RU2721726C2 - Устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности - Google Patents
Устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2721726C2 RU2721726C2 RU2018135637A RU2018135637A RU2721726C2 RU 2721726 C2 RU2721726 C2 RU 2721726C2 RU 2018135637 A RU2018135637 A RU 2018135637A RU 2018135637 A RU2018135637 A RU 2018135637A RU 2721726 C2 RU2721726 C2 RU 2721726C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- specified
- hfbp
- threshold value
- markers
- antibodies
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к иммуноанализу для выявления кардиомаркеров на ранних стадиях кардиального события, такого как инфаркт миокарда. Изобретение касается устройства для обнаружения маркеров острого инфаркта миокарда (ОИМ) в образце крови человека, включающего иммобилизованную в полосе иммуноанализа смесь по меньшей мере двух антител или конъюгатов антител, одновременно вступающую в реакцию по меньшей мере с сердечным тропонином (СТ) и с сердечной формой белка, связывающего жирные кислоты (HFBP), объединенные реакции обеспечивают визуальный сигнал, если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение, составляющее 0,5 нг/мл для СТ и 5 нг/мл для HFBP, указанный визуальный сигнал быстро и достоверно указывает на событие ОИМ в критический период от 1 до 4 часов с момента его возникновения. Технический результат - выявление диагностических маркеров крови уже в течение получаса при появлении симптомов острого инфаркта миокарда. 19 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.
Description
Область техники изобретения
Настоящее изобретение относится к иммуноанализу для выявления кардиомаркеров на ранних стадиях кардиального события, такого как инфаркт миокарда. В частности, изобретение представляет собой устройство для выявления диагностически релевантной комбинации двух маркеров крови уже в течение получаса при появлении симптомов острого инфаркта миокарда.
Уровень техники изобретения
Ежегодно около одного миллиона человек только в Соединенных Штатах страдают острым инфарктом миокарда (ОИМ), из которых 10% могут умереть в течение одного года в зависимости от степени тяжести заболевания и качества вмешательства. В любом случае, медицинская помощь, включая первичное чрескожное коронарное вмешательство и/или тромболитическую терапию, если необходимо, должна быть оказана по возможности незамедлительно. Было продемонстрировано, что сокращение продолжительности между началом боли за грудиной и реперфузией до менее чем четырех часов имеет решающее значение для снижения некроза миокарда и улучшения сердечной деятельности, снижая показатель 30-дневной смертности [Но Y.C. et al.: Crit. Care Med. 42 (2014) 1788-96]. Очень важна ранняя диагностика ОИМ, но чувствительность классической ЭКГ для диагностирования ОИМ у пациентов с болью в груди по ишемическому типу ненамного превышает 50% [The Merck Manual, 17-я редакция (1999), стр. 1673]. В этой связи кардиомаркеры крови имеют огромное значение. Для оценки повреждения миокарда использовались различные белки, которые просачиваются из поврежденных клеток миокарда в кровоток, включая миоглобин или энзимы, такие как аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа или креатинфосфокиназа. В настоящее время это, главным образом, тропонины, которые были признаны достаточно специфичными для выявления повреждений миокарда. К сожалению, кардиотропонины, хотя и остаются повышенными в течение двух недель после события ОИМ, проявляются не сразу и хорошо могут быть замерены только через несколько часов после события ОИМ, т.е. первые моменты, когда правильный диагноз является наиболее критическим, освещены недостаточно. Поэтому целью настоящего изобретения является создание способа диагностики острого инфаркта миокарда путем выявления соответствующих маркеров крови. Было установлено, что сердечная форма белка, связывающего жирные кислоты (HFBP), является другим маркером ОИМ и, как правило, появляется в крови в течение, приблизительно, одного часа, и достигает пикового значения в течение, приблизительно, пяти часов в пределах события ОИМ [Tanaka Т. et al.: Clinical Biochemistry 24 (1991) 195-201; Van Nieuwenhoven F.A. et al.: Circulation 92 (1995) 2848-54], но диагностическая точность HFBP в качестве единственного маркера оказалась недостаточной в клинических условиях [Park S.Y. et al.: Clin. Neurol. Neurosurg. 115 (2013) 405-10]. Другой целью настоящего изобретения является создание способа диагностирования острого инфаркта миокарда путем обнаружения более одного маркера крови.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание устройства для диагностики ОИМ, которое использует более одного маркера крови инфаркта миокарда.
Еще одной целью настоящего изобретения является создание устройства для оказания помощи в диагностике ОИМ в течение нескольких часов после события ОИМ.
Другие цели и преимущества настоящего изобретения будут представлены по мере описания.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение представляет собой устройство для обнаружения маркеров острого инфаркта миокарда (ОИМ) в образце крови человека, указанное устройство включает смесь по меньшей мере двух антител или конъюгатов антител, вступающую в реакцию по меньшей мере с сердечным тропонином (СТ) и с сердечной формой белка, связывающего жирные кислоты (HFBP). Указанные маркеры предпочтительно включают СТ и HFBP, причем указанные конъюгаты антител одновременно вступают в реакцию с указанными маркерами, присутствующими в указанном образце крови, тем самым создают визуальный сигнал, если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение. Антитела или конъюгаты антител вступают в реакцию с указанными маркерами крови только после отделения плазмы крови от клеток крови; клетки крови не контактируют с указанными антителами, как известно специалисту, поскольку клетки крови сначала удаляются на предварительном фильтре; обычно плазма перемещается к антителу или конъюгату антитела для образования комплекса маркер-антитело или комплекса
конъюгата маркер-антитело, который создает визуальный сигнал либо сам, либо после реакции с дополнительными реагентами. Пороговое значение для каждого маркера определяется из распределения его концентрации в крови здорового населения. В одном из вариантов осуществления изобретения, указанное пороговое значение выше 95-го перцентиля в указанном распределении для каждого из маркеров. В другом варианте осуществления изобретения, указанное пороговое значение выше 99-го перцентиля в указанном распределении для каждого из маркеров. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, указанное пороговое значение для каждого маркера ниже максимальной концентрации маркера в крови, которая не создает визуальный сигнал при вступлении в реакцию с указанными антителами или конъюгатами антител, если указанный маркер в образце один. В одном варианте осуществления устройства по данному изобретению, указанное пороговое значение для СТ составляет 0,5 нг/мл, а указанное пороговое значение для HFBP составляет 5 нг/мл. В другом варианте осуществления, указанное пороговое значение для СТ составляет около 1 нг/мл, а указанное пороговое значение для HFBP составляет около 10 нг/мл. В одном варианте осуществления, устройство по изобретению создает визуальный сигнал, если концентрация СТ в указанном образце крови составляет по меньшей мере 0,5 нг/мл и одновременно концентрация HFBP в указанном образце крови составляет по меньшей мере 5 нг/мл. В другом варианте осуществления, устройство по изобретению создает визуальный сигнал, если концентрации СТ и HFBP в указанном образце крови составляют по меньшей мере 1 нг/мл и 5 нг/мл, соответственно. В еще одном варианте осуществления, устройство по изобретению создает визуальный сигнал, если концентрации СТ и HFBP в указанном образце крови составляют по меньшей мере 1 нг/мл и 10 нг/мл, соответственно. Указанный тропонин может содержать белки, выбранные из тропонина-С, тропонина-I, тропонина-Т, комплекса указанных тропонинов или смеси, содержащей по меньшей мере два из указанных тропонинов. Предпочтительно, чтобы тропонин-I или тропонин-Т был использован в качестве кардиомаркера. Указанную смесь антител или конъюгатов антител обычно иммобилизуют в полосе иммуноанализа в устройстве по данному изобретению. Указанная полоса может быть частью устройства иммуноанализа, например, набора латерального проточного иммуноанализа. В одном из вариантов осуществления, указанное устройство иммуноанализа включает в себя ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay - твердофазный иммуносорбентный анализ). Указанную смесь антител или конъюгатов антител иммобилизуют в полосе иммуноанализа в виде одной узкой полоски, которая настроена на изменение цвета при наличии антигенов, а именно указанных маркеров крови ОИМ. Таким образом, указанный визуальный сигнал представляет собой изменение цвета указанной полоски, вызванное реакцией цветообразования маркера с конъюгатом антитела. В другом аспекте изобретения, указанная смесь антител или конъюгатов антител может быть иммобилизована в указанной полосе в виде нескольких узких полосок, которые различаются указанным заданным пороговым значением и создают визуальные сигналы при различных концентрациях указанных маркеров (различающихся по чувствительности). Устройство по изобретению может с успехом содержать контрольные полоски, демонстрирующие сравнительную интенсивность цвета либо до, либо после контакта с указанным образцом крови. Сравнительные полоски могут включать в себя антитела или конъюгаты антител, вступающие в реакцию с типовыми белками крови (альбумины, иммуноглобулины и др.), антитела или конъюгаты антител, конъюгированные таким образом и иммобилизованные в таком количестве, чтобы создать цветовой
сигнал желаемой интенсивности при контакте с указанным образцом крови. Сравнительные полоски могут содержать цвет желаемой интенсивности, присутствующий в устройстве до вступления в контакт с указанным образцом, а также стабильный уже после контакта с указанным образцом. Указанный цвет желаемой интенсивности может соответствовать ожидаемому цветовому сигналу, созданному соответствующими концентрациями маркеров в образце крови. Набор сравнительных полосок позволяет оценить концентрацию кардиомаркеров в образце крови при сравнении визуального сигнала, созданного кардиомаркером крови или сочетанием маркеров, с набором сравнительных полосок.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения, предусмотрено устройство для обнаружения события ОИМ, включающее одну или несколько смесей антител, одновременно специфичных как для СТ, так и для HFBP, антитела или конъюгаты антител, иммобилизованные в полосе иммуноанализа в виде одной или нескольких узких полосок и вступающие в реакцию с кардиомаркерами СТ и HFBP по меньшей мере в одном образце крови, чтобы создать визуальный сигнал(ы), если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение, указанная полоса дополнительно содержит контрольные полоски, демонстрирующие сравнительные интенсивности цвета либо до, либо после контакта с указанным образцом крови, причем несколько указанных узких полосок в некоторых случаях вступают в реакцию с указанными маркерами в указанном образце крови с различными чувствительностями и создают указанные визуальные сигналы при различных концентрациях маркера. Устройство по изобретению обеспечивает оценку концентрации СТ и/или HFBP в указанном образце, основанную либо на сравнении интенсивностей указанного
сигнала(ов) с указанными сравнительными интенсивностями, либо на сравнении двух сигналов, соответствующих двум различным концентрациям маркера. По одному аспекту изобретения, оценка концентрации СТ и/или HFBP в указанном образце обеспечивает оценку времени, прошедшего между отбором образца и событием ОИМ. В одном примере устройства, согласно изобретению, указанное пороговое значение составляет 0,5 нг/мл для СТ и 10 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок, причем положительный сигнал указывает на то, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее одного часа назад. В другом примере устройства, согласно изобретению, указанное заданное пороговое значение составляет 1 нг/мл для СТ и 20 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок, причем положительный сигнал указывает на то, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее трех часов назад. В еще одном примере устройства, согласно изобретению, указанное заданное пороговое значение составляет 4 нг/мл для СТ и 80 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок, причем положительный сигнал указывает на то, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее девяти часов назад. Комбинированные сигналы нескольких "хорошо отлаженных" полосок обеспечивают более точные результаты. Например, устройство, согласно изобретению, может включать в себя полоску с пороговым значением 0,5 нг/мл для СТ и 10 нг/мл для HFBP, и другую полоску с пороговым значением 1 нг/мл для СТ и 20 нг/мл для HFBP, причем положительный сигнал в первой указанной полоске вместе с отрицательным сигналом во второй указанной полоске указывают на то, что событие ОИМ произошло в указанном донорском образце в период, примерно, от 3 до 6 часов тому назад.
Изобретение обеспечивает способ диагностики кардиального события, в частности ОИМ, включающий взятие образца крови пациента с подозрением на наличие такого события, например пациента, страдающего от боли в груди по ишемическому типу, и нанесение образца на устройство иммуноанализа, содержащее смесь по меньшей мере двух антител или конъюгатов антител, которая вступает в реакцию по меньшей мере с СТ и HFBP. В другом аспекте изобретения, берутся по меньшей мере два образца в два разных периода времени, причем оценки концентраций СТ и/или HFBP в указанных двух образцах повышают точность оценки времени события ОИМ.
Подробное описание сущности изобретения
Авторы изобретения обнаружили, что одновременное выявление двух сердечных маркеров крови с использованием смеси антител или конъюгатов антител может исключить необходимость использования предыдущих способов, имеющих целью раннее подтверждение кардиального события в случае, например, боли в груди по ишемическому типу или при других симптомах. Изобретение представляет собой устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности, позволяющее быстро диагностировать пациента с подозрением на наличие кардиального события, в частности острого инфаркта миокарда (ОИМ), в течение наиболее критического периода, составляющего несколько часов с момента события. В одном аспекте, изобретение обеспечивает качественный латеральный проточный иммунохроматографический анализ, включающий смесь двух антител или конъюгатов антител, каждое из которых является специфичным для одного кардиомаркера и нацелено на одновременное выявление обоих маркеров при низких концентрациях, характерных для ранних стадий кардиального события, в то время как комбинированный сигнал
иммуноанализа, созданный обоими маркерами, при превышении определенного порогового уровня указывает на наличие события. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, один из маркеров представляет собой сердечный тропонин (СТ), а другой представляет собой сердечную форму белка, связывающего жирные кислоты (HFBP). В одном варианте осуществления изобретения, HFBP выявляется примерно через полчаса после появления симптомов, тогда как уровни в это время составляют около 5 нг/мл (базовые уровни 95% здорового населения находятся в диапазоне 0,5-3,5), тогда как тропонин-I обнаруживается примерно через три часа после симптомов, когда его уровни превышают 1 нг/мл. Например, результаты клинических испытаний показали аддитивный эффект двух маркеров, причем каждый из них по отдельности был необнаруживаемым ниже определенной концентрации (обычно 1 нг/мл для тропонина и 5 нг/мл для HFBP), но оба вместе в тех же концентрациях обеспечивали истинно положительные результаты; в одном примере, 0,14 нг/мл тропонина или 4,92 нг/мл FABP не обнаруживался, а образец содержащий 0,14 нг/мл тропонина с 4,92 нг/мл HFBP стал обнаруживаться.
Применительно к "антителу" в описании изобретения, речь может идти как об антителе, так и о деривате антитела или конъюгате антитела, соответствующим аспектом которых является способность агента вступать в реакцию с антигеном, а именно с кардиомаркером. Смесь антител в устройстве или способе, согласно изобретению, может содержать более одного антитела против одного маркера; смесь может содержать антитела против нескольких форм маркера, например, против нескольких форм тропонина, или против нескольких эпитопов на одном и том же маркере. Разумеется, что устройство и способ, согласно изобретению, используют известные в данной области реакции, такие как реакции комплекса антитело-антиген с другим антителом или конъюгатом антитела, целью которых является получение как можно более сильного визуального сигнала. Например, в одном варианте осуществления изобретения, устройство включает два антитела для реакции с СТ и одно антитело для реакции с HFBP, а также два конъюгата антител для реакции с комплексами СТ и один конъюгат антитела для реакции с комплексами HFBP.
Согласно одному аспекту, анализ нацелен на качественное определение HFBP и тропонина I в образце цельной крови диагностируемого пациента, указанные маркеры обычно обнаруживаются в крови в течение 1 часа и в течение 4 часов, соответственно, после повреждения миокарда, при раздельном контроле, причем следует отметить, что существующая практика не основывается на обнаружении только HFBP.
Средства раздельного обнаружения HFBP и тропонина I были описаны; однако, изобретение объединяет две отдельные реакции в один эффект, который выражается в одном индикаторном сигнале. В важном аспекте изобретения, устройство, включающее в себя смесь антител или конъюгатов антител, специфичных для двух кардиомаркеров, одновременно обнаруживает комбинированные минимальные уровни кардиотропонина I и/или HFBP; в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, указанные минимальные уровни могут быть едва различимы, если измеряются отдельно. Преимущественно, устройство по изобретению обеспечивает результаты через несколько минут, например от 10 до 15 минут; очень важно, что результаты могут быть получены в течение первых нескольких наиболее критических часов после кардиального события, в частности в течение четырех часов, например, в течение трех часов или в течение двух часов. Дело в том, что положительный результат при обнаружении повышенных уровней HFBP и СТ после предполагаемого кардиального события у пациента указывает на чрезвычайную ситуацию и предписывает госпитализацию пациента в больницу; новый подход к объединению обоих маркеров в одну линию упрощает интерпретацию практических результатов. Более того, общая линия теста для двух кардиомаркеров улучшает сенситивность теста, в котором комплексы большего количества антител или конъюгатов антител, таких как анти-HFBP и антитропонин I, способствуют интенсивности одной и той же полоски. Благодаря этому накопительному эффекту обнаруживается меньше маркеров в одной полоске, содержащей смесь антител, чем в двух отдельных полосках, содержащих раздельные антитела или конъюгаты антител. Однако, основным преимуществом нового устройства и способа является усредняющий эффект сочетания сигналов в критический период от одного до четырех часов после события ОИМ, что обеспечивает быстрые и надежные результаты практически в режиме онлайн.
Изобретение будет далее описано и проиллюстрировано следующими примерами.
Примеры
Были получены конъюгаты антител, обеспечивающие цветную реакцию с СТ, HFBP или человеческим сывороточным альбумином, в частности антитропонин I, анти-HFBP и анти-HSA (anti Human Serum Albumin - антитела к сывороточному альбумину человека). Конъюгаты антител применялись для иммобилизации в узких полосках, на полосах капиллярных ложе, сконфигурированных на иммобилизацию
конъюгатов антител. Были использованы полосы для подготовки устройств латерального проточного иммуноанализа (далее LFID). Иммобилизуя ряд конъюгатных количеств/концентраций (объемы определенных концентраций, которые должны быть нанесены на полосу для иммобилизации конъюгата, соответствующие различным общим количествам цветобразующих реагентов в полоске), и посредством взаимодействия полосок с рядом образцов, содержащих различные концентрации антигена, для всех антигенов были определены необходимые количества реагентов для желаемой интенсивности сигнала. Были определены следующие пороговые количества/концентрации: количество антитропонина I для обнаружения 1 нг/мл тропонина I в образце и количество aHTH-FABP-3 для обнаружения 5 нг/мл HFBP в образце, пороговые количества, соответствующие максимальной величине, обеспечивающей неразличимый цветовой сигнал. Образцы, включающие 3 нг/мл тропонина-I или 15 мг/мл HFBP, обеспечили при одинаковых условиях достаточно яркие цветовые полоски. Анти-HSA применялся в таком количестве, чтобы обеспечить сильный сигнал (примерно в 10 раз сильнее, чем 3 нг/мл тропонина-I с тропониновой полоской) и служить в качестве контроля того, что LFID в принципе работает. Смесь конъюгатов антител была подготовлена путем смешивания указанного порогового количества антитропонина I и указанного порогового количества FABP-3.
Было подготовлено девять LFID, все из которых содержали контрольную полоску HSA (Human Serum Albumin - сывороточный альбумин человека); три содержали пороговое количество для обнаружения 1 нг/мл тропонина-I, три содержали пороговое количество для обнаружения 5 нг/мл HFBP, и еще три содержали полоску со смешанными конъюгатами антител, включающими указанные
пороговые количества антитропонина-I и анти-HFBP. Образец человеческой крови от здорового донора (с очень низкими уровнями кардиомаркеров) был разделен на три порции: тропонин-1 был добавлен в первую порцию до концентрации 1 нг/мл, HFBP был добавлен во вторую порцию до концентрации 5 нг/мл, и оба маркера были добавлены в концентрациях 1 и 5 нг/мл, соответственно, в третью порцию. Каждую порцию наносили на LFIDs, включающие соответствующее антитело. Различимые сигналы появились (+) или не появились (-) в устройствах, как показано в Таблице 1.
Таблица 1
Наличие (+) или отсутствие (-) видимого сигнала в девяти устройствах. Три устройства содержали анти-СТ, следующие три устройства содержали анти-HFBP, и еще три содержали смесь антител; образец крови, содержащий 1 нг/мл добавленного тропонина-I, был нанесен на устройства с анти-СТ; образец крови, содержащий 5 нг/мл HFBP был нанесен на устройства с анти-HFBP; образец крови, содержащий 1 нг/мл добавленного тропонина-I и 5 нг/мл добавленного HFBP, был нанесен на устройства со смесями.
С - контроль, М - кардиомаркер.
В таблице показаны достоверные результаты, полученные с устройств (в трех экземплярах). Концентрации 1 и 5 нг/мл двух маркеров, соответственно, относятся к очень ранней стадии 25 кардиального события. Таблица показывает, что устройство по изобретению может предоставить релевантную информацию, способствующую ранней диагностике ОИМ.
Хотя данное изобретение и описано с точки зрения некоторых конкретных примеров, возможны многие модификации и вариации. Поэтому предполагается, что в рамках приложенной формулы изобретения, указанное изобретение может быть реализовано иначе, чем конкретно описано.
Claims (20)
1. Устройство для обнаружения маркеров острого инфаркта миокарда (ОИМ) в образце крови человека, включающее иммобилизованную в полосе иммуноанализа смесь по меньшей мере двух антител или конъюгатов антител, одновременно вступающую в реакцию по меньшей мере с сердечным тропонином (СТ) и с сердечной формой белка, связывающего жирные кислоты (HFBP), объединенные реакции обеспечивают визуальный сигнал, если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение, составляющее 0,5 нг/мл для СТ и 5 нг/мл для HFBP, указанный визуальный сигнал быстро и достоверно указывает на событие ОИМ в критический период от 1 до 4 часов с момента его возникновения.
2. Устройство по п. 1, включающее в себя другую смесь указанных антител или конъюгатов антител, где указанное пороговое значение составляет 4 нг/мл для СТ и 80 нг/мл для HFBP и где указанный визуальный сигнал показывает, что событие ОИМ произошло не менее девяти часов назад.
3. Устройство по п. 1, в котором указанное пороговое значение для каждого маркера определяется из распределения его концентрации в крови здорового населения.
4. Устройство по п. 3, в котором указанное пороговое значение выше 95-го перцентиля в указанном распределении для каждого из маркеров.
5. Устройство по п. 3, в котором указанное пороговое значение выше 99-го перцентиля в указанном распределении для каждого из маркеров.
6. Устройство по п. 3, в котором указанное пороговое значение для каждого маркера ниже максимальной концентрации маркера, которая не создает визуальный сигнал, если указанный маркер в образце один.
7. Устройство по п. 1, включающее в себя другую смесь указанных антител или конъюгатов антител, где указанное пороговое значение для СТ составляет около 1 нг/мл, а указанное пороговое значение для HFBP составляет около 10 нг/мл.
8. Устройство по п. 1, в котором указанный тропонин включает белки, выбранные из группы, состоящей из тропонина-С, тропонина-I, тропонина-Т, комплекса указанных тропонинов и смеси, содержащей по меньшей мере два из указанных тропонинов.
9. Устройство по п. 1, в котором указанная полоса является частью набора латерального проточного иммуноанализа.
10. Устройство по п. 1, в котором указанная смесь антител или конъюгатов антител иммобилизована в полосе иммуноанализа в виде одной узкой полоски и в котором указанный визуальный сигнал представляет собой изменение цвета указанной полоски.
11. Устройство по п. 1, в котором указанная смесь антител или конъюгатов антител иммобилизована в указанной полосе в виде нескольких узких полосок, различающихся указанным заданным пороговым значением и создающих указанный визуальный сигнал при различных концентрациях указанных маркеров (различающихся по чувствительности).
12. Устройство по п. 10 или 11, дополнительно включающее контрольные полоски, демонстрирующие сравнительную интенсивность цвета либо до, либо после контакта с указанным образцом крови.
13. Устройство по п. 1, включающее ELISA.
14. Устройство по п. 1, включающее одну или несколько смесей антител или конъюгатов антител, одновременно специфичных как для СТ, так и для HFBP, антитела или конъюгаты антител, иммобилизованные в полосе иммуноанализа в виде одной или нескольких узких полосок и вступающие в реакцию с указанными маркерами по меньшей мере в одном образце крови для создания визуального сигнала(ов), если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение, указанная полоса дополнительно включает контрольные полоски, демонстрирующие сравнительные интенсивности цвета либо до, либо после контакта с указанным образцом крови, причем несколько указанных узких полосок в некоторых случаях вступают в реакцию с указанными маркерами в указанном образце крови с различными чувствительностями и создают указанные визуальные сигналы при различных концентрациях маркера.
15. Устройство по п. 13, обеспечивающее оценку концентрации СТ и/или HFBP в указанном образце, основанную либо на сравнении интенсивностей указанного сигнала(ов) с указанными сравнительными интенсивностями, либо на сравнении двух сигналов, соответствующих двум различным концентрациям маркера.
16. Устройство по п. 14, в котором указанная оценка концентрации СТ и/или HFBP в указанном образце обеспечивает оценку времени, прошедшего между отбором образца и событием ОИМ.
17. Устройство по п. 14, в котором указанное заданное пороговое значение составляет 0,5 нг/мл для СТ и 10 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок и в котором положительный сигнал указывает, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее одного часа назад.
18. Устройство по п. 14, в котором указанное заданное пороговое значение составляет 1 нг/мл для СТ и 20 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок и в котором положительный сигнал указывает, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее трех часов назад.
19. Устройство по п. 14, в котором указанное заданное пороговое значение составляет 4 нг/мл для СТ и 80 нг/мл для HFBP для одной из указанных нескольких узких полосок и в котором положительный сигнал указывает, что событие ОИМ произошло у донора указанного образца не менее девяти часов назад.
20. Устройство по п. 14, в котором указанный по меньшей мере один образец крови включает по меньшей мере два образца, отобранных в два разных периода времени, и в котором оценки концентраций СТ и/или HFBP в указанных двух образцах повышают точность оценки времени события ОИМ.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL245091 | 2016-04-13 | ||
| IL245091A IL245091B (en) | 2016-04-13 | 2016-04-13 | Single stage cardiac test device |
| PCT/IL2017/050359 WO2017179036A1 (en) | 2016-04-13 | 2017-03-22 | One step cardiac test device |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018135637A3 RU2018135637A3 (ru) | 2020-05-13 |
| RU2018135637A RU2018135637A (ru) | 2020-05-13 |
| RU2721726C2 true RU2721726C2 (ru) | 2020-05-21 |
| RU2721726C9 RU2721726C9 (ru) | 2020-07-15 |
Family
ID=60042390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018135637A RU2721726C9 (ru) | 2016-04-13 | 2017-03-22 | Устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190154705A1 (ru) |
| EP (1) | EP3442428B1 (ru) |
| JP (1) | JP7251982B2 (ru) |
| CN (1) | CN109561887A (ru) |
| ES (1) | ES2908917T3 (ru) |
| IL (1) | IL245091B (ru) |
| RU (1) | RU2721726C9 (ru) |
| WO (1) | WO2017179036A1 (ru) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1998178A1 (en) * | 2007-05-29 | 2008-12-03 | F. Hoffman-la Roche AG | H-FABP as early predictor of myocardial infarction |
| CN101806804A (zh) * | 2010-01-08 | 2010-08-18 | 兰州生物制品研究所 | 用于免疫学方法检测急性心肌梗塞的试剂及测试条 |
| US20110076692A1 (en) * | 2009-09-29 | 2011-03-31 | Ramakrishna Sista | Detection of Cardiac Markers on a Droplet Actuator |
| WO2011113905A1 (en) * | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for staging myocardial infarction and for monitoring efficacy of intervention |
| RU113847U1 (ru) * | 2011-10-05 | 2012-02-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Производственное Объединение "Биотест" (Ооо Нпо "Биотест") | КОМБИНИРОВАННАЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ-МАРКЕРОВ ИНФАРКТА МИОКАРДА сБСЖК И ТРОПОНИНА I В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ |
| RU2464572C1 (ru) * | 2010-07-29 | 2012-10-20 | Сабир Насирович Велиев | Тест-система для иммунохроматографического определения сердечного белка, связывающего жирные кислоты, и тропонина i в образце цельной крови для экспресс-диагностики инфаркта миокарда (варианты) |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5604105B1 (en) * | 1990-10-12 | 1999-08-24 | Spectral Diagnostics Inc | Method and device for diagnosingand distinguishing chest pain in early onset thereof |
| JPH04285765A (ja) * | 1991-03-13 | 1992-10-09 | Casio Comput Co Ltd | デジタルレコーダ |
| JPH09304393A (ja) * | 1996-05-15 | 1997-11-28 | Ind Technol Res Inst | 急性心筋梗塞診断キット |
| JPH11326326A (ja) * | 1998-05-13 | 1999-11-26 | Dainippon Printing Co Ltd | 免疫検査体 |
| GB0509305D0 (en) | 2005-05-06 | 2005-06-15 | Randox Lab Ltd | Method |
| WO2007090058A2 (en) | 2006-01-27 | 2007-08-09 | Oxonica, Inc. | Lateral flow immunoassay with encapsulated detection modality |
| EP2016394A4 (en) | 2006-04-04 | 2013-04-24 | Singulex Inc | METHOD AND COMPOSITIONS FOR HIGHLY SENSITIVE ANALYSIS OF MARKERS AND DETECTION OF MOLECULES |
| WO2008066997A2 (en) | 2006-09-27 | 2008-06-05 | Cmed Technologies Ltd. | A method for quantitative measurement of cardiac biochemical markers |
| JP2010528306A (ja) | 2007-05-29 | 2010-08-19 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 心筋梗塞の早期予測因子としてのｈ−ｆａｂｐ |
| CN101271108A (zh) * | 2008-01-11 | 2008-09-24 | 广州益善生物技术有限公司 | 心肌梗塞早期诊断液相芯片及其制备方法 |
| JP5124601B2 (ja) | 2009-01-23 | 2013-01-23 | 惠三 山口 | オキサ型β−ラクタマーゼ産生菌の検出方法、同定方法及びキット |
| JP2010210444A (ja) | 2009-03-10 | 2010-09-24 | Beacle Inc | 多抗原同時検出用ナノ粒子 |
| EP2462444B1 (en) | 2009-08-07 | 2018-10-03 | Affinimark Technologies, Inc. | Methods for the immunological identification of cerebrospinal fluid |
| EP2753684B1 (en) * | 2011-09-08 | 2019-07-31 | Nexus Dx, Inc. | A multilevel analyte assay |
| CN203616317U (zh) | 2013-12-05 | 2014-05-28 | 北京汇创宜医疗科技有限公司 | 一种用于急性心梗诊断的组合检测卡 |
| CN103954778A (zh) | 2014-05-22 | 2014-07-30 | 江苏金标世纪生物科技有限公司 | 心肌梗塞三联快速检测试剂盒及其制备方法 |
| CN104714031A (zh) | 2015-03-25 | 2015-06-17 | 王义明 | 一种心肌梗死快速检测试剂盒 |
-
2016
- 2016-04-13 IL IL245091A patent/IL245091B/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-03-22 JP JP2018554438A patent/JP7251982B2/ja active Active
- 2017-03-22 WO PCT/IL2017/050359 patent/WO2017179036A1/en active Application Filing
- 2017-03-22 CN CN201780032538.2A patent/CN109561887A/zh active Pending
- 2017-03-22 US US16/091,385 patent/US20190154705A1/en not_active Abandoned
- 2017-03-22 ES ES17782044T patent/ES2908917T3/es active Active
- 2017-03-22 EP EP17782044.6A patent/EP3442428B1/en active Active
- 2017-03-22 RU RU2018135637A patent/RU2721726C9/ru active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1998178A1 (en) * | 2007-05-29 | 2008-12-03 | F. Hoffman-la Roche AG | H-FABP as early predictor of myocardial infarction |
| US20110076692A1 (en) * | 2009-09-29 | 2011-03-31 | Ramakrishna Sista | Detection of Cardiac Markers on a Droplet Actuator |
| CN101806804A (zh) * | 2010-01-08 | 2010-08-18 | 兰州生物制品研究所 | 用于免疫学方法检测急性心肌梗塞的试剂及测试条 |
| WO2011113905A1 (en) * | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for staging myocardial infarction and for monitoring efficacy of intervention |
| RU2464572C1 (ru) * | 2010-07-29 | 2012-10-20 | Сабир Насирович Велиев | Тест-система для иммунохроматографического определения сердечного белка, связывающего жирные кислоты, и тропонина i в образце цельной крови для экспресс-диагностики инфаркта миокарда (варианты) |
| RU113847U1 (ru) * | 2011-10-05 | 2012-02-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Производственное Объединение "Биотест" (Ооо Нпо "Биотест") | КОМБИНИРОВАННАЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ-МАРКЕРОВ ИНФАРКТА МИОКАРДА сБСЖК И ТРОПОНИНА I В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2721726C9 (ru) | 2020-07-15 |
| IL245091A0 (en) | 2016-08-31 |
| ES2908917T3 (es) | 2022-05-04 |
| EP3442428A4 (en) | 2019-10-16 |
| WO2017179036A1 (en) | 2017-10-19 |
| JP2019514009A (ja) | 2019-05-30 |
| EP3442428A1 (en) | 2019-02-20 |
| US20190154705A1 (en) | 2019-05-23 |
| RU2018135637A3 (ru) | 2020-05-13 |
| EP3442428B1 (en) | 2022-03-02 |
| IL245091B (en) | 2020-02-27 |
| JP7251982B2 (ja) | 2023-04-04 |
| RU2018135637A (ru) | 2020-05-13 |
| CN109561887A (zh) | 2019-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2628421B2 (ja) | 診断試験用キットおよびこれを用いる方法 | |
| JP5781436B2 (ja) | 神経学的状態のバイオマーカー検出方法およびアッセイ | |
| EP2281203B1 (en) | A marker for graft failure and mortality | |
| JP4560212B2 (ja) | 脳卒中を診断しそして区別するための方法 | |
| JP3551678B2 (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット | |
| Panteghini | Diagnostic application of CK-MB mass determination | |
| EP2209003A1 (en) | Means and methods for differentiating between fibrosis and cirrhosis | |
| US20080311591A1 (en) | Differential Immunoassay | |
| US11598781B2 (en) | Method for predicting the risk of incidence of chronic kidney disease | |
| US8058011B2 (en) | Method for the measurement of endocrine substances in an analyte | |
| WO2016064545A1 (en) | Lateral flow immunoassay methods and devices for simultaneously detecting hemoglobin s, hemoglobin c, and hemoglobin a in newborns, infants, children, and adults | |
| US7202042B2 (en) | Rapid evaluation of the ratio of biological molecules | |
| EP2496946A1 (en) | NT-pro ANP AND SFlt-1 FOR THE DIFFERENTIATION BETWEEN CIRCULATORY AND ISCHEMIC EVENTS | |
| US20220283186A1 (en) | Method for determining alzheimer-type dementia or mild cognitive impairment | |
| RU2721726C2 (ru) | Устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности | |
| Federico et al. | Assessment of serum IGF-I concentrations in the diagnosis of isolated childhood-onset GH deficiency: a proposal of the Italian Society for Pediatric Endocrinology and Diabetes (SIEDP/ISPED) | |
| JPH07311200A (ja) | 生物学的液体中の遊離リガンドの測定方法および測定用キット | |
| JP6989158B2 (ja) | 脳虚血由来の慢性病態を検出するための試薬の診断セット | |
| US20200124612A1 (en) | Detection of predictors of preeclampsia | |
| Sampson et al. | Falsely high concentration of serum lutropin measured with the Abbott IMx | |
| EP3730942A1 (en) | Diagnosis markers for atrial fibrillation | |
| JP3420027B2 (ja) | 生理状態の評価方法および簡易生理状態評価キット | |
| Oellerich et al. | Evaluation of enzyme immunoassays for determination of thyroxine (EMIT, ENZYMUN) and of thyroxine binding index | |
| EP0979828A1 (en) | A method for the diagnosis of autism | |
| Pancotto | Evaluation of cerebrospinal fluid biomarkers of endothelial damage and basement membrane degradation as indirect indicators of blood-brain barrier dysfunction in chronic canine hypothyroidism |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TH4A | Reissue of patent specification |