RU2659729C2 - Кохлеаты, полученные с использованием фосфатидилсерина сои - Google Patents
Кохлеаты, полученные с использованием фосфатидилсерина сои Download PDFInfo
- Publication number
- RU2659729C2 RU2659729C2 RU2015105881A RU2015105881A RU2659729C2 RU 2659729 C2 RU2659729 C2 RU 2659729C2 RU 2015105881 A RU2015105881 A RU 2015105881A RU 2015105881 A RU2015105881 A RU 2015105881A RU 2659729 C2 RU2659729 C2 RU 2659729C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cochleates
- biologically active
- active agent
- agent
- soy
- Prior art date
Links
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 title claims abstract description 88
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 88
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 102
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 31
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 144
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 104
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 claims description 101
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 claims description 61
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 claims description 61
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims description 54
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 54
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims description 54
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 claims description 42
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 39
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 claims description 39
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 24
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 claims description 21
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 claims description 21
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 claims description 12
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 9
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 6
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 6
- -1 ergotamines Natural products 0.000 claims description 6
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 4
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 239000002294 steroidal antiinflammatory agent Substances 0.000 claims description 4
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 4
- 229940125725 tranquilizer Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003204 tranquilizing agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 claims description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 3
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 3
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 3
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 claims description 3
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 claims description 3
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 claims description 3
- 229940065144 cannabinoids Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 claims description 3
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 claims description 3
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 claims description 3
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- 229960001597 nifedipine Drugs 0.000 claims description 3
- HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N nifedipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 claims description 3
- KEJXLQUPYHWCNM-UHFFFAOYSA-N propanidid Chemical compound CCCOC(=O)CC1=CC=C(OCC(=O)N(CC)CC)C(OC)=C1 KEJXLQUPYHWCNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004948 propanidid Drugs 0.000 claims description 3
- OLBCVFGFOZPWHH-UHFFFAOYSA-N propofol Chemical compound CC(C)C1=CC=CC(C(C)C)=C1O OLBCVFGFOZPWHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004134 propofol Drugs 0.000 claims description 3
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 claims description 3
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 claims description 3
- 150000003515 testosterones Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 4
- MCCACAIVAXEFAL-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(2,4-dichlorophenyl)-2-[(2,4-dichlorophenyl)methoxy]ethyl]imidazole;nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O.ClC1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 MCCACAIVAXEFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DUHUCHOQIDJXAT-OLVMNOGESA-N 3-hydroxy-(3-α,5-α)-Pregnane-11,20-dione Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)C)[C@@]2(C)CC1=O DUHUCHOQIDJXAT-OLVMNOGESA-N 0.000 claims 2
- AUJXLBOHYWTPFV-BLWRDSOESA-N CS[C@H]1SC[C@H]2N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](COC(=O)[C@@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](COC(=O)[C@@H](C(C)C)N(C)C2=O)NC(=O)c1cnc2ccccc2n1)NC(=O)c1cnc2ccccc2n1 Chemical compound CS[C@H]1SC[C@H]2N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](COC(=O)[C@@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](COC(=O)[C@@H](C(C)C)N(C)C2=O)NC(=O)c1cnc2ccccc2n1)NC(=O)c1cnc2ccccc2n1 AUJXLBOHYWTPFV-BLWRDSOESA-N 0.000 claims 2
- 108010009858 Echinomycin Proteins 0.000 claims 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 claims 2
- 229960003305 alfaxalone Drugs 0.000 claims 2
- 229960005040 miconazole nitrate Drugs 0.000 claims 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims 2
- AUJXLBOHYWTPFV-UHFFFAOYSA-N quinomycin A Natural products CN1C(=O)C(C)NC(=O)C(NC(=O)C=2N=C3C=CC=CC3=NC=2)COC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C2N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(NC(=O)C=3N=C4C=CC=CC4=NC=3)COC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C1CSC2SC AUJXLBOHYWTPFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 claims 2
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 claims 2
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000003477 cochlea Anatomy 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 53
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 46
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 40
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 31
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 31
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 31
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 30
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 11
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 9
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 8
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 8
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 8
- 241001502334 Mycobacterium avium complex bacterium Species 0.000 description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N Paromomycin II Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(N)CC(N)C2O)OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)N)OC1CO UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N paromomycin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N 0.000 description 6
- 229960001914 paromomycin Drugs 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 5
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 5
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 5
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 5
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 5
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 3
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 3
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 2
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 2
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 239000013554 lipid monolayer Substances 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 2
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 2
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 2
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMMRCKSBBNJCMR-KMZPNFOHSA-N Angiotensin III Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 QMMRCKSBBNJCMR-KMZPNFOHSA-N 0.000 description 1
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102400000348 Angiotensin-3 Human genes 0.000 description 1
- 101800000738 Angiotensin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102400000748 Beta-endorphin Human genes 0.000 description 1
- 101800005049 Beta-endorphin Proteins 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 102400000113 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical class [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001971 Middlebrook 7H10 Agar Substances 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000419538 Mycobacterium avium 101 Species 0.000 description 1
- 241000513886 Mycobacterium avium complex (MAC) Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical class [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical class [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WOPZMFQRCBYPJU-NTXHZHDSSA-N beta-endorphin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WOPZMFQRCBYPJU-NTXHZHDSSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002812 cholic acid derivative Substances 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- WDQPAMHFFCXSNU-BGABXYSRSA-N clofazimine Chemical compound C12=CC=CC=C2N=C2C=C(NC=3C=CC(Cl)=CC=3)C(=N/C(C)C)/C=C2N1C1=CC=C(Cl)C=C1 WDQPAMHFFCXSNU-BGABXYSRSA-N 0.000 description 1
- 229960004287 clofazimine Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- CWWARWOPSKGELM-SARDKLJWSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)OC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 CWWARWOPSKGELM-SARDKLJWSA-N 0.000 description 1
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 description 1
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003429 steroid acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
- A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/7036—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin having at least one amino group directly attached to the carbocyclic ring, e.g. streptomycin, gentamycin, amikacin, validamycin, fortimicins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/06—Aluminium, calcium or magnesium; Compounds thereof, e.g. clay
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1274—Non-vesicle bilayer structures, e.g. liquid crystals, tubules, cubic phases, cochleates; Sponge phases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к кохлеату для доставки биологически активного агента. Кохлеат для доставки биологически активного агента, содержит фосфолипид на основе сои, который содержит 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои, мультивалентный катион и биологически активный агент. Также предложен способ получения кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента. Способ лечения пациента с бактериальной инфекцией, согласно изобретению включает введение пациенту эффективного количества кохлеата, который содержит (i) фосфолипид на основе сои, включающий 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои, (ii) мультивалентный катион и (iii) антибиотический агент. Вышеописанный кохлеат эффективен для доставки биологически активного агента в организм пациента, обеспечивая высокую эффективность включения нагрузки в кохлеаты. 3 н. и 26 з.п. ф-лы, 11 ил., 4 табл., 10 пр.
Description
РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №61/677414, поданной 30 июля 2012 г. и предварительной заявки на патент США №61/835825, поданной 17 июня 2013 г., содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к возможности получать кохлеаты из неочищенного фосфатидилсерина (ФС) или фосфатидилсерина низкой степени чистоты (40-74% по массе), способам получения лекарственных кохлеатов с лекарственными средствами из ФС на основе сои и применению этих кохлеатов, нагруженных лекарственным средством, в качестве фармацевтического средства лечения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Средства доставки в форме кохлеатов являются универсальной технологией для доставки множества биологически активных терапевтических продуктов. Средства доставки в форме кохлеатов представляют собой стабильные фосфолипид-катионные преципитаты, состоящие из простых, встречающихся в естественных условиях веществ, например, фосфатидилсерина и кальция.
Двухслойная структура кохлеатов обеспечивает защиту от разрушения связанных или «включенных в кохлеаты» (encochleated) молекул. Так как структура кохлеата в целом представляет собой ряд твердых слоев, компоненты внутри структуры кохлеата остаются по существу ин, даже при том, что внешний слой кохлеата может подвергаться воздействию жестких условий окружающей среды или ферментов. Это включает защиту от расщепления в желудке.
Пользуясь этими уникальными свойствами, кохлеаты применяли в качестве посредника и для повышения биологической доступности при пероральном применении множества важных, но сложных в производстве биофармацевтических средств, в том числе соединений с плохой растворимостью в воде, белковых и пептидных лекарственных средств, а также крупных гидрофильных молекул. Например, с помощью кохлеатов осуществили пероральную доставку амфотерицина В, крупных ДНК-конструкций/плазмид для ДНК-вакцин и генной терапии, пептидных составов и антибиотиков, таких как клофазимин.
Кохлеаты можно хранить в катионсодержащем буфере или в виде лиофилизированного порошка, который хранят при комнатной температуре и растворяют в жидкости перед введением. Лиофилизация не оказывает негативного влияния на строение или функции кохлеата. Показано, что лекарственные средства в форме кохлеатов являются стабильным в течение более чем двух лет при 4°C в катион-содержащем буфере и в течение по меньшей мере одного года в виде лиофилизированного порошка при комнатной температуре.
Кохлеаты можно получать посредством нескольких способов, таких как способы захвата или гидрогелевые способы (публикация международной заявки № WO 03/082209, содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки).
ФС сои продают в магазинах здорового питания в качестве пищевой добавки. Неочищенный (40%) ФС используется и изучается в качестве пищевой добавки и в качестве компонента, который оказывает благотворное влияние на улучшение функций мозга у пожилых людей (Villardita С et al., Clin. Trials J. 24, 1987, 84-93).
Хотя неочищенный ФС сои (NSPS) продают и изучают на пациентах, NSPS (или ФС низкой степени чистоты) никогда не применяли для получения кохлеатов и для доставки лекарственных средств с применением данных кохлеатов. Как ранее сообщалось в WO 03/082209, NSPS не образует кохлеатов, и для увеличения содержания ФС в NSPS необходим процесс очистки до достижения по меньшей мере 75% по массе ФС, т.е. такого процентного содержания, которое позволяет образовывать кохлеаты.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Неожиданно было обнаружено, что NSPS или ФС сои низкой степени чистоты (40-74% по массе) обладают способностью образовывать кохлеаты.
Вкратце, согласно настоящему изобретению, получены улучшенные кохлеаты на основе липидов с применением неочищенного фосфатидилсерина сои или фосфатидилсерина сои низкой степени чистоты соевого в качестве источника липидов. Улучшенные кохлеаты содержат соевый фосфатидилсерин в количестве примерно 40%-74% (предпочтительно 45-70%, более предпочтительно 45-55%) по массе липида. Улучшенные кохлеаты могут быть пустыми или нагруженными. Нагруженные кохлеаты могут содержать любые биологически активные вещества или комбинации биологически активных веществ, таких как, например, белок, малый пептид, полинуклеотид, аминогликозид, противовирусный агент, анестетик, антибиотик, противогрибковый агент, противоопухолевый агент, иммуносупрессор, стероидное противовоспалительное средство, нестероидное противовоспалительное средство, транквилизатор, пищевая добавка, растительный продукт, витамин или сосудорасширяющий агент. Особый интерес для реализации настоящего изобретения на практике представляют кохлеаты на основе фосфатидилсерина сои, нагруженные противогрибковыми агентами или антибиотиками с получением экономичного и улучшенного противогрибкового лекарственного средства/антибиотика с пониженной токсичностью. Предпочтительные противогрибковые агенты включают амфотерицин В и нистатин. Предпочтительные антибиотики включают аминогликозид и амикацин.
Улучшенные кохлеаты на основе липидов согласно настоящему изобретению могут быть получены способом, включающим стадии: (а) приготовления липосом в водной среде, причем липосомы включают (i) липидный бислой, содержащий соевый фосфатидилсерин в количестве примерно 40%-74% (предпочтительно 45-70%, более предпочтительно 45-55%) по массе липидного бислоя и (ii) нагрузку из биологически активного агента; (b) добавления мультивалентного катиона к суспензии липосом из стадии (а) с получением кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента; и (с) сбора кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента.
Согласно настоящему изобретению кохлеаты из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента можно вводить пациентам с грибковыми или с бактериальными инфекциями. Кохлеаты из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента по изобретению удобно вводить перорально даже в случае лечения системных грибковых инфекций у пациентов с ослабленным иммунитетом. Кохлеаты из фосфатидилсерина/биологически активного агента по изобретению также вводят парентерально или посредством других средств введения. Предпочтительными биологически активными агентами являются амфотерицин В, куркумин и амикацин.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фигуре 1 показано исследование действия кохлеатов, с амикацином, in vitro против MAC 101 и MAC 109 на перитонеальных макрофагах мыши.
На фигуре 2 показана эффективность кохлеатов, с амикацином, in vivo при внутрибрюшинной доставке на модели инфекции MAC 101 мышей.
На фигуре 3 показана эффективность кохлеатов, с амикацином, in vivo при пероральной доставке на модели инфекции MAC 101 мышей.
На фигуре 4 показано включение гентамицина в кохлеат в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 5 показана эффективность включения в кохлеат амикацина с солями желчных кислот, в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 6 показана эффективность включения в кохлеат амикацина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 7 показана эффективность включения в кохлеат гентамицина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 8 показана эффективность включения в кохлеат гентамицина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 9 показана эффективность включения в кохлеат паромомицина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 10 показана эффективность включения в кохлеат паромомицина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
На фигуре 11 показана эффективность включения в кохлеат паромомицина с солями желчных кислот в зависимости от свойств ФС.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Следующие термины при использовании в настоящем документе имеют определения, приведенные ниже.
«Кохлеат» представляет собой стабильный фосфолипид-катионный преципитат, который может быть как пустым, так и нагруженным.
«Пустой кохлеат» представляет собой кохлеат, который состоит только из фосфолипида и катионов.
«Нагруженный кохлеат» представляет собой кохлеат, который имеет одно или более биологически активных соединений внутри структуры фосфолипид-катион.
«Фосфатидилсерин сои» или «фосфатидилсерин на основе сои» представляет собой фосфатидилсерин, который был получен из композиции на основе сои.
В реализации настоящего изобретения на практике улучшенные кохлеаты на основе фосфолипида получают с применением фосфатидилсерина сои в количестве 40%-74% по массе липидного компонента кохлеатов. В качестве альтернативы, количество фосфатидилсерина сои может составлять примерно 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или 70% или любое значение выше указанных по массе липидного компонента кохлеатов. Предполагается, что все величины и диапазоны между данными величинами включены в настоящее изобретение. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения фосфолипид содержит 45-70% фосфатидилсерина сои. В более предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения фосфолипид содержит 45-55% фосфатидилсерина сои.
Фосфатидная кислота является предпочтительным фосфолипидом, в случае присутствия в улучшенных кохлеатах по изобретению дополнительного фосфолипида помимо фосфатидилсерина. Другие фосфолипиды в дополнение к фосфатидной кислоте, которые можно применять в улучшенных кохлеатах по изобретениию, включают фосфатидилхолин, фосфатидилинозитол и фосфатидилглицерин. Смеси дополнительных фосфолипидов можно также применять в сочетании с соевым фосфатидилсерином.
Исходный материал фосфатидилсерина сои является коммерчески доступным или может быть выделен из композиции фосфолипидов сои, которые представляют собой смеси нескольких фосфолипидов сои, в соответствии с хорошо известными и стандартными методами очистки.
Для осаждения кохлеатов из исходных липосомных материалов можно применять любое мультивалентное соединение. В предпочтительном случае мультивалентные соединения представляют собой двухвалентные катионы, такие как Са++, Zn++, Ва++ и Mg++. Предпочтительные источники данных катионов включают хлоридные соли кальция, цинка, бария и магния. CaCl2 является особенно предпочтительным источником двухвалентных катионов.
В одном варианте реализации настоящего изобретения данные кохлеаты из фосфатидилсерина сои могут дополнительно содержать соли желчных кислот. Массовое соотношение фосфолипида на основе сои к солям желчных кислот составляет от 20:1 до 0.5:1, предпочтительно от 10:1 до 3:1.
Соли желчных кислот представляют собой желчные кислоты, соединенные с катионом, обычно, натрия. Желчные кислоты представляют собой стероидные кислоты, которые обнаруживают преимущественно в желчи млекопитающих. Желчные кислоты являются коммерчески доступными (например, Sigma - Aldrich каталожный номер #48305 Fluka холевой кислоты натриевая соль, ~50% дезоксихолевой кислоты натриевая соль, ~50%).
Неожиданно было обнаружено, что добавление солей желчных кислот увеличивает эффективность включения в кохлеаты для кохлеатов из фосфатидилсерина сои. Например, при добавлении солей желчных кислот, кохлеаты из фосфатидилсерина сои согласно настоящему изобретению (например, при использовании 50% ФС сои) более эффективны при включении в кохлеат, чем кохлеаты, содержащие по меньшей мере 75% фосфатидилсерина сои.
В одном варианте реализации настоящего изобретения данные кохлеаты из фосфатидилсерина сои получают способом, который включает стадии:
a. приготовления липосом в водной среде, причем липосомы имеют (i) липидный бислой, содержащий соевый фосфатидилсерин в количестве примерно 40%-74% (предпочтительно 45-70%, более предпочтительно 45-55%) по массе липидного бислоя и (ii) наполнение из биологически активного агента;
b. добавления мультивалентного катиона к суспензии липосом из стадии (а) для получения кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента; и
c. сбора кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента.
В одном варианте реализации настоящего изобретения водная среда, содержащая суспензию липосом, представляет собой забуференную среду, с рН 6,5-7,5, и наполнение из биологически активного агента имеет рН 10 или выше перед добавлением к липосомам. В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения суспензия липосом забуферена фосфатом.
В другом варианте реализации настоящего изобретения способ дополнительно включает стадию добавления солей желчных кислот к суспензии липосом из стадии (а) перед стадией (b) или добавление солей желчных кислот к кохлеатам из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента после стадии (b), причем массовое соотношение липидного бислоя к солям желчных кислот составляет от 20:1 до 0,5:1, предпочтительно от 10:1 до 3:1.
Согласно настоящему изобретению предложена композиция в форме полых частиц, которая содержит (1) липидный монослой, включающий фосфолипид на основе сои, содержащий примерно 40%-74% (предпочтительно 45-70%, более предпочтительно 45-55%) по массе фосфатидилсерина сои, расположенный вокруг гидрофобной области; и (2) липидную прослойку, размещенную около липидного монослоя, причем липидная прослойка содержит структуру чередующихся катионных слоев, включающих двухвалентный катион, и отрицательно заряженных пластинчатых липидных слоев; и вспомогательный фрагмент, связанный с гидрофобным доменом.
Международная публикация заявки № WO 2004/041247 включает способ получения указанной выше композиции в форме полых частиц, содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Биологически активный агент/лекарственное средство (называемые как «наполнение» или лекарственное средство) может быть гидрофобным в водной среде, гидрофильным или амфифильным. Лекарственное средство может представлять собой, не ограничиваясь ими, белок, малый пептид, биологически активный полинуклеотид, противогрибковый агент, противовирусный агент, анестетик, противоинфекционный агент, противоопухолевый агент, иммуносупрессор, стероидное противовоспалительное средство, пищевую добавку, растительный продукт, витамин, нестероидное противовоспалительное средство, транквилизатор или сосудорасширяющее средство. Примеры включают амфотерицин В, ацикловир, адриамицин, витамин А, карбамазепин, мелфалан, нифедипин, индометацин, напроксен, эстрогены, тестостероны, стероиды, фенитоин, эрготамины, каннабиноиды, рапамицин, пропанидид, пропофол, альфадион, эхиномицин, миконазола нитрат, тенипозид, таксаны, паклитаксел и таксотер.
Лекарственное средство может представлять собой полипептид, такой как циклоспорин, ангиотензин I, II и III, энкефалины и их аналоги, адренокортикотропный гормон (АСТН), противовоспалительные пептиды I, II, III, брадикинин, кальцитонин, бета-эндорфин, динорфин, лейкокинин, рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона (LHRH), инсулин, нейрокинины, соматостатин, субстанция Р, тиреотропин-рилизинг-гормон (TRH, ТРГ) и вазопрессин.
Лекарственное средство может представлять собой антиген, не ограничиваясь белковым антигеном. Антиген может также представлять собой углевод или ДНК. Примеры антигенных белков включают гликопротеины оболочки вирусов гриппа или Сендай, белки мембран клеток животных, белки мембран клеток растений, белки мембран бактерий и белки мембран паразитов.
Антиген экстрагируют из частиц, клеток, ткани или организма источника посредством известных способов. Нет необходимости поддерживать биологическую активность антигена. Однако, в некоторых случаях (например, когда белок является мембраносвязанным, или задействован в связывании лиганда, или образует комплекс, который распознается иммунной системой), необходимо поддерживать биологическую активность. В этих случаях применяют экстракционный буфер, содержащий детергент, который не нарушает биологическую активность белка мембраны. Подходящие детергенты включают ионные детергенты, такие как холаты, дезоксихолаты и им подобные или гетерогенные полиоксиэтиленовые детергенты, такие как Tween, BRIG или Triton.
Использование этого способа позволяет восстановить антигены, более конкретно белки, в липосомах с сохранением биологической активности и в конечном итоге осуществить эффективную ассоциацию с кохлеатами. Данный способ позволяет избежать применения органических растворителей, ультразвука или экстремальных рН, температуры или давления, каждый из которых может оказать негативное влияние на эффективное воссоздание антигена с сохранением биологически активной формы.
Улучшенные кохлеаты по изобретению могут включать нагрузку несколькими антигенными молекулами, биологически активными молекулами или лекарственными средствами в качестве подходящих компонентов.
Для выделения структур кохлеатов и для удаления раствора полимера преципитаты кохлеатов повторно промывают буфером, содержащим положительно заряженные молекулы, а более предпочтительно, двухвалентный катион. Добавление положительно заряженных молекул к промывочному буферу гарантирует сохранение структур кохлеатов в течение стадии промывки и их сохранение в форме преципитатов.
Среда, в которой суспендируют кохлеаты, может содержать соль, такую как хлорид натрия, сульфат натрия, сульфат калия, сульфат аммония, сульфат магния, карбонат натрия. Среда может содержать полимеры, такие как Tween 80 или BRIG или Triton. Лекарственные кохлеаты получают посредством разведения в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе (например, в буфере, содержащем двухвалентный катион).
Частицы кохлеатов могут быть кишечнорастворимыми. Частицы кохлеатов можно помещать в желатиновые капсулы, данные капсулы могут быть покрыты кишечнорастворимой оболочкой.
Специалист в данной области может определить наиболее эффективные и терапевтические средства для осуществления лечения посредством реализации настоящего изобретения на практике. Также можно ссылаться на любой из многочисленных документов и ссылок, включая, например «Goodman & Gillman's, The Pharmaceutical Basis for Therapeutics» (6th Ed., Goodman et al., eds., MacMillan Publ. Co., New York, 1980).
Улучшенные кохлеаты из фосфатидилсерина сои согласно настоящему изобретению, содержащие биологически активный агент, удобно вводить пациентам перорально, в результате чего кохлеаты абсорбируются и попадают в кровоток, и биологически активное наполнение доставляется системно. Это является особым преимуществом для нерастворимых в воде лекарственных средств, таких как амфотерицин В и паклитаксел. Кроме того, токсичность многих гидрофобных лекарственных средств существенно снижается, как показано для кохлеатов из фосфатидилсерина сои, содержащих амфотерицин В в качестве наполнения.
Следующие примеры иллюстрируют практическое применение настоящего изобретения, но их не следует рассматривать как ограничивающие его объем.
ПРИМЕР 1. Состав, содержащий кристаллические кохлеаты, нагруженные Амфотерицином В
Методики получения кристаллического состава, содержащего Амфотерицин В, в лабораторном масштабе:
#1.1 Экспериментальный состав:
43 мг (точно 40 мг Амфотерицина В в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) Амфотерицина В в 1,33 мл 0,1 н. NaOH перемешивали с 200 мг диолеоил фосфатидилсерина (DOPS, от Avanti или NOF Corporation) в 6,6 мл 50 мМ фосфатного буфера с рН 7,4 (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих Амфотерицин В. К полученной смеси затем добавляли 29,3 мг хлорида кальция с получением кристаллических кохлеатов. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов массовое соотношение липид : Амфотерицин В составляло примерно 5:1.
#1.2 Экспериментальный состав:
18 мг Амфотерицина В в 0,6 мл 0,1 н. NaOH затем перемешивали с 90 мг DOPS (от Avanti или NOF Corporation) в 3,0 мл 50 мМ фосфатного буфера с рН 7,4 (липосомы фильтровали через 5 мкм, 8 мкм и 4,5 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих Амфотерицин В. К полученной смеси затем добавляли 0,33 мл 0,5 М раствора хлорида кальция с получением кристаллических кохлеатов, нагруженных Амфотерицином В. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов массовое соотношение липид : Амфотерицин В составляло примерно 5:1.
Методики получения кристаллических кохлеатов, нагруженных Амфотерицином В, (Амфотерицин В) в малом масштабе:
#1.3 Экспериментальный состав:
399 мг (точно 372 мг в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) Амфотерицина В в 12,4 мл 0,1 н. раствора NaOH объединяли с 1,86 г 50% соевого ФС (American Lecithin Company или Lipoid LLC) в 62 мл 50 мМ фосфатного буфера с рН 7,4 (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих Амфотерицин В. Для того чтобы добавить антиоксидант к суспензии, к смеси липосом затем добавляли 372 мг витамина Е в 3,72 мл этилового спирта. К полученной смеси затем добавляли 520 мг хлорида кальция в виде порошка с получением кристаллических кохлеатов, нагруженных Амфотерицином В. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных Амфотерицином В, массовое соотношение липид : Амфотерицин В составляло примерно 5:1.
Методики получения кристаллического состава, содержащего Амфотерицин В, в масштабе до 4,5 л:
#1.4 Экспериментальный состав:
22,75 г Амфотерицина В (точно 21,2 г Амфотерицина В в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) в 707 мл 0,1 н. раствора NaOH затем перемешивали с 106 г 50% соевого ФС в 3,533 л 50 мМ фосфатного буфера с рН 7,4 (липосомы фильтровали через 10 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих Амфотерицин В. Для получения стабильной суспензии кохлеатов затем к смеси добавляли 372 мг витамина Е в 3,72 мл этилового спирта. К полученной смеси затем добавляли 194,8 мл 1М хлорида кальция с получением кристаллических кохлеатов. Конечный продукт в форме кохлеатов лиофилизировали с помощью лиофильной сушилки в течение нескольких дней. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных Амфотерицином В, массовое соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 5:1.
ПРИМЕР 2. Состав, содержащий кохлеаты в форме полых частиц, нагруженные Куркумином (гранулированным)
Методики получения кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных Куркумином (гранулированным), в малом масштабе:
#2.1 Экспериментальный состав:
Сначала растворяли 50 мг куркумина в 1 г касторового масла и 4,0 мл этилового спирта, затем объединяли с 19 мг 75% соевого ФС (American Lecithin Company или Lipoid LLC) в 100 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих куркумин. Для снижения клейкости суспензии и диффузии смеси, к смеси липосом затем добавляли 500 мг бычьего сывороточного альбумина («БСА» или казеина). К полученной смеси затем добавляли 16,9 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных куркумином. Конечный продукт в форме кохлеатов в форме полых частиц лиофилизировали с помощью лиофильной сушилки в течение нескольких дней. Для получения оптимальных кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных куркумином, массовое соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 20:1.
#2.2 Экспериментальный состав:
100 мг 75% соевого ФС в 100 мг стерильной воды (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) перемешивали с 500 мг казеина (или БСА) и затем перемешивали с 50 мг куркумина в 2,0 г касторового масла и 4,0 мл этилового спирта с получением липосом, содержащих куркумин. К полученной смеси затем добавляли 16,9 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов в форме полых частиц. Конечный продукт в форме кохлеатов в форме полых частиц лиофилизировали с помощью лиофильной сушилки в течение нескольких дней. Для получения оптимальных кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных куркумином, массовое соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 20:1.
Методики получения кристаллического состава, содержащего Куркумин (гранулированный), в малом масштабе:
#2.3 Экспериментальный состав:
1000 мг 75% соевого ФС в 100 мл стерильной воды объединяли с 20 мг куркумина в 4,0 мл этилового спирта с получением липосом, содержащих куркумин (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр). Чтобы помочь стабилизации лекарственного средства в липидном бислое к суспензии липосом затем добавляли 500 мг казеина (или БСА). К полученной смеси затем добавляли 16,9 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кристаллических кохлеатов. Конечный продукт в виде кристаллических кохлеатов лиофилизировали с помощью лиофильной сушилки в течение нескольких дней. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов массовое соотношение липид : куркумин составляло примерно 50:1.
#2.4 Экспериментальный состав:
1000 мг 75% соевого ФС в 100 мл стерильной воды объединяли с 20 мг куркумина в 4,0 мл этилового спирта с получением липосом, содержащих куркумин (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр). К полученной смеси затем добавляли 16,9 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кристаллических кохлеатов. Чтобы помочь стабилизации лекарственного средства в липидном бислое к суспензии кохлеатов затем добавляли 500 мг казеина (или БСА). Конечный продукт в виде кристаллических кохлеатов лиофилизировали с помощью лиофильной сушилки в течение нескольких дней. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов массовое соотношение липид : куркумин составляло примерно 50:1.
ПРИМЕР 3. Состав в форме полых частиц, содержащий Амфотерицин В (Amphotericin В)
Методики получения состава в форме полых частиц, содержащего Амфотерицин В (Amphotericin В), в лабораторном масштабе:
#3.1 Экспериментальный состав:
7,5 мг Амфотерицина В (точно 7 мг в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) в 0,2 мл 0,1 н. раствора NaOH перемешивали с 50 мг касторового масла и затем объединяли с 35 мг 50% соевого ФС в 1,75 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) с получением липосом в форме полых частиц, содержащих Амфотерицин В. Для предотвращения клейкости состава в форме полых частиц, содержащего Амфотерицин В, затем к смеси липосом в форме полых частиц, содержащих Амфотерицин В, добавляли 21 мг БСА или казеина. Для повышения стабильности состава в форме полых частиц, содержащего Амфотерицин В, затем к смеси липосом в форме полых частиц добавляли 7 мг витамина Е в 70 мкл этилового спирта. К полученной смеси затем добавляли 127 мкл 0,5 М хлорида кальция с получением кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных Амфотерицином В. Для получения оптимальных кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных Амфотерицином В, массовое соотношение липид : Амфотерицин В составляло примерно 5:1.
Методики получения состава в форме полых частиц, содержащего Амфотерицин В, в масштабе до 150 мл:
#3.2 Экспериментальный состав:
536 мг Амфотерицина В (точно 500 мг в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) в 14,3 мл 0,1 н. раствора NaOH затем перемешивали с 3,57 г касторового масла и затем объединяли с 2,5 г 50% соевого ФС в 125 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) с получением липосом в форме полых частиц, содержащих Амфотерицин В. Для предотвращения клейкости состава в форме полых частиц, затем к смеси липосом в форме полых частиц добавляли 1,5 г БСА или казеина. Для повышения стабильности состава в форме полых частиц, содержащего Амфотерицин В, затем к смеси липосом в форме полых частиц добавляли 250 мг витамина Е в 2,5 мл этилового спирта. К полученной смеси затем добавляли 8,88 мл 0,5 М хлорида кальция с получением кохлеатов в форме полых частиц. рН конечной смеси доводили до нейтрального посредством 0,3 мл 1 н. HCl. Для получения оптимальных кохлеатов в форме полых частиц, нагруженных Амфотерицином В, массовое соотношение липид : Амфотерицин В составляло примерно 5:1.
#3.3 Экспериментальный состав:
2,5 г 50% соевого ФС в 125 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5 мкм фильтр) перемешивали с 1,5 г БСА или казеина и затем объединяли с 536 мг Амфотерицина В (точно 500 мг в пересчете на активное вещество с концентрацией 0,932 мг/мг) в 14,3 мл 0,1 н. раствора NaOH с 3,57 г касторового масла с получением липосом, содержащих Амфотерицин В. Для получения стабильного состава в форме полых частиц затем к смеси липосом в форме полых частиц добавляли 250 мг витамина Е в 2,5 мл этилового спирта. рН конечной смеси доводили до нейтрального посредством 0,3 мл 1 н. HCl. К полученной смеси затем добавляли 8,88 мл 0,5 М хлорида кальция с получением кохлеатов в форме полых частиц. Кохлеаты в форме полых частиц затем концентрировали с применением лиофилизации для получения кохлеатов в форме полых частиц со стерильной водой в любых концентрациях (на основании требований эксперимента) с массовым соотношением липид : Амфотерицин В примерно 5:1.
ПРИМЕР 4. Состав, содержащий кристаллические кохлеаты, нагруженные Амикацином, для исследования in vitro
Методика получения состава, содержащего амикацин, для исследования in vitro:
#4.1 Экспериментальный состав:
2 мг амикацина в 1,0 мл дистиллированной деионизированной воды (D.D) фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Затем доводили концентрацию лекарственного средства амикацина в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных амикацином, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#4.2 Экспериментальный состав:
2 мг амикацина в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 15 мг хлорида натрия в 52 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию амикацина в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,066 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных амикацином, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#4.3 Экспериментальный состав:
2 мг амикацина в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 76 мг хлорида натрия в 264 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию амикацина в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,33 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных амикацином, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#4.4 Экспериментальный состав:
2 мг амикацина в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 152 мг хлорида натрия в 524 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию амикацина в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,66 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных амикацином, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
ПРИМЕР 5. Состав, содержащий кристаллические кохлеаты, нагруженные Амикацином, для исследования in vivo
Методика получения состава, содержащего амикацин, для исследования in vivo:
#5.1 Экспериментальный состав:
200 мг амикацина в 20 мл D.D. воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 2000 мг 50% соевого ФС в 200 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 17 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Кохлеаты затем концентрировали посредством лиофилизации с получением кристаллических кохлеатов (примерно 6,7 мг/мл) с соотношением липид : амикацин примерно 10:1.
#5.2 Экспериментальный состав:
200 мг амикацина в 20 мл D.D. воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 2000 мг 50% соевого ФС в 200 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих амикацин. К полученной смеси затем добавляли 17 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 1125,2 мг хлорида натрия в 3,88 мл стерильной воды. Кохлеаты затем концентрировали посредством лиофилизации с получением кристаллических кохлеатов (примерно 6,7 мг/мл и 0,66 М хлорида натрия) с соотношением липид : амикацин примерно 10:1.
ПРИМЕР 6. Исследование состава, содержащего кристаллические кохлеаты, нагруженные аминогликозидами, in vitro
Макрофаги и инфицирование
Клеточные линии: клеточная линия перитонеальных макрофагов мыши (Raw 246.7), и/или ТНР-1, клеточная линия макрофагов человека. Клетки культивировали в DMEM и RPMI-1640, соответственно, с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки, инактивированной нагреванием. Монослои макрофагов создавали добавлением 105 макрофагов в 24-луночный планшет для культивирования тканей. Через 24 часа монослои инфицировали, и инфицирование проводили в течение 1 часа, и затем экстрацеллюлярные бактерии удаляли посредством промывания. Содержимое нескольких лунок лизировали и высевали на агаровый планшет Middlebrook 7Н10 для определения внутриклеточного инокулята бактерий. Остальные лунки ежедневно обрабатывали кохлеатами, нагруженнымиразличными аминогликозидами, (например, амикацином, гентамицином и паромомицином), полученными в соответствии с заявленным способом. После обработки монослои клеток лизировали, и лизат высевали на 7Н10 агар для количественной оценки внутриклеточной нагрузки.
Как показано в Таблице 1, кохлеаты, нагруженные аминогликозидами, имеют повышенную эффективность против различных бактерий по сравнению с соответствующими свободными лекарственными средствами, не включенными в кохлеаты.
ПРИМЕР 7. Исследование состава, содержащего кристаллические кохлеаты с Амикацином in vitro
Способы: Как показано в примере 4, составы с амикацином, (Amkcch) оптимизировали по эффективности включения амикацина в кохлеат и размеру частиц посредством варьирования типа используемого ФС, соотношения ФС : биологически активный агент, соотношения ФС : Са++ и концентрации NaCl. Эффективность Amkcch против интрацеллюлярных Ма инфекций оценивали in vitro с использованием перитонеальных макрофагов мыши, инфицированных М. avium, штаммами MAC 101 или MAC 109. Клетки перитонеальных макрофагов мыши (Mo) Raw 264.7 высевали по 105 клеток/лунка. Монослои Мо инфицировали при соотношении 1:10 в течение 1 часа и удаляли экстрацеллюлярные бактерии. Монослои обрабатывали свободным амикацином и/или лекарственным средством в форме кохлеатов в течение 4 дней и определяли количество интрацеллюлярных бактерий. Количественное определение повторяли трижды.
Результаты: Необработанные контрольные Ма штаммы выросли в культуре клеток Мо от 3,8'105 до 4,9'106. Ма в клетках Мо, обработанных свободным амикацином (10 и 20 мг/мл), были элиминированы до 6,1 и 3,4'104 бактерий, соответственно. Оптимизированные Amkcch (10 и 20 мг/мл) продемонстрировали эффективность, повышенную более чем в 10 раз, уменьшение количества бактерий до 3,9 и 1,7'103 бактерий в клетках Мо (р<0,05 в сравнении со свободным амикацином).
Выводы: Как показано на фигуре 1, составы кохлеатов, нагруженных амикацином, являются в 10-50 раз более активными, чем свободный амикацин, против инфекции М. avium в макрофагах. Лекарственные средства в форме кохлеатов, нагруженных амикацином, показали значительную и увеличенную активность против Ма штаммов в макрофагах, из чего можно предположить, что кохлеаты достигают более высокой внутриклеточной концентрации и в течение более длительного времени, чем свободный амикацин.
ПРИМЕР 8. Исследование состава, содержащего кристаллические кохлеаты с Амикацином, in vivo
Разработана конструкция кохлеатов, включающих амикацин. Эффективность кохлеатов, нагруженных амикацином, in vivo против Mycobacterium avium complex (MAC) оценивали с применением линии черных мышей C57BL/6.
- Мышей, 12/группа, инфицировали М. avium 101 (8,1×107 бактерий/мышь) посредством инъекции в хвостовую вену.
- Через 7 дней отбирали 6 мышей и определяли количество MAC в селезенке для установления базового уровня бактериальной нагрузки (Время 0).
- Мышей обрабатывали различными кохлеатами, нагруженными амикацином, как показано на фигурах 2 и 3
- по 1,0 мг амикацина/день в течение 2 недель.
- Мышей отбирали на неделе 3 и через 2 дня (после 2 недель обработки), селезенки гомогенизировали и высевали на агар 7Н10.
- Подсчитывали колонии на планшетах и анализировали данные.
Как продемонстрировано на фигурах 2 и 3, кохлеаты, нагруженные амикацином, вводимые внутрибрюшинно или перорально, были активными, уменьшая количество бактериальной нагрузки в селезенке. Лекарственное средство в форме кохлеатов, включающих амикацин, с высокой концентрацией соли вводили перорально.
Вывод: Пероральное введение составов в форме кохлеатов, нагруженных амикацином, демонстрирует эффективность in vivo, аналогичную внутрибрюшинной доставке свободного амикацина.
ПРИМЕР 9. Способ получения составов с высоким содержанием соли, содержащих аминогликозиды, для исследования in vitro
#9.1 Экспериментальный состав:
2 мг аминогликозида в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Затем доводили концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#9.2 Экспериментальный состав:
2 мг аминогликозида в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 15 мг хлорида натрия в 52 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию аминогликозида в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,066 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#9.3 Экспериментальный состав:
2 мг аминогликозида в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 76 мг хлорида натрия в 264 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию аминогликозида в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,33 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
#9.4 Экспериментальный состав:
2 мг аминогликозида в 1,0 мл D.D воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы фильтровали через 5, 0,8 и 0,45 мкм фильтр) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,206 мл 0,1 М хлорида кальция с получением кохлеатов. Чтобы уменьшить размер агрегации кристаллических кохлеатов, к смеси кохлеатов затем добавляли 152 мг хлорида натрия в 524 мкл стерильной воды. Затем доводили концентрацию аминогликозида в смеси до 0,5 мг/мл стерильной водой. При этом конечный продукт содержал 0,66 М хлорида натрия. Для получения оптимальных кристаллических кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, соотношение липид : лекарственное средство составляло примерно 10:1.
Процент включения в кохлеаты определяли посредством измерения количества амикацина в супернатанте (нингидриновый метод) после образования кохлеатов и последующего центрифугирования. Количество в супернатанте затем вычитали из общего количества в процессе включения в кохлеаты. Это обозначено в виде процентов в супернатанте. Чем ниже процент в супернатанте, тем выше эффективность включения в кохлеаты. Результаты, приведенные в таблице 2, четко демонстрируют, что 50% соевый ФС является более эффективным при включении в кохлеаты, чем 85% ФС.
Процент включения в кохлеаты определяли посредством измерения количества амикацина в супернатанте (нингидриновый метод) после образования кохлеатов и последующего центрифугирования. Количество в супернатанте затем вычитали из общего количества в процессе включения в кохлеаты. Это обозначено в виде процентов в супернатанте. Чем ниже процент в супернатанте, тем выше эффективность включения в кохлеаты. Результаты, приведенные в таблице 3, четко демонстрируют, что 50% соевый ФС является более эффективным при включении в кохлеаты, чем 85% ФС.
Процент включения в кохлеаты определяли посредством измерения количества амикацина в супернатанте (нингидриновый метод) после образования кохлеатов и последующего центрифугирования. Количество в супернатанте затем вычитали из общего количества в процессе включения в кохлеаты. Это обозначали в виде процентов в супернатанте. Чем ниже процент в супернатанте, тем выше эффективность включения в кохлеаты. Результаты, приведенные в таблице 4, четко демонстрируют, что 50% соевый ФС является более эффективным при включении в кохлеаты, чем 99,99% ФС.
На фигуре 4 показано включение в кохлеаты гентамицина в зависимости от свойств ФС. Аналогично таблицам 1-3, результаты, приведенные на фигуре 4, четко демонстрируют, что 50% соевый ФС является более эффективным при включении в кохлеаты гентамицина при низких концентрациях солей желчных кислот, чем 85% ФС или 99,99% ФС.
ПРИМЕР 10. Эффективность включения в кохлеаты Амикацина, Гентамицина и Паромомицина с солями желчных кислот
#10.1 Методика получения состава, содержащего аминогликозид, с солями желчных кислот (после кальция) для исследований in vitro.
Кристаллические кохлеаты для состава, содержащего аминогликозид, с различными количествами солей желчных кислот (Sigma - Aldrich каталожный номер #48305 Fluka холевой кислоты натриевая соль, ~50% дезоксихолевой кислоты натриевая соль, ~50%):
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, затем добавляли 20,4 мг солей желчных кислот. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 11,3 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси кохлеатов, нагруженных аминогликозидом затем добавляли 13,6 мг солей желчных кислот. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 7,8 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, затем добавляли 6,8 мг солей желчных кислот. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 3,9 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, затем добавляли 3,4 мг солей желчных кислот. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 1,95 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, затем добавляли 1,7 мг солей желчных кислот. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 0,97 мМ.
#10.2 Методика получения состава, содержащего аминогликозид, с солями желчных кислот (до кальция) для исследований in vitro.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси липосом, содержащих аминогликозид, затем добавляли 20,4 мг солей желчных кислот. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 11,3 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси липосом, содержащих аминогликозид, затем добавляли 13,6 мг солей желчных кислот. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 7,8 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50%» соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси липосом, содержащих аминогликозид, затем добавляли 6,8 мг солей желчных кислот. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 3,9 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси липосом, содержащих аминогликозид, затем добавляли 3,4 мг солей желчных кислот. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 1,95 мМ.
Аминогликозид, 2 мг в 0,2 мл стерильной воды фильтровали через 0,22 мкм фильтр и объединяли с 20 мг липосом 50% соевого ФС в 2,0 мл стерильной воды (липосомы соевого ФС сначала фильтровали через 5, 0,8, 0,45 мкм фильтры) с получением липосом, содержащих аминогликозид. Для того чтобы уменьшить размер частиц кохлеатов, включающих аминогликозид, к смеси липосом, содержащих аминогликозид, затем добавляли 1,7 мг солей желчных кислот. К полученной смеси затем добавляли 0,159 мл 0,1 М хлорида кальция при интенсивном перемешивании с получением кохлеатов, нагруженных аминогликозидом. Затем концентрацию лекарственного средства аминогликозида в смеси доводили тем же буфером, что и суспензию, до 0,5 мг/мл. Конечные составы кохлеатов, нагруженных аминогликозидом, содержали 0,97 мМ.
На фигурах 5-11 показана эффективность включения в кохлеаты аминогликозидов с солями желчных кислот, включая амикацин с солями желчных кислот, гентамицин с солями желчных кислот и паромомицин с солями желчных кислот.
Процент включения в кохлеаты определяли посредством измерения количества аминогликозида с солями желчных кислот в супернатанте (нингидриновый метод) после образования кохлеатов и последующего центрифугирования. Количество в супернатанте затем вычитали из общего количества в процессе включения в кохлеаты. Данные результаты четко демонстрируют, что 50% соевый ФС является более эффективным при включении в кохлеаты при более низких концентрациях солей желчных кислот, чем 75% ФС или 99,99% ФС. А - соли желчных кислот, добавленные после включения в кохлеаты. В - соли желчных кислот, добавленные до включения в кохлеаты.
Claims (35)
1. Кохлеат для доставки биологически активного агента, содержащий:
фосфолипид на основе сои, который содержит 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои,
мультивалентный катион и
биологически активный агент.
2. Кохлеат по п. 1, отличающийся тем, что фосфолипид на основе сои представляет собой смесь, состоящую из по меньшей мере фосфатидилсерина сои и фосфатидной кислоты.
3. Кохлеат по п. 1, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из белка, малого пептида, полинуклеотида, аминогликозида, противовирусного агента, анестетика, антибиотика, противогрибкового агента, противоопухолевого агента, иммуносупрессора, стероидного противовоспалительного агента, нестероидного противовоспалительного агента, транквилизатора, пищевой добавки, растительного продукта, витамина или сосудорасширяющего средства.
4. Кохлеат по п. 3, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из аминогликозида, амфотерицина В, ацикловира, адриамицина, карбамазепина, куркумина, мелфалана, нифедипина, индометацина, напроксена, эстрогенов, тестостеронов, стероидов, фенитоина, эрготаминов, каннабиноидов, рапамицина, пропанидида, пропофола, альфадиона, эхиномицина, миконазола нитрата, тенипозида, таксана, паклитаксела и таксотера.
5. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что мультивалентный катион представляет собой Са++, Zn++, Ва++ или Mg++.
6. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что мультивалентный катион представляет собой Са++.
7. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой амфотерицин В.
8. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой куркумин.
9. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой аминогликозид.
10. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой амикацин.
11. Кохлеат по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что кохлеат дополнительно содержит соли желчных кислот.
12. Кохлеат по п. 11, отличающийся тем, что массовое соотношение фосфолипида на основе сои к солям желчных кислот составляет от 20:1 до 0,5:1 или от 10:1 до 3:1.
13. Способ получения кохлеатов из фосфатидилсерина на основе сои/биологически активного агента, который включает стадии:
a. получения липосом в водной среде, причем липосомы включают (i) липидный бислой, содержащий фосфатидилсерин сои в количестве 45% - 55% по массе липидного бислоя и (ii) нагрузку из биологически активного агента;
b. добавления мультивалентного катиона к суспензии липосом из стадии (а) с образованием кохлеатов из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента; и
c. сбора кохлеатов из фосфатидилсерина на основе сои/биологически активного агента.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что водная среда из стадии (а), содержащая суспензию липосом, представляет собой забуференную среду с рН 6,5-7,5, и нагрузка из биологически активного агента имеет рН 10 или выше перед добавлением к липосомам.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что суспензия липосом забуферена фосфатом.
16. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из белка, малого пептида, полинуклеотида, противовирусного агента, анестетика, антибиотика, противогрибкового агента, противоопухолевого агента, иммуносупрессора, стероидного противовоспалительного агента, нестероидного противовоспалительного агента, транквилизатора, пищевой добавки, растительного продукта, витамина или сосудорасширяющего средства.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из аминогликозида, амфотерицина В, ацикловира, адриамицина, карбамазепина, куркумина, мелфалана, нифедипина, индометацина, напроксена, эстрогенов, тестостеронов, стероидов, фенитоина, эрготаминов, каннабиноидов, рапамицина, пропанидида, пропофола, альфадиона, эхиномицина, миконазола нитрата, тенипозида, таксана, паклитаксела и таксотера.
18. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что мультивалентный катион представляет собой Са++, Zn++, Ва++ или Mg++.
19. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что мультивалентный катион представляет собой Са++.
20. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой амфотерицин В.
21. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой куркумин.
22. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что биологически активный агент представляет собой амикацин.
23. Способ по любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что массовое соотношение липидного бислоя к биологически активному агенту составляет от примерно 3:1 до примерно 20:1.
24. Способ по любому из пп. 13-15, дополнительно включающий стадию добавления солей желчных кислот к суспензии липосом из стадии (а) перед стадией (b) или добавление солей желчных кислот к кохлеатам из фосфатидилсерина сои/биологически активного агента после стадии (b), причем массовое соотношение липидного бислоя к солям желчных кислот составляет от 20:1 до 0,5:1.
25. Способ по п. 24, в котором массовое соотношение липидного бислоя к солям желчных кислот составляет от 10:1 до 3:1.
26. Способ лечения пациента с грибковой инфекцией, который включает введение пациенту эффективного количества кохлеата, который содержит (i) фосфолипид на основе сои, включающий 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои, (ii) мультивалентный катион и (iii) противогрибковый агент.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что противогрибковый агент представляет собой амфотерицин В.
28. Способ лечения пациента с бактериальной инфекцией, который включает введение пациенту эффективного количества кохлеата, который содержит (i) фосфолипид на основе сои, включающий 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои, (ii) мультивалентный катион и (iii) антибиотический агент.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что антибиотический агент представляет собой амикацин.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261677414P | 2012-07-30 | 2012-07-30 | |
| US61/677,414 | 2012-07-30 | ||
| US201361835825P | 2013-06-17 | 2013-06-17 | |
| US61/835,825 | 2013-06-17 | ||
| PCT/US2013/052756 WO2014022414A1 (en) | 2012-07-30 | 2013-07-30 | Cochleates made with soy phosphatidylserine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015105881A RU2015105881A (ru) | 2016-09-20 |
| RU2659729C2 true RU2659729C2 (ru) | 2018-07-03 |
Family
ID=50028476
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015105881A RU2659729C2 (ru) | 2012-07-30 | 2013-07-30 | Кохлеаты, полученные с использованием фосфатидилсерина сои |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US20150297725A1 (ru) |
| EP (2) | EP2879502B1 (ru) |
| JP (2) | JP6444865B2 (ru) |
| KR (1) | KR102115718B1 (ru) |
| CN (1) | CN105050409B (ru) |
| AU (1) | AU2013296651B2 (ru) |
| BR (1) | BR112015001892B1 (ru) |
| CA (1) | CA2879931C (ru) |
| DK (1) | DK2879502T3 (ru) |
| ES (1) | ES2688397T3 (ru) |
| HK (1) | HK1211181A1 (ru) |
| MX (1) | MX361155B (ru) |
| RU (1) | RU2659729C2 (ru) |
| WO (1) | WO2014022414A1 (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105050409B (zh) | 2012-07-30 | 2018-05-25 | 马丁尼斯生物制药纳米技术公司 | 使用大豆磷脂酰丝氨酸制备的脂质卷 |
| AU2016226151B2 (en) * | 2015-03-03 | 2021-02-25 | Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. | Cochleates and methods of using the same to enhance tissue penetration of pharmacologically active agent |
| JP6923206B2 (ja) * | 2015-04-22 | 2021-08-18 | マティナス バイオファーマ ナノテクノロジーズ，インコーポレーテッド | マイコバクテリア感染症及び肺疾患を治療するための組成物及び方法 |
| EP3310338A4 (en) * | 2015-06-18 | 2018-12-26 | Matinas BioPharma Nanotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating inflammatory disease or conditions |
| CA3005700A1 (en) * | 2015-12-16 | 2017-06-22 | Vivek Anand PARACHUR | Tri-molecular complex of natural compounds |
| CN114053417A (zh) * | 2016-07-12 | 2022-02-18 | 马丁尼斯生物制药纳米技术公司 | 用于中枢神经系统递送和治疗隐球菌感染的脂质卷包封的抗真菌化合物 |
| CN111491639A (zh) * | 2017-09-20 | 2020-08-04 | 异位性医疗有限责任公司 | 用于治疗和改善呼吸道病况和粘膜炎症的组合物和方法 |
| KR101989789B1 (ko) * | 2017-11-30 | 2019-06-18 | (주) 에이치엔에이파마켐 | 포스파티딜세린/음이온계면활성제/염화칼슘을 이용한 코킬레이트 |
| ES1245259Y (es) | 2019-05-10 | 2020-08-24 | Bionova Slu | Emulsiones de los cannabinoides del aceite de cáñamo |
| WO2022152939A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | Conserv Bioscience Limited | Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof |
| WO2023183297A1 (en) * | 2022-03-21 | 2023-09-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Ion channel prosthetic compositions comprising lipid-coated crystals of amphotericin b |
| WO2024039733A1 (en) | 2022-08-16 | 2024-02-22 | Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. | Methods of controlling lipid nanocrystal particle size and lipid nanocrystals produced by such methods |
| WO2024039729A1 (en) | 2022-08-16 | 2024-02-22 | Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. | Antifungal agent encapsulated in a lipid nanocrystal for treating mucormycosis |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4663161A (en) * | 1985-04-22 | 1987-05-05 | Mannino Raphael J | Liposome methods and compositions |
| US6663885B1 (en) * | 1993-03-15 | 2003-12-16 | A. Natterman & Cie Gmbh | Aqueous liposome system and a method for the preparation of such a liposome system |
| US20050008686A1 (en) * | 2003-01-15 | 2005-01-13 | Mannino Raphael J. | Cochleate preparations of fragile nutrients |
| US20050013855A1 (en) * | 2003-04-09 | 2005-01-20 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Cochleate compositions directed against expression of proteins |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8919172D0 (en) | 1989-08-23 | 1989-10-04 | Univ Nottingham | Useful composition |
| JPH0550062A (ja) | 1991-05-29 | 1993-03-02 | Toray Ind Inc | 水溶液の浄化法 |
| CA2123780A1 (en) * | 1991-12-11 | 1993-06-24 | Ronald A. Pieringer | Amphotericin b composition with enhanced antifungal activity |
| AU3244393A (en) | 1992-12-02 | 1994-06-22 | Vestar, Inc. | Antibiotic formulation and process |
| US5554382A (en) * | 1993-05-28 | 1996-09-10 | Aphios Corporation | Methods and apparatus for making liposomes |
| AU4981896A (en) * | 1995-02-14 | 1996-09-04 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Liposome composition and method for administering liposome-loadable drugs |
| US6120751A (en) * | 1997-03-21 | 2000-09-19 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Charged lipids and uses for the same |
| JP3697189B2 (ja) | 2001-01-11 | 2005-09-21 | 日清オイリオグループ株式会社 | リン脂質の塩基交換方法 |
| DE10109898A1 (de) * | 2001-02-21 | 2002-09-05 | Novosom Gmbh | Lipide mit veränderlicher Ladung |
| DE60220519T2 (de) * | 2001-04-20 | 2007-09-27 | The University Of British Columbia, Vancouver | Mizellares arzneistoffverabreichungssystem für hydrophobe arzneistoffe |
| US20030219473A1 (en) * | 2002-03-26 | 2003-11-27 | Leila Zarif | Cochleates made with purified soy phosphatidylserine |
| DE10228680A1 (de) * | 2002-06-27 | 2004-01-22 | Holden Development Limited, Tortola | Grundlage für transdermale Formulierungen (PTF) |
| AU2003254598A1 (en) | 2002-08-06 | 2004-02-23 | Tuo Jin | Cochleates without metal cations as the bridging agents |
| AU2003275850A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-05-13 | Vasogen Ireland Limited | Cyclooxygenase regulation with ps liposomes |
| US7879351B2 (en) | 2002-10-29 | 2011-02-01 | Transave, Inc. | High delivery rates for lipid based drug formulations, and methods of treatment thereof |
| EP1562557B2 (en) * | 2002-11-01 | 2016-11-16 | University of Medicine and Dentistry of New Jersey | Geodate delivery vehicles |
| US20050013854A1 (en) * | 2003-04-09 | 2005-01-20 | Mannino Raphael J. | Novel encochleation methods, cochleates and methods of use |
| JP4891522B2 (ja) * | 2003-10-03 | 2012-03-07 | 株式会社ファンケル | 血清ｇｏｔ、ｇｐｔ改善剤 |
| CU20080215A7 (es) | 2008-11-19 | 2012-06-21 | Inst Finlay | Vacunas unitemporales |
| WO2010091090A1 (en) * | 2009-02-03 | 2010-08-12 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Cochleate compositions and methods of use |
| JP5621204B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2014-11-12 | 日油株式会社 | 血管老化予防剤 |
| US20100239521A1 (en) * | 2010-06-01 | 2010-09-23 | Mohammad Reza Mozafari | Method for the preparation of micro- and nano-sized carrier systems for the encapsulation of bioactive substances |
| EP2689775A1 (en) | 2012-07-25 | 2014-01-29 | Instituto Finlay, Centro de Investigacion-Produccion de vacunas y sueros | Cochleate with only one mamp |
| CN105050409B (zh) * | 2012-07-30 | 2018-05-25 | 马丁尼斯生物制药纳米技术公司 | 使用大豆磷脂酰丝氨酸制备的脂质卷 |
-
2013
- 2013-07-30 CN CN201380051033.2A patent/CN105050409B/zh active Active
- 2013-07-30 JP JP2015525517A patent/JP6444865B2/ja active Active
- 2013-07-30 DK DK13826076.5T patent/DK2879502T3/en active
- 2013-07-30 WO PCT/US2013/052756 patent/WO2014022414A1/en active Application Filing
- 2013-07-30 CA CA2879931A patent/CA2879931C/en active Active
- 2013-07-30 MX MX2015001348A patent/MX361155B/es active IP Right Grant
- 2013-07-30 KR KR1020157005368A patent/KR102115718B1/ko active IP Right Grant
- 2013-07-30 RU RU2015105881A patent/RU2659729C2/ru active
- 2013-07-30 EP EP13826076.5A patent/EP2879502B1/en active Active
- 2013-07-30 ES ES13826076.5T patent/ES2688397T3/es active Active
- 2013-07-30 BR BR112015001892-0A patent/BR112015001892B1/pt active IP Right Grant
- 2013-07-30 EP EP18190254.5A patent/EP3461338A1/en not_active Withdrawn
- 2013-07-30 US US14/418,392 patent/US20150297725A1/en not_active Abandoned
- 2013-07-30 AU AU2013296651A patent/AU2013296651B2/en active Active
-
2015
- 2015-01-29 US US14/609,269 patent/US9775907B2/en active Active
- 2015-01-29 US US14/609,235 patent/US9370572B2/en active Active
- 2015-12-09 HK HK15112166.6A patent/HK1211181A1/xx unknown
-
2017
- 2017-11-13 US US15/811,040 patent/US10716860B2/en active Active - Reinstated
-
2018
- 2018-08-14 JP JP2018152560A patent/JP6751424B2/ja active Active
-
2020
- 2020-06-18 US US16/904,824 patent/US11964019B2/en active Active
-
2024
- 2024-03-28 US US18/619,502 patent/US20240316204A1/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4663161A (en) * | 1985-04-22 | 1987-05-05 | Mannino Raphael J | Liposome methods and compositions |
| US6663885B1 (en) * | 1993-03-15 | 2003-12-16 | A. Natterman & Cie Gmbh | Aqueous liposome system and a method for the preparation of such a liposome system |
| US20050008686A1 (en) * | 2003-01-15 | 2005-01-13 | Mannino Raphael J. | Cochleate preparations of fragile nutrients |
| US20050013855A1 (en) * | 2003-04-09 | 2005-01-20 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Cochleate compositions directed against expression of proteins |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МАЙСКИЙ В. В. "Элементарная фармакология", 2009, стр.422. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2659729C2 (ru) | Кохлеаты, полученные с использованием фосфатидилсерина сои | |
| JP4889485B2 (ja) | 調節性細胞リガンドをリポソームに含有させてなる医薬 | |
| US20100068251A1 (en) | Aqueous Systems For The Preparation Of Lipid Based Pharmaceutical Compounds; Compositions, Methods, And Uses Thereof | |
| US20220362162A1 (en) | Nanoparticles containing cellular membrane and uses thereof | |
| US20160310600A1 (en) | Aqueous Systems For The Preparation Of Lipid Based Pharmaceutical Compounds; Compositions, Methods, And Uses Thereof | |
| JP5225663B2 (ja) | 経口投与薬、ビタミンおよび栄養素の吸収促進および吸収変動性低減のための方法および製剤 | |
| EP2152304A1 (en) | Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same | |
| Ruckmani et al. | Tissue distribution, pharmacokinetics and stability studies of zidovudine delivered by niosomes and proniosomes | |
| US20030219473A1 (en) | Cochleates made with purified soy phosphatidylserine | |
| JP6238366B2 (ja) | 非極性溶媒に分散性を有する細菌菌体成分を内封する脂質膜構造体およびその製造方法 | |
| US20220125833A1 (en) | Vitamin d compositions and methods of use in the treatment of covid-19 and other lipid enveloped viral infections | |
| JP4092367B1 (ja) | リポソームおよびこれを含む免疫賦活活性用組成物。 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |