RU2633013C2 - Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии - Google Patents

Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии Download PDF

Info

Publication number
RU2633013C2
RU2633013C2 RU2016109528A RU2016109528A RU2633013C2 RU 2633013 C2 RU2633013 C2 RU 2633013C2 RU 2016109528 A RU2016109528 A RU 2016109528A RU 2016109528 A RU2016109528 A RU 2016109528A RU 2633013 C2 RU2633013 C2 RU 2633013C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
chloramphenicol
liquid chromatography
determination
dry residue
chromatograph
Prior art date
Application number
RU2016109528A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2016109528A (ru
Inventor
Людмила Карповна Герунова
Алена Игоревна Шитлина
Елена Валентиновна Темерова
Татьяна Владимировна Бойко
Тарас Владимирович Герунов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина" filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"
Priority to RU2016109528A priority Critical patent/RU2633013C2/ru
Publication of RU2016109528A publication Critical patent/RU2016109528A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2633013C2 publication Critical patent/RU2633013C2/ru

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/35Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using infrared light
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/90Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения. Заявленный способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии включает отбор пробы корма массой от 200 до 500 мг, гомогенизацию, экстракцию 95% этанолом, фильтрацию экстракта, обезвоживание сернокислым натрием, упаривание, растворение сухого остатка в этилацетате, введение растворенного сухого остатка в жидкостный хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, с использованием элюента: смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1, обработку результатов анализа. Технический результат – повышение чувствительности и избирательности способа, а также сокращение длительности проведения анализа. 1 табл.

Description

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения.
Известен способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах и фармпрепаратах, заключающийся в том, что левомицетин переводят из пробы в раствор, проводят кислотный гидролиз и осаждают белок из гидролизата с последующим вольтамперометрическим определением, вольтамперометрическое определение левомицетина осуществляют путем регистрации катодных пиков антибиотика на индикаторном ртутно-пленочном или стеклоуглеродном электроде в дифференциальном режиме съемки вольтамперограмм при соответствующих потенциалах -(0,67±0,05) В и -(0,60±0,03) В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фонах 0,1 моль/дм3 аммония лимоннокислого двузамещенного (рН 4,7-5,1) или 0,1 моль/дм3 (NH4)2SO4 с добавлением НСl до рН 5,1 при скорости развертки потенциала 10-25 мВ/с и концентрацию левомицетина определяют по высоте пика методом добавок аттестованных смесей [Патент RU №2180748, МПК G01N 27/48, 20.03.2002].
Недостатками известного способа являются низкая чувствительность и длительность проведения анализа.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, который заключается в отборе проб - 10 г мяса, гомогенизации с 15 см3 фосфатного буфера (рН=6,88), последующей экстракции 3 раза по 30 см3 этилацетата. Полученную взвесь центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин и декантируют. Этилацетатный слой промывают последовательно 5 см3 насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 мл 10% NaOH; 5 см3 насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 см3 10%-ного СН3СООН; 5 см3 насыщенного раствора NaCl. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (при 50°С) до возможно минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 см3 смеси ацетонитрил-вода (1:4) и экстрагируют 3 раза по 5 см3 петролейным эфиром. Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин экстракцией этилацетатом (3 раза по 5 см3). Этилацетатный слой упаривают досуха, растворяют в 0,1 см3 метанола. В жидкостной хроматограф с колонкой (Ультрасфер ODS, C18) 5 мкм (250×4,6 мм), УФ-детектором при λ=278 нм, используя элюент ацетонитрил-вода-дециламин (40:60:0,1), вводят 5 мкл стандартного раствора (10 нг/мкл) левомицетина. В тех же условиях вводят метанольный экстракт образца мяса. Проводят обработку результатов. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. [Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - №88 ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию». - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47
Недостатками данного метода определения левомицетина является его низкая чувствительность и избирательность, длительность проведения анализа.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение длительности проведения анализа.
Технический результат достигается тем, что в способе определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающем отбор пробы, гомогенизацию, экстракцию, упаривание, растворение сухого остатка, введение растворенного сухого остатка в хроматограф с использованием элюента, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску кормов животного происхождения массой от 200 до 500 мг, экстракцию проводят 95% этанолом, перед упариванием экстракт фильтруют, обезвоживают сернокислым натрием, растворение сухого остатка проводят в этилацетате, в качестве хроматографа используют жидкостной хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1.
Уменьшение массы пробы корма животного происхождения позволяет уменьшить объем экстрагента и количество извлекаемых при экстракции коэкстрактивных веществ, исключить этап очистки экстракта, что сокращает потери искомого вещества, ускоряет выпаривание экстрагента, повышает чувствительность и избирательность метода, сокращает продолжительность проведения анализа.
Использование 95% этанола для экстракции повышает чувствительность и избирательность способа. Экстракция 95% этанолом позволяет извлечь максимальное количество левомицетина, так как его растворимость в 95% этаноле выше, чем в этилацетате.
Фильтрация, обезвоживание экстракта сернокислым натрием сокращает продолжительность проведения анализа.
Использование для растворения сухого остатка этилацетата повышает избирательность метода. Кроме того, использование для растворения сухого остатка этилацетата менее опасно, чем использование метанола.
Использование жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1 позволяет получить острый, симметричный пик левомицетина, коэффициент асимметрии которого близок к 1, а также сократить время удерживания в колонке, что повышает чувствительность, избирательность метода и сокращает время проведения анализа.
Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 250 мг мясокостной муки, гомогенизируют. Далее экстрагируют 95% этанолом по 5 мл трижды по 20 минут. Отдельные экстракты объединяют, фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным безводным сернокислым натрием, в грушевидную колбу для выпаривания, затем упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°С досуха. Полученный сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата и аликвоту вводят в жидкостный хроматограф «Хромос-ЖХ 301» с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм. Рабочая длина волны 278 нм. В качестве элюента используют подвижную фазу ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Скорость потока 500 мкл/мин. Время удерживания левомицетина 5,305 мин. Нижний предел обнаружения 0,005 мг/кг. Проводят обработку результатов анализа. Количество левомицетина в пробе корма животного происхождения (X, мг/кг) рассчитывают по формуле
Х=А×S2×V2 / S1×V1×P,
где X - содержание левомицетина в пробе, мг/кг;
А - количество левомицетина в стандартном растворе, введенном в хроматограф, нг;
S1 - площадь пика стандартного раствора левомицетина, введенного в хроматограф, мм2;
S2 - площадь пика левомицетина в пробе, мм2;
V1 - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
V2 - объем экстракта после растворения сухого оcтатка, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г.
Метрологическая характеристика способа определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии представлена в таблице 1.
Figure 00000001
Анализ метрологических характеристик свидетельствует о высокой чувствительности и избирательности предлагаемого способа.
Предлагаемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии обеспечивает повышение чувствительности и избирательности за счет уменьшения навески пробы; использования в качестве экстрагента 95% этанола; использования жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Чувствительность предлагаемого способа определения левомицетина повышается в 2 раза.
Предлагаемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии обеспечивает сокращение длительности проведения анализа за счет уменьшения массы пробы корма, проведения фильтрации, обезвоживания экстракта сернокислым натрием, использования жидкостного хроматографа с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:01. Длительность проведения анализа предлагаемым способом сокращается в 1,8 раза.
Заявляемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть использован в лабораториях для контроля качества кормов, а также для оценки качества сырья животного происхождения, предназначенного для производства кормов, и определения содержания левомицетина в корме при добавлении в него антибиотика с целью групповой фармакотерапии.
Заявляемый способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии апробирован в химико-токсикологическом отделе БУ ОО «Омская областная ветеринарная лаборатория».
Источники информации
1. Патент RU №2180748, МПК G01N 27/48, 20.03.2002.
2. Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - №88 ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию». - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47 (прототип).

Claims (1)

  1. Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, гомогенизацию, экстракцию, упаривание, растворение сухого остатка, введение растворенного сухого остатка в хроматограф с использованием элюента, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску кормов животного происхождения массой от 200 до 500 мг, экстракцию проводят 95% этанолом, перед упариванием экстракт фильтруют, обезвоживают сернокислым натрием, растворение сухого остатка проводят в этилацетате, в качестве хроматографа используют жидкостной хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер–110C-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1.
RU2016109528A 2016-03-16 2016-03-16 Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии RU2633013C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016109528A RU2633013C2 (ru) 2016-03-16 2016-03-16 Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016109528A RU2633013C2 (ru) 2016-03-16 2016-03-16 Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2016109528A RU2016109528A (ru) 2017-09-19
RU2633013C2 true RU2633013C2 (ru) 2017-10-11

Family

ID=59893622

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016109528A RU2633013C2 (ru) 2016-03-16 2016-03-16 Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2633013C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2729620C1 (ru) * 2019-12-19 2020-08-11 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") Способ одновременного определения комплекса антибиотиков (тетрациклиновая группа, левомицетин, бацитрацин) в мясе и мясных продуктах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112595685A (zh) * 2020-12-29 2021-04-02 中农颖泰林州生物科园有限公司 一种含有天蚕素的产品和对产品中天蚕素含量检测的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2180748C1 (ru) * 2000-12-14 2002-03-20 Томский политехнический университет Способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах и фармпрепаратах
JP2007155657A (ja) * 2005-12-08 2007-06-21 Nippon Flour Mills Co Ltd 液体クロマトグラフィータンデム質量分析法(lc―ms/ms)を使用した農薬の分析方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2180748C1 (ru) * 2000-12-14 2002-03-20 Томский политехнический университет Способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах и фармпрепаратах
JP2007155657A (ja) * 2005-12-08 2007-06-21 Nippon Flour Mills Co Ltd 液体クロマトグラフィータンデム質量分析法(lc―ms/ms)を使用した農薬の分析方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению остаточных количеств левомицетина в продуктах животного происхождения от 20.05.1991 N 4-18/1890 // Институт питания АМН СССР, кафедра общей гигиены Белорусского Государственного института усовершенствования врачей Минздрава СССР. *
Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - N88 ФЗ "Технический регламент на молоко и молочную продукцию". - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47. *
Определение остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа. Методические указания. МУК 4.1.1912 - 04 // Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. - N88 ФЗ "Технический регламент на молоко и молочную продукцию". - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009. - С. 41-47. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению остаточных количеств левомицетина в продуктах животного происхождения от 20.05.1991 N 4-18/1890 // Институт питания АМН СССР, кафедра общей гигиены Белорусского Государственного института усовершенствования врачей Минздрава СССР. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2729620C1 (ru) * 2019-12-19 2020-08-11 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") Способ одновременного определения комплекса антибиотиков (тетрациклиновая группа, левомицетин, бацитрацин) в мясе и мясных продуктах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Also Published As

Publication number Publication date
RU2016109528A (ru) 2017-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sun et al. Simultaneous determination of seven nitroimidazole residues in meat by using HPLC-UV detection with solid-phase extraction
Orlando et al. Extraction of tetracyclinic antibiotic residues from fish filet: comparison and optimization of different procedures using liquid chromatography with fluorescence detection
CN107607645B (zh) 一种同时检测鱼肉中多种类兽药残留的方法
Yang et al. Simultaneous enrichment/determination of six sulfonamides in animal husbandry products and environmental waters by pressure-assisted electrokinetic injection coupled with capillary zone electrophoresis
Jastrzȩbska et al. Application of ion chromatography for the determination of biogenic amines in food samples
CN102081077A (zh) 动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法
RU2633013C2 (ru) Способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии
CN103760121A (zh) 一种血液中亚硝酸盐的检测方法
CN105445390A (zh) 乳制品中氯霉素类残留的检测方法
RU2532237C1 (ru) Способ хроматографического анализа парабенов (эфиров 4-гидроксибензойной кислоты) в продуктах питания, косметике, фармацевтических препаратах и биологически активных добавках
Wang et al. Determination of 23 perfluorinated alkylated substances in water and suspended particles by ultra-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry
Prelusky et al. Sensitive analysis of the mycotoxin zearalenone and its metabolites in biological fluids by high-performance liquid chromatography
CN103439444A (zh) 检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法
Zhang et al. Determination of tryptophan in bee pollen and royal jelly by high‐performance liquid chromatography with fluorescence detection
CN108008057A (zh) 一种禽肉中四环素类抗生素残留量的测定方法
Li et al. Determination of steroid hormones in milk using aqueous two-phase extraction coupled to liquid chromatography
CN114487171B (zh) 一种水产品中硝基呋喃类代谢物的检测方法和应用
CN109632781A (zh) 抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法
Cooper et al. Development of multi‐residue methodology for the HPLC determination of veterinary drugs in animal tissues
Li et al. Fluorometric determination of proline in honey by high-performance liquid chromatography after pre-column derivatization with 7-fluoro-4-nitrobenzo-2-oxa-1, 3-diazole (NBD-F)
RU2696010C1 (ru) Способ определения бацитрацина в мясе и мясных продуктах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии
Chang et al. Simultaneous determination of eleven quinolones antibacterial residues in marine products and animal tissues by liquid chromatography with fluorescence detection
Gbylik-Sikorska et al. Determinaton of enrofloxacin and ciprofloxacin in albumin and freeze-dried-eggs by liquid chromatography with fluorescence detection
Szymański Determination of sulfonamide residues in food by micellar liquid chromatography
Martysiak-Zurowska et al. A comparison of spectrophotometric Winkler method and HPLC technique for determination of 5-hydroxymethylfurfural in natural honey

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190317