RU2661036C2 - Средство для гемостатической обработки раны - Google Patents
Средство для гемостатической обработки раны Download PDFInfo
- Publication number
- RU2661036C2 RU2661036C2 RU2014132763A RU2014132763A RU2661036C2 RU 2661036 C2 RU2661036 C2 RU 2661036C2 RU 2014132763 A RU2014132763 A RU 2014132763A RU 2014132763 A RU2014132763 A RU 2014132763A RU 2661036 C2 RU2661036 C2 RU 2661036C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fibrinogen
- xaa
- peptide
- amino acid
- porous material
- Prior art date
Links
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 title claims abstract description 25
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 title abstract 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 108
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 86
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 86
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 86
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 53
- VWJLJHZPMZGDDV-HOCDWTQPSA-N (4s)-4-amino-5-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CN=CN1 VWJLJHZPMZGDDV-HOCDWTQPSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 24
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 11
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 54
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 54
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 51
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims description 46
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 41
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 39
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 38
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 38
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 38
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 38
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 38
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 34
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 24
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 claims description 21
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 21
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 17
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 16
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 10
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 claims description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 6
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 5
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 claims description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002201 Oxidized cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940107304 oxidized cellulose Drugs 0.000 claims description 3
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 2
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 9
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 7
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 7
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 7
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 7
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 6
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 6
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 6
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 5
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 3
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 108010015680 recombinant human thrombin Proteins 0.000 description 3
- 238000006894 reductive elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 3
- WXPZDDCNKXMOMC-AVGNSLFASA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-1-(2-aminoacetyl)pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 WXPZDDCNKXMOMC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(2s)-1-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-4-carboxy-1-[[2-[[2-[[2-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N 0.000 description 2
- GANZODCWZFAEGN-UHFFFAOYSA-N 5-mercapto-2-nitro-benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(S)=CC=C1[N+]([O-])=O GANZODCWZFAEGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 2
- 102400000525 Fibrinopeptide A Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-ylideneazanium;chloride Chemical compound Cl.N=C1CCCS1 ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101800003778 Fibrinopeptide B Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical class [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 244000078885 bloodborne pathogen Species 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 210000005161 hepatic lobe Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000000297 inotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108700005457 microfibrillar Proteins 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011555 rabbit model Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0015—Medicaments; Biocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
- A61L15/325—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/425—Porous materials, e.g. foams or sponges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/44—Medicaments
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0036—Porous materials, e.g. foams or sponges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/0047—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material
- A61L24/0073—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material with a macromolecular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
- A61L24/108—Specific proteins or polypeptides not covered by groups A61L24/102 - A61L24/106
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
- A61L26/0028—Polypeptides; Proteins; Degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/25—Peptides having up to 20 amino acids in a defined sequence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/418—Agents promoting blood coagulation, blood-clotting agents, embolising agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
- A61L2300/606—Coatings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/04—Materials for stopping bleeding
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/18—Modification of implant surfaces in order to improve biocompatibility, cell growth, fixation of biomolecules, e.g. plasma treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Hematology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Composite Materials (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине и касается средства для гемостатической обработки раны, которое содержит неколлоидный пористый материал и более чем один фибриногенсвязывающий пептид, иммобилизованный на указанном неколлоидном пористом материале, причем каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина. Группа изобретений также касается набора для формирования средства для гемостатической обработки раны; способа остановки кровотечения, который включает в себя наложение указанного средства; способа изготовления указанного средства для гемостатической обработки раны. Группа изобретений обеспечивает синергический эффект в отношении остановки кровотечения. 6 н. и 25 з.п. ф-лы, 6 пр., 5 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к средствам для гемостатической обработки ран, наборам и агентам для получения средств для гемостатической обработки ран, способам изготовления указанных средств, а также использованию указанных средств для остановки кровотечения, особенно сильного кровотечения, которое может произойти в хирургической практике.
В настоящее время доступен ряд некоторых гемостатиков местного применения для использования во время хирургических операций. Гемостатические губки, такие как Gelfoam, сделаны из свиного желатина. Gelfoam способна поглотить кровь более чем в сорок раз больше своего веса и расшириться приблизительно до двухсот процентов от своего первоначального объема. Поверхность губки вызывает активацию тромбоцитов посредством контактного воздействия на путь активации системы свертывания крови. Альтернативный продукт на основе желатина Floseal содержит желатиновые гранулы, которые сшиты таким образом, что они не набухают до почти той же степени, как Gelfoam.
Листовая окисленная целлюлоза, такая как Surgicel, представляет собой производное альфа-целлюлозы, и действует таким же образом, как и Gelfoam за счет контактного пути активации системы свертывания крови. При пропитывании кровью листы быстро набухают и превращаются в гелеобразную массу. Для микрофибриллярного коллагена, такого как Avitene, используется коллаген, который получен из кожи крупного рогатого скота. Он поставляется в виде тонкодисперсного порошка или листов. Он плотно связывается с поверхностью крови и вызывает минимальное набухание. Он не только вызывает контактную активацию, но и непосредственно активирует тромбоциты.
Местные гемостатики часто используются в сочетании с тромбином, который образует фибрин из фибриногена и способствует активации тромбоцитов, тем самым ускоряя свертывание крови. Обычно используется очищенный бычий или человеческий тромбин, или же рекомбинантный человеческий тромбин. Тем не менее, бычий тромбин является контаминированным с бычьим антигеном, в частности бычьим фактором V. Антитела, образованные против этого антигена, перекрестно реагируют с человеческим фактором V и приводят к опасному для жизни кровотечению, а, в некоторых случаях, к анафилаксии и смерти. В попытке свести к минимуму эти риски из объединенной плазмы доноров был выделен человеческий тромбин, но существует потенциальная возможность передачи переносимых кровью патогенных микроорганизмов, особенно вирусов. В последнее время был разработан рекомбинантный человеческий тромбин и одобрен для использования Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США. Он обладает тем преимуществом, что является минимально антигенным и не несет на себе риск передачи вируса. Тем не менее, это осуществляется с использованием генетически модифицированной линии клеток яичника китайского хомячка, и таким образом является относительно дорогим в производстве.
Препараты очищенного бычьего и рекомбинантного человеческого тромбина хранятся при комнатной температуре в виде порошка, который должен быть перед использованием разведен физиологическим раствором для приготовления рабочего раствора. Утвержденный Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США очищенный человеческий тромбин упакован в виде раствора, но может быть сохранен при комнатной температуре только в течение 24 часов; долгосрочное хранение требует замораживания (Lew and Weaver, Biologics: Targets & Therapy 2008:2(4) 593-599).
Еще один недостаток использования тромбина заключается в том, что ферменту требуется время для того, чтобы преобразовать фибриноген в фибрин, при этом происходит незначительная задержка перед тем, как процесс свертывания крови будет ускорен.
По этой причине существует необходимость создания гемостатиков для местного применения, которые обладают способностью остановить кровотечение быстро и эффективно, и при этом преодолеть один или более из вышеуказанных недостатков при использовании тромбина.
В соответствии с настоящим изобретением предлагается средство для гемостатической обработки раны, которое содержит неколлоидный пористый материал и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на неколлоидном пористом материале, где каждый фибриноген-связывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме валина, предпочтительно пролин, саркозин или лейцин; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме пролина.
Фибриноген содержит два крайних домена (D-домены), каждый из которых связан с фибриноген-связывающим пептидом. Когда фибриноген, например, в плазме или крови взаимодействует с пептидами, образуется сополимер, содержащий фибриноген-связывающие пептиды и фибриноген, который имеет характеристики фибринового сгустка. Наличие фибриноген-связывающих пептидов в средстве для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению, таким образом, ускоряет гемостаз.
Неожиданно было обнаружено, что средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению обладают значительно лучшими гемостатическими свойствами, чем обычный желатиновый тампон, который пропитан тромбином.
Средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению не зависят от действия экзогенного тромбина. Фибриноген-связывающие пептиды являются синтетическими и поэтому минимально антигенными, не несут риск передачи вируса, в процессе изготовления являются более дешевыми, чем рекомбинантные белки, которые экспрессируются в линиях клеток млекопитающих, и сохраняются длительное время в растворе при комнатной температуре.
Средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению не требуют ферментативной активности для того, чтобы ускорить гемостаз, и поэтому ускоряют гемостаза немедленно при контакте с фибриногеном.
Термин "неколлоидный пористый материал" используется в настоящем документе для обозначения любого неколлоидного пористого материала, который может быть локально нанесен как покрытие, в качестве обработки или для защиты раны. Примеры такого материала содержат листы, тампоны, губки, пены, пленки, марлю, сетку, гранулы и шарики. Неколлоидный пористый материал содержит материал, который пригоден для местного нанесения на рану, но не подходит для введения в организм. В частности, гранулы или шарики являются слишком большими для того, чтобы пройти через легочно-капиллярное русло. По меньшей мере, большинство гранул или шариков имеют максимальный размер, который является большим, чем 6 мкм. Неколлоидный пористый материал может содержать любое подходящее химическое вещество. Примеры содержат желатин, хлопок, вискозу, полиэфир, коллаген, альгинат и окисленную целлюлозу. Предпочтительным является желатин.
Тромбин отщепляет пептиды (с высвобождением фибринопептидов А и В) от концов аминокислот α и β цепей фибриногена, в результате чего становятся доступным последовательности NH2-GPRV- (SEQ ID NO: 3) и NH2-GHRP- (SEQ ID NO: 4) соответственно. Фибриноген-связывающие пептиды в средстве для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению, по этой причине, различаются по последовательности от последовательностей находящихся под действием тромбина на фибриноген. Предпочтительно, по меньшей мере, некоторые (более предпочтительно, все) фибриноген-связывающие пептиды содержат последовательность NH2-GPRP- (SEQ ID NO: 5) в аминоконцевой части.
Предпочтительно, фибриноген-связывающий пептиды представляет собой каждый пептид длиной 4-60, предпочтительно 4-30, более предпочтительно 4-10 остатков амитнокислот.
Аминоконцевая часть каждого фибриноген-связывающего пептида способна связываться с «отверстиями» в молекуле фибриногена (Weisel, Fibrinogen and Fibrin, Advances in Protein Chemistry, 2005, Vol. 70, pp. 247-299). Таким образом, любая последовательность фибриноген-связывающих пептидов, которая является карбоксиконцевой до четырех аминокислотных остатков в аминоконцевой части каждого пептида, не является критической, пока эта последовательность не ингибирует связывание аминоконцевой части пептида с фибриногеном.
В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения каждый фибриноген-связывающий пептид является по меньшей мере 5 аминокислотных остатков в длину для того, чтобы обеспечить достаточную длину пептида для того, чтобы взаимодействовать с высокой аффинностью с его областью связывания с фибриногеном. Таким образом, является особенно предпочтительным, чтобы каждый фибриноген-связывающий пептид имел длину 5-60, 5-30, или 5-10 аминокислотных остатков. Предпочтительно, чтобы пятый аминокислотный остаток аминоконцевой части каждого из таких фибриноген-связывающих пептидов являлся глициновым остатком. В других вариантах осуществления изобретения каждый фибриноген-связывающий пептид имеет длину по меньшей мере 6, 7, 8, 9, 10 или 11 аминокислотных остатков. Является предпочтительным, чтобы каждый фибриноген-связывающий пептид являлся не более чем 60 аминокислотных остатков в длину, более предпочтительно не более чем 30 аминокислотных остатков в длину.
Предпочтительно, каждый фибриноген-связывающий пептид представляет собой синтетический пептид.
Предпочтительно, фибриноген-связывающие пептиды связываются с фибриногеном с константой диссоциации лежащей в интервале от 10-9 до 10-6 М, например, приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 250, 300, 350, 400 или более нМ. Константа диссоциации равная приблизительно 100 нМ является предпочтительной.
Фибриноген-связывающие пептиды каждый имеют одну и ту же последовательность, предпочтительно каждый из которых содержит последовательность SEQ ID NO: 1 в аминоконцевой части. Альтернативно, фибриноген-связывающий пептиды содержат пептиды разной последовательности при условии, что каждый пептид содержит последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2 в его аминоконцевой части.
Некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются ковалентно или нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения, некоторое количество носителей являются нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале, и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются иммобилизованными, предпочтительно ковалентно иммобилизованными, в каждом носителе.
Когда фибриноген, например, в плазме или крови взаимодействует с фибриноген-связывающими пептидами, иммобилизованными на носителях, происходит связывание фибриногена с пептидами. Поскольку каждая молекула фибриногена связывает два пептида, молекулы фибриногена становятся нековалентно сшитыми с помощью носителей, и образуется сополимер, содержащий носители и фибриноген, который имеет характеристики фибринового сгустка.
Носителями могут быть растворимые или нерастворимые носители, но не тромбоциты. Носители должны быть пригодны для местного применения при кровотечении в области раны. Носители могут содержать растворимый или нерастворимый полимер, например белок, полисахарид или синтетический биосовместимый полимер, такой как полиэтиленгликоль, или комбинацию любого из них. Альбумин является предпочтительным белковым носителем.
Нерастворимый носитель может представлять собой микрочастицу (в том числе твердого вещества, полую или пористую микрочастицу, предпочтительно, по существу, сферическую микрочастицу). Микрочастица может быть выполнена из любого подходящего вещества, например сшитого белка. Подходящий белок представляет собой альбумин (полученный из сыворотки или рекомбинантный, человеческий или нечеловеческий в последовательности). Микрочастицы, пригодные для использования в качестве нерастворимых носителей в настоящем изобретении, сформированы путем сушки распылением сывороточного альбумина человека (HSA) с использованием хорошо известной технологии сушки распылением, например, как в WO 92/18164. Альтернативы для использования микрочастиц в качестве носителей содержат липосомы, синтетические полимерные частицы (такие как полимолочная кислота, полигликолевая кислота и поли (молочная/гликолевая) кислоты), или фрагменты клеточной мембраны.
По меньшей мере, большинство носителей предпочтительно имеют максимальный размер, который является меньшим, чем 6 мкм.
В теории нет верхнего предела количества фибриноген-связывающих пептидов на молекулу носителя. Оптимальное количество может зависеть от многих факторов, таких как природа носителя, и от количества реакционноспособных групп на каждом носителе для прикрепления фибриноген-связывающих пептидов. Тем не менее, предпочтительно, чтобы на молекулу носителя в среднем приходилось до 100 фибриноген-связывающих пептидов. Предпочтительно, чтобы на молекулу носителя в среднем приходилось по меньшей мере три, предпочтительно, по меньшей мере, пять фибриноген-связывающих пептидов. Предпочтительный диапазон на молекулу носителя составляет 10-20 фибриноген-связывающих пептидов.
Предпочтительно, фибриноген-связывающие пептиды являются ковалентно иммобилизованными на носителе.
Носители содержат реакционноспособные группы, которые позволяют прикрепление фибриноген-связывающих пептидов. Например, носители содержат на их поверхности тиольные компоненты или компоненты аминов. Если носители являются белковоподобными, тиоловые или аминные группы представлены боковыми цепями аминокислот, например, цистеина или лизина. Альтернативно, к носителю добавляются реакционноспособные группы. Это является особенно преимущественным, если носитель выполнен из белка, такого как HSA. Например, носитель использует такой тиолированный реагент, как 2-иминотиолан (2-IT), который обладает способностью взаимодействовать на носителе с первичными аминогруппами. Альтернативно, цистамин соединяется с карбоксильными группами на носителе в присутствии 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) с последующим восстановительным расщеплением введенной дисульфидной связи.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фибриноген-связывающие пептиды, ковалентно иммобилизованы на носителе через спейсер. Предпочтительный спейсер представляет собой непептидный спейсер, например, содержащий гидрофильный полимер, такой как полиэтиленгликоль (PEG). В предпочтительном варианте осуществления изобретения некоторое количество пептидных конъюгатов, каждый из которых содержит фибриноген-связывающий пептид, связанный с тиоловой реактивной группой (например, с малеимидной группой) с помощью PEG спейсера, взаимодействуют с тиолированным носителем (например, полученным с использованием 2-IT или цистамина, как описано выше).
Носители являются нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале посредством взаимодействия с материалом в водном растворе или суспензии носителей в течение достаточно долгого времени для того, чтобы произошла иммобилизация носителей на материале. В предпочтительном способе, указнный материал пропитывают носителями.
В других вариантах осуществления изобретения каждый фибриноген-связывающий пептид ковалентно иммобилизован непосредственно на неколлоидном пористом материале необязательно при помощи спейсера. Предпочтительный спейсер представляет собой непептидный спейсер, который предпочтительно содержит гидрофильный полимер, такой как PEG.
В таких вариантах осуществления изобретения, неколлоидный пористый материал предпочтительно содержит гранулы или шарики. В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения гранулы или шарики состоят из полимерного вещества, например белка, такого как желатин.
Неколлоидный материал содержит реакционноспособные группы, которые позволяют прикрепление фибриноген-связывающих пептидов. Например, указанный материал содержит на своей поверхности тиольные компоненты или компоненты аминов. Если указанный материал является белковоподобным, тиоловые или аминные компоненты представлены боковыми цепями аминокислот, например, цистеина или лизина. Альтернативно, к материалу добавляются реакционноспособные группы. Это является особенно преимущественным, если указанный материал выполнен из белка, такого как желатин. Например, указанный материал использует такой тиолированный реагент, как 2-иминотиолан (2-IT), который обладает способностью взаимодействовать на указанном материале с первичными аминогруппами. Альтернативно, цистамин соединяется с карбоксильными группами на указанном материале в присутствии 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) с последующим восстановительным расщеплением введенной дисульфидной связи.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фибриноген-связывающие пептиды, ковалентно иммобилизованы на неколлоидном материале при помощи спейсера. Предпочтительный спейсер представляет собой непептидный спейсер, например, содержащий гидрофильный полимер, такой как полиэтиленгликоль (PEG). В предпочтительном варианте осуществления изобретения некоторое количество пептидных конъюгатов, каждый из которых содержит фибриноген-связывающий пептид, связанный с тиоловой реактивной группой (например, с малеимидной группой) с помощью PEG спейсера, взаимодействуют с тиолированным указанным материалом (например, полученным с использованием 2-IT или цистамина, как описано выше).
Средство для гемостатической обработки ран согласно настоящему изобретению представлено в сухом виде, предпочтительно в лиофилизированной форме. Пример 5, который описан ниже, показывает, что средство для гемостатической обработки ран согласно настоящему изобретению сохраняет способность сополимеризировать фибриноген при повторном увлажнении после лиофилизации.
Предпочтительно средство для обработки ран является стерильным. Средство для гемостатической обработки ран согласно настоящему изобретению выполнено как стерильное средство для обработки раны, которое является готовым для введения в рану.
В соответствии с настоящим изобретением дополнительно представлено средство для гемостатической обработки раны в комплекте с инструкциями по наложению средства для обработки на рану.
В соответствии с настоящим изобретением также предлагается набор для формирования средства для гемостатической обработки раны, который содержит неколлоидный пористый материал и, отдельно, гемостатический агент, содержащий некоторое количество носителей и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на каждом носителе, где каждый фибриноген-связывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме валина, предпочтительно пролин, саркозин или лейцин; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме пролина.
Набор дополнительно содержит инструкции по нанесению указанного агента на неколлоидный пористый материал перед наложением указанного материала на рану и/или инструкции по наложению средства для гемостатической обработки раны на рану.
В соответствии с настоящим изобретением также предлагается гемостатический агент, который содержит некоторое количество носителей и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на каждом носителе, где каждый фибриноген-связывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме валина, предпочтительно пролин, саркозин или лейцин; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме пролина, и при этом указанный агент упакован совместно с инструкциями по нанесению указанного агента на неколлоидный пористый материал перед наложением указанного материала на рану.
Преимущественно, гемостатическый агент может находиться в виде раствора, в виде суспензии или в сухом виде, например, в лиофилизированной форме. Пример 3, который описан ниже, показывает, что гемостатический агент согласно настоящему изобретению сохраняет способность сополимеризировать фибриноген после экстрагирования в раствор из лиофилизированного средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению. Пример 6 показывает, что гемостатический агент согласно настоящему изобретению является стабильным в растворе в течение по меньшей мере шести месяцев при температуре 37°C. Таким образом, при желании, гемостатический агент согласно настоящему изобретению можно хранить в растворе, благодаря этому устраняется необходимость в восстановлении в растворенное состояние перед использованием.
Настоящее изобретение дополнительно представляет способ остановки кровотечения, особенно сильного кровотечения, который включает в себя наложение средства для гемостатической обработки раны на рану согласно настоящему изобретению.
Термин "сильное кровотечение" используется в настоящем документе для того, чтобы обозначить кровотечение, которое требует вмешательства (хирургического или эндоскопического) или декомпрессию замкнутого пространства для того, чтобы остановить или контролировать эпизод, в результате которого произошло кровотечение и нарушение гемодинамики (требующее гемотрансфузии, восстановления объема потерянной жидкости, инотропной поддержки или хирургического вмешательства), или кровотечение, которое не может быть остановлено с помощью общепринятых вмешательств, таких как пальцевое прижатие, прижигание или наложение швов.
В соответствии с настоящим изобретением также предлагается способ изготовления средства для гемостатической обработки раны, которое содержит некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на неколлоидном пористом материале, где каждый фибриноген-связывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме валина, предпочтительно пролин, саркозин или лейцин; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме пролина.
Некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются ковалентно или нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале.
Предпочтительно, некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются иммобилизованными на неколлоидном пористом материале при помощи некоторого количества носителей иммобилизованных на неколлоидном пористом материале, при этом некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются иммобилизованными на каждом носителе.
Определенные способы дополнительно включают в себя некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, которые иммобилизованы на каждом носителе.
Предпочтительно, некоторое количество носителей являются нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале, и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов являются иммобилизованными, предпочтительно ковалентно, на каждом носителе.
Подходящие способы ковалентной иммобилизации фибриноген-связывающих пептидов с носителями, необязательно через спейсер (предпочтительно непептидный спейсер, например, содержащий гидрофильный полимер, такой как PEG), описаны выше.
Подходящие способы нековалентной иммобилизации носителей на неколлоидном пористом материале описаны выше.
Подходящие способы ковалентной иммобилизации каждого фибриноген-связывающего пептида непосредственно на неколлоидном пористом материале, необязательно через спейсер (предпочтительно непептидный спейсер, например, содержащий гидрофильный полимер, такой как PEG), описаны выше.
В соответствии с настоящим изобретением также предлагается способ изготовления средства для гемостатической обработки раны, который включает в себя нанесение гемостатического агента на неколлоидный пористый материал, при этом указанный гемостатический агент содержит некоторое количество носителей и некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на каждом носителе, где каждый фибриноген-связывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме валина, предпочтительно пролин, саркозин или лейцин; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа обозначает любую аминокислоту кроме пролина.
Гемостатический агент нековалентно вводится в неколлоидный пористый материал, например, посредством взаимодействия водного раствора или суспензии гемостатического агента с указанным материалом в течение достаточно долгого времени для того, чтобы произошла иммобилизация гемостатического агента на материале. В предпочтительном способе, материал пропитывают гемостатическим агентом.
Особенно предпочтительные средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению содержат некоторое количество растворимых носителей (предпочтительно растворимых белковых носителей, таких как носитель альбумин) в которых некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов (каждый пептид предпочтительно содержащий аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Pro-Gly- (SEQ ID NO: 6) в аминоконцевой части) ковалентно иммобилизованы посредством непептидного спейсера (подходящего гидрофильного полимера, такого как полиэтиленгликоль) на каждом носителе. Носители являются нековалентно иммобилизованными на неколлоидном пористом материале (предпочтительно, содержащем желатин, такой как желатиновый тампон, или содержащем целлюлозное химическое волокно или сложный полиэфир). Примеры таких средств для гемостатической обработки раны описаны ниже в примерах 2, 3 и 4.
Дополнительно, особенно предпочтительные средства для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению содержат некоторое количество фибриноген-связывающих пептидов (каждый пептид предпочтительно содержащий аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Pro-Gly- в аминоконцевой части пептида), ковалентно иммобилизованых посредством непептидного спейсера (подходящего гидрофильного полимера, такого как полиэтиленгликоль) непосредственно на неколлоидном пористом материале (предпочтительно содержащем желатин в виде желатиновых гранул). Примеры таких средств для гемостатической обработки раны описаны ниже в примере 5.
Варианты осуществления настоящего изобретения теперь будут описаны ниже, в качестве только примера со ссылкой на прилагаемые чертежи, на которых:
Фигура 1 иллюстрирует структуру предпочтительного примера фибриноген-связывающего пептида, который ковалентно иммобилизован на носителе (в соответствии с предпочтительными вариантами осуществления изобретения ковалентно иммобилизованы на носителе некоторое количество таких фибриноген-связывающих пептидов - а на Фигуре иллюстрирован только один фибриноген-связывающий пептид, иммобилизованный на носителе);
Фигура 2а иллюстрирует схему для присвоения оценки тяжести кровотечения в соответствии с Adams и соавт., J Thromb Thrombolysis, 2009, 28(1):1-5;
Фигура 2b иллюстрирует график, который показывает результаты оценки гемостатической активности средства для гемостатической обработки раны в соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения;
Фигура 3 иллюстрирует результаты сравнения свертывающей активности носителей с иммобилизованными фибриноген-связывающими пептидами, которые выделены из лиофилизированных и нелиофилизированных средств для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению;
Фигура 4 иллюстрирует результаты оценки гемостатической активности средства для гемостатической обработки раны в соответствии с дополнительным предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения; и
Фигура 5 иллюстрирует результаты испытаний стабильности фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на носителе HSA, которые хранились в растворе при 37°C в течение 6 месяцев.
Обозначение "образование сгустка" и "свертывающая активность" по отношению к средствам для гемостатической обработки раны и гемостатическим агентам согласно настоящему изобретению обозначает образование сополимера, содержащего фибриноген-связывающие пептиды средства, или агентов и фибриногена, которые имеют характеристики сгустка фибрина.
Пример 1
Конъюгация фибриноген-связывающего пептида с носителем альбумином
Этот пример описывает конъюгацию фибриноген-связывающего пептида с последовательностью GPRPG, связанной с малеимидной группой (Mal), при помощи связующего звена полиэтиленгликоля (PEG) с носителем альбумином. Полученный в результате продукт назван "PeproStat".
Сывороточный альбумин человека разбавляют до 50 мг/мл в рабочем буферном растворе (50 ммоль фосфата натрия, 150 ммоль хлорида натрия, 100 ммоль этилендиаминтетрауксусной кислоты [EDTA], рН 8,0±0,2) и тиолируют добавлением шестидесятикратного молярного избытка 2-иминотиолан гидрохлорида. После инкубации в течение одного часа при комнатной температуре тиолированный альбумин отделен от непрореагировавшего 2-иминотиолан гидрохлорида путем диафильтрации тангенциальным потоком с использованием 20 ммоль фосфата натрия, 150 ммоль хлорида натрия, 1 ммоль EDTA, рН 7,2±0,2 (буферная фильтрация).
Конъюгация пептида выполняется путем растворения пептида (GPRPG-PEG12-малеимидного) при концентрации 50 мг/мл в буферной фильтрации и добавления к тиолированному альбумину в соотношении 0,95 мг пептида на 1 мг альбумина. После инкубации в течение одного часа при комнатной температуре избыток пептид удаляется при помощи диализа против 60-кратного избытка ТРИС-буферизированного физиологического раствора (TBS, 20 ммоль ТРИС, 150 ммоль хлорида натрия, рН 7,2±0,2) с использованием диализной мембраны с отсечением по молекулярной массе 10-14 кД, по меньшей мере 16 часов при 4°C с одной сменой буфера. Восстановленный PeproStat разбавляют до 5 мг/мл в TBS, стерильно фильтруют через фильтр 0,2 мкм, разливают и хранят при 4°C.
Содержание белка в конечном продукте оценивается путем измерения оптической плотности при длине волны 280 нм, где Е (280, 1%)=5,3.
Активность конечного продукта исследуется с помощью коагулометра Sigma Amelung KC4. Вкратце, 30 мкл тестового образца при концентрации 0,5 мг/мл добавляют к 100 мкл очищенного человеческого фибриногена при концентрации 3 мг/мл, затем KC4 регистрирует образование сгустка крови менее чем за 6 секунд.
Молекулярная масса конечного продукта оценивается при помощи SDS-PAGE-электрофореза восстановленных образцов с использованием 4-15% трис-глициновых сборных гелей окрашенных Кумасси по сравнению с профилем зоны неокрашенного маркера белка.
Характеристика препарата
Пример 2
Исследование гемостатической активности PeproStat в предварительно пропитанном желатиновом тампоне
Гемостатическая активность PeproStat была определена с использованием гепаринизированной модели кролика. Тем не менее, перед использованием этой модели, важно было определить, что препарат у кролика является активным, в частности, что фибриноген-связывающая последовательность PeproStat (GPRP-) связывается с фибриногеном кролика. Это было сделано путем конъюгирования пептида GPRPG с микрочастицами альбумина, которые затем инкубировали с FITC-меченым фибриногеном кролика. Флуоресцентный фибриноген, связанный с частицами был измерен с помощью проточного цитометра. При помощи этого способа было показано, что связывание PeproStat с кроличьим фибриногеном была сравнимо со связыванием с человеческим фибриногеном. Это подтверждает опубликованные данные, которые показывают, что относящиеся к исследуемой теме кроличьи и человеческие фибриноген-связывающие последовательности, подверженные воздействию при отщеплении тромбином фибринопептида А от фибриногена, являются одинаковыми.
Фибриноген-связывающая последовательность (GPRP) в PeproStat представляет собой производную от последовательности GPR, которая подвергается воздействию, когда фибринопептид А отщепляется от фибриногена под действием тромбина. Четвертая аминокислота в последовательности (пролин) дает более высокую аффинность с фибриногеном, чем естественная отщепленная последовательность человеческого фибриногена, которая имеет остаток валина в этом положении (Laudano and Doolittle Biochemistry 1980, 19: 1013-1019). Laudano и Doolittle доказали, что в то время как все соединения используют концевую последовательность GPR, существует изменение в четвертом положении аминокислоты, которое, как известно, влияет на аффинность с фибриногеном. Данные последовательности показывают, что кроличий фибриноген также имеет остаток валина в положении четыре и, по этой причине, кроличий и человеческий фибриноген, можно ожидать, имеют сравнимую аффинность с GPRP, как и было обнаружено.
Была использована модель абразивного повреждения печени кролика для оценки сравнительной гемостатического действия PeproStat, тромбина или физиологического раствора, которыми были пропитаны желатиновые тампоны. У кроликов, которым вводили гепарин в дозе 1000 ME/кг определяли гемостатическую активность.
Желатиновый тампон был обрезан до размера 2,0×3,0 см с использованием лезвия скальпеля. При каждой обработке образец тампона погружали в 1,5 мл аликвоты испытуемого раствора (PeproStat, тромбина или физиологического раствора). Затем он был извлечен и зажат между пальцами в перчатке для того, чтобы изгнать пузырьки воздуха, а затем возвращен в раствор до тех пор, пока не потребуется.
Поверхностное кругообразное повреждение (диаметром 10,3 мм, глубиной 2-3 мм) было создано путем обработки абразивным инструментом поверхности доли печени с помощью ручной дрели Dremel (модель 395, тип 5, USA; 10000-35000 оборотов в минуту) абразивным камнем с плоской поверхностью (Dremel, номер по каталогу 85602, USA). Выходящая из раны кровь была собрана в течение 15 секунд при помощи предварительно взвешенного сухого тампона. Вес собранной крови был использован в качестве измерения степени тяжести кровотечения. После удаления тампона был применен предварительно пропитанный тестовый тампон, а также была использована влажная марля для легкого придавливания обработанной раны в течение 30 секунд.
Были выполнены последовательно семь повреждений на каждой печени, а испытуемые тампоны рандомизированы по семи органам и тканям. Каждым испытуемым тампоном было выполнено 34 теста.
После удаления влажной марли с оставлением испытуемого тампона на своем месте рана была оценена для гемостаза на 1, 3, 6, 9, и 12 минуте, где одна минута обозначает время от того момента, когда испытуемый тампон был наложен на рану. Показатели кровотечения в баллах 0, 1, 2, 3, 4 и 5 были определены хирургом в соответствии со схемой, иллюстрированной на Фигуре 3а.
Результаты
0 баллов (т.е. отсутствие кровотечения) расценивались как успешный гемостаз в каждой временной точке. Процентное содержание 34 обработок (n=34 кроликов) считавшихся успешными, рассчитывали для каждой временной точки. Результаты иллюстрированы на Фигуре 3b.
Результаты показывают, что PeproStat в концентрации 5 мг/мл в пропитанном желатиновом тампоне является значительно лучшим гемостатическим агентом, чем физиологический раствор или тромбин (в концентрации 125 ед/мл) в пропитанном желатиновом тампоне.
Пример 3
Лиофилизированный PeproStat в желатиновом тампоне
Для определения поглощающей способности тампона 40 см2 желатинового тампона замачивали в 10 мл деионизированной воды. После максимального поглощения при помощи сжимания и повторного замачивания тампона для устранения всего воздуха остались 2 мл воды. Вследствие этого было подсчитано, что поглощающая способность 40 тампона площадью 40 см2 составляет 8 мл.
PeproStat в концентрации 10 мг/мл обессоливали с помощью устройства, которое представляет собой фильтрующую центрифугу Amicon Ultra, и разбавляли до концентрации 2,5 мг/мл. Желатиновый тампон площадью 40 см2 замачивали в 8 мл PeproStat при концентрации 2,5 мг/мл, и тампон затем сжимали пальцами в перчатках для того, чтобы удалить пузырьки воздуха. Тампоны оставляли в растворе и осторожно покачивали в течение 1 часа при комнатной температуре для того, чтобы гарантировать, что весь раствор подвергся адсорбции.
Тампон затем подвергали лиофилизированию с использованием настольного лиофилизатора.
Полки камеры для лиофилизации были приведены к начальной температуре -36°C, при этом тампоны были размещены на предварительно замороженных полках и подвержены этапам термальной обработки, доводящих температуру до -20°C в течение 270 минут.
Первичная сушка была выполнена в течение 800 минут при уменьшении вакуума от 800 мм. рт.ст. с сопутствующим увеличением температуры до 20°C.
Лиофилизированный тампон хранили в эксикаторе.
Успех лиофилизации был проанализирован путем сравнения свертывающей активности PeproStat, извлеченного из тампона после лиофилизации, со свертывающей активностью PeproStat, который не был лиофилизирован.
Было обнаружено, что тампон площадью 40 см2, содержащий 40 мг PeproStat весил после лиофилизации в общей сложности 440 мг.
Из тампона вырезали 25 мг и поместили в лодочку для взвешивания. Сухой PeproStat экстрагировали из тампона посредством тщательного замачивания тампона в 1 мл 10 ммоль фосфата натрия, 150 ммоль буферного раствора хлорида натрия, рН 7,2±0,2, и последующего отжимания полученного в результате раствора из тампона. Процедуру экстракции проводили в четырех отдельных случаях. Содержание белка извлеченного в раствор PeproStat было измерено с использованием 5 мкм С8 симметричности пиков обращенно-фазовой хроматографии HPLC по калибровочной кривой, построенной по разведениям стандартного PeproStat.
Анализ экстрагированного белка показал, что из тампона было извлечено 90-95% белка.
Свертывающую активность образца измеряли с использованием коагулометра Sigma Amelung KC-4, который измеряет время, необходимое для образования сгустка крови. Анализ свертывающей активности извлеченного из адсорбента PeproStat сравнивали с нелиофилизированным PeproStat.
Результаты
Результаты иллюстрированы на Фигуре 4.
Не было обнаружено никакого существенного различия между свертывающей активностью контрольного нелиофилизированного PeproStat и PeproStat из лиофилизированного тампона при испытании в коагулометре KC-4 при концентрации 0,5 мг/мл.
Пример 4
Гемостатическая активность PeproStat в пропитанном вискозно/полиэфирном пористом средстве
Гемостатическая активность 0,5 мл PeproStat при концентрации 5 мг/мл в пропитанной полиэфир/вискозной смеси была измерена с использованием метода определения импеданса крови следующим образом:
Двойной слой полиэфир/вискозной марли был растянут над универсальным контейнером с внутренним диаметром 2,5 см и была отмечена площадь марли, покрывающей открытую цилиндрическую область. Марля была удалена из цилиндрической области и 0,5 мл PeproStat при концентрации 5 мг/мл наносили на отмеченную окружность; 0,5 мл воды наносили на второе средство, отмеченное таким же образом, в качестве контроля.
Универсальные контейнеры были взвешены и пропитанные марли были растянуты над горловиной цилиндрической части. Затем последовательно наносили на пропитанную марлю 4×0,5 мл цитратной цельной крови, а прохождение крови через марлю измеряли по весу крови в цилиндрической части.
Результаты
Средний вес крови, прошедшей через марлю, содержащую PeproStat был 0,009 г±0,016 г (n=3) по сравнению с 0,695 г±0,721 г, прошедшей через контрольную марлю (n=3), как иллюстрировано в репрезентативном изображении, показанном на Фигуре 5.
Пример 5
Гемостатические свойства желатиновых носителей с иммобилизованными фибриноген-связывающими пептидами
Этот пример описывает приготовление двух различных предпочтительных средств для гемостатической обработки раны согласно настоящему изобретению и их гемостатические свойства. Оба средства содержали некоторое количество желатиновых носителей с некоторым количеством фибриноген-связывающих пептидов, ковалентно иммобилизованных на каждом носителе посредством такого связывающего агента, как полиэтиленгликоль. В этом примере желатиновые носители (или гранулы) представляют неколлоидный пористый материал.
Для приготовления первого средства был использован 2-иминотиолан с целью ковалентного присоединения некоторого количества конъюгатов фибриноген-связывающий пептид-PEG-связывающий агент к желатиновому носителю. Для приготовления второго средства фрагменты цистамина были конъюгированы с карбоксильными группами желатина в присутствии 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) с последующим восстановительным расщеплением введенной дисульфидной связи для того, чтобы образовать свободный тиол для прикрепления фибриноген-связывающего пептида.
Приготовление желатиновых гранул конъюгированных с GPRPG-PEG-12-Mal с использованием 2-иминотиолана
Желатиновые гранулы были тиолированы с использованием 2-иминотиолана, который модифицирует аминные остатки. Способ был использован в соответствии с Kommareddy S, Amiji М, 2005, Bioconjugate Chem 16: 1423-1432.
1 г желатиновых гранул взвешивали и гидратировали в 40 мл буферного раствора, содержащем 50 ммоль фосфата натрия, 0,15 моль NaCl, 0,1 моль EDTA, рН 8,0±0,2 путем смешивания на вальцовом смесителе в течение 10 минут при комнатной температуре. В гидратированный желатин добавляли 102 г 2-иминотиолана и перемешивали в вальцовом смесителе в течение 1 часа. Гранулы затем центрифугировали при 500 об/мин центрифугой RCF 28 в течение 2 минут, затем надосадочная жидкость была удалена, а объем замещен 20 ммоль фосфата натрия, 0,15 моль NaCl, 0,1 моль ЭДТА, рН 7,2±0,2. Это повторяли четыре раза для того, чтобы удалить 2-иминотиолан.
С целью определения количества -SH групп, введенных в желатин, был проведен анализ Эллмана. Реагент Эллмана - 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) - взаимодействует с сульфгидрилами при слегка щелочных условиях для того, чтобы высвободить высоко хромогенное соединение 5-тио-2-нитробензойную кислоту (TNB) Ellman GL. (1959) Arch Bichem. Biophys. 82 70-77.
После количественной оценки SH-групп 2,5 мл GPRPG-PEG-12-Mal в концентрации 50 мг/мл было добавлено к гранулам и перемешивали в вальцовом смесителе в течение 1 часа. Затем гранулы промывали четыре раза дистиллированной водой для того, чтобы удалить избыток пептида. Суспензия гранул была помещена в пластиковый контейнер и высушена путем инкубации при 37°C в течение 15 часов.
Приготовление желатиновых гранул конъюгированных с GPRPG-PEG-12-Mal с использованием химического соединения EDC/цистамин
2,2 г желатиновых гранул были взвешены и гидратированы в 80 мл 50 ммоль буферного раствора MES, рН 6,0, в течение 15 минут на вальцовом смесителе. 625 мг цистамина, 350 мг 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC) и 130 мг N-гидроксисукцинимида (NHS) были взвешены и добавлены к гидратированным гранулам. Реакционную смесь выдерживали в течение 2 часов в вальцовом смесителе при температуре окружающей среды, а затем разлили в два мерных цилиндра емкостью 50 мл. Затем гранулы были промыты и центрифугированы при 500 оборотов/мин с 4×40 мл объемами MES буферного раствора. 200 мкл одномолярного трис(2-карбоскиэтил)фосфина (ТСЕР) исходного раствора добавляли в каждую пробирку и оставляли на 10 минут в вальцовом смесителе при комнатной температуре. Повторяли промывание с 4 объемами MES с последующим проведением анализа Эллмана для того, чтобы определить свободные -SH.
7,2 мл GPRPG-PEG-12-Mal в концентрации 50 мг/мл смешивали с 10,45 мл N-этил-малеимида, а затем 8,8 мл смеси было добавлено в каждую пробирку. Реакционную смесь выдерживали в течение 1 часа в вальцовом смесителе при температуре окружающей среды.
Реакционные смеси промывали и центрифугировали при 800 об/мин с 4 объемами воды Milli-Q для того, чтобы удалить избыток пептида и N-этил-малеимида. Гранулы затем вылили в пластиковую коробку, покрытую Nescofilm, затем Nescofilm пробили и поместили в настольный лиофилизатор для сушки следующим образом:
Процесс сушки для конъюгированных гранул
Полки камеры для лиофилизации были приведены к начальной температуре -36°C, при этом желатиновые гранулы были размещены на предварительно замороженных полках и подвержены этапам термальной обработки, доводящих температуру до -20°C в течение 270 минут. Первичная сушка была выполнена в течение 800 минут при уменьшении вакуума от 800 мм. рт.ст. с сопутствующим увеличением температуры до 20°C. Лиофилизированные гранулы хранили в эксикаторе до тестирования.
Тестирование гранул сухого желатина на распадаемость тампона
100 мг сухих конъюгированных гранул желатина были помещены в шприц объемом 3 мл, а затем 0,5 мл трис-буферного физиологического раствора (TBS) (0,02 моль Трис, 0,15 моль NaCl, рН 7,2±0,2) были добавлены с помощью наконечника шприца для образования взвеси гранул. 0,5 мл тромбина в концентрации 500 ед/мл или 0,5 мл TBS были добавлены к 100 мг холостой пробы реагента (неконъюгированным гранулам желатина). При использовании наконечника шприца TBS был добавлен из другого шприца объемом 3 мл в каждый состав для образования взвеси. Каждую суспензию затем перемешивали при прохождении ее между шприцами приблизительно 40 раз.
Желатиновая суспензия была добавлена к третьему шприцу объемом 3 мл, а поршень шприца использовался для формирования тампона. Затем было введено в тампон 0,2 мл плазмы и выдержано в течение 3 минут. Затем нижняя часть шприца была отрезана, а тампон вытолкнут в 50 мл колбу, содержащую 0,9% физиологический раствор. Содержимое колбы затем перемешивали в вихревом смесителе в течение 10 минут. Тампон был затем оценен через 10 минут следующим образом:
0 = тампон распался полностью; 2 = присутствуют маленькие комочки (2-5 мм по размеру); 5 = присутствуют крупные куски (5-8 мм); 8 = большей частью тампон остался интактным, признаки эрозии; 10 = тампон полностью интактный.
Результаты
Результаты показывают, что механическая прочность тампона, образованного с помощью конъюгированных желатиновых гранул согласно настоящему изобретению является эквивалентной неконъюгированным гранулам, смешанным с тромбином.
Пример 6
Стабильность в растворе фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на носителе
Пример описывает результаты испытаний стабильности фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на носителе в растворе при 37°C.
PeproStat (содержащий фибриноген-связывающие пептиды, каждый в последовательности GPRPG, иммобилизованные на носителе HSA) хранился в растворе при 37°C в течение 6 месяцев. В нулевой момент времени, а также в различные моменты времени в течение периода хранения хранимые образцы раствора анализировали на способность образовывать сополимер с фибриногеном следующим образом:
Фибриноген разводили в 10 ммоль HEPES, 0,15 моль NaCl, рН 7,3+/10,2 до концентрации 6 мг/мл. 25 мкл PeproStat в концентрации 5 мг/мл было добавлено к 400 мкл разведенного фибриногена, а время, необходимое для формирования визуального сгустка крови, содержащего сополимер PeproStat и фибриноген, было запротоколировано.
Результаты иллюстрированы на Фигуре 5 и демонстрируют, что PeproStat является стабильным в растворе при 37°C в течение по меньшей мере 6 месяцев.
Claims (42)
1. Средство для гемостатической обработки раны, которое содержит неколлоидный пористый материал и более чем один фибриногенсвязывающий пептид, иммобилизованный на указанном неколлоидном пористом материале, причем каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит:
аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или
аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и
при этом указанный неколлоидный пористый материал содержит лист, тампон, губку, пену, пленку, марлю, сетку, гранулы или шарики, при этом в случае если указанный неколлоидный пористый материал содержит гранулы или шарики, по меньшей мере большая часть указанных гранул или шариков имеют максимальный размер, составляющий более 6 мкм.
2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой пролин, саркозин или лейцин.
3. Средство по п. 1, отличающееся тем, что более чем один фибриногенсвязывающий пептид является нековалентно иммобилизованным на указанном неколлоидном пористом материале.
4. Средство по п. 1, отличающееся тем, что более чем один носитель является иммобилизованным на указанном неколлоидном пористом материале, а более чем один фибриногенсвязывающий пептид является иммобилизованным на каждом носителе.
5. Средство по п. 4, отличающееся тем, что более чем один фибриногенсвязывающий пептид является ковалентно иммобилизованным на каждом носителе.
6. Средство по п. 5, отличающееся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид является ковалентно иммобилизованным на носителе при помощи непептидного спейсера.
7. Средство по п. 6, отличающееся тем, что указанный непептидный спейсер содержит гидрофильный полимер.
8. Средство по п. 7, отличающееся тем, что указанный гидрофильный полимер содержит полиэтиленгликоль.
9. Средство по п. 4, отличающееся тем, что указанные носители представляют собой растворимые носители.
10. Средство по п. 1, отличающееся тем, что более чем один фибриногенсвязывающий пептид является ковалентно иммобилизованным на указанном неколлоидном пористом материале.
11. Средство по п. 10, отличающееся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид является ковалентно иммобилизованным на указанном неколлоидном пористом материале при помощи непептидного спейсера.
12. Средство по п. 11, отличающееся тем, что указанный непептидный спейсер содержит гидрофильный полимер.
13. Средство по п. 12, отличающееся тем, что указанный гидрофильный полимер содержит полиэтиленгликоль.
14. Средство по любому из пп. 1-13, отличающееся тем, что указанный неколлоидный пористый материал содержит желатин, хлопок, целлюлозное химическое волокно, сложный полиэфир, коллаген, альгинат или окисленную целлюлозу.
15. Средство по любому из пп. 1-13, которое находится в сухой форме.
16. Средство по любому из пп. 1-13, которое находится в лиофилизированной форме.
17. Средство по любому из пп. 1-13, отличающееся тем, что каждый из фибриногенсвязывающих пептидов имеет длину от 4 до 60 аминокислотных остатков.
18. Средство по любому из пп. 1-13, которое представлено в комплекте с инструкциями по наложению указанного средства на рану.
19. Средство по любому из пп. 1-13 для остановки кровотечения.
20. Набор для формирования средства для гемостатической обработки раны, который содержит неколлоидный пористый материал и, отдельно, гемостатический агент, содержащий более чем один носитель и более чем один фибриногенсвязывающий пептид, иммобилизованный на каждом носителе, при этом каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части указанного пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и при этом указанный неколлоидный пористый материал содержит лист, тампон, губку, пену, пленку, марлю, сетку, гранулы или шарики, при этом в случае если указанный неколлоидный пористый материал содержит гранулы или шарики, по меньшей мере большая часть указанных гранул или шариков имеют максимальный размер, составляющий более 6 мкм.
21. Набор по п. 20, отличающийся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой пролин, саркозин или лейцин.
22. Набор по п. 20, который дополнительно содержит инструкции по нанесению указанного агента на указанный неколлоидный пористый материал перед наложением указанного материала на рану.
23. Набор по п. 20 или 22, который дополнительно содержит инструкции по наложению указанного средства для гемостатической обработки раны на рану.
24. Набор для формирования средства для гемостатической обработки раны, содержащий гемостатический агент, содержащий более чем один носитель и более чем один фибриногенсвязывающий пептид, иммобилизованный на каждом носителе, и неколлоидный пористый материал, при этом каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит:
аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или
аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина;
инструкции по нанесению указанного агента на неколлоидный пористый материал перед наложением материала на рану, которые упакованы совместно с указанным агентом,
причем указанный неколлоидный пористый материал содержит лист, тампон, губку, пену, пленку, марлю, сетку, гранулы или шарики, при этом в случае если указанный неколлоидный пористый материал содержит гранулы или шарики, по меньшей мере большая часть указанных гранул или шариков имеют максимальный размер, составляющий более 6 мкм.
25. Набор по п. 24, отличающийся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой пролин, саркозин или лейцин.
26. Способ остановки кровотечения, который включает в себя наложение средства для гемостатической обработки раны по любому из пп. 1-17 на рану.
27. Способ изготовления средства для гемостатической обработки раны, который включает в себя иммобилизацию более чем одного фибриногенсвязывающего пептида на неколлоидном пористом материале, при этом каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит:
аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или
аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и
при этом указанный неколлоидный пористый материал содержит лист, тампон, губку, пену, пленку, марлю, сетку, гранулы или шарики, при этом в случае если указанный неколлоидный пористый материал содержит гранулы или шарики, по меньшей мере большая часть указанных гранул или шариков имеют максимальный размер, составляющий более 6 мкм.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой пролин, саркозин или лейцин.
29. Способ по п. 27, отличающийся тем, что более чем один фибриногенсвязывающий пептид является иммобилизованным на неколлоидном пористом материале при помощи иммобилизации более чем одного носителя на неколлоидном пористом материале, при этом более чем один фибриногенсвязывающий пептид является иммобилизованным на каждом носителе.
30. Способ изготовления средства для гемостатической обработки раны, который включает в себя нанесение гемостатического агента на неколлоидный пористый материал, при этом указанный гемостатический агент содержит более чем один носитель и более чем один фибриногенсвязывающий пептид, иммобилизованный на каждом носителе, где каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит: аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме валина; или аминокислотную последовательность Gly-His-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 2) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и
при этом указанный неколлоидный пористый материал содержит лист, тампон, губку, пену, пленку, марлю, сетку, гранулы или шарики, при этом в случае если указанный неколлоидный пористый материал содержит гранулы или шарики, по меньшей мере большая часть указанных гранул или шариков имеют максимальный размер, составляющий более 6 мкм.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что каждый фибриногенсвязывающий пептид содержит аминокислотную последовательность Gly-Pro-Arg-Xaa (SEQ ID NO: 1) в аминоконцевой части пептида, в которой Хаа представляет собой пролин, саркозин или лейцин.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB1201751.3A GB201201751D0 (en) | 2012-02-01 | 2012-02-01 | Haemostatic wound dressing |
GB1201751.3 | 2012-02-01 | ||
PCT/GB2013/050237 WO2013114132A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-02-01 | Haemostatic wound dressing |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014132763A RU2014132763A (ru) | 2016-03-27 |
RU2661036C2 true RU2661036C2 (ru) | 2018-07-11 |
Family
ID=45876478
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014132763A RU2661036C2 (ru) | 2012-02-01 | 2013-02-01 | Средство для гемостатической обработки раны |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9808553B2 (ru) |
EP (1) | EP2809365B8 (ru) |
JP (1) | JP6258868B2 (ru) |
KR (1) | KR102168157B1 (ru) |
CN (1) | CN104114198B (ru) |
ES (1) | ES2879558T3 (ru) |
GB (2) | GB201201751D0 (ru) |
HR (1) | HRP20211112T8 (ru) |
IN (1) | IN2014DN06952A (ru) |
RU (1) | RU2661036C2 (ru) |
WO (1) | WO2013114132A1 (ru) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0516091D0 (en) * | 2005-08-04 | 2005-09-14 | Haemostatix Ltd | Therapeutic agent |
GB0808376D0 (en) | 2008-05-08 | 2008-06-18 | Bristol Myers Squibb Co | Wound dressing |
GB0817796D0 (en) | 2008-09-29 | 2008-11-05 | Convatec Inc | wound dressing |
GB201020236D0 (en) | 2010-11-30 | 2011-01-12 | Convatec Technologies Inc | A composition for detecting biofilms on viable tissues |
WO2012078784A1 (en) | 2010-12-08 | 2012-06-14 | Convatec Technologies Inc. | Wound exudate system accessory |
JP5965409B2 (ja) | 2010-12-08 | 2016-08-03 | コンバテック・テクノロジーズ・インコーポレイテッドConvatec Technologies Inc | 創傷滲出液を評価するための統合システム |
GB201115182D0 (en) | 2011-09-02 | 2011-10-19 | Trio Healthcare Ltd | Skin contact material |
GB2497406A (en) | 2011-11-29 | 2013-06-12 | Webtec Converting Llc | Dressing with a perforated binder layer |
GB201120693D0 (en) | 2011-12-01 | 2012-01-11 | Convatec Technologies Inc | Wound dressing for use in vacuum therapy |
CN105008611A (zh) | 2012-12-20 | 2015-10-28 | 康沃特克科技公司 | 化学改性的纤维素纤维的处理 |
GB201400292D0 (en) * | 2014-01-08 | 2014-02-26 | Haemostatix Ltd | Peptide dendrimers and agents |
US12083245B2 (en) * | 2014-10-02 | 2024-09-10 | Wake Forest University Health Sciences | Amniotic membrane powder and its use in wound healing and tissue engineering constructs |
GB201508020D0 (en) * | 2015-05-11 | 2015-06-24 | Haemostatix Ltd | Haemostatic material |
GB201508014D0 (en) * | 2015-05-11 | 2015-06-24 | Haemostatix Ltd | Haemostatic device |
GB201508024D0 (en) * | 2015-05-11 | 2015-06-24 | Haemostatix Ltd | Haemostatic compositions |
US20170152556A1 (en) * | 2015-06-08 | 2017-06-01 | The Procter & Gamble Company | Methods for identifying circadian rhythm-dependent cosmetic agents for skin care compositions |
AU2016313773B2 (en) * | 2015-09-01 | 2020-11-26 | Baxter International Inc. | Hemostatic material |
GB2543307B (en) * | 2015-10-14 | 2020-12-09 | Selentus Science Ltd | Haemostatic device |
CA3019445A1 (en) | 2016-03-30 | 2017-12-14 | Synovo Gmbh | Detecting microbial infection in wounds |
TW201800069A (zh) | 2016-03-30 | 2018-01-01 | 康華特科技有限公司 | 傷口中微生物感染檢測方法 |
WO2018009879A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Convatec Technologies Inc. | Fluid flow sensing |
CA3030151A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Convatec Technologies Inc. | Fluid collection apparatus |
MX2019000239A (es) | 2016-07-08 | 2019-09-06 | Convatec Technologies Inc | Sistema de presion negativa flexible. |
CN106344960B (zh) * | 2016-09-20 | 2019-02-22 | 安徽思维特生物科技有限公司 | 利用微晶纤维素接枝改性胎牛皮胶原纤维制备的止血凝胶 |
IL256405A (en) * | 2017-12-19 | 2018-01-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Wound bandage and method for its production |
GB2571080A (en) * | 2018-02-14 | 2019-08-21 | Medtrade Products Ltd | Haemostatic material |
US12076215B2 (en) | 2019-06-03 | 2024-09-03 | Convatec Limited | Methods and devices to disrupt and contain pathogens |
CN110448719B (zh) * | 2019-06-28 | 2020-05-22 | 浙江大学 | 一种促进凝血的丝素-多肽电纺膜及其制备方法 |
US11331221B2 (en) | 2019-12-27 | 2022-05-17 | Convatec Limited | Negative pressure wound dressing |
US11771819B2 (en) | 2019-12-27 | 2023-10-03 | Convatec Limited | Low profile filter devices suitable for use in negative pressure wound therapy systems |
GB2596525A (en) * | 2020-06-26 | 2022-01-05 | Fujifilm Corp | Modified gelatins |
CN112206307B (zh) * | 2020-09-15 | 2023-12-05 | 广州领晟医疗科技有限公司 | 一种可注射的温敏型水凝胶及其制备方法与应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005035002A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-04-21 | Haemostatix Limited | Fibrinogen targetting microparticles for promoting haemostasie |
WO2007015107A2 (en) * | 2005-08-04 | 2007-02-08 | Haemostatix Limited | Artificial platelets |
WO2008065388A2 (en) * | 2006-11-27 | 2008-06-05 | Haemostatix Limited | Biogel |
RU2326137C2 (ru) * | 2003-05-23 | 2008-06-10 | Др.Сувелак Скин Энд Хелт Кэар Аг | Способ получения содержащих альгинат пористых формованных изделий |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3175003D1 (en) | 1981-06-25 | 1986-08-28 | Serapharm Gmbh & Co Kg | Enriched plasma derivative for promoting wound sealing and wound healing |
GB9107628D0 (en) | 1991-04-10 | 1991-05-29 | Moonbrook Limited | Preparation of diagnostic agents |
EP1338648B1 (en) | 1992-05-29 | 2005-11-30 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Pharmaceutically acceptable fixed-dried human blood platelets |
AU702955B2 (en) | 1996-05-17 | 1999-03-11 | Quadrant Healthcare (Uk) Limited | Microparticles and their use in wound therapy |
ES2232862T3 (es) | 1996-10-21 | 2005-06-01 | Quadrant Drug Delivery Limited | Sustitutos de plaquetas y procedimientos de conjugacion apropiados para su preparacion. |
US6891077B2 (en) | 2001-07-25 | 2005-05-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Fibrinogen bandages and arterial bleeding models and methods of making and using thereof |
WO2003088990A1 (en) * | 2002-04-15 | 2003-10-30 | American National Red Cross | Plasma protein-binding ligands |
US20040101546A1 (en) * | 2002-11-26 | 2004-05-27 | Gorman Anne Jessica | Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents |
GB2410687A (en) | 2002-11-20 | 2005-08-10 | Univ Bar Ilan | Biological glue based on thrombin-conjugated nanoparticles |
CA2530032C (en) | 2003-06-16 | 2015-11-24 | Loma Linda University Medical Center | Deployable multifunctional hemostatic agent |
US7927626B2 (en) | 2003-08-07 | 2011-04-19 | Ethicon, Inc. | Process of making flowable hemostatic compositions and devices containing such compositions |
US7186684B2 (en) | 2003-08-07 | 2007-03-06 | Ethicon, Inc. | Hemostatic device containing a protein precipitate |
MX2007000918A (es) | 2004-07-22 | 2007-12-04 | Hemo Nanoscience Llc | Composiciones y metodos para tratar sangrado excesivo. |
US9358318B2 (en) | 2004-10-20 | 2016-06-07 | Ethicon, Inc. | Method of making a reinforced absorbable multilayered hemostatic wound dressing |
KR101428122B1 (ko) * | 2006-12-15 | 2014-08-07 | 라이프본드 엘티디. | 젤라틴-트랜스글루타미나아제 지혈 드레싱 및 실란트 |
WO2009018126A2 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Ethicon, Inc. | Collagen-related peptides and uses thereof |
US8512740B2 (en) | 2008-03-26 | 2013-08-20 | Baxter International Inc. | Fibrin foam and process for making |
US20100021527A1 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Chunlin Yang | Collagen-related peptides and uses thereof and hemostatic foam substrates |
US8513380B2 (en) | 2009-07-09 | 2013-08-20 | Georgia Tech Research Corporation | Peptides for binding fibrinogen and fibrin |
-
2012
- 2012-02-01 GB GBGB1201751.3A patent/GB201201751D0/en not_active Ceased
-
2013
- 2013-02-01 IN IN6952DEN2014 patent/IN2014DN06952A/en unknown
- 2013-02-01 KR KR1020147023963A patent/KR102168157B1/ko active IP Right Grant
- 2013-02-01 RU RU2014132763A patent/RU2661036C2/ru active
- 2013-02-01 EP EP13708510.6A patent/EP2809365B8/en active Active
- 2013-02-01 US US14/376,023 patent/US9808553B2/en active Active
- 2013-02-01 ES ES13708510T patent/ES2879558T3/es active Active
- 2013-02-01 CN CN201380007527.0A patent/CN104114198B/zh active Active
- 2013-02-01 JP JP2014555315A patent/JP6258868B2/ja active Active
- 2013-02-01 WO PCT/GB2013/050237 patent/WO2013114132A1/en active Application Filing
- 2013-02-01 GB GB1301847.8A patent/GB2501348B/en active Active
-
2021
- 2021-07-12 HR HRP20211112TT patent/HRP20211112T8/hr unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2326137C2 (ru) * | 2003-05-23 | 2008-06-10 | Др.Сувелак Скин Энд Хелт Кэар Аг | Способ получения содержащих альгинат пористых формованных изделий |
WO2005035002A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-04-21 | Haemostatix Limited | Fibrinogen targetting microparticles for promoting haemostasie |
WO2007015107A2 (en) * | 2005-08-04 | 2007-02-08 | Haemostatix Limited | Artificial platelets |
WO2008065388A2 (en) * | 2006-11-27 | 2008-06-05 | Haemostatix Limited | Biogel |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HRP20211112T1 (hr) | 2021-10-15 |
WO2013114132A1 (en) | 2013-08-08 |
US20150071985A1 (en) | 2015-03-12 |
EP2809365A1 (en) | 2014-12-10 |
JP2015506764A (ja) | 2015-03-05 |
US9808553B2 (en) | 2017-11-07 |
CN104114198A (zh) | 2014-10-22 |
GB201201751D0 (en) | 2012-03-14 |
ES2879558T3 (es) | 2021-11-22 |
JP6258868B2 (ja) | 2018-01-10 |
IN2014DN06952A (ru) | 2015-04-10 |
RU2014132763A (ru) | 2016-03-27 |
GB2501348B (en) | 2020-06-24 |
HRP20211112T8 (hr) | 2022-01-21 |
CN104114198B (zh) | 2018-09-04 |
EP2809365B8 (en) | 2021-06-23 |
KR102168157B1 (ko) | 2020-10-21 |
EP2809365B1 (en) | 2021-05-12 |
GB2501348A (en) | 2013-10-23 |
KR20140121864A (ko) | 2014-10-16 |
GB201301847D0 (en) | 2013-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2661036C2 (ru) | Средство для гемостатической обработки раны | |
JP6235104B2 (ja) | 止血組成物 | |
KR102143252B1 (ko) | 지혈 조성물 | |
US9694101B2 (en) | Flowable collagen-based hemostat and methods of use | |
CN108495658B (zh) | 止血材料 | |
US20130096082A1 (en) | Hemostatic compositions | |
US20160000962A1 (en) | Hemostatic Compositions | |
RU2744694C2 (ru) | Гемостатические композиции | |
CN117752848A (zh) | 硅酸盐生物陶瓷复合材料及其制备方法与应用 | |
JP2023541650A (ja) | 止血管理を改善するシステム | |
NZ623908B2 (en) | Hemostatic compositions | |
NZ623908A (en) | Hemostatic compositions |