2 RU 2724339C2 RU 2016141281 A RU2016141281 A RU 2016141281A RU 2016141281 A RU2016141281 A RU 2016141281A RU 2724339 C2 RU2724339 C2 RU 2724339C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
crs
group
liver
senecriviroc
fibrosis
Prior art date
Application number
RU2016141281A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2016141281A (ru
RU2016141281A3 (ru
Inventor
Эрик ЛЕФЕБВР
Original Assignee
Тобира Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Тобира Терапьютикс, Инк. filed Critical Тобира Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2016141281A publication Critical patent/RU2016141281A/ru
Publication of RU2016141281A3 publication Critical patent/RU2016141281A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2724339C2 publication Critical patent/RU2724339C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/536—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7052—Fibrosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для лечения фиброза печени или фиброза почек у субъекта. Для этого осуществляют совместное введение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество сенекривирока или его соли; фумаровой кислоты; и одного или более дополнительных активных агентов. Указанные дополнительные агенты выбирают из группы, состоящей из антиретровирусного агента, агента, подавляющего иммунную систему, и противофиброзного агента. Указанный фиброз печени связан с нецирротическим фиброзом печени, возникновением цирроза, неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ) или неалкогольной жировой болезнью печени (НЖБП). В другом воплощении обеспечивается способ лечения НАСГ у субъекта, включающий введение терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли; при этом неалкогольный стеатогепатит связан с CCR5-тропной ВИЧ-1 инфекцией. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность лечения фиброза и НАСГ у субъекта. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 38 табл., 26 пр., 56 ил.

Description

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0001] Сенекривирок (также известный как СВК) представляет собой общепринятое название соединения (S,E)-8-(4-(2-бутоксиэтокси)фенил)-1-(2-метилпропил)-N-(4-(((1-пропил-1H-имидазол-5-ил)метил)сульфинил)фенил)-1,2,3,4-тетрагидробензо[b]азоцин-5-карбоксамид. Химическая структура мезилата сенекривирока показана на Фигуре 1. Сенекривирок связывает и ингибирует активность рецепторов: C-C рецептора хемокина 2 (CCR2) и C-C рецептора хемокина 5 (CCR5) (24). Эти рецепторы не только играют роль в проникновении вирусов, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) в клетку, но и имеют важное значение для привлечения иммунных клеток к местам повреждения. Ингибирование такой активности рецепторов может иметь противовоспалительное действие. В последнее время была изучена роль, которую играет воспаление в развитии фиброза [30]. Было показано, что С-С хемокиновый рецептор 2 (CCR2) и CCR5 могут играть определенную роль в развитии фиброза печени [3, 4, 5, 31 32].
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения фиброза или фиброзного заболевания, или состояния у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли, или сольвата. В другом варианте реализации изобретения фиброз или фиброзное заболевание, или состояние представляет собой фиброз печени или фиброз почек. Еще в дополнительном варианте реализации изобретения фиброз печени связан с неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ). Еще в дополнительном варианте реализации изобретения фиброз печени связан с неалкогольной жировой болезнью печени (НЖБП). Еще в дополнительном варианте реализации изобретения фиброз печени связан с возникновением цирроза. В другом дополнительном варианте реализации изобретения фиброз печени включает нецирротический фиброз печени. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект инфицирован вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). В дополнительном варианте реализации изобретения сенекривирок или его соль, или сольват представлены в виде фармацевтической композиции, содержащей сенекривирок или его соль, или сольват, и фумаровую кислоту. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект страдает заболеванием или состоянием, выбранным из группы, состоящей из алкогольной болезни печени, смешанной инфекции ВИЧ и ВГС, инфекции ВГС, сахарного диабета 2 типа (СД2), метаболического синдрома (МС) и их комбинации.
[0003] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения НАСГ у субъекта, нуждающегося в этом, включающего введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли, или сольвата; в котором НАСГ или фиброз печени, связанный с НАСГ, связан с сахарным диабетом 2 типа (СД2).
[0004] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения НАСГ у субъекта, нуждающегося в этом, включающего введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли, или сольвата; в котором НАСГ или фиброз печени, связанный с НАСГ, связан с метаболическим синдромом (МС).
[0005] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения НАСГ у субъекта, нуждающегося в этом, включающего введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли, или сольвата; в котором фиброз печени связан со смешанной инфекцией ВИЧ и ВГС.
[0006] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения НАСГ у субъекта, нуждающегося в этом, включающего введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли, или сольвата; в котором фиброз печени связан с инфекцией ВГС.
[0007] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват представлены в виде пероральной композиции.
[0008] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват вводят один раз в сутки или два раза в сутки.
[0009] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват вводят совместно с одним или более дополнительными активными агентами. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов представляют собой один или более антиретровирусных агентов, выбранных из группы, состоящей из ингибиторов проникновения, нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, нуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы, ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, ингибиторов протеазы, ингибиторов переноса цепи интегразой, ингибиторов созревания и их комбинации. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных антиретровирусных агентов выбраны из группы, состоящей из ламивудина, эфавиренца, ралтегравира, вивекона, бевиримата, альфа-интерферона, зидовудина, абакавира, лопинавира, ритонавира, тенофовира, дизопроксила тенофовира, пролекарств тенофовира, эмтрицитабина, элвитегравира, кобицистата, дарунавира, атазанавира, рилпивирина, долутегравира и их комбинации.
[0010] В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов представляют собой один или более агентов, подавляющих иммунную систему. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов выбраны из группы, состоящей из циклоспорина, такролимуса, преднизолона, гидрокортизона, сиролимуса, эверолимуса, азатиоприна, микофенольной кислоты, метотрексата, базиликсимаба, даклизумаба, ритуксимаба, антитимоцитарного глобулина, антилимфоцитарного глобулина и их комбинации.
[0011] В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов представляют собой один или более противофиброзных агентов, включая, без ограничений, агенты, такие как N-ацетил-L-цистеины (NAC), а также ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), антагонисты АТ II, обетихолевая кислота (ОХК), GFT505, симтузумаб или их комбинации.
[0012] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, включающему определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, и определения схемы лечения на основании увеличения или снижения уровня одной или более биологических молекул, где биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из липополисахарида (ЛПС), ЛПС-связывающего белка (ЛСБ), 16S рРНК, sCD14, кишечной формы белка, связывающегося с жирными кислотами (I-FABP), зонулина-1, коллагена 1а1 и 3а1, TGF-β, фибронектина-1 и их комбинации.
[0013] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, включающему определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем увеличение или уменьшение уровня одной или более биологических молекул по сравнению с заранее определенным стандартным уровнем представляет собой прогноз эффективности лечения фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из липополисахарида (ЛПС), ЛПС-связывающего белка (ЛСБ), 16S-рДНК, sCD14, кишечной формы белка, связывающегося с жирными кислотами (I-FABP), зонулина-1, коллагена 1а1 и 3а1, TGF-β, фибронектина-1 и их комбинации.
[0014] В дополнительном варианте реализации изобретения одна или более биологических молекул измеряются в биологическом образце субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния. Еще в одном дополнительном варианте реализации изобретения биологический образец выбирают из крови, кожи, волосяных фолликул, слюны, слизистой ротовой полости, слизистой влагалища, пота, слез, эпителиальной ткани, мочи, семени, спермы, семенной жидкости, секрета простаты, предэякулята (Куперова жидкость), экскрета, биопсии, асцита, спинномозговой жидкости, лимфы, мозга, и образца выделенной ткани или образца биопсии.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0015] На Фигуре 1 показана химическая формула мезилата сенекривирока.
[0016] На Фигуре 2 представлен график сравнения абсолютной биодоступности у собак породы «бигль» мезилата сенекривирока, приготовленного в виде раствора для перорального применения, с мезилатом сенекривирока, приготовленного путем влажного гранулирования, и смешанного с различными кислоторастворимыми носительвспомогательными веществами.
[0017] На Фигуре 3 показан график общего содержания примесей и доли продуктов распада различных лекарственных форм сенекривирока, подвергнутых ускоренным испытаниям на стабильность при 40°С и относительной влажности 75%, при упаковке вместе с влагопоглотителем.
[0018] На Фигуре 4 представлена изотерма динамической сорбции пара различных лекарственных форм сенекривирока.
[0019] На Фигуре 5 показана абсорбция сенекривирока из различных лекарственных форм в трех вариантах премедикации у собак породы «бигль».
[0020] На Фигуре 6 показана абсолютная биодоступность сенекривирока и ламивудина в комбинированных таблетках у собак породы «бигль».
[0021] На Фигуре 7 (A-Б) показаны уровни внутриклеточной ДНК ВИЧ в МКПК участников в исследовании 202 в течение 24 недель. Диаграмма рассеяния, изображающая кратное изменение между исходным и 24-недельным уровнями внутриклеточного ДНК ВИЧ, разделенные по группам лечения. Линии и планки погрешностей представляют собой значения средних и стандартных ошибок, соответственно. Кратное изменение рассчитывали с использованием ΔΔCT в ВИЧ/ ГАФД мультиплексной кПЦР реакции с фоновой пробой каждого пациента в качестве калибратора. A) Полноразмерная ДНК ВИЧ (поздний обратный транскрипт), Б) сегмент ДНК ВИЧ, комплементарный 5'-концевой части вирусной РНК (ранний обратный транскрипт)
[0022] На Фигуре 8 (A-Б) показано действие СВК и МВК на R5-тропную вирусную РНК и р24 в культуральной жидкости. A) Уровни вирусной нагрузки в культуральной жидкости контрольных групп или клеток, обработанных СВК или МВК через 4 часа после заражения. Планки погрешностей обозначают стандартное отклонение. Представлено два независимых эксперимента. Б) Средние уровни антигена р24 в культуральной жидкости контрольных групп или клеток, обработанных СВК или МВК через 4 часа после заражения. Планки погрешностей обозначают стандартное отклонение. Представлено два независимых эксперимента.
[0023] На Фигуре 9 показано действие СВК и МВК на уровни R5-тропной внутриклеточной ДНК ВИЧ. Среднее кратное изменение уровней сегментов внутриклеточной ДНК, комплементарных 5'-концевой части вирусной РНК, СВК- или МВК-обработанных клеток по сравнению с безлекарственным контролем после 4 часов. Планки погрешностей обозначают стандартное отклонение. Кратное изменение рассчитывали с использованием ΔΔCT в ВИЧ/ГАФД мультиплексной кПЦР реакции с безлекарственным контролем после 4 часов в качестве калибратора. Представлено два независимых эксперимента.
[0024] На Фигуре 10 показаны формы множественного связывания СВК в CCR5. Координаты CCR5 были получены из кристаллической структуры CCR5, связанного с маравироку в кармане связывания (банк данных белков (PDB) ИД: 4Мб). Сайты связывания СВК исследовали после докинга СВК. Положения докинга СВК изображены в виде цветных тонких линий. Семь трансмембранных (7TM) а-спиралей изображены спиралями и пронумерованы (1-7) в соответствии с порядком аминокислотных последовательностей. А) вид сверху с внеклеточной стороны рецептора с тремя очерченными потенциальными сайтами связывания (сайт 1 (белый), сайт 2 (черный) и сайт 3 (светло-розовый)). (Б) Вид сбоку в трансмембранной полости CCR5. Внеклеточная петля 2 (ВКП2) помечена. Вторичные структуры представлены в виде эскиза структур. Все изображения обрабатывали с помощью программного обеспечения PyMOL.
[0025] На Фигуре 11 показано сравнение лигандсвязывающего кармана между CCR5/маравирок и CCR5/сенекривирок. Вид сверху CCR5, изображающий положения докинга, окрашенные тонкими линиями, СВК (слева) и МВК, желтая палочка, (справа) в лигандсвязывающем кармане. CCR5 показан на изображении молекулярной поверхности. Ключевые остатки: Tyr37, Trp86, Trp94, Leu104, Tyr108, Phe109, Phe112, Thr177, Ile198, Trp248, Tyr251, Leu255 и Glu283, которые участвуют в связывания gp120, находятся глубоко в кармане и окрашены в красный цвет.
[0026] На Фигуре 12 показана схема постановки опытов для оценки СВК в мышиной модели ООМ (односторонняя обструкция мочеточника) фиброза почек. Контроль (носитель) и СВК вводили два раза в сутки; антитело анти-TGF-β1, соединение 1D11 (положительный контроль) вводили каждые сутки два раза в сутки (QD BID), два раза в сутки; СВК, сенекривирок; ИП, интраперитонеально; PBS, фосфатно-солевой буферный раствор; QD, один раз в сутки; TGF, трансформирующий фактор роста; ООМ, односторонняя обструкция мочеточника
[0027] На Фигуре 13 показано изменение массы тела (5 сутки) в каждой терапевтической группе в мышиной модели ООМ фиброза почек.
[0028] На Фигуре 14 показана оценка объемного содержания коллагена (ОСК; % площади) в каждой терапевтической группе в мышиной модели ООМ фиброза почек. В представленных результатах не учитывали единичные резко отклоняющееся значения у животных в группе СВК 20 мг/кг/сутки, которые имели значение ОСК, превышающее >2 стандартных отклонения любого другого животного в группе.
[0029] На Фигуре 15 показана экспрессия мРНК в ткани коркового вещества почек, подвергнутой ложному хирургическому вмешательству
[0030] На Фигуре 16 показано изменение массы тела до 9 недели у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу).
[0031]
[0032] На Фигуре 17А-В показано изменение массы печени и тела вплоть до 9 недели у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу). На панели А показано изменение массы тела, на панели Б показано изменение массы печени, и на панели В показано изменение соотношения массы печени к массе тела
[0033] На Фигуре 18 A-Е показана биохимия цельной крови и биохимия животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю. На панели A показан уровень глюкозы цельной крови, на панели Б показан
уровень АЛТ в плазме крови, на панели В показан уровень МХБ-1 плазмы крови, на панели Г показан уровень МБВ-1β плазмы крови, на панели Д показан уровень триглециридов печени, и на панели Е показан уровень гидроксипролина печени.
[0034] На Фигуре 19 показаны срезы печени, окрашенные гематоксилином-эозином (ГЭ), животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0035] На Фигуре 20 показан индекс активности НЖБП животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0036] На Фигуре 21 показаны типичные микрофотографии срезов печени, окрашенных конго красным, у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0037] На Фигуре 22 показаны типичные микрофотографии срезов печени, иммуноокрашенных F4/80, у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0038] На Фигуре 23 показана процентная доля площади воспаления у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0039] На Фигуре 24 показаны типичные микрофотографии срезов печени, с двойным иммуноокрашиванием F4/80 и CD206, у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0040] На Фигуре 25 показана процентная доля F4/80 и CD206 дважды-положительных клеток F4/80 положительных клеток у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0041] На Фигуре 26 показаны типичные микрофотографии срезов печени, с двойным иммуноокрашиванием F4/80 и CD16/32 животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0042] На Фигуре 27 показана процентная доля F4/80 и CD16/32 дважды-положительных клеток F4/80 положительных клеток животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0043] На Фигуре 28 показано соотношение M1/M2 у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0044] На Фигуре 29 показаны типичные микрофотографии срезов печени, окрашенных масляным красным, у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0045] На Фигуре 30 показана процентная доля площади жировых отложений у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0046] На Фигуре 31 показаны типичные микрофотографии TUNEL-положительных клеток в печени животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0047] На Фигуре 32 показана процентная доля TUNEL-положительных клеток у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю.
[0048] На Фигуре 33 показан количественный ОТ-ПЦР животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю. Были измерены уровни ФНО-α, МХБ-1, коллагена 1 типа и ТИМП-1.
[0049] На Фигуре 34A-Е показаны исходные данные для количественного ОТ-ПЦР животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 9 неделю. На панели A показаны уровни 36B4, на панели Б показаны уровни ФНО-α, на панели В показаны уровни ТИМП-1, на панели Г показаны уровни коллагена 1 типа, на панели Д показаны уровни 36B4, и на панели Е показаны уровни МХБ-1.
[0050] На Фигуре 35 показаны изменения массы тела животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу) от 6 до 18 недель.
[0051] На Фигуре 36 показана кривая выживаемости животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу)
[0052] На Фигуре 37A-В показаны масса тела и масса печени животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю. На панели A показана масса тела, на панели Б показана масса печени, и на панели В показано соотношение массы печени к телу.
[0053] На Фигуре 38A-В показан макроскопический внешней вид печеней животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю. На панели A показаны печени животных, получавших только носитель, на панели Б показаны печени животных, получавших низкие дозы сенекривирока, и на панели В показаны печени животных, получавших высокие дозы сенекривирока.
[0054] На Фигуре 39 показано количество видимых опухолевых узлов у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0055] На Фигуре 40 показан максимальный диаметр видимых опухолевых узлов у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0056] На Фигуре 41 показаны типичные микрофотографии срезов печени, окрашенных ГЭ, животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0057] На Фигуре 42 показаны типичные микрофотографии срезов печени, иммуноокрашенных глутаминсинтетазой (ГС), животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0058] На Фигуре 43 показаны типичные микрофотографии срезов печени, иммуноокрашенных CD31, животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0059] На Фигуре 44 показана процентная доля CD31-положительной площади у животных, получавших сенекривирок (низкую или высокую дозу), на 18 неделю.
[0060] На Фигуре 45 показано изменение медианы в уровнях РНК ВИЧ-1 от базовых показателей когорты и дня исследования - исследование 201.
[0061] На Фигуре 46 доля субъектов с РНК ВИЧ-1 <50 копий/мл в течение продолжительного периода вплоть до 48 недели - алгоритм мгновенного снимка - ITT-анализ - исследование 202.
[0062] На Фигуре 47 показано изменение взвешенных средних значений, определенных методом наименьших квадратов, от базовых показателей в уровнях sCD14(106 пг/мл) в течение продолжительного периода вплоть до 48 недели - ITT-анализ.
[0063] На Фигуре 48 показаны СВК (совокупность данных) и субъекты, получающие ЭФВ (эфавиренц), сгруппированы в соответствии с оценкой индекса отношения АСТ к количеству тромбоцитов (индекс APRI) и индекса FIB-4 для определения фиброза в начале исследования, 24-й неделе и 48-й неделе.
[0064] На Фигуре 49 показан график рассеяния изменения от исходного уровня индекса APRI по сравнению с изменением от исходного уровня sCD14-48-я неделя (ITT-анализ).
[0065] На Фигуре 50 показан график рассеяния изменения от исходного уровня индекса FIB-4 по сравнению с изменением от исходного уровня sCD14-48-я неделя (ITT-анализ).
[0066] На Фигуре 51 показаны изменения среднего значения от исходного уровня креатинфосфокиназы (КФК) в течение продолжительного периода вплоть до 48 недели - выборка для оценки безопасности.
[0067] На Фигуре 52 показана плотность точек повышения КФК по степени тяжести по сравнению с Сср. (нг /мл) - 48-я неделя.
[0068] На Фигуре 53 показана плотность точек повышения АЛТ по степени тяжести по сравнению с Сср. (нг /мл) - 48-я неделя.
[0069] На Фигуре 54 показана плотность точек повышения АСТ по степени тяжести по сравнению с Сср. (нг /мл) - 48-я неделя.
[0070] На Фигуре 55 показана плотность точек повышения билирубина по степени тяжести по сравнению с Сср. (нг /мл) - 48-я неделя.
[0071] На Фигурах 56А, 56Б показаны изменения среднего значения от исходного уровня общего холестерина натощак, рассчитанные уровни холестерина ЛПНП, холестерина ЛПВП и триглицеридов в течение продолжительного периода вплоть до 48 недели (мг/дл).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0072] Следует понимать, что формы единственного числа используются в данной заявке для удобства, за исключением тех случаев, когда из контекста или утверждения явно не следует иное, то формы единственного числа предполагают включение форм множественного числа. Кроме того, следует понимать, что каждая журнальная статья, патент, патентная заявка, публикация, и тому подобное, которые упоминается в данном документе, включены в данный документ в качестве ссылки во всей своей полноте и для всех целей. Все числовые диапазоны подразумевают каждое числовое значение в пределах числового диапазона, и их следует интерпретировать как содержащие каждое числовое значение по отдельности. Конечные точки всех диапазонов, направленные к одному компоненту или свойству, включены и предназначены для независимого друг от друга комбинирования.
Термины
[0073] Кроме терминов, обсуждаемых ниже, все термины, используемые в данной заявке, предназначены для приобретения смысловой нагрузки, которую специалист в данной области техники к моменту данного изобретения будет им приписывать.
[0074] «Около» включает все значения, имеющие по существу тот же самый эффект или по существу обеспечивая тот же самый результат, как и эталонное значение. Таким образом, диапазон, охватываемый понятием ʺоколоʺ, будет варьировать в зависимости от контекста, в котором данный термин используется, например, связан со свойством эталонного значения. Таким образом, в зависимости от контекста ʺоколоʺ может означать, например, ±15%, ±10%, ±5%, ±4%, ±3%, ±2%, ±1%, или менее ±1%. Важно отметить, что все раскрытия эталонного значения, которые предшествует термину «около» предназначены также для раскрытия только эталонного значения. Независимо от предыдущих раскрытий, в данной заявке термин «около» имеет особое значение в отношении фармакокинетических параметров, таких как площадь под кривой (включая AUC, AUCt, и AUC∞) Cмакс, Tмакс и тому подобное. При использовании в отношении к значению фармакокинетического параметра, термин «около» означает от 80% до 125% от контрольного параметра.
[0075] ʺСенекривирокʺ относится к химическому соединению (S)-8-[4-(2-Бутоксиэтокси)фенил-1-изобутил-N-(4-{[(1-пропил-1H-имидазол-5-ид)метил]сульфинил}фенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-бензоазоцин-5-карбоксамид (структура приведена ниже). Подробная информация о составе вещества сенекривирока описана в публикации заявки на патент США № 2012/0232028, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей. Подробная информация о связанных с ним препаратах представлена в заявке на патент США № 61/823766, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей.
Figure 00000001
[0076] Термины ʺсоединение в соответствии с настоящим изобретениемʺ или ʺнастоящее соединениеʺ относится к сенекривироку или его соли, или сольвату.
[0077] ʺПо существу аналогичныйʺ означает композицию или препарат, который мало чем отличается от эталонной композиции или препарата, в значительной степени как идентичный, так и эквивалентный композиции или составу.
[0078] Термин «фармацевтически приемлемый» относится к материалу или способу, которые могут быть использованы в медицине или фармацевтике, в том числе для ветеринарных целей, например, для введения субъекту.
[0079] Термины «соль» и «фармацевтически приемлемая соль» включает соли присоединения как кислоты, так и основания. Термин «соль присоединения кислоты» относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований, которые не являются биологически или иным образом нежелательными и которые образованы неорганическими кислотами и органическими кислотами. Термин «соль присоединения основания» относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных кислот, которые не являются биологически или иным образом нежелательными, и которые получены добавлением неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничений, минеральные или органические соли присоединения кислот основных остатков, таких как амины; щелочные или органические соли присоединения кислотных остатков; и тому подобное, или комбинацию, содержащую одну или более из вышеуказанных солей. Фармацевтически приемлемые соли включают соли и четвертичные аммониевые соли действующего вещества. Так, например, кислые соли включают соли, полученные из неорганических кислот, таких как соляная, бромистоводородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и тому подобное; другие приемлемые неорганические соли включают соли металлов, такие как соль натрия, соль калия, соль цезия и тому подобное; и соли щелочноземельных металлов, такие как соль кальция, соль магния и тому подобное, или их комбинация, содержащая одну или более из вышеуказанных солей. Фармацевтически приемлемые органические соли включает соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, эмбоновая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изэтионовая, НООС-(CH2)n - COOH, где n равно 0-4, и тому подобное; соли органических аминов, такие как соль триэтиламина, соль пиридина, соль пиколина, соль этаноламина, соль триэтаноламина, соль дициклогексиламина, N,N' дибензилэтилендиамина, и тому подобное; и соли аминокислот, такие как аргинат, аспарагинат, глутамат, и тому подобное; или комбинация, содержащая одну или более из вышеуказанных солей.
[0080] В одном варианте реализации изобретения соль присоединения кислоты сенекривирока представляет собой мезилат сенекривирока, например, (S)-8-[4-(2-бутоксиэтокси)фенил]-1-изобутил-N-(4-{[(1-пропил-1H-имидазол-5-ил) метил]сульфинил}фенил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-бензоазоцин-5-карбоксамид монометансульфонат. В одном варианте реализации изобретения мезилат сенекривирока представляет собой кристаллическое вещество, например, в виде светло-зеленовато-желтого кристаллического порошка. В одном варианте реализации изобретения мезилат сенекривирока свободно растворим в ледяной уксусной кислоте, метаноле, бензиловом спирте, диметилсульфоксиде и N,N-диметилформамиде; растворим в пиридине и уксусном ангидриде; и умеренно растворим в 99,5% этаноле; слабо растворим в ацетонитриле, 1-октаноле и тетрагидрофуране; и практически не растворим в этилацетате и диэтиловом эфире. В одном варианте реализации изобретения мезилат сенекривирока свободно растворим в водном растворе с рН от 1 до 2; умеренно растворим при рН 3 и практически нерастворим при рН от 4 до 13 и в воде.
[0081] Термин ʺсольватʺ означает комплекс, образованный сольватацией (комбинация молекул растворителя с молекулами или ионами действующего вещества в соответствии с настоящим изобретением), или комплекс, который состоит из растворенного иона или молекулы (действующее вещество в соответствии с настоящим изобретением) с одной или более молекул растворителя. В настоящем изобретении предпочтительный сольват представляет собой гидрат.
[0082] Термин ʺфармацевтическая композицияʺ относится к лекарственной форме соединения в соответствии с настоящим изобретением и среде, общепринятой в данной области техники для доставки биологически активного соединения к млекопитающим, например, людям. Такая среда включает все фармацевтически приемлемые для этого носители, разбавители или носители.
[0083] Термин «лечение» включает улучшение, смягчение и сокращение случаев заболевания или состояния, или симптомов заболевания, или состояния.
[0084] Термин «введение» включает любой способ введения, такой как пероральное, подкожное, сублингвальное, трансмукозальное, парентеральное, внутривенное, внутриартериальное, трансбуккальное, сублингвальное, местное, вагинальное, ректальное, введение в глаз, введение в ухо, интраназальное, ингаляцию и трансдермальное. Термин «введение» может также включать назначение или приготовление согласно рецепту лекарственного средства, содержащего конкретное соединение. Термин «введение» также может включать предоставление указаний для выполнения приема, который предусматривает использование конкретного соединения или лекарственной формы, содержащей соединение.
[0085] Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество активного вещества, которое при введении субъекту для лечения заболевания, расстройства или другого нежелательного состояния здоровья, является достаточным, чтобы иметь положительный эффект в отношении данного заболевания, расстройства или состояния. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от химической идентичности и лекарственной формы активного вещества, заболевания или состояния и его тяжести, а также от возраста, массы и других соответствующих характеристик пациента, подлежащего лечению. Определение терапевтически эффективного количества данного активного вещества находится в пределах возможностей специалиста в данной области техники и, как правило, требует не более чем обычного экспериментирования.
Фиброз
[0086] Фиброз представляет собой разрастание волокнистой соединительной ткани в органе или ткани в репаративном или реактивном процессе. Данное состояние может быть реактивным, доброкачественным или патологическим. Разрастание соединительной ткани в органе и/или ткани может уничтожить архитектуру и функции основного органа или ткани. Фиброз представляет собой патологическое состояние разрастания волокнистой ткани, а также процесс образования соединительнотканных наложений при репарации.
[0087] Фиброз подобен процессу рубцевания в том, что оба вовлекают стимулированные клетки, образующие соединительную ткань, в том числе коллаген и гликозаминогликаны. Цитокины, которые опосредуют многие иммунные и воспалительные реакции, играют роль в развитии фиброза. Повреждение гепатоцитов в результате таких факторов, как накопление жира, вирусных агентов, чрезмерного употребления алкоголя, гепатотоксинов, неизбежно вызывает воспалительный иммунный ответ. Увеличение выработки цитокинов и хемокинов в печени приводит к рекрутингу провоспалительных моноцитов (клетки-предшественники), которые впоследствии созревают в провоспалительные макрофаги. Провоспалительным макрофагам свойственна профиброгенность, которая в конечном итоге приводит к активации звездчатых клеток печени (ЗКП), в первую очередь ответственных за отложение внеклеточного матрикса (ВКМ).
[0088] Инфильтрация различных популяций иммуноцитов, приводящая к воспалению, является главным патогенным признаком после острого и хронического поражения печени. Хроническое воспаление печени приводит к непрерывному повреждению гепатоцитов, которые могут привести к фиброзу, циррозу печени, ТСЗП и ГЦК. Взаимодействия между внутрипеченочными иммуноцитами приводят к повышенной активации и миграции клеток Купфера и ЗКП и критическим явлениям для развития фиброза печени. Кроме того, появляется все больше доказательств роли CCR2 и CCR5 в патогенезе фиброза печени [1-7,9, 31]. Эти члены семейства С-С хемокина экспрессируется профиброгенными клетками, включая провоспалительные моноциты и макрофаги, клетки Купфера и ЗКП [1-4]. Передача сигналов CCR2 играет важную роль в патогенезе фиброза почек путем регуляции фибробластов костного мозга [8]. CCR2- и CCR5-положительные моноциты, а также CCR5-положительные Т-лимфоциты притягиваются локально высвобождаемыми МХБ-1 и цитокином А5, и также могут способствовать хроническому интерстициальному воспалению в почках [10, 11]. У грызунов СВК имеет высокую степень распределения в печени, мезентериальном лимфатическом узле и кишечнике также описываемые как ось кишка-печень. Нарушение кишечной микрофлоры и его результирующее воздействие на ось кишка-печень играют важную роль в метаболических расстройствах, таких как ожирение, неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) и неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) [16, 23].
[0089] Таблица 1 перечень хемокинов, экспрессируемых клетками печени [30].
Тип клетки Хемокин
Гепатоциты МХБ-1 (CCL2) [38], МБВ-1α (CCL3) [74], цитокин А5 (CCL5) [16,74], МБВ-3β (CCL19) [75], SLC (CCL21) [75], Mig (CXCL9) [64], IP-10 (CXCL10) [64], CXCL16 [76], LEC (CCL16) [77], ИЛ-8 (CXCL8) [78] и эотаксин (CCL11) [41]
Звездчатые клетки МХБ-1 (CCL2) [52,60], IP-1α (CCL3) [60], МБВ-1β (CCL4) [60], фракталкин[59], KC (CXCL1) [60], МБВ-2 (CXCL2) [60], IP-10 (CXCL10) [60] и SLC (CCL21) [70]
Клетки Купфера МХБ1 (CCL2) [52,38,60,79], МБВ-1α (CCL3) [80] и МБВ-3α (CCL20) [56]
Эндотелиальные клетки печени МХБ-1 (CCL2) [52],ИЛ-8 (CXCL8) [81,76], CXCL16 [75], Mig (CXCL9) [69], IP-10 (CXCL10) [69], CXCL16 [65], фракталкин [82], SLC (CCL21) [83], эотоксин (CCL11) [41] и TECK (CCL25) [73]
* Краткое описание выбранных экспериментальных данных от людей и мышей/крыс относительно экспрессии хемокинов различными популяциями резидентных клеток печени после активации или после повреждения печени.
IP: протеин, индуцированный интерфероном-γ; KC: клетка Купфера; LEC: хемокин, экспрессируемый печенью; МХБ: моноцитарный хемоатрактантный белок; МБВ: макрофагальный воспалительный белок; SLC: хемокин вторичной лимфоидной ткани; TECK: хемокин, экспрессируемый в тимусе.
[0090] Активация звездчатых клеток печени (ЗКП) играет важную роль в патогенезе фиброза печени. После поражения печени, звездчатые клетки печени (ЗКП) активируются и экспрессируют комбинацию матричных металлопротеиназ (ММП) и их специфических тканевых ингибиторов (ТИМП) [32]. На ранних стадиях поражения печени ЗКП временно экспрессирует ММП-3, ММП-13 и активатор уроплазминогена (АУП) и проявляет фенотип, разрушающий матрикс. Деградация внеклеточного матрикса, по всей видимости, независима от CCR2 или CCR5.
[0091] Активированные ЗКП могут усиливать воспалительный ответ путем индукции инфильтрации моно- и полиморфноядерных лейкоцитов. Инфильтрирующие моноциты и макрофаги участвуют в развитии фиброза посредством нескольких механизмов, включая повышенную секрецию цитокинов и выработку окислительных продуктов, связанных со стрессом. Активированные ЗКП могут экспрессировать CCR2 и CCR5 и продуцировать хемокины, которые включают МХБ-1, МБВ-1α, МБВ-1β и цитокин А5. CCR2 способствует хемотаксису ЗКП и развитию фиброза печени. При заболеваниях печени человека повышенный МХБ-1 связан с рекрутингом макрофагов и тяжестью фиброза печени и первичным билиарным циррозом печени. CCR5 стимулирует миграцию и пролиферацию ЗКП.
[0092] На более поздних стадиях поражения печени и активации ЗКП, изменения паттерна, клетки экспрессируют комбинации ММП, которые обладают способностью разрушать нормальный матрикс печени, препятствуя деградации фибриллярных коллагенов, которые накапливаются при фиброзе печени. Данный паттерн характеризуется комбинацией экспрессии про-ММП-2 и ММП мембранного типа 1 (MT1), которые приводят к перицеллюлярному образованию активного ММП-2 и локальной деградации нормального матрикса печени. Кроме того, отмечено увеличение экспрессии ТИМП-1, приводящее к более глобальному ингибированию деградации фибриллярных коллагенов печени интерстициальной коллагеназой (ММП-1/MMП-13). При поражении печени, связанного с хронической алкогольной болезнью печени, увеличивается продуцирование ФНО-α, ИЛ-1, ИЛ-6, а также хемокинов ИЛ-8/CXCL8. Тажке ФНО-α является важным медиатором неалкогольной жировой болезни печени. Эти пути играют существенную роль в прогрессировании фиброза печени. Ингибирование активации ЗКП и ускорение клиренса активированных ЗКП могут быть эффективными стратегиями для регрессии фиброза печени.
[0093] Семейства хемокинов играют важную регуляторную роль в воспалении. Члены данного семейства включают, без ограничений, рецепторы и лиганды СХС включающие, без ограничений, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7, CXCR8, CXCR9, CXCR10, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16 и CXCL17; СС хемокины и рецепторы, включающие, без ограничений, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, CCL10, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR и CCR10; C хемокины, включающие, без ограничений, XCL1, XCL2 и XCR1; и CX3C хемокины, включающие, без ограничений, CS3CL1 и CX3CR1. Количество этих молекул может быть увеличено в фиброзных органах или тканях. В других вариантах реализации изобретения количество этих молекул может быть снижено в фиброзных органах или тканях. В других вариантах реализации изобретения количество молекул в сигнальных путях этих хемокинов может быть увеличено в фиброзных органах или тканях. В дополнительном варианте реализации изобретения количество молекул в сигнальных путях этих хемокинов может быть уменьшено в фиброзных органах или тканях.
[0094] Фиброз может возникнуть во многих тканях в организме, включая, без ограничений, легкие, печень, костный мозг, суставы, кожу, пищеварительный тракт, лимфатические узлы, кровеносные сосуды или сердце, и, как правило, является результатом воспаления или повреждения. Неограничивающие примеры включают легочный фиброз, идиопатический легочный фиброз, муковисцидоз, цирроз, эндомиокардиальный фиброз, инфаркт миокарда, атриальный фиброз, медиастинальный фиброз, миелофиброз, забрюшинный фиброз, массивный прогрессивный фиброз, осложнения от пневмокониоза, нефрогенный системный фиброз, болезнь Крона, келоидный рубец, склеродермию/системный склероз, рубцово-измененную ткань, болезнь Пейрони, контрактуру Дюпюитрена, фиброз, связанный с атеросклерозом, фиброз лимфатических узлов, а также адгезивный капсулит.
Варианты реализации терапевтических эффектов
[0095] настоящее изобретение предлагает способы лечения фиброза. В исследованиях на животных наблюдали антифиброзные эффекты СВК, если лечение СВК начинали при возникновении или вскоре после поражения печени (ТАА) (ТАА; рацион с высоким содержанием жиров (РВСЖ)), но ни разу не был установлен при циррозе (ТАА). Это говорит о том, что антифиброзные эффекты СВК могут быть более выраженными в выборках с установленным фиброзом печени и при значительном риске прогрессирования заболевания. К ним относятся: неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), связанный с сахарным диабетом 2 типа (СД2) и метаболический синдром (МС); смешанная инфекция ВИЧ и ВГС, или инфекция ВГС.
НАСГ
[0096] Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для лечения фиброза печени, являющегося следствием неалкогольного стеатогепатита (НАСГ), распространенного заболевания печени, которое затрагивает от 2 до 5 процентов американцев. Хотя повреждение печени вследствие НАСГ имеет некоторые из характеристик алкогольной болезни печени, это происходит у людей, которые мало или вообще не пьют алкоголь. Главной особенностью НАСГ является жир в печени, а также воспаление и повреждение гепатоцитов (баллонирование). НАСГ может быть серьезной и может привести к циррозу печени, при котором печень жестко повреждается и травмируется и уже не в состоянии работать должным образом. Неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) является общим, часто «молчащим», заболеванием печени, ассоциированным с заболеваниями, связанными с ожирением, такими как сахарный диабет 2-го типа и метаболический синдром, возникающие у людей, которые мало или вообще не пьют алкоголь, и характеризуется накоплением жиров в печени без других видимых причин. [32-43] На начальной стадии НАЖБП представляет собой простой стеатоз, который характеризуется накоплением жиров в печени. Стеатоз печени без воспаления является, как правило, доброкачественным и медленно прогрессирующим или не прогрессирующим. НАСГ представляет собой более запущенный и тяжелый подтип НАЖБП, в котором стеатоз осложняется повреждением клеток печени и воспалением, с или без фиброза.
[0097] Растущая распространенность расстройств, связанных с ожирением, способствует быстрому росту распространенности НАСГ. У примерно от 10% до 20% пациентов НАЖБП будет прогрессировать до НАСГ [44].
[0098] НЖБП является наиболее частой причиной хронического заболевания печени. [45] Большинство исследований США сообщают об уровне распространенности НЖБП от 10% до 35%; однако, эти показатели различаются в зависимости от исследуемой выборки и метода диагностики. [46] Так как примерно одна треть населения США страдает от ожирения, распространенность НЖБП среди населения США, скорее всего, составляет около 30%. [46] Одно исследование показало, что НЖБП поражает примерно от 27% до 34% американцев, или примерно от 86 до 108 миллионов пациентов. [44] НЖБП не является уникальной для США. Отчеты с остального мира, в том числе Бразилии, Китая, Индии, Израиля, Италии, Японии, Корее, Шри-Ланке и Тайваня, предполагают, что коэффициент распространенности болезни колеблется от 6% до 35% (в среднем 20%). [46] Исследование, проведенное гастроэнтерологическим обществом Австралии/австралийская ассоциация по изучению печени показало, что НЖБП поражает приблизительно 5,5 миллионов австралийцев, в том числе 40% всех взрослых людей в возрасте ≥50 лет. [47] Исследование, проведенное в Австралии, больных тяжелым ожирением установило, что 25% этих пациентов страдали НАСГ. [48]
[0099] Необходима биопсия печени, чтобы поставить окончательный диагноз НАСГ. По данным исследования, проведенного в США, распространенность гистологически подтвержденной НАСГ составила 12,2%. [49] По текущим подсчетам распространенность НАСГ оценивается примерно в 9-15 миллионов человек в США (от 3% до 5% населения США), с аналогичной распространенностью болезни в ЕС и Китае. [46, 50] Распространенность НАСГ среди населения с ожирением колеблется от 10% до 56% (в среднем 33%). [46] В серии патологоанатомических вскрытий тощих людей из Канады распространенность стеатогепатита и фиброза составила 3% и 7% соответственно. [46] Распространенность НАСГ также растет в развивающихся регионах, к которым относятся люди в этих регионах, переходящие к более сидячему образу жизни и западной диете, [51] состоящей из обработанных пищевых продуктов с высоким содержанием жиров и сахара/фруктозы [52].
[00100] НАСГ представляет собой серьезное хроническое заболевание печени, определяемое наличием стеатоза печени и воспаления с поражением гепатоцитов, с или без фиброза. [34] Хроническое воспаление печени является предшественником фиброза, который может прогрессировать в цирроз печени, терминальную стадию заболевания печени и гепатоцеллюлярную карциному. В дополнение к инсулинорезистентности, измененные накопление липидов и метаболизм, накопление холестерина в печени, окислительный стресс, приводящий к увеличению поражения печени и бактериальной транслокации [34,53-56], вторичной по отношению к нарушению микрофлоры кишечника (связано с высокофруктозной диетой), все были вовлечены в качестве важных сопутствующих факторов, способствующих прогрессированию НАСГ. [57-60] В связи с растущей эпидемией ожирения и диабета, НАСГ, согласно прогнозам, становится самой распространенной причиной поздних стадий заболевания печени и наиболее частым показанием для трансплантации печени. [46, 61-63] Бремя НАСГ, в сочетании с отсутствием каких-либо одобренных терапевтических вмешательств, представляет собой неудовлетворенную медицинскую потребность.
[00101] В других вариантах реализации изобретения фиброз печени связан с возникновением цирроза. В некоторых вариантах реализации изобретения цирроз печени связан с алкогольным поражением. В других вариантах реализации изобретения цирроз печени связан с гепатитной инфекцией, включая, без ограничений, гепатит В и гепатит С, первичный билиарный цирроз (ПБЦ), первичный склерозирующий холангит (ПСХ) или жировую болезнь печени. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способам лечения субъектов с риском развития фиброза или цирроза печени.
[00102] В другом варианте реализации изобретения фиброз включает нецирротический фиброз печени. В другом дополнительном варианте реализации изобретения субъект инфицирован вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). В еще одном дополнительном варианте реализации изобретения субъект инфицирован вирусом гепатита, включая, без ограничений, ВГС (вирус гепатита С). В еще одном варианте реализации изобретения субъект страдает сахарным диабетом. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект страдает диабетом 2-ого типа. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект страдает диабетом 1-ого типа. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект страдает метаболическим синдромом (МС). В дополнительных вариантах реализации изобретения субъект страдает одним или более из этих заболеваний или нарушений. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект подвержен риску развития одного или более из этих заболеваний. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект имеет инсулинорезистентность. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект имеет повышенные уровни глюкозы в крови, высокое кровяное давление, повышенный уровень холестерина, повышенный уровень триглицеридов или страдает ожирением. В дополнительном варианте реализации изобретения субъект страдает синдромом поликистоза яичников.
[00103] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват совместно вводили с одним или более дополнительными активными агентами. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов представляют собой один или более антиретровирусных агентов, выбранных из ингибиторов проникновения, нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, нуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы, ненуклеозидных ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторов протеазы, ингибиторов переноса цепи интегразой, ингибиторов созревания и их комбинации. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных антиретровирусных агентов, выбранных из группы, состоящей из ламивудина, эфавиренца, ралтегравира, вивекона, бевиримата, альфа-интерферона, зидовудина, абакавира, лопинавира, ритонавира, тенофовира, дизопроксила тенофовира, пролекарств тенофовира, эмтрицитабина, элвитегравира, кобицистата, дарунавира, атазанавира, рилпивирина, долутегравира и их комбинации. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов представляют собой один или более агентов, подавляющих иммунную систему. В дополнительном варианте реализации изобретения один или более дополнительных активных агентов выбраны из группы, состоящей из циклоспорина, такролимуса, преднизолона, гидрокортизона, сиролимуса, эверолимуса, азатиоприна, микофенольной кислоты, метотрексата, базиликсимаба, даклизумаба, ритуксимаба, антитимоцитарного глобулина, антилимфоцитарного глобулина и их комбинации.
[00104] Некоторые варианты реализации изобретения включают способы мониторинга и/или прогнозирования эффективности лечения по настоящему лечению, как описано в данном документе. Такие способы включают определение уровня одной или более биологических молекул таких, как, например, биомаркеры, у субъекта (или в биологическом образце, взятом у субъекта), подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем увеличение или уменьшение уровня одной или более биологических молекул по сравнению с заранее определенным стандартным уровнем представляет собой прогноз эффективности лечения данной терапии.
[00105] В одном варианте реализации изобретение относится к способу лечения, включающему определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния,, и определения схемы лечения на основании увеличения или снижения уровня одной или более биологических молекул, где биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из липополисахарида (ЛПС), ЛПС-связывающего белка (ЛСБ), 16S рДНК, sCD14, кишечной формы белка, связывающегося с жирными кислотами (I-FABP), зонулина-1, коллагена 1а1 и 3а1, TGF-β, фибронектина-1, вчСРБ, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-33, фибриногена, МХБ-1, МБВ-1α и -1β, цитокина А5, sCD163, TGF-β, ФНО-α, биомаркера апоптоза гепатоцитов, такого как CK-18 (расщепленный каспазой и общий) или биомаркеров бактериальной транслокации, таких как ЛПС, ЛСБ, sCD14, и I-FABP, или их комбинации.
[00106] В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу лечения, включающему определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем увеличение или уменьшение уровня одной или более биологических молекул по сравнению с заранее определенным стандартным уровнем представляет собой прогноз эффективности лечения фиброза или фиброзного заболевания, или состояния.
[00107] В дополнительном варианте реализации изобретения одна или более биологических молекул измеряются в биологическом образце субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния. Еще в одном дополнительном варианте реализации изобретения биологический образец выбирают из крови, кожи, волосяных фолликул, слюны, слизистой ротовой полости, слизистой влагалища, пота, слез, эпителиальной ткани, мочи, семени, спермы, семенной жидкости, секрета простаты, предэякулята (Куперова жидкость), экскрета, биопсии, асцита, спинномозговой жидкости, лимфы, мозга, и образца выделенной ткани или образца биопсии.
Способы применения и дозы
[00108] Дозировка конкретного субъекта может быть определена в соответствии с возрастом, массой, общим состоянием здоровья, полом, рационом, временем введения, путем введения, скоростью экскреции и степени конкретного болезненного состояния субъекта, подлежащего лечению, с учетом этих и других факторов.
[00109] Настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват представлены в виде пероральной композиции.
[00110] Настоящее изобретение относится к способу лечения, в котором сенекривирок или его соль, или сольват вводят, например, один раз в сутки или два раза в сутки. Данная лекарственная форма может вводиться в течение продолжительности времени, достаточного для лечения фиброзного заболевания или состояния.
[00111] В случае перорального введения суточная доза находится в диапазоне около от 5 до 1000 мг, предпочтительно около от 10 до 600 мг, а более предпочтительно около от 10 до 300 мг, наиболее предпочтительно около от 15 до 200 мг активного вещества (то есть соединения в соответствии с настоящим изобретением) в расчете на взрослого человека массой тела 50 кг, и лекарство может вводиться, например, один раз или от 2 до 3 раздельных доз в сутки.
[00112] Сенекривирок или его соль, или сольват могут быть приготовлены в виде любой лекарственной формы, подходящей для перорального или инъекционного введения. Когда соединение вводят перорально, оно может быть приготовлено в твердых лекарственных формах для перорального введения, например, таблетках, капсулах, пилюлях, гранулах и так далее. Оно также может быть приготовлено в виде жидких лекарственных форм для перорального введения, таких как растворы для перорального применения, пероральные суспензии, сиропы и т.п. Термин «таблетки», используемый в данном документе, относится к тем твердым препаратам, которые получают путем гомогенного смешивания и прессования соединений и подходящих вспомогательных веществ в круглые или неправильной формы пастилки, в основном, обычные таблетки для перорального введения, в том числе и таблетки для медленного растворения в щечном кармане, подъязычные таблетки, буккальные таблетки, жевательные таблетки, диспергируемые таблетки, растворимые таблетки, шипучие таблетки, таблетки с пролонгированным действием, таблетки с контролируемым высвобождением, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, и тому подобное. Термин «капсулы», используемый в данном документе, относится к тем твердым препаратам, приготовленных путем заполнения соединениями или соединениями вместе с подходящими вспомогательными веществами полых капсул или наполняя веществами мягкие капсулы. В соответствии с растворимостью и особенностью высвобождения, капсулы можно разделить на твердые капсулы (регулярные капсулы), мягкие капсулы (капсулы в мягкой желатиновой оболочке), капсулы с пролонгированным действием, капсулы с контролируемым высвобождением, капсулы, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, и тому подобное. Термин «пилюля», используемый в данном документе, относится к сферическим или практически сферическим твердым препаратам, которые получают путем смешивания соединений и подходящих вспомогательных веществ с помощью подходящих способов, включая таблетки для капель, драже, пилюлю и тому подобное. Термин «гранулы», используемый в данном документе, относится к сухим гранулированным препаратам, которые получают путем смешивания соединений и подходящих вспомогательных веществ и имеют определенный размер частиц. Гранулы могут быть разделены на растворимые гранулы (обычно называемые как гранулы), гранулы для приготовления суспензии, шипучие гранулы, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, гранулы с пролонгированным действием, гранулы с контролируемым высвобождением и тому подобное. Термин «растворы для перорального применения», используемый в данном документе, относится к осажденному жидкому препарату, который получают путем растворения соединений в подходящих растворителях для перорального введения. Термин «растворы для перорального применения», используемый в данном документе, относится к суспензиям для перорального введения, которые получают диспергированием нерастворимых соединений в жидких растворителях, включая также сухую суспензию или концентрированную суспензию. Термин «сиропы», используемый в данном документе, относится к концентрированному водному раствору сахарозы, содержащему соединения. Инъекционная лекарственная форма может быть получена с помощью известных в данной области техники способов получения лекарственных препаратов, и могут быть выбраны водные растворители или неводные растворители. Наиболее широко используемый водный растворитель представляет собой воду для инъекций, а также 0,9% раствор хлорида натрия или другие подходящие водные растворы. Обычно используемый неводный растворитель представляет собой растительное масло, преимущественно соевое масло для инъекций, и другие водные растворы спирта, пропиленгликоля, полиэтиленгликоля и т.д.
[00113] В одном варианте реализации изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая сенекривирок или его соль и фумаровую кислоту. В некоторых вариантах реализации изобретения сенекривирок или его соль представляет собой мезилат сенекривирока.
[00114] В других вариантах реализации изобретения массовое соотношение сенекривирока или его соли к фумаровой кислоте составляет от около 7:10 до около 10: 7, в частности, от около 8:10 до около 10: 8, от около 9:10 до около 10: 9 или от около 95: 100 до около 100: 95. В других дополнительных вариантах реализации изобретения фумаровая кислота присутствует в количестве от около 15% до около 40%, в частности, от около 20% до около 30%, или около 25% по массе композиции. В других дополнительных вариантах реализации изобретения сенекривирок или его соль присутствует в количестве от около 15% до около 40%, в частности, от около 20% до около 30%, или около 25% по массе композиции.
[00115] В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты дополнительно содержит один или более носителей. В более конкретных вариантах реализации изобретения один или более носителей выбраны из микрокристаллической целлюлозы, двухосновного фосфата кальция, целлюлозы, лактозы, сахарозы, маннита, сорбита, крахмала и карбоната кальция. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения один или более носителей представляет собой микрокристаллическую целлюлозу. В конкретных вариантах реализации изобретения массовое отношение одного или более носителей к сенекривироку или его соли составляет от около 25:10 до около 10: 8, в частности, от около 20:10 до около 10:10 или около 15:10. В других конкретных вариантах реализации изобретения один или более носителей присутствуют в количестве от около 25% до около 55%, в частности, от около 30% до около 50%, или около 40% по массе композиции. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция дополнительно содержит один или более разрыхлителей. В более конкретных вариантах реализации один или более разрыхлителей выбирают из структурированного поливинилпирролидона, трехмерной натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы и натрия крахмалгликолята. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения один или более разрыхлителей представляют собой трехмерную натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы. В конкретных вариантах осуществления массовое отношение одного или более разрыхлителей к сенекривироку или его соли составляет от около 10:10 до около 30:100, например, около 25: 100. В других конкретных вариантах реализации изобретения один или более разрыхлителей присутствуют в количестве от около 2% до около 10%, в частности, от около 4% до около 8%, или около 6% по массе композиции. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция дополнительно содержит одно или более скользящие вещества. В более конкретных вариантах реализации изобретения одно или более скользящих веществ выбирают из талька, диоксида кремния, стеарина, стеарата магния и стеариновой кислоты. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения одно или более скользящих веществ представляют собой стеарат магния. В конкретных вариантах реализации изобретения одно или более скользящих веществ присутствуют в количестве от около 0,25% до около 5%, например, от около 0,75% до около 3% или от около 1,25% по массе композиции.
[00116] В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты является в сущности аналогичной такой в таблице 2. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты является в сущности аналогичной такой в таблицах 3 и 4. В других дополнительных вариантах реализации изобретения любую из композиций сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты получают способом, включающим сухое гранулирование. В других дополнительных вариантах реализации изобретения любая из композиций сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты имеет содержание воды не более чем около 4% по массе, например, не более 2% по массе, после шестинедельной экспозиции при около 40°С и при около 75% относительной влажности при упаковке вместе с влагопоглотителем. В других дополнительных вариантах реализации изобретения любая из вышеупомянутых композиций имеет общий уровень загрязненности не более чем на около 2,5%, например, не более чем на 1,5%, после 12-недельной экспозиции при 40°С и при относительной влажности 75% при упаковке вместе с осушителем. В других дополнительных вариантах реализации изобретения сенекривирок или его соль любой из вышеуказанных композиций имеет среднюю абсолютную биодоступность после перорального введения, которая по существу аналогична биодоступности сенекривирока или его соли в растворе после перорального введения. Еще в дополнительных вариантах реализации изобретения сенекривирок или его соль имеет абсолютную биодоступность от около 10% до около 50%, например, около 27% у собак породы «бигль».
[00117] В другом варианте реализации предложен фармацевтический композиция, которая содержит композицию сенекривирока или его соли и фумаровой кислоты. В дополнительных вариантах реализации изобретения композиция в препарате может быть в форме гранул. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция в препарате расположена в капсульной оболочке. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция препарата расположена в саше. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция препарата представляет собой таблетку или часть таблетки. Еще в других вариантах реализации изобретения композиция препарата представляет собой один или более слоев многослойной таблетки. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция содержит один или более дополнительных фармацевтически неактивных ингредиентов. В других дополнительных вариантах реализации изобретения композиция является в сущности аналогичной такой в таблице 9. В других дополнительных вариантах реализации изобретения предложены таблетки, имеющие состав в сущности аналогичный такому из таблицы 9. В других дополнительных вариантах реализации изобретения любой из вышеуказанных вариантов покрыт носителями. В другом варианте реализации изобретения предложены способы получения любого из вышеупомянутых вариантов. В дополнительных вариантах реализации изобретения способ включает смешивание сенекривирока или его соли и фумаровой кислотой с образованием примеси и сухой гранулированной примеси. В других дополнительных вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает смешивание одного или более носителей с сенекривироком или его солью и фумаровой кислоты с образованием примеси. В других дополнительных вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает смешивание одного или более разрыхлителей с сенекривироком или его солью и фумаровой кислотой с образованием примеси. В других дополнительных вариантах реализации способ дополнительно включает смешивание одного или более скользящих веществ с сенекривироком или его солью и фумаровой кислотой с образованием примеси. В других дополнительных вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает прессование сухой гранулированной примеси в таблетку. В других дополнительных вариантах реализации изобретения способ включает заполнение капсул сухой гранулированной примесью.
[00118] Кроме того, соединение в соответствии с настоящим изобретением, могут быть включены или использованы в сочетании с кровью для переливания или производными крови. В одном варианте реализации изобретения соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть включено или использовано в сочетании с одним или более агентами, которые устраняют латентные резервуары ВИЧ, и добавляют в кровь для переливания или производные крови. Как правило, кровь для переливания или производные крови получают путем смешивания крови, полученной от множества лиц и, в некоторых случаях, неинфицированные клетки заражаются клетками, инфицированными вирусом ВИЧ. В таком случае, неинфицированные клетки, вероятно, будут инфицированы вирусом ВИЧ. Когда соединение в соответствии с настоящим изобретением добавляют к крови для переливания крови или производных крови вместе с одним или более агентами, которые устраняют латентные резервуары ВИЧ, инфицирование и распространение вируса можно предотвратить или контролировать. Особенно, когда производные крови консервируются, инфицирование и распространение вируса эффективно предотвращается или контролируется путем добавления соединения в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, когда кровь для переливания или производные крови, зараженные вирусом ВИЧ, вводят человеку, инфицирование и распространение вируса в организме человека может быть предотвращено путем добавления соединения в соответствии с настоящим изобретением к производным крови или в комбинации с одним или более агентов, которые устраняют латентные резервуары ВИЧ. Например, как правило, для профилактики ВИЧ-инфекционного заболевания при использовании крови или производных крови при пероральном введении дозировка находится в диапазоне приблизительно от 0,02 до 50 мг/кг, предпочтительно около от 0,05 до 30 мг/кг, и более предпочтительно около от 0,1 до 10 мг/кг на вес тела взрослого человека около 60 кг в качестве антагониста CCR5/CCR2, и лекарство может быть введено однократно или от 2 до 3 доз в сутки. По логике вещей, несмотря на то, что диапазон доз может регулироваться на основании унифицированной дозы, необходимо разделить суточную дозу, как описано выше, а дозировка конкретного субъекта может быть определена в соответствии с возрастом, массой, общим состоянием здоровья, полом, рационом, временем введения, путем введения, скоростью экскреции и степени конкретного болезненного состояния субъекта, подлежащего лечению, с учетом этих и других факторов. В этом случае путь введения также выбран соответствующим образом, и лекарство для профилактики ВИЧ-инфекционного заболевания в соответствии с настоящим изобретением может быть добавлено непосредственно в кровь для переливания или производные крови перед переливанием или используя производные крови. В таком случае, желательно, чтобы лекарство в соответствии с настоящим изобретением сразу же смешивали с кровью или производными крови или за 24 часа до, предпочтительно непосредственно за 12 часов до, более предпочтительно непосредственно за 6 ч до переливания или используя производные крови.
[00119] Независимо от крови для переливания или производных крови, когда композиции в соответствии с настоящим изобретением вводят вместе с кровью для переливания крови или производными крови и/или другими активными агентами, то лекарство вводят предпочтительно в то же время, за 1 ч до переливания или используя производные крови. Более предпочтительно, например, лекарство вводить от 1 до 3 раз в сутки, и введение продолжают 4 недели.
Комбинированная терапия
[00120] Соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть использовано отдельно или в комбинации с одним или более дополнительными активными агентами. Один или более дополнительных активных агентов могут представлять собой любое соединение, молекула или вещество, которое может оказывать терапевтический эффект на субъект, нуждающийся в этом. Один или более дополнительных активных агентов могут быть «совместно введены», т.е. введены вместе в совмещенном виде субъекту, либо как отдельные фармацевтические композиции, или как смесь одной фармацевтической композиции. «Совместно вводимые» один или более дополнительных активных агентов также могут быть введены одновременно с настоящим соединением или введены раздельно с настоящим соединением, в том числе и в разное время и с разной частотой. Один или более дополнительных активных агентов могут быть введены любым известным способом, например, перорально, внутривенно, внутримышечно, интраназально, подкожно, вагинально, ректально, и тому подобное; и терапевтический агент также можно вводить любым стандартным способом. Во многих вариантах реализации изобретения по меньшей мере один и, необязательно, оба из одного или более дополнительных активных агентов могут быть введены перорально.
[00121] Один или более данных дополнительных активных агентов включают, без ограничений, один или более противофиброзных агентов, антиретровирусных агентов, агентов, подавляющих иммунную систему, и CCR2 и/или CCR5-ингибиторов или терапию. Когда два или более лекарственных средств, используются в комбинации, доза каждого лекарства обычно идентична дозе лекарства при использовании независимо друг от друга, но когда лекарство вмешивается в метаболизм других лекарственных средств, дозу каждого лекарства должным образом корректирует. Каждое лекарство можно вводить одновременно или раздельно во временном интервале, например, менее 12 часов, 24 часов, 36 часов. Лекарственная форма, описанная в данном документе, такая как капсула, может быть введена через соответствующие интервалы. Например, один раз в сутки, два раза в сутки, три раза в сутки и тому подобное. В частности, лекарственная форма вводится, например, один или два раза в сутки. Еще более конкретно, лекарственная форма вводится один раз в сутки. В одном из вариантов реализации изобретения один или более антиретровирусных агентов включают, без ограничений, ингибиторы проникновения, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы протеазы, ингибиторы переноса цепи интегразой, ингибиторы созревания и их комбинации. В одном из вариантов реализации изобретения один или более дополнительных антиретровирусных агентов включают, без ограничений, ламивудин, эфавиренц, ралтегравир, вивекон, бевиримат, альфа-интерферон, зидовудин, абакавир, лопинавир, ритонавир, тенофовир, дизопроксил тенофовир, пролекарства тенофовира, эмтрицитабин, элвитегравир, кобицистат, дарунавир, атазанавир, рилпивирин, долутегравир, и их комбинации.
[00122] В одном варианте реализации изобретения один или более агентов, подавляющих иммунную систему, включают, без ограничений, циклоспорин, такролимус, преднизолон, гидрокортизон, сиролимус, эверолимус, азатиоприн, микофенольную кислоту, метотрексат, базиликсимаб, даклизумаб, ритуксимаб, антитимоцитарный глобулин, антилимфоцитарный глобулин и их комбинации.
[00123] Следующие примеры также более подробно описывают настоящее изобретение, но их не следует рассматривать как ограничивающие его объем.
ПРИМЕРЫ
Пример 1 - композиции мезилата сенекривирока
[00124] Партию композиций мезилата сенекривирока, которые были идентичны, за исключением идентичности по кислотному растворителю, получали путем влажного гранулирования в 1-литровом чашевом окомкователе Key с последующей сушкой подноса, просеиванием, смешиванием и прессованием в таблетки на прессе Carver. Состав препаратов приведен в таблице 2.
Таблица 2
Компоненты Форма вещества (мг/ед.)
Пример 1a
Лимонная кислота 		Пример 1б
Фумаровая кислота 		Пример 1в
Малеиновая кислота 		Пример 1г
Бисульфат натрия
Мезилат сенекривирока 28,45 28,45 28,45 28,45
Маннитол 7,88 7,88 7,88 7,88
Гидроксипропилцеллюлоза 2,62 2,62 2,62 2,62
Кроскармеллоза натрия 1,75 1,75 1,75 1,75
Кроскармеллоза натрия 1,75 1,75 1,75 1,75
Лимонная кислота 43,75 - - -
Фумаровая кислота - 43,75 - -
Малеиновая кислота - - 43,75 -
Бисульфат натрия - - - 43,75
Диоксид кремния 0,43 0,43 0,43 0,43
Магния стеарат 0,88 0,88 0,88 0,88
Общее количество 87,5 87,5 87,5 87,5
[00125] Таблетки назначали собакам породы «бигль». Раствор для перорального применения также вводят в качестве контроля. Абсолютная биодоступность композиций и раствора для перорального применения были определены и показаны на Фигуре 2. Данные демонстрируют, что мезилат сенекривирока с фумаровой кислотой имеет значительно более высокую биодоступность, чем любые другие протестированные растворители.
Пример 2: Композиция мезилата сенекривирока
[00126] Мезилат сенекривирока, фумаровую кислоту, микрокристаллическую целлюлозу, трехмерную натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы и стеарат магния перемешивали, подвергали сухому гранулированию, размалывали, смешивали с экстрагранулированной микрокристаллической целлюлозой, трехмерной натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы и стеаратом магния, и прессовали в таблетки, имеющие прочность на раздавливание более чем 10 кПа и прочность на истирание менее 0,8% масса/масса. Полученные таблетки имеют состав, который приведен в таблице 3.
Таблица 3.
Компоненты Форма вещества (мг/ед.)
Пример 2a Пример 2б Пример 2в Пример 2г Пример 2д
Мезилат сенекривирока 170,69a 170,69a 170,69a 170,69a 170,69a
Фумаровая кислота 160,00 160,00 160,00б 160,00 80,00
Микрокристаллическая целлюлоза 252,68 272,18 272,18 272,18 66,35
Кросповидон - - - 19,50 -
Кроскармеллоза натрия 58,50 39,00 39,00 19,50 20,70
Магния стеарат 8,13 8,13 8,13 8,13 2,55
Общее количество 650,0 650,0 650,0 650,0 340,0
aЭквивалентно 150 мг свободного основания cенекривирока.
bДобавлено в экстрагранулированную часть порошковой смеси.
[00127] В качестве иллюстрации, концентрации в процентах и массы на таблетку компонентов в примере 2б (т.е. пример 2б) приведены в таблице 4.
Таблица 4
Компонент Концентрация (% масса/масса) Масса (мг) на таблеку
Мезилат сенекривирока 26,26 170,69a
Фумаровая кислота 24,62 160,00
Микрокристаллическая целлюлоза 41,87 272,18
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы. 6,00 39,00
Магния стеарат 1,25 8,13
Общее количество 100,0 650,0
aэквивалентно 150 мг свободного основания сенекривирока.
Пример 3: Композиции мезилата сенекривирока
[00128] Мезилат сенекривирока, микрокристаллическую целлюлозу, трехмерную натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы и стеарат магния перемешивали, подвергали сухому гранулированию, размалывали, смешивали с экстрагранулированной микрокристаллической целлюлозой, трехмерной натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы, фумаровой кислотой, коллоидным диоксидом кремния и стеаратом магния и прессовали в таблетки, имеющие прочность на раздавливание более чем 10 кПа и прочность на истирание менее 0,8% масса/масса. Полученные таблетки имеют состав, показанный в таблице 5.
Таблица 5
Компонент Концентрация (% масса/масса) Масса (мг) на таблеку
Мезилат сенекривирока 26,26 28,45a
Фумаровая кислота 24,62 26,67
Микрокристаллическая целлюлоза 41,87 45,36
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы 6,00 39,00
Магния стеарат 1,25 1,35
Общее количество 100,0 108,3
aэквивалентно 25 мг свободного основания сенекривирока.
[00129] Следует отметить, что препарат по таблице 5 имеет такое же соотношение компонентов, как в таблице 3б, и отличается только общим количеством компонентов, которые используются для каждой таблетки. Таким образом, в таблице 4 показаны таблетки с 150 мг сенекривирока (в пересчете на свободное основание), в то время как в таблице CC-1 показаны таблетки с 25 мг сенекривирока (в пересчете на свободное основание) с тем же соотношением компонентов, как и 150 мг таблетки по примеру 2б, показанные в таблице 4.
Пример 4 - Ссылка
[00130] Препарат по таблице 6 на основе лимонной кислоты получают следующим образом. 4 Сенекривирок, гидроксипропилцеллюлозу, маннитол и трехмерную натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы смешивали, подвергали влажному гранулированию, сушили, размалывали и смешивали с микрокристаллической целлюлозой, трехмерной натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы, лимонной кислотой, коллоидным диоксидом кремния, тальком и стеаратом магния. Полученную смесь прессовали в таблетки, имеющие прочность на раздавливание более 10 кПа и прочность на истирание менее 0,8% масса/масса. Таблетки покрывали гидроксипропилметилцеллюлозой, полиэтиленгликолем 8000, диоксидом титана, желтым оксидом железа. Таблетки, покрытые оболочкой, полученные таким образом по существу были идентичны тем, которые описаны в публикации заявки на патент США №. 2008/031942 (смотри, например, таблицу 3).
Таблица 6
Компонент мг/таблетка % масса/масса
Мезилат сенекривирока 28,91 4,68
Маннитол 341,09 56,85
Микрокристаллическая целлюлоза 80,00 12,94
Коллоидный диоксид кремния 12,00 2,00
Безводная лимонная кислота 75,00 12,14
Гидроксипропилцеллюлоза 12,00 1,94
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы. 30,00 4,85
Тальк 12,00 1,94
Магния стеарат 9,00 1,46
Гидроксипропилметилцеллюлоза 11,71 1,89
Полиэтиленгликоль 8000 2,69 0,44
Диоксид титана 3,03 0,49
Желтый оксид железа 0,57 0,09
Пример 5 - Ссылка
[00131] Сенекривирок и гипромеллозу ацетат сукцинат растворяли в метаноле и подвергали сушке распылением в мелкодисперсный порошок, содержащий 25% сенекривирок по массе (в пересчете на массу свободного основания сенекривирока). Порошок смешивали с коллоидным диоксидом кремния, микрокристаллической целлюлозой, маннитолом, лаурилсульфатом натрия, трехмерной натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы и стеаратом магния. Примесь прессовали в таблетки, имеющие прочность на раздавливание более 10 кПа и прочность на истирание менее 0,8% масса/масса. Окончательный состав таблеток приведен в таблице 7.
Таблица 7
Компонент % весовой Масса (мг)
Сенекривирок (как соль мезилата) 8,33 50,00
Гипромеллозы ацетат сукцинат 25,00 150,00
Лаурилсульфат натрия 2,00 12,00
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы. 6,00 36,00
Микрокристаллическая целлюлоза 27,83 167,00
Маннитол 27,83 167,00
Коллоидный диоксид кремния 1,00 6,00
Магния стеарат 2,00 12,00
Общее количество 100,0 600,0
Пример 6: Биодоступность лекарственной формы СВК
[00132] Сравнивали абсолютную биодоступность таблеток по примеру 3 у собак породы «бигль» с таблетками по примерам 4 и 5, равно как и с раствором для перорального применения из мезилата сенекривирока, так и с желатиновыми капсулами, содержащими порошок мезилата сенекривирока. Результаты приведены в таблице 8.
Таблица 8
Компонент Абсолютная биодоступность (%)
Раствор для перорального применения 25,8
Порошок в капсуле 6,4
Пример 3 26,6
Пример 4 21,1
Пример 5 12,4
[00133] В этом примере показано, что биодоступность сенекривирока в таблетках, полученных с применением сухого гранулирования, с фумаровой кислотой (пример 3) является по существу аналогичной у раствора для перорального применения, и значительно выше, чем биодоступность сенекривирока в таблетках, полученных с применением влажного гранулирования, с фумаровой (Пример 1б или лимонной кислотой (пример А4), и более чем вдвое выше у сенекривирока в таблетках с аморфным сенекривироком в дисперсии, подвергнутой распылительной сушке, с ГПМЦ-АС (пример 5). Эти результаты являются неожиданными, потому как не было никаких оснований подозревать, что сухое гранулирование кристаллического АФИ обеспечивает существенное увеличение биодоступности по сравнению с влажной грануляцией и аморфными дисперсиями, высушенными распылением. Это особенно актуально, так как аморфные дисперсии, высушенные распылением, часто используют для повышения биодоступности плохо растворимых в воде лекарственных средств. Эти результаты также неожиданны, так как фумаровая кислота имеет более медленное время растворения, чем лимонная кислота и была использована при более низком массовом соотношении кислоты по отношению к АФИ СВК (3:1 для лимонной кислоты: АФИ по сравнению с 1,06:1 для фумаровой кислоты: АФИ). Следовательно, это вызывает удивление, почему фумаровая кислота оказалась более эффективным растворителем, чем лимонная кислота для СВК.
Пример 7: Ускоренное определение стабильности лекарственной формы СВК
[00134] Таблетки по примеру 2б сравнивали с таблетками по примерам 1б, 4 и 5 по ускоренному определению стабильности посредством воздействия условий 75% относительной влажности воздуха при температуре 40°C. В ходе исследования все таблетки были упакованы вместе с влагопоглотителем. Как показано на Фигуре 3, таблетки по примеру 2б были неожиданно гораздо более стабильными, чем другие таблетки, полученные с применением влажного гранулирования, и имели похожую стабильность с таблетками из дисперсии, высушенной распылением. Такое различие в стабильности между таблетками по примеру 2б и примеру 4 крайне неожиданно, поскольку единственным существенным различием между ними является способ изготовления композиции (сухое гранулирование против влажного гранулирования). Эти результаты также неожиданные, потому что ранее не было известно, что способ грануляции может оказать влияние как на биодоступность, так и на стабильность сенекривирока.
Пример 8: Стабильность препарата СВК
[00135] Стабильность таблеток по примерам 2 и 3 были испытана воздействием на таблетки условий относительной влажности 75% при 40°С в течение шести недель. Во время исследования все таблетки были упакованы с влагопоглотителем. Результаты, представленные в таблице 9, демонстрируют, что таблетки очень стабильны в этих условиях.
Таблица 9
Время (недели) Содержание воды (%) Дозировка (%) Общее содержание примесей (%)
0 1,5 99,1 1,2
2 1,4 99,2 1,1
4 1,4 98,0 1,0
6 1,4 98,6 1,0
Пример 9: Стабильность лекарственных форм СВК
[00136] Изотермы динамической сорбции пара при 25°C коррелирует со стабильностью таблеток по примерам 3 и 4 с мезилатом сенекривирока. Сорбцию проводили от 0% относительной влажности до 90% относительной влажности с 5% интервалами. На каждом интервале каждый образец уравновешивали в течение не менее 10 минут и не более 30 минут. Уравновешивание прекращали, когда скорость увеличения массы составляла не более 0,03% масса/масса в минуту или через 30 минут, независимо от того, насколько она была снижена. Результат, который показан на Фигуре 4, демонстрирует, что таблетки по примеру 2б значительно более стабильны, чем по примеру 4. Данный результат согласуется с примером 30, являясь значительно менее гигроскопичными, чем в примере 4. Повышенная гигроскопичность примера 4 по сравнению с примерами 2б, может быть связана с более высоким содержанием подвижной воды, которая в свою очередь может привести к частичной желатинизации и последующему снижению стабильности примера 4.
Пример 10: Биодоступность лекарственных форм СВК
[00137] Сравнивали биодоступность таблеток по примеру 3 и по примеру 5, и порошком мезилата сенекривирока в желатиновой капсуле при различных состояниях желудка у собак породы «бигль». Биодоступность тестировали по воздействием разных вариантов предварительной обработки, каждая из которых изменяет рН желудка. В частности, предварительная обработка пентагастрином обеспечивает самое низкое значение рН, отсутствие обработки дает промежуточное значение рН, и обработка фамотидином обеспечивает самый высокий рН.
[00138] Результат, который показан на Фигуре 5, демонстрирует, что таблетки по примеру 3 имеют более высокую биологическую доступность при всех условиях, которые были протестированы. Биодоступность примера 3 меньше изменялась между обработанными и необработанными пентагастрином собаками, в то время как пример 4 показал существенную потерю биодоступности у собак, которых не подвергали премедикации, (натощак) (средний уровень рН желудка) по сравнению с обработанными пентагастрином собаками (самый низкий рН желудка). Премедикация агонистом рецептора Н2, фамотидином, который подавляет кислотность желудка и повышает рН желудка, снизила биодоступность всех образцов, однако, снижение для примера 3 было намного меньше, чем для примера 4.
[00139] Эти результаты демонстрируют дополнительное неожиданное преимущество композиций сенекривирока, полученных сухим гранулированием, с фумаровой кислотой. В частности, фармакокинетика таких композиций не варьируются настолько сильно, как у тех дисперсий, которые высушены распылением, (пример 4) при введении по всему диапазону потенциальной рН желудка человека. Данный результат является непредвиденным и неожиданным, так как биодоступность других слабощелочных антиретровирусных препаратов, такого как атазанавир, в значительной степени обеспечивается рН желудка. Для таких лекарственных средств изменения рН желудка, которое может быть вызвано болезнью или расстройством организма, таким как ахлоргидрия пациентов или совместным введением лекарственных средств, таких как антациды, ингибиторы протонной помпы или агонистов рецептора Н2, может привести к снижению их биодоступности до субтерапевтических уровней. Эти результаты демонстрирует, что препарат мезилата сенекривирока на основе фумаровой кислоты, полученный сухим гранулированием, по примеру 3 менее склонен к изменениям биодоступности, тем более, что изменениями рН желудка показано, что пример 3 представляет собой более надежный препарат, который может быть использован пациентами, которые имеют или могут иметь изменения уровня рН желудка.
Примеры 11а-11в: Получение препаратов мезилата сенекривирока и ламивудина
[00140] Препараты мезилата сенекривирока и ламивудина по таблице 10 были получены следующим образом. Во-первых, интрагранулярные компоненты смешивали и с применением сухой грануляции получали композиции в виде сухой гранулированной примеси. Эту сухую гранулированную примесь затем дополнительно смешивали с экстрагранулярными компонентами с образованием смеси. Смесь прессовали в таблетки. Абсолютная биодоступность сенекривирока (СВК) и ламивудин (3TC) у собак породы бигль для таблеток с содержанием 150 мг СВК (примеры 11б и 11в) была измерена. Результаты показаны на Фигуре 6.
Таблица 10
Пример 12a Пример 12б Пример 12в
25 мг сенекривирока и 300 мг ламивудина 150 мг сенекривирока и 300 мг ламивудина 150 мг сенекривирока и 300 мг ламивудина
% масса/масса мг/таблетка % масса/масса мг/таблетка % масса/масса мг/таблетка
Интрагранулярные компоненты
Мезилат сенекривирока 5,69 28,45 17,97 170,69 21,34 170,69
Фумаровая кислота 5,33 26,67 16,84 160,00 20,00 160,00
Микрокристаллическая целлюлоза 5,82 29,11 18,39 19,50 2,64 21,10
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы 0,65 3,25 2,05 19,50 2,64 21,10
Магния стеарат 0,16 0,81 0,51 4,88 0,53 4,20
Экстрагранулярные компоненты
Ламивудин (3TC) 60,00 300,00 31,58 600,00 37,50 300,00
Микрокристаллическая целлюлоза 16,34 81,71 6,39 60,75 3,78 30,21
Трехмерная натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы 5,00 25,00 5,26 50,00 5,00 40,00
Магния стеарат 1,00 5,00 1,00 9,50 1,00 8,00
Общее количество на таблетку 100,00 500,00 100,00 950,00 100,00 800,00
Пример 12: Антифиброзная и противовоспалительная активность сенекривирока, двойного антогониста CCR2 и CCR5, в мышиной модели НАСГ
[00141] Общие сведения: Неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) характеризуется накоплением жира, хроническим воспалением (в том числе провоспалительных моноцитов и макрофагов) и при наличии фиброза может привести к циррозу печени или гепатоцеллюлярной карциноме. В настоящее время нет одобренной терапии НАСГ. Данные свидетельствуют о том, что C-C хемокиновый рецептор 2 (CCR) и его основной лиганд, моноцитарный хемотаксический фактор-1, способствуют рекрутингу провоспалительных моноцитов в печени. Сенекривирок (СВК) является пероральным, сильнодействующим, двойным антагонистом CCR2/CCR5, который показал благоприятный уровень безопасности и переносимость в 48-недельной 2б стадии испытания, проведенном на 143 ВИЧ-1-инфицированных взрослых людях (NCT01338883). СВК оценивали в мышиной модели диет-индуцированного НАСГ, который приводит к гепатоцеллюлярной карциноме; представлены данные по модели первой фиброзной стадии.
[00142] Способы: НАСГ индуцировали у самцов мышей путем однократной инъекции 200 мкг стрептозотоцина через 2 дня после рождения (вызывая нарушение регуляции уровня глюкозы), а затем применяли диету с высоким содержанием жира с 4-недельного возраста. С 6 до 9-недельного возраста 3 группам животных (n=6/группа) вводили два раза в сутки через оральный зонд СВК в дозах 0 (носитель), 20 (низкая доза) или 100 (высокая доза) мг/кг/сутки. Животных умерщвляли в 9-недельном возрасте, и проводили биохимический, экспрессии генов, и гистологический анализы печени.
[00143] Результаты: Лечение СВК не оказывает никакого влияния на массу организма или печени, уровень глюкозы в крови или уровень триглицеридов в печени. Средние уровни аланинаминотрансферазы (±СКО) значительно снизились в обеих группах, подвергаемых лечению СВК, по сравнению с контролем (58±12, 51±13 и 133±80 ед./л для низких доз, высоких доз и носитель, соответственно; р <0,05) и гидроксипролин печени имеет тенденцию к снижению в группах, подвергаемых лечению. Методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени определили, что уровни мРНК коллагена 1 типа в целых лизатах печени снизились на 27-37% с терапией СВК. Процент площади фиброза (окрашивание конго красным) был значительно снижен путем лечения СВК по сравнению с контролем (р <0,01): 0,66±0,16%, 0,64±0,19% и 1,10±0,31% для 20 мг/кг/день, 100 мг/кг/сут и контроля, соответственно, когда учитывали периваскулярное пространство; 0,29±0,14%, 0,20±0,06%, и 0,61±0,23%, соответственно, когда не учитывали периваскулярное пространство. Важно отметить, что индекс гистологической активности неалкогольной жировой болезни печени (оценка 0 для нелеченых мышей в данной модели) был значительно снижен терапией СВК (4,0±0,6, 3,7±0,8 и 5,3±0,5 для низкой дозы, высокой дозы и носителя, соответственно; р <0,05), в первую очередь за счет снижения воспаления и балла баллонирования. Как было показано ранее в организме человека, у мышей наблюдали компенсаторное увеличение в плазме крови уровней моноцитарного хемотаксического фактора-1, связанное с дозой СВК, (1,1- и 1,5-кратное увеличение для низких и высоких доз, соответственно), что согласуется с антагонизмом CCR2.
[00144] Выводы: эти данные свидетельствуют о том, что СВК, исследуемый препарат, в настоящее время в клинических испытаниях на людях, касающихся ВИЧ-1, обладает антифиброзной и противовоспалительной активностью в мышиной модели НАСГ, подтвержденные клиническим исследованием. Эти результаты являются еще одним доказательством того, что нарушение оси CCR2/моноцитарный хемотаксический фактор-1 может быть новым подходом для лечения НАСГ.
Пример 13: Выраженная антифиброзная активность сенекривирока, двойного антагониста CCR2/CCR5, на крысиной модели тиоацетамид-индуцированных фиброза и цирроза печени
[00145] Общие сведения: С-С рецепторы хемокина (CCR) 2 и 5 типов экспрессируются на провоспалительных моноцитах и макрофагах, клетках Купфера и звездчатых клетках печени (ЗКП), способствующих воспалению и фиброгенезу в печени. Сенекривирок (СВК; новый, сильнодействующий, пероральный, двойной антагонист CCR2/CCR5) имеет благоприятный уровень безопасности/переносимости препарата в 48-недельной 2б стадии испытания на 143 ВИЧ-1-инфицированных взрослых людях (NCT01338883).Данное исследование оценивает антифиброзное действие СВК in vivo, и сроки терапевтического вмешательства относительно начала заболевания у крыс с формирующимся фиброзом печени в связи тиоацетамид (ТАА)-индуцированным повреждением.
[00146] Способы: Фиброз индуцировали у самцов крыс линии Спрег-Доули путем внутрибрюшинного введения 150 мг/кг TAА 3 раза/неделю в течение 8 недель. Крысы (n=4-8/группа) получали 30 мг/кг/сутки СВК (а), 100 мг/кг/сутки СВК (б) или контроль (носитель) (в), одновременно с ТАА в течение первых 8 недель (группа 1; раннее вмешательство), в течение 4-8 недель (группа 2, возникновение фиброза) или в течение 8-12 недель после завершения введения ТАА (группа 3; обратимый цирроз). Были проведены биохимический, экспрессии генов и гистологический анализы печени.
[00147] Результаты: когда началась параллельно с ТАА (группа 1), СВК в дозе 30 мг (группа 1а) и 100 мг (группа 1б) значительно уменьшается фиброз (на 49% и 38% соответственно; р <0,001), по оценке морфометрии коллагена. Содержание белка коллагена 1 типа было снижено на 30% и 12% для групп 1а и 1б, соответственно, в то время как содержание α-ГМА было снижено на 17% и 22%, соответственно. Спустя 4 недели после ТАА-индуцированного повреждения начали лечение (группа 2) и наблюдали статистически значимое антифиброзное действие для 30 мг СВК (группа 2а, снижение коллагена на 36%; p<0,001), но не для 100 мг СВК (группа 2б). После начала лечения на 8 неделю (цирроз присутствует) и продолжалось в течение 4 недель (группа 3), не наблюдалось значимого эффекта на СВК на экспрессию фиброгенных генов или фиброз.
[00148] Выводы: СВК является сильнодействующим антифиброзным агентом при нецирротическом фиброзе печени вследствие воздействия ТАА. Лекарственное средство было эффективным при раннем вмешательстве (группа 1) и в формирующемся фиброзе (группа 2а), но не тогда, когда цирроз уже была установлен (группа 3).
Пример 14: Сенекривирок достигает высокой занятости рецептора CCR5 при низких наномолярных концентрациях
[00149] Общие сведения: Сенекривирок (СВК) является новым, применяемым раз в день, сильнодействующим, антагонистом CCR5 и CCR2, прошедшим испытания 2б стадии для лечения ВИЧ-1 инфекции у наивных взрослых людей (NCT01338883). Целью данного исследования была оценка in vitro занятости рецепторов и биологии после лечения СВК, BMS-22 (TOCRIS, антагонист CCR2) и одобренным антагонистом CCR5, маравироком (МВК).
[00150] Методика: МКПК от 5 ВИЧ+ и 5 ВИЧ- субъектов инкубировали с СВК, BMS-22 или МВК, за которой следовало или отсутствие терапии, или терапия с цитокином А5 (лиганд CCR5) или МХБ-1 (лиганд CCR2). Была оценена способность каждого лекарственного средства ингибировать интернализацию CCR5 и CCR2. Поверхностную экспрессию CCR5 и CCR2 оценивали с помощью проточной цитометрии и значения флуоресценции конвертировали в молекулы эквивалентных растворимых флюрохромов (МЭФР).
[00151] Результаты: Как СВК, так и МВК, при отсутствии цитокина А5, увеличивает поверхностную экспрессию CCR5. Данный эффект наблюдали в значительно большей степени у ВИЧ-отрицательных субъектов (CD4+ и CD8+ T-клетки). СВК предотвращал цитокин А5-индуцированную интернализацию CCR5 при более низких эффективных концентрациях, чем МВК. Эффективная концентрация, при которой достигается насыщение CCR5, для СВК составила 3,1 нМ для CD4+и 2,3 нМ для CD8+Т-клеток (~91% и ~90% занятости рецепторов, соответственно). МВК достиг насыщения при 12,5 нМ как для CD4+, так и для CD8+ Т-клеток, что составляет ~86% и ~87% занятости рецептора, соответственно. СВК и МВК достигали высокого, но неполного насыщения CCR5, эффект, который может быть усилен наблюдением повышенной экспрессии CCR5 с обоими агентами при отсутствии цитокина А5. При отсутствии МХБ-1, СВК индуцирует интернализацию CCR2 и снижение поверхностной экспрессии на моноцитах. BMS-22 немного увеличивает поверхностную экспрессию CCR2. СВК предотвращал МХБ-1-индуцированную интернализацию CCR2 при более низких концентрациях, чем BMS-22. Насыщение моноцитов CCR2 было достигнуто при 6 нМ СВК, что составляет ~98% занятость CCR2. Для того чтобы достичь >80% занятости рецептора, в среднем требуется 18 нМ BMS-22 по сравнению с 1,8 нМ СВК.
[00152] Выводы: CВК более легко предотвращал цитокин А5-индуцированную интернализацию CCR5 (при более низких концентрациях), чем МВК в условиях in vitrо, указывая на то, что СВК может более эффективно предотвращать клеточную активацию с помощью цитокина А5, чем МВК в условиях in vivo. Исходные уровни экспрессии CCR5 у субъектов, подвергаемых лечению, могут быть определяющим фактором антагонистической активности CCR5 in vivo. СВК достиг ~ 98% занятости рецептора CCR2 на моноцитах при низких наномолярных концентрациях in vitro, и снижение экспрессии CCR2 на моноцитах при отсутствии МХБ-1. Высокая насыщенность CCR2 за счет СВК в паре со сниженной экспрессией может объяснить мощную блокаду CCR2, наблюдаемое в клинических исследованиях с СВК. СВК обладает сильной иммуномодулирующей активностью in vitro, и может быть важным в сочетании с иммунотерапевтическими и антиретровирусными средствами при хронической ВИЧ-инфекции.
Пример 15: СВК блокирует проникновение ВИЧ, но не приводит к перераспределению HIV в межклеточном пространстве, как МВК
[00153] Общие сведения: In vivo СВК показал свою эффективность при монотерапии проходивших лечение пациентов, несущих CCR5-тропный вирус 7. В стадии IIb клинического исследования (652-2-202; NCT01338883) СВК продемонстрировал аналогичную эффективность в течение 24 недель (первичный анализ) с ненуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы (ННИОТ) эфавиренца (EFV) и лучший профиль токсичности, чем у ненуклеозидного ингибитора обратной транскриптазы (NNRTI) эфавиренца (EFV), при этом оба вводили в комбинации с эмтрицитабином (FTC) и тенофовиром (TDF) с благоприятным уровнем безопасности и переносимости. Мы предположили, что антиретровирусная эффективность СВК в исследовании 202 (например, 22), возможно, была недооценена в результате синдрома отдачи, наблюдаемого у МВК. Соответственно, мы провели ex vivo субанализ исследования 202 (пример 22) путем измерения внутриклеточной ДНК ВИЧ, снижаемой в заготовленной МКПК от 30 пациентов, достигших вирусологического успеха на 24-й неделе исследования. Мы также проводили анализах in vitro, чтобы определить и сравнить степень любого перераспределения внеклеточных вирионов, которое могут вызвать СВК или МВК.
[00154] Теперь мы покажем, что СВК не вызывает вирусной отдачи. Действительно, сопоставимое снижение внутриклеточной ДНК было замечено у лиц, получавших или СВК или EFV, предполагая, что вирусная нагрузка в плазме является точным показателем успешности лечения СВК. Структурное моделирование обеспечивает потенциальное объяснение различий между результатами, полученными с МВК и СВК.
[00155] Способы: Клетки. Клетки РМ-1, экспрессирующие CD4, CCR5 и CXCR4, выращивали в среде RPMI-1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (среда R10) при 37°С, 5% СО2. 293T-клетки, используемые для трансфекции, выдерживали в DMEM в 10% FBS, L-глютамине и антибиотиках (среда D10) при 37°С, 5% СО2 Хранение вируса. Вирус ВИЧ-1 BaL получали путем трансфекции клеток 293Т с плазмидами pWT/BaL Липофектамин 2000 был использован в качестве агента для трансфекции. Супернатанты культур собирали через 48 часов после трансфекции, фильтровали через поры 0,45 мкм фильтра, и обрабатывали 50 единицами бензоназы на мл хранимого вируса в течение 20 минут при 37°С для удаления контаминирующей плазмидной ДНК. Вирусные материалы замораживали при -80°С, чтобы остановить активность бензоназы. Вирусные материалы, обработанные бензоназой, размножали в мононуклеарных клетках крови пуповины (МККП). МККП стимулировали в течение 72 ч с фитогемагглютинином (ФГА-М) в среде R10 до заражения ВИЧ-1 BaL. Размноженную вирусную культуру затем выращивали в R10, дополненной интерлейкином-2 (ИЛ-2) и инкубировали при 37°С, 5% СО2.
[00156] Инфекции: Мы подвергали воздействию ВИЧ-1 BaL клетки РМ-1 в присутствии ингибирующих концентраций СВК (20 нМ) и МВК (50 нМ). Оба препарата инкубировали с клетками PM-1 в течение 1 ч при 37°С перед добавлением вируса. 500 нг антигена р24 ВИЧ-1 BaL инкубировали в 5X105 клеток в 1 мл cреды R10. Контрольная группа только с вирусом, описанная как «без клетки» в тексте, были использована для определения распада вирусов. Вирусную адсорбцию измеряли в контрольной группе нелекарственного средства, в результате чего 500 нг р24 Ag ВИЧ-1 Bal добавляли к 5X105 РМ-1 клеток, которые предварительно инкубировали при 37°С в течение 1 ч при отсутствии медикаментозного лечения. Каждую лекарственную терапию и контроль проводили в двух вариантах. Вирусную РНК экстрагировали из 140 мкл надосадочной жидкости с помощью мини набора QIAamp Viral RNA в соответствии с инструкциями изготовителя. Образцы хранили при -80°С до анализа. Загрузку вирусного супернатанта измеряли с помощью количественного ПЦР в реальном времени (ОТ-кПЦР) с использованием праймеров US1SSF (5'-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA-3'), US1SSR (TGAGGGATCTCTAGTTACCAGAGTCA-5'-3') и зонда US1SS (5'- ( FAM) CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA ) и набора qRT-PCR Supermix Invitrogen. Параметры цикла: 50°С в течение 15 минут, 95°C в течение 10 минут, затем 50 циклов при 95°С в течение 15 секунд, и 60°С в течение 1 минуты. Все значения получены в результате параллельного тестирования в более, чем в 2 независимых экспериментах. Количество копий РНК количественно оценивали с помощью 10-кратного последовательного разведения pBaL/wt для получения стандартных кривых для каждого анализа и калибровки по образцам с известным количеством копий из предыдущих исследований.
[00157] Образцы пациента: образцы мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) получали от 30 пациентов (10, 13 и 7 на СВК 100 мг, СВК 200 мг и EFV, соответственно), которые достигли вирусологического успеха на 24-й неделе в исследовании 202 стадии IIб клинических испытаний сравнения эффективности, безопасности и переносимости СВК (100 мг или 200 мг) или ЭФВ в сочетании с эмтрицитабином/тенофовиром дизопроксилом фумарата (FTC/TDF) у ВИЧ-1-инфицированных наивных пациентов, несущих CCR5-тропный вирус. Образцы в исходном состоянии и через 24 недели были взяты у участников, имеющих исходный уровень вирусной нагрузки <100000, но >1000 вирусных копий РНК/мл, число лимфоцитов CD4≥200 кл/мкл, которым случайным образом назначали или СВК или EFV.
[00158] кПЦР внутриклеточной ДНК: Суммарную ДНК выделяли, количественно оценивали и хранили при -80°C. Уровни сегментов внутриклеточной ДНК количественно оценивали с набором праймер/зонд US1SS, описанным выше. Уровни полноразмерной внутриклеточной ДНК количественно оценивали с набором праймер/зонд US1FL (прямая: 5'-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA; обратная: 5'-CGAGTCCTGCGTCGAGAGA; зонд: 5'-[FAM] -CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA). Оба уровня ДНК мультиплексировали с набором праймер/зонд ГАФД (прямая: 5'-ACCGGGAAGGAAATGAATGG, обратная: 5'-GCAGGAGCGCAGGGTTAGT; зонд: 5'- (VIC) -ACCGGCAGGCTTTCCTAACGGCT) для нормализации входных данных ДНК и проверяли целостность образца.
[00159] Статистический анализ: тест Манна-Уитни использовали для анализа in vitro уровней внутриклеточной ДНК ВИЧ для всех трех групп лечения. Все результаты были проанализированы с помощью программного обеспечения Prism 5.
Молекулярный докинг сенекривирока в CCR5
[00160] Идентификационный номер [PDB ИД] 4Мб) кристаллической структуры рецептора хемокина CCR5 (банк данных белков (PDB) был получен c банк данных белков исследовательской коллаборации структурной биоинформатики (RCSB) и использован в качестве мишени докинга. Структуру антагониста CCR5-рецептора, сенекривирока (ранее TAK-652/TBR-652) получали из PubChem и использовали в качестве лиганда. Минимизация лиганд-стыковочных структур облегчало применение UCSF Chimera, которая подготавливает CCR5 и СВК в качестве входных данных для расчетов докинга, который прогнозируют ориентацию лиганда в трансмембранных (7TM) полостях α-спирали рецептора CCR5. Проводили расчеты докинга и использовали максимальный размер квадрата сетки для включения всех возможных сайтов стыковки в CCR5. Сайт связывания состоит из всех остатков менее 15 Å из 7TM полости (вокруг остатков Glu283 и Tyr10). Результаты докинга обрабатывали для идентификации межмолекулярных взаимодействий. Тестируемые девять положений оставляли для дальнейшего анализа. Для подтверждения точности системы докинга, МВК был пристыкован к CCR5, используя тот же способ, и его ориентация относительно кристаллической структуры была определена. Среднеквадратичное отклонение (СКО), рассчитанное с использованием PyMOL, между наблюдаемой кристаллической структурой и прогнозируемой конформацией, полученной из AutoDock Vina, составило 0,275 Å, указывая на то, что протокол был надежным.
Результаты
[00161] Во-первых, мы количественно определяли внутриклеточную ДНК ВИЧ с целью подтверждения величины вирусной нагрузки, которая была получена в ходе клинического испытания - исследование 202. Результаты анализа ex vivo уровней полноразмерной внутриклеточной ДНК ВИЧ (свидетельствующей о начале обратной транскрипции) в МКПК, выделенной из участников данного клинического исследования, были сходны во всех группах (100 мг СВК, 200 мг СВК, 600 мг EFV) на 24 неделю (Фигура 7A). Среднее кратное изменение от базового уровня составило 0,643 и 0,787 для групп «100 мг СВК» (n=10) и «200 мг СВК» (n=11), соответственно. В группе «600 мг EFV» (n=7) среднее кратное изменение от базового уровня составило 0,825 на 24-й неделю. Различия не достигали статистической значимости.
[00162] Затем, на 24-й неделе уровни сегментов внутриклеточной ДНК (свидетельствующей о поздней обратной транскрипции) измеряли одновременно с уровнями полноразмерных (Фигура 7Б). Среднее кратное изменение от базового уровня составило 0,49 мг для группы 100 мг СВК, 0,63 мг для группы 200 мг СВК и 1,01 для группы 600 мг EFV. Средние значения существенно не отличались.
[00163] Также проводили эксперименты іn vitro по измерению уровней вирионной формы вируса после воздействия СВК и МВК. Уровни вируса в культуральной жидкости измеряли с помощью ОТ-кПЦР и ИФА P24 через 4 часа после инфицирования клеток, подвергающихся воздействию ингибиторов входа. После 4-х часов, культуральная жидкость от клеток, обработанных МВК, демонстрировала более высокие уровни РНК по сравнению с исходным уровнем (исходный уровень: 1,19X1010 копий/мл, 4 ч: 1,67X1010 копий/мл) (Фигура 8 A), кроме клеток, обрабатываемых СВК. (исходный уровень: 506 нг/мл, 4 часа: 520 нг/мл) (Фигура 8Б). Вирусная РНК в культуральной жидкости от клеток, обработанных СВК, существенно не изменилась после 4 часов (базовый уровень: 1,19X1010 копий/мл, 4 часа: 1,26X1010 копий/мл) (Фигура 8A). Уровень Р24 снизился по сравнению с исходным уровнем через 4 часа после обработки СВК (исходный уровень: 506 нг/мл, 4 часа: 192 нг/мл) (Фигура 8Б), уровень вирусной РНК снижался для контрольных групп «без клеток» и «без лекарственного средства» и был аналогичным после 4 часов, составляя 1,14X1010 копий/мл, и 1,1X1010 копий/мл, соответственно (Фигура 8A). В соответствии с исходным уровнем р24 в 506 нг/мл, уровень антигена р24 для контрольной группы «без клеток» после 4-х часов составлял 138 нг/мл. Уровень p24 контрольного варианта «без лекарственного средства» составил 244 нг/мл (Фигура 8Б).
[00164] Такие различия в уровнях внеклеточного вируса по результатам обработки СВК и МВК побудили нас изучить уровни внутриклеточной полноразмерной ДНК ВИЧ в клетках РМ-1, подвергаемых воздействию или СВК или МВК в течение 1 часа, прежде чем были инфицированы ВИЧ-1 BaL. Суммарную ДНК экстрагировали из сгустка клеток после 4-х часов. Уровни внутриклеточной сегментов ДНК ВИЧ из клеток, обработанных СВК или МВК, сравнивали с контролем «без лекарственного средства» (Фигура 9). Мы наблюдали относительный уровень 0,02 ДНК в клетках, обработанных МВК, по сравнению с контрольной группой «без лекарственного средства», тогда как клетки, обработанные СВК, демонстрировали относительный уровень только 0,1 внутриклеточной ДНК. Различие между относительными уровнями ДНК клеток, обработанных МВК и СВК, достигали статистической значимости
[00165] Кристаллическая структура существует в 7ТМ CCR5 в виде комплекса с МВК (PDB ИД 4Мб) и это использовали для создания модели CCR5 со стыковкой с СВК в связывающем кармане. Мы прогнозировали положения стыковки, которые также оценивали путем повторной стыковки МВК в CCR5; верхние положения с наиболее подходящими энергиями имели правильную ориентацию и пересекались с конформацией в кристаллической структуре (СКО <0,3 Å). Моделирование In silico докинга CCR5 показало, что СВК связывается исключительно с гидрофобным карманом в структуре CCR5, также известным как лиганд-связывающий карман (Фигура 10). Только верхних 9 положений оставляли для дальнейшего анализа. Есть три различные конформации, которые СВК демонстрирует после стыковки в CCR5, и они сгруппированы в трех сайтах (Фигура 10A, Б). Первый сайт (сайт 1) глубоко охватывает гидрофобный карман и заполняет большой объем (Фигура 10A). Второй сайт (сайт 2) частично расположен в середине кармана, но и выпячивает наружу от CCR5 между TM1 и TM7 (Фигура 10A). На третьем сайте (сайт 3) несколько положений СВК расположены вблизи входа в полость рецептора.
[00166] Сайт-направленный мутагенез остатков в пределах внеклеточных петель и трансмембранного домена в CCR5 определили ключевые остатки, которые участвуют в связывания gp120; мутации в различных положениях либо предотвращали, нарушали или подвергали изменениям связывание gp120 с CCR5. Тринадцать ключевых остатков, которые были определены как имеющие важное значение для связывания gp120 внутри CCR5, представляют собой Trp86, Trp94, Leu104, Tyr108, Phe109, Phe112, Thr177, Ile198, Trp248, Tyr251, Leu255 и Glu283. На Фигуре 11 показано представление молекулярной поверхности CCR5 со стыковочными положениями СВК (слева) и МВК (справа) в связывающем кармане. СВК и МВК имеют площади молекулярной поверхности в ~ 1285 и 1790 Å2 (рассчитываемые с использованием PyMOL), соответственно. МВК занимает среднюю часть связывающего кармана. Все тринадцать остатков, которые были определены как важные для связывания gp120, находятся в пределах 4 Å от МВК, как измерено PyMOL (отрезок, используемый в данном исследовании для электростатических и/или гидрофобных взаимодействий) В противоположность этому, положения стыковки СВК занимают один и тот же карман, но не в его центре, как видно для МВК (Фигура 11). Скорее всего, СВК смещается в сторону кармана (Фигура 12 A/Б) и были определены консенсусные остатки в CCR5 в пределах 4 Å от СВК. Даже если СВК занимает большую площадь поверхности, чем МВК, только семь из тринадцати остатков, которые имеют важное значение для связывания gp120, находятся в пределах 4 Å от СВК, т.е. Tyr37, Trp86, Tyr108, Phe109, Ile198, Leu255 и Glu283. В целом, эти модели предполагают, что СВК занимает область, аналогичную с МВК, в связывающем кармане CCR5.
[00167] Обсуждение: в данном исследовании, мы наблюдаем, что как СВК, так и МВК антагонисты CCR5, предотвращающие проникновение ВИЧ, имеют различное воздействие на уровни внеклеточного вируса.
[00168] В стадии IIb двойного слепого, с двойной имитацией исследования наивных субъектов по сравнению СВК с EFV, как и с FTC/TDF, 76% пациентов, получавших 100мг СВК, достигли вирусологического успеха (РНК ВИЧ <50 копий/мл) в течение 24 недель по сравнению с 73% пациентов, получавших 200 мг СВК, и 71% пациентов, получавших EFV. Ранее мы показали, что МВК, возможно, искусственно увеличивало уровень вирусной нагрузки, так как внеклеточные вирионы могли отталкиваться от клетки-мишени, после неудачной попытки проникновения в присутствии МВК. Настоящее исследование разрабатывали для решения вопросов, связанных с возможностью возникновения того же эффекта для СВК и могут ли измерения внутриклеточной ДНК дать более точное представление о противовирусной эффективности при сравнении ингибиторов проникновения и обратной транскриптазы.
[00169] На самом деле, уровни внутриклеточной ДНК в группе лечения исследования 202 в отобранных образцах были похожи на 24-й неделе (Фигура 7), отражая тенденции, наблюдаемые во время анализа «по намеченному лечению» (ITT-анализ). Уровни полноразмерной ДНК ВИЧ были одинаковы для всех групп на 24-й неделе, предполагая аналогичную противовирусную эффективность для обоих СВК и EFV. Различия наблюдали в уровнях сегментов ДНК ВИЧ между группами СВК и EFV, в то время как обе группы СВК проявляли более резкое снижение вирусной нагрузки по сравнению с EFV. Учитывая, что уровни сегментов ДНК ВИЧ подвержены непосредственному воздействию ингибиторов проникновения, данный результат был ожидаем. Сходство между EFV и СВК с точки зрения вирусологического успеха и внутриклеточных уровней ДНК ВИЧ позволяет предположить, что противовирусная активность этого двойного ингибитора CCR5 и CCR2 не скрывается измерениями вирусной нагрузки.
[00170] Мы также задались вопросом, может ли СВК привести к отталкиванию вируса, как показано для МВК in vitro. Два отдельных измерения вируса количественными анализами, ОТ-кПЦР и ИФА p24, показали, что лечение МВК поддерживает уровни вирионной формы вируса до 4-х часов после заражения. Напротив, лечение с СВК привело к снижению уровней вируса через 4 часа, сравнимые с таковыми у контрольных групп «без лекарственного средства» или «без клетки» (Фигура 8). Несмотря на якобы аналогичный противовирусный механизм, по-видимому, имеются различия между СВК и МВК в отношении взаимодействия между внеклеточным вирусом и CCR5.
[00171] Дальнейшее изучение сегментов внутриклеточногой ДНК in vitro показало, что СВК вызывало небольшое, хотя и значимое, увеличение уровней по сравнению с МВК (Фигура 9). Это может быть обусловлено различным воздействием обоих ингибиторов на CCR5, который, в свою очередь, влияет на скорость диссоциации между вирусом и рецептором. Это повышает вероятность того, что gp120 может более прочно ассоциировать с СВК-связанным CCR5 по сравнению с МВК.
[00172] Мы ставили цель понять, как СВК ингибирует проникновение ВИЧ в клетки-мишени путем изучения сайта связывания CCR5. Сконструированную человеческую конструкцию CCR5 предварительно кристаллизовали в комплексе МВК при разрешении 2,7 Å. Несмотря на то, что это не полноразмерная кристаллическая структура CCR5, она был использована для лучшего понимания взаимодействия СВК с CCR5 в in silico анализах докинга. Все предполагаемые модели докинга для СВК предполагают глубокое проникновение препарата в 7TM полость CCR5, также наблюдаемое для МВК. Тем не менее, положения стыковки СВК не находились в непосредственной близости к внеклеточной петле 2, ВКП2 оставался доступным после стыковки. Другие группы сообщили, что как N-конец CCR5, так и домены ВКП2 играют важную роль во взаимодействии ВИЧ-1 с CCR5. Кроме того, стеблевая область петли V3 gp120, как сообщается, связывается с N-концом CCR5, когда головка V3 взаимодействует с ВКП2 и с остатками внутри кармана связывания. Основываясь на нашей модели, мы можем предположить, что СВК не вмешивается непосредственно во взаимодействие петли V3 gp120 с ВКП2, так как ВКП2, по-видимому, подвергается воздействию в модели.
[00173] Можно предположить, что СВК может блокировать активацию CCR5, если CCR5 остается в неактивном состоянии. Два остатка, Tyr37 и Trp248, в 7TM области, как было показано, имеют важное значение для активации CCR5 при связывании хемокиновых лигандов, и также было показано, что они имеют важное значение для связывания МВК. Подобно МВК, различные положения стыковки СВК погружены в гидрофобный сайт связывания. Наша модель показывает, что доступ к Trp 248 блокируется СВК; было показано, что Trp 248 имеет важное значение для активации CCR5, объясняя тем самым инактивацию рецептора хемокина. Вторая гипотеза состоит в том, что связывание МВК с CCR5, может привести CCR5 к глобальному конформационному изменению, которое может быть меньше, чем изменение в присутствии СВК.
[00174] Основываясь на экспериментах сайт-направленного мутагенеза других групп и на экспериментах культуры тканей и моделирования докинга, представленных в данном исследовании, мы предполагаем, что МВК занимает среднюю часть гидрофобного кармана, что может привести к недоступности некоторых остатков в CCR5, которые являются важными для связывания gp120. Эти остатки могут также иметь важное значение для связывания gp120 посредством прямого электростатического или гидрофобного взаимодействий и/или вода-опосредованных водородных связей. В противоположность этому, СВК занимает сайт связывания, и может оказаться, что gp120 по-прежнему может получить доступ к некоторым из остатков, важных для связывания CCR5, даже в присутствии состыкованного СВК. Эта гипотеза подтверждается исследованиями сайт-направленного мутагенеза, которые позволяют предположить, что gp120 частично заполняет полость рецептора, занимая всю ВКП2. Тем не менее, степень, в которой петли V3 gp120 проникает в 7TM CCR5 остается неизвестной. Кроме того, было сообщено, что скорость диссоциации gp120 из CCR5 ускоряется в присутствии МВК, так как последний препятствует тесной связи между ВКП2 и петлей V3. На основе этих исследований, СВК может иметь различное влияние на взаимодействие ВКП2/V3, по сравнению с МВК. Исследования диссоциации и поверхностного плазмонного резонанса, а также кристаллизации CCR5 в комплексе с СВК предоставят ценную информацию по данной теме.
[00175] Сайт-направленный мутагенез и биохимические исследования необходимы для выявления остатков, которые важны для взаимодействия CCR5 с СВК. Определение проксимального расположения N-конца CCR5 также представляет интерес.
[00176] В данном исследовании мы показали, что количественный анализ вирусной нагрузки представляет собой точное измерение противовирусной эффективности СВК, и что ингибирование проникновения вируса с помощью СВК не приводит к вирусной отдаче от поверхности клетки во внеклеточную среду. Наша структура моделирования in silico обеспечивает потенциальное объяснение функциональных различий между СВК и МВК. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять, как СВК влияет на связывание gp120 с CCR5.
Пример 16: Антифиброзная активность сенекривирока, двойного антагониста CCR5/CCR2, в мышиной модели фиброза почек
[00177] Общие сведения: Сенекривирок (СВК) является новым, пероральным, применяемым раз в день, двойным антагонистом CCR5 и CCR2, прошедшим испытания стадии 2б развития ВИЧ (исследование 202; NCT01338883). СВК имеет благоприятный профиль безопасности у 555 субъектов, которых подвергались лечению по меньшей мере одной дозой, в том числе у 115 ВИЧ-1-инфицированных взрослых, получавших СВК в течение 48-недель. В последнее время СВК продемонстрировал существенную антифиброзную активность в мышиной модели диет-индуцированного неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и крысиной модели тиоацетамид-индуцированного фиброза. Здесь мы оценивали СВК в хорошо изученной мышиной модели фиброза почек, индуцированной односторонней обструкцией мочеточника (ООМ).
[00178] Методика: Подопытные животные были распределены по массе в группах лечения за день до хирургической процедуры (день -1). Самцы мышей CD-1 (N=51; возраст: 7-8 недель) с помощью асептической лапаротомии подвергались либо фиктивной операции, или общей перевязке правого мочеточника, т.е. ООМ (Фигура 12). От 0 до 5 суток: мыши, перенесшие фиктивную операцию, получали носитель (0,5% метилцеллюлозы+1% Твин-80) два раза в сутки через оральный зонд; мыши с постоянной ООМ получали либо контроль (носитель), 7 мг/кг/день СВК или 20 мг/кг/сут СВК два раза в сутки через оральный зонд. Еще одна группа получала анти-трансформирующий фактор роста, антитело TGF-β1, соединение 1D11 (положительный контроль) в дозе 3 мг/кг/день от 1 до 4 суток, вводили внутрибрюшинно один раз в сутки, и контроль (носитель) от 0 до 5 суток. Группа «100 мг/кг/день» (N=9) первоначально был включена в исследование, но была исключена досрочно из-за состояния агонии (анализ не проводился, так как ни одно животное не достигли 5-х суток). Дозы СВК до 2000 мг/кг/сут хорошо переносились в токсикологических исследованиях у мыши, не связанных с хирургическими процедурами. На 5-е сутки животных анестезировали, кровь и ткани собирали перед умерщвлением.
[00179] Конечные точки исследования: конечные точки исследования включали: а) массу тела и почек; б) фиброз в почке с обструкцией оценивали с помощью количественного гистологического анализа изображений, окрашенных пикросириусом красным (десять изображений/глубина/почка получены и оценены в слепом режиме с использованием световой микроскопии [при увеличении 200x] для отбора 60-70% проб с корковой области почки) и оценивали количественно по совокупного объемного содержания коллагена (ОСК [% общая отображаемая площадь]) результат выражали как среднее площади положительного окрашивания на трех анатомически различных (200-250 мкм друг от друга) срезах тканей, или глубинах из почки с обструкцией; в) содержание гидроксипролина в замороженной биопсии корковой ткани почки оценивали биохимическими анализами; г) экспрессию мРНК профибротических и воспалительных биомаркеров (включая МХБ-1, коллаген 1a1, коллаген 3a1, TGF- β1, фибронектин-1, α-актин гладких мышц (α-ГМА) и фактор роста соединительной ткани-1 CTGF-1), оценивали с помощью Luminex® (Life Technologies™, Карлсбад, Калифорния, США) анализа относительной экспрессии, нормализованной к ГФРТ (гипоксантин фосфорибозилтрансферазы).
[00180] Статистический анализ: результаты представлены в виде среднего арифметического±стандартная ошибка среднего (СОС). Статистический анализ проводили с использованием GraphPad Prism® (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния, США). Различия в терапии между фиктивной операцией+контроль (носитель) и контрольной группой МОО +носитель, а также между МОО+ контроль (носитель) и группой МОО +соединение-1D11 (положительный контроль) проанализировали с помощью критерия Стьюдента для одной выборки. Различия в терапии между группами «МОО+ контроль (носитель)» и «доза СВК» анализировали однофакторным дисперсионным анализом (вариационный анализ) с критерием Дуннетта (ретроспективный анализ).
[00181] Способы: СВК продемонстрировал существенные антифиброзные эффекты, которые определены снижением объемного содержания коллагена или ОСК (% положительно окрашенной области по коллагену в гистологических срезах почки с обструкцией) в хорошо изученной мышиной модели ООМ фиброза почек. Наблюдали тенденции снижения уровней экспрессии мРНК коллагена 1а1, коллагена 3а1, TGF- β1 и фибронектина-1 в почке с обструкцией, но они не достигали статистической значимости. В комплексе, механизм действия, антифиброзная активность СВК в животных моделях (почек и печени), а также обширные данные по клинической безопасности обеспечили дальнейшую оценку фиброзных заболеваний. Планируется экспериментальное исследование НАСГ и фиброза печени у неинфицированных ВИЧ пациентов. В III стадии клинических испытаний ВИЧ-1-инфицированных пациентов также планируется оценить сочетание фиксированной дозы СВК/ламивудин (3TC) в качестве новой «базисной терапии» по сравнению с тенофовиром дизопроксилом фумарата/ эмтрицитабином (TDF/FTC) при совместном введении с предпочтительными по методическим рекомендациям третьими агентами.
[00182] Результаты: Масса тела и масса почки с обструкцией: 7 мг/кг/сутки СВК и соединение 1D11 (положительный контроль) не оказывало влияния на массу тела, в то время как 20 мг/кг/сут СВК приводило к незначительному, но значимому, снижению (5%) массы тела, по отношению к группе ООМ+носитель на 5-е сутки (р <0,05) (Фигура 1 3; изменение массы тела в граммах [г]). Статистически значимых эффектов терапии отмечено не было (СВК или соединение 1D11 [положительный контроль]) на массу контралатеральной почки или почки с обструкцией, или индекс массы почки по сравнению с контрольной группой МОО +носитель (данные не показаны). Гистология: сложный показатель ОСК (% площади в среднем по трем глубинам [±СОС]) был значительно выше в контрольной группе ООМ+носитель по сравнению с таковым в группе с фиктивной операцией (11,4±1,0 раза; р <0,05) (Фигура14). 7 и 20 мг/кг/сутки СВК и соединение 1D11 (положительный контроль) значительно ослабляет ООМ-индуцированное увеличение сложного показателя ОСК (усредненное по трем глубинам [±СОС]) по сравнению с контрольной группой ООМ+носитель (меньше на 28,6±8,8%, 31,8±6,8% и 50,3±7,3%, соответственно; р <0,05).
[00183] Содержание гидроксипролина: содержание гидроксипролина (% белка) в почках с обструкцией в контрольной группе «ООМ+носитель» значимо увеличилось по сравнению с группой «фиктивная операция» (0,72% против 0,27%; p <0,05) (данные не показаны). Никакая доза тестируемого СВК не оказывала влияния на ООМ-индуцированное увеличение содержания гидроксипролина в почке с обструкцией по сравнению с контрольной группой «ООМ+носитель»; однако, группа «соединение 1D11» (положительный контроль) имела значительно более низкие уровни (0,55% против 0,72%; p <0,05) (данные не показаны).
[00184] Профибротические и воспалительные биомаркеры экспрессии мРНК: для каждого из оцениваемых биомаркеров (МХБ-1, коллаген 1a1, Коллаген 3а1, TGF-β1, фибронектин-1, α-ГМА и CTGF-1), экспрессию мРНК в контрольной группе ООМ-носитель по сравнению с группой «фиктивная операция» (p<0,05) (Фигура 15). 7 и 20 мг/кг/сут СВК ослабляет ООМ-индуцированное увеличение экспрессии мРНК коллагена 1а1, коллаген 3а1, TGF-β1 и фибронектина-1. Тем не менее, такое снижение, по сравнению с контрольной группой «ООМ+носитель» не достигало статистической значимости. Соединение 1D11 (положительный контроль) значительно снижает ООМ-индуцированное увеличение экспрессии мРНК коллагена 1а1, коллаген 3а1, TGF-β1 и фибронектина-1 по сравнению с контрольной группой «ООМ+носитель» (p <0,05). 7 и 20 мг/кг/сутки СВК и соединение 1D11 (положительный контроль) не оказывают значимого влияния на ООМ-индуцированное увеличение экспрессии мРНК в МХБ-1, α-ГМА и CTGF-1 в кортикальном слое почки с обструкцией по сравнению с контрольной группой «ООМ+носитель» (данные не показаны для мРНК α-ГМА и CTGF-1)
[00185] Выводы: СВК продемонстрировал существенные антифиброзные эффекты, которые определены снижением объемного содержания коллагена или ОСК (% положительно окрашенной области по коллагену в гистологических срезах почки с обструкцией) в хорошо изученной мышиной модели ООМ фиброза почек. Наблюдали тенденции снижения уровней экспрессии мРНК коллагена 1а1, коллагена 3а1, TGF- β1 и фибронектина-1 в почке с обструкцией, но они не достигали статистической значимости. В комплексе, механизм действия, антифиброзная активность СВК в животных моделях (почек и печени), а также обширные данные по клинической безопасности обеспечили дальнейшую оценку фиброзных заболеваний. Планируется экспериментальное исследование НАСГ и фиброза печени у неинфицированных ВИЧ пациентов. В III стадии клинических испытаний ВИЧ-1-инфицированных пациентов также планируется оценить сочетание фиксированной дозы СВК/ламивудин (3TC) в качестве новой «базисной терапии» по сравнению с тенофовиром дизопроксилом фумарата/ эмтрицитабином (TDF/FTC) при совместном введении с предпочтительными по методическим рекомендациям третьими агентами.
Пример 17: Улучшение баллов индекса APRI и индекса FIB-4 для определения фиброза, коррелирующих с уменьшением sCD14 у ВИЧ-1-инфицированных взрослых, получающих сенекривирок в течение 48 недель
[00186] Общие сведения и цели: Сенекривирок (СВК) является новым, пероральным, применяемым раз в сутки, антагонистом CCR2/CCR5, который продемонстрировал благоприятный уровень безопасности и активность против ВИЧ в клинических испытаниях. СВК продемонстрировал антифиброзную активность в двух животных моделях болезней печени. Ретроспективный анализ проводили по баллам индекса APRI и индекса FIB-4 в исследовании 202 (NCT01338883).
[00187] Способы: 143 взрослых пациента с CCR5-тропным ВИЧ-1, ИМТ≤35кг/м2 и с неочевидной болезнью печени (то есть степень АЛТ/АСТ≤2, общий билирубин≤верхняя граница нормы, нет ВГВ, ВГС, активное или хроническое заболевание печени, или цирроз) были рандомизированы 4:1 к СВК или эфавиренцу (EFV). Были подсчитаны баллы индекса APRI и индекса FIB-4. Изменение баллов показателя по сравнению с исходным показателем (ИП) к 24 и 48 неделе оценивали у пациентов с не пропущенными данными. Были оценены корреляции между изменениями от БП в баллах индекса APRI и индекса FIB-4 и уровни МХБ-1 (лиганд CCR2) и sCD14 (биомаркер воспаления).
[00188] Результаты: В начале исследования больше пациентов, получавших СВК, чем EFV, имели индекс APRI≥0,5 и индекс FIB-4≥1,45; доля пациентов, получавших СВК, выше этих пороговых значений снизилась на 24 и 48 недели (таблица). Значимые корреляции наблюдали на 24-й неделе между изменениями в баллах индекса APRI и уровнями МХБ-1 (p=0,014), а также между баллами индекса FIB-4 и уровнями sCD14 (р=0,011), и на 48 неделе между изменениями в баллах индексов APRI (р=0,028) и FIB-4 (р=0,007) и уровнями sCD14 (таблица 11).
Таблица 11
Индекс
фиброза		 СВК EFV
Начало исследования (n=113) 24 неделя (n=92) 48 неделя (n=80) Начало исследования (n=28) 24 неделя (n=20) 48 неделя (n=17)
Балл индекса APRI <0,5 84% 93% 91% 96% 100% 100%
0,5-1,5 14% 7% 8% 4% - -
>1,5 2% - 1% - - -
снижение на один балл по сравнению с базового уровня Н/Д 14% 10% Н/Д 5% 6%
Балл индекса FIB-4 <1,45 82% 93% 94% 100% 100% 94%
1,45-3,25 17% 7% 5% - - 6%
>3,25 1% - 1% - - -
снижение на один балл по сравнению с базового уровня Н/Д 13% 14% Н/Д - -
[00189] Выводы: В данной выборке с неочевидным заболеванием печени, терапию СВК связывали с улучшением индексов APRI и FIB-4, и наблюдали корреляции между изменениями в баллах индекса APRI и индекса FIB-4 и уровнях sCD14 на 48 неделе. Доказанный антагонизм CCR2/CCR5, антифиброзные эффекты в животных моделях и обширные данные по клинической безопасности всех дополнительных клинических исследований СВК по фиброзу печени.
Пример 18: исследование эффективности in vivo сенекривирока в модели STAM неалкогольного стеатогепатита
[00190] Данное исследование эффективности in vivo проводили с целью изучить влияние сенекривирока на мышиную модель STAM™ неалкогольного стеатогепатита.
Материалы и методы
План исследования и терапия
Исследуемые группы
[00191] Группа 1-носитель: восемнадцати мышам с НАСГ перорально вводили носитель в объеме 10 мл/кг два раза в сутки (9:00 и 19:00) с 6-недельного возраста.
[00192] Группа 2-20 мг/кг сенекривирока (СВК-низкая): восемнадцати мышам с НАСГ вводили перорально носитель с добавлением сенекривирока в дозе 10 мг/кг два раза в сутки (20 мг/кг/сутки) (9:00 и 19:00) с 6-недельного возраста.
[00193] Группа 3-100 мг/кг сенекривирока (CVC-высокая): восемнадцати мышам с НАСГ вводили перорально носитель с добавлением сенекривирока в дозе 50 мг/кг два раза в сутки (100 мг/кг/сутки) (9:00 и 19:00) с 6-недельного возраста.
[00194] Таблица 12 приведены схемы лечения:
Таблица 12
Группа № мыши Мышь Тестируемое вещество Доза
(мг/кг)		 Объем
(мл/кг)		 Схема приема лекарств Умерщвление подопытного животного
(нед.)
1 18 STAM Носитель - 10 Перорально, два раза в сутки,
6-9 нед., 6 -18нед.		 9 и 18
2 18 STAM СВК- низкая 20 10 Перорально, два раза в сутки, 6-9 нед., 6 -18 нед. 9 и 18
3 18 STAM CVC-высокая 100 10 Перорально, два раза в сутки, 6-9 нед., 6 -18 нед. 9 и 18
Результаты
Часть 1: исследование в целях определения анти-НАСГ/антифиброзных эффектов СВК
[00195] Изменения массы тела и общего состояния до 9 недели (Фигура 16)
[00196] Масса тела постепенно увеличивалась в течение периода лечения. Средняя масса тела существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» в течение всего периода лечения. Ни у одного из животных в настоящем исследовании не отмечено ухудшения общего состояния в течение всего периода лечения.
[00197] Масса тела в день умерщвления подопытного животного на 9 неделю (Фигура 17A и таблица 13)
[00198] Средняя масса тела существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 18,9±3,3 гр., СВК-низкая: 19,5±2,0 гр., СВК-высокая: 18,7±0,9 гр.).
Таблица 13: Масса тела и масса печени на 9 неделю
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=6) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирок-высокая (n=6)
Масса тела (гр.) 18,9±3,3 19,5±2,0 18,7±0,9
Масса печени (мг) 1270±326 1334±99 1307±119
Соотношение массы печени к массе тела (%) 6,6±0,8 6,9±1,0 7,0±0,8
[00199] Масса печени и соотношение массы печени к массе тела на 9 неделю (Фигуры 17Б и В, и таблица 13)
[00200] Средняя масса печени существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 1270±326 мг, СВК-низкая: 1334±99 мг, СВК-высокая: 1307±119 мг).
[00201] Среднее соотношение массы печени к массе тела существенно не отличалось между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель:6,6±0,8%, СВК-низкая: 6,9±1,0%, СВК-высокая: 7,0±0,8%).
Цельная кровь и биохимия на 9 неделю
[00202] Данные уровня глюкозы в цельной крови приведены на Фигурах 18A-Г и таблице 14.
[00203] Уровни глюкозы в цельной крови существенно не отличались между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 590±108 мг/дл, СВК-низкая: 585±91 мг/дл, СВК-высокая: 585±91 мг/дл). 4.4.2. АЛТ плазмы крови (Фигура18Б, таблица 14). Группы «СВК-низкая» и «СВК-высокая» показали существенное снижение уровней АЛТ в плазме крови по сравнению с группой «носитель» (носитель: 133±80 ед./л, СВК-низкая: 58±12 ед/л, СВК-высокая: 52±13 ед/л).
Таблица 14: Биохимия крови и печени на 9 неделю
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=6) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирок-высокая (n=6)
Уровень глюкозы в цельной крови (мг/дл) 590±108 585±91 585±91
Уровень АЛТ в плазме крови (ед/л) 133±80 58±12 52±13
Уровень МХБ-1 в плазме крови (пг/мл) 60±4 68±16 91±14
Уровень МБВ-1β в плазме крови (пг/мл) 18±5 18±2 20±4
Уровень триглицеридов в печени (мг/г печени) 40,8±20,4 48,5±16,1 51,7±14,1
Уровень гидроксипролина в печени (мкг/мг общего белка) 0,75±0,18 0,63±0,05 0,62±0,09
[00204] Данные уровня МХБ-1 плазмы крови приведены на Фигуре 18В и таблице 14. Группа «СВК-высокая» показала значительное увеличение в плазме крови уровней МХБ-1 по сравнению с группой «носитель». Уровни МХБ-1 в цельной крови существенно не отличались между группой «носитель» и группой «СВК-низкая» (носитель: 60±4 пг/мл, СВК-низкая: 68±16 пг/мл, СВК-низкая: 91±14 пг/мл).
[00205] Данные уровня МБВ-1 β плазмы крови приведены на Фигуре 18Г, таблице14. Уровни МБВ-1 β в цельной крови существенно не отличались между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 18±5 пг/мл, СВК-низкая: 18±2 пг/мл, СВК-высокая: 20±4 пг/мл).
Биохимия печени на 9 неделю
[00206] Данные о содержании триглицеридов печени приведены на Фигуре 18Г и таблице 14. Содержание триглицеридов печени существенно не отличалось между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 40,8±20,4 мг/гр. печени, СВК-низкая: 48,5±16,1 мг/гр. печени, СВК-высокая: 51,7±14,1 мг/гр. печени).
[00207] Данные о содержании гидроксипролина печени приведены на Фигуре18Д и таблице14. Содержание гидроксипролина в печени, как правило, снижается в группах «СВК-низкая» и «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель»(носитель: 0,75±0,18 мкг/мг, СВК-низкая: 0,63±0,05 мкг/мг, СВК-высокая: 0,62±0,09 мкг/мг).
Гистологические анализы на 9 неделю
[00208] Результаты ГЭ-окрашивания и индекс активности НАЖБП приведены на Фигурах 19 и 20, и в таблице 15. Срезы печени из группы «носитель» демонстрируют тяжелое микро- и макровезикулярное жироотложение, гепатоцеллюлярное баллонирование и инфильтрацию воспалительных клеток. Группы «СВК-низкая» и СВК-высокая» показали умеренное улучшение в инфильтрации воспалительных клеток печени и гепатоцеллюлярного баллонирования со значительным снижением NAS (шкала активности НЖБП Клейнера) по сравнению с группой «носитель» (носитель: 5,3±0,5, СВК-низкая: 4,0±0,6, СВК-высокая: 3,7±0,8). Типичные микрофотографии ГЭ-окрашенных срезов показаны на Фигуре 19.
Figure 00000002
[00209] Результаты окрашивания конго красным показаны на Фигурах 21, 22, 23 и таблице 16. На срезах печени от группы «носитель» показаны отложения коллагена в перицентральный области дольки печени. По сравнению с группой «носитель», отложение коллагена в перицентральной области было заметно снижено в группах «СВК-низкая» и СВК-высокая». Область фиброза (область, положительно окрашенная конго красным) значительно уменьшились в группах «СВК-низкая» и «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель» (носитель: 1,10±0,31%, СВК-низкая: 0,66±0,16%, СВК-высокая: 0.64±0,19%). Измененные фиброзом области также были значительно уменьшены в группах «СВК-низкая» и «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель» (носитель: 0,61±0,23%, СВК-низкая: 0,29±0,14%, СВК-высокая: 0,20±0,06%).
Таблица 16: Гистологические анализы на 9 неделю
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=6) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирок-высокая (n=6)
Область, положительно окрашенная конго красным (%) 1,10±0,31 0,66±0,16 0,64±0,19
Модифицированная область, положительно окрашенная конго красным 0,61±0,23 0,29±0,14 0,20±0,06
F4/80-положительная область (%) 4,99±1,10 4,77±1,02 4,96±0,60
F4/80 и CD206-положительные клетки (%) 34,3±4,2 34,7±6,3 33,1±3,0
F4/80 и CD16/32-положительные клетки (%) 33,5±3,7 38,7±7,6 41,5±8,2
Соотношение M1/M2 (%) 99,6±20,2 112,3±17,0 125,1±21,9
Область, положительно окрашенная масляным красным (%) 9,66±5,02 6,51±3,88 7,23±3,59
TUNEL-положительные клетки (%) 36,0±3,7 43,3±2,9 39,0±5,3
Сенекривирок-высокая
Мыши Идентификатор Фото №. Общая область (пикс.) Общая положительная область (пикс.) Положительная периваскулярная область (пикс.) Измененная положительная область (пикс.) Измененная положительная область (%) Измененная положительная область (%)
301 1 1264424 9749 6409 3340 0,26 0,18
2 1291238 3234 2491 743 0,06
3 1289200 4737 3491 1246 0,10
4 1252731 17225 12045 5180 0,41
5 1277575 6253 5119 1134 0,09
302 1 1217885 16038 13242 2796 0,23 0,20
2 1248706 7010 4876 2134 0,17
3 1253036 14194 10634 3560 0,28
4 1301898 4914 2070 2844 0,22
5 1268269 7439 6404 1035 0,08
303 1 1285828 4306 3322 984 0,08 0,12
2 1297994 2159 1550 609 0.05
3 1279156 3201 2025 1176 0,09
4 1285026 12648 8537 4111 0,32
5 1285009 4011 3119 892 0,07
304 1 1294810 3685 1677 2008 0,16 0,26
2 1274697 2221 1222 999 0,08
3 1286001 11356 8814 2542 0,20
4 1236232 10705 8252 2453 0,20
5 1217017 18761 10537 8224 0,68
305 1 1287425 5774 2832 2942 0,23 0,17
2 1278985 2638 1733 905 0,07
3 1272127 7654 4214 3440 0,27
4 1289371 5726 3563 2163 0,17
5 1200639 3654 2171 1483 0,12
306 1 1236260 6253 2852 3401 0,28 0,27
2 1270484 12655 11196 1459 0,11
3 1144610 20504 12793 7711 0,67
4 1292425 7266 4401 2865 0,22
5 1295488 1921 976 945 0,07
[00210] Типичные микрофотографии срезов печени, окрашенных конго красным, показаны на Фигуре 21.
[00211] Результаты F4/80-иммуногистохимии представлены на Фигурах 22 и 23, и таблице16. Иммунное окрашивание F4/80 срезов печени от группы «носитель» демонстрирует аккумуляцию F4/80+ клеток в дольке печени. Количество и размеры F4/80+ клеток, также, как и в процентах от площади воспаления (F4/80-положительная область) существенно не отличались между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 4,99±1,10%, СВК-низкая: 4,77±1,02%, СВК-высокая: 4,96±0,60%).
[00212] Типичные микрофотографии F4/80-иммуноокрашенных срезов показаны на Фигуре22.
[00213] Результаты иммуногистохимии F4/80+CD206+ и F4/80+CD16/32+ представлены на Фигурах 24, 25, 26, 27, 28, и таблице 16). Проценты клеток F4/80+ CD206+ в макрофагах существенно не отличались между группой «носитель» и группами «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 34,3±4,2%, СВК-низкая: 34,7±6,3%, СВК-высокая: 33,1±3,0%). Проценты F4/ 80+ CD16/32+ клеток в макрофагах существенно не отличались между группой «носитель» и группой «СВК-низкая». Проценты F4/80+CD16/32+ клеток имеет тенденцию к увеличению в группе «СВК-высокая» по сравнению с носителем (носитель: 33,5±3,7%, СВК-низкая: 38,7±7,6%, СВК-высокая: 41,5±8,2%). Соотношение М1/М2 существенно не отличалось между группой «носитель» и группой «СВК-низкая». В группе «СВК-высокая» соотношение M1/M2 имеет тенденцию к увеличению по сравнению с носителем (носитель: 99,6±20,2%, «СВК-низкая»: 112,3±17,0%, СВК-высокая: 125,1±21,9%
[00214] Типичные микрофотографии срезов с двойным иммуноокрашиванием F4/80 и CD206, F4/80 и CD16/32 показаны на Фигурах 24 и 26.
[00215] Результаты окрашивания масляным красным приведены на Фигурах 29, 30 и таблице 16. Отложение жира между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая», а также в проценты от площади отложения жира (область, положительно окрашенная маслом) существенно не отличались (носитель: 9,66±5,02%, СВК-низкая: 6,51±3,88%, СВК-высокая: 7,23±3,59%).
[00216] Типичные микрофотографии срезов, окрашенных масляным красным, показаны на Фигуре 29.
[00217] Результаты TUNEL-окрашивания представлены на Фигурах 31, 32 и таблице 16. Процент TUNEL-положительных клеток значительно увеличился в группе «СВК-низкая» по сравнению с группой «носитель». Проценты TUNEL-положительных клеток существенно не отличались между группой «носитель» и группой «СВК-высокая» (носитель: 36,0±3,7%, СВК-низкая: 43,3±2,9%, СВК-высокая: 39,0±5,3%).
[00218] Типичные микрофотографии TUNEL-позитивных клеток в печени показаны на Фигуре 31.
[00219] Результаты анализа экспрессии генов на 9 неделю приведены на Фигуре 33 и таблицах 17-18.
Таблица 17: Анализа экспрессии генов на 9 неделю
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=6) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирок-высокая (n=6)
ФНО-α 1,00±0,24 1,16±0,39 1,09±0,23
Уровень МХБ-1 в плазме крови 1,00±0,31 1,05±0,50 1,00±0,53
Коллаген 1 типа 1,00±0,42 0,63±0,10 0,73±0,04
ТИМП-1 1,00±0,46 0,75±0,32 0,80±0,20
Figure 00000003
Figure 00000004
ФНО-α
[00220] Уровни экспрессии мРНК TNFα существенно не отличались между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 1,00±0,24, СВК-низкая: 1,16±0,39, СВК-высокая: 1,09±0,23).
МХБ-1
[00221] Уровни мРНК МХБ-1 существенно не отличались между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 1,00±0,31, СВК-низкая: 1,05±0,50, СВК-высокая: 1,00±0,53).
Коллаген 1 типа
[00222] Уровни экспрессии мРНК коллагена 1 типа значительно снижаются в группе «СВК-низкая» по сравнению с группой «носитель». Уровни экспрессии мРНК коллагена 1 типа имеют тенденцию к снижению в группе «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель» (носитель: 1,00±0,42, СВК-низкая: 0,63±0,10, СВК-высокая: 0,73±0,04).
ТИМП-1
[00223] Между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» и «СВК-высокая» уровни экспрессии мРНК ТИМП-1 существенно не отличались (носитель: 1,00±0,46, «СВК-низкая»: 0,75±0,32, «СВК-высокая»: 0,80±0,20).
Часть 2: исследование в целях определения анти-ГЦК эффектов СВК
Изменения массы тела до 18 недели (Фигура 35)
[00224] Масса тела постепенно увеличивалась в течение периода лечения. Cредняя масса тела существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» в течение всего периода лечения.
[00225] Данные анализа выживаемости приведены на Фигуре 36. Четыре из двенадцати мышей умерли на 59 сутки (ID112), на 75 сутки (ID113, 115) и на 84 сутки (ID116) в группе «носитель» (первые сутки введения были обозначены как 0 сутки). Шесть из двенадцати мышей умерли на 62 сутки (ID209), на 54 сутки (ID217), на 75 сутки (ID212), на 76 сутки (ID213), на 84 сутки (ID215) и на 86 сутки (ID208) в группе «СВК-низкая». Пять из двенадцати мышей умерли на 62 сутки (ID317), на 65 сутки (ID312), на 70 сутки (ID316), на 78 сутки (ID314) и на 85 сутки (ID309) в группе «СВК-высокая». У мертвых животных не обнаружено никаких аномальных находок при аутопсии, за исключением типичных для НАСГ поражений печени. Выживаемость существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая». По согласованным инструкциям остальных животных умерщвляли раньше, чем планировали, в возрасте 18 недель (запланированное умерщвление в 20-недельном возрасте).
[00226] Данные по массе тела в день умерщвления на 18 неделе представлены на Фигуре 37А и в таблице 19. Масса тела имела тенденцию к снижению в группе «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель». Средняя масса тела существенно не отличалась между группой «носитель» и группой «СВК-низкая» (носитель: 23,0±2,3 гр., СВК-низкая: 22,9±3,5 гр., СВК-высокая: 20,8±2,7 гр.).
Таблица 19: Масса тела и масса печени на18 неделю
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=8) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирокавысокая (n=7)
Масса тела (гр.) 23,0±2,3 22,9±3,5 20,8±2,7
Масса печени (мг) 1782±558 1837±410 1817±446
Соотношение массы печени к массе тела (%) 7,7±2,2 8,3±2,8 8,8±2,3
[00227] Данные по массе печени и соотношению массы печени к массе тела на 18 неделю приведены на Фигурах 37Б, В и в таблице 19. Средняя масса печени существенно не отличалась между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 1782±558 мг, СВК-низкая: 1837±410 мг, СВК-высокая: 1817±446 мг). Среднее соотношение массы печени к массе тела существенно не отличалось между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 7,7±2,2%, СВК-низкая: 8,3±2,8%, СВК-высокая: 8,8±2,3%).
Макроскопические анализы печени на 18 неделе
[00228] Макроскопический внешний вид печеней показан на Фигурах 38A-В.
[00229] Количество видимых опухолевых узлов, образованных на поверхности печени, показано на Фигуре 39 и таблице 20. Количество опухолевых узлов печени на отдельную мышь существенно не отличалось между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 2,4±4,1, СВК-низкая: 1,5±1,9, СВК-высокая: 3,6±2,5).
Таблица 20: Макроскопические анализы печени на 18 неделе
Показатель (Среднее ± стандартное отклонение) Носитель (n=8) Сенекривирок-низкая (n=6) Сенекривирокавысокая (n=7)
Количество видимых опухолевых узлов 2,4±4,1 1,5±1,9 3,6±2,5
Максимальный диаметр видимых опухолевых узлов (мм) 4,0±4,7 4,8±5,4 5,3±5,1
[00230] Максимальные диаметры видимых опухолевых узлов на поверхности печени показаны на Фигуре 40 и в таблице 20. Максимальный диаметр опухоли существенно не отличался между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» (носитель: 4,0±4,7 мм, СВК-низкая: 4,8±5,4 мм, СВК-высокая: 5,3±5,1 мм).
Гистологические анализы на 18 неделю
[00231] Результаты ГЭ-окрашивания представлены на Фигуре 41. ГЭ-окрашивание выявило инфильтрацию воспалительных клеток, макро- и микровезикулярные отложения жира, гепатоцеллюлярное баллонирование, измененные очаги и узловые поражения в группе «носитель». У шести из этих восьми мышей в группе «носитель» обнаруживали поражения ГЦК. ГЦК поражения были обнаружены у пяти из шести мышей в группе «СВК-низкая» и у шести из семи мышей в группе «СВК-высокая». Ни одного явного различия между группой «носитель» и группами или «СВК-низкая» или «СВК-высокая» обнаружено не было.
[00232] Типичные микрофотографии ГЭ-окрашенных срезов показаны на Фигуре 41.
[00233] Результаты ГС-иммуногистохимии представлены на Фигуре 42. ГС-положительные узлы были обнаружены в срезах шести из восьми мышей в группе «носитель», пяти из шести мышей в группе «СВК-низкая» и семи из семи мышей в группе «СВК-высокая», соответственно.
[00234] Типичные микрофотографии ГС-окрашенных срезов показаны на Фигуре 42.
[00235] Результаты CD31-иммуногистохимии представлены на Фигурах 43 и 44, и в таблице 21. Область, положительно окрашенная CD31, имела тенденцию к уменьшению в группе «СВК-низкая» по сравнению с группой «носитель». Область, положительно окрашенная CD31, имела тенденцию к увеличению в группе «СВК-высокая» по сравнению с группой «носитель» (носитель: 2,71±1,36%, СВК-низкая: 1,47±1,10%, СВК-высокая: 3,68±1,37%).
[00236] Типичные микрофотографии CD31-окрашенных срезов показаны на Фигуре 43.
Таблица 21: Гистологические анализы на 18 неделю
Показатель
(Среднее+стандартное отклонение)		 Носитель
(n=8)		 Сенекривирок-низкая
(n=6)		 Сенекривирок-высокая
(n=7)
CD31-положительная область (%) 2,71+1,36 1,47+1,10 3,68+1,37
Таблица 22: Р-значения на 18 неделю
Р-значение (t-тест Стьюдента, односторонний) Масса тела Масса печени Соотношение массы печени к массе тела Количество видимых опухолевых узлов Максимальный диаметр видимых опухолевых узлов CD31-положительная область
Носитель против сенекривирок-низкая 0,4758 0,4215 0,341 0,3191 0,3812 0,0456
Носитель против сенекривирок-высокая 0,0574 0,4476 0,184 0,2578 0,3096 0,0972
Р-значения (логранговый критерий) Кривая выживания
Носитель против сенекривирок-низкая 0,7513 [0001]
Носитель против сенекривирок-высокая 0,5701 [0001]
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
[00237] В ходе исследований на 9 неделю отмечено, что лечение низкой и высокой дозой СВК значительно уменьшало площадь фиброза в зависимости от дозы, демонстрируя антифиброзный эффект СВК в настоящем исследовании. Лечение низкой и высокой дозой СВК также снижало уровни экспрессии мРНК коллагена 1 типа и содержание гидропроксипролина в печени, обеспечивая его антифиброзное свойство. В группах, подвергаемых лечению СВК, существенно снижался уровень АЛТ в плазме крови и НАС по сравнению с группой «носитель» в зависимости от дозы. Улучшение в НАС было связано с уменьшением лобулярного воспаления и баллонирования гепатоцитов. Поскольку баллонирование гепатоцитов происходит от окислительного стресса, вызванного гепатоцеллюлярным повреждением, и связано с прогрессированием заболевания НАСГ [26; 27], то настоятельно рекомендуется, чтобы СВК улучшало патологию НАСГ путем ингибирования повреждения гепатоцитов и баллонирования. Вместе с тем СВК обладает потенциальными анти-НАСГ и гепатопротекторными эффектами в данном исследовании.
[00238] Как было показано на людях, уровни МХБ-1 в плазме крови повышаются путем СВК-терапии по настоящему исследованию, что указывает на дозозависимый антагонизм CCR2 по СВК, но уровни МБВ-1β не показали каких-либо существенных изменений от терапии. Для изучения механизма действия СВК, мы оценивали влияние СВК на популяцию макрофагов. Предварительные результаты продемострировали, что СВК показывал тенденцию к высокому соотношению М1/М2 по сравнению с группой «носитель», предполагая, что СВК мог ингибировать фиброгенез посредством регулирования баланса субпопуляции макрофагов в воспаленной печени. Это будет проверено в будущем.
[00239] В ходе исследований на 18 неделю не установлено воздействие на ГЦК, вызванную НАСГ, в группах, подвергаемых лечению СВК. В заключение, СВК продемонстрировал анти-НАСГ, гепатопротекторное и антифиброзное действие в настоящем исследовании.
Пример 19: Рецептор-связывающие свойства СВК и метаболитов
[00240] СВК обладает уникальным свойством в условиях in vitro, являясь антагонистом CCR2 в 50% ингибирующей концентрации (ИК 50), 5,9 нмоль/л. СВК дозозависимо ингибирует связывание цитокина А5, МБВ-1α и МБВ--1 в CCR5-экспрессирующих клетках яичника китайского хомячка (СНО) при ИК50 3,1, 2,3, и 2,3 нмоль/л, соответственно. СВК достигал ≥90% занятости рецептора в организме человека в условиях ex vivo для CCR5 при концентрациях 3,1 нмоль/л для CD4+, и 2,3 нмоль/л для CD8+Т-клеток. СВК ингибирует связывание МХБ-1 к CCR2b при ИК50 в 5,9 нмоль/л. СВК достигал ~ 98% занятости рецептора CCR2 на моноцитах при 6 нмоль/л в организме человека в условиях ex vivo и снижал экспрессию CCR2 на моноцитах при отсутствии МХБ-1. СВК слабо ингибировал связывание лиганда с CCR3 и CCR4. CVC не ингибировал связывание лиганда с CCR1 или CCR7. СВК блокировал цитокин А5-индуцированную Ca2+ активацию.
[00241] Два метаболита СВК (М-I и M-II) были обнаружены в опытах на животных (смотри пример 20); M-II был основным метаболитом у обезьян и собак, М-I был второстепенным метаболитом у всех видов. М-I ингибировал связывание цитокина А5 с CCR5-экспрессирующими клетками при ИК50 в 6,5 нмоль/л, что является приблизительно двукратной ИК50 СВК. М-II не влиял на связывание цитокина А5.
Пример 20: Идентификация метаболитов
[00242] После однократного перорального введения [14С]-СВК в дозе 3 мг/кг сытым животным, неизменный СВК был основным компонентом, обнаруженным в плазме крови крыс и собак, соотношение AUC0-24 СВК к общему количеству 14C составляло 58,9% и 47,4%, соответственно [44]. У обезьян данное соотношение составляло только 12,9%, в то время как было обнаружено относительно большое количество метаболита М-II, соотношение AUC0-24 М-II к общему количеству 14C составляло 34,3%. В частности, у собак и обезьян количество M-II было значительно выше после перорального введения, чем после внутривенного введения. Эти результаты свидетельствуют о том, что СВК может быть метаболизирован в M-II до достижения системного кровотока. Второстепенные метаболиты, в том числе М-I, Т-1184803 и Т-1169518, были также обнаружены в плазме крови крыс, собак и обезьян. Можно предположить, что метаболит M-I образуется путем окисления фрагмента сульфинила СВК и что M-II образуется последующим восстановлением фрагмента сульфинила с разрывом C-S связи группы [(1-пропил-1Н-имидазол -5-ил) метил]сульфинила, с последующим S-метилированием.
КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ
Пример 21: Результаты кратковременной эффективности у ВИЧ-1-инфицированных взрослых пациентов
Способы
[00243] Стадия 2a двойного слепого, рандомизированного, плацебо-контролируемого, доза-увеличивающего исследования, оценивающее противовирусную активность, ФК профиль, безопасность и переносимость монотерапии СВК в течение 10 дней у пациентов с CCR5-тропной ВИЧ-1 инфекцией. От участников требовалось быть прошедшими антиретровирусную терапию, не получавшими антагонистов CCR5, с уровнем РНК ВИЧ-1 по меньшей мере 5000 копий/мл и содержанием CD4+клеток по меньшей мере 250 клеток/мм3. Группы из 10 субъектов последовательно включали в исследование в соотношении 4: 1 субъекта на когорту для получения СВК (25, 50, 75, 100 или 150 мг) или соответствующее плацебо. Все пациенты получали однократные суточные дозы СВК или плацебо в течение 10 суток, и наблюдались на 40 сутки.
Персональные данные и другие исходные характеристики
[00244] В общей сложности 54 субъекта были включены в данное исследование. Персональные данные были в целом аналогичны по дозовым группам. Большинство испытуемых в каждой дозовой группе были мужчинами (от 66,7% до 100%), а медиана возраста варьировала от 33,5 лет (группа «плацебо») до 45,0 лет (группа «150 мг»). Большинство испытуемых были кавказцами или афроамериканцами. Медиана ИМТ варьировала от 22,9 кг/м2 (группа «100 мг») до 27,4 кг/м2 (группа «25 мг»). Значения медианы РНК ВИЧ-1 варьировались от 4,00 log10 копий/мл (группа «150 мг») до 4,00 log10 копий/мл (группа «75 мг»). Медиана количества CD4+ клеток была самой высокой в группе «150 мг» (508,0 клеток/мм3) и варьировала от 402,0 до 460,0 клеток/мм3 по остальным группам.
Результаты эффективности и безопасности
[00245] СВК показал сильное влияние на уровни РНК ВИЧ-1, которые сохранялись после завершения лечения. Срединные изменения самого низкого уровня от исходного уровня для доз 25-, 50-, 75- и 150 мг составляли -0,7, -1,6, -1,8 и -1,7 log10 копий/мл, соответственно, у не получавших антагонистов CCR5, проходивших лечение ВИЧ-1-инфицированных субъектов. Данные результаты демонстрируют сильную антагонистическую CCR5 активность СВК. Среднее изменение уровней РНК ВИЧ-1 показано на Фигуре 45.
[00246] Экспериментальная оценка изменений уровней МХБ-1 (лиганд CCR2, который представляет собой корецептор хемокина, экспрессируемый на провоспалительных моноцитах, также известный как CCL2), вчСРБ и ИЛ-6 была выполнена и отмечено существенное дозозависимое увеличение уровней МХБ-1 (таблица 23).
[00247] На 10 сутки взвешенные средние уровней МХБ-1 были на 56,3, 94,2, 34,4, и 334,3 пг/мл выше исходного уровня в 25-, 50-, 75-и 150 мг дозовых группах, соответственно, по сравнению с небольшим снижением в группе «плацебо». При дозировках в 50- и 150 мг, данные результаты достигали статистической значимости (р=0,024 и р <0,001 соответственно). Данные результаты демонстрируют сильную антагонистическую CCR5 активность СВК. СВК не оказывает никакого влияния на уровни вчСРБ и ИЛ-6 в целом в данном 10-дневном исследовании.
Таблица 23
Показатель Плацебо 25 мг СВК 50 мг СВК 75 мг СВК 150 мг СВК
Исходный уровень, пг/мл n=10 n=9 n=7 n=7 n=8
Среднее 22,4 20,0 12,6 26,6 31,6
Медиана 18,5 16,0 6,0 8,0 19,5
Диапазон 6-50 7-44 5-37 5-92 8-82
10 сутки, пг/мл n=10 n=9 n=7 n=7 n=8
Среднее 21,0 75,3 101,3 59,1 372,0
Медиана 12,5 39,0 65,0 43,5 368,0
Диапазон 5-52 10-287 21-266 20-128 79-605
Изменение исходного уровня к 10 суткам n=10 n=9 n=7 n=7 n=8
ПС -1,9 +56,3 +94,2 +34,4 +333,4
P-значенияа -- 0,095 0,024 0,222 <0,001
Медиана 0,0 +25,0 +56,0 +36,0 +322,0
Аббревиатура: ПС - предел среднего.
a P-значения были односторонними и основаны на сравнении каждой дозы СВК с плацебо без поправок на множественные сравнения.
Нежелательные явления
[00248] Сенекривирок в целом хорошо переносился в исследуемых дозах и проблем безопасности не выявили. Ни одного смертельного случая, СНЯ или другого значимого НЯ не наблюдали, и не наблюдали досрочного завершения терапии из-за НЯ. Большинство НЯ, возникших в ходе лечения, были легкой или умеренной степени тяжести. Субъекты, которые получали 150 мг СВК (т.е. максимальную исследуемую дозу), страдали большим количеством НЯ по сравнению с субъектами в других дозовых группах, хотя тяжесть НЯ была сопоставимой во всех дозовых группах. Наиболее распространенные НЯ, возникших в ходе лечения, (≥10%) в данном исследовании были тошнота (18,5%), диарея (16,7%), головная боль (14,8%), и усталость (11,0%).
Лабораторная безопасность
[00249] 6 субъектов было с повышенными АЛТ и/или АСТ в «25 мг» (2 субъекта), «50 мг « (2 субъекта), «100 мг «(1 субъект) и «150 мг» (1 субъект) дозовых групп, а также 1 субъект с повышенным АСТ в группе «плацебо» в течение периода наблюдения. Все повышения уровней были 1 степени, были изолированными, кроме 2-х субъектов (оба в дозовой группе «50-мг»), которые имели более чем одно повышение, и решенное без последствий. 2 субъекта, которые имели более одного повышения уровня были в дозовой группе «50 мг», и один из этих субъектов имел 1-ю первую степень повышенной АСТ в начале исследования. Повышенные уровни АСТ, наблюдаемые у субъектов в дозовых группах «100 мг» и «150 мг» во ходе лечения (наблюдаемые у 1 субъекта в каждой дозовой группе), возвращались к нормальным значениям при продолжении лечения. Ни одного повышения уровней AЛT или АСТ до 2-4 степени не произошло во время исследования.
[00250] Отклонения лабораторных показателей только 3 степени или выше были в дозовой группе «25 мг» - гипофосфатемия 3 степени, которая присутствовала перед введением препарата, в дозовой группе «50 мг» - повышенные уровни триглицеридов 4 степени у субъекта, который имел повышенные триглицериды 3 степени в начале исследования, и отклонения в уровнях амилазы и липазы 3 и 4 степени, соответственно, у субъекта с предшествующей историей панкреатита.
Сердечно-сосудистая безопасность и физические обследования
[00251] Артериальную систолическую гипертензию 3 степени наблюдали у субъекта в дозовой группе «150 мг», который страдал артериальным систолическим давлением 2 степени в начале исследования. Не было никаких клинически значимых результатов физического обследования или ЭКГ.
[00252] Как было описано ранее, СВК имеет двойную активность как антагонист CCR5 и CCR2. Экспериментальная оценка изменений МХБ-1 (лиганд CCR2, также известный как CCL2), вчСРБ и ИЛ-6 была выполнена и отмечено существенное дозозависимое увеличение МХБ-1 (см. таблицу 24). На 10 сутки взвешенные средние уровней МХБ-1 были на 56,3, 94,2, 34,4, и 334,3 пг/мл выше базового уровня в 25-, 50-, 75-и 150 мг дозовых группах, соответственно, по сравнению с небольшим снижением в группе «плацебо». При дозировках в 50- и 150 мг, данные результаты достигали статистической значимости (р=0,024 и р <0,001 соответственно). Данные результаты демонстрируют сильную антагонистическую CCR5 активность СВК. СВК не оказывает никакого влияния на уровни вчСРБ и ИЛ-6 в целом в данном 10-дневном исследовании.
Таблица 24: Обобщенные результаты по уровням МХБ-1 когорты - исследование 201
Показатель Плацебо 25 мг СВК 50 мг СВК 75 мг СВК 150 мг СВК
Исходный уровень n=10 n=9 n=7 n=7 n=8
Среднее 22,4 20,0 12,6 26,6 31,6
Медиана 18,5 16,0 6,0 8,0 19,5
Диапазон 6-50 7-44 5-37 5-92 8-82
10 сутки, пг/мл n=10 n=9 n=7 n=8 n=8
Среднее 21,0 75,3 101,3 59,1 372,0
Медиана 12,5 39,0 65,0 43,5 368,0
Диапазон 5-52 10-287 21-266 20-128 79-605
Изменение исходного уровня к 10 суткам n=10 n=9 n=7 n=7 n=8
ПС -1,9 +56,3 +94,2 +34,4 +334,3
P-значенияа -- 0,095 0,024 0,222 <0,001
Медиана 0,0 +25,0 +56,0 +36,0 +322,0
Аббревиатура: ПС - предел среднего.
a P-значения были односторонними и основаны на сравнении каждой дозы СВК с плацебо без поправок на множественные сравнения.
Данные устойчивости
[00253] В исследовании 201, анализ лекарственной устойчивости проводили в начале исследования, на 7 сутки, и на 40 сутки (или в визит досрочного прекращения участия в исследовании, если это применимо) Все субъекты с оцениваемыми образцами оставались полностью чувствительными к СВК.
Тропизм вируса
[00254] Все субъекты в исследовании 201 были протестированы на тропизм вируса, чтобы исключить то, что их вирус был CXCR4-тропным или двойным/смешанным. Все субъекты имели CCR5-тропные вирус при скрининге (на основе теста с повышенной чувствительностью). В общей сложности у 39 субъектов, получавших СВК, оценивали образцы после лечения, и у одного из этих субъектов (в дозовой группе «150 мг СВК») на 10 сутки обнаружили двойной/смешанный-тропный вирус. Дальнейшее тестирование (в другой лаборатории с использованием другого анализа) показало, что данный субъект имел в основном CXCR4-тропный вирус в начале исследования, поэтому, данный субъект не должен был быть включен в исследование согласно критериям включения. Данный субъект не ответил на лечение СВК; самое большое снижение РНК ВИЧ-1 у данного субъекта составило 0,13 log10 копий/мл ниже исходного уровня.
Фармакокинетическо-фармакодинамические взаимосвязи
[00255] Для всех тестируемых доз в исследовании 201 наблюдали дозопропорциональное увеличение в воздействии для «Препарата F1», который использовали для всех, кроме когорты «100 мг доза».
[00256] Реакция на лекарственное средство была охарактеризована с использованием следующей модели максимального эффекта (Eмакс):
Figure 00000005
где Е - эффект, Е0 - базовый эффект (фиксированное значение 0), Imax - максимальное ингибирование, С обозначает переменную ФК (AUC0-24, Cмакс, или равновесную концентрацию [Css]), IC50 представляет собой значение переменной ФК, которая соответствует 50% от максимального ингибирования, а γ представляет собой параметр формы, который описывает степень сигмоидности.
[00257] Eмакс СВК в ФК/ФД составлял -1,43 log10 копий/мл. На основании модели Eмакс, средняя Css СВК для доз в 25, 50, 75 и 150 мг, должна была составить 54,9%, 79,8%, 85,9% и 95,9% от максимального ингибирующего эффекта препарата. Таким образом, уровни доз в 75 и 150 мг один раз в сутки проявляют мощную противовирусную активность, с ФД эффектами превышающими 80% Eмакс СВК у ВИЧ-1-инфицированных субъектов.
Пример 22: Результаты долговременной эффективности у ВИЧ-1-инфицированных взрослых пациентов
Результаты эффективности в исследовании 202
План исследования и цели
[00258] Данное 48-недельное сравнительное исследование представляло собой рандомизированное, двойное слепое, с двойной имитацией по оценке эффективности и безопасности 100 мг СВК и 200 мг СВК по сравнению с одобренным антиретровирусным агентом эфавиренцем (EFV, Sustiva®), все препараты вводили в комбинации с одобренным антиретровирусным агентом эмтрицитабином/тенофовиром дизопроксилом фумарата (FTC/TDF) ВИЧ-1-инфицированных, не проходивших антиретровирусную терапию взрослых пациентов только с CCR5-тропным вирусом. Субъекты с ВИЧ-2, гепатитом В и/или С, циррозом печени или любым известным активным или хроническим активным заболеванием печени в анамнезе были исключены из исследования.
[00259] Около 150 человек были запланированы для рандомизации (143 испытуемых были в действительности рандомизированы) в 2:2:1 соотношении между 100 мг СВК+плацебо, 200 мг СВК+плацебо или одобренному противовирусному агенту эфавиренцу (EFV)+плацебо, все препараты в комбинации с одобренными противовирусными средствами эмтрицитабином/тенофовиром дизопроксилом фумарата (FTC/TDF), предоставляемыми как открытое исследуемое лекарственное средство в комбинированном лекарственном препарате с фиксированной дозой (TRUVADA®). Фармакокинетическую оценку проводили первым 25 изучаемым субъектам для подтвердждения того, что приемлемая концентрация СВК в плазме крови была достигнута в выбранных дозах в 100 мг СВК и 200 мг СВК, до включения оставшейся части исследуемой выборки.
Персональные и исходные характеристики
[00260] Большинство испытуемых были мужчинами (94%) и белокожими (62%) со средним возрастом 35 лет и средним индексом массы тела 26,2 кг/м2. В общей сложности, 32% испытуемых были чернокожими/афроамериканцами. Кроме того, 24% рандомизированных испытуемых имели латиноамериканское происхождение.
[00261] На момент начала исследования средняя продолжительность ВИЧ-1-инфекции (т.е. времени [месяцев] после первого положительного теста на ВИЧ-1 по дате информированного согласия) составляла 8 месяцев, среднее количество РНК ВИЧ-1 составляло 4,50 log10 копий/мл. (80% субъектов имели уровень вирусной нагрузки <100000 копий/мл), а среднее количество CD4+клеток составляло 402 клеток/мм3 (58% пациентов имели число CD4+клеток≥350 клеток/мм3).
Результаты первичной эффективности
[00262] Первичной конечной точкой эффективности был вирусологический ответ на 24-й неделе, определяемый как <50 копий/мл РНК ВИЧ-1 при использовании алгоритма мгновенного снимка, одобренного FDA. Процент субъектов с вирусологическим успехом (ответом) был сопоставим среди 3 групп лечения (76% с 100 мг СВК, 73% с 200 мг СВК, и 71% с EFV)). В группе «EFV» преждевременно выбыло из исследования больше пациентов (11 из 28 пациентов, 39%), чем в группе «100 мг СВК» (17 из 59 субъектов, 29%) и в группе «200 мг СВК» (15 из 56 субъектов, 27%).
[00263] Данные, полученные на 48 неделю, согласуются с данными, наблюдаемыми на 24 неделю. Процент пациентов с вирусологическим успехом в течение долгого времени был в целом сопоставим между 3-мя группами лечения, хотя на 48 неделю в группах СВК был выше по сравнению с группой «EFV» (68% с 100 мг СВК, 64% с 200 мг СВК, и 50% с EFV).
Дополнительный и поисковый анализы
Биомаркеры воспаления
[00264] В качестве поискового анализа измеряли уровни биомаркеров воспалительных процессов, МХБ-1, sCD14, высокочувствительного С-реактивного белка [вчСРБ], интерлейкина-6 [ИЛ-6], D-димера, и фибриногена). Исходные значения и изменения по сравнению с исходными уровнями МХБ-1, sCD14, вчСРБ, ИЛ-6, D-димера и фибриногена на 24 неделю и 48 неделю представлены в таблице 25.
Таблица 25
Показатель 100 мг СВК 200 мг СВК 600 мг EFV
N Среднее (СКО) Медиана (мин; макс) N Среднее (СКО) Медиана (мин; макс) N Среднее (СКО) Медиана (мин; макс)
МХБ-1 (пг/мл)
Исходное значение 55 128 (8,3) 110 (57; 337) 54 153 (8,4) 137 (68; 393) 28 139 (19,2) 122 (57;608)
Изменение по сравнению с исходным значением на 24 неделю неделю 48 493 (46,2)*
429(184; 2352)		 44 753 (50,2)*
695 (48; 1557)		 21 -44(24,1)
-17 (-471; 77)
Изменение по сравнению с исходным значением на 48 неделю 41 636 (63,8)*
523 (220;2616)		 39 900 (90,9)*
756 (121; 3259)		 18 4,2 (29,49)
33,6 (-437; 175)
sCD14 (x 106 пг/мл) (исходные значения)
Исходное значение 55 1,80 (0,062)
1,73 (1,07; 3,77)		 54 1,88 (0,069)
1,86 (1,05; 3,76)		 28 2,00 (0,105)
2,02 (0,93; 3,95)
Изменение по сравнению с исходным значением на 24 неделю 48 -0,19(0,064)*
-0,18 (-1,33; 0,95)		 44 -0,23(0,066)*
-0,19 (-1,78; 0,80)		 21 0,23 (0,143)
0,13 (-1,60; 1,33)
Изменение по
сравнению с исходным значением на 48 неделю		 41 0,10 (0,070)*
0,10 (-0,63; 1,96)		 39 -0,04 (0,081)*
-0,04 (-1,24; 1,15)		 18 0,64 (0,178)
0,46 (-0,50; 2,51)
чсСРБ (мг/дл)
Исходное значение 57 0,39 (0,128) 54 0,46 (0,149) 28 0,81 (0,374)
0,15 (0,01; 6,48) 0,15 (0,02; 6,81) 0,14 (0,02; 9,81)
Изменение по сравнению с исходным значением на 24 неделю 52 -0,16(0,121) -0,03 (-6,07; 0,86) 49 -0,04 (0,138 -0,04(-4,03; 4,72) 21 -0,46 (0,529)-0,01 (-9,26; 4,12)
Изменение по сравнению с исходным значением на 48 неделю 44 -0,08 (0,161) -0,01 (-6,22; 2,72) 40 -0,18 (0,114) -0,04 (-4,13; 0,67) 20 -0,71 (0,484) -0,03 (-8,93; 0,17)
ИЛ-6 (пг/мл)
Исходное значение 57 2,51 (0,306) 1,90 (1,90; 18,00) 52 3,34 (0,561) 1,90 (1,90; 21,50) 28 13,81 (9,418) 1,90(1,90; 264,00)
Изменение по сравнению с исходным значением на 24 неделю 52 0,42 (0,375) 0,00 (-4,80; 12,80) 47 0,81 (0,877) 0,00 (-12,10; 33,80) 21 -8,72 (7,518) 0,00 (-149,00; 29,70)
Изменение по сравнению с исходным значением на 48 неделю 44 0,29 (0,362) 0,00 (-5,20; 10,90) 38 -0,04 (0,471) 0,00 (-12,10; 7,70) 20 -13,11 (10,320) 0,00 (-204,10; 5,00)
D-димер (нг/мл)
Исходное значение 56 187 (21,1)
150 (49; 800)		 54 184(19,0)
125 (49; 750)		 27 163 (19,0)
150 (49; 450)
Изменение по сравнению с исходным значением 24 неделю 51 -32 (25,4) -1,0 (-550; 801) 49 -64(16,2) -50 (-500; 100) 20 -53 (24,7) -26 (-350; 150)
Изменение по сравнению с исходным значением 48 неделю 42 -41 (23,1) -1,0 (-650; 250) 40 -70 (21,3) -50 (-701; 100) 19 -34 (25,7) 0.0 (-300; 150)
Фибриноген (мг/дл)
Исходное значение 55 236 (6,7) 229(134; 409) 54 248 (8,6) 260 (86; 429) 28 258 (16,9) 245 (139; 510)
Изменение по сравнению с исходным значением 24 неделю 50 -3 (8,0)
-14 (-121; 198)		 49 -7 (11,7)
-8 (-187; 231)		 21 -28 (19,0) -31 (-227; 174)
Изменение по сравнению с исходным значением 48 неделю 41 11 (10,2)# 15 (-127; 186) 40 -10(8,8)# -13 (-103; 140) 20 -30(15,9) -22 (-164; 109)
N=количество субъектов.
Примечание: исходное значение было определено как последнее значения без оценки до начала и, не отсутствующей оценки до начала лечение в рамках исследования.
*Попарное сравнение с EFV, используя предел среднего на основе 011 модели ANCOVA с факторами: лечение, исходный уровень и РНК ВИЧ-1 в начале исследования, показали, р-значения <0,001.
#Различия между группами лечения, согласно оценке критерием Манна-Уитни-Уилкоксона для исходного уровня РНК ВИЧ-1, является статистически значимым (р-значения: 0,048).
[00265] Для СВК наблюдали дозозависимый эффект в повышении МХБ-1, лиганда CCR2, в течение продолжительного периода, в то время как в группе EFV МХБ-1 оставался на исходных уровнях (см. Фигуру 46). Различия в изменениях по сравнению с исходными уровнями МХБ-1 в плазме крови между группами лечения «EFV» и «100 мг СВК» и «200 мг СВК» достигали статистической значимости (р <0,001) на 24 неделю и 48 неделю (смотри таблицу 25).
[00266] Кроме того, наблюдали снижение sCD14 в течение 48 недель лечения (анализ смешанной линейной модели с повторными измерениями sCD14, смотри ниже) в обеих группах лечения СВК, в то время как в группе EFV наблюдали повышение sCD14 за тот же период наблюдения (смотри Фигуру 47). Растворимый CD14 представляет собой биомаркер активации моноцитов и был независимо связан с заболеваемостью и смертностью в больших, долгосрочных когортных исследованиях у ВИЧ-инфицированных пациентов, и с неблагоприятными клиническими результатами у больных с хроническим вирусным гепатитом и больных с тяжелой формой фиброза печени.
[00267] Образцы sCD14 первоначально анализировали в 2 отдельных сериях: серия 1 включала образцы первичного анализа на 24 неделе и серия 2 включала образцы с 32 недели и 48 недели (конец исследования). Результаты изменений sCD14 по сравнению с исходным показателем из 2-серийного анализа представлены в таблице 25. Повторный анализ всех анализируемых в одной серии архивных образцов был проведен на предмет соответствия анализу по всем временным точкам. Для учета влияния ковариаты, анализ линейной смешанной модели с повторными измерениями проводили по изменениям от базового уровня sCD14 (анализ, датированный сентябрем 2013 года). За исключением изменений по сравнению с исходным уровнем до 32 недели в группе «200 мг СВК», снижение уровней sCD14, наблюдаемое при СВК в обеих дозах (100 и 200 мг) в течение 48 недель лечения, (взвешенные средние уровни) достигали статистической значимости по сравнению с увеличением, наблюдаемым при EFV (р <0,05) (смотри таблицу 26 и Фигуру 47).
Таблица 26
Показатель 100 мг СВК 200 мг СВК 600 мг EFV
N Среднее (Ошибка среднего) Медиана (мин.; макс.) N Среднее (Ошибка среднего) Медиана (мин.; макс.) N Среднее (Ошибка среднего) Медиана (мин.; макс.)
Исходные значения: sCD14 (x 10 6 пг/мл) окончательный анализ на 48 неделю (июнь, 2013)
Исходное значение 55 1,80 (0,062) 1,73 (1,07; 3,77) 54 1,88 (0,069)
1,86 (1,05; 3,76)		 28 2,00 (0,105)
2,02 (0,93; 3,95)
Изменения по сравнению с исходным значением
12 неделя
Изменения по сравнению с исходным значением
24 неделя
Изменения по сравнению с исходным значением
32 неделя
Изменения по сравнению с исходным значением
48 неделя 		51
48
44
41		 -0,14 (0,054)*
-0,16 (-1,14; 0,95)
-0,19 (0,064)*
-0,18 (-1,33; 0,95)
0,11 (0,072)#
0,12 (-0,68; 1,39)
0,10 (0,070)*
0,10 (-0,63; 1,96)		 50
44
43
39		 -0,23 (0,070)*
-0,21 (-2,39; 0,83)
-0,23 (0,066)*
-0,19 (-1,78; 0,80)
-0,02 (0,084)*
-0,02 (-1,53; 1,00)
-0,04 (0,081)*
-0,04 (-1,24; 1,15)		 22
21
19
18		 0,09 (0,160)
0,18 (-1,45; 1,61)
0,23 (0,143)
0,13 (-1,60; 1,33)
0,48 (0,186)
0,17 (-0,97; 2,18)
0,64 (0,178)
0,46 (-0,50; 2,51)
[00268] Изменения уровней других биомаркеров воспаления (чсСРБ, ИЛ-6, D -димер) были похожи в группах лечения СВК и EFV.
Индексы APRI и FIB-4
[00269] Кроме того, в ретроспективном анализе данных этого исследования, включавшего субъекты без видимой болезни печени по строгим критериям (ВИЧ-1-инфекция, не сопровождающаяся АЛТ/АСТ≤2, общим билирубином ≤ верхняя граница нормы, ВГВ и/или ВГС, активным или хроническим заболеванием печени, циррозом или ИМТ> 35 кг/м2), наблюдали улучшения в индексе отношения АСТ к количеству тромбоцитов (APRI) и в неинвазивной оценке стадии фиброза печени, сочетающей стандартные биохимические показатели, показатели уровня тромбоцитов, АЛТ, АСТ, и возраста (индекс FIB-4), в течение долгого времени у≥10% всех субъектов, подвергаемых лечению СВК (объединенные данные для 100 мг и 200 мг СВК) (Фигура 48). В группе EFV у 5% субъектов на 24 неделю и у 6% субъектов на 48 неделю отмечали снижение индекса APRI на один балл по сравнению с исходным уровнем; не было субъектов, подвергаемых лечению EFV, у которых снижался индекс FIB-4 на один балл, когда у всех субъектов были баллы <1,45 в исходном состоянии.
[00270] Как было упомянуто выше, в данном исследовании, СВК также оказывает существенное влияние на sCD14, что является важным маркером активации моноцитов. В тех же ретроспективних анализах, описанных выше, наблюдали статистически значимые корреляции между изменениями в индексе FIB-4 и уровнях sCD14 у субъектов, подвергаемых лечению СВК, на 24 неделю, а также между изменениями в индексах APRI и FIB-4 и уровнях sCD14 на 48 неделе. Результаты 48 недели представлены на Фигуре 49 и Фигуре 50.
Результаты безопасности
Длительность лечения
[00271] Средняя продолжительность приема исследуемого препарата (СВК или EFV) была длинней в группе СВК, чем в группе лечения EFV (41,2 и 40,9 недель с 100 мг и 200 мг СВК, соответственно, по сравнению с 36,2 неделями с EFV), что было обусловлено более высокой частотой прекращения лечения в группе EFV.
Краткое описание всех нежелательных явлений
[00272] В общей сложности 51 субъект (88%), 48 субъектов (84%), и 27 субъектов (96%) имели по меньшей мере 1 НЯ, соответственно, для 100 мг СВК, 200 мг СВК и группы EFV. Наиболее часто сообщалось о НЯ (термины предпочтительного употребления у≥10% субъектов в любой из 3 групп лечения), которые представляли собой тошноту, инфекции верхних дыхательных путей, диарею, головную боль, сыпь, усталость, головокружение, назофарингит, необычные сновидения, бессонницу, увеличение лимфатических узлов, депрессию и люес (таблица 27). Из этих НЯ наиболее часто сообщали о головной боли, усталости, и инфекции верхних дыхательных путей, при этом чаще сообщали в группах СВК, чем в группе EFV; и о головокружении, необычных сновидениях, бессоннице, депрессии, увеличении лимфатических узлов, а также люесе чаще сообщалось в группе EFV, чем в группах СВК.
Таблица 27
Термин предпочтительного
употребления, n (%) 		100 мг CVC
(N=58)		 200 мг CVC (N=57) Все СВК
(N=115)		 EFV
(N=28)
Средняя (СКО) продолжительность
приема исследуемого
препарата (недели ) 0 		41,2 (1,89) 40,9 (1,88) 41,1 (1,33) 36,2 (3,64)
Любое НЯ 51 (88%) 48 (84%) 99 (86%) 27(96%)
Тошнота 10 (17%) 8 (14%) 18(16%) 6(21%)
Инфекция верхних
дыхательных путей		 9(16%) 9 (16%) 18(16%) 2 (7%)
Диарея 7 (12%) 10 (18%) 17(15%) 3 (11%)
Головная боль 9(16%) 7 (12%) 16(14%) 0
Высыпания 7 (12%) 7 (12%) 14(12%) 5 (18%)
Усталость 6 (10%) 8 (14%) 14(12%) 1 (4%)
Головокружение 5 (9%) 6 (11%) 11 (10%) 8 (29%)
Назофарингит 2 (3%) 8 (14%) 10 (9%) 1 (4%)
Необычные сновидения 6 (10%) 3 (5%) 9 (8%) 6(21%)
Бессонница 0 7 (12%) 7 (6%) 4 (14%)
Лимфаденопатия 3 (5%) 4 (7%) 7 (6%) 4 (14%)
Депрессия 2 (3%) 1 (2%) 3 (3%) 3 (11%)
Люес 1 (2%) 0 1 (1%) 3 (11%)
N=количество субъектов: n=количество наблюдений.
Примечание: Нежелательные явления кодировали с использованием MedDRA версии 13.1. Приведены только нежелательные явления с датой начала и с датой первого приема исследуемого препарата в пределах 30 суток после прекращения приема исследуемого препарата. Представлены данные для субъектов, которые испытали то же кодированное событие более одного раза и только событие с самой высокой степенью тяжести.
аОбратите внимание, что экспозиция основана на ITT-выборке.
bвключает сыпь, пятнисто-папулезная сыпь, зудящая сыпь, уртикария и папулезная сыпь.
[00273] Большинство НЯ были легкими или умеренными (1 степень или 2 степень). НЯ 3 или 4 степени приведены в таблице 29. Процент пациентов, который испытывал НЯ≥3 степени, в группах СВК (всего 4%) был ниже, чем в группе EFV (15%). Один субъект (cубъект 06007) в группе EFV имел 4 степень НЯ, которое было признано серьезным - суицидальные мысли. Ни один из НЯ 4 степени не был зарегистрирован у субъектов, подвергаемых лечению СВК. Ни один из НЯ≥3 степени (термины предпочтительного употребления) не было зарегистрировано у более чем 1 субъекта. Таблица 28 представляет собой обзор смертей, СНЯ, НЯ, НЯ по степени тяжести, НЯ, связанные с приемом исследуемого препарата, и НЯ, ведущих к прекращению терапии.
Таблица 28
Количество субъектов с НЯ, n (%) 100 мг
СВК		 200 мг
СВК		 Все СВК EFV
(N=58) (N=57) (N=115) (N=28)
Средняя (СКО) продолжительность приема исследуемого препарата,
(недели)		 41,2 (1,89) 40,9 (1,88) 41,1 (1,33) 36,2 (3,64)
Субъекты с >1 НЯ 51 (88%) 48 (84%) 99 (86%) 27 (96%)
Субъекты с НЯ, по степени тяжести:
1 степень 31 (53%) 19 (33%) 50 (43%) 10 (36%)
2 степень 18 (31%) 26 (46%) 44 (38%) 13 (46%)
3 степень 2 (3%) 3 (5%) 5 (4%) 3 (11%)
4 степень 0 0 0 1 (4%)
Субъекты с НЯ, связанными с исследуемым препаратом** 29 (50%) 25 (44%) 54 (47%) 20 (71%)
Субъекты с НЯ, вызвавшие прекращение приема исследуемого препарата 0 1 (2%) 1 (1%) 6(21%)
Субъекты с серьезными НЯ 1 (2%) 1 (2%) 2 (2%) 1 (4%)
Количество смертей 0 0 0 0
N=количество субъектов n=количество наблюдений.
Примечание: Нежелательные явления кодировали с использованием MedDRA версии 13.1. Приведены только нежелательные явления с датой начала и с датой первого приема исследуемого препарата в пределах 30 суток после прекращения приема исследуемого препарата. Представлены данные для субъектов, которые испытали то же закодированное событие более одного раза и только событие с самой высокой степенью тяжести.
аОбратите внимание, что экспозиция основана на ITT-выборке.
bНЯ, в соответствии с мнением исследователя, принято считать меньшей мере, возможно, связанными с приемом исследуемого препарата (то есть СВК, EFV или FTC).
Таблица 29
Предпочтительный термин употребления классификации по системам органов, 100 мг СВК 200 мг СВК Все СВК EFV
n (%) (N=58) (N=57) (N=115) (N=28)
Средняя (СКО) продолжительность приема исследуемого препарата(недели) а 41,2 (1,89) 40,9 (1,88) 41,1 (1,33) 36,2 (3,64)
Любое НЯ 3 степени 2 (3%) b 3 (5%) c 5 (4%) 3 (11%)
Любое НЯ 4 степени 0 0 0 1 (4%)
Исследования 0 1 (2%) 1 (1%) 1 (4%)
Увеличение уровня креатинфосфокиназы в крови 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Снижение массы 0 0 0 1 (4%)
Психические расстройства 1 (2%) 0 1 (1%) 1 (4%)
Депрессия 0 0 0 1 (4%)
Стресс 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Суицидальные мысли 0 0 0 1 (4%)
Нарушения со стороны сердца 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Учащенное сердцебиение 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Нарушения со стороны органа слуха и равновесия 0 0 0 1 (4%)
Звон в ушах 0 0 0 1 (4%)
Нарушения со стороны органа зрения 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Односторонняя медицинская слепота 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Боль в животе 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Общие расстройства и нарушения в
месте введения 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Лихорадочное состояние 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Инфекции и инвазии 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Инфекции роговицы 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Нарушения со стороны кожи и подкожных тканей 0 0 0 1 (4%)
Аллергический дерматит 0 0 0 1 (4%)
N=количество субъектов; 11 =количество наблюдений.
Примечание: нежелательные явления кодировали с использованием MedDRA версии 13.1. Приведены только нежелательные явления с датой начала и с датой первого приема исследуемого препарата в пределах 30 суток после прекращения приема исследуемого препарата. Представлены данные для субъектов, которые испытали то же кодированное событие более одного раза и только событие с самой высокой степенью тяжести.
aОбратите внимание, что экспозиция основана на ITT-выборке.
bСубъекты 10004 и 54001 в группе «100 мг СВК».
cСубъекты 06009, 42001 и 45005 в группе «200 мг СВК».
dСубъекты 06005, 06007, 46003 и 48001 в группе «EFV».
еПримечание: Данные (суицидальные мысли в группе «EFV») явления были 4 степени: все остальные явления были 3 степени.
[00274] Серьезные нежелательные явления представлены в таблице 30.
Таблица 30 - Количество субъектов (%) со серьезными нежелательными явлениями спустя 48 неделю - выборка для оценки безопасности
Предпочтительный термин употребления классификации по системам органов, n (%) 100 мг СВК
(N=58)		 100 мг СВК
(N=57)		 Все СВК
(N=115)		 EFV
(N=28)
Средняя (СКО) продолжительность приема исследуемого препарата (недели) а 41,2 (1,89) 40,9 (1,88) 41,1 (1,33) 36,2 (3,64)
Любое СНЯ 1 (2%) 1 (2%) 2 (2%) 1 (4%)
Инфекции и инвазии 1 (2%) 1 (2%) 2 (2%) 0
Инфекции роговицы 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Гастроэнтерит 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Нарушения со стороны органа зрения 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Односторонняя медицинская слепота 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Психические расстройства 0 0 0 1 (4%)
Депрессия 0 0 0 1 (4%)
Стресс 0 0 0 1 (4%)
N=количество субъектов: n=количество наблюдений.
Примечание: нежелательные явления кодировали с использованием MedDRA версии 13.1. Приведены только нежелательные явления с датой начала и с датой первого приема исследуемого препарата в пределах 30 суток после прекращения приема исследуемого препарата. Представлены данные для субъектов, которые испытали то же кодированное событие более одного раза и только событие с самой высокой степенью тяжести.
аОбратите внимание, что экспозиция основана на ITT-выборке.
Нежелательные явления, приведшие к досрочному завершению терапии
[00275] НЯ, приведшие к прекращению исследования препарата, представлены в таблице 31. В общем, НЯ, приведшие к прекращению исследования препарата, возникали у 1 субъекта (2%) в группе «200 мг СВК» и у 6 субъектов (21%) в группе «EFV». НЯ (термины предпочтительного употребления), приведшие к прекращению исследования препарата, которые были зарегистрированы у более чем 1 субъекта, представляли собой бессонницу и головокружение, о которых сообщили 3 и 2 субъекта, соответственно, в группе «EFV», и депрессию, о которой сообщили 1 субъект в группе «200 мг СВК» и 1 субъект в группе «EFV» (бессонница, головокружение и депрессия являются общими НЯ для EFV).
Таблица 31 - Количество субъектов (%) с нежелательными явлениями, приведшими к прекращению исследования препарата спустя 48 недель - выборка для оценки безопасности
100 мг 200 мг Все
Предпочтительный термин употребления СВК СВК СВК EFV
классификации по системам органов, n (%) (N=58) (N=57) (N=115) (N=28)
Средняя (СКО) продолжительность приема
исследуемого препарата (недели )а 41,2(1,89) 40.9 (l,88) 41,1 (1,33) 36,2 (3,64)
Любое НЯ, приводящее к прекращению
приема исследуемого препарата 0 1 (2%)b 1 (1%) 6 (21%)c
Нарушение нервной системы 0 0 0 4 (14%)
Головокружение 0 0 0 2 (7%)
Расстройства внимания 0 0 0 1 (4%)
Гипестезия 0 0 0 1 (4%)
Психические расстройства 0 1 (2%) 1 (1%) 3 (11%)
Асомния 0 0 0 3 (11%)
Депрессия 0 1 (2%) 1 (1%) 1 (4%)
Необычные сновидения 0 0 0 1 (4%)
Агрессия 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Тревожное расстройство 0 0 0 1 (4%)
Тахифрения 0 0 0 1 (4%)
Патологическое мышление 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Нарушения со стороны кожи и подкожных тканей 0 0 0 2 (7%)
Аллергический дерматит 0 0 0 1 (4%)
Кожная сыпь 0 0 0 1 (4%)
Нарушения со стороны органа слуха и равновесия 0 0 0 1 (4%)
Звон в ушах 0 0 0 1 (4%)
Нарушения со стороны органа зрения 0 0 0 1 (4%)
Фотофобия 0 0 0 1 (4%)
Нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта 0 0 0 1 (4%)
Тошнота 0 0 0 1 (4%)
Общие расстройства и нарушения в
месте введения 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Чувство дискомфорта 0 1 (2%) 1 (1%) 0
Нарушения со стороны скелетно-мышечной и
соединительной ткани 0 0 0 1 (4%)
Костно-мышечный дискомфорт 0 0 0 1 (4%)
N=количество субъектов: n=количество наблюдений.
Примечание: нежелательные явления кодировали с использованием MedDRA версии 13.1. Приведены только нежелательные явления с датой начала и с датой первого приема исследуемого препарата в пределах 30 суток после прекращения приема исследуемого препарата. Представлены данные для субъектов, которые испытали то же кодированное событие более одного раза и только событие с самой высокой степенью тяжести.
аОбратите внимание, что экспозиция основана на ITT-выборке.
bСубъект Subject 06001 в группе «200 мг СВК».
сСубъект 02016, 16031, 20004, 26001, 46003 и 48001 в группе «EFV».
[00276] Краткий обзор числа субъектов с расположением по степени отклонений лабораторных показателей от нормы, возникших после начала лечения, приведен в таблице 32.
Таблица 32
Отклонения лабораторных показателей по степени тяжести, n (%)a 100 мг СВК
(N=58)		 200 мг СВК
(N=57)		 Все
СВК
(N=115)		 EFV
(N=28)
Отклонения любой степени (1-4 степени) 51 (88%) 55 (96%) 106 (92%) 25 (89%)
1 степень 21 (36%) 16(28%) 37 (32%) 13 (46%)
2 степень 23 (40%) 27 (47%) 50 (43%) 8 (29%)
3 степень 4 (7%) 9(16%) 13 (11%) 3 (11%)
4 степень 3 (5%) 3 (5%) 6 (5%) 1 (4%)
N=количество субъектов: n=количество наблюдений.
aПроцентное соотношение основано на числе субъектов, проходивших лабораторное исследование.
[00277] Отклонения лабораторных показателей от нормы, возникших после начала лечения, 3 или 4 степени (тяжелые степени токсичности) приведены в таблице 33. У субъектов с 3 степенью или 4 степенью отклонений лабораторных показателей в процентном отношении не было никаких различий между группами, за исключением отклонений в КФК, которые чаще наблюдали в группе «200 мг СВК».
Таблица 33 - Лабораторные показатели 3 степени и 4 степени, возникшие во время лечения, (тяжелая степень; DAIDS) спустя 48 недель - выборка для оценки безопасности
Отклонения лабораторных показателей по степени тяжести, n (%) a 100 мг СВК 200 мг СВК Все СВК EFV
(N=58) (N=57) (N=115) (N=28)
Любое отклонение 3 или 4 степени 7(12%) 12(21%) 19(17%) 4 (14%)
Любое отклонение 3 степени 4 (7%) 9 (16%) 13 (11%) 3 (11%)
Любое отклонение 4 степени 3 (5%) 3 (5%) 6 (5%) 1 (4%)
Химия
Повышение уровня
аспартатаминотрансферазы (АСТ) (3 или 4 степени) 1 (2%) 0 1 (<1%) 0
3 степень 1 (2%) 0 1 (<1%) 0
4 степень 0 0 0 0
Повышение уровня креатинфосфокиназы
(КФК) (3 или 4 степени) 3 (5%) 9 (16%) 12 (10%) 2 (7%)
3 степень 2 (3%) 6(11%) 8 (7%) 2 (7%)
4 степень 1 (2%) 3 (5%) 4 (3%) 0
Снижение уровня фосфата (3 или 4 степени) 2 (3%) 2 (4%) 4 (3%) 1 (4%)
3 степень 2 (3%) 2 (4%) 4 (3%) 1 (4%)
4 степень 0 0 0 0
Коагулирование
Повышение протромбинового индекса/ международный коэффициент нормализации (3 или 4 степени)
1 (2%) 0 1 (< 1%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 1 (2%) 0 1 (< 1%) 0
Гематология
Снижение уровня фибриногена (3 или 4 степени) 0 2 (4%) 2 (2%) 0
3 степень 0 2 (4%) 2 (2%) 0
4 степень 0 0 0 0
Снижение уровня гемоглобина (3 или 4 степени) 1 (2%) 0 1 (< 1%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 1 (2%) 0 1 (< 1%) 0
Снижение содержания нейтрофилов (3 или 4 степени) 2 (3%) 0 2 (2%) 1 (4%)
3 степень 2 (3%) 0 2 (2%) 0
4 степень 0 0 0 1 (4%)
N =количество субъектов: n=количество наблюдений.
aПроцентное соотношение основано на числе субъектов, проходивших лабораторное исследование.
[00278] Повышение креатинфосфокиназы (КФК) 3 или 4 степени чаще наблюдали в группе «200 мг СВК», чем в двух других группах лечения. Из 12 субъектов с 3 или 4 степенью повышения КФК в группах СВК (3 субъекта, получавшие 100 мг СВК, и 9 субъектов, получавшие 200 мг СВК), 11 субъектов имели повышенные КФК (8 субъектов имели 3 степень и 3 субъекта имели 4 степень повышения), которые наблюдали в одной временной точке (примечание: 1 из этих 11 субъектов [субъект 48015] имел изолированное повышение КФК 3 степени на 8 неделю и 36 неделю). У 12-го субъекта (субъект 42001) было 2 последовательных повышения КФК (3 степень с последующей 4 степенью), которые вернулись к нормальным значениям при продолжении лечения в последующие посещения. Ни одно из повышений КФК не было связано с клиническими симптомами; ни один из субъектов не выбыл из исследования из-за повышений КФК и не было никаких различий в НЯ, связанных с нарушениями опорно-двигательной системы, между группами СВК и EFV.
[00279] Изменения по сравнению с исходным уровнем КФК показаны на Фигуре 51. В фактических значениях КФК или в изменениях по сравнению с исходным уровнем в любой из групп лечения с течением времени не наблюдали ни одной очевидной тенденции.
[00280] Количество субъектов с расположением по степени отклонений лабораторных показателей от нормы, возникших после начала лечения, в выбранных параметрах печени, представляющих интерес, приведено в таблице 34. Повышение АЛТ или АСТ 4 степени не наблюдали. Все повышения АЛТ и АСТ были 1 или 2 степени, за исключением одного повышения уровня АСТ 3 степени. Повышение АСТ 3 степени у 1 субъекта (48015 в группе «100 мг СВК») наблюдали в одной временной точке, и оно было бессимптомным; субъект не прекращал прием исследуемого препарата из-за повышения АСТ 3 степени и не сообщал о НЯ, связанном с повышением АСТ. Кроме того, данный субъект с повышенным АСТ 3 степени не имел какого-либо расположенного по степени повышения билирубина, но было одно единственное повышение КФК 3 степени в тот же самый визит, предусмотренный исследованием, когда отметили повышение АСТ 3 степени. Все отклонения в уровнях билирубина были 1 или 2 степени. Большинство повышений уровней АЛТ, АСТ и билирубина были временными, возвращаясь к исходным значениям при последующих визитах при продолжении лечения, не были связаны с какими-либо клиническими симптомами и не привели к досрочному завершению терапии.
Таблица 34 - Лабораторные отклонения тяжелой степени (DAIDS), возникшие во время лечения, в выбранных параметрах печени спустя 48 недель - выборка для оценки безопасности
Отклонения лабораторных показателей по степени тяжести, n (%) a 100 мг СВК
(N=58)		 200 мг СВК
(N=57)		 Все
СВК
(N=115)		 EFV
(N=28)
Аланинаминотрансфераза (АЛТ) 7 (12%) 8 (14%) 15 (13%) 2 (7%)
1 степень 4 (7%) 6(11%) 10 (9%) 2 (7%)
2 степень 3 (5%) 2 (4%) 5 (4%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
Аспартатаминотрансфераза (АСТ) 11 (19%) 10 (18%) 21 (18%) 3 (11%)
1 степень 8 (14%) 6(11%) 14 (12%) 3 (11%)
2 степень 2 (3%) 4 (7%) 6 (5%) 0
3 степень 1 (2%) 0 1 (< 1%) 0
4 степень 0 0 0 0
Билирубин 4 (7%) 3 (5%) 7 (6%) 1 (4%)
1 степень 1 (2%) 2 (4%) 3 (3%) 1 (4%)
2 степень 3 (5%) 1 (2%) 4 (3%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
N =количество субъектов: n=количество наблюдений.
aПроцентное соотношение основано на числе субъектов, проходивших лабораторное исследование.
[00281] Поисковые анализы проводили 24 и 48 недели для оценки влияния СВК на пациентов с лабораторными нежелательными явлениями, возникшими в ходе лечения. Особый интерес представляли повышения КФК, учитывая увеличение числа отклонений КФК в группе «200 мг СВК» и параметров печени, представляющих интерес (АСТ, АЛТ и билирубин). Оба показателя экспозиции (Cср. и Cмин) считали обоснованными для изучения возможных связей с отклонениями лабораторных показателей; однако Cср. считался наиболее важным с учетом того, что он является отражением общего влияния СВК.
[00282] Несмотря на возможный сигнал для зависимости доза- реакция для повышений КФК в силу различий между группами лечения в рамках исследования, ни один из этих подробных поисковых анализов не смог выявить какие-либо причинно-следственные связи. Логистический регрессивный анализ результатов, оценивающий Ln эскпозиции по сравнению с вероятностью возникновения >2 степени выраженности КФК, не выявил связи между воздействием СВК и повышением КФК. Тенденции увеличения частоты или выраженности повышения КФК по сравнению с воздействием СВК отсутствовали.
[00283] Аналогичные анализы были проведены для повышений АЛТ, АСТ и билирубина, и также не выявили какой-либо явной связи между воздействием CVC и отклонениями в лабораторных показателях, связанных с печенью (Фигуры 52 - Фигура 55).
Метаболические показатели
[00284] Количество субъектов с расположением по степени отклонения лабораторных показателей от нормы, возникших после начала лечения, при осмотре натощак приведены в таблице 35. Все отклонения уровней общего холестерина, холестерина ЛПНП, триглицеридов, глюкозы были 1 степени или 2 степени. Процент субъектов с отклонениями уровней общего холестерина и холестерина ЛПНП в группах СВК был ниже, чем в группе EFV, что соответствует снижению уровня холестерина во время лечения СВК (Фигуры 56А и 56Б).
Таблица 35 - Отклонения лабораторных показателей тяжелой степени (DAIDS), возникшие после начала лечения, при осмотре натощак спустя 48 недель.
Отклонения лабораторных показателей, по степени тяжести, n (%) a 100 мг СВК
(N=58)		 200 мг СВК
(N=57)		 Все
СВК
(N=115)		 EFV
(N=28)
Отклонения лабораторных показателей от нормы любой степени, натощак (1-4 степени) 4 (7%) 12 (21%) 16 (14%) 9 (32%)
1 степень 3 (5%) 6 (11%) 9 (8%) 6 (21%)
2 степень 1 (2%) 6 (11%) 7 (6%) 3 (11%)
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
Общий холестерин 3 (5%) 5 (9%) 8 (7%) 9 (32%)
1 степень 3 (5%) 2 (4%) 5 (4%) 6(21%)
2 степень 0 3 (5%) 3 (3%) 3 (11%)
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
Глюкоза (сыворотка, высокий уровень) 0 5 (9%) 5 (4%) 2 (7%)
1 степень 0 3 (5%) 3 (3%) 2 (7%)
2 степень 0 2 (4%) 2 (2%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
ХСЛПНП 2 (3%) 4 (7%) 6 (5%) 6 (21%)
1 степень 1 (2%) 2 (4%) 3 (3%) 3 (11%)
2 степень 1 (2%) 2 (4%) 3 (3%) 3 (11%)
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
Триглицериды 0 1 (2%) 1 (< 1%) 0
1 степень 0 0 0 0
2 степень 0 1 (2%) 1 (< 1%) 0
3 степень 0 0 0 0
4 степень 0 0 0 0
N=количество субъектов; n=количество наблюдений.
Примечание: Отклонения в уровне холестерине (ЛПНП) 4 степени и отклонения в уровне триглицеридов 1 степени не доступны с градуированной шкалой DAIDS.
аПроцентное соотношение основано на числе субъектов, проходивших лабораторное исследование.
[00285] Средние базовые значения и изменения по сравнению с исходными уровнями гликогемоглобина, оценки инсулинорезистентности, ЛПНП натощак, ЛПВП натощак, общего холестерина натощак, соотношении общего холестерина/ЛПВП натощак и триглицеридов натощак приведены в таблице 36. Средние изменения по сравнению с исходным уровнем в метаболических показателях приведены на Фигурах 56А и 56Б. Во время лечения СВК (как в 100 мг, так и в 200 мг СВК) было отмечено снижение уровня общего холестерина, в основном за счет снижения уровня холестерина ЛПНП (смотри таблицу 36). Напротив, во время лечения EFV наблюдали увеличение уровня холестерина ЛПНП, а также холестерина ЛПВП. Малые и сопоставимые снижения соотношения общего холестерина/ЛПВП натощак наблюдали во всех группах лечения. С течением времени в уровнях глюкозы, инсулина, индекса инсулинорезистентности, гликогемоглобина и триглицеридов не наблюдали существенных изменений (смотри таблицу 36).
Таблица 36 - Средние изменения по сравнению с базовыми уровнями в лабораторных показателях основного обмена спустя 48 недель - выборка для оценки безопасности
Лабораторный показатель N 100 мг
СВК		 N 200 мг
СВК		 N Все
СВК		 N EFV
HbAlc* %Hb
Исходный показатель, среднее (СО) 54 5,41 (0,074) 55 5,39 (0,049) 109 5,40 (0,044) 28 5,43 (0,080)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 0,01 (0,050) 50 -0,08 (0,038) 101 -0,03 (0,031) 24 -0,01 (0,067)
- 12 неделя 51 -0,04 (0,048) 47 -0,08 (0,043) 98 -0,06 (0,032) 23 -0,07 (0,065)
- 24 неделя 48 0,06 (0,053) 48 0,06 (0,046) 96 0,06 (0,035) 21 -0,01 (0,093)
- 48 неделя 40 0,09 (0,065) 40 0,10 (0,055) 80 0,10(0,042) 19 -0,08 (0,108)
Индекс ИР
Исходный показатель, среднее (СО) 52 5,08 (1,154) 50 4,25 (0,698) 102 4,67 (0,678) 28 4,45 (0,830)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 46 0,11 (1,678) 45 -0,71 (0,792) 91 -0,30 (0,930) 22 0,30 (0,738)
- 12 неделя 48 -0,59 (1,113) 44 -0,53 (0,842) 92 -0,56 (0,703) 21 0,06 (1,296)
- 24 неделя 44 -1,42 (1,355) 39 0,15 (0,458) 83 -0,68 (0,751) 21 -1,27 (0,851)
- 48 неделя 40 -1,56 (1,411) 34 0,17(0,771) 74 -0,76 (0,842) 17 -0,12 (1,313)
ЛПНП, мг/дл (натощак)
Исходный показатель, среднее (СО) 58 94,72 (3,344) 54 98,30 (3,964) 112 96,45 (2,573) 28 91,00 (4,976)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 -10,90 (2,721) 48 -8,46 (2,533) 99 -9,72 (1,858) 21 8,62 (4,018)
- 12 неделя 51 -11,20 (2,894) 49 -11,69 (2,685) 100 -11,44(1,967) 22 7,59 (5,120)
- 24 неделя 47 -10,21 (3,111) 43 -6,93 (3,464) 90 -8,64 (2,313) 20 13,40 (6,210)
- 48 неделя 43 -11,16 (3,340) 35 -5,20 (3,442) 78 -8,49 (2,412) 16 11,19 (8,464)
ЛПВП, мг/дл (натощак)
Исходный показатель, среднее (СО) 58 48,21 (1,901) 56 43,75 (1,602) 114 46,02 (1,259) 28 42,00(1,909)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 -3,98 (1,065) 50 -1,84 (0,966) 101 -2,92 (0,724) 21 5,90(1,790)
- 12 неделя 51 -2,96 (1,663) 51 -1,22 (0,989) 102 -2,09 (0,966) 22 9,45 (1,965)
- 24 неделя 48 -2,15 (1,539) 45 -0,71 (1,269) 93 -1,45 (1,001) 20 12,75 (2,100)
- 48 неделя 43 -1,63 (1,908) 38 -0,21 (1,391) 81 -0,96(1,200) 16 11,94 (2,128)
Общий холестерин, мг/дл (натощак)
Исходный показатель, среднее (СО) 58 166(4,6) 56 168(4,2) 114 167 (3,1) 28 155 (5,2)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 -16(3,6) 50 -12(2,9) 101 -14(2,3) 21 19(4,2)
- 12 неделя 51 -17(3,8) 51 -16(3,1) 102 -17(2,5) 22 18(5,5)
- 24 неделя 48 -14 (3,9) 45 -12 (4,0) 93 -13 (2,8) 20 24 (6,2)
- 48 неделя 43 -14(3,9) 38 -9 (3,9) 81 -12 (2,8) 16 26 (9,4)
Лабораторный показатель N 100 мг
СВК		 N 200 мг
СВК		 N Все
СВК		 N EFV
Соотношение общего холестерина к ЛПВП, (натощак)
Исходный показатель, среднее (СО) 58 3,70 (0,175) 56 4,13 (0,196) 114 3,91 (0,132) 28 3,92 (0,233)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 -0,11 (0,146) 50 -0,22 (0,100) 101 -0,17 (0,089) 21 -0,07 (0,141)
- 12 неделя 51 -0,06 (0,264) 51 -0,36 (0,105) 102 -0,21 (0,142) 22 -0,41 (0,166)
- 24 неделя 48 -0,19 (0,165) 45 -0,41 (0,128) 93 -0,30 (0,105) 20 -0,47 (0,154)
- 48 неделя 43 0,02 (0,290) 38 -0,31 (0,118) 81 -0,14(0,164) 16 -0,35 (0,221)
Общие триглицериды, мг/дл (натощак)
Исходный показатель, среднее (СО) 58 118 (10,8) 56 133 (11,9) 114 125 (8,0) 28 111 (12,7)
Изменение среднего (СО) по сравнению с исходным показателем:
- 4 неделя 51 -8 (8,3) 50 -2 (7,0) 101 -5 (5,4) 21 23 (14,4)
- 12 неделя 51 -16(9,0) 51 -13(7,2) 102 -15(5,8) 22 3 (14,4)
- 24 неделя 48 -8 (10,0) 45 -23 (9,4) 93 -15 (6,9) 20 -10(12,9)
- 48 неделя 43 -9 (8,2) 38 -16(11,7) SI -12 (7,0) 16 14(19,4)
HbAlc=гемоглобин Alс: ЛПВП=липопротеид высокой плотности; индекс ИР=гомеостатическая модель оценки - индекс инсулинорезистентности: ЛПНП=липопротеид низкой плотности: N=количество субъектов.
Примечание: исходный уровень определяется как последнее обследование до начала лечения в рамках исследования.
[00286] В соотношении окружностей талии и бедра в любой из групп лечения не наблюдали существенных изменений по сравнению с базовым уровнем на 24 неделю и 48 неделю.
Сердечно-сосудистая безопасность
[00287] Серьезные отклонения ЭКГ, возникшие во время лечения, приведены в таблице 37. Доля субъектов с увеличением длительности интервала QT >30-60 мс была ниже для групп СВК по сравнению с группой EFV. Только у 1 субъекта из группы «100 мг СВК» отмечено увеличение длительности интервала QT >60 мс. Ни один из субъектов не имел патологически удлиненный интервал QT.
[00288] Клинически значимых изменений в параметрах ЭКГ не наблюдали в течение периода лечения в любой из групп лечения.
Таблица 37 - Серьезные отклонения ЭКГ, возникшие во время лечения, спустя 48 недель
Показатель, n (%) 100 мг
СВК		 200 мг
СВК		 Все
СВК		 EFV
(N=58) (N=57) (N=115) (N=28)
Интервал QT с корректировкой Фридерицияа
Пограничное удлинение 1 (2%) 1 (2%) 2 (2%) 0
Удлиненный 0 0 0 0
Патологическое удлинение 0 0 0 0
увеличен на >30-60 мс 4 (8%) 3 (6%) 7 (7%) 4 (14%)
увеличен на >60 мс 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Интервал QT с корректировкой Базеттаb
Пограничное удлинение 4 (8%) 2 (4%) 6 (6%) 3 (11%)
Удлиненный 0 0 0 0
Патологическое удлинение 0 0 0 0
увеличен на >30-60 мс 6 (12%) 3 (6%) 9 (9%) 4 (14%)
увеличен на >60 мс 1 (2%) 0 1 (1%) 0
Интервал QRSc
Крайне низкий 0 0 0 0
Крайне высокий 1 (2%)d 0 1 (l %)d 0
Интервал PRe
Крайне высокий 2 (3%) 1 (2%) 3 (3%) 1 (4%)
Пульсf
Крайне низкий 0 0 0 0
Крайне высокий 0 0 0 0
N=количество субъектов: n=количество наблюдений.
Примечание: Процентное соотношение основано на количестве субъектов с заданными параметрами ЭКГ.
aИнтервал QT с корректировкой Фридерицияа: нормальный <450 мс < пограничное удлинение <480 мс < удлиненный < 500 мс < патологическое удлинение.
bИнтервал QT с корректировкой Базетта: нормальный < 450 мс < пограничное удлинение < 480 мс < удлиненный < 500 111s < патологическое удлинение.
сОтклонения в интервале QRS: крайне низкий <50 мс < нормальный <120 мс < крайне высокий.
dДанный субъект (субъект 06004) имел значение интервала QRS в 120 мс на 24 неделю, и имел значение при отборе в 125 мс и исходный показатель < 120 мс (т.е. 111 мс: смотри перечень 16.2.8.7).
eОтклонения в интервале PR: нормальный <210 111s < крайне высокий.
fОтклонения от нормы в частоте пульса: крайне низкий < 50 количество ударов в минуту <нормальный <120 количество ударов в минуту < крайне высокий.
Показатели жизненно важных функций
[00289] В любом из показателей жизненно важных функций (систолическое и диастолическое артериальное давление, частота сердечных сокращений) не наблюдали клинически значимые изменения средних значений в любой из групп лечения. Экспериментальные данные, касающиеся МХБ-1 со 2 стадии исследований белка МХБ-1 и экспрессии генов, показали повышение экспрессии в ткани печени у больных с хронической болезнью с различными степенями поражения печени и фиброза. Как было показано ранее, наблюдали компенсаторное повышение уровней МХБ-1 в плазме крови после лечения СВК в доклинических и клинических исследованиях, указывая на мощную блокаду CCR2. Хотя влияние длительного компенсаторного повышения уровней МХБ-1 на фоне СВК антагонизма CCR2 в человеке в настоящее время неизвестно, имеющиеся данные не указывают на повышенный риск развития нарушений гепатобилиарной системы или отклонений в показателях печени на основе 48 недель данных по оценке безопасности.
[00290] Ни один из признаков воспаления не наблюдали в клинико-лабораторных показателях или в какой-либо ткани, в том числе в печени, с помощью микроскопии при высокой дозе в 1000 мг/кг/ сутки, где уровни МХБ-1 в плазме крови в длительных (3- и 9-месячные) токсикологических исследованиях обезьяны были в ~5 раз выше по сравнению с контрольной группой.
[00291] В действительности, антифиброзные эффекты СВК при дозе в 100 мг/кг/сутки, наблюдаемые в мышиной модели НАСГ, были замечены в комбинации со значительно повышенными уровнями МХБ-1 в плазме крови. Кроме того, произошли улучшения в индексах APRI и FIB-4 для определения фиброза, наблюдаемые у субъектов, подвергаемых лечению СВК, в течение 48 недель, несмотря на значительные и устойчивые повышения МХБ-1. Кроме того, в данном исследовании, СВК в целом хорошо переносился в течение 48 недель 115 субъектами, получавшими 100 мг СВК и 200 мг СВК.
[00292] Изменения в НАС и в стадии фиброза печени (гистологическая балльная система НАСГ по СЦКИ и шкала Исхака) в течение 1 и 2 лет будут оценивать с помощью гистологического исследования. Также будут рассматриваться изменения в морфометрической количественной оценке коллагена при биопсии печени. Корреляции между конечными точками эффективности и уровнями МХБ-1 в плазме крови будут исследованы, чтобы определить, действительно ли пролонгированное повышение МХБ-1, наблюдаемое с лечением СВК, представляют собой потенциальный риск у субъектов с фиброзом печени, вызванным НАСГ.
Пример 23: Биомаркеры воспаления и иммунной функции
[00293] Для СВК наблюдали дозозависимый эффект в повышении МХБ-1, лиганда CCR2, который представляет собой хемокиновый рецептор, обнаруженный на моноцитах, в то время как в группе EFV МХБ-1 оставался на исходных уровнях. Различия в изменениях по сравнению с исходными уровнями МХБ-1 в плазме крови между группами лечения «EFV» и «100 мг СВК» и «200 мг СВК» достигали статистической значимости (р <0,001) на 24 неделю и 48 неделю, указывая на мощную и дозозависимую блокаду CCR2 с помощью СВК. Кроме того, наблюдали снижение уровней sCD14 в течение 48 недель лечения в обеих группах лечения СВК, в то время как в группе «EFV» наблюдали повышение уровней sCD14 за тот же период наблюдения. Между 24 и 48 неделями уровни sCD14 возвращались к исходным значениям у субъектов, получавших СВК, в то время как у субъектов, получавших EFV, они продолжали повышаться. Различия в изменениях по сравнению с исходными уровнями между группами лечения «СВК» и «EFV» достигали статистической значимости (р <0,001) на 24 неделю и 48 неделю, и также на 48 неделю при повторном анализе. Данные результаты указывают на потенциальное влияние СВК на снижение активации моноцитов.
[00294] Никаких значимых различий в изменениях от базового уровня у других биомаркеов воспаления (чсСРБ, фибриноген, ИЛ-6 и D-димер) и биомаркеров иммунной функции (общая экспрессия CD38+ и общая экспрессия HLA DR+на CD4+ T-клетках или на CD8+ Т-клетках) между группами лечения не наблюдали.
Пример 24: Измерение биомаркеров, связанных с бактериальной транслокацией
[00295] Снижение уровней sCD14 у субъектов, получающих СВК, также могут приравнять к уменьшению бактериальной транслокации, явлению, обычно наблюдаемому у пациентов с ВИЧ-инфекцией [15], а также с НАСГ [16-18], алкогольной болезнью печени [17,19], ВИЧ/ВГС [20] и циррозом печени [21]. Бактериальная транслокация наступает в результате нарушения плотных контактов (ПК) энтероцитов, которое ставит под угрозу кишечный слизистый барьер, явление, обычно называемое как синдром повышенной кишечной проницаемости. Снижение целостности кишечника связано с иммунной недостаточностью и/или существенными изменениями в микрофлоре кишечника, называемые также дисбактериозом и чрезмерным развитием микрофлоры. Последующая транслокация микробных продуктов, таких как липополисахарид (ЛПС) и 16S рибосомальная ДНК (16S рДНК), способствует активации иммунной системы. ЛПС, компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий, связывает мембрану или растворимый CD14 (sCD14, продуцируемый при ЛПС-активации моноцитов) и комплекс ТПР4/миелоидной дифференциации-2 (МД-2) [14].
[00296] Липополисахарид представляет собой наиболее мощный индуктор воспалительных цитокинов, в частности, ФНО-α, в моноцитах и макрофагах. Высокие уровни sCD14 в плазме крови предполагают развитие болезни ВГВ и ВГС-инфекции независимо от других маркеров воспаления печени, фиброза и прогрессирования заболевания [20]. Воздействие бактериальных продуктов кишечного происхождения, в первую очередь эндотоксина, включая ЛПС, приводит к воспалению печени, повреждению гепатоцитов и фиброзу печени [22]. Активация Купферовских клеток через ТПР4-зависимый механизм и с последующей активацией звездчатых клеток печени представляют собой мощные драйверы фиброгенеза [19].
[00297] Эта гипотеза будет проверена тестированием биомаркеров бактериальной транслокации в архивных образцах из исследования 652-2-202, последующим исследованием 652-1-121 печеночной недостаточности и экспериментальной проверки концепции 652-2-203 фиброза печени. Эти биомаркеры будут включать в себя ЛПС, ЛПС-связывающий белок (ЛСБ), sCD14, кишечную фракцию белка, связывающегося с жирными кислотами (I-FABP).
Пример 25 - Выводы, основанные на данных клинических исследований СВК на 1 и 2 стадии.
[00298] Данные ВИЧ-инфицированных субъектов, получавших СВК, оценивали в 14 однодозовых и многодозовых исследованиях и исследованиях взаимодействия препаратов на здоровых испытуемых-добровольцах (n=390), а также в двух исследованиях 2 стадии у ВИЧ-инфицированных субъектов (n=159), в том числе 115 субъектов, получавших СВК до 48 недель.
[00299] Наиболее частые нежелательные явления, наблюдаемые в 1 стадии исследований, в которой давали только СВК согласуются с патологическими состояниями, распространенными в блоках 1 стадии исследования. В целом, картина нежелательных явлений позволяет предположить, что СВК в общем хорошо переносится в этих 1 стадии исследованиях, оценивающих однократные дозы СВК до 800 мг и в многократные суточные дозы до 200 мг в течение 10 суток. Частота и величина повышения уровней трансаминаз, наблюдаемые в данных исследованиях согласуются с моделью, описанной для стадии 1 испытаний в научной литературе. СВК изучали в стадии 2a исследования 10-суточной монотерапии СВК в дозах от 25 до 150 мг (n=44) и в cтадии 2б 48-недельного исследования по оценке эффективности и безопасности в дозах 100 мг СВК и 200 мг СВК (n=115). В обоих исследованиях и во всех дозах СВК продемонстрировал благоприятный профиль нежелательных явлений. На основании 48-недельных данных 2б стадии исследования, СВК не был связан с повышенным риском развития нарушений гепатобилиарной системы или повышения трансаминаз. Снижение в общем и ЛПНП холестерине наблюдали у субъектов, получавших СВК, в данном исследовании. Клинически значимые изменения в параметрах ЭКГ или изменения каких-либо параметров жизненно важных функций в течение 48-недельного периода лечения не наблюдали. Связь нежелательных явлений, отклонений лабораторных показателей от нормы (в том числе повышение уровней КФК, АЛТ, АСТ и билирубина) или дозолимитирующей токсичности и различимой дозы или экспозиции не отмечена.
[00300] Основываясь на данных, полученных в рамках стадии 1 исследования, и данных стадии 2 исследований ВИЧ-инфицированных субъектов, мы планируем оценить 150 мг СВК, получаемые один раз в сутки, при лечении субъектов с фиброзом печени, вызванным НАГС, в течение 2-х лет в исследовании 652-2-203 (с первичной конечной точкой исследования в 1-й год). Исследование по плану с рассмотрением противоположных гипотез позволит оценить безопасность и эффективность в течение 2 непрерывных лет лечения СВК, также 1 года лечения плацебо, а затем 1 года лечения СВК. Стандартную оценку влияния лечения СВК на фиброз печени, вызванный НАСГ, будут проводить на основе гистологических данных биопсии печени и других оценок гистологического улучшения. Будут оценены безопасность и переносимость, и будет проводиться тщательный контроль на наличие признаков токсического действия на печень или другие органы, включая периодический обзор данных независимым комитетом по мониторингу данных. Предполагается, что исследование позволит установить противовоспалительную и антифиброзную активность СВК и его влияние на фиброз печени, вызванный НАСГ, и предоставит дополнительные данные для оценки безопасности и переносимости 150 мг СВК.
Пример 26 -Исследование СВК в целях оценки гистологического улучшения печени при НАСГ
[00301] На основании доклинических и клинических результатов, указывающих на то, что СВК обладает противовоспалительной и антифиброзный активностью и, как правило, хорошо переносится, Tobira планирует исследовать СВК в стадии 2 исследования у субъектов с фиброзом печени, вызванным НАСГ. На 2 стадии исследования будут оценивать эффективность СВК в лечении НАСГ у взрослых субъектов с фиброзом печени, которые подвергаются риску прогрессирования заболевания в связи с наличием по меньшей мере одного из факторов, включая сахарный диабет 2 типа (СД2), высокий индекс массы тела (ИМТ) (> 25 кг/м2) с по меньшей мере 1 признаком метаболического синдрома (МС), в соответствии с определением Национальной образовательной программы по холестерину (НОПХ), мостовидный фиброз и/или диагностированный НАСГ (НАС≥5).
[00302] Стадия 2 исследования предназначена для оценки потенциала СВК для лечения этого тяжелого состояния и для решения значительной неудовлетворенной медицинской потребности пациентов с фиброзом печени, вызванным НАСГ. Данное исследование представляет собой рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование, предназначенное для оценки эффективности и безопасности 150 мг СВК по сравнению с плацебо у субъектов с фиброзом печени, вызванным НАСГ. Исследуемая выборка состоит из субъектов с фиброзом печени (1-3 стадия по гистологической балльной системе сети центров клинических исследований [СЦКИ]), вызванным НАСГ (НАС≥4) с повышенным риском прогрессирования заболевания.
[00303] Доза в 150 мг СВК (препарат DP7) будет оцениваться в лечении НАСГ у субъектов с фиброзом печени в исследовании 652-2-203 на основании следующих соображений:
[00304] предполагается, что СВК обеспечивает как противовоспалительную, так и антифиброзную активность, в первую очередь благодаря его антагонизму к корецепторам CCR2 и CCR5 и в конечном итоге влияет на рекрутинг, миграцию и инфильтрацию провоспалительных моноцитов к месту повреждения печени. Поэтому первоочередное внимание при выборе дозы для использования в настоящем исследовании заключалось в гарантировании того, что содержание СВК в плазме крови является достаточным для обеспечения близкого к максимальному антагонизма CCR2 и CCR5.
[00305] Антагонизм CCR2 и CCR5 с помощью СВК был оценен в in vitro и ex vivo исследованиях и в 2 клинических исследованиях СВК при лечении ВИЧ-1 инфекции (стадия 2a исследования 652-2-201 и стадия 2б исследования 652-2-202). В каждом случае наблюдали мощный и дозозависимый антагонизм CCR2 и CCR5. Клинические проявления антагонизма CCR2 и CCR5 установлены путем измерения изменений по сравнению с исходным уровнем в концентрациях МХБ-1 в плазме крови (лиганд CCR2) и изменений в уровнях РНК ВИЧ в плазме крови (CCR5, корецептор требуется для проникновения ВИЧ), соответственно, в данных 2 исследованиях 2 стадии.
[00306] В исследовании 652-2-202, дозы в 100 мг и 200 мг СВК (препарат DP6) оценивали на 115 ВИЧ-1-инфицированных субъектах в течение 48 недель (средняя [ошибка среднего)] продолжительность приема СВК: 41,1 [1,33] недель) и были признаны эффективными и хорошо переносимыми при лечении ВИЧ-инфекции. На основании причинно-следственного анализа, который показал, что повышение концентраций СВК в плазме крови коррелирует с улучшением вирусологического эффекта, дозу в 200 мг СВК рассматривали как подходящую дозу для дальнейшей оценки СВК в качестве противовирусного агента для лечения ВИЧ-инфекции в 3 стадии исследований.
[00307] Содержание СВК в плазме крови, по всей видимости, было выше у неинфицированных ВИЧ здоровых добровольцев по сравнению с ВИЧ-инфицированными субъектами, когда СВК вводили по одинаковой схеме приема (исследования 652-1-111, 652-1-110, 652- 2-202). Дозу в150 мг СВК будут оценивать при лечении НАСГ у субъектов с фиброзом печени в исследовании 652 2 203. На основании упоминаемых доступных данных, эта доза находится в терапевтически релевантном диапазоне и, как ожидается, обеспечивает экспозиции у субъектов с НАСГ и фиброзом печени, которые сопоставимы с 200 мг СВК, которую оценили в исследовании 652-2-202, и приводит к мощному антагонизму CCR2 и CCR5.
[00308] В общей сложности запланированы 250 субъектов (125 субъектов на группу лечения) и общая продолжительность лечения в программе исследования составит 2 года. Исследование выборки будет включать субъекты с НАСГ (НАС≥4) и фиброзом печени (от 1 до 3 стадии [гистологическая балльная система НАСГ по СЦКИ]), которые находятся в группе повышенного риска прогрессирования заболевания в связи с наличием≥1 способствующего фактора(факторов):
[00309] Документальное подтверждение сахарного диабета 2 типа
[00310] Высокий индекс массы тела (> 25 кг/м2) с по меньшей мере 1 из следующих признаков метаболического синдрома, в соответствии с определением НОПХ:
[00311] Абдоминальное ожирение: окружность талии≥102 см или 40 дюймов (мужчины), ≥88 см или 35 дюймов (женщины)
[00312] Дислипидемия: ТГ≥1,7 ммоль/л (150 мг/дл)
[00313] Дислипидемия: ХсЛПВП <40 мг/дл (мужчины), <50 мг/дл (у женщин)
[00314] Кровяное давление≥130/85 мм рт.ст. (или лечение гипертонии)
[00315] Концентрация глюкозы в плазме натощак≥6,1 ммоль/л (110 мг/дл); или
[00316] Мостовидный фиброз (3 стадия по гистологической балльной системе НАСГ СЦКИ) и/или диагностированный НАСГ (NAS≥5).
[00317] Будет два периода лечения. Период лечения 1 будет состоять из двойного слепого рандомизированного лечения (150 мг СВК или соответствующее плацебо) в течение 1 года. Субъекты и исследователи будут оставаться слепыми к распределению по группам лечения в течение периода 1. Во время периода лечения 2 субъекты, первоначально рандомизированные в группу «150 мг СВК» будут продолжать получать это лечение еще один год, а субъеткы, первоначально рандомизированные в группу «плацебо», будут переходить от плацебо к 150 мг СВК.
[00318] Субъекты будут получать исследуемый препарат один раз в сутки (QD) в течение 2 лет. Исследование будет включать 2 периода лечения: период лечения 1 (первый год) и период лечения 2 (второй год). Удовлетворяющим критериям субъектам будет назначен прием СВК (n=126) или соответствующего плацебо (n=126) в течение первого года лечения (период лечения 1). За период лечения 2 половина субъектов, получавших плацебо, (рандомизированные в начале исследования) перейдет на СВК, а другая половина останется на плацебо в течение второго года лечения. В начале исследования (день 1), после скрининговой оценки, субъектов, подходящих для участия в исследовании, распределяют по группам лечения, используя блочную рандомизацию с применением стратификации при скрининге по NAS (4 или≥5) и стадии фиброза (≤2 или> 2). Удовлетворяющие критериям субъекты будут рандомизированы в соотношении 2: 1: 1 к одной из следующих 3-х групп лечения:
Таблица 38
Группа N Период лечения 1 Период лечения 2
A 126 150 мг СВК, QD 150 мг СВК, QD
Б 63 Соответствующее плацебо, QD 150 мг СВК, QD
В 63 Соответствующее плацебо, QD Соответствующее плацебо, QD
[00319] СВК и соответствующее плацебо вводят в виде препарата двойного слепого исследования. Исследуемый препарат (СВК/соответствующее плацебо) следует принимать каждое утро с пищей.
[00320] Биопсия, соответствующая первичной конечной точке, (1-й год) должна быть выполнена в течение 1 месяца до окончания периода лечения 1 и перед началом периода лечения 2. Заключительная биопсия (2-й год) должна быть выполнена в течение 1 месяца до окончания лечения исследуемым препаратом.
[00321] Включение субъектов в исследование будет начато в ограниченном количестве учреждений, до 20 субъектов будут рандомизированы и будут проходить лечение, и данные по безопасности будут рассмотрены независимым комитетом по мониторингу данных (НКМД). Первое рассмотрение НКМД будет происходить в течение 3-х месяцев после включения первого субъекта в исследование или, когда в пределах 20 субъектов будут рандомизированы и по меньшей мере 10 субъектов будут проходить лечение в течение 1 месяца, в зависимости от того, что наступит раньше. Последующее включение в исследование оставшейся части испытуемых будет происходить после того, как НКМД проведет оценку данных по безопасности для этих первых 10-20 субъектов и определит, что исследование может продолжиться.
[00322] В течение всего периода лечения 1, все субъекты будут проходить оценку безопасности на 2 и 4 недели 1 месяца. Кроме того, первые 20 субъекты будут проходить оценку безопасности на 1 и 3 недели 1 месяца. Все субъекты будут проходить оценку при визитах, предусмотренных исследованием, каждые 2 недели в течение 2 месяца, ежемесячных визитах с 3 по 6 месяцы, и на 8, 10 и 12 месяцы. Во время периода лечения 2, субъекты будут ежемесячно посещать с 13 по 15 месяцы и в 18, 21 и 24 месяцы.
Основные обследования
[00323] В ходе исследования:
[00324] Биопсию печени будут выполнять при скрининге, в первичной конечной точке (1 год: в течение 1 месяца до конца периода лечения 1 и перед началом периода лечения 2), и на 2-й год (в течение 1 месяца до конца лечения)
[00325] Провоспалительные цитокины, биомаркеры воспаления, биомаркеры апоптоза гепатоцитов, биомаркеры бактериальной транслокации, показатели основного обмена, показатели почек и показатели рСКФ будут измерять в начале исследования и на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы.
[00326] В учреждениях, где это возможно, оценку неинвазивной визуализацией печени (например, непрямая ультразвуковая эластография [TE], двумерная магнитно-резонансная эластография [MRE], акустические радиационные импульсы давления [ARFI]) будут выполнять в начале исследования и на 6, 12, 18, и 24 месяцы.
[00327] Фармакокинетические пробы для СВК будут собраны в начале исследования (проба до введения препарата непосредственно перед началом лечения), на 0,5, 3 и 15 месяцы (до введения препарата и по меньшей мере 1 час после введения), и в 6, 12, 18 и 24 месяцы (перед введением препарата).
[00328] Массу, окружность талии, окружность бедра, окружность плеча, и толщину кожно-жировой складки над трицепсом будут измерять в начале исследования и на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы. Рост будут измерять при скрининге и на 12 месяц.
[00329] Физические осмотры и лабораторные анализы будут проводить при каждом визите. ЭКГ будет выполнять в начале исследования и на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы, соответственно.
[00330] Нежелательные явления и сопутствующие лекарственные препараты будут оценивать при каждом визите.
[00331] Информированное согласие и материалы по просвещению пациентов о НАСГ, фиброзе печени и процедурах биопсии печени будут рассмотрены в ходе скринингового визита.
[00332] Дневник приема исследуемого препарата будет предоставляться каждому субъекту в то же самое время, когда исследуемый препарат будут выдавать. Дневник будет анализироваться при всех наблюдениях в ходе лечения и при досрочном прекращении наблюдений.
[00333] Субъект вернется в клинику через 1 месяц после последнего лечения для последующего обследования в завершающемся исследовании.
[00334] Целью первичной эффективности данного исследования будет оценка гистологического улучшения печени в баллах шкалы активности (NAS) неалкогольной жировой болезни печени (НЖБП) на 1 год относительно скрининга биопсии, определяемой минимальным 2-балльным улучшением в NAS с улучшением по меньшей мере на 1 балл как в степени лобулярного воспаления, так и в степени баллонирования и без сопутствующего прогрессирования стадии фиброза (с ухудшением определяем как прогрессирование к мостовидному фиброзу или циррозу).
[00335] Вторичные цели эффективности включают оценку регрессии НАСГ без сопутствующего ухудшения стадии фиброза (ухудшение определяемое как прогрессирование к мостовидному фиброзу или циррозу) на 2 год; регрессия НАСГ без сопутствующего ухудшения стадии фиброза (ухудшение определяемое как прогрессирование к мостовидному фиброзу или циррозу) на 1 год; безопасность и переносимость СВК через 1 и 2 года лечения НАСГ у взрослых пациентов с фиброзом печени; ФК параметры СВК в плазме крови в выборке для анализа ФК; оценка гистологического улучшения печени по NAS на 2 год, в соответствии с определением минимального 2-балльного улучшения по NAS, по меньшей мере 1-балльным улучшением, более чем в 1-й категории и без сопутствующего ухудшения стадии фиброза (ухудшение определяемое как прогрессирование к мостовидному фиброзу или циррозу); оценка эффективности СВК по сравнению с плацебо у взрослых пациентов с фиброзом печени, как это установлено изменением морфометрической количественной оценкой коллагена при биопсии печени на 1 и 2 годы; оценка изменения гистологической стадии фиброза (гистологическая балльная система НАСГ по СЦКИ [НАСГ СЦКИ] и шкала Исхака) на 1 и 2 годы; оценка изменения в уровнях фибриногенного белка (альфа-актин гладких мышц [α-ГМА]) ткани печени на 1 и 2 годы; оценка изменения от исходного уровня неинвазивных маркеров фиброза печени (индекс APRI, индекс FIB-4, гиалуроновая кислота, ФиброТест (FibroSure), шкала оценки стадии фиброза при НАЖБП [NFS] и тест на обширный фиброз печени [ELF]) на 3, 6, 12, 15, 18, и 24 месяцы; оценка изменения от исходного уровня биомаркеров апоптоза гепатоцитов на 1 и 2 годы; оценка изменений по сравнению с исходными показателями печени и показателями основного обмена на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы; оценка изменения от исходного уровня массы тела, ИМТ, окружности талии, соотношения талии и бедер, окружности плеча и толщины кожно-жировой складки над трицепсом на 3, 6, 12, 15, 18, и 24 месяцы.
[00336] Третичные цели включают оценку изменений по сравнению с базовым показателем в методе неинвазивной визуализации печени (например, непрямая ультразвуковая эластография [TE], двумерная магнитно-резонансная эластография [MRE], акустические радиационные импульсы давления [ARFI]) на 6, 12, 18 и 24 месяцы (в учреждениях, где это возможно); изменение от исходного уровня провоспалительных цитокинов и биомаркеров воспаления на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы; изменение от исходного уровня расчетной скорости клубочковой фильтрации (рСКФ) и показателей почки на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы; и изменение от исходного уровня биомаркеров, связанных с бактериальной транслокацией, на 3, 6, 12, 15, 18 и 24 месяцы.
[00337] В подробном описании настоящего документа описаны различные аспекты и варианты реализации настоящего изобретения, однако, если не указано иное, ни одно из них не предназначено для ограничения объема изобретения. Действительно, специалист в данной области техники, прочитав данное изобретение, определит вариации, изменения и корректировки, которые могут быть сделаны, не выходя за рамки объема и сущности настоящего изобретения, все из которых должны рассматриваться как часть изобретения, если не указано иное. Заявители, таким образом, предполагают, что изобретение, описанное в настоящем документе, будет ограничено только прилагаемой формулой изобретения.
Ссылки:
1. Saiman Y, Friedman SL. The role of chemokines in acute liver injury. 2012;3:213.
2. Zimmermann HW, Tacke F. Modification of chemokine pathways and immune cell infiltration as a novel therapeutic approach in liver inflammation and fibrosis. Inflamm Allergy Drug Targets. 2011;10:509-536.
3. Seki E, De Minicis S, Gwak GY, Kluwe J, Inokuchi S, Bursill CA, Llovet JM, Brenner DA, Schwabe RF. CCR1 and CCR5 promote hepatic fibrosis in mice. J Clin Invest. 2009;119:1858-1870.
4. Seki E, de Minicis S, Inokuchi S, Taura K, Miyai K, van Rooijen N, Schwabe RF,
Brenner DA. CCR2 promotes hepatic fibrosis in mice. Hepatology. 2009;50:185-197.
5. Miura K, Yang L, van Rooijen N, Ohnishi H, Seki E. Hepatic recruitment of macrophages promotes nonalcoholic steatohepatitis through CCR2. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2012;302:G1310-1331.
6. Mitchell C, Couton D, Couty JP, Anson M, Crain AM, Bizet V, Rénia L, Pol S, Mallet V, Gilgenkrantz H. Dual role of CCR2 in the constitution and the resolution of liver fibrosis in mice. Am J Pathol. 2009;174:1766-1775.
7. Xia Y, Entman ML, Wang Y. CCR2 regulates the uptake of bone marrow-derived fibroblasts in renal fibrosis. PLoS ONE 2013; 8(10): e77493. doi:10.1371/journal.pone.0077493
8. Karlmark KR, Wasmuth HE, Trautwein C, Tacke F. Chemokine-directed immune cell infiltration in acute and chronic liver disease. Expert Review Gastroenterology Hepatology. 2008; 2: 233-242.
9. Vielhauer V, Anders H-J, Mack M, Cihak J, Strutz F, Stangassinger M, Luckow B, Gröne H-J, Schlöndorff D. Obstructive nephropathy in the mouse: Progressive fibrosis correlates with tubulointerstitial chemokine expression and accumulation of CC chemokine receptor 2- and 5-positive leukocytes. J Am Soc Nephrol 2001;12:1173-1187.
10. Segerer S, Mack M, Regele H, Kerjaschki D, Schlöndorff D. Expression of the C-C chemokine receptor 5 in human kidney disease. Kidney Int 1999; 56:52-64.
11. Wai C-T, Greenson J, Fontana R, Kalbfleisch J, Marrero J, Conjeevaram H, Lok A. A simple noninvasive index can predict both significant fibrosis and cirrhosis in patients with chronic hepatitis C. Hepatology 2003;38:518-526.
12. Vallet-Pichard A, Mallet V, Nalpas B, Verkarre V, Nalpas A, Dhalluin-Venier V, Fontaine H, Pol S. FIB-4: an inexpensive and accurate marker of fibrosis in HCV infection. Comparison with liver biopsy and FibroTest. Hepatology 2007;46:32-36.
13. Sandler NG, Wand H, Roque A, et al. Plasma levels of soluble CD14 independently predict mortality in HIV infection. JID 2011;203:780-790.
14. Brenchley J, Price DA, Schacker TW, Asher TE, Silvestri G, Rao S, Kazzaz Z, Bornstein E, Lambotte O, Altmann D, Blazar BR, Rodriguez B, Teixeira-Johnson L, Landay A, Martin JN, Hecht FM, Picker LJ, Lederman MM, Deeks SG, Douek DC. Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.Nature Medicine 2006;12:1365-1371.
15. Vajro P, Paolella G, Fasano A. Microbiota and Gut-Liver Axis: Their Influences on Obesity and Obesity-Related Liver Disease JPGN 2013;56: 461-468.
16. Roh YS, Seki E. Toll-like receptors in alcoholic liver disease, non-alcoholic steatohepatitis and carcinogenesis Journal of Gastroenterology and Hepatology 2013; 28: 38-42.
17. Ilan Y. Leaky gut and the liver: A role for bacterial translocation in nonalcoholic steatohepatitis. World J Gastroenterol 2012 June 7; 18: 2609-2618.
18. Petrasek J, Mandrekar P, Szabo G. Toll-Like Receptors in the Pathogenesis of Alcoholic Liver Disease. Gastroenterology Research and Practice 2010, Article ID 710381, 12 pages. doi:10.1155/2010/710381.
19. Sandler N, Koh C, Roque A, Eccleston J, Siegel R, Demino M, Kleiner D, Deeks S, Liang T-J, Heller T, Douek D. Host Response to Translocated Microbial Products Predicts Outcomes of Patients With HBV or HCV Infection. Gastroenterology 2011;141:1220-1230. doi:10.1053/j.gastro.2011.06.063.
20. Wiest R, Lawson M, Geuking M. Pathological bacterial translocation in liver cirrhosis. J Hepatology 2014; 60(1):197-209.
21. Shanab AA, Scully P, Crosbie O, Buckley M, O'Mahony L, Shanahan F, Gazareen S, Murphy E, Quigley EM. Small in testinal bacterial overgrowth in nonalcoholic steatohepatitis: association with toll-like receptor 4 expression and plasma levels of interleukin 8. Dig Dis Sci 2011; 56: 1524-1534
22. Henao-Mejia J, Elinav E, Jin C, Hao L, Mehal WZ, Strowig T, Thaiss CA, Kau AL, Eisenbarth SC, Jurczak MJ, Camporez J-P, Shulman GI, Gordon JI, Hoffman HM; Flavell RA. Inflammasome-mediated dysbiosis regulates progression of NAFLD and obesity. Nature 2012; 492: 179-185. doi:10.1038/nature10809.
23. Klibanov, Olga M.; Williams, Shannon H.; Iler, Cameron A (2010). «Cenicriviroc, an orally active CCR5 antagonist for the potential treatment of HIV infection». Current Opinion in Investigational Drugs 11 (8): 940-950.
24. Kleiner DE. et al., Hepatology, Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease; 2005;41:1313-1321.
25. Fujii H et al. J. Atheroscler. Thromb. 2009;16:893.
26. Rangwala F et al. J. Pathol. 2011; 224:401.
27. Seki et al. CCR1 and CCR5 promote hepatic fibrosis in mice. J. Clin. Invest. 2009; 119(7):1858-1870.
28. Xu et al. Liver fibrosis: mechanisms of immune-mediated liver injury. Cellular & Mol. Immunol.; 2012; 9:296-301.
29. Karlmark et al., Expert Rev. Gastroenterol. Hepatol. 2(2), 233-242 (2008).
30. Mitchell C, et al. Dual role of CCR2 in the constitution and the resolution of liver fibrosis in mice. Am J Pathol. 2009;174:1766-1775.
31. Berres M-L, et al. Antagonism of the chemokine Ccl5 ameliorates experimental liver fibrosis in mice. Journal of Clin Invest. November 2010; 120(11): 4129-4140
32. Benyon, RC and MJ Arthur, Extracellular matrix degradation and the role of hepatic stellate cells. Semin Liver Dis. 2001 Aug;21(3):373-84.
33. Sheth SG, Chopra S. Natural history and management of nonalcoholic fatty liver disease in adults, UpToDate; 2014
34. Chalasani N, Younossi Z, Lavine JE, Diehl AM, Brunt EM, Cusi K, et al. The diagnosis and management of non-alcoholic fatty liver disease: Practice Guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases, American College of Gastroenterology, and the American Gastroenterological Association. Hepatology 2012;55:2005-23.
35. McCullough AJ. The clinical features, diagnosis and natural history of nonalcoholic fatty liver disease. Clin Liver Dis 2004;8(3):521-33.
36. Loomba R, Sirlin CB, Schwimmer JB, Lavine JE. Advances in pediatric nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology 2009;50(4):1282-93.
37. Torres DM, Williams CD, Harrison SA. Features, diagnosis, and treatment of nonalcoholic fatty liver disease. Clin Gastroenterol Hepatol 2012;10(8):837-58.
38. Schwenger KJ, Allard JP. Clinical approaches to non-alcoholic fatty liver disease. World J Gastroenterol 2014;20(7):1712-23.
39. Koo SH. Nonalcoholic fatty liver disease: molecular mechanisms for the hepatic steatosis. Clin Mol Hepatol 2013;19(3):210-5.
40. Attar BM, Van Thiel DH. Current concepts and management approaches in nonalcoholic fatty liver disease. ScientificWorld Journal 2013;2013:481893
41. Basaranoglu M, Basaranoglu G, Sentürk H. From fatty liver to fibrosis: a tale of «second hit». World J Gastroenterol 2013;19(8):1158-65.
42. Cohen JC, Horton JD, Hobbs HH. Human fatty liver disease: old questions and new insights. Science 2011;332(6037):1519-23.
43. Matteoni CA, Younossi ZA, Gramlich T, et al. Nonalcoholic fatty liver disease: A spectrum of clinical and pathological severity. Gastroenterology 1999;116(6):1413-1419
44. World Gastroenterology Organisation Global Guidelines. Nonalcoholic Fatty liver Disease and Nonalcoholic Steatohepatitis. June 2012.
45. Ahmed MH, Abu EO, Byrne CD. Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD): new challenge for general practitioners and important burden for health authorities? Prim Care Diabetes. 2010;4:129-37.
46. Vernon G, Baranova A, Younossi ZM. Systematic review: the epidemiology and natural history of non-alcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis in adults. Aliment Pharmacol Ther 2011;34:274-85.
47. The Gastroenterological Society of Australia/Australian Liver Association January 2013. http://static.squarespace.com/static/50ff0804e4b007d5a9abe0a5/t/53321aaee4b09f967eb0c7e5/1395792558684/gesa2013_revised%5B1%5D.pdf
48. Dixon JB, Bhathal PS, O'Brien PE. Nonalcoholic fatty liver disease: predictors of nonalcoholic steatohepatitis and liver fibrosis in the severely obese. Gastroenterol. 2001;121:91-100.
49. Williams CD, Stenger J, Asike MI, Torres DM, Shaw J, Contreras M, et al. Prevalence of nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis among a largely middle-aged population utilizing ultrasound and liver biopsy: a prospective study. Gastroenterology 2011;140:124-131.
50. Schattenberg JM, Schuppan D. Nonalcoholic steatohepatitis: the therapeutic challenge of a global epidemic. Curr Opin Lipidol 2011;22:479-88.
51. Bahrami H. Nonalcoholic fatty liver disease in developing countries. World J Gastroenterol 2005;11:3808-3809.
52. Tiniakos DG, Vos MB, Brunt EM. Nonalcoholic fatty liver disease: pathology and pathogenesis. Annu Rev Pathol 2010;5:145-71.
53. Vajro P, Paolella G, Fasano A. Microbiota and gut-liver axis: their influences on obesity and obesity-related liver disease. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2013;56:461-8.
54. Roh YS, Seki E. Toll-like receptors in alcoholic liver disease, non-alcoholic steatohepatitis and carcinogenesis. J Gastroenterol Hepatol 2013;28 Suppl 1:38-42.
55. Ilan Y. Leaky gut and the liver: a role for bacterial translocation in nonalcoholic steatohepatitis. World J Gastroenterol 2012;18:2609-18.
56. Moschen AR, Kaser S, Tilg H. Non-alcoholic steatohepatitis: a microbiota-driven disease. Trends Endocrinol Metab 2013;24:537-45.
57. Sanyal AJ, Campbell-Sargent C, Mirshahi F, Rizzo WB, Contos MJ, Sterling RK, et al. Nonalcoholic steatohepatitis: association of insulin resistance and mitochondrial abnormalities. Gastroenterology 2001;120:1183-92.
58. McClain CJ, Mokshagundam SP, Barve SS, Song Z, Hill DB, Chen T, et al. Mechanisms of non-alcoholic steatohepatitis. Alcohol 2004;34:67-79.
59. Day CP, Saksena S. Non-alcoholic steatohepatitis: definitions and pathogenesis. J Gastroenterol Hepatol. 2002;17 Suppl 3:S377-S84.
60. Marra F, Gastaldelli A, Svegliati Baroni G, Tell G, Tiribelli C. Molecular basis and mechanisms of progression of non-alcoholic steatohepatitis. Trends Mol Med. 2008;14:72-81
61. Charlton MR, Burns JM, Pederson RA, Watt KD, Heimbach JK, Dierkhising RA. Frequency and outcomes of liver transplantation for nonalcoholic steatohepatitis in the United States. Gastroenterol. 2011;141:1249-53.
62. Vatche G. Agopian et al. Liver Transplantation for Nonalcoholic Steatohepatitis. Annals of Surgery 2012; 256(4); 624-633.
63. McCullough AJ. Epidemiology of the metabolic syndrome in the USA. J Dig Dis. 2011;12:333-40.

Claims (13)

1. Способ лечения фиброза печени или фиброза почек у субъекта, нуждающегося в этом, включающий совместное введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество сенекривирока или его соли; фумаровой кислоты; и одного или более дополнительных активных агентов, где один или более дополнительных активных агентов выбраны из группы, состоящей из антиретровирусного агента, агента, подавляющего иммунную систему, и противофиброзного агента; где фиброз печени связан с нецирротическим фиброзом печени, возникновением цирроза, неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ) или неалкогольной жировой болезнью печени (НЖБП).
2. Способ по п. 1, в котором субъект страдает заболеванием или состоянием, выбранным из группы, состоящей из алкогольной болезни печени, смешанной инфекции ВИЧ и ВГС, вирусного гепатита (такого как инфекция ВГВ или ВГС), сахарного диабета 2 типа (СД2), метаболического синдрома (МС) и их комбинации.
3. Способ лечения неалкогольного стеатогепатита у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества сенекривирока или его соли; при этом неалкогольный стеатогепатит связан с CCR5-тропной ВИЧ-1 инфекцией.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором сенекривирок или его соль представлены в виде пероральной композиции.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором сенекривирок или его соль вводят один раз в сутки или два раза в сутки.
6. Способ по п. 1, в котором один или более дополнительных активных агентов представляют собой антиретровирусный агент, выбранный из группы, состоящей из ингибиторов проникновения, нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, нуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы, ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы, ингибиторов протеазы, ингибиторов интегразы, ингибиторов созревания и их комбинации.
7. Способ по п. 6, в котором один или более дополнительных антиретровирусных агентов выбраны из группы, состоящей из ламивудина, эфавиренца, ралтегравира, вивекона, бевиримата, альфа-интерферона, зидовудина, абакавира, лопинавира, ритонавира, тенофовира, дизопроксила тенофовира, пролекарств тенофовира, эмтрицитабина, элвитегравира, кобицистата, дарунавира, атазанавира, рилпивирина, долутегравира и их комбинации.
8. Способ по п. 1, в котором один или более дополнительных активных агентов представляют собой агент, подавляющий иммунную систему, выбранный из группы, состоящей из циклоспорина, такролимуса, преднизолона, гидрокортизона, сиролимуса, эверолимуса, азатиоприна, микофенольной кислоты, метотрексата, базиликсимаба, даклизумаба, ритуксимаба, антитимоцитарного глобулина, антилимфоцитарного глобулина и их комбинации.
9. Способ по п. 1, в котором один или более дополнительных активных агентов представляют собой противофиброзные агенты, выбранные из группы, состоящей из N-ацетил-L-цистеинов (NAC), а также ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), антагонистов АТ II, обетихолевой кислоты (ОХК), GFT505, симтузумаба или их комбинации.
10. Способ по п. 1, включающий определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, и определения схемы лечения на основании увеличения или снижения уровня одной, или более биологических молекул, причем биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из липополисахарида (ЛПС), ЛПС-связывающего белка (ЛСБ), 16S рДНК, sCD14, кишечной формы белка, связывающего жирные кислоты (I-FABP), зонулина-1, коллагена 1а1 и 3а1, TGF-β, фибронектина-1, вчСРБ, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-33, фибриногена, моноцитарного хемотаксического белка-1 (МХБ-1), макрофагального воспалительного белка-1α и -1β (МБВ-1α и -1β), цитокина А5, sCD163, TGF-β, ФНО-α, биомаркера апоптоза гепатоцитов, такого как цитокератин-18 (CK-18) (расщепленный каспазой и общий) и их комбинации.
11. Способ по п. 1, включающий определение уровня одной или более биологических молекул у субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем увеличение или уменьшение уровня одной или более биологических молекул по сравнению с заранее определенным стандартным уровнем представляет собой прогноз эффективности лечения фиброза или фиброзного заболевания, или состояния, причем биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из липополисахарида (ЛПС), ЛПС-связывающего белка (ЛСБ), 16S-рДНК, sCD14, кишечной формы белка, связывающего жирные кислоты (I-FABP), зонулина-1, коллагена 1а1 и 3а1, TGF-β, фибронектина-1, чсСРБ, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-33, фибриногена, МХБ-1, МБВ-1α и -1β, цитокина А5, sCD163, TGF-β, ФНО-α, биомаркера апоптоза гепатоцитов, такого как CK-18 (расщепленный каспазой и общий) и их комбинации.
12. Способ по п. 10 или 11, в котором одна или более биологических молекул измеряются в биологическом образце субъекта, подвергаемого лечению фиброза или фиброзного заболевания, или состояния.
13. Способ по п. 12, в котором биологический образец выбирают из крови, кожи, волосяных фолликулов, слюны, слизистой ротовой полости, слизистой влагалища, пота, слез, эпителиальной ткани, мочи, сперматозоида, спермы, семенной жидкости, секрета простаты, предэякулята (Куперова жидкость), экскрета, биопсии, асцита, спинномозговой жидкости, лимфы, мозга, и образца выделенной ткани или образца биопсии.
RU2016141281A 2014-03-21 2015-03-20 Сенекривирок для лечения фиброза RU2724339C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461968829P 2014-03-21 2014-03-21
US61/968,829 2014-03-21
US201462024713P 2014-07-15 2014-07-15
US62/024,713 2014-07-15
US201562114304P 2015-02-10 2015-02-10
US62/114,304 2015-02-10
PCT/US2015/021828 WO2015143367A2 (en) 2014-03-21 2015-03-20 Cenicriviroc for the treatment of fibrosis

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020119611A Division RU2020119611A (ru) 2014-03-21 2015-03-20 Сенекривирок для лечения фиброза

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2016141281A RU2016141281A (ru) 2018-04-23
RU2016141281A3 RU2016141281A3 (ru) 2018-10-26
RU2724339C2 true RU2724339C2 (ru) 2020-06-23

Family

ID=54145485

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020119611A RU2020119611A (ru) 2014-03-21 2015-03-20 Сенекривирок для лечения фиброза
RU2016141281A RU2724339C2 (ru) 2014-03-21 2015-03-20 Сенекривирок для лечения фиброза

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020119611A RU2020119611A (ru) 2014-03-21 2015-03-20 Сенекривирок для лечения фиброза

Country Status (16)

Country Link
US (3) US20170239262A1 (ru)
EP (2) EP3922246A1 (ru)
JP (1) JP6556825B2 (ru)
KR (1) KR20160132489A (ru)
CN (1) CN106488769A (ru)
AU (2) AU2015230986A1 (ru)
BR (1) BR112016021682A2 (ru)
CA (1) CA2941411A1 (ru)
CL (1) CL2016002372A1 (ru)
HK (1) HK1232147A1 (ru)
IL (1) IL247515A0 (ru)
MA (1) MA39748A (ru)
MX (1) MX2016012262A (ru)
RU (2) RU2020119611A (ru)
SG (2) SG11201607859SA (ru)
WO (1) WO2015143367A2 (ru)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2206702B1 (en) 2001-08-08 2011-12-28 Tobira Therapeutics, Inc. Bicyclic compound, production and use thereof
WO2011140441A2 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Children's Hospital Medical Center Methods and systems for converting precursor cells into intestinal tissues through directed differentiation
MY180145A (en) * 2013-05-15 2020-11-23 Tobira Therapeutics Inc Cenicriviroc compositions and methods of making and using the same
WO2015183920A2 (en) 2014-05-28 2015-12-03 Children's Hospital Medical Center Methods and systems for converting precursor cells into gastric tissues through directed differentiation
AU2015314830B2 (en) * 2014-09-12 2021-01-07 Tobira Therapeutics, Inc. Cenicriviroc combination therapy for the treatment of fibrosis
WO2016061464A1 (en) 2014-10-17 2016-04-21 Children's Hospital Center, D/B/A Cincinnati Children's Hospital Medical Center In vivo model of human small intetine using pluripotent stem cells and methods of making and using same
JP6716568B2 (ja) 2014-12-23 2020-07-01 トビラ セラピューティクス， インコーポレイテッド セニクリビロックの製造方法及び関連類似体
MX2018003179A (es) * 2015-09-16 2018-08-21 Tobira Therapeutics Inc Terapia de combinación con cenicriviroc para el tratamiento de fibrosis.
ES2793001T3 (es) 2015-12-16 2020-11-12 Inst Nat Sante Rech Med Marcadores diagnósticos de inmunosenescencia y métodos para determinar la susceptibilidad a las infecciones nosocomiales
FR3050112B1 (fr) 2016-04-15 2020-09-04 Soc Civ Immobiliere Gecinq Utilisation de l'acide fenofibrique dans le traitement des maladies hepatiques
CN116790476A (zh) 2016-05-05 2023-09-22 儿童医院医疗中心 用于体外制造胃底组织的方法和与其相关的组合物
AU2017280068A1 (en) 2016-06-21 2019-01-31 Tobira Therapeutics, Inc. Purified cenicriviroc and purified intermediates for making cenicriviroc
CN106248947A (zh) * 2016-07-21 2016-12-21 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种哺乳动物高原脑水肿生物标志物及其应用
SG11201901438VA (en) 2016-08-31 2019-03-28 Tobira Therapeutics Inc Solid forms of cenicriviroc mesylate and processes of making solid forms of cenicriviroc mesylate
WO2018085615A1 (en) 2016-11-04 2018-05-11 Children's Hospital Medical Center Liver organoid compositions and methods of making and using same
WO2018106628A1 (en) 2016-12-05 2018-06-14 Children's Hospital Medical Center Colonic organoids and methods of making and using same
CN110418641A (zh) * 2017-02-24 2019-11-05 基恩菲特公司 用于组合疗法的药物组合物
JP7263659B2 (ja) * 2018-02-02 2023-04-25 シチュアン ケルン－バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド カルボン酸基を含む窒素含有ベンゾ複素環化合物、その調製方法及び使用
GB201804922D0 (en) * 2018-03-27 2018-05-09 Ucl Business Plc Traatment
WO2021133811A1 (en) * 2019-12-26 2021-07-01 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Solid state forms of cenicriviroc and process for preparation thereof
JP2023538533A (ja) * 2020-08-07 2023-09-08 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 線維症の処置のための、ｃｃｒ２／５拮抗剤と組み合わせたｆｇｆ２１

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2337365C1 (ru) * 2006-12-12 2008-10-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (ГОУ ВПО НГМУ Росздрава) Способ дифференциальной диагностики алкогольного и неалкогольного стеатогепатита
US20100179095A1 (en) * 2002-02-26 2010-07-15 Thomas Mueller Use of folates for producing a preparation suitable for preventing and treating inflammation and diseases associated with inflammation, especially for influencing the inflammation markers crp and saa
EA014772B1 (ru) * 2005-05-31 2011-02-28 Новартис Аг Лечение заболеваний печени, в патогенезе которых задействовано железо
RU2435593C2 (ru) * 2009-07-21 2011-12-10 Лев Давидович Раснецов Фармацевтическая композиция для лечения сахарного диабета 2 типа и лекарственное средство на его основе
US20120232028A1 (en) * 2001-08-08 2012-09-13 Tobira Therapeutics, Inc. Bicyclic Compound, Production and Use Thereof
WO2014186581A1 (en) * 2013-05-15 2014-11-20 Tobira Therapeutics, Inc. Cenicriviroc compositions and methods of making and using the same

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60032016T2 (de) * 1999-12-08 2007-06-21 Teijin Ltd. Cycloamin-ccr5-rezeptor-antagonisten
JPWO2006059716A1 (ja) 2004-12-03 2008-06-05 武田薬品工業株式会社 固形製剤
US7683176B2 (en) * 2006-07-14 2010-03-23 Chemocentryx, Inc. Triazolyl pyridyl benzenesulfonamides
US20080194575A1 (en) * 2006-10-04 2008-08-14 Naiara Beraza Treatment for non-alcoholic-steatohepatitis
CN101616689A (zh) * 2006-10-05 2009-12-30 森托科尔奥索生物科技公司 用于治疗纤维化的ccr2拮抗剂

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120232028A1 (en) * 2001-08-08 2012-09-13 Tobira Therapeutics, Inc. Bicyclic Compound, Production and Use Thereof
US20100179095A1 (en) * 2002-02-26 2010-07-15 Thomas Mueller Use of folates for producing a preparation suitable for preventing and treating inflammation and diseases associated with inflammation, especially for influencing the inflammation markers crp and saa
EA014772B1 (ru) * 2005-05-31 2011-02-28 Новартис Аг Лечение заболеваний печени, в патогенезе которых задействовано железо
RU2337365C1 (ru) * 2006-12-12 2008-10-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (ГОУ ВПО НГМУ Росздрава) Способ дифференциальной диагностики алкогольного и неалкогольного стеатогепатита
RU2435593C2 (ru) * 2009-07-21 2011-12-10 Лев Давидович Раснецов Фармацевтическая композиция для лечения сахарного диабета 2 типа и лекарственное средство на его основе
WO2014186581A1 (en) * 2013-05-15 2014-11-20 Tobira Therapeutics, Inc. Cenicriviroc compositions and methods of making and using the same

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KLIBANOV O.M. et al. Cenicriviroc, an orally active CCR5 antagonist for potential treatment of HIV infection. Curr. Opin Investing Drugs. 2010 Aug; 11(8): 940-50. *
KLIBANOV O.M. et al. Cenicriviroc, an orally active CCR5 antagonist for potential treatment of HIV infection. Curr. Opin Investing Drugs. 2010 Aug; 11(8): 940-50. MENNING MM et al. Fumaric acid microenvironment tablet formulation and process development for crystalline cenicriviroc mesylate, a BCS IV compound. Mol. Pharm., 2013 Nov. 4, 10(11), р.4005-15. *
MENNING MM et al. Fumaric acid microenvironment tablet formulation and process development for crystalline cenicriviroc mesylate, a BCS IV compound. Mol. Pharm., 2013 Nov. 4, 10(11), р.4005-15. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2016141281A (ru) 2018-04-23
US20170239262A1 (en) 2017-08-24
MX2016012262A (es) 2017-01-06
KR20160132489A (ko) 2016-11-18
CL2016002372A1 (es) 2017-02-10
EP3119401A2 (en) 2017-01-25
JP2017509704A (ja) 2017-04-06
JP6556825B2 (ja) 2019-08-07
CN106488769A (zh) 2017-03-08
RU2020119611A (ru) 2020-06-29
HK1232147A1 (zh) 2018-01-05
SG11201607859SA (en) 2016-10-28
US20200368247A1 (en) 2020-11-26
BR112016021682A2 (pt) 2018-06-26
RU2016141281A3 (ru) 2018-10-26
AU2020203867A1 (en) 2020-07-02
WO2015143367A2 (en) 2015-09-24
EP3119401A4 (en) 2017-12-13
CA2941411A1 (en) 2015-09-24
MA39748A (fr) 2021-04-21
EP3922246A1 (en) 2021-12-15
IL247515A0 (en) 2016-11-30
AU2015230986A1 (en) 2016-10-13
US20190099429A1 (en) 2019-04-04
SG10201808104RA (en) 2018-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2724339C2 (ru) Сенекривирок для лечения фиброза
JP2020196750A (ja) 線維症を処置するためのセニクリビロック併用療法
US20200268768A1 (en) Cenicriviroc combination therapy for the treatment of fibrosis
US20200360347A1 (en) Cenicriviroc for the treatment of fibrosis