RU2673455C2 - Адреномедуллин для направленной терапии по снижению кровяного давления - Google Patents
Адреномедуллин для направленной терапии по снижению кровяного давления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2673455C2 RU2673455C2 RU2015144699A RU2015144699A RU2673455C2 RU 2673455 C2 RU2673455 C2 RU 2673455C2 RU 2015144699 A RU2015144699 A RU 2015144699A RU 2015144699 A RU2015144699 A RU 2015144699A RU 2673455 C2 RU2673455 C2 RU 2673455C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- subject
- identifying
- adm
- need
- Prior art date
Links
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 title claims description 18
- 101800004616 Adrenomedullin Proteins 0.000 title description 148
- 102000004379 Adrenomedullin Human genes 0.000 title description 144
- ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N adrenomedullin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N 0.000 title description 134
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title description 14
- 230000007423 decrease Effects 0.000 title description 2
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 claims abstract description 92
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 63
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 56
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- 238000002637 fluid replacement therapy Methods 0.000 claims abstract description 34
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims abstract description 28
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 25
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 18
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 32
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 28
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 26
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 16
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 10
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 claims description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 6
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 claims description 5
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 5
- 206010007625 cardiogenic shock Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 4
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 claims description 3
- 206010049765 Bradyarrhythmia Diseases 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000007574 infarction Effects 0.000 claims description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 3
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 claims description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000004221 Multiple Trauma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023637 Multiple injury Diseases 0.000 claims description 2
- 206010040007 Sense of oppression Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 229940124572 antihypotensive agent Drugs 0.000 abstract 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 47
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 25
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 19
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 14
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 12
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 6
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 108010012004 proadrenomedullin Proteins 0.000 description 5
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 206010007556 Cardiac failure acute Diseases 0.000 description 4
- 101000690940 Homo sapiens Pro-adrenomedullin Proteins 0.000 description 4
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 102000034567 proadrenomedullin Human genes 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 3
- 102000046663 human ADM Human genes 0.000 description 3
- 239000004041 inotropic agent Substances 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 3
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 3
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 2
- WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-x-rhodamine Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 2
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 2
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 2
- -1 antibody Proteins 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 229940124446 critical care medicine Drugs 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 2
- 208000012866 low blood pressure Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002671 oral rehydration therapy Methods 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNGRENQDBKMCCR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-amino-6-iminoxanthen-9-yl)benzoic acid;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[NH2+])C=C2OC2=CC(N)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O JNGRENQDBKMCCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010006591 Apoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 241000532370 Atla Species 0.000 description 1
- 239000010755 BS 2869 Class G Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010004194 Bed bug infestation Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001327638 Cimex lectularius Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000028399 Critical Illness Diseases 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- JRWZLRBJNMZMFE-UHFFFAOYSA-N Dobutamine Chemical compound C=1C=C(O)C(O)=CC=1CCNC(C)CCC1=CC=C(O)C=C1 JRWZLRBJNMZMFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000007530 Essential hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102100026651 Pro-adrenomedullin Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 102000000395 SH3 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050008861 SH3 domains Proteins 0.000 description 1
- 101100319898 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YAP6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940126530 T cell activator Drugs 0.000 description 1
- 102100024554 Tetranectin Human genes 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004136 Vasopressin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000643 Vasopressin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- ZDVWPPFTKCGYBB-UHFFFAOYSA-N [4-[3-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-3-oxopropyl]phenyl] 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC(C=C1)=CC=C1CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZDVWPPFTKCGYBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 1
- 208000037998 chronic venous disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229960001089 dobutamine Drugs 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960004580 glibenclamide Drugs 0.000 description 1
- ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N glyburide Chemical compound COC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCCCC2)C=C1 ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000003093 intracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229940039009 isoproterenol Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- PZRHRDRVRGEVNW-UHFFFAOYSA-N milrinone Chemical compound N1C(=O)C(C#N)=CC(C=2C=CN=CC=2)=C1C PZRHRDRVRGEVNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003574 milrinone Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036581 peripheral resistance Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000005053 phenanthridines Chemical class 0.000 description 1
- 229960001802 phenylephrine Drugs 0.000 description 1
- SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N phenylephrine Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002570 phosphodiesterase III inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 108010049361 preproadrenomedullin Proteins 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000036593 pulmonary vascular resistance Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013102 re-test Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 238000011309 routine diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- JCVQBJTWWDYUFQ-MRUTUVJXSA-N selepressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 JCVQBJTWWDYUFQ-MRUTUVJXSA-N 0.000 description 1
- 229950008103 selepressin Drugs 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013645 tetranectin Proteins 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/06—Antiarrhythmics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока. Для этого проводят определение уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта. Сопоставляют уровень proADM с потребностью указанного субъекта в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента. Причем пациента выявляют в качестве субъекта, имеющего такую потребность, если уровень proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение. Изобретение позволяет выявить субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента. 18 з.п. ф-лы, 7 ил., 11 табл., 8 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к способу выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, включающему следующие стадии:
- Определение уровня proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта
- Сопоставление указанного уровня с потребностью указанного пациента в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного пациента выявляют в качестве пациента, нуждающегося в такой потребности, если уровень proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
Пептид адреномедуллин (adrenomedullin - ADM) впервые описан Kitamma с соавт. (ссылка [1], см. ниже список литературы) в качестве нового гипотензивного пептида, содержащего 52 аминокислоты, который выделен из феохромоцитомы человека. В тот же год также была описана кДНК, кодирующая пептид-предшественник, состоящий из 185 аминокислот, и полная аминокислотная последовательность пептида предшественника. Пептид-предшественник, включающий в частности сигнальную последовательность из 21 аминокислоты с N-конца, называют препроадреномедуллином (preproadrenomedullin - pre-proADM). Pre-proADM включает 185 аминокислот. Зрелая форма ADM имеет последовательность SEQ ID No. 4, ADM-Gly имеет последовательность SEQ No. 5.
Зрелая форма пептида адреномедуллина (adrenomedullin - ADM) является амидированным пептидом, включающим 52 аминокислоты (SEQ ID No: 4), а именно аминокислоты с 95 по 146 в pre-proADM, от которого она формируется в результате протеолитического расщепления. В настоящее время по существу более точно охарактеризовано только несколько пептидных фрагментов, сформированных в результате расщепления pre-proADM, в том числе физиологически активные пептиды адреномедуллин (ADM) и «РАМР» - пептид из 20 аминокислот (22-41), следующих за 21 аминокислотой сигнального пептида в pre-proADM. И для ADM, и для РАМР, кроме того, были открыты и более детально исследованы физиологически активные суб-фрагменты. Открытие и описание в 1993 году ADM стимулировали интенсивные исследования активности, а также поток публикаций, результаты которых суммированы в разнообразных обзорных статьях; в настоящем описании ссылки приводят в основном на статьи издания «Peptides», посвященного ADM (Peptides 22 (2001)), в особенности [2] и [3]. См. также обзор [4]. В настоящее время по результатам научных исследований установлено, что ADM в частности можно рассматривать в качестве полифункционального регуляторного пептида. Он высвобождается в кровяное русло в неактивной форме за счет удлинения молекулы путем присоединения глицина [5]. Также имеется связующий белок [6], специфичный в отношении ADM и предположительно также модулирующий действие ADM.
К физиологическим эффектам ADM и РАМР, которые в настоящее время имеют первостепенное значение и которые необходимо исследовать, относятся воздействия на кровяное давление. Поскольку ADM является эффективным сосудорасширителем, гипотензивный эффект может быть связан с определенными пептидными сегментами в C-концевой части ADM.
Кроме того, было установлено, что упомянутый выше физиологически активный пептид РАМР, сформированный из pre-proADM, также проявляет гипотензивный эффект, даже если его механизм действия отличается от механизма действия ADM (наряду с указанными выше обзорами [3] и [4] см. также публикации [7], [8] или [9] и [10]).
Также было установлено, что концентрации ADM, которые могут быть измерены в кровяном русле и в других биологических жидкостях в случаях рядя патологических состояний, существенно выше концентраций, установленных у здоровых людей, служащих контролем. Так уровень ADM у пациентов с застойной сердечной недостаточностью, инфарктом миокарда, болезнями почек, гипертензивными расстройствами, сахарным диабетом, в острой фазе удара, при сепсисе и септическом шоке существенно повышен, хотя и в разной степени. Концентрации РАМР также повышены при некоторых из указанных патологических состояний, но уровни в плазме снижены относительно ADM ([3]; с. 1702).
Также известно, что необычно высокие концентрации ADM наблюдают при сепсисе или септическом шоке ([3] и [11], [12], [13], [14] и [15]). Эти показатели связаны с характерными гемодинамическими изменениями, которые известны как типичные симптомы по мере развития заболевания пациента с сепсисом и другими тяжелыми синдромами, например, такими как синдром системного воспалительного ответа (ССВО).
Хотя принято считать, что ADM и РАМР сформированы из единого пептида-предшественника, pre-proADM, у которого аминокислотные последовательности, соответствующие этим пептидам, находятся в качестве частей пептидов в эквимолярных количествах, концентрации ADM или РАМР, измеряемые в биологических жидкостях, очевидно различны. В этом нет ничего необычного.
Таким образом, измеряемые концентрации разных продуктов распада одного и того же пептида-предшественника могут быть разными, например, потому, что они являются результатом разных конкурентных процессов распада, которые, например, в случае разных стадий патологии, приводят к разной фрагментации пептида-предшественника и, следовательно, к разным продуктам распада. Некоторые пептиды, являющиеся частью пептида-предшественника, могут быть сформированы в виде свободных пептидов или могут быть не сформированы, и/или разные пептиды формируются разными путями и в разных количествах. Даже если для процессинга пептида-предшественника предпринят единственный путь распада и, следовательно, все продукты распада происходят от одного и того же пептида-предшественника и должны быть сформированы per se первоначально в эквимолярных количествах, состояние стабильности концентраций разных частей пептидов и фрагментов, измеряемых в биологических жидкостях, могут сильно различаться, а именно, например, если отдельные из них формируются с разными скоростями и/или имеют разную индивидуальную стабильность (время существования) в соответствующей биологической жидкости, или если они удалены из кровообращения из-за различных механизмов клиренса и/или различных скоростей клиренса.
Адреномедуллин имеет важнейшее значение в развитии сепсиса [16, 17], а также в многочисленных острых и хронических заболеваниях [18, 4].
Описано несколько методов измерения уровня ADM в крови: непосредственное определение ADM или опосредованное путем определения более стабильного фрагмента исходного пептида-предшественника. Недавно опубликован метод, позволяющий измерять в крови зрелую форму ADM (Di Somma S, Magrini L, Travaglino F, Lalle I, Fiotti N, Cervellin G, Avanzi GC, Lupia E, Maisel A, Hein F с соавт.: Opinion paper on innovative approach of biomarkers for infectious diseases and sepsis management in the emergency department. Clinical chemistry and laboratory medicine: CCLM / FESCC 2013:1-9.)
Известны другие методы количественного измерения фрагментов, производных от предшественника ADM, например, измерение MR-proADM (Morgenthaler NG, Struck J, Alonso C, Bergmann A. Clin Chem. 2005 Oct; 51(10): 1823-9.), PAMP (Washimine H, Kitamura K, Ichiki Y, Yamamoto Y, Kangawa K, Matsuo H, Eto T. Biochem Biophys Res Commun. 1994 Jul 29; 202(2): 1081-7.), CT-proADM (EP211552). Известен коммерческий анализ по измерению MR-proADM (BRAHMS MR-proADM KRYPTOR; BRAHMS GmbH, Хеннигсдорф, Германия) (Clin Biochem. 2009 May; 42(7-8):725-8. doi: 10.1016/j.clinbiochem.2009.01.002. Epub 2009 Jan 23).
Гомогенный время-зависимый иммунофлуоресцентный анализ для измерения средне-регионального проадреномедуллина в плазме на полностью автоматизированной системе B.R.A.H.M.S KRYPTOR (Caruhel Р, Mazier С, Kunde J, Morgenthaler N.G, Darbouret В.). Поскольку эти пептиды вырабатываются в стехиометрическом соотношении из единого предшественника, их уровни в плазме до определенной степени коррелируют.
Только несколько исследований ADM в плазме проведено у пациентов с системным воспалением, сепсисом, тяжелым сепсисом или септическим шоком; уровни коррелировали с гемодинамическими параметрами:
В исследовании Hirata с соавт. установлено, что ADM в плазме у пациентов с сепсисом коррелирует с частотой сердцебиений, нормальным артериальным давлением, но не со средним артериальным давлением (mean arterial pressure - MAP) (Hirata Y, Mitaka C, Sato K, Nagura T, Tsunoda Y, Amaha K, Marumo F: Increased circulating adrenomedullin, a novel vasodilatory peptide, in sepsis. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 1996, 81(4): 1449-1453).
Nishio с соавт. сообщают, что повышенные концентрации ADM в плазме коррелируют с расслаблением тонуса сосудов у пациентов с септическим шоком (корреляция с сердечным индексом, систолическим индексом, частотой сердцебиений, снижением диастолического артериального давления, системным индексом сосудистого сопротивления и индексом легочного сосудистого сопротивления), однако нет существенной корреляции со средним кровяным давлением [19].
У здоровых субъектов при физической нагрузке установлена существенная отрицательная корреляция ADM и MAP в плазме [20].
Ничего неизвестно о связи уровней циркулирующего ADM или родственных пептидов, например, pro-ADM или его фрагментов, с потребностью в жидкостной реанимации и во введении сосудосуживающего агента для жидкостной реанимации пациентам с развивающимся шоком. Это неудовлетворенная медицинская потребность, поскольку обычно сосудосуживающие агенты вводят слишком поздно, когда состояние пациента уже становится тяжелым. Необходимо уметь идентифицировать тех пациентов, которым требуется жидкостная реанимация и сосудосуживающие агенты до того, как состояние пациента станет тяжелым. В медицине существует потребность в умении прогнозировать потребность в лечении с помощью жидкостной реанимации и введения сосудосуживающего агента до того, как показание кровяного давления достигнет установленного критического значения 65 mm Hg [21]. При падении кровяного давления снабжение кислородом становится недостаточным, что приводит к дисфункции органов и смерти. Поэтому существует неудовлетворенная потребность в раннем выявлении пациентов с риском понижения кровяного давления. Если такие пациенты могут быть выявлены на более раннем этапе, например, при величине давления, превышающей критические значения среднего артериального давления, может быть начато применение жидкостной реанимации и лечение сосудосуживающим агентом. Повышенные пороговые уровни составляют <70 mm Hg, предпочтительно <75 mm Hg. Следовательно, подобную терапию начинают уже при значении выше 65 mm Hg.
Объектом настоящего изобретения является способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, повышающего кровяное давление, включающий следующие стадии:
- Определение в жидкости тела указанного субъекта уровня proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот,
- Сопоставление указанного уровня с потребностью указанного пациента в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного субъекта или пациента выявляют в качестве пациента, нуждающегося в такой потребности, если в жидкости тела указанного субъекта уровень proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, превышает пороговое значение.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения в способах по настоящему изобретению среднее артериальное давление у субъектов составляет >65 mm Hg. Кроме того, у указанного субъекта среднее артериальное давление <75 mm Hg, в другом варианте осуществления настоящего изобретения оно составляет <70 mm Hg.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения описанным способом является способ раннего выявления потребности в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем понятие «более раннее» означает, что указанные меры следует осуществить ранее, чем кровяное давление достигнет критической величины 65 mm Hg или до того, как кровяное давление упадет до 65 mm Hg.
Жидкостью тела по настоящему изобретению в одном из вариантов его осуществления является образец крови. Образец крови может быть выбран из группы, включающей цельную кровь, сыворотку и плазму.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения указанный proADM и/или его фрагменты, включающие по меньшей мере 6 аминокислот, выбран/выбраны из группы, включающей:
SEQ ID No. 1 (proADM): 164 аминокислоты (22-185 в preproADM)
ARLDVASEF RKKWNKWALS RGKRELRMSS SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RVKRYRQSMN NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYGRRR RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGS APHFL
SEQ ID No. 2 (N-20 концевой пептид проадреномедуллина): пептиды 22-41
ARLDVASEF RKKWNKWALS R
SEQ ID No. 3 (средне-региональный проадреномедуллин (MidregionalproAdrenomedullin - MR-proADM)): пептиды 45-92
ELRMSS SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RV
SEQ ID No. 4 (зрелая форма адреномедуллина (зрелая форма ADM); амидированная): пептиды 95-146 -CONH2
YRQSMN NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGY - CONH2
SEQ ID No. 5 (адреномедуллин 1-52-Gly (ADM 1-52-Gly)): пептиды 95-147 YRQSMN NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYG
SEQ ID No. 6 (С-концевой проадреномедуллин, CT-proADM): пептиды 148-185
RRR RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGS APHFL
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения указанный proADM и/или его фрагменты, включающие по меньшей мере 6 аминокислот, выбран/выбраны из группы, включающей зрелую форму ADM (SEQ ID NO. 4)
и/или зрелую форму ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), MR-proADM (SEQ ID No. 3) и CT-proADM (SEQ ID No. 6).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4), и/или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), или уровень иммунореактивности MR-proADM (SEQ ID No.3), или уровень иммунореактивности CT-ADM (SEQ ID No.6) определяют и соотносят с потребностью указанного пациента в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного пациента выявляют в качестве имеющего такую потребность, если уровень иммунореактивности зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4), и/или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), или уровень иммунореактивности MR-proADM (SEQ ID No. 3), или уровень иммунореактивности CT-ADM (SEQ ID No. 6) в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения уровень proADM и/или его фрагментов определяют, используя по меньшей мере один связующий агент, выбранный из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последующую последовательность зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4) и/или зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность зрелой формы ADM (SEQ ID NO. 4) и/или зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения уровень proADM и/или его фрагментов определяют, используя по меньшей мере один связующий агент, выбранный из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность MR-proADM (SEQ ID No. 3), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность MR-proADM (SEQ ID No. 3)
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения уровень proADM и/или его фрагментов определяют, используя по меньшей мере один связующий агент, выбранный из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность CT-proADM (SEQ ID No. 6), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность CT-pro ADM (SEQ ID No. 6).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяют метод определения уровня proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, причем чувствительность указанного метода позволяет определить количество ADM у здорового субъекта, составляющее <70 пг/мл, предпочтительно <40 пг/мл и более предпочтительно <10 пг/мл.
В одном из вариантов осуществления настоящею изобретения указанный связующий агент проявляет связывающее сродство с proADM и/или его фрагментами, составляющее по меньшей мере 107 М-1 предпочтительно 108 М-1 предпочтительное сродство превышает 109 М-1 наиболее предпочтительное сродство составляет 1010 М-1. Специалистам в данной области известно, что это можно рассматривать в качестве компенсации низкого сродства за счет применения повышенной дозы соединений и такая мера не выходит за рамки охвата настоящего изобретения.
Для определения сродства антител с адреномедуллином определяют кинетику связывания адреномедуллина с иммобилизованным антителом методами поверхностного плазмонного резонанса без метки, используя систему Biacore 2000 (фирма GE Healthcare Europe GmbH, Фрайбург, Германия). Обратимую иммобилизацию антител проводят, используя антитело против Fc-фрагмента мыши, ковалентно связанное с высокой плотностью с поверхностью сенсора СМ5, по инструкциям производителя (mouse antibody capture kit; фирма GE Healthcare) [22].
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения указанный связующий агент выбран из группы, включающей антитело, или фрагмент антитела, или каркас молекулы, не являющейся Ig, который связывается с proADM и/или его фрагментами.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения проводят исследование для определения уровня proADM и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, причем такое исследование является иммуноферментным сэндвич-анализом, предпочтительно полностью автоматизированным.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения это может быть так называемый тест в месте оказания помощи или тест у постели больного (point-of-care test - РОСТ), который представляет метод исследования, позволяющий проводить тестирование менее чем за 1 ч в месте нахождения пациента без необходимости использования полностью автоматизированной системы анализа. Одним из примеров такого метода является технология иммунохроматографического теста.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения таким анализом является иммуноферментный сэндвич-анализ, в котором используют какой-либо тип способа обнаружения, включая, но ими не ограничиваясь, ферментную метку, хемилюминесцентную метку, электрохемилюминесцентную метку, предпочтительно анализ полностью автоматизирован. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения таким анализом является иммуноферментный сэндвич-анализ. К примерам автоматизированных или полностью автоматизированных анализов относятся анализы, которые могут проводиться в следующих системах: Roche Elecsys®, Abbott Architect®, Siemens Centauer®, Brahms Kryptor®, BiomerieuxVidas®, Alere Triage®.
Многочисленные известные иммуноисследования могут быть применены в анализах и методах по настоящему изобретению, к ним относятся: радиоиммуноисследования (radioimmunoassay - RIA), гомогенный иммунологический анализ с ферментативным усилением (enzyme-multiplied immunoassays technique - EMIT), фермент-связанный иммуносорбентный анализ (enzyme linked immunoadsorbent assays - ELISA), апоферментный реактивационный иммуноанализ (apoenzyme reactivation immunoassay - ARIS), иммуноанализ с индикаторной полоской и иммунохроматографические анализы.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, по меньшей мере один из связующих агентов несет выявляемую метку.
К предпочтительным методам обнаружения относятся иммуноисследования различных форматов, например, радиоиммуноисследование (radioimmunoassay - RIA), хемилюминесцентные и флуоресцентные иммуноанализы, фермент-связанные иммуноанализы (enzyme-linked immunoassays - ELISA), исследования на гранулах фирмы Luminex, исследования белковых микроматриц и быстрые тест-форматы, например, иммунохроматографические тесты на полосках (стрипах).
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанная метка выбрана из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку, радиоактивный йод.
Анализы могут быть гомогенными и гетерогенными, конкурентными и неконкурентными. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяют анализ в форме иммуноферментного сэндвич-анализа, который является неконкурентным иммуноанализом, причем молекула, которую обнаруживают и/или определяют ее количество, связана с первым антителом и со вторым антителом. Первое антитело может быть связано с твердой фазой, например, с гранулой, поверхностью лунки или другого контейнера, чипа или полоски, и второе антитело является антителом с меткой, например, красителем, радиоизотопом или частью молекулы реакционноспособного или каталитического действия. Количество меченого антитела, связанного с выявляемым при анализе веществом, затем определяют соответствующим методом. Общий состав и методы, используемые в «иммуноферментном сэндвич-анализе», хорошо обоснованы и известны специалистам в этой области [23].
В другом варианте осуществления настоящего изобретения анализ включает две молекулы захвата, предпочтительно антитела, которые оба содержатся в диспергированном виде в жидкой реакционной смеси, причем первый меченый компонент присоединен к первой молекуле захвата и первый меченый компонент является частью системы маркирования, основанной на флуоресцентном или хемилюминесцентном гашении или расширении, и второй меченый компонент указанной системы маркирования присоединен ко второй молекуле захвата таким образом, что при связывании обеих молекул захвата с выявляемым при анализе веществом вырабатывается измеряемый сигнал, который позволяет выявить сформированные сэндвич-комплексы в растворе, включающем образец.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанная система маркирования включает редкоземельные криптаты или редкоземельные хелаты в комбинации с флуоресцентным красителем или хемилюмицесцентным красителем, особенно красителем типа цианина.
В контексте настоящего изобретения исследования на основе флуоресценции включают применение красителей, которые, например, могут быть выбраны из группы, включающей РАМ (5- или 6-карбоксифлуоресцеин), VIC, NED, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат (fluoresceinisothiocyanate FITC), IRD-700/800, цианиновые красители, например, CY3, CY5, CY3.5, CY5.5, Су7, ксантен, 6-карбокси-2',4',7',4,7-гексахлорфлуоресцеин (hexachlorofluorescein-HEX), ТЕТ, 6-карбокси-4',5'-дихлор-2',7'-диметодифлуоресцеин(JOE), N,N,N',N'-тетраметил-6-карбоксиродамин (TAMRA), 6-карбокси-Х-родамин (ROX), 5-карбоксиродамин-6G (R6G5), 6-карбоксиродамин-6G (RG6), родамин, родамин зеленый, родамин красный, родамин 110, красители BODIPY, например, BODIPY TMR, Орегон зеленый, кумарины, например, умбеллиферон, бензимиды, например Hoechst 33258, фенантридины, например Texas Red, Yakima Yellow, Alexa Fluor, PET, этидиумбромид, акридиновые красители, карбазоловые красители, феноксазиновые красители, порфириновые красители, полиметиновые красители и другие.
В контексте настоящего изобретения к анализам на основе хемилюминесценции относится применение красителей, в основе которых лежат физические принципы и которые охарактеризованы как хемилюминесцентные материалы в [24]. Предпочтительными хемилюминесцентными красителями являются эфиры акридина.
В контексте настоящего изобретения понятие «анализ» или «диагностическое исследование» означает какой-либо тип анализа, применяемый в диагностике. Такой анализ может основываться на связывании определяемого вещества с одним или несколькими зондами захвата с определенным сродством. Касательно взаимодействия молекул захвата с молекулами-мишенями или целевыми молекулами, следует отметить, что константа сродства предпочтительно превышает 108 М-1.
В контексте настоящего изобретения понятие «связующие молекулы» относится к молекулам, которые могут применяться для связывания молекул-мишеней или целевых молекул, т.е. выявляемого при анализе вещества (т.е. в контексте настоящего изобретения РСТ и его фрагментов) из образца. Таким образом, связующим молекулам должна быть придана адекватная форма, касающаяся пространственных и поверхностных показателей, например, относящаяся к поверхностному заряду, гидрофобности, гидрофильности, наличию или отсутствию льюисовых доноров и/или акцепторов для специфического связывания молекул-мишеней или целевых молекул. При этом связывание может быть, например, опосредовано ионными силами, Ван-дер-Ваальсовыми силами, взаимодействиями в парах pi-pi и sigma-pi, гидрофобными или водородными связями или комбинацией двух или более вышеупомянутых взаимодействий между молекулами захвата и молекулами-мишенями или целевыми молекулами. В контексте настоящего изобретения связывающие молекулы могут быть выбраны из группы, в которую входят, например, молекула нуклеиновой кислоты, молекула углевода, молекула РНК, белок, антитело, пептид или гликопротеин. Предпочтительно связующими молекулами являются антитела, включая их фрагменты с достаточным сродством с мишенью или целевой молекулой, а также включая рекомбинантные антитела или фрагменты рекомбинантных антител и химически и/или биохимически модифицированные производные указанных антител или фрагментов, производных от варианта цепи длиной не менее 12 аминокислот.
Хемилюминесцентной меткой может быть сложный эфир акридиния, стероидные метки, включая метки изолюминола и другие.
Ферментными метками могут быть лактатдегидрогеназа (dehydrogenase - LDH), креатинкиназа (creatinekinase - CPK), щелочная фосфатаза, аспартатаминотрансфераза (aspartateaminotransferace - AST), аланинаминотрансфераза (alanine aminotransferace - ALT), кислая фосфатаза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа и другие.
В одном из вариантов осуществления настоящего по меньшей мере один из двух указанных связующих связан с твердой фазой, например, с магнитными частицами и поверхностями из полистирола.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения по меньшей мере один из двух указанных связующих связан с твердой фазой.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения концентрация ADM или его фрагментов, измеренные в образце, находятся в диапазоне 10-500 пг/мл в плазме или крови.
Уровни ADM по настоящему изобретению, или уровни proADM, или их фрагментов, соответственно, определяют методом исследования ADM, описанным в примерах (или исследования proADM, или исследования их фрагментов, соответственно). Указанные выше значение могут различаться в разных исследованиях ADM (или в исследованиях proADM, или в исследованиях их фрагментов, соответственно), в зависимости от способа калибровки. Указанные выше значения будут применять для таких по-разному калиброванных исследований ADM, соответственно, учитывая различия в калибровке. Исследования ADM могут быть откалиброваны путем корреляции и приведения в соответствие через их нормальные диапазоны (здоровая популяция) (или исследования proADM, или исследования их фрагментов, соответственно). В другом варианте, коммерчески доступные контрольные образцы могут применяться для приведения в соответствие разных калибровок (фирма ICI Diagnostics, Берлин, Германия).
В описанном анализе ADM среднее значение для нормальной популяции определено равным 24,7 пг/мл.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения устанавливают пороговое значение для ADM в плазме 90 пг/мл, предпочтительно 70 пг/мл.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения устанавливают пороговое значение для MR-proADM в плазме 0,9 нмоль/л, предпочтительно 0,7 нмоль/л.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения устанавливают пороговое значение для CT-proADM в плазме 1,0 нмоль/л, предпочтительно 0,8 нмоль/л.
Если в плазме уровень ADM, или MR-proADM, ли CT-proADM выше указанных пороговых значений, субъект может нуждаться в лечении сосудосуживающим агентом.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения указанный образец выбран из группы, включающей нитратную плазму, гепариновую плазму, плазму EDTA, цельную кровь человека.
Субъект, который может нуждаться в жидкостной реанимации или в лечении сосудосуживающим агентом, может находиться в состоянии, выбранном из группы, включающей: пациентов с риском развития состояний физиологического шока, согласно приведенному ниже более подробному описанию, а также при инфекциях, ССВО, сепсисе, сердечной недостаточности, сердечно-легочном угнетении, в период после операции на сердце, при инфаркте правого желудочка, мерцательной брадиаритмии, множественных травмах, ожогах, повреждении почек.
Этот тип шока может быть вызван:
- Тяжелым кровотечением.
- Легочной эмболией (сгустком крови в легких).
- Тяжелой рвотой и диареей.
- Травмой позвоночника.
- Отравлением.
Также существуют специфические типы физиологического шока с весьма характерными симптомами.
Кардиогенный шок:
Кардиогенный шок возникает при тяжелом поражении сердца, например, при тяжелом сердечном приступе, когда сердце больше не в состоянии качать кровь и должным образом обеспечивать кровоснабжение тела, что приводит к очень низкому кровяному давлению. Такие состояния возникают примерно в восьми процентах сердечных приступов. Их сложно лечить, но могут быть введены лекарства для усиления работы сердца. Этого может быть достаточно, чтобы пациент пережил наихудший период, пока сердце само не восстановится, но кардиогенный шок все еще заканчивается смертью в восьми случаях из десяти. Новые методы лечения для «реваскуляризации» или восстановления тока крови к сердечной мышце повышает выживаемость.
Септический шок:
Наблюдают при сокрушительной бактериальной инфекции, которая вызывает падение кровяного давления. Более чем в 50% случает пациенты умирают. Хотя септический шок вызывает бактериальная инфекция, лечение антибиотиками оказывается не таким простым, поскольку бактерии после своего уничтожения выделяют огромное количество токсина, который еще больше усугубляет шоковое состояние. Септический шок всегда следует лечить в клинике, где могут быть правильно выбраны лекарства и может поддерживаться водный баланс. Одним из типов септического шока является синдром токсического шока - редкое тяжелое заболевание, вызываемое некоторыми штаммами бактерии Staphylococcus aureus.
Анафилактический шок:
Это тяжелая аллергическая реакция. Обычно анафилактический шок вызывают укусы пчел и ос, орехи, ракообразные, яйца, латекс и некоторые медикаменты, включая пенициллин. К симптомам относятся:
- Жжение и разбухание губ и языка.
- Затрудненное дыхание (как при приступе удушья).
- Красная, покрытая пузырями или зудящая кожа, чихание.
- Слезящиеся глаза.
- Тошнота.
- Страх.
Анафилаксия требует неотложного лечения в условиях клиники. Людям с риском развития анафилаксии следует всегда иметь при себе набор для неотложного лечения, в состав которого входит адреналин.
Сепсис и формы его обострения (тяжелый сепсис, септический шок) по прежнему представляют сложную медицинскую задачу, смертность колеблется от 30 до 70%. Несмотря на успехи поддерживающей терапии ежегодно у 750000 людей развивается сепсис и только в США умирает 225000, причем ежегодно случаев сепсиса становится больше на 1,5-8% [4-6]. Для того чтобы спасти жизнь пациента с сепсисом, важно, во-первых, своевременно принять меры против признаков инфекции с помощью антибиотиков или других средств, и, во-вторых, своевременно распознать нарастающее осложнение ситуации, например, когда тяжелый сепсис переходит в септический шок, значит должная терапия с применением сосудосуживающего агента должна быть инициирована ранее. Отсрочка лечения могла повысить риск смерти пациента.
Признаки, при которых пациентов с прогрессированием септического шока рекомендуют начинать жидкостную реанимацию или терапию сосудосуживающим/инотропным агентом, описаны в рекомендациях Surviving Sepsis Campaign [3]: рекомендуют применить сосудосуживающие агенты при гипотонии, что не соответствует первоначальной жидкостной реанимации для поддержания среднего артериального давления (MAP)≥65 mm Hg. В этом руководстве также рекомендуют, какой сосудосуживающий/инотропный агент следует применить в такой ситуации. В настоящее время консолидированное мнение следующее: норэпинефрин (синоним - норадреналин) - сосудосуживающий агент первого выбора. Эпинефрин (синоним - адреналин; вводят для потенциального замещения норадреналина) применяют, если дополнительный агент необходим для поддержания должного кровяного давления. Сосудосуживающий агент в количестве 0,03 ед./мин может быть добавлен к норэпинефрину либо для повышения MAP, либо для снижения дозы норэпинефрина. В основном применяемыми в настоящее время в клинической практике сосудосуживающими и инотропными агентами являются [7, 8]: катехоламины (допамин, добутамин, норэпинефрин, эпинефрин, изопротеренол, фенилэфрин), ингибиторы фосфодиэстеразы III (милринон, амринон), вазопрессин, левосимендан.
Кроме того, разрабатывают другие соединения, активные в отношении сосудов, например, селепрессин - селективный агонист рецептора вазопрессина Via [9], и антитела против адреномедуллина.
Были исследованы другие соединения, но доступные результаты клинических исследований являются разбросанными, и полученные в большем масштабе результаты имеют неоднозначное толкование [10]. К ним относятся ингибиторы АТФ-зависимых K+-каналов (глибенкламид [11, 12]) NOS (NG-монометил-L-аргинин [13, 14]) и cGMP (метиленовый синий [15, 16]).
Сосудосуживающие агенты и инотропы клинически применимы для лечения и предупреждения различных типов физиологического шока и сердечнососудистых заболеваний (застойной сердечной недостаточности, остановки сердца, после операции на сердце, инфаркта правого желудочка, брадиаритмии) [7].
Поскольку всегда проводят мониторинг кровяного давления у пациентов, пребывающих в критическом состоянии, с клинической точки зрения пациенты с показателями, превышающими определенные пороговые значения, например, при высоком ADM (>70 пг/мл) без потребности в сосудосуживающем агенте при осмотре больного, следует лечить сосудосуживающим агентом путем адаптации точек принятия решения от величины MAP<66 mm Hg до, например, <75 mm Hg, принимая решение о более ранней поддержке кровообращения для защиты пациентов от дисфункций органов, связанных с низким кровяным давлением, и последующей высокой смертностью. Руководствуясь этим правилом для пациентов с ADM>70 пг/мл и лечения сосудосуживающими агентами при MAP<=75 mm Hg, пациентов (группа 3) следовало начинать лечить в среднем на 1,6 суток раньше, чем по стандартной схеме лечения (<=66 mm Hg).
Таким образом, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения указанного пациента определяют в качестве нуждающегося во введении сосудосуживающего агента, если уровень proADM и/или его фрагментов, содержащих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта выше порогового значения, и если у пациента MAP</=75 mm Hg, но предпочтительно >66 mm Hg, более предпочтительно MAP>70 mm Hg.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяют порог ADM в плазме 90 пг/мл, предпочтительно 70 пг/мл, и/или у пациента MAP<=/75 mm Hg, но предпочтительно >66 mm Hg, более предпочтительно MAP>70 mm Hg.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяют порог MR-proADM в плазме 0,9 нмоль/л, предпочтительно 0,7 нмоль/л, и/или у пациента MAP<=/75 mm Hg, но предпочтительно >66 mm Hg, более предпочтительно MAP>70 mm Hg.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения применяют порог СТ proADM в плазме 1,0 нмоль/л, предпочтительно 0,8 нмоль/л, и/или у пациента MAP<=/75 mm Hg, но предпочтительно >66 mm Hg, более предпочтительно MAP>70 mm Hg.
Если уровень ADM в плазме, или MR-proADM в плазме, или СТ proADM в плазме выше указанного выше порогового значения, и/или если у пациента MAP</=75 mm Hg, но предпочтительно >66 mm Hg, более предпочтительно MAP>70 mm Hg, субъект нуждается в лечении сосудосуживающим агентом.
Замещение жидкости или жидкостная реанимация является медицинской практикой замещения жидкости тела, утраченной с потом, в результате кровотечения, перемещения жидкости в организме или в следствие других патологических процессов, описанных выше. Жидкость может быть замещена введением через рот (питье), внутривенно, ректально или введением жидкости в подкожную клетчатку, прямой инъекцией жидкости в подкожную ткань. Жидкости, введенные перорально и подкожно, всасываются медленнее, чем при внутривенном введении. Пероральная регидратационная терапия - пример простого метода лечения дегидратации, связанной с диареей, особенно с гастроэнтеритем/гастроэнтеропатией, например, вызванных холерой или ротавирусом. Пероральная регидратационная терапия заключается во введении через рот раствора солей и Сахаров.
При тяжелой форме дегидратации предпочтительнее внутривенное замещение жидкости, которое может привести к спасению жизни субъекта. Этот метод лечения особенно применим при истощении жидкости и во внутриклеточном пространстве, и в просветах сосудов.
Замещение жидкости также показано при истощении жидкости при каком-либо из описанных выше состояний.
В контексте настоящего изобретения антителом является белок, включающий один или более полипептидов, главным образом кодируемых генами иммуноглобулинов, специфически связывающих антиген. Установленными генами иммуноглобулинов являются гены константных областей каппа, лямбда, альфа (IgA), гамма (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), дельта (IgD), эпсилон (IgE) и мю (IgM), а также несметное количество генов вариабельных областей иммуноглобулинов. Легкие цепи иммуноглобулинов полной длины обычно имеют размер примерно 25 кДа или 214 аминокислот в длину. Тяжелые цепи иммуноглобулинов полной длины обычно имеют размер примерно 50 кДа или 446 аминокислот в длину. Легкие цепи кодируются геном вариабельной области с NН2-конца (примерно 110 аминокислот в длину) и геном константной области каппа или лямбда с COOH-конца. Тяжелые цепи сходным образом кодируются геном вариабельной области (примерно 116 аминокислот в длину) и одним из других генов константной области.
Основную структурную единицу антитела обычно представляет тетрамер, который состоит из двух идентичных пар цепей иммуноглобулина, каждая пара содержит одну легкую и одну тяжелую цепь. В каждой паре вариабельные области легкой и тяжелой цепей связываются с антигеном, и константные области опосредуют эффекторные функции. Иммуноглобулины также существуют в виде множества других форм, включая, например, Fv, Fab и (Fab')2, а также в виде бифункциональных гибридных антител и единичных цепей (например, Lanzavecchia с соавт., Eur. J. Immunol. 17, 1987, с. 105; Huston с соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85, 1988, cc. 5879-5883; Bird с соавт., Science 242, 1988, cc. 423-426; Hood с соавт., Immunology, Benjamin, N.Y., 2nd ed., 1984; Hunkapiller and Hood, Nature 323, 1986, cc. 15-16). Вариабельная область легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина включает каркасную область, прерываемую тремя гипервариабельными областями, также называемыми областями, определяющими комплементарность (complementary determining region - CDR) (см. Sequences of Proteins of Immunological Interest, E. Kabat с соавт., U.S. Department of Health and Human Services, 1983). Выше отмечено, что CDR главным образом ответственны за связывание с эпитопом антигена. Иммунным комплексом является антитело, например, моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело человека, или функциональный фрагмент антитела, специфически связывающиеся с антигеном.
Химерными являются антитела, в которых сконструированы гены легких и тяжелых цепей, обычно путем генной инженерии, от генов вариабельных и константных областей иммуноглобулинов, принадлежащих разным видам. Например, вариабельные сегменты генов моноклонального антитела мыши могут быть соединены с константными сегментами человека, например, каппа и гамма 1 или гамма 3. В одном из примеров терапевтическое химерное антитело является гибридным белком, состоящим из вариабельного или антиген-связывающего домена от антитела мыши и константного или эффекторного домена от антитела человека, хотя могут быть использованы и другие виды млекопитающих или вариабельная область может быть получена молекулярными методами. Методы получения химерных антител известны в данной области, например, см. US 5807715. Понятие «гуманизированный» иммуноглобулин означает иммуноглобулин, включающий каркасную область человека и одну или несколько областей, определяющих комплементарность (CDR), производных не от иммуноглобулина человека (производных, например, от мыши, крысы или синтетическую область/области). Иммуноглобулин, не являющийся иммуноглобулином человека, который служит источником CDR, называют «донором», а иммуноглобулин человека, который служит источником каркасной области, называют «акцептором». В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения все CDR в гуманизированном иммуноглобулине происходят от иммуноглобулина-донора. Не требуется, чтобы присутствовали константные области, но если они есть, они должны быть в основном идентичны константным областям иммуноглобулина человека, например, идентичность должна составлять по меньшей мере примерно 85-90%, например, примерно 95% или более. Следовательно, все части гуманизированного иммуноглобулина, возможно за исключением CDR, в значительной степени идентичны соответствующим частям последовательностей природных иммуноглобулинов человека. Понятие «гуманизированное антитело» означает антитело, включающее гуманизированную легкую цепь и гуманизированную тяжелую цепь иммуноглобулина. Гуманизированное антитело связывается с тем же антигеном, что и антитело-донор, от которого происходят CDR. Акцепторный каркасный участок гуманизированного иммуноглобулина или антитела может иметь ограниченное число замещений аминокислотами, взятыми от каркасного участка донора. Гуманизированные или иные моноклональные антитела могут иметь дополнительные консервативные аминокислотные замещения, которые не оказывают значительного влияния на связывание антигена или иные функции иммуноглобулина. Примерами консервативных замещений являются, например, gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gin; ser, thr; lys, arg; и phe, tyr. Гуманизированные иммуноглобулины могут быть сконструированы методами генетической инженерии (см., например, US 5585089). Антителом человека является антитело, в котором гены легкой и тяжелой цепей происходят от человека. Антитела человека могут быть выработаны методами, известными в данной области. Антитела человека могут быть получены путем иммортализации В-клеток человека, секретирующих требуемое антитело. Иммортализация может достигаться, например, инфицированием вирусом ЕВУ или гибридизацией В-клеток человека с миеломой или гибридомой для получения клеток триом. Антитела человека также могут быть получены методом фагового дисплея (см., например, WO 91/17271, WO 92/001047, WO 92/20791) или выбраны из библиотеки комбинаторных моноклональных антител человека (см. вебсайт фирмы Morphosys). Антитела человека также могут быть получены за счет использования трансгенных животных, несущих ген иммуноглобулина человека (см., например, WO 93/12227, WO 91/10741).
Таким образом, антитело может иметь конфигурации, известные в данной области. К примерам относятся антитела человека, моноклональные антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, CDR-трансплантированные антитела. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитела по настоящему изобретению являются рекомбинантно полученными антителами, например, IgG, типичным иммуноглобулином полной длины, или фрагментами антител, содержащими по меньшей мере F-вариабельный домен тяжелой и/или легкой цепи, например, химически соединенные антитела (связывание фрагментов антител), включая, но ими не ограничиваясь, Fab-фрагменты, включая минитела Fab, одноцепочечное Fab-антитело, моновалентное Fab-антитело с эпитопными метками, например, Fab-V5Sx2; бивалентное Fab (мини-антитело), димеризованное с доменом СНЗ; бивалентное Fab или мультивалентное Fab, например, сформированное путем мультимеризации с помощью гетерологичного домена, например, путем димеризации dHLX-доменов, например, Fab-dHLX-FSx2; F(ab')2-фрагменты, scFv-фрагменты, мультимеризованные мультивалентные и/или мультиспецифичные scFv-фрагменты, бивалентные и/или биспецифичные диантитела, BITE® (биспецифичный активатор Т-клеток), трифункциональные антитела, поливалентные антитела, например, от класса, не являющегося классом G; однодоменные антитела, например, напотела, производные от иммуноглобулинов семейства верблюдовых или рыб, и многие другие.
Помимо антител в данной области известны другие биополимерные каркасы для комплектования целевой молекулы, их применяют для получения биополимеров с высокой специфичностью к мишени. Примерами являются аптамеры, шпигельмеры, антикалины и конотоксины.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения конфигурация антитела выбрана из группы, включающей Fv-фрагмент, scFv-фрагмент, Fab-фрагмент, scFab-фрагмент, (Fab) 2-фрагмент и гибридный белок scFv-Fc. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения конфигурация антитела выбрана из группы, включающей scFab-фрагмент, Fab-фрагмент, scFv-фрагмент и их биодоступные оптимизированные конъюгаты, например, ПЭГелированные фрагменты. Одной из наиболее предпочтительных конфигураций является конфигурация scFab.
Молекулами-каркасами помимо Ig могут быть белки, которые можно использовать в качестве миметиков антител, поскольку они способны связываться с лигандами или антигенами. Молекулы-каркасы, не являющиеся Ig, могут быть выбраны из группы, включающей молекулы-каркасы на основе тетранектина (см., например, US 2010/0028995), фибронектина (см., например, ЕР 1266 025), липокалина (см., например, WO 2011/154420), убиквитина (см., например, WO 2011/073214), переносящих молекул-каркасов (см., например, US 2004/0023334), белка А (см., например, ЕР 2231860), повторов анкирина (см., например, WO 2010/060748), микробелков, предпочтительно микробелков, формирующих цистиновый узел (см., например, ЕР 2314308), домена Fyn SH3 (см., например, WO 2011/023685), домена EGFR-A (см., например, WO 2005/040229) и домена Куница (см., например, ЕР 1941867).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения антитела по настоящему изобретению могут быть получены следующим образом:
Мышь Balb/c иммунизируют 100 мкг конъюгата пептида-БСА в 0 и 14 сутки (эмульгированного в 100 мкл полного адъюванта Фрейнда) и 50 мкг на 21 и 28 сутки (в 100 мкл неполного адъюванта Фрейнда). За трое суток до проведения эксперимента по гибрдизации животное получает 50 мкг конъюгата, растворенного в 100 мкл физиологического раствора, введенного в виде одной внутрибрюшинной и одной внутривенной инъекции.
Спленоциты от иммунизированной мыши и клетки миеломы линии SP2/0 гибридизируют с 1 мл 50% полиэтиленгликоля в течение 30 сек при 37°C. После промывания клетки высевают в 96-луночный планшет для культуры клеток. Гибридные клоны отбирают по росту в среде HAT [культуральной среде RPMI 1640, обогащенной 20% фетальной сыворотки теленка и добавкой НАТ-Supplement]. Через две недели среду HAT заменяют средой НТ за три пассажа с последующим возвратом к нормальной среде для культуры клеток.
Через три недели после гибридизации супернатанты культур клеток в первую очередь подвергают скринингу на IgG-антитела, специфичные к антигену. Положительные микрокультуры переносят в 24-луночные планшеты для размножения. После повторной проверки отобранные культуры клонируют и реклонируют, используя метод серийных разведений, определяют изотипы (см. также Lane R.D.J. Immunol. Meth. 81, 1985, cc. 223-228; Ziegler В. с соавт. Horm. Metab. Res. 28, 1996, cc. 11-15).
Антитела могут быть получены методом фагового дисплея по следующей процедуре:
Библиотеки HAL7/8 генов антител человека, не подвергнутых какому-либо воздействию, применяют для выделения рекомбинантных одноцепочечных F-вариабельных доменов (scFv) против пептида адреномедуллина. Библиотеки генов антител подвергают скринингу методом пэннинга с применением пептидов, содержащих биотиновую метку, связанную через два разных спейсера с пептидной последовательностью адреномедуллина. Комбинацию циклов пэннинга, используя неспецифически связанный антиген и стрептавидин-связанный антиген, применяют для минимизации фонового воздействия неспецифических связующих. Элюированные фаги с третьего цикла пэннинга применяют для получения штаммов Е. coli, экспрессирующих моноклональные scFv. Супернатанты культур таких клоповых штаммов непосредственно используют для ELISA тестирования на антиген (см. М. Hust с соавт. Journal of Biotechnology 152, 2011, cc. 159-170; M. с соавт. PLoS One 4, 2009, с. е6625).
Гуманизирование антител мышей могут проводить по описанной ниже процедуре.
Для гуманизации антитела, происходящего от мыши, последовательность антитела анализируют для определения структурного взаимодействия каркасных участков (framework regions - FR) с областями, определяющими комплементарность (complementary determining region - CDR), и антигена.
Основываясь на структурном моделировании, выбирают необходимый участок FR, происходящий от человека, и последовательности CDR мыши трансплантируют в FR человека. Вариации аминокислотной последовательности CDR или FR могут быть интродуцированы для восстановления структурных взаимодействий, которые были нарушены в результате переключения на последовательности FR других видов. Восстановление структурных взаимодействий может быть достигнуто случайным подходом, используя библиотеки фагового дисплея, или направленным подходом с помощью молекулярного моделирования (см. J.C. Almagro, J. Fransson. Front Biosci. 2008 Jan 1(13), 2008, cc. 1619-33).
Другим объектом настоящего изобретения является сосудосуживающий агент для лечения субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного субъекта выявляют одним из описанных выше методов in vitro, включая все варианты осуществления указанных методов in vitro.
Описание фигур
Фиг. 1. Типичная кривая АДМ дозы/сигнала. Кривая АДМ дозы/сигнала в присутствии 100 мкг/мл антитела NT-H.
Фиг. 2. Прогнозирование больничной летальности по данным логистической регрессии.
Фиг. 3. Прогнозирование больничной летальности - ADM не зависит от APACHE и предоставляет дополнительную прогностическую информацию.
Фиг. 4. Среднее артериальное давление, зависящее от уровней ADM в плазме. Диаграмма разброса данных и коэффициент корреляции показаны для величин, полученных от пациентов при госпитализации. Статистическая значимость р<0,0001.
Фиг. 5. Концентрации адреномедуллина при госпитализации у пациентов, нуждающихся в лечении сосудосуживающим агентом, по сравнению с пациентами, не требующими лечения сосудосуживающим агентом. Различие между двумя группами статистически значимо (р<0,0001).
Фиг. 6. Концентрации ADM при госпитализации у пациентов, которых лечили сосудосуживающими агентами на момент госпитализации («на ADM»), кому не требуется лечение сосудосуживающими агентами в течение первых четырех суток после госпитализации («никогда»), и которым требуется лечение сосудосуживающим агентом в первые четверо суток после госпитализации, но не в день госпитализации («позднее»). На графике указан нормальный диапазон концентраций ADM.
Фиг. 7. Анализ характеристической кривой (Receiver Operating Characteristic - ROC) для концентраций ADM у пациентов с острой сердечной недостаточностью, которым требуется (чувствительность) и не требуется (специфичность) лечение сосудосуживающими агентами.
Пример 1. Выработка антител и определение у них констант сродства
В настоящем изобретении получают моноклональные антитела мыши путем связывания с N-концевой, средней и C-концевой частями ADM и определяют у них константы сродства (табл. 1).
Пептиды для иммунизации
Используют пептиды фирмы JPT Peptide Technologies GmbH (Берлин, Германия). Пептиды соединяют с БСА, используя метод образования поперечных связей Sulfo-SMCC. Процедуру образования поперечных связей проводят по инструкциям производителя (фирма Thermo Fisher / Pierce).
Антитела мышей получают следующим методом: мышь A Balb/c иммунизируют 100 мкг конъюгата пептида-БСА в 0 и 14 сутки (эмульгированного в 100 мкл полного адъюванта Фрейнда) и 50 мкг на 21 и 28 сутки (в 100 мкл неполного адъюванта Фрейнда). За трое суток до проведения эксперимента по гибридизации животное получает 50 мкг конъюгата, растворенного в 100 мкл физиологического раствора, которое вводят в виде одной внутрибрюшинной и одной внутривенной инъекции.
Спленоциты от иммунизированных мышей и клетки миеломы линии SP2/0 гибридизируют с 1 мл 50% полиэтиленгликоля в течение 30 сек при 37°C. После промывания клетки высевают в 96-луночные планшеты для культур клеток. Гибридные клоны отбирают путем выращивания в среде HAT [культуральная среда RPMI 1640, обогащенная 20% фетальной сыворотки теленка и НАТ-добавкой]. Через 2 недели среду HAT заменяют средой НТ на протяжении трех пересевов с последующим возвращением к нормальной среде для культуры клеток.
Супернатанты культур клеток в первую очередь исследуют на наличие специфичных к антигену IgG антител через три недели после гибридизации. Микрокультуры с обнаруженным положительным результатом переносят в 24-луночные планшеты для размножения. После повторного исследования отобранные культуры клонируют и реклонируют, используя метод серийных разведений, и определяют изотипы. (R.D. Lane J. Immunol. Meth., 81, 1985, cc. 223-228; В. Ziegler с соавт. Horm. Metab. Res., 28, 1996, cc. 11-15).
Получение моноклонального антитела
Антитела получают стандартными методами получения антител (Marx с соавт., ATLA, 25, 1997, с. 121) и очищают с помощью белка А. Чистота антител составляет >95% по данным SDS гель-электрофореза.
Константы сродства
Для определения сродства антител с адреномедуллином определяют кинетику связывания адреномедуллина с иммобилизованным антителом с помощью поверхностного плазмонного резонанса без метки, используя систему Biacore 2000 (GE Healthcare Europe GmbH, Фрайбург, Германия). Обратимую иммобилизацию антител проводят, используя антитело против Fc-фрагмента мыши, связанное ковалентно с высокой плотностью с поверхностью сенсора СМ5 по инструкциям производителя (mouse antibody capture kit; фирма GE Healthcare).
Процедура нанесения метки (индикатора): 100 мкг (100 мкл) антитела (1 мг/мл в физиологическом растворе, рН 7,4,) смешивают с 10 мкл NHS-сложного эфира акридиния (1 мг/мл в ацетонитрилле, In Vent GmbH, Германия) [57] и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. СТ-Н с меткой очищают гель-фильтрационной ВЭЖХ на колонке Bio-Sil® SEC 400-5 (фирма Bio-Rad Laboratories, Inc., США). Очищенное меченое антитело разводят (в 300 ммоль/л фосфата калия, 100 ммоль/л NaCl, 10 ммоль/л Na-EDTA, 5 г/л Bovine Serum Albumin, pH 7,0). Итоговая концентрация составляет примерно 800000 относительных световых единиц (ОСЕ) меченого соединения (примерно 20 нг меченого антитела) на 200 мкл. Хемилюминесценцию сложного эфира акридиния измеряют с помощью люминометра AutoLumat LB 953 (фирма Berthold Technologies GmbH & Co. KG).
Твердая фаза: в пробирки из полистирола (фирма Greiner Bio-One International AG, Австрия) наносят в течение 18 ч при комнатной температуре антитело (1,5 мкг антитела/0,3 мл 100 ммоль/л NaCl, 50 ммоль/л TRIS/HCl, рН 7,8). После блокирования с помощью 5% бычьего сывороточного альбумина, пробирки промывают ФСБ8, рН 7,4, и высушивают в вакууме.
Калибраторы: Синтетический ADM человека (фирма Bachem, Швейцария) линейно разводят, используя 50 мМ Tris/HCl, 250 мМ NaCl, 0,2% Triton Х-100, 0,5% БСА, 20 таблеток/л Protease cOmplete Protease Inhibitor Cocktail Tablets (фирма Roche AG); pH 7,8. Калибраторы хранят при -20°C до применения.
Пример 2. Определение комбинации антител, которая дает высокое соотношение сигнала/шума
ADM иммуноанализ: 50 мкл образца (или калибратора) вносят пипеткой в пробирки с покрытием, затем добавляют меченое второе антитело (200 мкл), пробирки инкубируют в течение 2 ч при комнатной температуре. Несвязанный маркер удаляют путем пятикратного промывания (каждый раз по 1 мл) раствором для промывания (20 мМ ФСБ, рН 7.4, 0.1% Triton Х-100).
Хемилюминесценцию, связанную в пробирке, измеряют с помощью люминометра AutoLumat LB 953.
Все антитела, которые используют в иммуноферментном сэндвич-анализе, представлены в виде пробирки с покрытием и меченого антитела, которые объединены в приведенных ниже вариациях (табл. 2):
Инкубирование осуществляют согласно описанию hADM-иммуноисследования. Результаты приводят в виде соотношения специфического сигнала (при 10 нг/мл ADM) /сигналу среды (образец без ADM).
Неожиданно было установлено, что комбинация MR-ADM и CT-ADM обладает наивысшим соотношением сигнал/шум.
Затем полученную комбинацию с антителом используют для дальнейших исследований. Используют MR-ADM в качестве антитела твердой фазы и CT-ADM в качестве меченого антитела. Типичная кривая доза/сигнал показана на фиг. 1. Аналитическая чувствительность метода составляет 2 нг ADM/мл (в среднем 10 экспериментов, образец без ADM+2SD).
Пример 3. Стабильность адреномедуллина человека
ADM человека разводят в цитратной плазме человека (n=5, итоговая концентрация 10 нг ADM/мл) и инкубируют при 24°C. В определенные сроки берут аликвоты и замораживают при -20°C. Сразу же после оттаивания образцы hADM исследуют количественно, используя описанный выше hADM-иммуноанализ.
Неожиданно с помощью комбинаций MR-ADM и CT-ADM в иммуноферментном сэндвич-анализе было обнаружено, что стабильность вещества до начала проведения анализа высока (средняя потеря иммунной реактивности составляет всего лишь 0,9%/ч). Напротив, при использовании других методов анализа период полураспада в плазме составляет только 22 мин (Hinson 2000). Поскольку время от отбора образца до анализа в клинической лаборатории составляет менее 2 ч, используемый метод обнаружения ADM пригоден для рутинной диагностики. Следует отметить ценную особенность: какие-либо специфические добавки к образцам (например, апротинин, (20)) не требуются для достижения приемлемой стабильности ADM-иммунной реактивности.
Пример 4. Воспроизводимость калибратора-препаратов.
Установлено, что полученные результаты отличаются большой вариабельностью при подготовке калибраторов для ADM-анализов (средний коэффициент вариации (СУ) 8,5%, см. табл. 4). Это может быть связано с высокой адсорбцией hADM к поверхности пластика или стекла (см. также [58]). Этот эффект незначительно снижают добавлением детергентов (до 1% Triton X 100 или 1% Tween 20), белка (до 5% БСА), за счет высокой ионной силы (до 1М NaCl) или комбинаций перечисленных веществ. Неожиданно было установлено, что если избыток антитела против ADM (10 мкг/мл) вносят в буфер для разбавления калибратора, восстановление и воспроизводимость калибратора-препаратов ADM-анализа существенно улучшается до <1% коэффициента вариации (CV) при подготовке (табл. 4).
Ценное свойство заключается в том, что наличие N-концевых антител не влияет на ADM-сигнал, вырабатываемый комбинацией MR- и С-концевых антител (фиг. 1).
Вариации при подготовке калибраторов.
Калибраторы ADM-анализа получают согласно описанному выше с наличием 10 мкг/мл NT-ADM-антитела или без него. Коэффициенты вариации получают от пяти независимых циклов получения. Калибраторы измеряют, используя ADM-анализ, описанный выше.
Для всех последующих исследований применяют анализ ADM, основанный на калибраторах, приготовленных в присутствии 10 мкг/мл NT-ADM-антитела и 10 мкг/мл NT-ADM-антитела в качестве добавки к индикаторному буферу.
Пример 5. Чувствительность
Целью исследования анализа является полное изучение концентраций ADM у здоровых субъектов.
Концентрация ADM у здоровых субъектов:
Здоровых субъектов (n=100, средний возраст 56 лет) исследуют, используя ADM-анализ. Срединная величина составляет 24,7 пг/мл, наименьшая величина 11 пг/мл и 99й процентиль 43 пг/мл. Поскольку чувствительность метода составляет 2 пг/мл, 100% здоровых субъектов исследуют, используя описанный ADM-анализ.
Применяют коммерческий метод для измерения MR-proADM (BRAHMS MR-proADM KRYPTOR) (фирма BRAHMS GmbH, Хеннигсдорф, Германия) (ClinBiochem. 42(7-8), 2009, cc. 725-728).
Пример 6. Клиническое исследование
Пациентов отделения интенсивной терапии (101 человек), у которых определяют развитие сепсиса (R.P. Dellinger и др. Critical care medicine, 36(1), 2008, cc. 296-327), госпитализируют (средняя продолжительность госпитализация 5 суток) и подвергают стандартному лечению. EDTA-плазму получают через 1 сутки (после осмотра в отделении интенсивной терапии) и по одному образцу берут ежедневно на протяжении госпитализации. Время для замораживания образцов для последующего ADM-измерения составляет менее 4 ч.
Характеристики пациентов суммированы в табл. 5.
IQR (interquartile range) - межквартильный диапазон
26,7% пациентов умерло во время пребывания в госпитале, и они были учтены в качестве не отвечающих на лечение, 73,3% всех пациентов пережили сепсис и были учтены в качестве отвечающих на лечение.
У 66% всех пациентов с сепсисом показатель ADM отличается от нормы и составляет >43 пг/мл (99й процентиль), свидетельствуя, что ADM не является маркером инфекции.
Результаты клинических исследований
Первоначальный показатель ADM является высоко прогностическим признаком.
Сравнивают первоначальный показатель ADM с госпитальной смертностью и сопоставляют ADM по шкале оценки тяжести состояния APACHE 2. ADM является в высокой степени прогностическим признаком для оценки исхода сепсиса (см. фиг. 2) и данный показатель сопоставим с оценкой APACHE 2. Если ADM и APACHE 2 объединяют, получается существенная дополнительная информация (фиг. 3).
Мониторинг ADM при лечении
Пациентов лечат по стандартным методикам (табл. 5). Среднее время госпитализации составляет 5 суток. В госпитале ADM измеряют ежедневно (первые сутки = день госпитализации) и сопоставляют с показателем смертности в госпитале (табл. 6). За время пребывания в клинике ADM меняется, и изменение со временем улучшает прогностическое значение на 52% от первоначального значения Chi2 19,2 до 29,2 на пятые сутки.
Применение простой модели порогового значения 70 пг/мл ADM показывает 68% риск смерти для пациентов, у которых исходно были концентрации ADM>70 пг/мл и сохранялись на протяжении всего срока пребывания в клинике >70 пг/мл (пациент не отвечает на лечение). Среди пациентов, у которых все время величина ADM<70 пг/мл или меняется от >70 пг/мл до <70 пг/мл, смертность составляет только 11% (эффективное лечение/у пациента успешный отклик на лечение), а у пациентов, имеющих величины ADM>70 пг/мл, которые снижаются на протяжении времени лечения в клинике до величин <70 пг/мл, смертность составляет 0%. Не было пациентов, у которых показатель менялся бы с <70 пг/мл до >70 пг/мл на протяжении времени лечения в клинике. Среднее время, требуемое для получения информации, отвечает ли пациент на лечение или не отвечает, для всех пациентов составляет примерно 1 сутки. Для пациентов с показателем >70 пг/мл требуется примерно 2 суток, чтобы понять, является ли лечение успешным по ADM.
Связь ADM в плазме со средним артериальным давлением (MAP) и потребностью во введении сосудосуживающего агента
Была установлена корреляция концентраций ADM со средним артериальным давлением (фиг. 4) и с потребностью в терапии сосудосуживающим агентом для лечения/предупреждения шока (фиг. 5).
Также установлена временная связь концентраций ADM с потребностью в терапии сосудосуживающим агентом (фиг. 6): из 101 исследованного пациента 18 требовали терапии сосудосуживающим агентом уже при госпитализации; срединная концентрация ADM для этих пациентов при госпитализации составляет 129 пг/мл. У пациентов, не нуждавшихся в терапии сосудосуживающим агентом на протяжении первых четырех суток пребывания в клинике после госпитализации (n=79), срединная концентрация ADM составляет 48,5 пг/мл. Важно отметить, что пациенты, нуждающиеся в терапии сосудосуживающим агентом во время пребывания в клинике позднее, чем при госпитализации, имели повышенные уровни ADM уже при госпитализации (срединное значение 87,2 пг/мл), например: повышение концентрации ADM в плазме предшествовало терапии сосудосуживающим агентом.
В образцах плазмы также измеряют MR-proADM - стабильный фрагмент молекулы-предшественника ADM. MR-proADM рассматривают в качестве суррогатного маркера высвобождения зрелой формы ADM (J. Struck и др., Peptides, 25(8), 2004, cc. 1369-1372; N.G. Morgenthaler и др., Clinical chemistry 51(10), 2005, cc. 1823-1829). Коммерческий MR-proADM анализ осуществляют (BRAHMS MR-proADM KRYPTOR) по инструкциям производителя (BRAHMS GmbH, Хеннигсдорф, Германия). Срединные уровни в день госпитализации составляют 0,63 нмоль/л для пациентов, которые не нуждались в терапии сосудосуживающим агентом, и 1,57 нмоль/л для пациентов, нуждающихся в терапии сосудосуживающим агентом. Концентрации MR-proADM существенно коррелируют с концентрациями ADM (r=0,79).
Пример 7. Метод порогового значения для диагностики и прогнозирования потребности во введении сосудосуживающего агента
Характеристики пациентов приведены в примере 6. Исследование проводят, основываясь на результатах первого анализа крови, взятого при угрозе сепсиса у пациента.
Выбрано пороговое значение 70 пг/мл; величина <70 пг/мл свидетельствует о низком риске необходимости применения сосудосуживающего агента, а величина >70 пг/мл свидетельствует о высоком риске необходимости применения сосудосуживающего агента. В группе 1 находятся пациенты, которым не требуется применение сосудосуживающего агента (МАР<=66 mm Hg) и которые не получают сосудосуживающих агентов ни при первичном осмотре, ни за 4 последующих суток. В группе 2 находятся пациенты, которым требуются сосудосуживающие агенты (MAP<=66 mm Hg) или которые получают сосудосуживающие агенты при первичном осмотре. В группе 3 находятся пациенты, которым не требуются сосудосуживающие агенты и которые не получают сосудосуживающие агенты при первичном осмотре, но потребность в сосудосуживающих агентах возникает в последующие 4 суток. Пациентов (n=2) с недостоверной информацией по лечению сосудосуживающим агентом исключают.
Используя простой метод порогового значения с величиной отсечения 70 пг/мл, выявили 89,5% от общего числа пациентов, нуждающихся в терапии сосудосуживающими агентами при осмотре в отделении интенсивной терапии, руководствуясь показателем ADM (группа 2). 20 пациентов с показателем >70 пг/мл не нуждались в сосудосуживающих агентах при осмотре (группа 1/3), у 15 (75%) не возникает потребность в применении сосудосуживающих агентов на протяжении последующих 4 суток и у 5 (25%) пациентов возникла потребность в применении сосудосуживающих агентов на протяжении последующих 4 суток. Напротив, если ADM составляет <70 пг/мл у пациентов, не имеющих при осмотре потребности в сосудосуживающих агентах (группа 1/3), у 56 пациентов (96,5%) не возникает потребность в применении сосудосуживающих агентов на протяжении последующих 4 суток и только у 2 (3,5%) возникла потребность в применении сосудосуживающих агентов. Риск возникновения потребности в сосудосуживающих агентах в последующие 4 суток у пациентов с величиной ADM выше 70 пг/мл, в 7,1 раза выше, чем для пациентов с уровнями ADM ниже 70 пг/мл (25% против 3,5%).
Поскольку всегда проводят мониторинг кровяного давления, с клинической точки зрения пациентов с высоким содержанием ADM (>70 пг /мл) без потребности в сосудосуживающем агенте при осмотре следует лечить сосудосуживающим агентом путем адаптации точек принятия решения от величины MAP<66 mm Hg до, например, <75 mm Hg для более ранней поддержке кровообращения для защиты пациента от низкого кровяного давления, связанного с дисфункций органов и последующей высокой смертностью. Руководствуясь этим правилом для пациентов с >70 пг/мл ADM и проводя лечение сосудосуживающими агентами при MAP<=75 mm Hg, пациентов следует начинать лечить в среднем на 1,6 суток раньше, чем по стандартной схеме лечения (<=66 mm Hg).
Близкие результаты получают, когда MR-proADM с пороговым значением 0,78 нмоль/л применяют в анализе вместо ADM.
Пример 8. Клиническое исследование/острая сердечная недостаточность
Исследуемыми пациентами являются пациенты, поступившие в отделение неотложной помощи с острой сердечной недостаточностью. Характеристики пациентов: средний возраст ± SD составляет 74,3±12,2; n=1022 (643 мужчины, 63%); ранее имели ишемическое заболевание сердца - 31%, гипертонию - 58%, диабет - 33%, сердечную недостаточность - 35%. Пациентов наблюдают в течение 2 лет. Образцы плазмы для измерения ADM и других соединений получают в день госпитализации.
Анализ Сох показывает, что ADM является независимым прогностическим фактором смерти в течение 1 года (табл. 9) и смерти в течение 1 года/госпитализации из-за острой декомпенсированной сердечной недостаточности (табл. 10). Логистический регрессионный анализ показывает, что ADM является независимым прогностическим фактором госпитальной смерти (табл. 11).
У пациентов, нуждающихся в терапии сосудосуживающими агентами (инотропами), концентрации ADM существенно выше, чем у всех других пациентов (область под кривой - 0,75; р<0001; фиг. 7).
Литература
1. K. Kitamura с соавт. Adrenomedullin: A Novel Hypotensive Peptide Isolated From Human Pheochromocytoma. Biochemical and Biophysical Research Communications, 192(2), 1993, cc. 553-560.
2. Adrenomedullin: from a pheochromocytoma to the eyes. Под ред. K. Takahashi. Peptides, 22, 2001, с. 1691.
3. Т. Eto. A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides. Peptides, 22, 2001, cc. 1693-1711.
4. Hinson с соавт. Adrenomedullin, a Multifunctional Regulatory Peptide. Endocrine Reviews. 21(2), 2000, cc. 138-167.
5. K. Kitamura с соавт. The intermediate form of glycine-extended adrenomedullin is the major circulating molecular form in human plasma. Biochem. Biophys. Res. Commun., 244(2), 1988, cc. 551-555. Abstract Only.
6. R. Pio с соавт. Complement Factor H is a Serum-binding Protein for Adrenomedulli, and the Resulting Complex Modulates the Bioactivities of Both Partners. The Journal of Biological Chemistry, 276(15), 2001, cc. 12292-12300.
7. K. Kuwasako с соавт. Purification and characterization of PAMP-12 (PAMP-20) in porcine adrenal medulla as a major endogenous biologically active peptide. FEBS Lett, 414(1), 1997, cc. 105-110. Abstract Only.
8. K. Kuwasaki с соавт. Increased plasma proadrenomedullin N-terminal 20 peptide in patients with essential hypertension. Ann. Clin. Biochem., 36 (часть 5), 1999, cc. 622-628. Abstract Only.
9. T. Tsuruda с соавт. Secretion of proadrenomedullin N-terminal20 peptide from cultured neonatal rat cardiac cells. Life Sci., 69(2), 2001, cc. 239-245. Abstract Only.
10. EP 0622458 A2, Shionogi & Co. Ltd.; Kangawa, Kenji
11. Hirata с соавт. Increased Circulating Adrenomedullin, a Novel Vasodilatory Peptide, in Sepsis. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 81(4), 1996, cc. 1449-1453.
12. K. Ehlenz с соавт. High levels of circulating adrenomedullin in severe illness: Correlation with C-reactive protein and evidence against the adrenal medulla as site of origin. ExpClinEndocrinol Diabetes, 105, 1997, cc 156-162.
13. Y. Tomoda с соавт. Regulation of adrenomedullin secretion from cultured cells. Peptides, 22, 2001, cc. 1783-1794.
14. S. Ueda с соавт. Increased Plasma Levels of Adrenomedullin in Patients with Systemic Inflammatory Response Syndrome. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 160, 1999, cc. 132-136.
15. P. Wang. Andrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis. Peptides, 22, 2001, cc. 1835-1840.
16. P. Wang. Adrenomedullin in sepsis and septic shock. Shock, 10(5), 1998, cc. 383-384.
17. P. Wang, Z.F. Ba, W.G. Cioffi, K.I. Bland, I.H. Chaudry. The pivotal role of adrenomedullin in producing hyperdynamic circulation during the early stage of sepsis. Archives of surgery, 133(12), 1998, cc. 1298-1304.
18. C. Parlapiano с соавт. Adrenomedulin assay and its clinical significance. European Review for Medical and Pharmacological Sciences, 3, 1999; cc. 53-61.
19. K. Nishio, Y. Akai, Y. Murao, N. Doi, S. Ueda, H. Tabuse, S. Miyamoto, K. Dohi, N. Minamino, H. Shoji с соавт.Increased plasma concentrations of adrenomedullin correlate with relaxation of vascular tone in patients with septic shock. Critical care medicine, 25(6), 1997, cc. 953-957.
20. K. Krzeminski, T. Mikulski, B. Kruk, K. Nazar. Plasma adrenomedullin response to maximal exercise in healthy subjects. Journal of physiology and pharmacology: an official journal of the Polish Physiological Society, 54(2), 2003, cc. 225-232.
21. R.P. Bellinger, M.M. Levy, A. Rhodes, D. Annane, H. Gerlach, S.M. Opal, J.E. Sevransky, C.L. Sprung, I.S. Douglas, R. Jaeschke с соавт. Surviving sepsis campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock: 2012. Critical care medicine, 41(2), 2013, cc. 580-637.
22. D.C. Angus, W.T. Linde-Zwirble, J. Lidicker, G. Clermont, J. Carcillo, M.R. Pinsky. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Critical care medicine, 29(7), 2001, cc. 1303-1310.
23. G.S. Martin, D.M. Mannino, S. Eaton, M. Moss. The epidemiology of sepsis in the United States from 1979 through 2000. The New England journal of medicine, 348(16), 2003, cc. 1546-1554.
24. A. Melamed, F.J. Sorvillo. The burden of sepsis-associated mortality in the United States from 1999 to 2005: an analysis of multiple-cause-of-death data. Critical care, 13(1), 2009, c. R28.
25. C.B. Overgaard, V. Dzavik. Inotropes and vasopressors: review of physiology and clinical use in cardiovascular disease. Circulation, 118(10), 2008, cc. 1047-1056.
26. M.N. Bangash, M.L. Kong, R.M. Pearse. Use of inotropes and vasopressor agents in critically ill patients. British journal of pharmacology, 165(7), 2012, c. 2015-2033.
27. O.B. Boucheix, S.P. Milano, M. Henriksson, T.M. Reinheimer. Selepressin, a New V1A Receptor Agonist: Hemodynamic Comparison to Vasopressin in Dogs. Shock, 2013.
28. H. Bracht, E. Calzia, M. Georgieff, J. Singer, P. Radermacher, J.A. Russell. Inotropes and vasopressors: more than haemodynamics! British journal of pharmacology, 165(7), 2012, cc. 2009-2011.
29. M. Singer, F. Coluzzi, A. O'Brien, L.H. Clapp. Reversal of life-threatening, drug-related potassium-channel syndrome by glibenclamide. Lancet, 365(9474), 2005, cc. 1873-1875.
30. S. Warrillow, M. Egi, R. Bellomo. Randomized, double-blind, placebo-controlled crossover pilot study of a potassium channel blocker in patients with septic shock. Critical care medicine, 34(4), 2006, cc. 980-985.
31. J. Bakker, R. Grover, A. McLuckie, L. Holzapfel, J. Andersson, R. Lodato, D. Watson, S. Grossman, J. Donaldson, J. Takala с соавт. Administration of the nitric oxide synthase inhibitor NG-methyl-L-arginine hydrochloride (546C88) by intravenous infusion for up to 72 hours can promote the resolution of shock in patients with severe sepsis: results of a randomized, double-blind, placebo-controlled multicenter study (study no. 144-002). Critical care medicine, 32(1), 2004, cc. 1-12.
32. A. Lopez, J.A. Lorente, J. Steingrub, J. Bakker, A. McLuckie, S. Willatts, M. Brockway, A. Anzueto, L. Holzapfel, D. Breen с соавт. Multiple-center, randomized, placebo-controlled, double-blind study of the nitric oxide synthase inhibitor 546C88: effect on survival in patients with septic shock. Critical care medicine, 32(1), 2004, cc. 21-30.
33. M.Y. Kirov, O.V. Evgenov, N.V. Evgenov, E.M. Egorina, M.A. Sovershaev, B. Sveinbjornsson, E.V. Nedashkovsky, L.J. Bjertnaes. Infusion of methylene blue in human septic shock: a pilot, randomized, controlled study. Critical care medicine, 29(10), 2001, cc. 1860-1867.
34. N.P. Juffermans, M.G. Vervloet, C.R. Daemen-Gubbels, J.M. Binnekade, M. de Jong, A.B. Groeneveld. A dose-finding study of methylene blue to inhibit nitric oxide actions in the hemodynamics of human septic shock. Nitric oxide: biology and chemistry / official journal of the Nitric Oxide Society, 22(4), 2010, cc. 275-280.
35. N.G. Morgenthaler, J. Struck, C. Alonso, A. Bergmann. Measurement of midregional proadrenomedullin in plasma with an immunoluminometric assay. Clinical chemistry, 51(10), 2005, cc. 1823-1829.
36. J. Struck, C. Tao, N.G. Morgenthaler, A. Bergmann. Identification of an Adrenomedullin precursor fragment in plasma of sepsis patients. Peptides, 25(8), 2004, cc. 1369-1372.
Claims (25)
1. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока, включающий следующие стадии:
- определение уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта;
- сопоставление указанного уровня с потребностью указанного субъекта в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного пациента выявляют в качестве субъекта, имеющего такую потребность, если уровень proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
2. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1, в котором указанный proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагменты, включающие по меньшей мере 6 аминокислот, выбраны из группы, включающей зрелую форму ADM (SEQ ID No. 4), и/или зрелую форму ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5) и MR-proADM (SEQ ID No. 3) и CT-proADM (SEQ ID No. 6).
3. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4), и/или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), или уровень иммунореактивности MR-proADM (SEQ ID No. 3), или уровень иммунореактивности CT-proADM (SEQ ID No. 6) определяют и соотносят с потребностью указанного пациента в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, причем указанного пациента выявляют в качестве имеющего такую потребность, если уровень иммунореактивности зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4), и/или уровень иммунореактивности зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), или уровень иммунореактивности MR-proADM (SEQ ID No. 3), или уровень иммунореактивности CT-ADM (SEQ ID No. 6) в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
4. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1, в котором уровень pro-ADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов определяют с помощью по меньшей мере одного связующего агента, выбранного из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4) и/или зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность зрелой формы ADM (SEQ ID No. 4) и/или зрелой формы ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5).
5. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1, в котором уровень pro-ADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов определяют с помощью по меньшей мере одного связующего агента, выбранного из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность MR-proADM (SEQ ID No. 3), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность MR-proADM (SEQ ID No. 3).
6. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1, в котором уровень pro-ADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов определяют с помощью по меньшей мере одного связующего агента, выбранного из группы, включающей: связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность CT-proADM (SEQ ID No. 6), и второй связующий агент, который связывается с областью, входящей в последовательность CT-proADM (SEQ ID No. 6).
7. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором применяют метод для определения уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, причем чувствительность указанного метода позволяет определять количество ADM у здоровых субъектов и оно составляет < 70 пг/мл, предпочтительно < 40 пг/мл и более предпочтительно < 10 пг/мл.
8. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по одному из пп. 4-6, в котором указанный связующий агент проявляет связывающее сродство с proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментами, составляющее по меньшей мере 107 М-1.
9. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по одному из пп. 4-6, в котором указанный связующий агент выбран из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, или каркас молекулы, не являющейся Ig, которые связываются с proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментами.
10. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором применяют метод для определения уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, причем такой метод является сэндвич-анализом, предпочтительно полностью автоматизированным.
11. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по одному из пп. 4-6, в котором по меньшей мере один из двух указанных связующих агентов имеет метку для обнаружения.
12. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по одному из пп. 4-6, в котором по меньшей мере один из двух указанных связующих агентов связан с твердой фазой.
13. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором используемое пороговое значение для ADM в плазме составляет 90 пг/мл, предпочтительно 70 пг/мл.
14. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором используемое пороговое значение для MR-proADM (SEQ ID No. 3) в плазме составляет 0,9 нмоль/л, предпочтительно 0,7 нмоль/л.
15. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором указанный образец выбран из группы, включающей цитратную плазму, гепариновую плазму, плазму EDTA, цельную кровь, сыворотку человека.
16. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, в котором указанного пациента выявляют в качестве субъекта, имеющего такую потребность, если уровень proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта выше порогового значения и если среднее артериальное значение у пациента > 66 mm Hg, более предпочтительно > 70 mm Hg.
17. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, включающий следующие стадии:
- определение уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта;
- сопоставление указанного уровня с потребностью указанного субъекта в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, независимо от среднего артериального давления пациента, причем указанного пациента выявляют в качестве субъекта, имеющего такую потребность, если уровень proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
18. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося в жидкостной реанимации или во введении сосудосуживающего агента, или выявления пациента с риском развития физиологического шока по п. 1 или 2, включающий следующие стадии:
- определение уровня proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта;
- сопоставление указанного уровня с потребностью повысить для медицинского вмешательства пороговое значение среднего артериального давления пациента до 70 mm Hg, более предпочтительно до 75 mm Hg, еще более предпочтительно до 80 mm Hg, для инициации жидкостной реанимации или лечения сосудосуживающим агентом, причем указанного пациента выявляют в качестве субъекта, имеющего такую потребность, если уровень proADM (SEQ ID No. 1) и/или его фрагментов, включающих по меньшей мере 6 аминокислот, в жидкости тела указанного субъекта превышает пороговое значение.
19. Способ выявления in vitro субъекта, нуждающегося во введении сосудосуживающего агента, по п. 1 или 2, в котором указанный субъект проявляет следующие признаки или болезненные состояния: состояния физиологического шока, включая септический шок, кардиогенный шок и анафилактический шок; инфекции, сепсис, сердечную недостаточность, сердечно-легочное угнетение, состояние после операции на сердце, инфаркт правого желудочка, мерцательную брадиаритмию, множественные травмы, ожоги, повреждение почек.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13160265.8 | 2013-03-20 | ||
EP13160265 | 2013-03-20 | ||
PCT/EP2014/055554 WO2014147153A1 (en) | 2013-03-20 | 2014-03-19 | Adrenomedullin to guide therapy of blood pressure decline |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015144699A RU2015144699A (ru) | 2017-04-28 |
RU2673455C2 true RU2673455C2 (ru) | 2018-11-27 |
Family
ID=47901848
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015144699A RU2673455C2 (ru) | 2013-03-20 | 2014-03-19 | Адреномедуллин для направленной терапии по снижению кровяного давления |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10598674B2 (ru) |
EP (1) | EP2976646B1 (ru) |
JP (3) | JP6259905B2 (ru) |
CN (2) | CN105102985B (ru) |
CA (1) | CA2907467A1 (ru) |
DK (1) | DK2976646T3 (ru) |
ES (1) | ES2830036T3 (ru) |
HK (2) | HK1216264A1 (ru) |
RU (1) | RU2673455C2 (ru) |
SG (2) | SG10201800309SA (ru) |
WO (1) | WO2014147153A1 (ru) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3006390A1 (en) * | 2015-11-27 | 2017-06-01 | B.R.A.H.M.S Gmbh | Mr-proadm as marker for the extracellular volume status of a subject |
RU2019103403A (ru) * | 2016-07-08 | 2020-08-10 | Сфинготек Гмбх | Адреномедуллин для оценки застоя у индивидуума с острой сердечной недостаточностью |
EP3309550A1 (en) * | 2016-10-12 | 2018-04-18 | sphingotec GmbH | Method for the detection of apolipoprotein e4 |
JP6855118B2 (ja) * | 2017-03-14 | 2021-04-07 | 東ソー株式会社 | 全身状態の良不良を評価するための情報を提供する方法及び測定試薬 |
CN110678550B (zh) * | 2017-03-29 | 2023-11-14 | 国立大学法人宫崎大学 | 长效肾上腺髓质素衍生物 |
CN107194129B (zh) * | 2017-06-30 | 2019-08-06 | 江南大学 | 一种应用乳酸修正的adm1模型分析餐厨垃圾产甲烷的方法 |
EP3438668A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-06 | B.R.A.H.M.S GmbH | Diagnosis and risk stratification of fungal infections |
WO2019053116A1 (en) * | 2017-09-13 | 2019-03-21 | B.R.A.H.M.S Gmbh | FLUID THERAPY GUIDING METHOD BASED ON PROADRENOMEDULLINE |
DK3682241T3 (da) * | 2017-09-13 | 2022-05-16 | Brahms Gmbh | Pct og pro-adm som markører til monitorering af antibiotikabehandling |
WO2019053124A1 (en) * | 2017-09-13 | 2019-03-21 | B.R.A.H.M.S Gmbh | PROADRENOMEDULINE AS AN INDICATOR FOR RENAL REPLACEMENT THERAPY IN SERIOUSLY PATIENT PATIENTS |
EP3971572A1 (en) | 2017-09-13 | 2022-03-23 | B.R.A.H.M.S GmbH | Proadrenomedullin as a marker for abnormal platelet levels |
EP3854414A1 (en) * | 2017-09-25 | 2021-07-28 | AdrenoMed AG | Anti-adrenomedullin (adm) binder for use in therapy or prevention of symptoms of illness |
BR112020005682A2 (pt) * | 2017-10-18 | 2020-10-20 | Adrenomed Ag | monitoração de terapia sob tratamento com um aglutinante de antiadrenomedulina (adm) |
US20210109118A1 (en) * | 2017-12-20 | 2021-04-15 | B.R.A.H.M.S Gmbh | Antibiotic therapy guidance based on pro-adm |
EP3502706A1 (en) * | 2017-12-20 | 2019-06-26 | B.R.A.H.M.S GmbH | Workflow for risk assessment and patient management using procalcitonin and midregional-proadrenomedullin |
EP3578989A1 (en) * | 2018-06-06 | 2019-12-11 | B.R.A.H.M.S GmbH | Pro-adm for prognosis of trauma-related complications in polytrauma patients |
US20220008499A1 (en) * | 2018-11-15 | 2022-01-13 | Ferring B.V. | Compounds, compositions and methods for treating sepsis |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0622458A2 (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Adrenomedullin |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
GB8519425D0 (en) | 1985-08-01 | 1985-09-04 | Ici Plc | Amine production |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
ES2087997T3 (es) | 1990-01-12 | 1996-08-01 | Cell Genesys Inc | Generacion de anticuerpos xenogenicos. |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
JPH06508511A (ja) | 1990-07-10 | 1994-09-29 | ケンブリッジ アンティボディー テクノロジー リミティド | 特異的な結合ペアーの構成員の製造方法 |
AU3328493A (en) | 1991-12-17 | 1993-07-19 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US6818418B1 (en) | 1998-12-10 | 2004-11-16 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
IL160289A0 (en) | 2001-08-30 | 2004-07-25 | Biorexis Pharmaceutical Corp | Modified transferrin fusion proteins |
PT1941867E (pt) | 2002-06-07 | 2012-02-16 | Dyax Corp | Polipeptídeo contendo um domínio kunitz modificado |
DE10316583A1 (de) * | 2003-04-10 | 2004-10-28 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Bestimmung eines midregionalen Proadrenomedullin-Teilpeptids in biologischen Flüssigkeiten zu diagnostischen Zwecken, sowie Immunoassays für die Durchführung einer solchen Bestimmung |
US20050148029A1 (en) * | 2003-09-29 | 2005-07-07 | Biosite, Inc. | Methods and compositions for determining treatment regimens in systemic inflammatory response syndromes |
US20050164301A1 (en) | 2003-10-24 | 2005-07-28 | Avidia Research Institute | LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers |
US20100028995A1 (en) | 2004-02-23 | 2010-02-04 | Anaphore, Inc. | Tetranectin Trimerizing Polypeptides |
CA2580881A1 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-30 | Nascacell Technologies Ag | Use of microproteins as tryptase inhibitors |
CA2624569A1 (en) * | 2005-10-03 | 2007-04-12 | Biosite Incorporated | Methods and compositions for diagnosis and/or prognosis in systemic inflammatory response syndromes |
US8906857B2 (en) * | 2005-12-01 | 2014-12-09 | B.R.A.H.M.S. Gmbh | Methods for the diagnosis and treatment of critically ill patients with endothelin, endothelin agonists and adrenomedullin antagonists |
DE102006060112A1 (de) * | 2006-12-20 | 2008-06-26 | Brahms Aktiengesellschaft | Diagnose und Risikostratifizierung mittels dem neuen Marker CT-proADM |
WO2009009907A1 (en) * | 2007-07-18 | 2009-01-22 | The University Of British Columbia | Use of vasopressin-receptor agonists for the treatment of septic shock |
ES2373832T3 (es) | 2007-12-19 | 2012-02-09 | Affibody Ab | Polipéptido derivado de proteína a y capaz de unirse a pdgf. |
US20090304673A1 (en) * | 2008-06-10 | 2009-12-10 | Bernd Buchberger | Method of Treatment of Inflammatory Diseases |
CA2742241C (en) | 2008-11-03 | 2019-12-10 | Molecular Partners Ag | Binding proteins inhibiting the vegf-a receptor interaction |
MX2012002428A (es) | 2009-08-27 | 2012-09-12 | Covagen Ag | Compuestos de union il-17 y usos medicos de los mismos. |
EP2367843B1 (en) | 2009-12-14 | 2014-10-08 | Scil Proteins GmbH | Modified ubiquitin proteins having a specific binding activity for the extradomain b of fibronectin |
WO2011154420A2 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Pieris Ag | Tear lipocalin muteins binding il-4 r alpha |
RU2013102112A (ru) * | 2010-06-18 | 2014-07-27 | Сезанн С.А.С. | Маркеры для прогнозирования и оценки риска развития обусловленных беременностью гипертензии и преэклампсии |
-
2014
- 2014-03-19 ES ES14711741T patent/ES2830036T3/es active Active
- 2014-03-19 DK DK14711741.0T patent/DK2976646T3/da active
- 2014-03-19 SG SG10201800309SA patent/SG10201800309SA/en unknown
- 2014-03-19 CN CN201480010451.1A patent/CN105102985B/zh active Active
- 2014-03-19 RU RU2015144699A patent/RU2673455C2/ru active
- 2014-03-19 CA CA2907467A patent/CA2907467A1/en active Pending
- 2014-03-19 SG SG11201507774YA patent/SG11201507774YA/en unknown
- 2014-03-19 US US14/778,114 patent/US10598674B2/en active Active
- 2014-03-19 WO PCT/EP2014/055554 patent/WO2014147153A1/en active Application Filing
- 2014-03-19 CN CN201810035720.XA patent/CN108362885B/zh active Active
- 2014-03-19 EP EP14711741.0A patent/EP2976646B1/en active Active
- 2014-03-19 JP JP2016504582A patent/JP6259905B2/ja active Active
-
2016
- 2016-04-13 HK HK16104224.2A patent/HK1216264A1/zh unknown
-
2017
- 2017-12-11 JP JP2017236881A patent/JP2018059947A/ja not_active Ceased
-
2019
- 2019-01-17 HK HK19100872.2A patent/HK1258520A1/zh unknown
- 2019-12-25 JP JP2019234773A patent/JP6820399B2/ja active Active
-
2020
- 2020-02-04 US US16/781,226 patent/US20200249246A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0622458A2 (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Adrenomedullin |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
BELLONI A S; ALBERTIN G; FORNERIS M L; NUSSDORFER G G: "Proadrenomedullin-derived peptides as autocrine-paracrine regulators of cell growth.", HISTOLOGY AND HISTOPATHOLOGY: CELLULAR AND MOLECULAR BIOLOGY, GUTENBERG, ES, vol. 16, no. 4, 1 October 2001 (2001-10-01), ES, pages 1263 - 1274, XP008164054, ISSN: 0213-3911 * |
BELLONI A.S. et al. Proadrenomedullin-derived peptides as autocrine-paracrine regulators of cell growth//Hystology and Histopathology, 2001, vol.16, pp.1263-1274 XP008164054. NANDALUR M.R. et al. Vasopressor use in the critical care unit for treatment of persistent post-carotid artery stent induced hypotension//Neurocritical Care, vol.7, No3, 1 august 2007, pp. 232-237, XP055112961. MAHATA M. et al. Proadrenomedullin N-terminal 20 peptide: minimal active region to regulate nicotinic receptors// Hypertension, vol.32, No5, pp. 907-916, 01.11.1998, abstract. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2016521351A (ja) | 2016-07-21 |
CN108362885A (zh) | 2018-08-03 |
EP2976646A1 (en) | 2016-01-27 |
HK1216264A1 (zh) | 2016-10-28 |
HK1258520A1 (zh) | 2019-11-15 |
WO2014147153A1 (en) | 2014-09-25 |
ES2830036T3 (es) | 2021-06-02 |
JP2018059947A (ja) | 2018-04-12 |
DK2976646T3 (da) | 2020-11-16 |
CN105102985A (zh) | 2015-11-25 |
CN105102985B (zh) | 2018-05-18 |
US20170010286A1 (en) | 2017-01-12 |
US10598674B2 (en) | 2020-03-24 |
JP2020073896A (ja) | 2020-05-14 |
EP2976646B1 (en) | 2020-08-19 |
RU2015144699A (ru) | 2017-04-28 |
SG11201507774YA (en) | 2015-10-29 |
CA2907467A1 (en) | 2014-09-25 |
US20200249246A1 (en) | 2020-08-06 |
SG10201800309SA (en) | 2018-02-27 |
CN108362885B (zh) | 2021-05-14 |
JP6259905B2 (ja) | 2018-01-10 |
JP6820399B2 (ja) | 2021-01-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2673455C2 (ru) | Адреномедуллин для направленной терапии по снижению кровяного давления | |
US10800842B2 (en) | Anti-adrenomedullin (ADM) monoclonal antibodies and anti-ADM monoclonal antibody fragments that bind to adrenomedullin | |
DK2780717T3 (en) | ADRENOMEDULLINASSAYS AND METHODS FOR DETERMINING MODERN ADRENOMEDULLIN | |
EP2780370B1 (en) | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy of an acute disease or acute condition of a patient for stabilizing the circulation | |
US20220268761A1 (en) | Therapy monitoring under treatment with an anti-adrenomedullin (adm) binder | |
AU2017294549B2 (en) | Adrenomedullin for assessing congestion in a subject with acute heart failure | |
US20240085438A1 (en) | Adrenomedullin assays and methods for determining mature andrendomedullin | |
US20230104578A1 (en) | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy or prevention of shock | |
US20230193348A1 (en) | Dpp3 for therapy guidance, monitoring and stratification of nt-adm antibodies in patients with shock | |
RU2776811C2 (ru) | Мониторинг терапии при лечении связывающим веществом против адреномедуллина (adm) | |
WO2024023369A1 (en) | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy or prevention of shock |