RU2686326C1 - Nutrient medium for cultivation of lactobacilli - Google Patents

Nutrient medium for cultivation of lactobacilli Download PDF

Info

Publication number
RU2686326C1
RU2686326C1 RU2018125557A RU2018125557A RU2686326C1 RU 2686326 C1 RU2686326 C1 RU 2686326C1 RU 2018125557 A RU2018125557 A RU 2018125557A RU 2018125557 A RU2018125557 A RU 2018125557A RU 2686326 C1 RU2686326 C1 RU 2686326C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
molasses
cultivation
beet
cfu
yeast extract
Prior art date
Application number
RU2018125557A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Юрий Андреевич Лысенко
Андрей Георгиевич Кощаев
Ирина Михаиловна Донник
Альбина Владимировна Лунева
Владимир Игоревич Дмитриев
Наталья Евгеньевна Горковенко
Анна Андреевна Волчанская
Светлана Анатольевна Гринь
Азамат Хазретович Шантыз
Александр Александрович Дельцов
Ольга Викторовна Кощаева
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина"
Priority to RU2018125557A priority Critical patent/RU2686326C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2686326C1 publication Critical patent/RU2686326C1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

FIELD: agriculture; chemistry.
SUBSTANCE: invention relates to microbiology and agriculture and can be used to produce a probiotic additive in order to increase meat yield of quails. Disclosed nutrient medium for cultivation of lactobacilli consists of feed molasses, K2NRA4, yeast extract and water. Feed molasses consists of beet and maize molasses taken in equal parts and microorganisms Lactobacillus agilis with titre of not less than 1.0×105 CFU/ml at the following ratio of initial components, g/l: beet molasses 22–23, maize molasses - 22–23, K2HPO4 2.0, yeast extract 0.02, microorganisms Lactobacillus agilis with titre of not less than 1.0×105 CFU/ml 99–101, water - the rest.
EFFECT: use of the invention increases titre of lactic acid cultures of lactobacillus agilis in a nutrient medium.
1 cl, 2 tbl, 5 dwg

Description

Изобретение относится к микробиологии и сельскому хозяйству, а конкретно к способу культивированию микроорганизмов на основе молочнокислых бактерий для получения пробиотической добавки с целью повышения мясной продуктивности перепелов.The invention relates to Microbiology and agriculture, and specifically to a method for cultivating microorganisms based on lactic acid bacteria to obtain a probiotic additive in order to increase the meat productivity of quails.

Современное птицеводство многими путями решает проблему максимальной реализации биоресурсного потенциала птицы и сохранения при этом ее продуктивного здоровья. Ускорение динамики роста и повышение суточных приростов живой массы птицы при снижении экономических затрат на 1 кг прироста живой массы тела является одной из основных задач птицеводства, в частности, перепеловодства.Modern poultry farming in many ways solves the problem of maximizing the bird's bioresource potential and at the same time preserving its productive health. Accelerating the dynamics of growth and increasing daily increase in live weight of poultry while reducing economic costs per 1 kg increase in live weight is one of the main tasks of the poultry industry, in particular, quailing.

Известно использование для выращивания микробной культуры мелассной среды в составе на 1 л воды: 45 г свекловичной, мелассы, 2 г КН2РО4, 0,02 г дрожжевого экстракта (Патент РФ №243864, МПК C05F 3/00, А01С 3/00, C05F 11/08, 27.12., 2011 г.).Known use for the cultivation of microbial culture molasses medium composed of 1 liter of water: 45 g beet, molasses, 2 g KN 2 PO 4 , 0.02 g yeast extract (Patent RF №243864, IPC C05F 3/00, A01C 3/00 , C05F 11/08, 27.12., 2011).

Известен способ предусматривающий применение в составе комбикормов для перепелов пробиотической кормовой добавки, включающей три вида молочнокислых бактерий: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B-5788, Lactobacillus acidophilus B-3235, Lactococcus lactis ssp. lactis B-3145, выращенных на среде, состоящей из воды, мелассы свекловичной, молока или молочной сыворотки, которая обеспечивает повышение сохранности и продуктивности перепелов (Кобыляцкая Г.В. Получение и эффективность применения пробиотика Трилактобакт в перепеловодстве: автореф. дис. … канд. с.-х. наук / Г.В. Кобыляцкая. - Краснодар, 2013. - 24 с.).The known method provides for the use in the composition of animal feed for quails of a probiotic feed additive, which includes three types of lactic acid bacteria: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B-5788, Lactobacillus acidophilus B-3235, Lactococcus lactis ssp. lactis B-3145 grown on a medium consisting of water, beet molasses, milk or whey, which improves the safety and productivity of quails (Kobylyatskaya GV Receipt and efficacy of using probiotic Trilatobact in quailing: abstract of thesis ... cand. of agricultural sciences / GV Kobylyatskaya. - Krasnodar, 2013. - 24 p.).

Недостатком данного способа является то, что в состав пробиотика входят микроорганизмы, которые не являются естественными представителями микробиома желудочно-кишечного тракта перепелов, а используемая питательная среда позволяет достичь титра каждой культуры всего лишь 5,0×107 КОЕ/мл, в результате добавка не будет обеспечивать максимальную реализацию биологического потенциала птицы.The disadvantage of this method is that the probiotic contains microorganisms that are not natural representatives of the microbiome of the gastrointestinal tract of quails, and the nutrient medium used allows the titer of each culture to be only 5.0 × 10 7 CFU / ml, as a result, will ensure the maximum realization of the biological potential of the bird.

Наиболее близким является техническое решение в котором используют для получения пробиотической добавки для перепелов, среду состоящую из мелассы кормовой, К2НРO4, дрожжевого экстракта и воды (Интенсификация процесса культивирования физиологически- адаптированных штаммов лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства / А.Г. Кощаев, Ю.А. Лысенко, Мищенко В.А. [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. - 2017. - №04 (128). - С.1102-1115).The closest is the technical solution used to obtain probiotic supplements for quails, the medium consisting of feed molasses, K 2 HPO 4 , yeast extract and water (Intensification of the cultivation process of physiologically adapted strains of lactobacilli as the basis for the creation of microbial biopreparations for poultry farming / A. G. Koshchaev, Yu.A. Lysenko, Mishchenko VA [and others] // Polytematic network electronic scientific journal of the Kuban State Agrarian University. - 2017. - №04 (128). - P.1102-1115).

Недостатком известного технического решения является то, что недостаточное повышение титра молочнокислых культур Lactobacillus agilis.A disadvantage of the known technical solution is that an insufficient increase in the titer of lactic acid cultures of Lactobacillus agilis.

Техническим результатом является повышение титра молочнокислых культур Lactobacillus agilis, являющиеся представителями естественной микрофлоры ЖКТ перепелов, за счет использования мелассной питательной среды.The technical result is to increase the titer of lactic acid cultures of Lactobacillus agilis, which are representatives of the natural microflora of the gastrointestinal tract of quails, due to the use of molasses nutrient medium.

Технический результат достигается тем, что в питательной среде для культивирования лактобактерий, состоящей из мелассы кормовой, К2НРO4, дрожжевого экстракта и воды, согласно изобретению меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях и микроорганизмов Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:The technical result is achieved by the fact that in a nutrient medium for the cultivation of lactobacilli consisting of feed molasses, K 2 HPO 4 , yeast extract and water, according to the invention, feed molasses consists of beet and corn molasses taken in equal parts and microorganisms of Lactobacillus agilis with no titer less than 1.0 × 10 5 CFU / ml in the following ratio of initial components, g / l:

Меласса свекловичная - 22-23;Beet molasses - 22-23;

Меласса кукурузная - 22-23;Corn molasses - 22-23;

К2НРО4 - 2,0;K 2 NRA 4 - 2.0;

Дрожжевой экстракт - 0,02;Yeast extract - 0.02;

Микроорганизмы Lactobacillus agilisMicroorganisms Lactobacillus agilis

с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл - 99-101;with a titer of at least 1.0 × 10 5 CFU / ml - 99-101;

Вода - остальноеWater - the rest

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что используется среда из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях, для выращивания молочнокислых микроорганизмов - Lactobacillus agilis, которые независимыми микробиологическим методом, методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и метагеномными методами были выделены из ЖКТ перепелов (Идентификация штаммов автохтонной микрофлоры - основы биопрепаратов лечебно-профилактического действия / В.В. Радченко, Е.В. Ильницкая, А.С. Родионова, Т.М. Шуваева, Ю.А. Лысенко, Г.А. Плутахин, А.И. Манолов, И.М. Донник, А.Г. Кощаев // Биофармацевтический журнал. - 2016. Том. - 8, №1. - С. 3-12; Метагеномное профилирование бактериозеноза пищеварительного тракта различных линий перепелов / Е.Р. Кириллова, Т.В. Григорьева, М.Н. Синягина и др. // Материалы всероссийской конференции с международным участием, посвященная 40-летию кафедры генетики Института фундаментальной медицины и биологии Казанского университета. - Казань. - 2016. - С. 55-56; Автохтонная микрофлора дикой птицы - основа препаратов лечебно-профилактического действия для промышленной птицы / А.С. Родионова, Е.В. Ильницкая, В.В. Радченко, А.В. Лихоман, Ю.А. Лысенко, А.Г. Кощаев // XXVIII зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии». Сборник тезисов. - М.: ФАНО России, 2016. - С. 151).The novelty of the proposed technical solution is due to the fact that the medium from beet and corn molasses, taken in equal parts, is used for growing lactic acid microorganisms - Lactobacillus agilis, which were isolated from the gastrointestinal tract by independent microbiological method, quantitative polymerase chain reaction and metagenomic methods. (Identification of autochthonous microflora strains - the basis of biological preparations of therapeutic and prophylactic action / V.V. Radchenko, E.V. Ilnitskaya, A.S. Rodionova, T.M. Shuvaev a, Yu.A. Lysenko, G.A. Plutakhin, A.I. Manolov, I.M. Donnik, A.G. Koshchaev // Biopharmaceutical journal .- 2016. Volume .- 8, No. 1. -S. 3-12; Metagenomic profiling of bacteriocenosis of the digestive tract of various quail lines / ER Kirillova, TV Grigorieva, MN Sinyagin, etc. // Proceedings of the All-Russian conference with international participation dedicated to the 40th anniversary of the Department of Genetics of the Institute of Fundamental Medicine and Biology of Kazan University. - Kazan. - 2016. - pp. 55-56; Autochthonous microflora of wild birds - the basis of therapeutic and prophylactic drugs for industrial poultry / А.S. Rodionova, E.V. Ilnitskaya, V.V. Radchenko, A.V. Likhoman, Yu.A. Lysenko, A.G. Koshchaev // XXVIII winter youth scientific school "Perspective directions of physical and chemical biology and biotechnology". Collection of theses. - M .: FANO of Russia, 2016. - p. 151).

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».Signs that distinguish the claimed technical solution from the prototype, aimed at achieving a technical result and not identified in the study of this and related areas of science and technology and, therefore, meet the criterion of "inventive step".

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемых технических решений критерию «новизна».These differences allow us to conclude that the proposed technical solutions comply with the “novelty” criterion.

Соответствие заявляемого решения критерию патентоспособности «промышленная применимость» обусловлено тем, что предлагаемое техническое решение работоспособно и возможно его использование для выращивания перепелов.The compliance of the proposed solution to the patentability criteria "industrial applicability" is due to the fact that the proposed technical solution is operational and its use for growing quails is possible.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на рис. 1 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава мелассной среды; на рис. 2 - представлен график зависимости количества редуцирующих веществ от времени культивирования микроорганизмов на мелассной среде №3; на рис. 3 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава питательных сред; на рис. 4 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при температуре 36°С; на рис. 5 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при ратуре 38°С.The invention is illustrated by drawings, where Fig. 1 shows a graph of the number of microorganisms on the composition of the molasses medium; in fig. 2 shows a graph of the dependence of the amount of reducing substances on the time of cultivation of microorganisms on molasses medium No. 3; in fig. 3 shows a graph of the number of microorganisms on the composition of nutrient media; in fig. 4 shows a graph of the number of microorganisms as a function of the time of their cultivation at a temperature of 36 ° C; in fig. 5 is a graph of the number of microorganisms as a function of the time of their cultivation at a temperature of 38 ° C.

Питательная среда для культивирования лактобактерий воспроизводится следующим образом.Nutrient medium for the cultivation of lactic acid bacteria is reproduced as follows.

Культивирование микроорганизмов Lactobacillus agilis осуществляют в среде, состоящей из мелассы кормовой 45,0 г, которая состоит из свекловичной и кукурузной меласс взятых в равных частях, К2НРO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г в расчете на 1 литр воды. Затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл в количестве 100,0 г/л и культивируют при температуре 37°С, в течение 24 ч.The cultivation of microorganisms Lactobacillus agilis carried out in an environment consisting of molasses feed 45.0 g, which consists of beet and corn molasses taken in equal parts, 2 HPO 4 - 2.0 g and yeast extract - 0.02 g per 1 litere of water. Then, Lactobacillus agilis microorganisms with a titer of at least 1.0 × 10 5 CFU / ml in an amount of 100.0 g / l are added to the resulting mixture and cultured at 37 ° C for 24 hours.

При использовании засевной культуры Lactobacillus agilis в количестве менее 100,0 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.When using the seed culture of Lactobacillus agilis in an amount of less than 100.0 g / l, the achievement of the required culture titer in the probiotic additive will not be ensured.

При использовании засевной культуры Lactobacillus agilis в количестве более 100,0 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.When using Lactobacillus agilis seed culture in an amount of more than 100.0 g / l, the same titer is achieved and it does not make sense to take a larger amount.

При использовании свекловичной мелассы в количестве менее 22,5 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.When using beet molasses in the amount of less than 22.5 g / l, the achievement of the required culture titer in the probiotic additive will not be ensured.

При использовании свекловичной мелассы в количестве более 22,5 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.When using beet molasses in an amount of more than 22.5 g / l, the same titer is achieved and it does not make sense to take a larger amount.

При использовании кукурузной мелассы в количестве менее 22,5 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.When using corn molasses in the amount of less than 22.5 g / l, the achievement of the required culture titer in the probiotic additive will not be ensured.

При использовании кукурузной мелассы в количестве более 22,5 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.When using corn molasses in an amount of more than 22.5 g / l, the same titer is achieved and it does not make sense to take a larger amount.

Первый этап исследований включает выращивание бактерий на мелассной питательной среде различного состава. Время выращивания культуры составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.The first stage of research includes the cultivation of bacteria on molasses nutrient medium of different composition. The time of cultivation of the culture was 48 hours, the temperature optimum was 37 ° C.

Поскольку основным компонентом в среде является состав мелассы, то для подбора питательного субстрата для Lactobacillus agilis использовали мелассную питательную среду следующих составов:Since the main component in the medium is the composition of molasses, then for the selection of the nutrient substrate for Lactobacillus agilis, molasses nutrient medium of the following composition was used:

1. Состав мелассной среды №1: 45 г/л мелассы кормовой (100% свекловичной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.1. Composition of molasses medium No. 1: 45 g / l molasses fodder (100% beet molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

2. Состав мелассной среды №2: 45 г/л мелассы кормовой (100% кукурузной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.2. Composition of molasses medium No. 2: 45 g / l molasses fodder (100% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

3. Состав мелассной среды №3: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.3. Composition of molasses medium No. 3: 45 g / l molasses fodder (50% beet and 50% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

4. Состав мелассной среды №4: 45 г/л мелассы кормовой (25% свекловичной и 75% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.4. Composition of molasses medium No. 4: 45 g / l molasses fodder (25% beet and 75% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

5. Состав мелассной среды №5: 45 г/л мелассы кормовой (75% свекловичной и 25% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.5. Composition of molasses medium No. 5: 45 g / l molasses fodder (75% beet and 25% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

Определение титра микрофлоры проводили согласно ГОСТу 10444.11-89 (пункт 4.2.2). Брали 1,0 мл выращенной каждой культуры и помещали в колбу объемом 100 см3 и заливали 99,0 мл стерильным физиологическим растворов, оставляли на 1 ч. При этом получали разведение 1:100. После этого готовили ряд последовательных десятикратных разведений до 10-10. Для каждого разведения применяли отдельные стерильные наконечники. Посев в чашки Петри проводили согласно (на Лактобакагар из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10. Из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 стерильным наконечником автоматического дозатора по 1 мл суспензии переносили в 4 чашки Петри, в которые заливают стерильную, расплавленную питательную среду, охлажденную до 38-40°С. Круговым движением чашек Петри в них перемешивали среду и оставляют до застывания агара. Чашки с засеянными средами помещали в термостат и выдерживали при (37±1)°С в течении 72 ч. По количеству выросших колоний согласно (ГОСТ 9225-84 (пункт 4.5.3) определяли общий титр микроорганизмов. Число жизнеспособных клеток в 1 мл препарата (X), вычисляли по формуле:The determination of the microflora titer was carried out according to GOST 10444.11-89 (clause 4.2.2). They took 1.0 ml of each culture grown and placed in a flask with a volume of 100 cm 3 and poured 99.0 ml with sterile saline, left for 1 hour. A dilution of 1: 100 was obtained. After that they prepared a series of consecutive tenfold dilutions up to 10 -10 . Separate sterile tips were used for each dilution. Sowing in Petri dishes was carried out according to (on Laktobakagar from dilutions 10 -7 , 10 -8 , 10 -9 , 10 -10 . From dilutions 10 -7 , 10 -8 , 10 -9 , 10 -10 with a sterile tip of an automatic dispenser, 1 ml of the suspension was transferred to 4 Petri dishes, into which sterile, molten nutrient medium was poured, cooled to 38-40 ° C. In a circular motion, Petri dishes were mixed in the medium and left until agar solidified. The plates with the inoculated media were placed in a thermostat and kept at ( 37 ± 1) ° C for 72 hours. According to the number of grown colonies, according to (GOST 9225-84 (clause 4.5.3), The total titer of the microorganisms The number of viable cells in 1 ml of the preparation (X) was calculated by the formula:

X=N×P,X = N × P,

где: N - среднеарифметическое значение числа колоний в чашках Петри; Р - порядковый номер десятикратного разведения, в котором отмечается рост бактерий.where: N is the arithmetic mean value of the number of colonies in Petri dishes; P - the serial number of tenfold dilution, in which the growth of bacteria.

В процессе культивирования проводился анализ динамики потребления редуцирующих веществ (РВ) с исходной концентрацией 4%. Метод определения редуцирующих веществ основан на восстанавливающей способности моноформ сахаров - глюкозы и фруктозы.In the process of cultivation, an analysis of the dynamics of consumption of reducing substances (PB) with an initial concentration of 4% was carried out. The method of determining the reducing substances is based on the reducing ability of the monoforms of sugars - glucose and fructose.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в мелассной среде, представлены на рисунке 1, где по оси абсцисс указаны номера составов мелассной среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.Results on the number of microbial cultures studied, obtained under laboratory conditions during cultivation in a molasses medium, are presented in Figure 1, where the composition numbers of the molasses medium are indicated on the abscissa axis and the number of microorganisms on the ordinate axis.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда №3, где в качестве кормовой мелассы использовалось 50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы, титр Lb. agilis составил 3,3×1010 КОЕ/мл, в то время как на других вариантах титр используемых культур не превысил 1,0×109 КОЕ/мл. Так на мелассной питательной среде №1 количество Lb. agilis составило 2,1×109 КОЕ/мл; на варианте №2 Lb. agilis - 6,7×109 КОЕ/мл; вариант №4 Lb. agilis - 9,0×109 КОЕ/мл и вариант №5 Lb. agilis - 6,3×109 КОЕ/мл.As a result of the study, molasses medium No. 3 turned out to be the most effective, where 50% of beet and 50% of corn molasses, Lb. titer, were used as fodder molasses. agilis was 3.3 × 10 10 CFU / ml, while on other variants the titer of the cultures used did not exceed 1.0 × 10 9 CFU / ml. So on molasses nutrient No. 1 amount of Lb. agilis was 2.1 × 10 9 CFU / ml; on option number 2 Lb. agilis - 6.7 × 10 9 CFU / ml; option number 4 Lb. agilis - 9.0 × 10 9 CFU / ml and option No. 5 Lb. agilis - 6.3 × 10 9 CFU / ml.

Также в процессе культивирования снимали динамику потребления редуцирующих веществ (РВ) на мелассной среде №3, результаты которой представлены на рисунке 2, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат - количество редуцирующих веществ.Also in the process of cultivation, the dynamics of consumption of reducing substances (PB) on molasses medium No. 3 were recorded, the results of which are shown in Figure 2, where the time of cultivation of microorganisms is indicated on the abscissa and the number of reducing substances is shown on the ordinate axis.

По результатам контроля потребления углеродного субстрата можно сделать вывод о его истощении уже к 24 ч от начала культивирования.Based on the results of monitoring the carbon substrate consumption, it can be concluded that it is depleted by as early as 24 hours from the start of cultivation.

Следующим этапом исследований являлось определение влияния на рост используемых культур различных питательных сред, которые часто используют для культивирования лактобактерий. Время выращивания для всех культур составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.The next stage of the research was to determine the effect on growth of the used cultures of various nutrient media, which are often used for the cultivation of lactic acid bacteria. The cultivation time for all cultures was 48 h, the temperature optimum was 37 ° C.

Для доказательства эффективности заявляемой среды для сравнения были использованы среды следующего состава:For evidence of the effectiveness of the proposed environment for comparison were used media of the following composition:

1. Среда для молочнокислых бактерий (г. Углич): дрожжевой экстракт - 0,2%; кукурузный экстракт - 0,3%; глюкозный сироп - 2%; аскорбиновая кислота (цитрат натрия) - 4 г/л; КН2РO4 - 2 г/л.1. Environment for lactic acid bacteria (Uglich): yeast extract - 0.2%; corn extract - 0.3%; glucose syrup - 2%; ascorbic acid (sodium citrate) - 4 g / l; KN 2 PO 4 - 2 g / l.

2. Состав среды МРС, г/л: пептон - 10,0; дрожжевой экстракт - 20,0; глюкоза - 20,0; дикалия гидрофосфат - 2,0; натрия ацетат - 5,0; триаммония цитрат - 2,0; магния сульфат - 0,2; марганца сульфат 4-водный - 0,05.2. The composition of the medium MPC, g / l: peptone - 10.0; yeast extract - 20,0; glucose - 20.0; dipotassium phosphate - 2.0; sodium acetate - 5,0; triammonium citrate - 2.0; magnesium sulfate - 0.2; manganese sulfate 4-water - 0.05.

3. Состав среды ГПС, г/л: Na2HPO4 12-водный - 3,2; КН2РO4 - 0,3; MgSO4 - 0,5; NaCl - 0,5; пептон - 2,0; дрожжевой экстракт - 0,05; глюкоза - 25.3. The composition of the medium HPS, g / l: Na 2 HPO 4 12-water - 3.2; KH 2 PO 4 - 0.3; MgSO 4 - 0.5; NaCl - 0.5; peptone - 2.0; yeast extract - 0.05; glucose - 25.

4. Состав мелассной среды: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.4. The composition of the molasses medium: 45 g / l molasses fodder (50% beet and 50% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в различных питательных средах, представлены на рисунке 3, где по оси абсцисс указаны различные питательные среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.Results on the number of microbial cultures studied, obtained under laboratory conditions during cultivation in various nutrient media, are presented in Figure 3, where different nutrient media are indicated on the abscissa axis and the number of microorganisms on the ordinate axis.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда, так как титр Lb. agilis составил 4,7×1010 КОЕ/мл. Менее эффективной оказалась среда для молочнокислых бактерий г. Углич - Lb. agilis - 8,7×109 КОЕ/мл. При выращивании лактобактерий на среде ГПС были получены следующие результаты: Lb. agilis - 2,7×109 КОЕ/мл, а на МРС: Lb. agilis - 2,0×109 КОЕ/мл.As a result of the study, the molasses medium turned out to be the most effective, since the Lb. agilis was 4.7 × 10 10 CFU / ml. The environment for lactic acid bacteria was less effective. Uglich - Lb. agilis - 8.7 × 10 9 CFU / ml. When growing lactobacilli on the environment HPS were obtained the following results: Lb. agilis - 2.7 × 10 9 CFU / ml, and on MPC: Lb. agilis - 2.0 × 10 9 CFU / ml.

Далее определяли оптимальную температуру культивирования испытуемых микроорганизмов с целью повышения титра клеток в наиболее короткие сроки. Представленные выше результаты культивирования получены при температуре выращивания 37°С.Next, we determined the optimal cultivation temperature of the tested microorganisms in order to increase the cell titer in the shortest possible time. The above cultivation results were obtained at a growing temperature of 37 ° C.

Была заложена серия опытов по определению максимальной термотолерантности данных культур при выращивании на мелассной среде №3 в течение 48 ч. Результаты зависимости количества клеток молочнокислых бацилл от температуры представлены на рисунках 4 и 5, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат - количество микроорганизмов.A series of experiments was laid to determine the maximum thermotolerance of these crops when grown on molasses medium No. 3 for 48 hours. The results of temperature dependence of the number of lactic acid bacilli cells are presented in Figures 4 and 5, where the time of cultivation of microorganisms is indicated on the abscissa axis and - the number of microorganisms.

Итог культивирования при 39°С не представлен, так как при этой температуре ни одна культура не выявила роста относительно засевного титра. Однако после снижения температуры культивирования до 37°С рост восстановился в прежнем объеме, что свидетельствует о том, что культура не отмерла, а перешла в фазу задержки роста, продолжавшуюся до снижения температуры на 2-3°С.The result of cultivation at 39 ° C is not represented, since at this temperature no culture showed growth relative to the seed titer. However, after the cultivation temperature was reduced to 37 ° C, the growth was restored in the same volume, which indicates that the culture did not die off, but entered the phase of growth inhibition, which continued until the temperature decreased by 2-3 ° C.

На основании приведенных результатов культивирования на различных средах и при различных температурах установлено, что наибольший титр клеток достигался к 24 ч от начала выращивания независимо от состава сред. Более длительное выращивание и повышение температуры ведет к снижению титра и, как правило, увеличению количества нежизнеспособных клеток.Based on the results of cultivation on various media and at different temperatures, it was established that the highest cell titer was achieved by 24 hours from the start of the cultivation, regardless of the composition of the media. Longer growth and increase in temperature leads to a decrease in titer and, as a rule, an increase in the number of non-viable cells.

Результаты проведенных исследований показали, что наиболее эффективной питательной средой является мелассная среда следующего состава: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л, при этом оптимум температурного и временного режимов составляют 37°С и 24 ч, соответственно. Разработанная мелассная среда может быть использована в производственных условиях при дальнейшей разработки биопрепаратов для животноводства, в том числе птицеводства.The results of the studies showed that the most effective nutrient medium is molasses medium of the following composition: 45 g / l molasses feed (50% beet and 50% corn molasses), K 2 HPO 4 - 2 g / l, yeast extract - 0.02 g / l, while the optimum temperature and time regimes are 37 ° C and 24 h, respectively. The developed molasses environment can be used under production conditions during the further development of biological products for animal husbandry, including poultry farming.

Для доказательства эффективности полученной пробиотической добавки на основе микроорганизмов Lactobacillus agilis были проведены научные исследования на перепелах японской породы.To prove the effectiveness of the obtained probiotic supplement on the basis of Lactobacillus agilis microorganisms, scientific studies were conducted on quails of the Japanese breed.

Методом групп аналогов было сформировано пять групп перепелов по 20 голов в каждой: контрольная группа - в рационе присутствовал только основной полноценный комбикорм и питьевая вода; 1-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,2 мл/гол; 2-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,5 мл/гол; 3-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 1,0 мл/гол. Применение пробиотической добавки в опытных группах осуществлялось ежедневно (таблица 1).By the method of groups of analogues, five groups of quails of 20 animals each were formed: the control group - only the main complete feed and drinking water were present in the diet; The 1st experimental group - with the basic ration and drinking water to the bird, they also drank a probiotic supplement in a dose of 0.2 ml / goal; 2nd experimental group - with the basic ration and drinking water to the bird, they also drank a probiotic supplement in a dose of 0.5 ml / goal; The 3rd experimental group - with the basic ration and drinking water to the bird, also drank a probiotic supplement in a dose of 1.0 ml / goal. The use of probiotic supplements in the experimental groups was carried out daily (Table 1).

Figure 00000001
Figure 00000001

Перепела выращивались в полупромышленных многоярусных металлических клетках.Quails were grown in industrial multi-tier metal cages.

Результаты хозяйственных показателей при выращивании перепелов представлены в таблице 2.The results of economic indicators for growing quails are presented in table 2.

Результаты хозяйственных показателей при выращивании перепелов представлены в таблице 2.The results of economic indicators for growing quails are presented in table 2.

Figure 00000002
Figure 00000002

Как видно из таблицы, значительное повышение по живой массе перепелов в сравнении с группой контроля было выявлено на 21-е сутки во 2-й и 3-й опытных группах, соответственно, на 7,80 и 7,16%. На 28-е сутки во 2-й опытной группе живая масса перепелов была больше, чем в контроле на 13,46%, а в 3-й - на 14,21%. На 35-й день выращивания птицы значительное повышение живой массы наблюдалось во 2-й и 3-й опытных группах на 10,60 и 10,83%. Аналогичная тенденция в этих опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась на 42-е сутки, в которой живая масса была выше на 9,12 и 9,75%. Необходимо отметить, что в 1-й опытной группе наблюдалось незначительное повышение живой массы за весь период выращивания.As can be seen from the table, a significant increase in live weight of quails in comparison with the control group was detected on the 21st day in the 2nd and 3rd experimental groups, respectively, at 7.80 and 7.16%. On the 28th day, in the 2nd experimental group, the live weight of quails was greater than in the control by 13.46%, and in the 3rd group - by 14.21%. On the 35th day of bird rearing, a significant increase in live weight was observed in the 2nd and 3rd experimental groups by 10.60 and 10.83%. A similar trend in these experimental groups for the studied indicator was observed on the 42nd day, in which the live weight was higher by 9.12% and 9.75%. It should be noted that in the 1st experimental group there was a slight increase in live weight over the entire growing period.

Сохранность перепелов во всех группах была одинакова и составила 100,0%. Прирост живой массы перепелов за весь период выращивания в опытных группах также был больше, чем в контрольной на 2,91; 9,45 и 10,10%.The safety of quails in all groups was the same and amounted to 100.0%. The increase in live weight of quails for the entire period of cultivation in the experimental groups was also greater than in the control group by 2.91; 9.45 and 10.10%.

Как видно из данных таблицы 2, с ростом живой массы опытных птиц повышается и потребление ими комбикормов. При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы в опытных группах оставались ниже, чем в контрольной на 2,01; 7,79; и 6,78%.As can be seen from the data of table 2, with an increase in the live weight of the experienced birds, their consumption of compound feed also increases. The cost of feed per 1 kg increase in live weight in the experimental groups remained lower than in the control by 2.01; 7.79; and 6.78%.

В целом, обосновать повышенную динамику живой массы перепелов в опытных группах, можно за счет положительного воздействия биопрепаратов на основе культур Lactobacillus agilis, которые способствуют лучшему усвоению энергии и питательных веществ комбикорма птицей.In general, to justify the increased dynamics of live weight of quails in the experimental groups, it is possible due to the positive effects of biological products based on Lactobacillus agilis cultures, which contribute to better absorption of energy and nutrients of the compound feed by poultry.

Таким образом, результаты испытаний показали, что выращивание перепелов с использованием разработанной пробиотической добавки на основе культуры вида Lactobacillus agilis, выделенная из ЖКТ перепела, а также выращенная на мелассной среде, в испытуемых дозах обеспечивает повышение продуктивности перепелов, что особенно выявлено в дозе 0,5 мл/гол.Thus, the test results showed that growing quails using the developed probiotic supplement based on the culture of the species Lactobacillus agilis, isolated from the gastrointestinal tract of quails, and also grown on a molasses medium, in test doses provides an increase in the productivity of quails, which was especially detected at a dose of 0.5 ml / goal.

Claims (2)

Питательная среда для культивирования лактобактерий, состоящая из мелассы кормовой, К2НРО4, дрожжевого экстракта и воды, отличающаяся тем, что меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях, и микроорганизмов Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл, при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:Nutrient medium for the cultivation of lactobacilli, consisting of molasses fodder, K 2 NRA 4 , yeast extract and water, characterized in that the molasses fodder consists of beet and corn molasses, taken in equal parts, and microorganisms Lactobacillus agilis with a titer of not less than 1.0 × 10 5 CFU / ml, in the following ratio of initial components, g / l: Меласса свекловичнаяBeet molasses 22-2322-23 Меласса кукурузнаяCorn Molasses 22-2322-23 K2НРО4 K 2 NRA 4 2,02.0 Дрожжевой экстрактYeast Extract 0,020.02 Микроорганизмы Lactobacillus agilisMicroorganisms Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/млwith a titer of at least 1.0 × 10 5 CFU / ml 99-10199-101 ВодаWater ОстальноеRest
RU2018125557A 2018-07-11 2018-07-11 Nutrient medium for cultivation of lactobacilli RU2686326C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018125557A RU2686326C1 (en) 2018-07-11 2018-07-11 Nutrient medium for cultivation of lactobacilli

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018125557A RU2686326C1 (en) 2018-07-11 2018-07-11 Nutrient medium for cultivation of lactobacilli

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2686326C1 true RU2686326C1 (en) 2019-04-25

Family

ID=66314803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018125557A RU2686326C1 (en) 2018-07-11 2018-07-11 Nutrient medium for cultivation of lactobacilli

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2686326C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2753363C1 (en) * 2020-11-02 2021-08-13 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Method for increasing resistance of lactic bacteria for probiotic supplement
RU2759305C1 (en) * 2020-11-02 2021-11-11 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Nutrient medium for cultivation of lactic bacteria
RU2761882C1 (en) * 2020-11-02 2021-12-13 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Medium for producing a probiotic supplement for poultry

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378000C2 (en) * 2008-02-13 2010-01-10 Александр Иванович Леляк Method for production of therapeutic additive
RU2412612C1 (en) * 2009-12-29 2011-02-27 ООО "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of "ferm km" probiotic fodder additive for domestic animals and birds

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378000C2 (en) * 2008-02-13 2010-01-10 Александр Иванович Леляк Method for production of therapeutic additive
RU2412612C1 (en) * 2009-12-29 2011-02-27 ООО "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" Method for production of "ferm km" probiotic fodder additive for domestic animals and birds

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MIDILLI М. et al. Effects of dietary probiotic and prebiotic supplementation on growth performance and serum IgG concentration of broilers.South African Journal of Animal Science 2008, 38 (l), p.21-26. *
КОЩАЕВ А.Г. и др. Интенсификация процесса культивирования физиологически-адаптированных лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства // Политематический Сетевой Электронный Научный Журнал Кубанского Государственного Аграрного Университета, 2017, N 128, С. 1102-1115 DOI: 10.21515/1990-4665-128-076. *
КОЩАЕВ А.Г. и др. Интенсификация процесса культивирования физиологически-адаптированных лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства // Политематический Сетевой Электронный Научный Журнал Кубанского Государственного Аграрного Университета, 2017, N 128, С. 1102-1115 DOI: 10.21515/1990-4665-128-076. MIDILLI М. et al. Effects of dietary probiotic and prebiotic supplementation on growth performance and serum IgG concentration of broilers.South African Journal of Animal Science 2008, 38 (l), p.21-26. *
ЛЫСЕНКО Ю.А. и др. Подбор эффективной питательной среды для выращивания лактобактерий как основы создания биопрепаратов для птицеводства // Современные аспекты производства и переработки сельско-хозяйственной продукции : сб. ст. по материалам III науч.-практ. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых, посвящ. 95-летию Кубанского государственного аграрного университета. - Краснодар : КубГАУ, 2017, С. 403-407. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2753363C1 (en) * 2020-11-02 2021-08-13 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Method for increasing resistance of lactic bacteria for probiotic supplement
RU2759305C1 (en) * 2020-11-02 2021-11-11 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Nutrient medium for cultivation of lactic bacteria
RU2761882C1 (en) * 2020-11-02 2021-12-13 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" Medium for producing a probiotic supplement for poultry

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2689701C1 (en) Quail growing method
RU2688429C1 (en) Method of producing a probiotic additive for quail
RU2689680C1 (en) Method of producing a probiotic additive
RU2689730C1 (en) Method for quail feeding
CN101461453B (en) Composite microbial feed additive for beasts and birds
CN102171329B (en) Lactic acid bacterium having high oxalic acid decomposition ability
RU2686326C1 (en) Nutrient medium for cultivation of lactobacilli
CN107047934A (en) Using bacillus subtilis strain to strengthen the method for animal health
CN107312732B (en) Probiotic feed additive
RU2698213C1 (en) Medium for production of probiotic additive for poultry
CN104106726A (en) New probiotic, and probiotic fermentation feed prepared by using it
CN107549456A (en) A kind of compound probiotic agent for improving goose function of intestinal canal and preparation method thereof
RU2652832C1 (en) Method of feeding farm birds
TWI425915B (en) New Pseudomonas bacteria
JP4199685B2 (en) New lactic acid bacteria
RU2376755C1 (en) Method for growth of young fish of azov-chernomorskaya royal fish in ponds
JP2001149023A (en) Bioactive agent and animal feed additive using the same
RU2761882C1 (en) Medium for producing a probiotic supplement for poultry
RU2756559C1 (en) Method for growing quails
RU2757355C1 (en) Method for producing a probiotic supplement for quails
RU2752993C1 (en) Method for feeding quails
RU2759703C1 (en) Method for producing a probiotic supplement for poultry
RU2759305C1 (en) Nutrient medium for cultivation of lactic bacteria
Paliy et al. Enhanced cultivation technology for lacto and bifidobacteria
JP2021153543A (en) Feed made from waste creamer

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200712