RU2644201C2 - Вакцины против hpv - Google Patents
Вакцины против hpv Download PDFInfo
- Publication number
- RU2644201C2 RU2644201C2 RU2014129788A RU2014129788A RU2644201C2 RU 2644201 C2 RU2644201 C2 RU 2644201C2 RU 2014129788 A RU2014129788 A RU 2014129788A RU 2014129788 A RU2014129788 A RU 2014129788A RU 2644201 C2 RU2644201 C2 RU 2644201C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- nucleic acid
- sequence
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 52
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 136
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 96
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 85
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims abstract description 40
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 61
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 claims description 36
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 25
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 24
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 20
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 8
- 101100540311 Human papillomavirus type 16 E6 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 claims description 7
- 229960002566 papillomavirus vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 5
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 101710132595 Protein E7 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 abstract description 50
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 40
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 72
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 69
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 22
- 241000388169 Alphapapillomavirus 7 Species 0.000 description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 14
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 14
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 102220207483 rs1057521296 Human genes 0.000 description 9
- 102220056406 rs730880234 Human genes 0.000 description 9
- 102220248709 rs1555729589 Human genes 0.000 description 8
- -1 DNA vaccines Chemical class 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 102220105306 rs879254426 Human genes 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 101000954519 Human papillomavirus type 18 Protein E6 Proteins 0.000 description 5
- 102220580971 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1_F47W_mutation Human genes 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 4
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102100031172 C-C chemokine receptor type 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710149814 C-C chemokine receptor type 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 3
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 3
- 238000009595 pap smear Methods 0.000 description 3
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 2
- 102000004500 CCR1 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017319 CCR1 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000004274 CCR5 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017088 CCR5 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000746783 Homo sapiens Cytochrome b-c1 complex subunit 6, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 241000341657 Human papillomavirus type 18 Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101710132594 Protein E6 Proteins 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 2
- 102000048638 human UQCRH Human genes 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 229940034080 provenge Drugs 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WNNNWFKQCKFSDK-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-aminopent-4-enoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC=C WNNNWFKQCKFSDK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BWKMGYQJPOAASG-VIFPVBQESA-N (3s)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CN[C@H](C(=O)O)CC2=C1 BWKMGYQJPOAASG-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CNC(C(=O)O)CC2=C1 BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 2,2-diaminobutanoic acid Chemical compound CCC(N)(N)C(O)=O BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-thiophen-2-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CS1 WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-QMMMGPOBSA-N 4-chloro-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- XDOLZJYETYVRKV-UHFFFAOYSA-N 7-Aminoheptanoic acid Chemical compound NCCCCCCC(O)=O XDOLZJYETYVRKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 229940124957 Cervarix Drugs 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940124897 Gardasil Drugs 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000777387 Homo sapiens C-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 241000726306 Irus Species 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UCUNFLYVYCGDHP-BYPYZUCNSA-N L-methionine sulfone Chemical compound CS(=O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O UCUNFLYVYCGDHP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UCUNFLYVYCGDHP-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulfone Natural products CS(=O)(=O)CCC(N)C(O)=O UCUNFLYVYCGDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZLNHFMRPBPULJ-VKHMYHEASA-N L-thioproline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CSCN1 DZLNHFMRPBPULJ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- PEMUHKUIQHFMTH-UHFFFAOYSA-N P-Bromo-DL-phenylalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Br)C=C1 PEMUHKUIQHFMTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000011260 Retinoblastoma Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010023377 Retinoblastoma Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 208000037842 advanced-stage tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- MAHPNPYYQAIOJN-UHFFFAOYSA-N azimsulfuron Chemical compound COC1=CC(OC)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2N(N=CC=2C2=NN(C)N=N2)C)=N1 MAHPNPYYQAIOJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 102220347459 c.91C>G Human genes 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 238000002573 colposcopy Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055691 human APC Human genes 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000012768 mass vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102200026988 rs104894204 Human genes 0.000 description 1
- 102200092879 rs28933077 Human genes 0.000 description 1
- 102220086061 rs864622206 Human genes 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940022511 therapeutic cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39575—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from other living beings excluding bacteria and viruses, e.g. protozoa, fungi, plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/521—Chemokines
- C07K14/523—Beta-chemokines, e.g. RANTES, I-309/TCA-3, MIP-1alpha, MIP-1beta/ACT-2/LD78/SCIF, MCP-1/MCAF, MCP-2, MCP-3, LDCF-1, LDCF-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/084—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6056—Antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/892—Reproductive system [uterus, ovaries, cervix, testes]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20071—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретения касаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей гомодимерный белок, гомодимерного белка, аминокислотной цепи, способной формировать гомодимерный белок, их применения для получения лекарственного средства, клетки-хозяина, фармацевтической и вакцинной композиций, способа получения гомодимерного белка или аминокислотной цепи и способа получения вакцины. Представленная молекула нуклеиновой кислоты кодирует гомодимерный белок из двух идентичных аминокислотных цепей, каждая из которых включает: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу. Указанная направляющая единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO: 1. Указанная антигенная единица включает аминокислотную последовательность, полученную из ранних белков Е6 папилломавируса человека (HPV16) и/или HPV18, и аминокислотную последовательность, полученную из раннего белка Е7 из HPV16 и/или HPV18. Представленные изобретения позволяют индуцировать специфичный и сильный иммунный ответ к HPV посредством презентации АПК клетками иммуногенных эпитопов продуктов генов HPV и могут быть использованы в качестве терапевтических соединений при лечении различных заболеваний, вызванных HPV, таких как раковые опухоли и инфекционные заболевания. 9 н. и 16 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к терапевтическим соединениям, таким как вакцины против папилломавируса человека (HPV) и, в частности, к ДНК вакцинам против HPV16 и/или HPV18. Изобретение также относится к белковой конструкции, кодирующей гомодимерные пептиды, которые могут высвобождаться из ДНК вакцины или использоваться отдельно. Также описаны фармацевтические композиции, клетки-хозяева и способы получения вакцин, а также способы лечения различных заболеваний, вызванных HPV, таких как раковые опухоли и инфекционные заболевания, согласно применению.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
На настоящий момент хорошо известно, что папилломавирус человека (HPV) является причиной рака шейки матки и других HPV-ассоциированных злокачественных новообразований, таких как аногентальные (анальные, вульварные, вагинальные и пенильные) раковые опухоли и подгруппа раковых образований головы и шеи. В частности, HPV16 и HPV18 ответственны за приблизительно 70% всех раковых образований шейки матки во всем мире.
На сегодняшний день на рынке присутствуют две профилактических HPV вакцины (Гардасил и Церварикс). Цель профилактических вакцин состоит в том, чтобы вызывать гуморальные иммунные ответы при стимуляции продукции нейтрализующих антител, специфичных к вирусным капсидным белкам HPV - L1 и L2. Хотя профилактические вакцины являются важной вехой в борьбе с вызванным HPV раком шейки матки и, вероятно, другими HPV-ассоциированными злокачественными новообразованиями, эффект этих вакцин не будет существенно проявляться в течение 20-40 лет (Ma B et al., Current Cancer Therapy Reviews, 2010). Кроме того, поскольку охват массовой вакцинации с применением профилактических вакцин до настоящего времени ограничен, в дополнение к существенному проценту населения во всем мире, которые уже инфицированы HPV, HPV-ассоциированный злокачественные новообразования продолжат прогрессировать. Таким образом, будет важно разработать HPV-специфичные терапевтические вакцины для снижения смертности и распространенности HPV-ассоциированных злокачественных новообразований и предшествующих им повреждений (Ma B et al., Current Cancer Therapy Reviews, 2010).
Разработка различных противораковых вакцин и стратегий иммунотерапии рака в течение двух последних десятилетий расширилась. Впрочем, только одна терапевтическая противораковая вакцина, названная Провендж (Provenge, Dendreon INC), была пока одобрена для применения в качестве стандартной терапии рака предстательной железы. В частности, вследствие этических причин большинство терапевтических противораковых вакцин тестируют на группе больных, имеющих поздние стадии опухоли. Данная группа больных имеет в значительной степени ослабленный иммунитет, подразумевая, что клетки опухоли долгое время избегали воздействия иммунной системы и способствовали развитию иммунологической толерантности к опухоли в процессе канцерогенеза. В дополнение, выбор антигенов (опухолеспецифичных или опухолеассоциированных) применяют, поскольку вакцины крайне важны для индукции опухолеспецифичных иммунных ответов и предотвращения гибели здоровых клеток у пациентов, что может приводить к тяжелым нежелательным проявлениям. Таким образом, главные вызовы в иммунотерапии рака заключаются в устранении иммунологической толерантности и активации опухолеспецифических эффекторных функций, чтобы распознавать и убивать опухолевые клетки. Хотя некоторые клинические случаи демонстрируют клинический ответ на терапевтические противораковые вакцины у пациентов с опухолями поздних стадий, наиболее распространенный основной конечный результат состоит в наблюдении воздействия на общую выживаемость по сравнению с обычной терапией (хирургия, химиотерапия и лучевая терапия). Однако большинство исследований либо не являются заключительными, либо им не удается полностью показать это. Одна из причин получения отрицательных результатов состоит в том, что группа пациентов имеет опухоли конечной стадии, которые было сложно лечить изначально. Возможной стратегией может стать включение в испытания терапевтических вакцин пациентов с опухолями ранних стадий.
Одна из стратегий состоит в направленном воздействии на предраковые поражения. Основные сложности для этой стратегии представляет главным образом нехватка надежных биомаркеров, которые специфически экспрессируются в предраковых поражениях во многих тканях, и плохой медицинский скрининг (который либо не существует, либо существующий метод обеспечивает недостаточную чувствительность). В порядке исключения, в случае HPV-индуцированных злокачественных новообразований дело обстоит иначе. Например, большинство западных стран имеют хорошие программы скрининга дисплазии шейки матки и рака шейки матки, который проводят с помощью теста Папаниколау (мазок Папаниколау). Если мазок Папаниколау дает неясные или аномальные результаты, то проводят кольпоскопию (Национальная Коалиция по Раку шейки матки (NCCC)). HPV-анализ также можно рекомендовать некоторым пациентам для обнаружения присутствия HPV высокого онкогенного риска в предраковом поражении. Таким образом, HPV представляет собой потенциальный биомаркер для HPV-ассоциированных предраковых поражений, в частности внутриэпителиальной дисплазии шейки матки (CIN).
ДНК-вакцины показали растущий потенциал для лечения заболеваний человека, в частности рака. ДНК-вакцины индуцируют сильные антигенспецифичные иммунные ответы, при этом их можно вводить многократно для поддержания мишеньспецифичных иммунных ответов. Такие вакцины, как полагают, являются безопасными, а также простыми и дешевыми в крупномасштабном производстве по сравнению с другими форматами противораковых терапевтических средств. Многочисленные иммунотерапевтические вмешательства не способны индуцировать иммунологическую память. В порядке исключения, ДНК вакцинация гарантирует длительное высвобождение вакцинного продукта in vivo, что усиливает антигенспецифичную иммунологическую память. Прямая доставка антигенов в специализированные антигенпрезентирующие клетки (АПК) стимулирует и CD4+, и CD8+ T-клеточные иммунные ответы in vivo. Такие сильные клеточные иммунные ответы, как было продемонстрировано, специфично распознают и эффективно убивают антигенположительные злокачественные клетки in vitro и in vivo.
В уровне техники сохраняется потребность в улучшенных вакцинах для индукции сильных и специфичных иммунных ответов против HPV, который является причиной как инфекционных заболеваний, так и раковых опухолей.
ЦЕЛЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью вариантов осуществления изобретения является предоставление специфичных и высокоэффективных терапевтических соединений, таких как ДНК-вакцины, против заболеваний и состояний, вызванных HPV.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что при комбинировании антигенов продуктов ранних генов E6 и E7 из HPV, например из HPV16 и/или HPV18 с направляющим модулем hMIP-1α, могут быть получены терапевтические вакцины, в которых сильные иммуногенные эпитопы продуктов генов HPV с высокой эффективностью презентируются АПК клеткам, с индукцией специфичного и сильного иммунного ответа. Продукты согласно настоящему изобретению, прежде всего, предполагаются в качестве терапевтических вакцин на основе нуклеиновых кислот, например ДНК-вакцин, в которых конструкция нуклеиновой кислоты, кодирующая Vaccibody конструкцию, используется в качестве терапевтического соединения, ведущего к in vivo продукции белкового продукта в организме лица, получающего вакцину. Впрочем, в качестве альтернативы, сам белковый продукт может быть включен в композицию и использован непосредственно в вакцине.
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к гомодимерному белку из двух идентичных аминокислотных цепей, при этом каждая аминокислотная цепь включает: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив, и (4) антигенную единицу, где указанная направляющая единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO:1, и антигенная единица включает аминокислотную последовательность папилломавируса человека (HPV), например, антигенная единица включает аминокислотную последовательность HPV16 и/или HPV18, например, антигенная единица получена из ранних белков E6 и/или E7 HPV16 и/или HPV18.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотной цепи, включающей: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, где указанная направляющая единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO:1, и антигенная единица включает аминокислотную последовательность папилломавируса человека (HPV), например, антигенная единица включает аминокислотную последовательность HPV16 и/или HPV18, например, антигенная единица получена из ранних белков E6 и/или E7 HPV16 и/или HPV18, где указанная аминокислотная цепь способна формировать гомодимерный белок согласно изобретению.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, такой как ДНК, кодирующей аминокислотную цепь, включающую: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, где указанная направляющая единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO:1, и антигенная единица включает аминокислотную последовательность папилломавируса человека (HPV), например, антигенная единица включает аминокислотную последовательность HPV16 и/или HPV18, например, антигенная единица получена из ранних белков E6 и/или E7 HPV16 и/или HPV18, где указанная аминокислотная цепь способна формировать гомодимерный белок согласно изобретению.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к гомодимерному белку согласно изобретению или аминокислотной цепи согласно изобретению, или молекуле нуклеиновой кислоты согласно изобретению для применения в качестве лекарственного средства.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей гомодимерный белок согласно изобретению или аминокислотную цепь согласно изобретению, или молекулу нуклеиновой кислоты согласно изобретению.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, включающей молекулу нуклеиновой кислоты согласно изобретению.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения гомодимерного белка согласно изобретению или аминокислотной цепи согласно изобретению, где способ включает: a) трансфекцию молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению в популяцию клеток; b) культивирование популяции клеток; c) сбор и очистку гомодимерного белка или аминокислотной цепи, экспрессируемой популяцией клеток.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения вакцины, такой как ДНК-вакцина, включающей иммунологически эффективное количество молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению, где способ включает: a) получение молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению; b) растворение молекулы нуклеиновой кислоты, полученной в этапе a) в фармацевтически приемлемом носителе, растворителе или буфере.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к вакцине против HPV, включающей иммунологически эффективное количество гомодимерного белка согласно изобретению или аминокислотной цепи согласно изобретению, или молекуле нуклеиновой кислоты, такой как ДНК, согласно изобретению, где указанная вакцина способна индуцировать и T-клеточный, и B-клеточный иммунный ответ.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или предотвращения вызванного HPV заболевания или состояния, такого как рак или инфекционное заболевание, вызванное HPV у пациента, где способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, гомодимерного белка согласно изобретению, или аминокислотной цепи согласно изобретению, или молекулы нуклеиновой кислоты, такой как ДНК, согласно изобретению.
ОБОЗНАЧЕНИЯ НА ФИГУРАХ
Фиг. 1: Общая структура vaccibody вакцин со слитым антигеном E7/E6. Показаны и ДНК, и белковый форматы. Vaccibody состоит из трех функциональных модулей; хемокин человека MIP-1α (LD78β) в направляющем модуле, шарнирная и CH3 последовательности из IgG3 человека в димеризационном модуле и слитая конструкция полноразмерного E7 и/или E6 в вакцинном модуле.
Фиг. 2: Предполагаемый механизм действия Vaccibody ДНК вакцины против вызванных HPV злокачественных новообразований. Оголенную ДНК-плазмиду, кодирующую vaccibody, вводят внутрикожно с последующей электропорацией. Плазмида поглощается локальными клетками и белки vaccibody продуцируются и секретируются. хемотаксические направляющие модули привлекают CCR1- и CCR5-экспрессирующие антигенпрезентирующие клетки (АПК) и обеспечивают связывание и захват дендритными клетками (ДК). ДК презентируют антигенные пептиды CD4+ и CD8+ T-клеткам, и CD8+ T-клетки убивают HPV инфицированные и трансформированные клетки в шейке матки.
Фиг. 3: Результаты ELISPOT, показывающие количество E7 и E6 специфичных T-клеточных ответов в зависимости от различных вводимых количеств вакцины. Мышам C57BL/6 вводили в/к оголенные ДНК-плазмиды, кодирующие VB1009 и VB1016, и соответствующий контроль с последующей электропорацией (Cellectis, France) в день 0 и день 7. Спленоциты собирали в день 21 и стимулировали MHC класса I рестриктированным пептидом E7 или E6 в течение 24 ч. Количество IFNγ-секретирующих спленоцитов вычисляли с помощью ELISPOT. (A) E7-специфичные ответы после в/к вакцинации 25 мкг VB1009, контроля 1 (только антиген) и pUMVC4a (пустой вектор). (B) E7-специфичные ответы после в/к вакцинации 12,5 и 1,4 мкг VB1016, контроля 2 (только антиген) и pUMVC4a (пустой вектор). (C) E6-специфичные ответы после в/к вакцинации 12,5 и 1,4 мкг VB1016, контроля 2 (только антиген) и pUMVC4a (пустой вектор).
Фиг. 4: Терапевтический эффект VB1016, показанный путем измерения объема опухоли. Мышам C57BL/6 п/к вводили 5×105 клеток TC-1 в день 0. В день 3 и день 10 мышам в/к вводили 12,5 мкг оголенной ДНК-плазмиды, кодирующей VB1016, контроля 2 или пустого вектора, с последующей электропорацией (Cellectis, France). Размеры опухоли измеряли с помощью штангенциркуля два-три раза в неделю и вычисляли объем опухоли.
Фиг. 5: Терапевтический эффект VB1016, показанный по измеренному объему опухоли. Мышам C57BL/6 вводили п/к в области шеи 5×104 клеток TC-1 в день 0. В день 3, 7 и день 10 мышам в/к вводили 20 мкг или 2 мкг оголенных ДНК-плазмид, кодирующих VB1016, контроля 2 или пустого вектора, с последующей электропорацией (Cellectis, France). Размеры опухоли измеряли штангенциркулем два-три раза в неделю и вычисляли объем опухоли.
Фиг. 6: Терапевтический эффект VB1020 и VB1021, показанный по измеренному объему опухоли. Мышам C57BL/6 вводили п/к в бедро 5×104 клеток TC-1 в день 0. В день 3 и день 10 мышам в/к вводили 10 мкг оголенных ДНК-плазмид, кодирующих VB1016, VB1020, VB1021 или пустой вектор, с последующей электропорацией (Cellectis, France). Размеры опухоли измеряли штангенциркулем два-три раза в неделю и вычисляли объем опухоли.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Конструкции и технология ДНК-вакцин, описанные в настоящей заявке авторами настоящего изобретения (также называемые "vaccibody" (или вакцитело) молекулы/вакцины/конструкции) представляют собой новую вакцинную стратегию, позволяющую индуцировать сильные и специфичные иммунные ответы, как против инфекционных заболеваний, так и против рака. HPV E6/E7, например HPV16 или HPV18 E6/E7 вакцину, описанную в настоящей заявке, можно вводить как ДНК-вакцину с помощью внутрикожной инъекции, предпочтительно сопровождаемой электропорацией. Такие результаты при поглощении конструкции ДНК, кодирующей vaccibody-HPV16 и/или HPV18 E6/E7 вакцину в клетках на участке инъекции (кожи), включающем дендритные клетки (клетки Лангерганса), ведут к in vivo продукции vaccibody-E6/E7 молекулы.
Продукты ранних генов, E6 и E7, типов HPV "высокого риска", таких как HPV16 и 18, могут быть ответственны за перерождение клеток основного эпителия и индукцию предраковых поражений. Оба белка состоят из высокоиммуногенных эпитопов и, как показано в настоящем описании, индуцируют сильные иммунные ответы, ведущие к специфичной ликвидации представляющих высокий риск HPV-положительных опухолевых клеток in vitro и in vivo.
Молекула vaccibody (или вакцитела), описанная в настоящей заявке, представляет собой гомодимер, состоящий из трех модулей: направляющего модуля, димеризационного модуля и вакцинного модуля (Фиг. 1). Гены, кодирующие три указанных модуля, подвергнуты генно-инженерной манипуляции для того, чтобы они экспрессировались в виде одного гена. При экспрессии in vivo, молекула вакцитела направленно взаимодействует с антигенпрезентирующими клетками (АПК), что приводит к повышенной эффективности вакцины по сравнению с идентичными, не направленными антигенами. In vivo экспрессия хемокина, человеческого макрофагального воспалительного белка 1 альфа (hMIP-1α/LD78β), приводит к привлечению ДК, нейтрофилов и других иммунных клеток, несущих рецепторы CCR1 и CCR5, к участку экспрессии. Таким образом, молекула вакцитела, состоящая из hMIP-1α в качестве направляющего модуля, будет не только направлять антигены к специфическим клеткам, но при этом также обеспечивать эффект усиления ответа (адъювантный эффект) посредством рекрутинга специфических иммунных клеток в участок инъекции. Этот уникальный механизм может иметь колоссальное значение в клинических условиях, когда пациенты могут получать вакцину без каких-либо дополнительных адъювантов, поскольку вакцина сама обеспечивает адъювантный эффект.
Авторами настоящего изобретения в настоящей заявке описаны вакцинные конструкции, в которых антигенный модуль состоит из полноразмерной генетической последовательности E7, слитой с полноразмерной последовательностью E6, происходящей из подтипа HPV16 ИЛИ HPV18. Преимущество данного формата состоит в том, что и E6, и E7 будут присутствовать в одной конструкции и смогут, таким образом, одинаково экспрессироваться in vivo. Следовательно, одна молекула вакцитела, состоящая из мультиантигенной единицы, может предоставлять иммунной системе равные уровни E6 и E7. Продукты генов HPV16, E6 и E7, в своей естественной форме являются онкогенными. Для нейтрализации их онкогенных свойств, на определенных участках в генетическую последовательность E6 и E7 могут быть введены мутации.
Мутации, включая делеции, могут быть введены в определенные участки, мутации в которых, как известно, ингибируют онкогенные свойства E6 и E7, например, в любые участки, описанные в любом из следующих источников: Dalal S et al., J Virol, 1996; Münger K et al., EMBO, 1989; Nakagawa S et al., Virology, 1995; Crook T et al., Cell, 1991; Münger K et al., HPV Compendium Online, 1997 (http://www.stdgen.lanl.gov/COMPENDIUM_PDF/97PDF/3/E7.pdf); Nguyen, M et al., J Virol, 2002; Nomine Y et a., Molecular Cell, 2006; Moody C et al., Nat Rev Cancer, 2010, Polakova I et al., Vaccine, 2010; Xie Q, Virologica Sinica, 2011; Mesplede T et al., J Virol, 2012; US 2008/0102084 и US 6306397, которые настоящим включены посредством отсылки. Таким образом, в некоторых аспектах изобретения, конструкции согласно настоящему изобретению содержат HPV16 E6, E7 или HPV16 E6/E7 химерные конструкции с одной или более мутациями в HPV16 E6 и/или E7, в положении, мутация в котором, как известно, ингибирует онкогенные свойства, как описано в Dalal S et al., J Virol, 1996; Münger K et al., EMBO, 1989; Nakagawa S et al., Virology, 1995; Crook T et al., Cell, 1991; Münger K et al., HPV Compendium Online, 1997 (http://www.stdgen.lanl.gOv/COMPENDIUM_PDF/97PDF/3/E7.pdf); Nguyen, M et al., J Virol, 2002; Nomine Y et a., Molecular Cell, 2006; Moody C et al., Nat Rev Cancer, 2010, Polakova I et al., Vaccine, 2010; Xie Q, Virologica Sinica, 2011; Mesplede T et al., J Virol, 2012; US 2008/0102084 или US6306397. В других аспектах изобретения, конструкции согласно настоящему изобретению содержат HPV18 E6, E7 или HPV18 E6/E7 химерные конструкции с одной или более мутациями в HPV18 E6 и/или E7, в положении, мутация в котором, как известно, ингибирует онкогенные свойства, как описано в Dalal S et al., J Virol, 1996; Münger K et al., EMBO, 1989; Nakagawa S et al., Virology, 1995; Crook T et al., Cell, 1991; Münger K et al., HPV Compendium Online, 1997 (http://www.stdgen.lanl.gov/COMPENDIUM_PDF/97PDF/3/E7.pdf); Moody C et al., Nat Rev Cancer, 2010, US 2008/0102084 и US6306397.
Существует возможность, что молекула вакцитела (направляющий и димеризационный модули) может ликвидировать онкогенные свойства белков E6 и E7 дикого типа в конечном слитом белке. Таким образом, в еще одном аспекте изобретения предложено применение полноразмерных последовательностей E6 и/или E7 дикого типа в конструировании вакцитела.
В изобретении описано несколько вариантов Vaccibody HPV терапевтических ДНК-вакцин, которые основаны на общем формате, описанном на Фиг. 1, терапевтические vaccibody-HPV ДНК-вакцины кодируют гены, которые естественно экспрессируются у человека; гены направляющего модуля кодируют хемокин hMIP-1α, который связывается со своими когнатными рецепторами, CCR1 и CCR5, экспрессируемыми на поверхности клеток АПК. Гены димеризационного модуля могут кодировать шарнирные области и константную область 3 тяжелой цепи, например из IgG3 человека, которые соединяют два мономера вакцитела с формированием гомодимерной молекулы. Гены, кодирующие вакцинный модуль для текущей стратегии, состоят из антигенов HPV, такого как HPV16 и/или HPV18, E7 и E6, таких как полноразмерные антигены HPV16 E7 и E6, необязательно включающих одну или более мутаций с целью ингибировать онкогенные свойства. После введения in vivo с помощью в/к инъекции, сопровождаемой электропорацией, клетки кожи, принимающие вакцинную конструкцию, будут экспрессировать vaccibody-HPV молекулу. Продуцируемые in vivo vaccibody-вакцины направленно взаимодействуют с CCR1 и CCR5, экспрессируемыми на поверхности АПК в коже, в частности ДК. Связывание молекулы вакцитела со своими когатными рецепторами приводит к интернализации комплекса в АПК, деградации белков с образованием малых пептидов, которые загружаются на молекулы MHC и презентируются CD4+ и CD8+ T-клеткам, индуцируя HPV16 E6 и E7 специфичные иммунные ответы. После стимуляции и при посредстве активированных CD4+ T-клеток, CD8+ T-клетки будут направляться и убивать клетки, экспрессирующие E6 и E7 HPV16 (Фиг. 2). Такие усиленные иммунные ответы на вакцину с "встроенным" адъювантным эффектом потенциально могут преодолеть ускользание опухоли (ускользание опухоли от воздействия иммунной системы) в результате устранения иммунологической толерантности и обеспечить эффективный цитолиз злокачественных клеток. Направляющая единица hMIP-1α может быть связана через димеризационный мотив, такой как шарнирная область, с антигенной единицей, причем связывание происходит либо по COOH-концу, либо по NH2-концу. Настоящее изобретение относится не только к последовательности ДНК, кодирующей данный рекомбинантный белок, но также и к векторам экспрессии, включающим указанные последовательности ДНК, линиям клеток, включающим указанные векторы экспрессии, к лечению млекопитающих, предпочтительно с помощью иммунизации посредством ДНК Vaccibody, РНК Vaccibody, или белка Vaccibody, и, наконец, к фармацевтическим препаратам и набору, включающему указанные молекулы.
Димеризационный мотив в белках согласно настоящему изобретению может быть сконструирован таким образом, что он включает шарнирную область и домен иммуноглобулина (например, домен Cγ3), например, C-концевой C домен (домен CH3), или последовательность, которая по существу идентична указанному C домену. Шарнирная область может быть получена из Ig и способствует димеризации в результате формирования межцепочечной ковалентной связи(ей), например дисульфидного мостика(ов). В дополнение, он функционирует как гибкий спейсер между доменами, позволяя двум направляющим единицам одновременно связываться с двумя молекулами-мишенями на АПК, экспрессируемыми на различных расстояниях. Домены иммуноглобулина вносят вклад в гомодимеризацию посредством нековалентных взаимодействий, например гидрофобных взаимодействий. В предпочтительном варианте осуществления домен CH3 получен из IgG. Такие димеризационные мотивы могут быть заменены другими мультимеризационными молекулами (например, из Ig других изотипов/подклассов). Предпочтительно димеризационный мотив получен из нативных человеческих белков, таких как IgG человека.
Следует понимать, что димеризационный мотив может иметь любую ориентацию относительно антигенной единицы и направляющей единицы. В одном варианте осуществления антигенная единица находится на COOH-конце димеризационного мотива, при этом направляющая единица находится на N-конце димеризационного мотива. В другом варианте осуществления антигенная единица находится на N-конце димеризационного мотива, а направляющая единица - на COOH-конце димеризационного мотива.
В международной заявке WO 2004/076489, которая настоящим включена посредством отсылки, раскрыты последовательности нуклеиновых кислот и векторы, которые могут применяться согласно настоящему изобретению.
Белки согласно настоящему изобретению включают антигенную единицу, полученную из HPV, такую как антигены E7 и E6 HPV16, такие как полноразмерные антигены E7 и E6 HPV16, а также их иммуногенные фрагменты или варианты. Антигенная последовательность должна иметь достаточную длину. Минимальная длина такой антигенной единицы может составлять приблизительно 9 аминокислот. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, антигенная единица, полученная из HPV, включает аминокислотную последовательность длиной по меньшей мере 9 аминокислот, соответствующих по меньшей мере приблизительно 27 нуклеотидам в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей такую антигенную единицу. Предпочтительно антигенная единица, полученная из HPV, значительно более длинная, например, является такой как полноразмерные антигены E7 и E6 HPV16. Разнообразие возникает в пределах данного генотипа HPV в результате ограниченных нуклеотидных изменений в кодирующих (с частотой <2%) и некодирующих (с частотой <5%) областях (Bernard, HU et al., Int J Cancer, 2006). Такие варианты филогенетически расщепляются на основе их географического происхождения и поэтому их обозначают как Европейский, Африканский, Азиатский, Американо-азиатский и Северо-американский. Вставка таких последовательностей в формат Vaccibody может приводить к активации обоих механизмов иммунного ответа.
Способы иммунизации посредством белка Vaccibody, ДНК Vaccibody или РНК Vaccibody, причем две последние выполняют, например, путем внутримышечной или внутрикожной инъекции, с или без последующей электропорации, являются целесообразными способами согласно настоящему изобретению.
Как обсуждается выше, настоящее изобретение относится к вакцинной композиции против рака или инфекционных заболеваний, вызванных HPV, вакцинная композиция включает иммунологически эффективное количество нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу изобретения или соответствующие вырожденные варианты. Вакцина может быть способна индуцировать как T-клеточный, так и B-клеточный иммунный ответ. Настоящее изобретение также относится к набору, включающему Vaccibody ДНК, РНК или белок в диагностических, медицинских или научных целях.
Изобретение также относится к способу получения рекомбинантной молекулы изобретения, включающему трансфекцию вектора, включающего молекулу изобретения, в популяцию клеток; культивирование популяции клеток; сбор рекомбинантного белка, экспрессированного популяцией клеток; и очистку экспрессированного белка.
Описанные выше нуклеотидные последовательности могут быть встроены в вектор, подходящий для генной терапии, например, под контролем определенного промотора, и введены в клетки. В некоторых вариантах осуществления вектор, включающий указанную последовательность ДНК, является вирусом, например аденовирусом, вирусом осповакцины или аденоассоциированным вирусом. В некоторых вариантах осуществления в качестве вектора используются ретровирусы. Примерами подходящих ретровирусов являются, например, MoMuLV или HaMuSV. В целях генной терапии, последовательности ДНК/РНК согласно изобретению также могут транспортироваться в клетки-мишени в форме коллоидной дисперсии. Они включают, например, липосомы или липоплексы.
Настоящее изобретение охватывает применение направляющей единицы, а также антигенной единицы, имеющей минимальную степень идентичности последовательности или гомологии последовательности с аминокислотной последовательностью(ями), определенными в настоящем описании, или с полипептидом, обладающим определенными свойствами, которые определены в настоящем описании. Настоящее изобретение охватывает, в частности, применение пептидных вариантов или пептидных единиц, используемых в конструкциях согласно настоящему изобретению, обладающих некоторой степенью идентичности последовательности с любой из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34. В данном случае, термин "вариант" означает единицу, обладающую некоторой степенью идентичности последовательности с рассматриваемыми аминокислотными последовательностями или рассматриваемыми нуклеотидными последовательностями, где рассматриваемая аминокислотная последовательность предпочтительно представляет собой SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33 или SEQ ID NO:34.
В одном аспекте, вариант или фрагмент аминокислотной последовательности и/или нуклеотидной последовательности должны обеспечивать и/или кодировать полипептид, который сохраняет функциональную активность и/или повышает активность полипептида SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34.
В настоящем контексте считается, что вариант последовательности включает аминокислотную последовательность, которая может быть по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична рассматриваемой последовательности. Как правило, варианты, используемые согласно настоящему изобретению, будут включать те же активные сайты и т.д., что и рассматриваемая аминокислотная последовательность. Хотя гомологию также можно рассматривать в значении подобия (то есть аминокислотные остатки, обладающие аналогичными химическими свойствами/функциями), в рамках настоящего изобретения предпочтительно выражать гомологию в значении идентичности последовательности.
Сравнения идентичности последовательности могут проводить визуально или, еще чаще, при помощи общедоступных компьютерных программ для сравнения последовательностей. В таких коммерчески доступных компьютерных программах используются сложные алгоритмы сравнения для выравнивания двух или более последовательностей, которые лучше всего отражают эволюционные события, которые, возможно, привели к появлению различия(й) между этими двумя или более последовательностями. Таким образом, указанные алгоритмы работают с системой оценки, поощряющей выравнивание идентичных или подобных аминокислот и штрафующей вставки пропусков, продолжение пропуска и выравнивание несовпадающих аминокислот. Система оценки алгоритмов сравнения включает:
i) присвоение штрафной оценки при каждом включении пропуска (штрафа за пропуск),
ii) присвоение штрафной оценки при каждом продолжении существующего пропуска на дополнительное положение (штраф за продолжение пропуска),
iii) присвоение высоких оценок при выравнивании идентичных аминокислот, и
iv) присвоение переменных оценок при выравнивании неидентичных аминокислот.
Большинство программ выравнивания позволяет изменять штрафы за пропуски. Впрочем, при использовании таких программ для сравнений последовательностей предпочтительно использовать значения по умолчанию.
Оценки, которые даются за выравнивание неидентичных аминокислот, присваивают согласно оценочной матрице, также называемой матрицей замен. Оценки, получаемые в таких матрицах замен, отражают тот факт, что подобие одной аминокислоты, заменяемой другой аминокислотой в ходе развития, изменяется и зависит от физической/химической природы заменяемой аминокислоты. Например, вероятность замены полярной аминокислоты другой полярной аминокислотой выше, нежели вероятность ее замены гидрофобной аминокислотой. Таким образом, оценочная матрица присваивает наивысшую оценку за идентичную аминокислоту, более низкую оценку за неидентичную, но подобную аминокислоту, и еще более низкую оценку за неидентичные неподобные аминокислоты. Наиболее часто используются такие оценочные матрицы, как матрицы PAM (Dayhoff et al. (1978), Jones et al. (1992)), матрицы BLOSUM (Henikoff and Henikoff (1992)) и матрица Gonnet (Gonnet et al. (1992)).
Подходящие компьютерные программы для выполнения такого выравнивания включают, без ограничения, Vector NTI (Invitrogen Corp.), а также программы ClustalV, ClustalW и ClustalW2 (Higgins DG & Sharp PM (1988), Higgins et al. (1992), Thompson et al. (1994), Larkin et al. (2007)). Выбор других инструментов выравнивания доступен с сервера ExPASy Proteomics по адресу www.expasy.org. Другим примером программы, которая может выполнять выравнивание последовательностей, является BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), который доступен со страницы Национального Центра Биотехнологической Информации (NCBI), которую в настоящее время можно найти по адресу http://www.ncbi.nlm.nih.gov/, и который впервые был описан в статье Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215; 403-410.
После построения выравнивания программой может быть вычислен % подобия и % идентичности последовательности. Программное обеспечение обычно выполняет это как часть сравнения последовательности и производит числовой результат.
В одном варианте осуществления для выполнения выравниваний последовательностей предпочтительно использовать программное обеспечение ClustalW. Предпочтительно, выравнивание с помощью ClustalW выполняют со следующими параметрами для парного выравнивания:
| Матрица замен | Gonnet 250 |
| Штраф за введение пропуска | 20 |
| Штраф за продолжение пропуска | 0,2 |
| Штраф за окончание пропуска | нет |
ClustalW2 доступна, например, в Интернете на сайте Европейского Института Биоинформатики на странице EMBL-EBI www.ebi.ac.uk по вкладке tools - sequence analysis - ClustalW2. В настоящее время точный адрес инструмента ClustalW2 - www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2.
В другом варианте осуществления для выполнения выравнивания последовательностей предпочтительно использовать программу Align X в Vector NTI (Invitrogen). В одном варианте осуществления Exp10 может использоваться с параметрами настройки по умолчанию:
Штраф за введение пропуска: 10
Штраф за продолжение пропуска: 0,05
Диапазон штрафа за разделение пропуска: 8
Матрица оценок: blosum62mt2
Таким образом, настоящее изобретение также охватывает применение вариантов, фрагментов и производных любой аминокислотной последовательности белка, полипептида, мотива или домена, как определено в настоящей заявке, в особенности таковые из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34.
Последовательности, в особенности последовательности вариантов, фрагментов и производных SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34, также могут иметь делеции, вставки или замены аминокислотных остатков, которые производят молчащее изменение и приводят к функционально эквивалентному веществу. Преднамеренные аминокислотные замены могут быть сделаны на основе подобия по полярности, заряду, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфифильной природе остатков, при условии сохранения вторичной связывающей активности вещества. Например, отрицательно заряженные аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту; положительно заряженные аминокислоты включают лизин и аргинин; и аминокислоты с незаряженными полярными концевыми группами, имеющими сходные значения гидрофильности, включают лейцин, изолейцин, валин, глицин, аланин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, фенилаланин и тирозин.
Настоящее изобретение также охватывает консервативную замену (замена и замещение используются в настоящем описании для обозначения обмена присутствующего аминокислотного остатка на альтернативный остаток), которая может произойти, то есть замену подобного подобным, такую как основный на основный, кислотный на кислотный, полярный на полярный и т.д. Также может происходить неконсервативная замена, то есть замена остатка одного класса остатком другого класса или, альтернативно, она может включать введение неприродных аминокислот, таких как орнитин (в дальнейшем обозначаемый как Z), диаминомасляная кислота орнитин (в дальнейшем обозначаемый как B), норлейцин орнитин (в дальнейшем обозначаемый как O), пириилаланин, тиенилаланин, нафтилаланин и фенилглицин.
Консервативные замены, которые могут быть сделаны, производят, например, в рамках групп основных аминокислот (аргинин, лизин и гистидин), кислотных аминокислот (глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота), алифатических аминокислот (аланин, валин, лейцин, изолейцин), полярных аминокислот (глутамин, аспарагин, серин, треонин), ароматических аминокислот (фенилаланин, триптофан и тирозин), гидроксиаминокислот (серин, треонин), крупных аминокислот (фенилаланин и триптофан) и малых аминокислот (глицин, аланин).
Замены также могут быть сделаны неприродными аминокислотами и включают; альфа* и альфа-дизамещенные* аминокислоты, N-алкиламинокислоты*, молочную кислоту*, галогенпроизводные природных аминокислот, такие как трифтортирозин*, п-Cl-фенилаланин*, п-Br-фенилаланин*, п-I-фенилаланин*, L-аллил-глицин*, β-аланин*, L-α-аминомасляную кислоту*, L-γ-аминомасляную кислоту*, L-α-аминоизомасляную кислоту*, L-ε-аминокапроновую кислоту#, 7-аминогептановую кислоту*, L-метионин-сульфон#*, L-норлейцин*, L-норвалин*, п-нитро-L- фенилаланин*, L-гидроксипролин#, L-тиопролин*, метильные производные фенилаланина (Рhе), такие как 4-метил-Рhе*, пентаметил-Phe*, L-Рhе (4-амино)#, L-Tyr (метил)*, L-Phe (4-изопропил)*, L-Tic (1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота)*, L-диаминопропионовую кислоту* и L-Phe (4-бензил)*. Обозначение * использовано в рамках представленного выше обсуждения (относительно гомологичной и неконсервативной замены) для указания гидрофобной природы производного, тогда как обозначение # использовано для указания гидрофильной природы производного, #* указывает на амфипатические характеристики.
Вариант аминокислотных последовательностей может включать подходящие спейсерные группы, которые можно встраивать между любыми двумя аминокислотными остатками последовательности, в том числе алкильные группы, такие как метильную, этильную или пропильную группы, в дополнение к аминокислотным спейсерам, таким как остатки глицина или β-аланина. Другая форма вариации, которая включает присутствие одного или большего количества аминокислотных остатков в пептоидной форме, хорошо известна специалистам в данной области. Во избежание сомнений "пептоидная форма" используется для обозначения варианта аминокислотных остатков, где группа-заместитель α-атома углерода находится на атоме азота данного остатка, а не на α-атоме углероде. Способы получения пептидов в пептоидной форме известны в уровне техники (например, Simon RJ et al. (1992), Horwell DC. (1995)).
В одном варианте осуществления вариант направляющей единицы, используемой в гомодимерном белке согласно настоящему изобретению, представляет собой вариант, имеющий последовательность аминокислот, которая обладает по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности аминокислотной последовательности с ними.
В одном аспекте, белок или последовательность, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно находятся в очищенной форме. Термин "очищенный" означает, что данный компонент присутствует на высоком уровне. Компонент желательно является преобладающим активным компонентом, присутствующим в композиции.
"Вариант" или "варианты" относятся к белкам, полипептидам, единицам, мотивам, доменам или нуклеиновым кислотам. Термин "вариант" может использоваться попеременно с термином "мутант". Варианты включают вставки, замены, трансверсии, усечения и/или инверсии в одном или более положениях аминокислотной или нуклеотидной последовательности, соответственно. Фразы "вариант полипептида", "полипептид", "вариант" и "вариант фермента" означают полипептид/белок, который имеет аминокислотную последовательность, которая была изменена с аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1. Варианты полипептидов включают полипептид, имеющий некоторый процент, например, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34.
"Варианты нуклеиновых кислот" могут включать последовательности, которые комплементарны последовательностям, способным к гибридизации с нуклеотидными последовательностями, представленными в настоящем описании. Например, вариант последовательности комплементарен последовательностям, способным к гибридизации в строгих условиях, например, 50°C и 0,2×SSC (1×SSC=0,15М NaCl, 0,015М цитрат натрия, pH 7,0), с нуклеотидными последовательностями, представленными в настоящем описании. Более конкретно, термин вариант охватывает последовательности, которые комплементарны последовательностям, способным к гибридизации в очень строгих условиях, например, 65°C и 0,1×SSC, с нуклеотидными последовательностями, представленными в настоящем описании. Точка плавления (Тп) варианта нуклеиновой кислоты может быть приблизительно на 1, 2 или 3°C ниже, чем Тп нуклеиновой кислоты дикого типа. Варианты нуклеиновых кислот включают полинуклеотид, имеющий некоторый процент, например, 80%, 85%, 90%, 95% или 99%, идентичности последовательности с нуклеиновой кислотой SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34, кодирующей мономерный белок, который может формировать гомодимерный белок согласно изобретению.
Определенной категорией мутаций являются мутации в E6 и E7
Белок E6 можно детоксифицировать, делая невозможным связывание p53. Пять положений в полноразмерном белке E6 HPV16 являются сайтами мутаций для инактивации функциональных свойств E6, F47, L50, C63, C106 и I128. Любая аминокислотная замена в этих положениях может приводить к инактивации E6 и вызывает супрессию опухоли. Потенциально могут использоваться замены в любом из указанных положений на любую другую аминокислоту. Сайты потенциальных мутаций показаны в SEQ ID NO:22.
В белке E7 присутствуют консервативные области, связанные с онкогенными свойствами (см. Phelps et al J. Virol. April 1992, vol.66, no. 42418-242; Gulliver et al J Virol.1997, August; 71(8)), в том числе N-концевой мотив Rb (ретинобластома-связывающий белок) связывающего сайта (LXCXE) и две консервативные области 3 (3ʹ и 5ʹ) с цинк-связывающим мотивом (CXXC). Предпочтительными сайтами мутаций в LXCXE-мотиве являются C24 и E26. Предпочтительными сайтами в двух мотивах CXXC являются C58, C61, C91 и C94. Впрочем, любые мутации в этих областях могут быть предусмотрены для замены с целью снижения связывающих функций и, таким образом, устранения онкогенных эффектов E7. Сайты потенциальных мутаций показаны в SEQ ID NO:23.
Сигнальный пептид:
Сигнальный пептид на N-конце синтезируемого полипептида направляет молекулу в ЭР перед транспортом в комплекс Гольджи. Сигнальный пептид отщепляется под действием сигнальной пептидазы после выполнения своей функции, состоящей в направлении и импорте белка в ЭР. Указанные сигнальные пептиды обычно имеют длину 15-30 аминокислот, но могут содержать более 50 остатков (Martoglio, B. et al., Trends in Cell Biology, 1998, Knappskog, S. et al., J Biotechnol, 2007). Нативный сигнальный пептид может быть заменен сигнальными пептидами из любого млекопитающего, прокариотического или морского организма. Обычно используются сигнальные пептиды, например, IL-2 человека и альбумина человека из-за их природной способности секретировать большие количества белка. Выбор сигнального пептида может оказывать значительное влияние на количество синтезируемого и секретируемого белка.
В некоторых вариантах осуществления, сигнальный пептид, используемый в конструкции белка согласно настоящему изобретению, получен из белкового хемокина, как, например, сигнальная последовательность LD78beta.
В некоторых вариантах осуществления сигнальный пептид не получен из pLNOH2 (B1-8 лидерная последовательность вариабельной области иммуноглобулина), раскрытого в международной заявке PCT/EP2011/060628.
В некоторых вариантах осуществления сигнальный пептид получен не из гена иммуноглобулина.
Термин "гомодимерный белок", при использовании в настоящем описании, относится к белку, включающему две отдельные идентичные аминокислотные цепи, или субъединицы, соединенные вместе в один димерный белок водородными связями, ионными взаимодействиями (заряженных групп), фактическим ковалентным дисульфидным мостиком или некоторой комбинацией перечисленных взаимодействий.
Термин "димеризационный мотив", при использовании в настоящем описании, относится к последовательности аминокислот между антигенной единицей и направляющей единицей и включает шарнирную область и необязательный второй домен, который может участвовать в димеризации. Указанный второй домен может быть доменом иммуноглобулина, при этом, необязательно, шарнирная область и второй домен связаны через линкер. Таким образом, димеризационный мотив служит для соединения антигенной единицы и направляющей единицы, но также содержит шарнирную область, которая способствует димеризации двух мономерных белков в гомодимерный белок согласно изобретению.
Термин "направляющая единица", при использовании в настоящем описании, относится к единице, которая доставляет белок с его антигеном в мышиные или человеческие АПК для MHC класса-II рестриктированной презентации CD4+ T-клеткам или для обеспечения перекрестной презентации CD8+ T-клеткам при MHC класса-I рестрикции. Направляющая единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из, или идентична, зрелому LD78-бета.
Термин "антигенная единица", при использовании в настоящем описании, относится к любой молекуле, такой как пептид, который может специфично распознаваться антителом или другим компонентом иммунной системы, таким как поверхностный рецептор на T-клетках. В рамки данного определения также входят иммуногены, которые способны вызывать иммунный ответ. Термины "эпитоп" или "антигенный эпитоп" используются для обозначения определенной молекулярной поверхности, такой как молекулярная поверхность, сформированная короткой пептидной последовательностью в пределах антигенной единицы. В некоторых вариантах осуществления антигенная единица включает два или более антигенных эпитопов. Антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из, или идентична продуктам ранних генов E6 и E7 из HPV, такого как HPV16 или HPV18.
Термин "шарнирная область" относится к пептидной последовательности гомодимерного белка, которая облегчает димеризацию, например, посредством формирования межцепочечной ковалентной связи(ей), например дисульфидного мостика(ов). Шарнирная область может быть получена из Ig, например, из экзонов шарнирной области h1+h4 Ig, такого как IgG3.
Определенные варианты осуществления изобретения
Как описано выше, настоящее изобретение относится к гомодимерному белку из двух идентичных аминокислотных цепей, каждая из которых включает: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, где указанная направляющая единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO:1, и антигенная единица включает аминокислотную последовательность папилломавируса человека (HPV), например, антигенная единица включает аминокислотную последовательность HPV16 и/или HPV18, например, антигенная единица получена из ранних белков E6 и/или E7 HPV16 и/или HPV18. В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, направляющая единица, димеризационный мотив и антигенная единица в аминокислотной цепи расположены в порядке от N-конца к C-концу, в последовательности направляющая единица, димеризационный мотив и антигенная единица.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из HPV16, например, из ранних белков E6 и/или E7.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из E6 HPV16.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из E7 HPV16.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из HPV18, например, из ранних белков E6 и/или E7.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из E6 HPV18.
В некоторых вариантах осуществления антигенная единица, применяемая в конструкциях согласно настоящему изобретению, получена из E7 HPV18.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, сигнальный пептид состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 1-23 из SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, сигнальный пептид состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99%, например, 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 1-23 из SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, направляющая единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO:1.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, димеризационный мотив включает шарнирную область и, необязательно, другой домен, который способствует димеризации, такой как домен иммуноглобулина, необязательно связанный через линкер.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, шарнирная область получена из Ig, например, получена из IgG3.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, шарнирная область имеет способность формировать одну, две или несколько ковалентных связей. В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, ковалентная связь представляет собой дисульфидный мостик.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, домен иммуноглобулина димеризационного мотива является C-концевым доменом или последовательностью, которая по существу идентична C-домену или его варианту.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, C-концевой домен получен из IgG.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, домен иммуноглобулина димеризационного мотива имеет способность к гомодимеризации.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, домен иммуноглобулина имеет способность к гомодимеризации посредством нековалентных взаимодействий. В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, нековалентные взаимодействия являются гидрофобными взаимодействиями.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, димеризационный домен не содержит CH2 домен.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, димеризационный мотив состоит из экзонов шарнирной области h1 и h4, соединенных через линкер с CH3 доменом IgG3 человека.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, димеризационный мотив состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 94-237 из SEQ ID NO:3.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, линкер является линкером G3S2G3SG.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица и димеризационный мотив связаны через линкер, такой как линкер GLGGL или линкер GLSGL.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, направляющая единица состоит из аминокислот 24-93 из SEQ ID NO:1, или ее варианта.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, гомодимерный белок обладает повышенной аффинностью к любому хемокиновому рецептору, выбранному из CCR1, CCR3 и CCR5, по сравнению с аффинностью того же гомодимерного белка с направляющей единицей, состоящей из аминокислот 24-93 из SEQ ID NO:1, или ее варианта.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-293 из SEQ ID NO:3.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-293 из SEQ ID NO:3.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает одну или более аминокислотных замен в положении, выбранном из списка, состоящего из F47, L50, C63, C106 и I128 из SEQ ID NO:22, или делецию, включающую одну или более аминокислот, выбранных из списка, состоящего из Y43-L50 SEQ ID NO:22.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 или 20 аминокислотных замен и/или делеций по сравнению с SEQ ID NO:22.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность 243-293 из SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:9, или их вариант или антигенный фрагмент.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности 243-293 из SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:9, или их варианта или антигенного фрагмента.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-340 из SEQ ID NO:11.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-340 из SEQ ID NO:11.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает одну или более аминокислотных замен в положении, выбранном из списка, состоящего из C24, E26, C58, C61, C91 и C94 SEQ ID NO:23, или делецию, включающую одну или более аминокислот, выбранных из списка, состоящего из L22-E26 и/или C58-C61, и/или C91-S95 SEQ ID NO:23.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 или 20 аминокислотных замен и/или делеций по сравнению с SEQ ID NO:23.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность 243-340 из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:17, или их вариант или антигенный фрагмент.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности 243-340 из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:17, или их варианта или антигенного фрагмента.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-501 из SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 243-501 из SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица, включающая аминокислотную последовательность папилломавируса человека 16 (HPV16), получена из ранних белков E6 и E7.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица, включающая аминокислотную последовательность папилломавируса человека 18 (HPV18), получена из ранних белков E6 и E7.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает одну или более аминокислотных замен в положении, выбранном из списка, состоящего из F47, L50G, C63, C106, I128T в SEQ ID NO:22 и C24, E26, C58, C61, C91, C94 в SEQ ID NO:23.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает не более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 или 20 аминокислотных замен и/или делеций по сравнению с SEQ ID NO:22 и SEQ ID NO:23.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности 243-501 из SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO:34, или их варианта или антигенного фрагмента.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, аминокислотная цепь состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из списка, состоящего из SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:32 и SEQ ID NO:34, или их варианта или антигенного фрагмента.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица включает аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с любой аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 и SEQ ID NO:25.
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему изобретению, антигенная единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 81%, например, по меньшей мере 82%, например, по меньшей мере 83%, например, по меньшей мере 84%, например, по меньшей мере 85%, например, по меньшей мере 86%, например, по меньшей мере 87%, например, по меньшей мере 88%, например, по меньшей мере 89%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 91%, например, по меньшей мере 92%, например, по меньшей мере 93%, например, по меньшей мере 94%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 96%, например, по меньшей мере 97%, например, по меньшей мере 98%, например, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с любой аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24 и SEQ ID NO:25.
В некоторых вариантах осуществления гомодимерный белок согласно настоящему изобретению находится в своей зрелой форме без какой-либо сигнальной пептидной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению оптимизирована по кодонам человека.
Следует понимать, что оптимизированная по кодонам человека молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению включает одну или более замен нуклеиновых кислот по сравнению с последовательностью дикого типа, где указанная замена вводит кодон с более высокой частотой использования в кодирующих областях человека. Частоту использования кодонов у Homo sapiens можно найти по адресу http://biowiki.edu-wiki.org/en/codon_table
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению включает любую из нуклеотидных последовательностей, выбранных из списка, состоящего из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:31 и SEQ ID NO:33, или их вариант.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению представлена вектором.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению подготовлена для введения пациенту с целью индукции синтеза гомодимерного белка у указанного пациента.
В некоторых вариантах осуществления вакцина согласно настоящему изобретению дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель и/или адъювант.
В некоторых вариантах осуществления, способ лечения или предотвращения вызванного HPV заболевания или состояния, такого как рак, или инфекционного заболевания, вызванного HPV у пациента, согласно настоящему изобретению включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, молекулы нуклеиновой кислоты, такой как ДНК согласно настоящему изобретению, с последующим этапом электропорации. В некоторых вариантах осуществления введение производят внутрикожно или внутримышечно.
ПРИМЕР 1
Конструирование и экспрессия вакцин
Последовательности генов создавали согласно следующей структуре: 1: нативная лидерная последовательность человеческого LD78b, 2: полноразмерная последовательность LD78b. 3: Человеческая шарнирная область 1 из IgG3. 4: Человеческая шарнирная область 4 из IgG3. 5: Глицин-сериновый линкер. 6: Человеческий домен CH3 из IgG3. 7: Глицин-лейциновый линкер. 8: Онкогены E6, E7 дикого и мутантного папилломовирусов человека и слитые белки E6 и E7, разделенные глицин-сериновым линкером. Конструкции обозначили согласно их E6 и/или E7 составу следующим образом:
VB1001: Вакцитело-E6 дикого типа;
VB1005: Вакцитело-E7 дикого типа;
Мутанты обозначили согласно аминокислотному положению в соответствующей нативной последовательности E6 или E7.
VB1002: Вакцитело-E6 C63R;
VB1003: Вакцитело-E6 C106R;
VB1004: Вакцитело-E6 F47R, C63R, C106R;
VB1006: Вакцитело-E7 C24G, E26G;
VB1007: Вакцитело-E7 C24G, E26G, C58G, C61G;
VB1008: Вакцитело-E7 C24G, E26G, C91G, C94G;
VB1009: Вакцитело-E7 C24G, E26G/E6 F47R, C63R, C106R;
VB1016: Вакцитело-E7 C24G, E26G/E6 C63R, C106R;
VB1020: Вакцитело-E7 C24G, E26G/E6 F47R, C63R, C106R оптимизированный по кодонам человека;
VB1021: Вакцитело-E7 C24G, E26G/E6 F47R, L50G, C106R, I128T оптимизированный по кодонам человека.
Были включены контрольные вакцины, состоящие только из антигенов:
Контроль 1: E7 C24G, E26G/E6 F47R, C63R, C106R;
Контроль 2: E7 C24G, E26G/E6 C63R, C106R.
Все последовательности генов заказывали в Aldevron (Fargo ND, USA) или Eurofins MWG GmbH и клонировали в вектор экспрессии pUMVC4a.
Все конструкции трансфицировали в клетки 293E и экспрессию интактных белков вакцител подтверждали с помощью дот-блота и ELISA (данные не показаны). Все аминокислотные последовательности, за исключением Контролей 1 и 2, показаны как SEQ ID.
ПРИМЕР 2
Исследования иммунного ответа
VB 1009, VB1016, VB1020 и VB1021 отбирали в качестве кандидатных вакцин с их соответствующими Контролями 1 и 2, соответственно. В качестве отрицательного контроля использовали пустой вектор pUMVC4a.
25, 12,5 и 1,4 мкг плазмидной ДНК каждой кандидатной вакцины вводили внутрикожно в нижний отдел спины мышей C57BI/6 с последующей электропорацией, Dermavax, Cellectis (Paris, France). Через 7 дней мышам делали бустер-инъекцию подобных количеств вакцин и контрольных плазмид. В день 21 мышей умертвляли и забирали селезенку.
T-клеточные ответы вычисляли с помощью ELISPOT (Фигуры 3 a, b и c).
ПРИМЕР 3
Терапевтический эффект
VB1016, VB1020 и VB1021 с соответствующими контролями 1 и 2 отбирали в качестве кандидатной вакцины для терапевтических исследований вакцины.
5×104 или 5×105 клеток TC-1 (Johns Hopkins University, Baltimore, USA, Lin KY et al., Cancer Res, 1996) вводили в область шеи или бедра мышей C57BI/6. После дней 3 и 10, или дня 3, 7 и 10, мышей вакцинировали 2 мкг, 10 мкг, 12,5 мкг или 20 мкг плазмидной ДНК с последующей электропорацией, Dermavax, Cellectis France. Размер опухоли измеряли два-три раза в неделю до дня 49 после инъекции клеток TC-1 (Фиг. 4, 5 и 6)
ПРИМЕР 4
Используемая терапевтическая ДНК вакцина может быть изготовлена согласно стандарту производства GMP плазмидной вакцины в соответствии с руководством контролирующих органов, включая хранение клеток GMP, производство GMP лекарственных веществ и лекарственных продуктов, исследования стабильности ICH и полного цикла производства ДНК вакцины. ДНК вакцина может быть изготовлена путем растворения в солевом растворе, таком как 10 нМ Трис, 1 мМ ЭДТА при концентрации 2-5 мг/мл. Вакцину можно вводить внутрикожно или внутримышечно, с или без последующей электропорации.
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
C-C мотив хемокин-3-подобного 1 предшественника, включая сигнальный пептид (ак 1-23 выделены жирным шрифтом) и зрелый пептид (LD78-бета), ак 24-93 (SEQ ID NO:1):
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIADYFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA
Специфическая ДНК и соответствующие аминокислотные последовательности конструкций вакцитела HPV:
одиночные конструкции E6 или E7:
Исключительно в целях иллюстрации, различные домены конструкций разделены "|", домены расположены в следующем порядке: Сигнальный пептид | MIP-1α человека | Шарнирная область h1 | Шарнирная область h4 | линкер Gly-Ser или линкер Gly-Leu | hCH3 IgG3 | линкер Gly-Ser или линкер Gly-Leu | дикий или мутантный полноразмерный E6 или E7. Аминокислоты или нуклеотиды, выделенные жирным шрифтом, показывают участки мутаций.
Последовательность ДНК VB1001 (SEQ ID NO:2):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTTTTCGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTATGTGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACTGTCAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1001 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению с E6, SEQ ID NO:3): аминокислотная последовательность 393 аминокислоты.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MFQDPQER
PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN
PYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQK
PLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL*
Последовательность ДНК VB1002 (SEQ ID NO:4):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTTTTCGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTACGAGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACTGTCAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1002 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:5): аминокислотная последовательность, 393 аминокислоты.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MFQDPQER
PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN
PYAVRDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQK
PLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL*
Последовательность ДНК VB 1003 (SEQ ID NO:6):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTTTTCGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTATGTGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACCGACAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1003 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:7): аминокислотная последовательность, 393 аминокислоты.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MFQDPQER
PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN
PYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINRQK
PLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL*
Последовательность ДНК VB1004 (SEQ ID NO:8):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTCGACGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTACGAGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACCGACAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1004 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:9): аминокислотная последовательность, 393 аминокислоты.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSAELKTPLG
DTTHTEPKSCDTPPPCPRCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGLGGLMFQDPQER
PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFARRDLCIVYRDGN
PYAVRDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINRQK
PLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL*
Последовательность ДНК VB1005 (SEQ ID NO:10):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGTGCCCCATCTGTTCTCAGAAACCATAA
Последовательность белка VB1005 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению с E7, SEQ ID NO:11): аминокислотная последовательность, 340 аминокислот.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP*
Последовательность ДНК VB1006 (SEQ ID NO:12):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACGGATATGGACAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGTGCCCCATCTGTTCTCAGAAACCATAA
Последовательность белка VB1006 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:13): аминокислотная последовательность, 340 аминокислот.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSAELKTPLG
DTTHTEPKSCDTPPPCPRCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGLGGLMHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP*
Последовательность ДНК VB1007 (SEQ ID NO:14):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACGGATATGGACAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTGGATGCAAGGGAGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGTGCCCCATCTGTTCTCAGAAACCATAA
Последовательность белка VB1007 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:15): аминокислотная последовательность, 340 аминокислот.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSAELKTPLG
DTTHTEPKSCDTPPPCPRCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGLGGLMHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFG
CKGDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP*
Последовательность ДНК VB1008 (SEQ ID NO:16):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACGGATATGGACAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGGGACCCATCGGATCTCAGAAACCATAA
Последовательность белка VB1008 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:17): аминокислотная последовательность, 340 аминокислот.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSAELKTPLG
DTTHTEPKSCDTPPPCPRCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGLGGLMHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVGPIGSQKP*
Конструкции с E6 и E7
Исключительно в целях иллюстрации, различные домены конструкций отделены "|", домены расположены в следующем порядке: Сигнальный пептид | MIP-Iα человека | Шарнирная область h1 | Шарнирная область h4 | линкер Gly-Ser или линкер Gly-Leu | hCH3 IgG3 | линкер Gly-Ser или линкер Gly-Leu | мутант E7 | линкер Gly-Ser или линкер Gly-Leu | мутант E6. Аминокислоты или нуклеотиды, выделенные жирным шрифтом, показывают участки мутаций.
Последовательность ДНК VB1009 (SEQ ID NO:18):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACGGATATGGACAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGTGCCCCATCTGTTCTCAGAAACCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTCGACGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTACGAGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACCGACAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1009 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:19): Аминокислотная последовательность, 501 аминокислота.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP|GGGSSGGGSG|
MFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFARRDL
CIVYRDGNPYAVRDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLL
IRCINRQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQ
L*
Последовательность ДНК VB1016 (SEQ ID NO:20):
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTGCAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGCTTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGAGACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGCCGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTGACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACACA|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAGCGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTCACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG|ATGCATGGAGATACACCTACATTGCATGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACGGATATGGACAATTAAATGACAGCTCAGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGTCCAGCTGGACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCATTACAATATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTGACTCTACGCTTCGGTTGTGCGTACAAAGCACACACGTAGACATTCGTACTTTGGAAGACCTGTTAATGGGCACACTAGGAATTGTGTGCCCCATCTGTTCTCAGAAACCA|GGCGGTGGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|ATGTTTCAGGACCCACAGGAGCGACCCAGAAAGTTACCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAACTATACATGATATAATATTAGAATGTGTGTACTGCAAGCAACAGTTACTGCGACGTGAGGTATATGACTTTGCTTTTCGGGATTTATGCATAGTATATAGAGATGGGAATCCATATGCTGTACGAGATAAATGTTTAAAGTTTTATTCTAAAATTAGTGAGTATAGACATTATTGTTATAGTTTGTATGGAACAACATTAGAACAGCAATACAACAAACCGTTGTGTGATTTGTTAATTAGGTGTATTAACCGACAAAAGCCACTGTGTCCTGAAGAAAAGCAAAGACATCTGGACAAAAAGCAAAGATTCCATAATATAAGGGGTCGGTGGACCGGTCGATGTATGTCTTGTTGCAGATCATCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTGTAA
Последовательность белка VB1016 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению, SEQ ID NO:21): Аминокислотная последовательность, 501 аминокислота.
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLSAPLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSAELKTPLG
DTTHTEPKSCDTPPPCPRCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGLGGLMHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKPGGGSSGGGSG
MFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDL
CIVYRDGNPYAVRDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLL
IRCINRQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQ
L*
SEQ ID NO:22:
>tr|Q778I6|Q778I6_HPV16 E6 белок OS=Папилломавирус человека тип 16 GN=E6 PE=4 SV=1; (Подчеркнутые аминокислоты обозначают аминокислоты, которые могут быть удалены; Потенциальные аминокислоты, которые могут быть подвергнуты мутации, выделены жирным шрифтом),
MFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL
SEQ ID NO:23:
>sp|P03129|VE7_HPV16 белок E7 OS=Папилломавирус человека тип 16 GN=E7 PE=1 SV=1; (Подчеркнутые аминокислоты обозначают аминокислоты, которые могут быть удалены; Потенциальные аминокислоты, которые могут быть подвергнуты мутации, выделены жирным шрифтом),
MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP
SEQ ID NO:24:
>sp|P06463|VE6_HPV18 белок E6 OS=Папилломавирус человека тип 18 GN=E6 PE=1 SV=1
MARFEDPTRRPYKLPDLCTELNTSLQDIEITCVYCKTVLELTEVFEFAFKDLFVVYRDSI
PHAACHKCIDFYSRIRELRHYSDSVYGDTLEKLTNTGLYNLLIRCLRCQKPLNPAEKLRH
LNEKRRFHNIAGHYRGQCHSCCNRARQERLQRRRETQV
SEQ ID NO:25:
>sp|P06788|VE7_HPV18 белок E7 OS=Папилломавирус человека тип 18 GN=E7 PE=3 SV=2
MHGPKATLQDIVLHLEPQNEIPVDLLCHEQLSDSEEENDEIDGVNHQHLPARRAEPQRHT
MLCMCCKCEARIKLVVESSADDLRAFQQLFLNTLSFVCPWCASQQ
SEQ ID NO:26:
Шарнирные области (Шарнирная область UH IgG3), 12 аминокислот: ELKTPLGDTTHT
SEQ ID NO:27:
Шарнирная область (Шарнирная область MH IgG3, 15 аминокислот): EPKSCDTPPPCPRCP
SEQ ID NO:28:
Линкер Gly-Ser: GGGSSGGGSG
SEQ ID NO:29: hCH3 IgG3:
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:30: Линкер: GLGGL
SEQ ID NO:31: последовательность ДНК VB1020:
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTG
CAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGC
TTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGA
GACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGC
CGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTG
ACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACAC
A|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGT
GGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTAC
ACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCT
GCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAG
CGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGAC
GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC
AGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTC
ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA|GGCCTCGGTGGCCTG/ATG
CATGGCGATACCCCAACACTCCATGAGTACATGCTGGACCTTCAGCCCGAGA
CTACGGATCTGTATGGCTATGGGCAGTTGAATGACTCATCTGAGGAGGAGGA
CGAAATAGACGGCCCAGCTGGTCAAGCCGAACCGGATAGAGCCCACTACAA
CATTGTGACCTTTTGCTGTAAGTGTGACAGCACTCTGAGACTGTGTGTTCAGT
CCACTCATGTCGACATACGCACATTGGAGGATCTCCTGATGGGAACACTGGG
AATTGTGTGTCCCATCTGTTCCCAAAAGCCT/GGAGGTGGAAGCAGTGGAGGC
GGTTCAGGC/ATGTTCCAAGATCCTCAAGAACGTCCTCGTAAGCTGCCACAGC
TGTGTACCGAGCTTCAGACCACCATTCACGACATCATCCTGGAGTGCGTCTAT
TGCAAACAGCAGCTCCTTAGAAGGGAAGTGTACGATTTTGCACGGAGGGACC
TCTGCATCGTGTATCGGGACGGCAATCCCTATGCGGTACGGGATAAATGCCT
GAAGTTCTACAGCAAAATCTCCGAGTACCGGCACTACTGCTACTCTCTCTATG
GGACGACTCTGGAACAGCAGTACAACAAGCCCTTGTGCGATCTGCTGATTCG
CTGCATTAATCGCCAGAAACCTCTGTGCCCAGAAGAGAAGCAAAGACACCTG
GACAAGAAACAGCGATTCCACAACATCCGAGGGAGATGGACAGGGAGGTGT
ATGAGCTGCTGTCGGAGTTCTAGGACAAGGCGCGAAACCCAGCTTTGA
SEQ ID NO:32: Последовательность белка VB1020 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению. Аминокислотная последовательность, 501 аминокислота):
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP|GGGSSGGGSG|
MFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFARRDL
CIVYRDGNPYAVRDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLL
IRCINRQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQ
L*
SEQ ID NO:33: последовательность ДНК VB1021:
ATGCAGGTCTCCACTGCTGCCCTTGCCGTCCTCCTCTGCACCATGGCTCTCTG
CAACCAGGTCCTCTCT|GCACCACTTGCTGCTGACACGCCGACCGCCTGCTGC
TTCAGCTACACCTCCCGACAGATTCCACAGAATTTCATAGCTGACTACTTTGA
GACGAGCAGCCAGTGCTCCAAGCCCAGTGTCATCTTCCTAACCAAGAGAGGC
CGGCAGGTCTGTGCTGACCCCAGTGAGGAGTGGGTCCAGAAATACGTCAGTG
ACCTGGAGCTGAGTGCC|GAGCTCAAAACCCCACTTGGTGACACAACTCACAC
A|GAGCCCAAATCTTGTGACACACCTCCCCCGTGCCCAAGGTGCCCA|GGCGGT
GGAAGCAGCGGAGGTGGAAGTGGA|GGACAGCCCCGAGAACCACAGGTGTAC
ACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCT
GCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAG
CGGGCAGCCGGAGAACAACTACAACACCACGCCTCCCATGCTGGACTCCGAC
GGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC
AGGGGAACATCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGCTTC
ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA/GGCCTCGGTGGCCTG/ATG
CATGGTGACACACCAACCCTGCACGAATACATGCTCGATCTGCAGCCAGAGA
CTACCGACCTTTACGGCTATGGGCAGTTGAACGACAGCTCTGAGGAGGAGGA
CGAGATCGATGGTCCTGCTGGACAAGCAGAACCAGACAGAGCCCACTACAA
CATCGTAACCTTTTGCTGCAAGTGTGACAGTACCCTTCGTTTGTGCGTTCAGA
GCACGCATGTCGACATTCGGACACTGGAGGATCTGCTCATGGGGACTCTGGG
GATTGTGTGTCCTATTTGCAGCCAGAAACCA/GGCGGAGGATCTTCAGGAGGC
GGGAGTGGC/ATGTTCCAAGACCCTCAGGAACGCCCTCGGAAACTGCCCCAA
TTGTGTACTGAGCTCCAGACAACGATACACGACATAATCCTGGAGTGCGTGT
ATTGCAAGCAGCAGCTTCTGAGGAGGGAAGTGTACGATTTTGCCAGGAGAGA
TGGCTGCATTGTCTACCGAGATGGCAATCCCTATGCGGTGTGTGATAAGTGTC
TGAAGTTCTATTCCAAAATCAGCGAATATCGGCATTATTGCTACTCACTGTAC
GGAACTACCCTCGAACAGCAGTACAACAAACCGCTCTGTGATCTGCTGATCA
GATGCATCAATCGGCAGAAACCCCTTTGTCCCGAAGAGAAGCAAAGACAC
CTGGACAAGAAGCAGAGGTTCCACAATACCCGAGGTCGTTGGACTGGGCGCT
GCATGTCCTGTTGTCGCTCCTCTCGCACAAGGAGAGAGACACAACTGTGA
SEQ ID NO:34: Последовательность белка VB1021 (Гомодимерная конструкция согласно изобретению. Аминокислотная последовательность, 501 аминокислота):
MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS|APLAADTPTACCFSYTSRQIPQNFIAD
YFETSSQCSKPSVIFLTKRGRQVCADPSEEWVQKYVSDLELSA|ELKTPLG
DTTHT|EPKSCDTPPPCPRCP|GGGSSGGGSG|GQPREPQVYTLPPSREEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK|GLGGL|MHGDTPTL
HEYMLDLQPETTDLYGYGQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFC
CKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP|GGGSSGGGSG|
MFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLLRREVYDFARRDG
CIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLL
IRCINRQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNTRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQ
L*
Claims (30)
1. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая гомодимерный белок из двух идентичных аминокислотных цепей, каждая из которых включает: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, указанная направляющая единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO: 1, и указанная антигенная единица включает аминокислотную последовательность, полученную из ранних белков Е6 папилломавируса человека (HPV16) и/или HPV18, и аминокислотную последовательность, полученную из раннего белка Е7 из HPV16 и/или HPV18, где указанный гомодимерный белок может быть использован в качестве HPV вакцины.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где указанный сигнальный пептид состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 1-23 из SEQ ID NO: 1.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2, содержащая антигенную единицу, полученную из Е6 и Е7 HPV16.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2, где указанная антигенная единица содержит мутации для нейтрализации ее онкогенных свойств.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 4, где указанная антигенная единица включает одну или более аминокислотных замен в положениях, выбранных из перечня, состоящего из F47, L50, C63, С106 и l128 SEQ ID NO: 22 и/или C24, E26, C58, C61, C91, C94 SEQ ID NO: 23.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1, 2 или 5, где указанный димеризационный мотив состоит из экзонов шарнирной области h1 и h4, соединенных через линкер с CH3 доменом IgG3 человека.
7. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предыдущих пунктов формулы, кодирующая аминокислотную цепь, содержащую (1) сигнальный пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 1-23 из SEQ ID NO: 1; (2) направляющую единицу, состоящую из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO: 1; (3) димеризационный мотив, который состоит из экзонов шарнирной области h1 и h4, соединенных через линкер с CH3 доменом IgG3 человека; и (4) антигенную единицу, полученную из Е6 и Е7 HPV16, которая содержит мутации для нейтрализации ее онкогенных свойств.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предыдущих пунктов формулы, где указанная молекула нуклеиновой кислоты оптимизирована по кодонам человека.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предыдущих пунктов формулы, которая представляет собой ДНК.
10. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предыдущих пунктов формулы, включающая любую из нуклеотидных последовательностей, выбранных из перечня, состоящего из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 33, или их вариант.
11. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из предыдущих пунктов формулы в составе вектора.
12. Гомодимерный белок из двух идентичных аминокислотных цепей, каждая из которых включает: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, указанная направляющая единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO: 1, и указанная антигенная единица включает аминокислотную последовательность, полученную из ранних белков Е6 HPV16 и/или HPV18, и аминокислотную последовательность, полученную из раннего белка Е7 из HPV16 и/или HPV18, где указанный гомодимерный белок может быть использован в качестве HPV вакцины.
13. Гомодимерный белок по п. 12, где указанный сигнальный пептид состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 1-23 из SEQ ID NO: 1.
14. Гомодимерный белок по п. 12 или 13, содержащий антигенную единицу, полученную из Е6 и Е7 HPV16.
15. Гомодимерный белок по п. 12 или 13, где указанная антигенная единица содержит мутации для нейтрализации ее онкогенных свойств.
16. Гомодимерный белок по п. 15, где указанная антигенная единица включает одну или более аминокислотных замен в положениях, выбранных из перечня, состоящего из F47, L50, С63, С106 и l128 SEQ ID NO: 22 и/или С24, Е26, С58, С61, С91, С94 SEQ ID NO: 23, или делецию, включающую одну или более аминокислот, выбранных из перечня, состоящего из Y43-L50 SEQ ID NO: 22, и/или L22-E26, и/или С58-С61, и/или C91-S95 SEQ ID NO: 23.
17. Гомодимерный белок по любому из пп. 12, 13 или 16, где указанный димеризационный мотив состоит из экзонов шарнирной области h1 и h4, соединенных через линкер с CH3 доменом IgG3 человека.
18. Гомодимерный белок по любому из пп. 12, 13 или 16 в своей зрелой форме без какой-либо последовательности сигнального пептида.
19. Аминокислотная цепь, включающая: (1) сигнальный пептид, (2) направляющую единицу, (3) димеризационный мотив и (4) антигенную единицу, указанная направляющая единица состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью 24-93 из SEQ ID NO: 1, и указанная антигенная единица включает аминокислотную последовательность, полученную из ранних белков Е6 HPV16 и/или HPV18, и аминокислотную последовательность, полученную из раннего белка Е7 из HPV16 и/или HPV18, где указанная аминокислотная цепь способна формировать гомодимерный белок согласно любому из пп. 12-18, где указанный гомодимерный белок может быть использован в качестве HPV вакцины.
20. Применение гомодимерного белка по любому из пп. 12-18, или аминокислотной цепи по п. 19, или молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 8-13 для получения лекарственного средства против HPV.
21. Фармацевтическая композиция против HPV, включающая гомодимерный белок по любому из пп. 12-18, или аминокислотную цепь по п. 19, или молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11.
22. Клетка-хозяин для экспрессии гомодимерного белка по любому из пп. 12-18, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11.
23. Способ получения гомодимерного белка по любому из пп. 12-18 или аминокислотной цепи по п. 19, включающий:
a) трансфекцию молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11 в популяцию клеток;
b) культивирование популяции клеток;
c) сбор и очистку гомодимерного белка или аминокислотной цепи, экспрессированных популяцией клеток.
24. Способ получения вакцины против HPV, включающей иммунологически эффективное количество молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11, где способ включает:
a) получение молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11;
b) растворение молекулы нуклеиновой кислоты, полученной на стадии а), в фармацевтически приемлемом носителе, растворителе или буфере.
25. Вакцина против HPV, включающая иммунологически эффективное количество гомодимерного белка по любому из пп. 12-18, или аминокислотной цепи по п. 19, или молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-11.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161578542P | 2011-12-21 | 2011-12-21 | |
| US61/578,542 | 2011-12-21 | ||
| PCT/EP2012/076404 WO2013092875A1 (en) | 2011-12-21 | 2012-12-20 | Vaccines against hpv |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014129788A RU2014129788A (ru) | 2016-02-10 |
| RU2644201C2 true RU2644201C2 (ru) | 2018-02-08 |
Family
ID=47471832
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014129788A RU2644201C2 (ru) | 2011-12-21 | 2012-12-20 | Вакцины против hpv |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9901635B2 (ru) |
| EP (2) | EP2793937B1 (ru) |
| JP (1) | JP6258864B2 (ru) |
| KR (1) | KR102057265B1 (ru) |
| CN (1) | CN104039833B (ru) |
| AU (1) | AU2012356969B2 (ru) |
| BR (1) | BR112014015016B1 (ru) |
| CA (1) | CA2858963C (ru) |
| DK (1) | DK2793937T3 (ru) |
| ES (1) | ES2730718T3 (ru) |
| HK (1) | HK1202442A1 (ru) |
| HU (1) | HUE043361T2 (ru) |
| IL (1) | IL233217B (ru) |
| PT (1) | PT2793937T (ru) |
| RU (1) | RU2644201C2 (ru) |
| TR (1) | TR201908199T4 (ru) |
| WO (1) | WO2013092875A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201404516B (ru) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014140176A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Vaccibody As | Targeting vaccines for veterinary use |
| EP3992210A1 (en) | 2014-01-13 | 2022-05-04 | Baylor Research Institute | Novel vaccines against hpv and hpv-related diseases |
| MX2017002081A (es) * | 2014-08-15 | 2017-05-23 | Genexine Inc | Metodo para tratar cancer de cuello uterino. |
| AU2016309743B2 (en) * | 2015-08-20 | 2019-02-07 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Therapeutic HPV18 vaccines |
| WO2019048928A1 (en) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | University Of Oslo | VACCINE MOLECULES |
| US12005112B2 (en) | 2017-09-07 | 2024-06-11 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
| KR20230004585A (ko) | 2020-04-09 | 2023-01-06 | 니코데 테라퓨틱스 에이에스에이 | 개별화된 치료용 항암 백신 |
| BR112022021284A2 (pt) | 2020-04-24 | 2022-12-06 | Genexine Inc | Composição farmacêutica, seu uso para tratar ou prevenir um câncer induzido pelo vírus do papiloma humano, e combinação |
| JP2023524054A (ja) | 2020-05-01 | 2023-06-08 | ナイコード セラピューティクス アルメン アクスイェ セルスカプ | ベータコロナウイルスの予防と治療 |
| MX2023011355A (es) | 2021-03-26 | 2023-11-24 | Nykode Therapeutics ASA | Combinacion terapeutica para tratar el cancer. |
| EP4333881A1 (en) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Nykode Therapeutics ASA | Immunogenic constructs and vaccines for use in the prophylactic and therapeutic treatment of infectious diseases |
| WO2022238363A1 (en) | 2021-05-10 | 2022-11-17 | Nykode Therapeutics ASA | Immunogenic constructs and vaccines for use in the prophylactic and therapeutic treatment of infectious diseases |
| AU2022274154A1 (en) | 2021-05-10 | 2023-11-16 | Nykode Therapeutics ASA | Co-expression of constructs and immunostimulatory compounds |
| WO2022238381A2 (en) | 2021-05-10 | 2022-11-17 | Nykode Therapeutics ASA | Immunotherapy constructs for treatment of disease |
| CA3218097A1 (en) | 2021-05-10 | 2022-11-17 | Agnete Brunsvik Fredriksen | Tolerance-inducing constructs and composition and their use for the treatment of immune disorders |
| EP4337247A1 (en) | 2021-05-10 | 2024-03-20 | Nykode Therapeutics ASA | Tolerance-inducing constructs and compositions and their use for the treatment of immune disorders |
| EP4337249A2 (en) | 2021-05-10 | 2024-03-20 | Nykode Therapeutics ASA | Co-expression of constructs and immunoinhibitory compounds |
| CA3235174A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Peter Ebert | Immunogenic constructs and vaccines for use in the prophylactic and therapeutic treatment of diseases caused by sars-cov-2 |
| WO2024092025A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Nykode Therapeutics ASA | Constructs and their use |
| WO2024100196A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Nykode Therapeutics ASA | Co-expression of constructs and polypeptides |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004076489A1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-09-10 | Medinnova As | Modified antibody |
| WO2005089792A1 (en) * | 2004-03-18 | 2005-09-29 | Institut Pasteur | Recombinant protein carrying human papillomavirus epitopes inserted in an adenylate cyclase protein or fragment thereof. therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9105383D0 (en) | 1991-03-14 | 1991-05-01 | Immunology Ltd | An immunotherapeutic for cervical cancer |
| AUPN015794A0 (en) | 1994-12-20 | 1995-01-19 | Csl Limited | Variants of human papilloma virus antigens |
| US7223408B2 (en) | 2002-10-03 | 2007-05-29 | Wyeth Holdings Corporation | Human papillomavirus polypeptides and immunogenic compositions |
| EP1846026A4 (en) | 2005-01-26 | 2008-07-02 | Univ Johns Hopkins | ANTICANCER DNA VACCINE USING PLASMID CODING ANTIGEN AND CALRETICULIN SUCH AS MUTANT ONCOPROTEINS |
| WO2011161244A1 (en) * | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Vaccibody As | Homodimeric protein constructs |
-
2012
- 2012-12-20 AU AU2012356969A patent/AU2012356969B2/en active Active
- 2012-12-20 KR KR1020147020468A patent/KR102057265B1/ko active IP Right Grant
- 2012-12-20 HU HUE12809271A patent/HUE043361T2/hu unknown
- 2012-12-20 EP EP12809271.5A patent/EP2793937B1/en active Active
- 2012-12-20 RU RU2014129788A patent/RU2644201C2/ru active
- 2012-12-20 EP EP19166523.1A patent/EP3533462A1/en not_active Withdrawn
- 2012-12-20 TR TR2019/08199T patent/TR201908199T4/tr unknown
- 2012-12-20 DK DK12809271.5T patent/DK2793937T3/da active
- 2012-12-20 CA CA2858963A patent/CA2858963C/en active Active
- 2012-12-20 ES ES12809271T patent/ES2730718T3/es active Active
- 2012-12-20 BR BR112014015016-8A patent/BR112014015016B1/pt active IP Right Grant
- 2012-12-20 CN CN201280064089.7A patent/CN104039833B/zh active Active
- 2012-12-20 US US14/365,536 patent/US9901635B2/en active Active
- 2012-12-20 WO PCT/EP2012/076404 patent/WO2013092875A1/en active Application Filing
- 2012-12-20 PT PT12809271T patent/PT2793937T/pt unknown
- 2012-12-20 JP JP2014548019A patent/JP6258864B2/ja active Active
-
2014
- 2014-06-18 IL IL233217A patent/IL233217B/en active IP Right Grant
- 2014-06-19 ZA ZA2014/04516A patent/ZA201404516B/en unknown
-
2015
- 2015-03-27 HK HK15103135.3A patent/HK1202442A1/xx unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004076489A1 (en) * | 2003-02-25 | 2004-09-10 | Medinnova As | Modified antibody |
| WO2005089792A1 (en) * | 2004-03-18 | 2005-09-29 | Institut Pasteur | Recombinant protein carrying human papillomavirus epitopes inserted in an adenylate cyclase protein or fragment thereof. therapeutic uses thereof |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| AGNETE BRUNSVIK FREDRIKSEN et al., Chemokine-idiotype fusion DNAvaccines are potentiated by bivalency and xenogeneic sequences, BLOOD, 15 September 2007, Vol.110, No.6, pp.1797-1805. OYNEBRATEN I et al., P19-39. * |
| FREDRIKSEN AB et al. DNA vaccines increase immunogenicity of idiotypic tumor antigen by targeting novel fusion proteins to antigen-presenting cells, Mol Ther. 2006 Apr, Vol.13, No.4, abstr. * |
| RUFFINI PA et al. Human chemokine MIP1α increases efficiency of targeted DNA fusion vaccines, Vaccine., 2010 Dec 16, Vol.29, No.2, abstr. * |
| RUFFINI PA et al. Human chemokine MIP1α increases efficiency of targeted DNA fusion vaccines, Vaccine., 2010 Dec 16, Vol.29, No.2, abstr. AGNETE BRUNSVIK FREDRIKSEN et al., Chemokine-idiotype fusion DNAvaccines are potentiated by bivalency and xenogeneic sequences, BLOOD, 15 September 2007, Vol.110, No.6, pp.1797-1805. OYNEBRATEN I et al., P19-39. Vaccibodies: a novel vaccine strategy for HIV that target viral antigens to APC, Retrovirology 2009, Vol.6, Suppl 3, P359. FREDRIKSEN AB et al. DNA vaccines increase immunogenicity of idiotypic tumor antigen by targeting novel fusion proteins to antigen-presenting cells, Mol Ther. 2006 Apr, Vol.13, No.4, abstr. * |
| Vaccibodies: a novel vaccine strategy for HIV that target viral antigens to APC, Retrovirology 2009, Vol.6, Suppl 3, P359. * |
| Л.Н.УРАЗОВА и др. Рак шейки матки и вирусы папилломы: этиопатогенетические аспекты (обзор литературы), Сибирский онкологический журнал, 2009, No.31(1), стр.64-71. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112014015016B1 (pt) | 2023-10-03 |
| HK1202442A1 (en) | 2015-10-02 |
| NZ626124A (en) | 2016-07-29 |
| HUE043361T2 (hu) | 2019-08-28 |
| AU2012356969A1 (en) | 2014-07-03 |
| BR112014015016A8 (pt) | 2023-05-09 |
| AU2012356969B2 (en) | 2017-05-04 |
| DK2793937T3 (da) | 2019-07-01 |
| TR201908199T4 (tr) | 2019-06-21 |
| IL233217B (en) | 2019-05-30 |
| RU2014129788A (ru) | 2016-02-10 |
| ZA201404516B (en) | 2017-04-26 |
| IL233217A0 (en) | 2014-08-31 |
| CA2858963C (en) | 2023-05-23 |
| WO2013092875A1 (en) | 2013-06-27 |
| EP2793937A1 (en) | 2014-10-29 |
| CN104039833B (zh) | 2018-01-30 |
| PT2793937T (pt) | 2019-06-05 |
| KR102057265B1 (ko) | 2019-12-18 |
| BR112014015016A2 (pt) | 2020-10-27 |
| CN104039833A (zh) | 2014-09-10 |
| EP3533462A1 (en) | 2019-09-04 |
| CA2858963A1 (en) | 2013-06-27 |
| US9901635B2 (en) | 2018-02-27 |
| EP2793937B1 (en) | 2019-04-10 |
| KR20140107569A (ko) | 2014-09-04 |
| JP6258864B2 (ja) | 2018-01-10 |
| ES2730718T3 (es) | 2019-11-12 |
| JP2015508284A (ja) | 2015-03-19 |
| US20150306217A9 (en) | 2015-10-29 |
| US20150056197A1 (en) | 2015-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2644201C2 (ru) | Вакцины против hpv | |
| US11479605B2 (en) | Homodimeric protein constructs | |
| CN107921117B (zh) | Hpv疫苗 | |
| TW200844230A (en) | Signaling peptides | |
| Massa et al. | Antitumor activity of DNA vaccines based on the human papillomavirus-16 E7 protein genetically fused to a plant virus coat protein | |
| JP2022046617A (ja) | 異種ポリペプチドを含むＣｙａＡベースのキメラタンパク質及び免疫応答の誘導におけるその使用 | |
| KR20140069222A (ko) | 교차 제시 수지상 세포를 표적으로 하는 백시바디 | |
| NZ626124B2 (en) | Vaccines against hpv | |
| JP2019033762A (ja) | ホモ二量体タンパク質コンストラクト |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |