RU2630619C2

RU2630619C2 - Фармацевтические композиции, содержащие карбамоилоксиарилалканоиларилпиперазиновое соединение

Info

Publication number: RU2630619C2
Application number: RU2013102958A
Authority: RU
Inventors: Хон Сик МУН; Хань Цзу ЙИ; Ын Хи ЧХЕ; Сан Ми ЧХЕ; Хье Вон ШИНЬ
Original assignee: СК Биофармасьютикалз Ко., Лтд.
Priority date: 2010-07-08
Filing date: 2011-07-08
Publication date: 2017-09-11
Also published as: US20130131081A1; WO2012005536A2; JP6562522B2; BR112013000532A2; JP2016193901A; AU2011274665A1; EP2590650A2; WO2012005536A3; CN103096892A; MX2012015015A; JP2018058855A; RU2013102958A; JP2013536161A; HK1181305A1; CA2803580C; KR101810975B1; US9238633B2; CL2013000034A1; EP2590650A4; US20140243352A1

Abstract

Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания, связанного с 15-липоксигеназой, содержащая терапевтически эффективное количество соединения 3-[4-(3.4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты. Изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с 15-липоксигеназой, а также к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью. Осуществление изобретения позволяет повысить эффективность предупреждения или лечения заболеваний, связанных с 15-липоксигеназой, таких как диабетическая нефропатия, диабетическая невропатия, сосудистые осложнения диабета, гиперлипидемия и воспалительные реакции, индуцированные диабетом. 3 н.п. ф-лы, 15 пр., 2 табл., 6 ил.

Description

Область изобретения

В настоящей заявке на изобретение испрошен приоритет заявки на патент Кореи No.10-2010-0065950, поданной 8 июля 2010 года, в Корейский офис по интеллектуальной собственности, описание которой включено здесь путем ссылки.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей карбамоилоксиарилалканоиларилпиперазиновое соединение, и к способу лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления, путем применения фармацевтической композиции.

Предшествующий уровень техники

Липоксигеназы представляют собой негемовые содержащие железо ферменты, которые обнаружены у растений и животных, и которые катализируют окисление ряда полинасыщенных жирных кислот, таких как липиды и липопротеины. Известно несколько отличающихся липоксигеназ, осуществляющих конкретные реакции окисления. Липоксигеназы млекопитающих названы в соответствии с их местоположением в арахидонате, который должен быть окислен. У людей известно три типа липоксигеназ, и они катализируют добавление молекул кислорода к углероду в положениях 5, 12 и 15 арахидоната. Соответственно, ферменты называются 5-, 12- или 15-липоксигеназой в соответствии с местоположением углерода, к которому добавляются молекулы кислорода. 5-Липоксигеназа превращает арахидонат в 5-гидропероксиэйкозатетраенат (5-НРЕТЕ). Это превращение представляет собой первую фазу метаболического пути образования 5-гидроксиэйкозатетраената (5-НЕТЕ) и лейкотриена (LT). Аналогично, 12- и 15-липоксигеназы, соответственно, превращают арахидонат в 12-НРЕТЕ и 15-НРЕТЕ. Биохимическое восстановление 12-НРЕТЕ приводит к образованию 15-НЕТЕ, который является предшественником соединений, известных как 15-НЕТЕ липоксин. С продуктами, обладающими липоксигеназной активностью, связаны различные биологические эффекты, и многие из этих продуктов известны как факторы-посредники при различных заболеваниях. 15-липоксигеназа обычно экспрессируется в клетках эндотелия, гладкомышечных клетках, моноцитах/макрофагах, клубочковых мезангиальных клетках, эпителиальных клетках почечных канальцев и подоцитах, а также катализирует образование 15-8-гидроксиэйкозатетраената (15-S-HETE) из арахидоната (Natarajan and Nadler, Front. Biosci. (2003) 8:s783-795; Reilly et al., J. Biol. Chem. (2004) 279(10):9440-9450).

Хронические осложнения при диабете включают макрососудистые осложнения, диабетическую нефропатию, диабетическую невропатию и т.д. Если сахарный диабет продолжается в течение нескольких лет, то микро- и макрососуды медленно претерпевают патологические изменения. Микрососудистые изменения развиваются непосредственно из-за гипергликемии. Если образование сорбита облегчается при гипергликемии, то толщина стенки кровяного сосуда увеличивается и затрудняет ток крови, тем самым способствуя свертыванию крови. Если микроскопические повреждения сосудов, вызванные продолжительной гипергликемией, происходят в почках, нейронах и т.д., то могут развиться такие хронические осложнения диабета, такие как диабетическая нефропатия и диабетическая невропатия. При этом гипергликемия является опосредованной причиной макрососудистых осложнений, а повышение уровня холестерина из-за аномального метаболизма липидов при гипергликемическом состоянии является прямой причиной гипергликемии.

Из предшествующего уровня техники известно, что 15-липоксигеназа вовлечена в развитие артериосклероза, гломерулонефрита, гиперлипидемии или воспаления. Также в KR 2008-67364 в качестве ингибиторов 15-липоксигеназы предложены триазольные соединения. Тем не менее, агент для предупреждения или лечения таких заболеваний путем ингибирования 15-липоксигеназы в настоящее время в продаже отсутствует. Таким образом, существует необходимость в разработке фармацевтической композиции для предупреждения или лечения таких заболеваний.

Описание изобретения

Техническая задача

В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления.

В настоящем изобретении также предложен способ лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления, путем применения фармацевтической композиции.

Решение задачи

В соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения, предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления, где фармацевтическая композиция включает терапевтически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из соединения, представленного формулой I, указанной ниже, его фармацевтически приемлемых соли, изомера, сольвата или гидрата, их комбинации, а также фармацевтически приемлемый носитель:

,

где X₁ представляет собой по меньшей мере один заместитель, выбранный из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного С1-С6алкила, F, Cl или Br-содержащего галогена, линейной или разветвленной группы С1-С6алкокси, нитро и трифторметила;

Х₂ представляет собой по меньшей мере один заместитель, выбранный из группы, состоящей из водорода, линейного или разветвленного С1-С6алкила, галогена, линейной или разветвленной группы С1-С6алкокси, нитро, трифторметила, и если Х₂ содержит два или более чем два заместителя, то они являются одинаковыми или отличаются друг от друга и образуют кольцо вместе с соседним атомом углерода; и

Y представляет собой водород или метил, или вместе с соседним атомом углерода образует карбонил.

Фармацевтическая композиция в соответствии с воплощением настоящего изобретения может включать терапевтически эффективное количество соединения, выбранного из группы, состоящей из соединения, представленного формулой 1 выше, его фармацевтически приемлемых соли, изомера, сольвата или гидрата и их комбинации.

В еще одном воплощении предложен способ лечения заболевания, связанного с 15-липоксигеназой, при котором пациенту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соединения, выбранного из группы, содержащей соединение, представленное формулой I, его фармацевтически приемлемые соль, изомер, сольват или гидрат или их комбинации. Заболевание, связанное с 15-липоксигеназой, выбрано из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления.

Термин "лечение" понимают как предупреждение развития заболевания или состояния, подавление заболевания или состояния, то есть подавление развития заболевания или состояния, а также облегчение заболевания или состояния, что обозначает наступление регресса заболевания или состояния, у животного, страдающего заболеванием, выбранным из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления или состояния, или у животного, у которого еще не диагностировано заболевание или состояние, но которое имеет склонность к такому заболеванию или состоянию. Соответственно, термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству, которое достаточно для достижения фармацевтического действия, то есть терапевтического действия.

Соединение, представленное Формулой 1 в соответствии с воплощением настоящего изобретения, может быть получено специалистом в данной области техники с учетом синтеза соединений в данной области техники путем использования известных соединений или соединений, которые можно легко из них получить. В частности, способы получения соединения подробно описаны в документе KR 2008-40393, поданном авторами настоящего изобретения, который включен сюда путем ссылки. Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы химически способами, описанными в упомянутом выше источнике. Тем не менее, эти способы использованы только в целях иллюстрации. Соответственно, последовательность способа, который использован здесь, может быть частично изменена при необходимости, и не может ограничивать объем настоящего изобретения.

Соединение может также включать, кроме соединения, представленного формулой I, его фармацевтически приемлемую соль, представляющую собой его соль присоединения кислоты или основания, а также стереохимический изомер соединения, представленного формулой I, фармацевтически приемлемая соль может представлять собой любую из различных солей, которые дают возможность исходному соединению поддерживать активность в организме субъекта, которому вводят соединение, и которые не вызывают побочных действий. Фармацевтически приемлемая соль может представлять собой неорганическую соль или органическую соль. Примеры кислоты представляют собой уксусную кислоту, соляную кислоту, азотную кислоту, аспарагиновую кислоту, сульфоновую кислоту, серную кислоту, малеиновую кислоту, глутаминовую кислоту, муравьиную кислоту, янтарную кислоту, ортофосфорную кислоту, фталевую кислоту, таниновую кислоту, винную кислоту, бромистоводородную кислоту пропионовую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, стеариновую кислоту, этансульфоновую кислоту, масляную кислоту, бикарбоновую кислоту, бисерную кислоту, бивинную кислоту, щавелевую кислоту, бутиловую кислоту (butylic acid), кальций эдетовую кислоту, камсиловую кислоту, угольную кислоту, хлорбензойную кислоту, лимонную кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту, толуолсульфоновую кислоту, эдицилиновую кислоту (edicylinic acid), эцилиновую кислоту (ecylinic acid), фумаровую кислоту, глуцептиновую кислоту, памовую кислоту, глюконовую кислоту, гликолиларсаниловую кислоту, метилазотную кислоту, полигалактуроновую кислоту, гексиллизорциноновую кислоту, малоновую кислоту, гидробамовую кислоту, хлористоводородную кислоту, йодистоводородную кислоту, гидроксилнафтоловую кислоту, изетионовую кислоту, лактобионовую кислоту, миндальную кислоту, эстолиновую кислоту, муциновую кислоту, нафциловую кислоту, муконовую кислоту, пара-нитрометансульфоновую кислоту, гексамовую кислоту, пантотеновую кислоту, гидрофосфорную кислоту, дигидрофосфорную кислоту, салициловую кислоту, сульфамовую кислоту, сульфанильную кислоту, метансульфоновую кислоту и теоклиновую кислоту. Например, кислота для соли присоединения может представлять собой соляную кислоту или метансульфоновую кислоту. Также примеры основной соли представляют собой соль аммония, а также соль щелочного или щелочно-земельного металла, такого как литий, натрий, калий, магний или кальций. Подробно описанные примеры основной соли представляют собой соль, содержащую органическое основание, такое как бензатин, N-метил-D-глюкамин или гидрабаминовую соль, а также соль, содержащую аминокислоту, такую как аргинин или лизин. Также соли можно преобразовать в форму свободных радикалов путем обработки подходящим основанием или кислотой. Термин "соль присоединения" включает соединение растворителя, которое получено из соединения, представленного формулой I, и его солей. Примеры соединений растворителя представляют собой гидраты и алкоголяты.

Кроме того, стереохимический изомер соединения, представленного формулой I в соответствии с воплощением настоящего изобретения, относится к любому соединению, которое можно получить из соединения, представленного формулой I. Если не определено иное, то химические обозначения соединений указывают на любые возможные смеси типов стереохимических изомеров, и примеры смесей представляют собой диастереоизомеры и энантиомеры, каждый из которых имеет основную молекулярную структуру. В частности, стереоцентр может иметь R- или S-координацию, а замещающий 2-валентный циклический (частично) насыщенный радикал может иметь цис- или транс-положение. Соединение, обладающее двойной связью, может иметь Е или Z-стереохимию в двойной связи. Стереохимический изомер соединения, представленного формулой I, включен в объем настоящего изобретения.

Не ограничивающие объем изобретения примеры соединения, представленного формулой I, представляют собой 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-фторфенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты, 3-(4-бензо[1,3]диоксол-5-ил-пиперазин-1-ил)-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир карбаминовой кислоты, гидрохлорид 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-трифторметилфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-нитрофенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты, 3-[4-(4-хлорфенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (R)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (S)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (R)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-фенилбутиловый эфир карбаминовой кислоты, а также 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-хлорфенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты. В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения, соединение, представленное формулой I, может представлять собой 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (R)-карбаминовой кислоты.

Фармацевтическая композиция в соответствии с одним воплощением настоящего изобретения может включать фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтически приемлемый носитель фармацевтической композиции может представлять собой любой из различных материалов, которые обычно используют в композициях, и не ограничивающие объем изобретения примеры фармацевтически приемлемого носителя представляют собой лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, ортофосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, а также минеральное масло. Фармацевтическая композиция может дополнительно включать смазывающий агент, увлажнитель, ароматизатор, эмульгатор, суспендирующий агент, консервант и т.д. Подходящие фармацевтически приемлемые носители и композиции подробно описаны в Remington’s Pharmaceutical Sciences (19th ed.,1995).

В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения, фармацевтическую композицию можно вводить перорально или парентерально. Парентеральное введение может представлять собой внутривенную инфузию, подкожную инфузию, внутримышечную инфузию, внутрибрюшинную инфузию, введение в эндотелий, местное введение, интраназальное введение, интравагинальное введение, внутрилегочное введение или интраректальное введение. В случае перорального введения активный материал может быть покрыт оболочкой или приготовлен с обеспечением защиты от разрушения в желудке. Также фармацевтическую композицию можно вводить посредством любого устройства, которое позволяет активному материалу достичь клетки-мишени. Путь введения может отличаться в соответствии с общим состоянием или возрастом субъекта, которого лечат, состояния, которое лечат, и используемым активным материалом.

Подходящее для введения количество фармацевтической композиции может отличаться в зависимости от способа изготовления, способа введения, возраста, массы, пола и состояния здоровья пациента, пищи, времени введения, пути введения, скорости выведения и чувствительности реакции. Обычно врачи-специалисты в данной области техники без труда могут определить и назначить вводимое количество, которое эффективно для лечения или предупреждения. Вводимое количество фармацевтической композиции можно доставлять целиком за один раз, или его можно разделить на несколько порций, и, например, фармацевтическую композицию можно вводить от одного до четырех раз в сутки.

Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в виде стандартной лекарственной формы путем применения способа, который очевиден для специалистов в данной области техники, с фармацевтически пригодным носителем и/или эксципиентом, или может быть изготовлена с применением контейнера со множеством доз. В этом случае композиция может представлять собой раствор, суспензию или эмульсию в масле или водной среде, экстракт, порошок, гранулу, таблетку или капсулу, а также в фармацевтическую композицию может быть дополнительно включен диспергатор или стабилизатор. Также фармацевтическую композицию можно вводить в композиции суппозитория, спрея, мази, крема, геля, с помощью ингалятора или кожного пластыря.

Фармацевтическую композицию можно применять для предупреждения или лечения диабетической нефропатии, диабетической невропатии или сосудистых осложнений диабета.

Термин "диабетический" обозначает, что причиной соответствующего заболевания является диабет. Хотя термин "диабет" относится к группе заболеваний, которая характеризуется как хроническая гипергликемия, вызванная дефицитом инсулина, и которая демонстрирует различные нарушенные метаболические пути в результате хронической гипергликемии. Соответственно, диабетическую нефропатию, диабетическую невропатию и сосудистые осложнения диабета, понимают как нефропатию, вызванную диабетом, невропатию, вызванную диабетом, а также сосудистые осложнения, вызванные диабетом.

Диабетическая нефропатия относится к заболеванию, при котором микрососуды почек нарушаются и, таким образом, белки выводятся непосредственно без фильтрации. Диабетическая нефропатия развивается вследствие чрезмерной проницаемости почечного клубочка, утолщения новой базальной мембраны клубочка, пролиферации клеток гломерулярного мезангия, утолщения клубочка, а также синтеза и увеличения внеклеточного матрикса, и вызывают постепенный гломерулосклероз и почечную недостаточность. Диабетическая невропатия представляет собой осложнение нервной системы при диабете, при котором нарушение происходит в функции или структуре нейронов в результате диабета, и часто развивается в периферической нервной системе. Кроме того, сосудистые осложнения диабета относятся к заболеванию, при котором развивается ангиосклероз вследствие вызванной диабетом гипергликемии и метаболического расстройства, такого как резистентность к инсулину, которое приводит к расстройству кровообращения.

Кроме того, фармацевтическую композицию применяют для предупреждения или лечения гипергликемии, ишемической болезни сердца или воспаления.

Гиперлипидемия относится к состоянию, при котором метаболизм жира, такого как триглицериды или холестерин, проходит с нарушениями и, таким образом, кровь содержит огромное количество жира, и когда жировой материал присутствует в крови, тогда он может накапливаться на стенках кровеносных сосудов, вызывая воспаление, и таким образом приводя к сердечнососудистому заболеванию. Кроме того, ишемическая болезнь сердца относится к состоянию, при котором откладывается жир, фиброзная ткань накапливается в артерии (коронарной артерии или сердечной артерии), через которую кровь поступает к сердцу, и, таким образом, поток крови, поступающей к сердечной мышце, ограничивается настолько, что развивается стенокардия, некроз миокарда и инфаркт миокарда, и, таким образом, функции сердца серьезно нарушаются. В соответствии с воплощением настоящего изобретения причиной гиперлипидемии или ишемической болезни сердца может быть диабет.

Под воспалением специалист в данной области техники понимает включение симптома, который характеризуется как местный или системный защитный ответ, и может быть вызван химическими и/или физиологическими реакциями против физических внешних ран, инфекции, хронических заболеваний, описанных выше, и/или внешних стимулов (например, части аллергической реакции). Реакции вызывают разрушение, бред или отделение раневых тканей. Например, воспаление развивается в результате лихорадки, опухания, боли, гиперемии, расширения сосудов и/или усиленного кровотока, инвазии лейкоцитов в инфицированные области, или утраты функции и/или воспалительного состояния, связанного с другими симптомами. Соответственно, в понятие воспаления включают воспалительное заболевание, расстройство или состояние, и в частности острое, хроническое, язвенное, специфическое, аллергическое и некротическое воспаление, а также другие типы воспаления, известные специалистам в данной области техники. Соответственно, фармацевтическая композиция может быть использована для лечения астмы, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), фиброза легких, аллергического заболевания, ринита, воспалительного заболевания кишечника, язвы, воспалительной боли, лихорадки, артериосклероза, ишемической болезни сердца, васкулита, панкреатита, артрита, остеоартрита, ревматоидного артрита, конъюнктивита, воспаления радужной оболочки, склерита, увеита, заживления ран, дерматита, экземы, псориаза, инсульта, диабета, аутоиммунного заболевания, болезни Альцгеймера, рассеянного склероза, саркоидоза, болезни Ходжкина, других злокачественных опухолей, а также других типов заболеваний, включающих воспалительный фактор.

В соответствии с воплощением настоящего изобретения соединение может обладать ингибирующей активностью в отношении 15-липоксигеназы.

Известно, что 15-липоксигеназа является причиной различных заболеваний, включая артериосклероз, астму, гломерулонефрит, хронические осложнения при диабете и т.д. (Harats et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., (2000) 20(9):2100-2105; Natarajan et al., Front Biosci., (2003)8:s783-795; Hatley et al., J. Biol. Chem., (2003) 278(28):25369-25375; Shannon et al., Am. Rev. Respir. Dis., (1993) 147(4):1024-1028; Montero and Badr, Exp. Neph., (2000) 8(1):14-19; Hatley et al., J. Biol. Chem., (2003) 278(28):25369-25375; Natarajan et al., Arterioscler Thromb. Vase. Biol., 24, (2004) 24(9): 1542-1548; Ma et al., Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids., (2005) 72(1): 13-20; Xu et al., Kidney Int., (2006) 69(3):512-9; Dwarakanath et al., J. Vase. Res., (2008) 45(2):132-142), a экспрессия 15-липоксигеназы усиливается при диабетическом состоянии или состоянии гипергликемии. Усиленная экспрессия 15-липоксигеназы влияет на различные метаболические пути, сигнальную сеть, контроль транскрипции и экспрессию генов, тем самым усиливая образование свободных радикалов, перекисное окисление липидов, митоген-активирующейся протеинкиназы (MAP), а также воспалительных реакций. Такие результаты способствуют развитию осложнений диабета, и путем искусственного ингибирования экспрессии или активности 15-липоксигеназы можно предупредить и лечить сосудистые осложнения диабета, диабетическую нефропатию и диабетическую невропатию в модели диабета у животных (Natarajan and Nadler, Front. Biosci. (2003) 8:s783-795; Reilly et al., J. Biol. Chem. (2004) 279(10):9440-9450; Obrosova et al., Diabetes 55 (Suppl.1) (2006) A188; Xu et al., Nephrol Dial Transplant., (2009) 24(6): 1744-1752; Yuan et al., Am J Physiol Renal Physiol. (2008) 295(2):F605-617). Кроме того, ингибирование экспрессии или активности 15-липоксигеназы предполагают в качестве способа предупреждения или лечения ишемической болезни сердца, которая индуцируется или не индуцируется при диабете (Siu, J Cardiovasc Med (Hagerstown), (2010) 11(1):1-6; Nagelin et al., J. Biol. Chem. (2009) 284(45):31303-31314; Natarajan et al., Front Biosci. (2003) 8:s783-95; Hatley et al., J. Biol. Chem. (2003) 278(28):25369-25375), а также поскольку 15-липоксигеназа играет важную роль в биосинтезе при астме, аллергии, псориазе, и поскольку факторы, опосредующие воспаление, и ингибиторы фермента ингибируют биохимический путь, связанный с состоянием болезни, ингибирование 15-липоксигеназы полезно при лечении связанных с воспалением заболеваний (Liu et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. (2009) 297(1):1196-1203; Jeon et al., Clin Exp Allergy. (2009) 39(6):908-917; Claesson, Prostaglandins Other Lipid Mediat. (2009) 89(3-4):120-125; Hajek, J Allergy Clin Immunol., (2008) 122(3):633-639).

Следовательно, соединение, проявляющее ингибирующую активность против 15-липоксигеназы, можно применять в качестве агента для предупреждения или лечения диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца или воспаления, как описано выше.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, осложнений на сосудах, связанных с диабетом, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца и воспаления, включающий приведение фармацевтической композиции в контакт с субъектом.

Контакт можно осуществлять in vitro или in vivo. Если контакт осуществляют in vivo, то способ может дополнительно включать введение фармацевтической композиции субъекту.

Субъект может представлять собой клетку, ткань, орган или индивида. Кроме того, введение может включать непосредственный контакт раствора фармацевтической композиции, растворенной в подходящем буферном растворе, и клетки, ткани или органа, или может представлять собой парентеральное введение. Фармацевтическая композиция и способ введения, используемые при лечении, уже были описаны выше и, таким образом, не будут описаны здесь подробно.

При этом субъект, которому вводят фармацевтическую композицию, может представлять собой любой вид животного. Например, субъект может представлять собой человека, или животное, отличающееся от человека, такое как собака, кошка или мышь.

Краткое описание графических материалов

Описанные выше и другие характерные особенности и преимущества настоящего изобретения станут более понятными путем подробного описания примеров воплощений со ссылкой на приложенные графические материалы, где:

на фиг.1 представлены результаты измерения количества общего холестерина в сыворотке крови, полученные после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом;

на фиг.2 представлены результаты измерения количества триглицеридов в сыворотке крови, полученные после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом;

на фиг.3 представлены результаты уровня экспрессии фибронектина в ткани коры почки после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом;

на фиг.4 представлены результаты измерения количества мРНК, транскрибируемой с гена PAI-1 в тканях коры почек после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом;

на фиг.5 представлены результаты измерения количества мРНК, транскрибируемой с гена МСР-1, в тканях коры почек после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом; и

на фиг.6 представлены результаты измерения количества мРНК, транскрибируемой с гена TGF-β1 в тканях коры почек, после введения соединения в соответствии с воплощением настоящего изобретения мыши с индуцированным диабетом, где на фиг.1-6 * указывает на то, что существует статистическая значимость между контрольной и тестируемой группой, которым соединение не вводили, а + указывает на то, что существует статистическая значимость между тестируемой группой, которой соединение не вводили, и тестируемой группой, которой вводили соединение.

Способ по изобретению

Настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Эти примеры служат только в целях иллюстрации, и не ограничивают объем изобретения.

Пример 1: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира карбаминовой кислоты.

554 мг (2,887 ммоль) этилбензоилацетата и 641 мг (2,887 ммоль) 3,4-диметоксифенилпиперазина растворяли в толуоле и кипятили с обратным холодильником в течение 24 часов. 736 мг (1,99 ммоль) соединения, полученного после концентрирования при пониженном давлении, растворяли в метаноле и охлаждали до температуры 0°С, и медленно добавляли 109 мг (2,887 ммоль) борогидрида натрия. Полученный в результате раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем растворитель концентрировали при пониженном давлении и разбавляли водой, и несколько раз экстрагировали этилацетатом. Затем полученный органический слой сушили с использованием сульфата магния и фильтровали, концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали путем колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=1:1), таким образом получая 1,592 ммоль (589 мг) соединения. Полученное вещество растворяли в тетрагидрофуране (10 мл), затем к нему добавляли 820 мг (5 ммоль) 1,1’-карбомидазола и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем добавляли избыток водного аммиака и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли водой и несколько раз экстрагировали этилацетатом, и полученный органический слой сушили сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Полученный остаток очищали путем колоночной хроматографии (этилацетат) с получением желаемого соединения (Количество: 329 мг, Выход: 28%).

¹H ЯМР (ядерный магнитный резонанс) (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1H), 3.04 (m, 5Н), 3.61 (m, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.88 (d, 6H), 4.77 (br, 2H), 6.15 (t, 1H), 6.42 (d, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.82 (d, 1H), 7.41 (m, 5Н)

Пример 2: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-фторфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 1, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали 4-фторбензоилацетат и 3,4-диметоксифенилпиперазин (Количество: 542 мг, Выход: 37%).

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1H), 3.01 (m, 5Н), 3.60 (m, 2H), 3.75 (m, 2H), 3.86 (d, 6H), 4.92 (br, 2H), 6.15 (t, 1H), 6.42 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 7.04 (t,2H), 7.38 (t, 2H)

Пример 3: Синтез 3-(4-бензо[1,3]диоксол-5-илпиперазин-1-ил)-3-оксо-1-фенилпропилового эфира карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 1, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали этилбензоилацетат и 3,4-метилендиоксифенилпиперазин (Количество: 190 мг, Выход: 48%)

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.98 (m, 6H), 3.59 (m, 2H), 3.76 (m, 2H), 4.71 (br, 2H), 5.94 (s, 2H), 6.15 (t, 1H), 6.36 (dd, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.74 (d, 1H), 3.40 (m, 5Н)

Пример 4: Синтез хлоргидрата 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-трифторметилфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 1, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали этил-4-трифторметилбензоилацетат и 3,4-диметоксифенилпиперазин (Количество: 250 мг, Выход: 52%). Полученный продукт растворяли в дихлорметане, и к нему добавляли насыщенный раствор HCI/эфира, чтобы получить хлоргидрат.

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO), δ: 2.90 (dd, 1Н), 3.12 (dd, 1H), 3.34 (m, 4H), 3.75 (s, 3Н), 3.78 (s, 3Н), 3.85 (m, 4H), 6.00 (m, 1H), 6.60 (br, 2H), 7.01 (m, 2H), 7.20 (m, 1H), 7.60 (d,2H), 7.75 (d,2H)

Пример 5: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-нитрофенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 1, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали этил-4-нитробензоилацетат и 3,4-диметоксифенилпиперазин (Количество: 261 мг, Выход: 57%).

¹H ЯМР (200 МГц, DMSO), δ: 2.96 (dd, 1H), 3.16 (dd, 1H), 3.42 (m, 4H), 3.76 (s, 3Н), 3.78 (s, 3Н), 3.92 (m, 4H), 6.05 (m, 1H), 6.64 (br, 2H), 7.02 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.65 (d, 2H), 8.24 (d, 2H)

Пример 6: Синтез 3-[4-(4-хлорфенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты

1,0 г (6,0 ммоль) (R)-3-гидрокси-3-фенилпропионовой кислоты и 1,18 г (6,0 ммоль) 4-хлорфенилпиперазина растворяли в 50 мл тетрагидрофурана в качестве растворителя при комнатной температуре, и к раствору по капле добавляли 1,24 г (6,0 ммоль) EDC (1,2-дихлорэтан) и 0,81 г (6 ммоль) HOBt (гидроксибензотриазол) и перемешивали при температуре 25°С в течение 5 часов. Избыток растворителя удаляли путем перегонки в условиях пониженного давления, и полученный продукт нейтрализовали 20 мл 1 н. водного раствора хлорида натрия, к нему добавляли 25 мл этилацетата, и полученный органический слой отделяли и дважды экстрагировали 15 мл этилацетата. Органический слой сушили 2 г безводного сульфата магния и фильтровали, а фильтрат концентрировали в условиях пониженного давления и очищали путем отделения при помощи колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=от 1:1 до 1:10). 0,345 г (1 ммоль) полученного продукта растворяли в 15 мл тетрагидрофурана, и затем к нему добавляли 0,325 г (2 ммоль) 1,1’-карбодимидазола и перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре, и затем добавляли избыток раствора аммиака и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли водой и несколько раз экстрагировали этилацетатом, и полученный органический слой сушили сульфатом магния и концентрировали в условиях пониженного давления. Полученный остаток очищали путем колоночной хроматографии (гексан: этилацетат=1:1), получая таким образом желаемое соединение (Количество: 1,2 г, Выход: 52,5%).

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1Н), 3.07 (m, 5H), 3.58 (m, 2H), 3.74 (m, 2H), 4.81 (br, 2H), 6.13 (t, 1Н), 6.84 (d, 2H), 7.38 (m, 7H)

Пример 7: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (S)-карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 6, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали (S)-3-гидрокси-3-фенилпропионовую кислоту (6 ммоль) и 3,4-диметоксифенилпиперазин (6 ммоль) (Количество: 1,38 г, Выход: 56%)

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1Н), 3.04 (m, 5H), 3.61 (m, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.88 (d, 6H), 4.77 (br, 2H), 6.15 (t, 1Н), 6.42 (d, 1Н), 6.57 (s, 1Н), 6.82 (d, 1H),7.41 (m, 5H)

Пример 8: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (Р)-карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 6, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали (R)-3-гидрокси-3-фенилпропионовую кислоту и 3,4-диметоксифенилпиперазин (Количество: 1,040 г, Выход: 42%)

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1Н), 3.04 (m, 5H), 3.61 (m, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.88 (d, 6H), 4.77 (br, 2H), 6.15 (t, 1Н),

Пример 9: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-фенилбутилового эфира карбаминовой кислоты

Фенил-1-профенилкетон (4,1 ммоль) и 3,4-диметоксифенилпиперазин (4,9 ммоль) растворяли в 30 мл этанола в качестве растворителя, и перемешивали при температуре 72°С в течение 48 часов. Растворитель перегоняли в условиях пониженного давления, и полученную смесь разбавляли водой, дважды экстрагировали водой и дважды экстрагировали этилацетатом. Органический слой перегоняли в условиях пониженного давления, и затем сушили сульфатом магния и фильтровали, а фильтрат концентрировали в условиях пониженного давления и очищали путем колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=4:1), получая таким образом соединение. Это соединение (2,9 ммоль) растворяли в 20 мл метанола, и к нему медленно добавляли NaBH₄ (3,8 ммоль). Полученный продукт перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, растворитель концентрировали в условиях пониженного давления, и желтый остаток очищали путем колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=1:1). Очищенное соединение (2 ммоль) растворяли в 15 мл тетрагидрофурана и затем к нему добавляли 1,1’-карбодиимидазол (4 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем добавляли избыток водного аммиака и перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли водой и несколько раз экстрагировали этилацетатом, и полученный органический слой сушили с сульфатом магния и концентрировали в условиях пониженного давления. Полученный остаток очищали путем колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=1:1), получая таким образом конечный продукт (Количество: 90,9 мг, Выход: 22%).

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 1.81 (m, 1Н), 2.32 (m, 1H), 2.5 (m, 3H), 2.8 (m, 2H), 3.14 (m, 4H), 3.80 (s, 6H), 4.80 (br, 2H),6.02 (t, 1H), 6.92 (m, 4H), 7.36 (m, 5H)

Пример 10: Синтез 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-хлорфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты

Желаемое соединение получали, как описано в примере 1, за исключением того, что в качестве исходных материалов использовали этил-4-хлорбензоилацетат и 3,4-диметоксифенилпиперазин (Количество: 543 мг, Выход: 42%).

¹H ЯМР (200 МГц, CDCl3), δ: 2.82 (dd, 1H), 3.01 (m, 5H), 3.61 (m, 2H), 3.77 (m, 2H), 3.86 (d, 6H), 4.84 (br, 2H), 6.15 (t, 1H), 6.42 (d, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.82 (d, 1H), 7.35 (s, 4H)

Пример 11: Тест in-vitro ингибирующего действия в отношении 15-липоксигеназы

Для того чтобы подтвердить, что соединения, полученные в соответствии с примерами 1-10, специфически ингибируют только 15-липоксигеназу, использовали человеческую индуцированную тромбоцитами 12-липоксигеназу в качестве отрицательного контроля и кроличью индуцированную ретикулоцитами 15-липоксигеназу в качестве тестируемой группы для идентификации ингибирующего действия соединений в отношении 12-липоксигеназы.

12-Липоксигеназа взаимодействует с арахидонатом в качестве субстрата с получением 12-гидроксиэкозатетреноата (12-НЕТЕ) в качестве продукта. Соответственно, активность 12-липоксигеназы оценивают путем измерения количества образованного 12-НЕТЕ с использованием спектрометрии. Кроме того, 15-липоксигеназа взаимодействует с линоленовой кислотой в качестве субстрата для получения 13-гидроперокси-9,11-октадекадиеноевой кислоты (13-HPODE) в качестве продукта. Соответственно, активность 15-липоксигеназы оценивают путем измерения количества полученного 13-HPODE с использованием спектрометрии.

Активность 12-липоксигеназы измеряли, когда концентрация каждого соединения составляла 10 мкМ. Каждый образец предварительно обрабатывали буферным раствором (50 сМ Tris-HCl, 0,1% Triton X-100, pH 7,4) при температуре 25°С в течение 15 минут, и затем добавляли 30 мкМ арахидоната (его концентрацию контролировали таким образом, чтобы она составляла 30 мкМ во время взаимодействия), и оставляли взаимодействовать при температуре 25°С в течение 15 минут, и количество 12-НЕТЕ, в качестве полученного продукта, измеряли путем поглощения при длине волны 570 нм.

Активность 15-липоксигеназы измеряли, когда концентрация каждого соединения составляла 10 мкМ. Каждый образец предварительно обрабатывали с применением буферного раствора (физиологический раствор, забуференный фосфатом, pH 7.4) при температуре 4°С в течение 15 минут, и затем добавляли 260 мкМ линоленовой кислоты (ее концентрацию контролировали таким образом, чтобы она составляла 260 мкМ во время взаимодействия) и оставляли при температуре 4°С на 10 минут, и количество 13-HPODE в качестве полученного продукта измеряли по поглощению при длине волны 660 нм.

Результаты, полученные путем измерения ингибирующего действия соединений в отношении 12-липоксигеназы, представлены в таблице 1.

Таблица 1
Пример	Соединение	15-липоксигеназа	12-липоксигеназа
		Ингибирующий уровень при 10 мкМ (%)	Ингибирующий уровень при 10 мкМ (%)
1	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир карбаминовой кислоты	73	10
2	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-фторфенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты	69	-5
3	3-(4-бензо[1,3]диоксол-5-илпиперазин-1-ил)-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир карбаминовой кислоты	85	-8
4	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-трифторметилфенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты; гидрохлорид	48	0
5	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-нитрофенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты	75	0
6	3-[4-(4-хлорфенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (R)-карбаминовой кислоты	114	11
7	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (S)-карбаминовой кислоты	69	2
8	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (R)-карбаминовой кислоты	79	15
9	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-фенилбутиловый эфир карбаминовой кислоты	62	0
10	3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-хлорфенил)-3-оксопропиловый эфир карбаминовой кислоты	72	7

Пример 12: Тестирование фармацевтического действия в отношении диабетической гиперлипидемии в модели диабета у животных

Крыс Sprague-Dawley (n=21, 4 недели, самцы) использовали в качестве лабораторных моделей (Central Lab. Animal Inc.). Крыс (n=14), страдающих диабетом, вызванным путем внутрибрюшинного введения 50 мг/кг стрептозотоцина, использовали в качестве тестируемой группы, а крыс (n=7), которым внутрибрюшинно вводили только растворитель (100 мМ буферного раствора лимонной кислоты, рН 4,5), использовали в качестве контроля. Обычно стрептозотоцин разрушает бета-клетки поджелудочной железы, вызывая диабет, и, таким образом, сахар в крови увеличивается, и количество холестерина и триглицеридов в сыворотке увеличиваются. Через двое суток после введения стрептозотоцина диабет вызвали в тестируемой группе. Тестируемую группу разделили на две группы, и крысам в одной группе перорально вводили один раз в сутки 200 мг/кг 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты в течение четырех недель. Другой группе перорально вводили 30% пол и этилен гликоля (PEG) вместо соединения.

Через 4 недели после введения соединения или PEG измеряли количества общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови в каждой группе, и результаты измерения представлены на фиг.1 и 2. Для измерения количеств общего холестерина и триглицеридов, у крыс отбирали сыворотку крови и использовали автоматический анализатор Hitachi 7600. В результате подтвердили, что благодаря введению 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты концентрация (120±13 мг/дл) общего холестерина, повышенного вследствие стрептозотоцина, снижалась до 66±9 мг/дл, по аналогии с 62±5 мг/дл в контрольной группе, и также концентрация (760±162 мг/дл) триглицеридов, повышенная вследствие стрептозотоцина, существенно уменьшалась до 126±44 мг/дл. Таким образом, уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови значительно уменьшался вследствие введения соединения. Эти результаты подтвердили, что соединение полезно для предупреждения или лечения гиперлипидемии.

Пример 13: Тестирование фармацевтического действия в отношении диабетической нефропатии

В качестве лабораторный моделей использовали крыс Sprague-Dawley (n=21, 4 недели, самцы) (Central Lab. Animal Inc.). Крыс (n=14), страдающих диабетом, вызванным путем внутрибрюшинного введения 50 мг/кг стрептозотоцина, использовали в качестве тестируемой группы, а крыс (n=7), которым внутрибрюшинно вводили только растворитель (100 мМ буферный раствор лимонной кислоты, рН 4,5), использовали в качестве контроля. Обычно у крыс, страдающих диабетом, вызванным стрептозотоцином, диабетическая нефропатия обусловлена гипергликемией, и одним из симптомов является фиброз почек, и повышается экспрессия гена белка внеклеточного матрикса, такого как фибронектин. Через 2 суток после введения стрептозотоцина диабет вызывали в тестируемой группе. Тестируемую группу делили на две группы, и крысам одной группы перорально вводили раз в сутки 200 мг/кг 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты в течение 4 недель. Другой группе перорально вводили 30% полиэтиленгликоля (PEG) вместо соединения.

После 4-недель введения соединения и PEG ткани коры почек экстрагировали в каждой группе и затем измеряли уровень экспрессии фибронектина при помощи полимеразной цепной реакции в реальном времени (а именно количество мРНК, транскрибируемой с гена фибронектина) (смотри фиг.3). Уровень экспрессии фибронектина измеряли с помощью прямого праймера (5’-GCCACACCTACAACCAGTAT-3’; SEQ ID NO:1) и обратного праймера (5’-ATGACCACTCAGAAATGGAG-3’; SEQ ID NO:2). При полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-PCR) отжиг проводили в течение одной минуты при температуре 60°С, в качестве флуоресцирующего материала использовали SYBR green (Applied Biosystem), и использовали систему ПЦР в реальном времени 7300 производства Applied Biosystem Company. Реакции, отличающиеся от отжига, осуществляли с применением способа, известного специалистам в данной области техники, в соответствии с протоколом, предложенным производителем. В качестве контроля использовали мРНК гена бета-актина, а результаты измерений представлены путем деления количества мРНК фибронектина, количественно оцененного по результатам RT-PCR, на количество мРНК бета-актина. Как результат, вследствие введения стрептозотоцина уровень экспрессии фибронектина в коре почек повысился в 1,4±0,1 раз по сравнению с контролем, и благодаря введению 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты уровень экспрессии фибронектина в коре почек снижался в 1,2±0,1 раз больше по сравнению с контролем. На основании этих результатов подтвердили, что соединение эффективно для ингибирования фиброза почек, вызванного диабетом.

Пример 14: Тестирование фармацевтического действия в отношении воспалительной реакции в модели животного с индуцированной диабетической нефропатией

Когда диабетическая нефропатия вызвана стрептозотоцином, в почках увеличиваются воспалительные реакции и, таким образом, увеличивается экспрессия различных связанных с воспалением генов (например, PAI-1, МСР- и TGF-β1). Соответственно, для подтверждения фармацевтического действия соединения на воспалительные реакции в тканях коры почек соответствующих групп, используемых в Примере 13, с помощью RT-PCR, используемой в Примере 13, измеряли количество мРНК, транскрибирующейся с генов РА1-1, МСР-1 и TGF-β1 (смотри фиг.4, 5 и 6). Гены амплифицировали с использованием следующих последовательностей праймеров: прямой праймер (5’-TCCGCCATCACCATTTT-3’; SEQ ID NO:3) и обратный праймер (5’-GTCAGTCATGCCCAGCTTCTC-3’; SEQ ID NO:4), которые использовали для амплификации РА1-1; прямой праймер (5’-CCTCCACCACTATGCAGGTCTCC-3’; SEQ ID NO:5) и обратный праймер (5’-GCACGTGGATGCTACAGGC-3’; SEQ ID NO:6), которые использовали для амплификации МСР-1; и прямой праймер (5’-CCAACTACTGCTTCAGCTCCA-3’; SEQ ID NO:7) и обратный праймер (5’-GTCTCCAGGCTCCAAATGT-3’; SEQ ID NO:8), которые использовали для амплификации TGF-β1.

В результате экспрессии РА1-1, МСР-1 и TGF-β1, которые представляют собой гены, связанные с воспалением, в коре почек увеличивались соответственно в 1,8±0,1, 3,4±1,0 и 1,6±0,2 по сравнению с контролем, и благодаря введению 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты, уровни экспрессии генов PAI-1, МСР-1 и TGF-β1 в коре почек соответственно уменьшались в 1,1±0,2, 1,6±0,3 и 1,3±0,2 раз по сравнению с контролем. На основании этих результатов подтвердили, что соединение эффективно для ингибирования экспрессии генов, связанных с воспалением, индуцированным диабетом.

В соответствии с результатами примеров 13 и 14 подтвердили, что поскольку соединение ингибирует экспрессию генов, связанных с фиброзом и воспалением, вызывающих диабетическую нефропатию, соединение полезно для предупреждения или лечения диабетической нефропатии.

Пример 15: Введение 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты и изготовление содержащей его таблетки (ожидаемый результат)

Соединение по настоящему изобретению применяют для предупреждения или лечения диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца или воспаления. Клинически подходящее количество для введения (пероральное введение) составляло 300 мг для взрослого человека.

На основании вводимого количества изготовили таблетку, содержащую компоненты, представленные в Таблице 2 ниже, с применением традиционного способа. В качестве наполнителя использовали Avicel 102 (микрокристаллическая целлюлоза).

Таблица 2
Компонент	Количество
3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропиловый эфир (S)-карбаминовой кислоты	300 мг
Повидон К30	50 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	170 мг
Натрий крахмал гликолят	27,5 мг
Стеарат магния	2,5 мг
Итого	550 мг

Подходящее количество для введения соединения составляло 60 кг для взрослого человека, что эквивалентно одной или двум таблеткам, содержащим компонент.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно применять для эффективного предупреждения или лечения диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии, ишемической болезни сердца или воспаления.

Несмотря на то, что настоящее изобретение продемонстрировано и описано со ссылкой на примеры воплощений, специалистам в данной области техники понятно, что могут быть осуществлены различные изменения формы и деталей без отступления от сущности и объема настоящего изобретения, определенного в формуле изобретения.

Последовательности нуклеотида или полипептида SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8 представлены в виде перечня последовательностей, и контексты в перечне последовательностей полностью включены в настоящую заявку.

Claims

1. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 15-липоксигеназы, для предупреждения или лечения заболевания, связанного с 15-липоксигеназой и выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии и воспалительных реакций, индуцированных диабетом, содержащая терапевтически эффективное количество соединения 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты или его фармацевтически приемлемых соли, сольвата или гидрата и фармацевтически приемлемый носитель.

2. Способ лечения заболевания, связанного с 15-липоксигеназой и выбранного из группы, состоящей из диабетической нефропатии, диабетической невропатии, сосудистых осложнений диабета, гиперлипидемии и воспалительных реакций, индуцированных диабетом, включающий введение субъекту, которого лечат, фармацевтической композиции по п. 1.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 15-липоксигеназы, содержащая соединение, выбранное из группы, состоящей из 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-фторфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты, 3-(4-бензо[1,3]диоксол-5-илпиперазин-1-ил)-3-оксо-1-фенилпропилового эфира карбаминовой кислоты, гидрохлорида 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-трифторметилфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-нитрофенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты, 3-[4-(4-хлорфенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (S)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-3-оксо-1-фенилпропилового эфира (R)-карбаминовой кислоты, 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-фенилбутилового эфира карбаминовой кислоты и 3-[4-(3,4-диметоксифенил)-пиперазин-1-ил]-1-(4-хлорфенил)-3-оксопропилового эфира карбаминовой кислоты, или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или гидрат и фармацевтически приемлемый носитель.