RU2677343C2 - Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами - Google Patents
Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2677343C2 RU2677343C2 RU2017123459A RU2017123459A RU2677343C2 RU 2677343 C2 RU2677343 C2 RU 2677343C2 RU 2017123459 A RU2017123459 A RU 2017123459A RU 2017123459 A RU2017123459 A RU 2017123459A RU 2677343 C2 RU2677343 C2 RU 2677343C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vion
- bromelain
- immobilization
- buffer
- preparation
- Prior art date
Links
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 title claims abstract description 33
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 title claims abstract description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 24
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 8
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 241000234671 Ananas Species 0.000 description 2
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000346 stem bromelain Proteins 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 108010022647 Wobenzym Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000006502 antiplatelets effects Effects 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/38—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/56—Protease inhibitors from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами, включающий иммобилизацию ферментного препарата в буферном растворе, инкубирование и промывку, отличающийся тем, что иммобилизацию бромелайна проводят на матрицу ионообменных волокон ВИОН КН-1 или ВИОН АН-1 в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 2 мг/мл на 1 г волокон; в качестве буферного раствора для иммобилизации на ВИОН КН-1 используют 0.05 М глициновый буфер с pH 9.0-10,5 или 0.05 М боратный буфер с pH 8.0 без добавления KCl, а для иммобилизации на ВИОН АН-1 - 0.2 М ацетатный буфер с pH 5.0; инкубация проводится в течение 24 часов при комнатной температуре; образовавшийся осадок промывают использованным при иммобилизации буфером до отсутствия в промывных водах белка. Изобретение позволяет получить ранозаживляющий материал на основе бромелайна, который позволит сократить расход ранозаживляющего средства благодаря высокой стабильности препарата при температурах выше физиологических и его пролонгированному действию. 7 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано при изготовлении лекарственных средств, обладающих регенерирующим и ранозаживляющим действием.
Процесс ранозаживления сложен и многостадиен, поэтому актуальной задачей современной медицины является проблема лечения ран. Лекарственные препараты, применяемые для лечения и профилактики кожных повреждений, воздействуют на разные этапы заживления ткани и действуют по различным механизмам. Включение ферментов в процесс ранозаживления способствует энзиматическому очищению ран от сгустков крови, а также лизису некротических образований. При использовании ферментов в свободном состоянии не наблюдается высокого лечебного эффекта, регистрируется их быстрая инактивация и не обеспечивается длительного контакта с раневой поверхностью. Наиболее эффективными композициями являются гели, мази, повязки. Известны марлевые перевязочные материалы на основе натуральных волокон, предназначенных защищать рану от механического воздействия и впитывать экссудаты. Недостатком таких материалов является низкая эффективность курса лечения, его длительность, поэтому необходимо такие повязки сочетать с применением других лекарственных средств, в частности с ферментными препаратами. В медицинской практике широко распространены такие материалы как «Легиус». Однако их недостатком является одноразовое использование и при таком способе лечения не происходит удаления токсичных веществ [Патент RU 2093190, МПК A61L 15/22, A61L 15/44, опубл. 20.10.1997; Патент RU 2066199, МПК A61L 15/16, опубл. 10.09.1996].
Бромелайн (КФ 3.4.22.32) - протеолитический растительный фермент, получаемый из ананаса, относится к группе цистеиновых протеиназ. Бромелайн является основным белком с изоэлектрической точкой при рН 9.55. Температурный оптимум составляет 62°С, рН оптимум - около 7 единиц. Бромелайн используется для улучшения пищеварения, облегчения воспалительных процессов при травмах, снятия отека мягких тканей, а также для ускорения их восстановления после повреждений. Показаны его противораковые свойства и способность предотвращать образование тромбов. Бромелайн обладает иммуномодулирующим действием, ускоряет процессы репарации тканей в результате деполимеризации межклеточных структур и модификации проницаемости сосудов [Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. - М.: Наука, 1971. - 404 с.].
Все большее применение в химико-фармацевтической промышленности находят иммобилизованные ферменты, т.е. искусственно связанные с нерастворимым носителем посредством физических или химических взаимодействий и сохраняющие частично или полностью каталитические свойства.
На сегодняшний день использование лекарственных средств под перевязочным материалом является главенствующим благодаря его доступности и простоте применения.
Задачей предлагаемого изобретения является расширение базы ранозаживляющих материалов на основе иммобилизованных ферментов. Целью изобретения является создание высокоэффективного лекарственного средства, которое будет позволять лечить гнойные и длительно незаживающие раны без образования рубца в более короткой срок, обладать противовоспалительным, регенераторным действием, не вызывая аллергических реакций, значительно сокращать расход ранозаживляющего материала.
Поставленная задача решается применением в качестве действующего вещества протеолитического фермента бромелайна (КФ 3.4.22.32), иммобилизованного на матрицах волокон ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1. Технология по производству ионообменных материалов, а также тканных и нетканых прошивных полотен из него, давно известна и легко осуществима на заводах, которые синтезируют полиакрилонитрильные волокна [Патент RU 2102544, МПК D01F 11/04, C08J 5/20, опубл. 20.01.1998]. Сочетание недорогих компонентов позволит сделать доступным этот технологичный метод для отечественных лабораторий.
В медицинской практике уже применяются лекарственные средства, включающие в свой состав бромелайн, в частности для ферментотерапии с использованием полиэнзимного препарата «Wobenzym» в виде драже в кишечнорастворимой оболочке, для лечения хронических воспалительных дерматозов у детей, при инфекционных заболеваниях органов дыхания, для фармакологического лечения аутоиммунного мужского бесплодия [Патент RU 2149021, МПК A61K 38/43, A61P 15/08, опубл. 20.05.2000; Патент RU 2175244, МПК A61K 38/43, A61P 17/00, опубл. 27.10.2001; Патент RU 2450812, МПК A61K 31/194, A61K 36/03, A61K 36/185, A61P 11/00, опубл. 20.05.2012].
В качестве прототипа служил СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-НЕКРОТИЧЕСКИХ РАН (SU 1814764, МПК A61K 31/557, A61K 47/48, опубл. 20.03.1995), включающий иммобилизацию ферментного препарата, с целью повышения лечебного эффекта средства, иммобилизацию проводили путем обработки 2%-ного геля хитозана 2%-ным раствором глутарового альдегида в фосфатном буфере при рН 7.5, взятых в соотношении 1:1, выдерживания его при температуре 18-20°С в течение 30 мин, после чего пропускали через гель экстракт гепатопанкреаса камчатского краба, содержащего комплекс ферментов.
Технический результат заключается в разработке способа получения нового ранозаживляющего материала на основе бромелайна, который позволит сократить расход ранозаживляющего средства благодаря высокой стабильности препарата при температурах выше физиологических и его пролонгированному действию.
Действующим веществом предлагаемого нами средства является бромелайн, который обладает противовоспалительным действием, ускоряет процессы репарации тканей в результате деполимеризации межклеточных структур и модификации проницаемости сосудов. Противовоспалительный и антиагрегантный эффекты фермента обусловлены его способностью изменять метаболизм арахидоновой кислоты. Температурный оптимум функционирования бромелайна составляет порядка 60°С [H.J. Suh [et al.] Purification and characterization of bromelain isolated from pineapple // J. Han'guk Nonghwa Hakhoechi - 1992. - Vol. 35. - P. 300-307], иммобилизация фермента на матрице нерастворимого полимера дает эффект дополнительной стабилизации препарата [R. Mahmood [et al.] Additional stabilization of stem bromelain coupled to a thermosensitive polymer by uniform orientation and using polyclonal antibodies // Biochemistry. - 2007. - Vol. 72. - P. 307-312]. Кроме того, в качестве носителя для иммобилизации бромелайна (основы повязки) нами были выбраны ионообменные волокна ВИОН - ранозаживляющие материалы, характеризующиеся высокой степенью сорбции, очищающие и дезинфицирующие рану [Патент RU 2229311, МПК A61L 15/00, A61L 15/16, A61L 15/22, опубл. 27.05.2004].
Технический результат достигается тем, что в способе получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами, включающем иммобилизацию ферментного препарата в буферном растворе, инкубирование и промывку, согласно изобретению, иммобилизацию бромелайна проводят на матрицу ионообменных волокон ВИОН КН-1 или ВИОН АН-1 в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 2 мг/мл на 1 т волокон; в качестве буферного раствора для иммобилизации на ВИОН КН-1 используют 0.05 М глициновый буфер (рН 9.0-10.5) или 0.05 М боратный буфер без добавления KCl (рН 8.0), а для иммобилизации на ВИОН АН-1 - 0.2 М ацетатный (рН 5.0) буфер; инкубация проводится в течение 24 часов при комнатной температуре; образовавшийся осадок промывают использованным при иммобилизации буфером до отсутствия в промывных водах белка.
Фиг. 1. Структура элементарного звена волокон (а) ВИОН КН-1 и (б) ВИОН АН-1. Фиг. 2 и 5 приведены диаграммы содержания белка в препаратах бромелайна, иммобилизованных на ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1 соответственно. Фиг. 3 и 6 приведены диаграммы общей активности препаратов бромелайна, иммобилизованных на ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1 соответственно. Фиг. 4 и 7 приведены диаграммы удельной активности препаратов бромелайна, иммобилизованных на ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1 соответственно.
В качестве объекта исследования был выбран бромелайн фирмы «Sigma-Aldrich», субстратом для гидролиза служил бычий сывороточный альбумин (БСА) фирмы «Sigma-Aldrich», носителем для иммобилизации -ионообменные волокна ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1 (фиг. 1). Содержание белка в препаратах определяли методом Лоури [Lowry О.Н., Rosebrough N.J., Faar A.L., Randall RJ. Protein measurement with folin-phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193. - P. 265-275]. Статистическую обработку полученных результатов проводили при уровне значимости 5% с использованием t-критерия Стьюдента.
На первом этапе экспериментов для получения гетерогенных биокатализаторов на основе бромелайна, иммобилизованного на матрице ионообменных волокон ВИОН КН-1, в качестве иммобилизационной среды мы использовали следующие растворы: 0.1 М карбонатный (рН 9.0-10.5), 0.05 М глициновый (рН 8.6-10.5), 0.1 М боратный буфер без добавления KCL (рН 8.0-10.0), 0.2 М ацетатный (рН 4.0-5.8), 0.05 М трис-HCL буфер (рН 7.0-9.0).
Установлено, что наибольшее содержание белка (в мг на г носителя) в препаратах бромелайна, адсорбированного на матрице ионообменного волокна ВИОН КН-1, наблюдается при иммобилизации в следующих растворах: 0.2 М ацетатный (рН 4.0-5.8), 0.05 М трис-HCL (рН 7.0-9.0) буферы (фиг. 2).
Высокую общую активность (в ед на мл раствора) показали препараты бромелайна, приготовленные с помощью боратного буфера (рН 8.0-10.0), трис-HCL (рН 7.0-9.0) и глицинового (рН 9.0, 10.0 и 10.5) буферов (фиг. 3).
Максимальная удельная активность (в ед на мг белка) гетерогенного биокатализатора на основе бромелайна, сорбированного на матрице ионообменного волокна ВИОН КН-1, регистрируется при использовании боратного буфера без добавления KCL (рН 8.0) и глицинового буфера (рН 9.0 и 10.5) (фиг. 4).
На втором этапе эксперимента для получения гетерогенного биокатализатора на основе протеолитического фермента бромелайна, иммобилизованного на матрице ионообменного волокна ВИОН АН-1, в качестве иммобилизационной среды мы использовали следующие растворы: 0.2 М ацетатный (рН 4.0-5.8), 0.1 М карбонатный (рН 9.0-10.5), 0.05 М глициновый (рН 8.6-10.5) буферы.
Установлено, что наибольшее содержание белка (в мг на г носителя) в препаратах бромелайна наблюдается при иммобилизации в глициновом (рН 9.0 и 10.5) и карбонатном (рН 10.0) буферных растворах (фиг. 5).
Высокую общую активность (в ед на мг белка) показали препараты бромелайна, приготовленные с помощью ацетатного (рН 5.0 и 5.8), карбонатного (рН 10.0 и 10.5) и глицинового (рН 9.0, 10.0 и 10.5) буферов (фиг. 6).
Максимальная удельная активность (в ед на мг белка) гетерогенного препарата, приготовленного на основе бромелайна, сорбированного на матрице ВИОН АН-1, зарегистрирована при использовании ацетатного буфера (рН 5.0) (фиг. 7).
Из вышеизложенного материала следует, что оптимальными для создания гетерогенных препаратов на основе бромелайна являются следующие два варианта:
Пример 1. К 1 г катионообменных волокон ВИОН КН-1 добавляли 20 мл раствора бромелайна в концентрации 2 мг/мл в 0.05 М глициновом буфере (рН 9.0) или 0.05 М боратном буфере без добавления KCl (рН 8.0), инкубировали в течение 24 часов. После окончания инкубации образовавшийся осадок промывали буфером до отсутствия в промывных водах белка (контроль этого факта осуществляли на спектрофотометре СФ-2000 при λ=280 нм).
Пример 2. К 1 г анионообменных волокон ВИОН АН-1 добавляли 20 мл раствора бромелайна в концентрации 2 мг/мл в 0.2 М ацетатном (рН 5.0) буфере, инкубировали в течение 24 часов. После окончания инкубации образовавшийся осадок промывали буфером до отсутствия в промывных водах белка (контроль этого факта осуществляли на спектрофотометре СФ-2000 при λ=280 нм).
Таким образом, нами была разработана методика получения ранозаживляющего гетерогенного препарата медицинского назначения на основе бромелайна и ионообменных волокон ВИОН КН-1 и ВИОН АН-1. Подобраны оптимальные условия для иммобилизации бромелайна на матрицах ионообменных волокон ВИОН. Предлагаемый нами продукт может быть использован в медицинской практике, обладает пролонгированным действием благодаря стабилизации фермента, что позволит сократить расход перевязочного материала.
Claims (1)
- Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами, включающий иммобилизацию ферментного препарата в буферном растворе, инкубирование и промывку, отличающийся тем, что иммобилизацию бромелайна проводят на матрицу ионообменных волокон ВИОН КН-1 или ВИОН АН-1 в соотношении 20 мл раствора фермента в концентрации 2 мг/мл на 1 г волокон; в качестве буферного раствора для иммобилизации на ВИОН КН-1 используют 0.05 М глициновый буфер с pH 9.0-10,5 или 0.05 М боратный буфер с pH 8.0 без добавления KCl, а для иммобилизации на ВИОН АН-1 - 0.2 М ацетатный буфер с pH 5.0; инкубация проводится в течение 24 часов при комнатной температуре; образовавшийся осадок промывают использованным при иммобилизации буфером до отсутствия в промывных водах белка.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017123459A RU2677343C2 (ru) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017123459A RU2677343C2 (ru) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017123459A RU2017123459A (ru) | 2019-01-09 |
| RU2017123459A3 RU2017123459A3 (ru) | 2019-01-09 |
| RU2677343C2 true RU2677343C2 (ru) | 2019-01-16 |
Family
ID=64977293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017123459A RU2677343C2 (ru) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2677343C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750377C1 (ru) * | 2020-07-27 | 2021-06-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") | Способ получения иммобилизованного ферментного препарата на основе бромелайна, гиалуроновой кислоты и полисахаридов, модифицированных виниловыми мономерами |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1814764A3 (ru) * | 1990-04-20 | 1995-03-20 | Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения АН СССР | Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран |
| RU2102544C1 (ru) * | 1996-06-28 | 1998-01-20 | Акционерное общество закрытого типа "МЕТТЭМ-технологии" | Способ получения хемосорбционного карбоксилсодержащего волокна |
| RU2229311C2 (ru) * | 2001-11-22 | 2004-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Айтуар -НП" | Ранозаживляющий материал |
| WO2005030111A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-04-07 | Coloplast A/S | A wound care device |
| US20080279842A1 (en) * | 2003-10-10 | 2008-11-13 | Coloplast A/S | Controlled release dressing for enzymatic debridement of necrotic and non-viable tissue in a wound |
-
2017
- 2017-07-03 RU RU2017123459A patent/RU2677343C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1814764A3 (ru) * | 1990-04-20 | 1995-03-20 | Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения АН СССР | Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран |
| RU2102544C1 (ru) * | 1996-06-28 | 1998-01-20 | Акционерное общество закрытого типа "МЕТТЭМ-технологии" | Способ получения хемосорбционного карбоксилсодержащего волокна |
| RU2229311C2 (ru) * | 2001-11-22 | 2004-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Айтуар -НП" | Ранозаживляющий материал |
| WO2005030111A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-04-07 | Coloplast A/S | A wound care device |
| US20080279842A1 (en) * | 2003-10-10 | 2008-11-13 | Coloplast A/S | Controlled release dressing for enzymatic debridement of necrotic and non-viable tissue in a wound |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750377C1 (ru) * | 2020-07-27 | 2021-06-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") | Способ получения иммобилизованного ферментного препарата на основе бромелайна, гиалуроновой кислоты и полисахаридов, модифицированных виниловыми мономерами |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2017123459A (ru) | 2019-01-09 |
| RU2017123459A3 (ru) | 2019-01-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Baidamshina et al. | Anti-biofilm and wound-healing activity of chitosan-immobilized Ficin | |
| CA2587951C (en) | Debriding composition from bromelain and methods of production thereof | |
| Martínez et al. | Immobilized keratinase and enrofloxacin loaded on pectin PVA cryogel patches for antimicrobial treatment | |
| RU2677858C2 (ru) | Способ получения гетерогенного ферментного препарата на основе фицина, обладающего ранозаживляющими и регенерирующими свойствами | |
| CN107929719B (zh) | 一种冻干人血浆活化凝血因子vii浓制剂的大规模生产制备方法 | |
| RU2677343C2 (ru) | Способ получения гетерогенного препарата на основе бромелайна, обладающего ранозаживляющими свойствами | |
| JPH02219571A (ja) | 修飾プロテアーゼ及びその製造法 | |
| Brkich et al. | Miramistin as an antimicrobial component in the innovative substance of Chitosan-Miramistin Complex (CMC) for the treatment of infected wounds of various genesis | |
| US20030203031A1 (en) | Immune modulation with polystyrene sulfonate | |
| RU2712690C1 (ru) | Способ получения препарата папаина в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана | |
| RU2677873C2 (ru) | Способ получения гетерогенного препарата на основе папаина | |
| KR100377279B1 (ko) | 트롬빈의제조방법 | |
| RU2771183C1 (ru) | Способ получения препарата фицина в геле на основе карбоксиметилцеллюлозы | |
| Holyavka et al. | Novel biocatalysts based on bromelain immobilized on functionalized chitosans and research on their structural features. Polymers. 2022; 14 (23): 5110 | |
| RU2822736C1 (ru) | Способ получения гибридного препарата папаина и аскорбата хитозана в виде густого раствора | |
| RU2769243C1 (ru) | Способ получения гетерогенного ферментного препарата на основе фицина и низкомолекулярного хитозана | |
| RU2610669C1 (ru) | Способ получения протеолитического препарата для медицинского применения | |
| RU2792785C1 (ru) | Способ получения композиционного препарата бромелайна и альгината натрия в виде густого раствора | |
| RU2678435C2 (ru) | Способ получения гетерогенного препарата на основе коллагеназы и хитозана | |
| RU2268751C2 (ru) | Медицинская повязка, содержащая комплекс протеолитических ферментов, включая коллагенолитические протеазы, из гепатопанкреаса краба | |
| RU2535053C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая лизин и ферменты: лизоцим, дезоксирибонуклеазу и/или пероксидазу для наружного лечения и профилактики инфекций, вызванных вирусом герпеса типа 1,2 и бактериальных осложнений, вызываемых герпетической инфекцией | |
| RU2788455C1 (ru) | Способ получения композиционного препарата папаина и альгината натрия в виде густого раствора | |
| RU2691611C1 (ru) | Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана | |
| RU2819793C1 (ru) | Способ получения гибридного препарата бромелайна и аскорбата хитозана в виде густого раствора | |
| RU2795425C1 (ru) | Способ получения гибридного препарата папаина и карбоксиметилцеллюлозы в виде густого раствора |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200704 |