RU2598270C2 - Новая молочнокислая бактерия и способ производства с ее помощью силоса или ферментированного корма - Google Patents
Новая молочнокислая бактерия и способ производства с ее помощью силоса или ферментированного корма Download PDFInfo
- Publication number
- RU2598270C2 RU2598270C2 RU2014102762/10A RU2014102762A RU2598270C2 RU 2598270 C2 RU2598270 C2 RU 2598270C2 RU 2014102762/10 A RU2014102762/10 A RU 2014102762/10A RU 2014102762 A RU2014102762 A RU 2014102762A RU 2598270 C2 RU2598270 C2 RU 2598270C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactic acid
- silage
- sbs
- nisin
- strain
- Prior art date
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 207
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 115
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 103
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 103
- 239000004460 silage Substances 0.000 title claims abstract description 59
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 52
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 52
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 33
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 claims abstract 4
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 33
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 91
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 89
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 89
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 89
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 55
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 32
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 20
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 17
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 15
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 11
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 11
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAWKGBKLRHURSZ-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butanoic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(O)=O.CCCC(O)=O.CC(O)C(O)=O FAWKGBKLRHURSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 8
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 7
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 6
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 6
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 6
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 244000060234 Gmelina philippensis Species 0.000 description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 5
- 241001668545 Pascopyrum Species 0.000 description 5
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 108010074461 nisin A Proteins 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 4
- 240000004296 Lolium perenne Species 0.000 description 4
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 4
- 239000008361 herbal raw material Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- -1 3-methylanthionine Chemical compound 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 3
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 3
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 244000081757 Phalaris arundinacea Species 0.000 description 3
- 235000015696 Portulacaria afra Nutrition 0.000 description 3
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 3
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 3
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 3
- 244000177175 Typha elephantina Species 0.000 description 3
- 235000018747 Typha elephantina Nutrition 0.000 description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000234643 Festuca arundinacea Species 0.000 description 2
- 241000234645 Festuca pratensis Species 0.000 description 2
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209082 Lolium Species 0.000 description 2
- 244000294411 Mirabilis expansa Species 0.000 description 2
- 235000015429 Mirabilis expansa Nutrition 0.000 description 2
- 241000746983 Phleum pratense Species 0.000 description 2
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 2
- 244000152045 Themeda triandra Species 0.000 description 2
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 2
- 229940069780 barley extract Drugs 0.000 description 2
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000004140 ketosis Effects 0.000 description 2
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 235000013536 miso Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 108700042622 nisin Z Proteins 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 241000441614 x Festulolium Species 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IBAOFQIOOBQLHE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,9-dihydropurin-9-ium-6-one;chloride Chemical compound Cl.N1C(N)=NC(=O)C2=C1N=CN2 IBAOFQIOOBQLHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000609240 Ambelania acida Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000861718 Chloris <Aves> Species 0.000 description 1
- UQBOJOOOTLPNST-UHFFFAOYSA-N Dehydroalanine Chemical compound NC(=C)C(O)=O UQBOJOOOTLPNST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000058871 Echinochloa crus-galli Species 0.000 description 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N L-lanthionine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSC[C@H](N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 1
- 241001520921 Leersia virginica Species 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191998 Pediococcus acidilactici Species 0.000 description 1
- 241000191996 Pediococcus pentosaceus Species 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000006004 Urochloa deflexa Nutrition 0.000 description 1
- 241000186514 Warburgia ugandensis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 235000016127 added sugars Nutrition 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010905 bagasse Substances 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000003977 dairy farming Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000019249 food preservative Nutrition 0.000 description 1
- 239000005452 food preservative Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000006458 gyp medium Substances 0.000 description 1
- 239000004463 hay Substances 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 239000006049 herbal material Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N meso-lanthionine Natural products OC(=O)C(N)CSCC(N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000021108 sauerkraut Nutrition 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 235000020083 shōchū Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000015041 whisky Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/231—Lactis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Birds (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Physiology (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Предложены штамм молочнокислой бактерии Lactococcus lactis SBS-0001 (NITE BP-1107) и штамм молочнокислой бактерии Lactococcus lactis SBS-0002 (NITE BP-1108) для производства силоса. Указанные штаммы способны подавлять маслянокислое брожение в сырье для силоса или ферментированного корма, имеющем низкое содержание сахара, и не отличающемся достаточным качеством брожения при использовании обычной молочнокислой бактерии. Предложена также микробная добавка для производства силоса, препарат которой содержит один из указанных штаммов и штамм молочнокислой бактерии Lactobacillus paracasei SBS-0003 (NITE BP-1109), обладающий кислотной устойчивостью. Указанную микробную добавку используют в способе получения силоса, предусматривающем добавление микробной добавки к сырью и брожение сырья, содержащего микробную добавку для производства силоса, при температуре от 5 до 30°C в течение 1 недели и более. Группа изобретений позволяет улучшить качество брожения силоса. 4 н.п. ф-лы, 15 табл., 2 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к молочнокислой бактерии, способной подавлять маслянокислое брожение, к микробной добавке, содержащей бактерию, а также к способу производства силоса или ферментированного корма с использованием микробной добавки.
Уровень техники
Силос, который получают в результате молочнокислого брожения основного корма для скота, такого как трава и кормовые культуры, в анаэробных условиях, в настоящее время является важным кормом, используемым в молочном животноводстве. Таким образом, производство высококачественного силоса очень важно для молочных фермеров. В процессе молочнокислого брожения часто параллельно происходит нежелательное вредное брожение. Это проблематичное брожение вызвано более активным размножением в силосе маслянокислых бактерий по сравнению с молочнокислыми бактериями, что приводит к увеличению содержания в силосе масляной кислоты. При увеличении содержания масляной кислоты в силосе вкусовые качества корма ухудшаются, и потребление корма коровами снижается, а также начинают развиваться такие проблематичные заболевания, как кетоз. Для предотвращения такой порчи, вызванной маслянокислыми бактериями, широко используемым методом является использование молочнокислой бактерии в качестве добавки к силосу. Действительно, были использованы различные молочнокислые бактерии, и большинство из них подавляют маслянокислое брожение за счет ускорения молочнокислого брожения для снижения pH. Однако в условиях, способствующих маслянокислому брожению (в частности, высоком содержании воды, низком содержании сахара и загрязнении большим количеством почвы), эти молочнокислые бактерии могут недостаточно подавлять маслянокислые бактерии. Даже в настоящее время неизбежное производство силоса, испорченного маслянокислым брожением, является проблемой.
Для получения эффекта от молочнокислой бактерии, добавленной к силосу, в сырой траве содержание растворимых сахаридов (сухого вещества) должно быть на уровне 5,0-6,0% (что эквивалентно 1,0-3,0% в сыром веществе) или выше (непатентный документ 1). Кроме того, поскольку многие виды трав и кормовых культур имеют низкое содержание сахара, все молочнокислые бактерии, о которых когда-либо сообщалось, часто не в состоянии оказывать достаточный эффект на качество силоса и подавлять маслянокислое брожение.
Между тем, некоторые молочнокислые бактерии, как известно, производят бактериоцин, антибактериальный белок, в процессе ферментации или культивирования. Одним из таких бактериоцинов является низин, антибактериальный белок, состоящий из 34 аминокислот и продуцируемый некоторыми штаммами Lactococcus lactis, молочнокислых бактерий, который содержит в своей молекуле лантионин, 3-метиллантионин, дегидроаланин, дегидробутирин и 2-аминомасляную кислоту. Низин имеет несколько аналогов, и структуры трех аналогов низина, низина A, низина Z и низина Q, уже определены. Недавно стало известно о низине U, продуцируемом Streptococcus uberis, и низине F, продуцируемом Lactococcus lactis.
Низин имеет широкий спектр антибактериального действия в отношении грамположительных бактерий, включая маслянокислую бактерию. Так, при добавлении к силосу низин может ингибировать маслянокислую бактерию. В настоящее время низин A, являющийся аналогом низина, широко используется в пищевой промышленности в качестве пищевого консерванта для сыра и консервированных овощей, поскольку низин A получил одобрение ВОЗ и ФАО. Однако в случае, когда низин непосредственно добавляют к пище, необходим низин в высокой концентрации, который должен быть получен в результате культивирования молочнокислой бактерии, а также стадий экстракции, очистки и высушивания. Таким образом, процесс в целом требует высоких затрат. Кроме того, низин проявляет немедленный антибактериальный эффект, однако этот эффект трудно сохранить и он может снижаться в некоторых случаях вследствие взаимодействия с ингредиентом, к которому низин был добавлен.
Учитывая данные обстоятельства, были проведены исследования по добавлению продуцирующей низин молочнокислой бактерии к пищевым продуктам, таким как сыр, квашеная капуста, соевое мисо и рисовое мисо (непатентные документы 2-5), однако такую молочнокислую бактерию никогда не использовали на практике применительно к траве и кормовым культурам (сырью силоса), отходам при производстве продуктов питания, и так далее. Одна из возможных причин этого заключается в следующем. Это силосное сырье бедно питательными веществами, включая сахар, который является важным компонентом для роста молочнокислых бактерий, по сравнению с пищевыми продуктами. Кроме того, поскольку это силосное сырье не проходит стадию стерилизации, которую, как правило, проходят пищевые продукты, молочнокислая бактерия растет в конкуренции с другими микроорганизмами. Таким образом, даже при добавлении продуцирующей низин молочнокислой бактерии, которая эффективна в случае пищевых продуктов, эффект может не проявиться в полной степени. В попытке преодолеть данный недостаток, сообщалось о молочнокислой бактерии, которая продуцирует низин в высокой концентрации в синтетической культуральной среде, и о продукции низина в среде ферментированного ячменного экстракта (патентный документ 1 и непатентный документ 6). Однако ни в одном документе предшествующего уровня техники не описано производство низина в высокой концентрации в силосном материале, содержащем другое питательное вещество, хотя раскрыто производство низина в высокой концентрации в синтетической культуральной среде или в среде ферментированного ячменного экстракта.
В случае, когда молочнокислую бактерию добавляют к силосу, известно, что к сырью для силоса добавляют Lactococcus lactis RO50, способную продуцировать бактериоцин (патентный документ 2). Однако в некоторых случаях не был достигнут достаточный эффект улучшения брожения, что свидетельствует о том, что эффект Lactococcus lactis RO50 не достигается систематически. Кроме того, четко не выяснено, действительно ли Lactococcus lactis RO50 продуцирует бактериоцин в силосе (непатентные документы 7 и 8). В патентном документе 3 раскрыт способ внесения добавок в силос, в котором используют продуцирующую низин молочнокислую бактерию и устойчивую к низину молочнокислую бактерию, и в силосе определяют активность низина, составляющую 200 МЕ/г. Тем не менее, по сравнению со случаем, когда добавляют не продуцирующую низин молочнокислую бактерию, качество брожения, включая pH, общее содержание органической кислоты, отношение аммонийного азота к общему азоту и так далее, существенно не менялось. Кроме того, эксперимент проводили при содержании сахара, при котором обычно используемая молочнокислая бактерия может оказывать благоприятный эффект на брожение (5,0% или выше (сухое вещество), 1,0% или выше (сырое вещество)). Таким образом, в патентном документе 3 не описан эффект молочнокислой бактерии в жестких условиях низкого содержания сахара.
Список цитированной литературы
Патентные документы
Патентный документ 1: WO 2005/080550.
Патентный документ 2: JP-A-2004-41064.
Патентный документ 3: EP 1273237 A1.
Непатентные документы
Непатентный документ 1: Takayoshi MASUKO (1999), Progress in Silage Science, Dairy Japan Corporation, 99-101.
Непатентный документ 2: Delves-Broughton, J. et al., Antonie van Leeuwenhoek (1996) 69: 193-202.
Непатентный документ 3: Harris, L. J. et al., Appl. Environ. Microbiol.(1992) 58: 1484-1589.
Непатентный документ 4: Takeo Kato et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. (1999) 63: 642-647.
Непатентный документ 5: Takeo Kato et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. (2001) 65: 330-337.
Непатентный документ 6: Furuta Y. et al., J. Biosci. Bioeng. (2008) 106: 393-397.
Непатентный документ 7: Cai Yimin et al., Research Results of NARO Institute of Livestock and Grassland Science (2002) No. 2: 53-54.
Непатентный документ 8: Hisami Kobayashi et al., Japanese Journal of Grassland Science (2010) 56: 39-46.
Сущность изобретения
Проблемы, решаемые с помощью изобретения
Задачей настоящего изобретения является получение путем отбора молочнокислой бактерии, способной продуцировать низин в высокой концентрации даже в условиях брожения силоса, когда легко развивается маслянокислое брожение, чтобы тем самым создать способ систематического получения высококачественного силоса и высококачественного ферментированного корма, включающий добавление к силосу микробной добавки, содержащей молочнокислую бактерию, обладающую такой способностью.
Средства для решения проблем
Для того чтобы выбрать молочнокислую бактерию, способную демонстрировать высокую производительность в силосе, авторы изобретения создали травяную бульонную питательную среду без добавления сахара и с существенно более низким содержанием моно- и дисахаридов. Авторы изобретения культивировали молочнокислые бактерии с использованием созданной таким образом среды и выбрали продуцирующие низин молочнокислые бактерии путем скрининга. В результате авторам изобретения удалось получить путем скрининга молочнокислую бактерию, проявляющую более высокую низин-продуцирующую активность в травяной бульонной питательной среде, по сравнению с известными продуцирующими низин штаммами молочнокислых бактерий. Настоящее изобретение было осуществлено на основе этих результатов.
Соответственно, настоящее изобретение относится к следующим пунктам [1]-[11].
[1] Молочнокислая бактерия, продуцирующая низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 40 МЕ или более на мл супернатанта среды.
[2] Молочнокислая бактерия по п.[1], продуцирующая низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,7 масс.%, в концентрации 100 МЕ или более на мл супернатанта среды.
[3] Молочнокислая бактерия по п.[1] или [2], продуцирующая низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 100 МЕ или более на мл супернатанта среды.
[4] Молочнокислая бактерия по любому из пунктов [1]-[3], представляющая собой штамм SBS-0001 Lactococcus lactis (NITE BP-1107) или штамм SBS-0002 Lactococcus lactis (NITE BP-1108).
[5] Микробная добавка для производства силоса, содержащая молочнокислую бактерию, продуцирующую низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 40 МЕ или более на мл супернатанта среды.
[6] Микробная добавка для производства силоса по п.5, отличающаяся тем, что молочнокислая бактерия представляет собой молочнокислую бактерию по любому из пунктов [2]-[4].
[7] Микробная добавка для производства силоса по п.[5] или [6], дополнительно содержащая молочнокислую бактерию, обладающую кислотной устойчивостью.
[8] Микробная добавка для производства силоса по п.[7], отличающаяся тем, что молочнокислая бактерия, обладающая кислотной устойчивостью, представляет собой штамм SBS-0003 Lactobacillus paracasei (NITE BP-1109).
[9] Способ производства силоса или ферментированного корма, включающий использование микробной добавки для производства силоса, содержащей молочнокислую бактерию, продуцирующую низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 40 МЕ или более на мл супернатанта среды.
[10] Способ производства силоса или ферментированного корма по п.[9], отличающийся тем, что молочнокислая бактерия представляет собой молочнокислую бактерию по любому из пунктов [2]-[4].
[11] Способ производства силоса или ферментированного корма по п.[9] или [10], отличающийся тем, что микробная добавка для производства силоса дополнительно содержит молочнокислую бактерию, обладающую кислотной устойчивостью.
Эффекты изобретения
В настоящее время многие молочные фермеры страдают от проблем, связанных с маслянокислым брожением силоса и ферментированного корма. По настоящему изобретению предложена молочнокислая бактерия, продуцирующая низин даже в материале с низким содержанием сахара, который похож на силос, предназначенный для брожения. По настоящему изобретению также предложена микробная добавка, содержащая вышеуказанную молочнокислую бактерию и дополнительную молочнокислую бактерию, обладающую кислотной устойчивостью, при этом добавка подавляет маслянокислое брожение, тем самым способствуя желательному молочнокислому брожению. В соответствии с настоящим изобретением можно производить силос или ферментированный корм с гарантированной высокой безопасностью и высокой вкусовой привлекательностью для домашнего скота.
Способы осуществления изобретения
Продуцирующую низин молочнокислую бактерию по настоящему изобретению получают путем отбора молочнокислой бактерии, продуцирующей низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов 1,0 масс.% или менее, предпочтительно 0,7 масс.% или менее, более предпочтительно 0,4 масс.% или менее.
В настоящем изобретении не существует никаких особых ограничений в отношении травы для получения травяной бульонной питательной среды, в которой проводят отбор продуцирующей низин молочнокислой бактерии, при условии, что траву используют в качестве силоса или ферментированного корма. Примеры травы включают люцерну, клевер, тимофеевку, ежу, двукисточник тростниковидный, пырей, итальянский райграс, пастбищный райграс, овсяницу высокую, овсяницу луговую, фестулолиум, мятлик луговой, полевицу белую, просо гвинейское, хлорис гвианскую и слоновую траву. С учетом условий, в которых существует вероятность маслянокислого брожения, трава предпочтительно является травой с низким содержанием сахара, такой как люцерна, клевер, тимофеевка, ежа, двукисточник тростниковидный, пырей, просо гвинейское, хлорис гвианская или слоновая трава. Трава может быть как свежескошенным зеленым кормом, так и полученным из травы охлажденным или замороженным продуктом. Альтернативно, можно также использовать сухой порошок из травы, полученный путем сушки обдувом или лиофилизации свежей травы с последующим измельчением. Кроме того, можно также использовать обычные доступные кормовые продукты, такие как гранулы люцерны и кубы сена.
Травяная бульонная питательная среда, используемая по настоящему изобретению, представляет собой среду, содержащую в качестве единственного питательного вещества жидкость, полученную при замачивании описанной выше травы в горячей воде. Температура горячей воды составляет предпочтительно 50-100°C, более предпочтительно 70-100°C. Время для замачивания травы в горячей воде составляет предпочтительно от 10 до 180 минут, более предпочтительно от 30 до 120 минут. При необходимости, настоянную на траве жидкость предпочтительно фильтруют для удаления твердого материала перед использованием. Для отбора молочнокислой бактерии, продуцирующей низин в условиях низкого содержания сахара, травяную бульонную питательную среду, используемую по изобретению, предпочтительно разбавляют водой таким образом, чтобы общее содержание в ней моно- и дисахаридов составляло 1,0 масс.% или менее, предпочтительно 0,7 масс.% или менее, более предпочтительно 0,4 масс.% или менее. Нижний предел общего содержания моно- и дисахаридов составляет предпочтительно 0,1 масс.%, более предпочтительно 0,2 масс.%.
При отборе продуцирующей низин молочнокислой бактерии по настоящему изобретению можно использовать условия культивирования, при которых можно выращивать обычные молочнокислые бактерии. В одном примере молочнокислые бактерии инокулируют в травяную бульонную питательную среду при концентрации клеток от 0,1 до 1,0 масс.% и проводят статическое культивирование при 25-35°C в течение 8-24 часов.
Само собой разумеется, что поскольку продуцирующий низин штамм обладает устойчивостью к низину, при первичном скрининге можно отбирать штаммы, способные расти в среде с добавлением низина. В этом случае среда для скрининга может представлять собой среду MRS, содержащую низин в концентрации от 100 до 1000 МЕ/мл. Продуцирующую низин бактерию, способную выполнить задачу по настоящему изобретению, можно выбирать путем измерения концентрации низина или активности низина в культуральном супернатанте. Концентрацию низина можно определять таким методом, как высокоэффективная жидкостная хроматография. Активность низина можно определять как антибактериальную активность в отношении чувствительного к низину штамма молочнокислой бактерии или маслянокислой бактерии; например, Lactobacillus bulgaricus. Активность низина предпочтительно определяют как содержание низина. Содержание низина в культуральном супернатанте можно определять общеизвестным методом. В одном конкретном методе активность низина можно определять с помощью лунок в агаровом геле. Более конкретно, пенициллиновые флаконы (диаметр: 8 мм) помещают на чашку 1,5% агара со средой MRS. На агар со средой наслаивают 0,75% агар со средой MRS, содержащей 0,1% раствор культуры Lactobacillus bulgaricus JCM1002T в качестве индикаторной бактерии. После затвердевания агара пенициллиновые флаконы удаляют, и чашку используют в качестве среды для пластинчатых разводок в антибактериальном тесте. Каждый культуральный супернатант фильтруют для удаления ненужных микроорганизмов и добавляют в лунки, сформированные при помощи пенициллиновых флаконов. Чашку культивируют в анаэробных условиях при 37°C в течение 24 часов, и измеряют диаметр кольца ингибирования для индикаторной бактерии. При использовании препарата низина (производства Sigma, содержание низина: 2,5%) в качестве стандарта, можно получить активность низина на микрограмм низина, соответствующую 40 МЕ (1 МЕ эквивалентна 1 мкг препарата низина).
Молочнокислая бактерия по настоящему изобретению представляет собой молочнокислую бактерию, продуцирующую низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 40 МЕ или более на мл супернатанта среды.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения молочнокислая бактерия продуцирует низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,7 масс.%, в концентрации 100 МЕ или более на мл супернатанта среды. Более предпочтительно, молочнокислая бактерия продуцирует низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 100 МЕ или более на мл супернатанта среды.
Вышеуказанное общее содержание моно- и дисахаридов в травяной бульонной питательной среде более предпочтительно составляет от 0,2 до 0,4 масс.%. Продукция низина в среде составляет 40 МЕ или более на мл супернатанта, предпочтительно 100 МЕ или более, даже более предпочтительно от 100 до 400 МЕ, даже более предпочтительно от 100 до 300 МЕ.
Кроме того, даже в условиях низкого рН (то есть, pH 5), молочнокислая бактерия по настоящему изобретению продуцирует низин в травяной бульонной питательной среде, имеющей общее содержание моно- и дисахаридов от 0,1 до 0,4 масс.%, в концентрации 40 МЕ или более на мл супернатанта среды. Поскольку молочнокислая бактерия по настоящему изобретению способна продуцировать низин в условиях низкого рН, молочнокислая бактерия по настоящему изобретению сохраняет способность продуцировать низин в течение длительного периода времени.
Вышеуказанная продуцирующая низин молочнокислая бактерия предпочтительно принадлежит к роду Lactococcus, более предпочтительно к Lactococcus lactis. Конкретные примеры включают штамм SBS-0001 Lactococcus lactis (NITE BP-1107), штамм SBS-0002 Lactococcus lactis (NITE BP-1108), штамм SBS-0004 Lactococcus lactis и штамм SBS-0005 Lactococcus lactis. Из них, штамм SBS-0001 Lactococcus lactis (NITE BP-1107) и штамм SBS-0002 Lactococcus lactis (NITE BP-1108) являются предпочтительными.
Вышеуказанные штамм SBS-0001 и штамм SBS-0002 депонированы в депозитарии патентованных микроорганизмов Национального института технологии и оценки (2-5-8, Kazusakamatari, Kisarazu, Chiba, 292-0818, Япония) 15 июня 2011 г.
Молочнокислая бактерия по настоящему изобретению способна расти даже в присутствии травы с низким содержанием сахара и может проявлять способность к брожению, тем самым продуцируя низин в больших количествах. Таким образом, бактерия по настоящему изобретению полезна в качестве ингредиента микробной добавки для производства силоса.
Вышеуказанную молочнокислую бактерию можно культивировать в обычной культуральной среде для молочнокислых бактерий. Никаких конкретных ограничений не существует в отношении среды, при условии, что среду можно использовать для культивирования молочнокислых бактерий. Примеры среды, которую можно использовать по настоящему изобретению, включают среду GYP (Michio KOZAKI et al., Manual for Experiments of lactobacillus, 1992, Asakura Publishing Co., Ltd.) и среду MRS (de Man J.C. et al., Journal of Applied Bacteriology, Vol. 23, 130-135 (1960)). Никаких конкретных ограничений не существует в отношении условий культивирования. Как правило, культивирование можно проводить при рН 5,0-7,0 и температуре 25-40°C в течение 10-24 часов. Продукт культивирования молочнокислой бактерии можно добавлять к силосу или ферментированному корму в виде концентрата культурального раствора или гранул. Концентрат можно замораживать для использования. Альтернативно, продукт культивирования молочнокислой бактерии можно лиофилизировать, высушивать распылением или высушивать в псевдоожиженном слое с соответствующим защитным средством или носителем, и использовать полученный таким образом порошок.
Микробная добавка по настоящему изобретению может содержать продуцирующие низин штаммы молочнокислой бактерии, входящие в объем настоящего изобретения, сами по себе или в сочетании с различными видами. Кроме того, микробная добавка может содержать дополнительную молочнокислую бактерию. В частности, если добавка содержит кислотоустойчивую молочнокислую бактерию, маслянокислое брожение подавляется, и может происходить полезное молочнокислое брожение. В этом случае, разумеется, дополнительная молочнокислая бактерия представляет собой предпочтительно штамм с высокой устойчивостью к низину. Никаких конкретных ограничений не существует в отношении кислотоустойчивой молочнокислой бактерии, и примеры включают Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Enterococcus faecium, Pediococcus acidilactici и Pediococcus pentosaceus. Примеры предпочтительных кислотоустойчивых молочнокислых бактерий включают штамм SBS-0003 Lactobacillus paracasei (NITE BP-1109), штамм SBT-2300 Lactobacillus rhamnosus и штамм Chikuso-1 Lactobacillus plantarum. Из них, штамм SBS-0003 Lactobacillus paracasei (NITE BP-1109) является более предпочтительным.
Вышеуказанный штамм SBS-0003 был депонирован в депозитарии патентованных микроорганизмов Национального института технологии и оценки (2-5-8, Kazusakamatari, Kisarazu, Chiba, 292-0818, Япония) 15 июня 2011 г.
В микробной добавке никаких конкретных ограничений не существует для соотношения молочнокислой бактерии по настоящему изобретению и кислотоустойчивой молочнокислой бактерии. Соотношение по массе составляет предпочтительно от 1:100 до 100:1, более предпочтительно от 1:9 до 9:1, даже более предпочтительно от 3:7 до 7:3.
Микробная добавка по настоящему изобретению может дополнительно содержать фермент в соответствии с потребностями. Примеры ферментов включают целлюлазу и гемицеллюлазу.
Микробную добавку по настоящему изобретению можно использовать для получения разнообразного силоса и ферментированных кормовых продуктов. Никаких конкретных ограничений не существует в отношении сырья для силоса и сырья для ферментированного корма, которое используют для производства разнообразного силоса и ферментированных кормовых продуктов, при условии, что их, как правило, используют в качестве корма. Примеры травы и кормовых культур включают люцерну, клевер, тимофеевку, ежу, двукисточник тростниковидный, пырей, итальянский райграс, пастбищный райграс, овсяницу высокую, овсяницу луговую, фестулолиум, мятлик луговой, полевицу белую, просо гвинейское, хлорис гвианскую, слоновую траву, овес, ячмень, рожь, сорго, суданскую траву, японское просо, кукурузу и кормовой рис. Примеры отходов при производстве пищевых продуктов включают пивные зерна, отходы тофу (соевого творога), отходы чая, отходы при производстве шочу (японского алкогольного напитка), отходы при производстве виски, свекловичный жом, жмых, отходы кофе, отходы при производстве сока, отходы капусты и отходы крахмала. Примеры сельскохозяйственных отходов включают рисовую солому, солому и некондиционные овощи. Микробную добавку по настоящему изобретению можно добавлять к ферментированным полнорационным смесям (TMR), которые готовят путем смешивания отходов производства пищевых продуктов, силоса, сельскохозяйственных отходов, сена, концентрированных кормов, витаминов и минералов, и так далее. Такое сырье для силоса и сырье для ферментированных кормов предпочтительно используют после доведения содержания воды в них до 40-90 масс.%.
Примеры способа внесения микробной добавки включают растворение или суспендирование добавки в воде и опрыскивание жидкостью сырья, а также распределение или смешивание микробной добавки в порошковой форме с сырьем.
Количество клеток, добавленных в сырье, составляет предпочтительно 103-107 всех клеток на грамм сырья, более предпочтительно 104-106 клеток.
При производстве силоса или ферментированного корма, как правило, происходит брожение сырья в анаэробных условиях. Никаких конкретных ограничений не существует в отношении силосохранилища для брожения, при условии, что там до некоторой степени могут поддерживаться анаэробные условия. Примеры силосохранилища включают бункерное силосохранилище, стеллажное силосохранилище, траншейное силосохранилище, башенное силосохранилище, подземное силосохранилище, блочное силосохранилище, цилиндрическое силосохранилище, сенные рулоны и гибкий контейнерный мешок. Как правило, брожение происходит при температуре наружной среды (от примерно 5 до примерно 30°C) в течение одной недели или дольше.
В силосе и ферментированном корме, полученном с использованием микробной добавки по настоящему изобретению, маслянокислое брожение эффективно подавляется. Таким образом, силос и ферментированный корм сохраняют высокую вкусовую привлекательность, хорошо поедаются коровами и не вызывают кетоз.
Примеры
Далее настоящее изобретение будет описано подробно с помощью примеров, которые не должны быть истолкованы как ограничивающие изобретение.
<Пример 1> Активность низина в травяной бульонной питательной среде
Каждую молочнокислую бактерию культивировали в травяной бульонной питательной среде и измеряли активность низина в супернатанте культурального раствора.
Травяную бульонную питательную среду готовили следующим образом. Дистиллированную воду (1 л) добавляли к гранулам люцерны (100 г) и смесь нагревали в кипящей водяной бане до температуры жидкости 90°C. Затем ингредиенты травы экстрагировали при 90°C в течение 30 минут. Смесь фильтровали через марлю, и полученный таким образом остаток отжимали. Фильтрат центрифугировали, и жидкость фильтровали через фильтровальную бумагу. Полученный таким образом фильтрат разбавляли до 1 л, и разбавленный раствор разливали по пробиркам. Эти образцы стерилизовали в автоклаве (115°C, 20 минут).
Содержание сахара в травяной бульонной питательной среде определяли следующим образом. Ацетонитрил (840 мкл) добавляли к среде (360 мкл), с последующим перемешиванием, и смесь оставляли стоять при комнатной температуре в течение 15 минут. Смесь центрифугировали (15000 об/мин, 15 минут) для удаления осадка, и супернатант фильтровали через 0,2-мкм фильтр. Фильтрат анализировали методом ВЭЖХ. Количество моносахаридов и дисахаридов (ксилозы, глюкозы, фруктозы и сахарозы) суммировали, получая содержание сахара.
Каждую из молочнокислых бактерий, представленных в таблице 1, предварительно культивировали в жидкой среде MRS. Полученный таким образом раствор предварительной культуры центрифугировали для удаления среды. К клеточным осадкам добавляли эквивалентное количество физиологического раствора. Клеточную суспензию инокулировали в количестве 1% в травяную бульонную питательную среду, и проводили статическое культивирование при 32°С в течение 8 часов. Измеряли оптическую плотность (при 660 нм) культурального раствора. Затем культуральный раствор центрифугировали и фильтровали через 0,2-мкм фильтр для удаления клеток. Активность низина в культуральном супернатанте определяли с помощью метода лунок в агаровом геле.
Таблица 1 | |
Штамм бактерий | |
SBS-0001 | Тестируемый штамм |
SBS-0002 | Тестируемый штамм |
RO50 | Контрольный штамм: продуцирующий бактериоцин |
ATCC 11454 | Контрольный штамм: продуцирующий низин A |
JCM 7638 | Контрольный штамм: продуцирующий низин Z |
Метод лунок в агаровом геле применяли следующим образом. Более конкретно, пенициллиновые флаконы (диаметр: 8 мм) помещали на чашку 1,5% агара со средой MRS. На агар со средой наслаивали 0,75% агар со средой MRS, содержащей 0,1% раствор культуры Lactobacillus bulgaricus JCM1002T в качестве индикаторной бактерии. После затвердевания агара пенициллиновые флаконы удаляли, и чашку использовали в качестве среды для пластинчатых разводок в антибактериальном тесте. Каждый культуральный супернатант фильтровали для удаления ненужных микроорганизмов и добавляли в лунки, сформированные при помощи пенициллиновых флаконов. Чашку культивировали в анаэробных условиях при 37°C в течение 24 часов, и измеряли диаметр кольца ингибирования для индикаторной бактерии. Добавку низина (производства Sigma, содержание низина: 2,5%) использовали в качестве стандарта, и активность низина на микрограмм низина принимали за 40 МЕ (1 МЕ эквивалентна 1 мкг добавки низина).
Таблица 2 | ||
Штамм Lactobacillus | O.D. 660 | Активность низина (МЕ/мл) |
SBS-0001 (экс.) | 0,88 | 165,56 |
SBS-0002 (экс.) | 0,85 | 165,56 |
RO50 (контроль) | 0,82 | 30,36 |
ATCC 11454 (контроль) | 0,75 | 0 |
Содержание сахара в травяной бульонной питательной среде: 0,33%
Таблица 3 | ||
Штамм Lactobacillus | O.D. 660 | Активность низина (МЕ/мл) |
SBS-0001 (экс.) | 0,75 | 145,03 |
SBS-0002 (экс.) | 0,84 | 169,94 |
JCM 7638 (контроль) | 0,77 | 0 |
Содержание сахара в травяной бульонной питательной среде: 0,31%
Таблица 4 | ||
Штамм Lactobacillus | O.D. 660 | Активность низина (МЕ/мл) |
SBS-0001 (экс.) | 1,15 | 192,91 |
SBS-0002 (экс.) | 1,21 | 229,66 |
JCM 7638 (контроль) | 1,14 | 96,05 |
Содержание сахара в травяной бульонной питательной среде: 0,68%
Таблица 5 | ||
Штамм Lactobacillus | O.D. 660 | Активность низина (МЕ/мл) |
SBS-0001 (экс.) | 0,53 | 44,59 |
SBS-0002 (экс.) | 0,54 | 40,25 |
RO50 (контроль) | 0,62 | 0 |
Содержание сахара в травяной бульонной питательной среде: 0,33%
Исходное значение pH: 5,0
Как видно из таблиц 2 и 3, в травяной бульонной питательной среде с содержанием сахара примерно 0,3%, продуцирующий низин A штамм ATCC 11454, продуцирующий низин Z штамм JCM 7638 и продуцирующий бактериоцин штамм RO50 демонстрировали такие же показатели роста (O.D. 660), что и показатели у штамма SBS-0001 и штамма SBS-0002, однако отличались очень низкой активностью низина. Напротив, штамм SBS-0001 и штамм SBS-0002 проявляли очень высокую активность низина в травяной бульонной питательной среде с содержанием сахара примерно 0,3%.
Кроме того, как видно из таблицы 4, штамм SBS-0001 и штамм SBS-0002 демонстрировали более высокие показатели роста и активность низина в травяной бульонной питательной среде с содержанием сахара примерно 0,7%, чем в травяной бульонной питательной среде с содержанием сахара примерно 0,3%. Напротив, штамм JCM 7638 демонстрировал активность, составляющую половину или менее от активности штамма SBS-0001 или штамма SBS-0002.
Значение рН силоса, как известно, снижается в процессе брожения. Таким образом, с тем чтобы обеспечить долговременный стойкий эффект, низин предпочтительно должен продуцироваться также при низком значении pH. Однако, как известно, способность к продукции низина снижается при снижении pH в культуре. Как видно из таблицы 5, если исходное значение pH травяной бульонной питательной среды доводили до 5,0, у всех тестируемых штаммов наблюдали пониженную активность низина в каждом культуральном супернатанте. Хотя у штамма RO50 наблюдали активность низина, равную 0, штамм SBS-0001 и штамм SBS-0002 демонстрировали активность низина, составляющую 40 МЕ/мл или выше.
<Пример 2> Производство силоса и качество брожения
Образцы силоса получали путем добавления молочнокислой бактерии к траве, и исследовали качество брожения в каждом образце.
Молочнокислые бактерии, приведенные в таблице 6, получали следующим образом. Каждый клеточный штамм инокулировали в жидкую среду GYP и культивировали при 37°С в течение 24 часов. Культуральный раствор центрифугировали (6500 об/мин, 15 минут), и супернатант отбрасывали. К отделенным таким образом клеточным осадкам добавляли 10% раствор трегалозы и 1% раствор глутамата натрия, получая суспензию. Суспензию высушивали, используя лиофильную сушилку.
Таблица 6 | |
Штамм бактерий | |
SBS-0001 | Тестируемый штамм: Lactococcus lactis |
SBS-0002 | Тестируемый штамм: Lactococcus lactis |
SBS-0003 | Тестируемый штамм: Lactobacillus paracasei |
SBT-2300 | Контрольный штамм: Lactobacillus rhamnosus Штамм, используемый в коммерческом продукте Snow Lact L (Snow Brand Seed Co., Ltd.) |
RO50 | Контрольный штамм: Lactococcus lactis |
Образцы силоса получали следующим образом. Тимофеевку, ежу, двукисточник тростниковидный, пырей, итальянский райграс и рожь скашивали на стадии колошения, а люцерну скашивали на стадии цветения. В каждом случае скошенное растение измельчали на куски длиной примерно 2 см. Лиофилизированный порошок каждой молочнокислой бактерии растворяли в воде. Если добавляли один единственный штамм, то бактерию добавляли в количестве 1,0×105 КОЕ на 1 г травяного сырья, с последующим перемешиванием, а если добавляли два штамма, то каждую бактерию добавляли в количестве 5,0×104 КОЕ на 1 г травяного сырья, с последующим перемешиванием. Каждое травяное сырье помещали в пластиковую бутылку из полиэтилена емкостью 1 л или в пластиковый пакет (из многослойной нейлоново-полиэтиленовой пленки). В случае пластиковой бутылки, травяное сырье (600 г) утрамбовывали в бутылку, и бутылку закрывали крышкой. В случае пластикового пакета, травяное сырье (100 г) вносили, и из пакета откачивали воздух с помощью коммерческого всасывающего насоса для герметизации. Эти образцы подвергали брожению при 25°C в течение 2 месяцев. Полученные таким образом образцы силоса анализировали с точки зрения pH (с помощью pH-метра) и содержания органических кислот (методом ВЭЖХ).
Таблица 7 | ||||
Качество брожения силоса из тимофеевки (пластиковая бутылка) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 4,82 | 0 | 0,87 | 0,74 |
SBT-2300 (контроль) | 4,81 | 0 | 0,79 | 0,78 |
SBT-2300 + RO50 (контроль) | 4,86 | 0 | 0,38 | 0,86 |
SBT-2300 + SBS-0001 (экс.) | 4,56 | 0,62 | 0,18 | 0,46 |
Таблица 8 | ||||
Качество брожения силоса из двукисточника тростниковидного (пластиковая бутылка) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,35 | 0 | 0,80 | 0,92 |
SBT-2300 (контроль) | 4,92 | 0,05 | 0,25 | 1,08 |
SBT-2300 + RO50 (контроль) | 4,45 | 0,72 | 0,05 | 0,55 |
SBT-2300 + SBS-0001 (экс.) | 4,30 | 0,96 | 0,06 | 0,38 |
Таблица 9 | ||||
Качество брожения силоса из тимофеевки (пакет) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,10 | 0 | 0,22 | 0,77 |
SBT-2300 (контроль) | 4,25 | 0,87 | 0,15 | 0,51 |
SBS-0003 (контроль) | 3,97 | 1,43 | 0,30 | 0,11 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 3,80 | 1,71 | 0,28 | 0,01 |
SBS-0003 + SBS-0002 (экс.) | 3,81 | 1,79 | 0,30 | 0 |
Таблица 10 | ||||
Качество брожения силоса из ежи (пакет) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,11 | 0 | 0,57 | 0,94 |
SBT-2300 (контроль) | 5,02 | 0,02 | 0,49 | 0,89 |
SBS-0003 (контроль) | 4,73 | 0,25 | 0,30 | 0,81 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 3,82 | 2,61 | 0,18 | 0 |
SBS-0003 + SBS-0002 (экс.) | 3,80 | 2,22 | 0,15 | 0 |
Таблица 11 | ||||
Качество брожения силоса из люцерны (пакет) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,63 | 0 | 0,74 | 1,08 |
SBT-2300 (контроль) | 5,64 | 0 | 0,82 | 1,18 |
SBS-0003 (контроль) | 5,69 | 0 | 0,84 | 1,09 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 4,85 | 1,31 | 0,88 | 0,15 |
SBS-0003 + SBS-0002 (экс.) | 4,74 | 1,43 | 0,89 | 0 |
Таблица 12 | ||||
Качество брожения силоса из двукисточника тростниковидного (пластиковая бутылка) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 4,98 | 0 | 1,10 | 0,78 |
SBT-2300 (контроль) | 5,11 | 0 | 0,77 | 0,94 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 3,89 | 1,57 | 0,10 | 0 |
Таблица 13 | ||||
Качество брожения силоса из пырея (пластиковая бутылка) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,47 | 0 | 0,64 | 1,02 |
SBT-2300 (контроль) | 4,22 | 1,49 | 0,10 | 0,44 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 3,80 | 2,59 | 0,18 | 0 |
Таблица 14 | ||||
Качество брожения силоса из итальянского райграса (пакет) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,17 | 0 | 0,74 | 1,40 |
SBT-2300 (контроль) | 4,18 | 2,03 | 0,21 | 0,31 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 3,73 | 3,06 | 0,10 | 0 |
SBS-0003 + SBS-0002 (экс.) | 3,76 | 3,05 | 0,12 | 0 |
Таблица 15 | ||||
Качество брожения силоса из ржи (пакет) | ||||
Обработка | pH | Содержание органических кислот (% от свежего материала) | ||
Молочная кислота | Уксусная кислота | Масляная кислота | ||
Без добавок (контроль) | 5,58 | 0,24 | 0,33 | 0,98 |
SBT-2300 (контроль) | 5,17 | 0,71 | 0,29 | 0,63 |
SBS-0003 + SBS-0001 (экс.) | 4,16 | 2,03 | 0,10 | 0 |
SBS-0003 + SBS-0002 (экс.) | 4,15 | 2,01 | 0,10 | 0 |
Как видно из таблиц 7 и 8, при добавлении штамма RO50, который способен продуцировать низин в травяной бульонной питательной среде в количестве 40 МЕ/мл или менее, к сырью, качество брожения которого практически не может быть улучшено с помощью штамма SBT-2300 (используемого в качестве коммерческой молочнокислой бактерии для производства силоса), качество брожения силоса существенно не улучшалось, или наблюдался только слабый эффект снижения содержания масляной кислоты. Напротив, при добавлении штамма SBS-0001, обладающего повышенной способностью продуцировать низин в травяной бульонной питательной среде, к травяному сырью уровень масляной кислоты был отчетливо снижен, следствием чего было улучшение качества брожения силоса.
Как видно из таблицы 9, штамм SBS-0003 демонстрировал более высокие показатели молочнокислого брожения, чем показатели штамма SBT-2300. При добавлении штамма SBT-0001 или штамма SBT-0002 уровень масляной кислоты был снижен еще больше.
Как видно из таблиц 10 и 11, при добавлении штамма SBS-0001 или штамма SBS-0002 дополнительно к штамму SBS-0003, содержание масляной кислоты в силосе, качество брожения которого не может быть улучшено за счет штамма SBT-2300 или штамма SBS-0003, было значительно снижено, и было достигнуто заметное улучшение качества брожения.
Как видно из таблиц 9, 10, 11, 12, 13, 14 и 15, при добавлении штамма SBS-0001 или штамма SBS-0002 дополнительно к штамму SBS-0003, уровни масляной кислоты различного сырья, демонстрирующего плохое качество брожения в отсутствие обычных бактерий, и качество брожения которого невозможно было полностью улучшить при помощи штамма SBT-2300, были значительно снижены, и было достигнуто заметное улучшение качества брожения.
Claims (4)
1. Молочнокислая бактерия, принадлежащая к роду Lactococcus, представляющая собой штамм SBS-0001 Lactococcus lactis (NITE BP-1107) для производства силоса.
2. Молочнокислая бактерия, принадлежащая к роду Lactococcus, представляющая собой штамм SBS-0002 Lactococcus lactis (NITE BP-1108) для производства силоса.
3. Микробная добавка для производства силоса, препарат которой содержит молочнокислую бактерию, принадлежащую к роду Lactococcus, и молочнокислую бактерию, обладающую кислотной устойчивостью,
где молочнокислой бактерией, принадлежащей к роду Lactococcus, является молочнокислая бактерия по п. 1 или 2,
и где молочнокислой бактерией, обладающей кислотной устойчивостью, является штамм Lactobacillus paracasei SBS-0003 (NITE BP-1109).
где молочнокислой бактерией, принадлежащей к роду Lactococcus, является молочнокислая бактерия по п. 1 или 2,
и где молочнокислой бактерией, обладающей кислотной устойчивостью, является штамм Lactobacillus paracasei SBS-0003 (NITE BP-1109).
4. Способ производства силоса, включающий
- добавление микробной добавки для производства силоса, содержащей молочнокислую бактерию, принадлежащую к роду Lactococcus, и молочнокислой бактерии, обладающей кислотной устойчивостью, к сырью,
где молочнокислой бактерией, принадлежащей к роду Lactococcus, является молочнокислая бактерия по п. 1 или 2,
и где молочнокислой бактерией, обладающей кислотной устойчивостью, является штамм Lactobacillus paracasei SBS-0003 (NITE BP-1109); и
- брожение сырья, содержащего микробную добавку для производства силоса при температуре от 5 до 30°C в течение 1 недели и более.
- добавление микробной добавки для производства силоса, содержащей молочнокислую бактерию, принадлежащую к роду Lactococcus, и молочнокислой бактерии, обладающей кислотной устойчивостью, к сырью,
где молочнокислой бактерией, принадлежащей к роду Lactococcus, является молочнокислая бактерия по п. 1 или 2,
и где молочнокислой бактерией, обладающей кислотной устойчивостью, является штамм Lactobacillus paracasei SBS-0003 (NITE BP-1109); и
- брожение сырья, содержащего микробную добавку для производства силоса при температуре от 5 до 30°C в течение 1 недели и более.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011144726 | 2011-06-29 | ||
JP2011-144726 | 2011-06-29 | ||
PCT/JP2012/056991 WO2013001862A1 (ja) | 2011-06-29 | 2012-03-19 | 新規乳酸菌及びこれを用いるサイレージ又は発酵飼料の調製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014102762A RU2014102762A (ru) | 2015-08-10 |
RU2598270C2 true RU2598270C2 (ru) | 2016-09-20 |
Family
ID=47423773
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014102762/10A RU2598270C2 (ru) | 2011-06-29 | 2012-03-19 | Новая молочнокислая бактерия и способ производства с ее помощью силоса или ферментированного корма |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP2727994B1 (ru) |
JP (1) | JP5931064B2 (ru) |
CN (1) | CN103781898B (ru) |
DK (1) | DK2727994T3 (ru) |
RU (1) | RU2598270C2 (ru) |
WO (1) | WO2013001862A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2645227C1 (ru) * | 2016-09-30 | 2018-02-19 | Общество с ограниченной ответственностью "Фермлаб" | Новый биоконсервант для силосования кормов и способ его получения |
RU2658978C1 (ru) * | 2017-09-22 | 2018-06-26 | Владимир Львович Темнянский | Комбинированная закваска для переработки растительного сырья с получением кормового белка |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RS55497B1 (sr) | 2013-09-23 | 2017-04-28 | Aleksandra Ivetić | Postupak i primena aditiva pri konzervisanju hrane |
CN104531566A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-22 | 中国农业大学 | 一种青贮接种剂及其应用 |
CN104894030B (zh) * | 2015-06-18 | 2017-09-26 | 郑州大学 | 一株乳酸乳球菌乳酸亚种及其在低温青贮中的应用 |
CN106854626A (zh) * | 2015-12-08 | 2017-06-16 | 内蒙古沃德生物质科技有限公司 | 一种玉米秸秆青(黄)贮酶菌复合发酵剂的制备方法 |
JP6807160B2 (ja) | 2016-03-15 | 2021-01-06 | 雪印種苗株式会社 | サイレージ調製用乳酸菌及びサイレージ調製用添加剤 |
EP3479700A4 (en) * | 2016-06-29 | 2019-12-18 | Menicon Co., Ltd. | AGENTS FOR IMPROVING THE FORAGE REPLACEMENT IN FARM ANIMALS, ANIMAL FEED FOR PROMOTING THE BODY WEIGHT GAIN, METHOD FOR FEEDING FARM ANIMALS AND METHOD FOR SUPPRESSING METHANE PRODUCTION |
JP7062443B2 (ja) * | 2018-01-04 | 2022-05-06 | 雪印種苗株式会社 | サイレージ調製用乳酸菌製剤 |
CN109662208A (zh) * | 2019-02-26 | 2019-04-23 | 天津九州大地饲料有限公司 | 一种仔猪用微生物发酵饲料的制备工艺 |
CN115836121A (zh) | 2020-10-12 | 2023-03-21 | 独立行政法人国立高等专门学校机构 | 乳酸菌及其取得方法以及含乳酸菌的饮食品 |
CN113527447A (zh) * | 2021-07-21 | 2021-10-22 | 山东元泰生物工程有限公司 | 一种乳酸链球菌素的提取方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20A (en) * | 1836-08-31 | Saddle-spbitirg | ||
EP0906952A2 (en) * | 1997-09-26 | 1999-04-07 | Medipharm AB | Bacterial strain for use in ensiling of straw fodder |
EP1273237A1 (en) * | 2001-07-02 | 2003-01-08 | CSK Food Enrichment B.V. | Nisin-producing starter cultures for fermented food products |
RU2268299C2 (ru) * | 2004-03-24 | 2006-01-20 | Владимир Шавашович Саян | Способ получения бактериального концентрата для силосования кормов |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4020289B2 (ja) * | 1999-12-28 | 2007-12-12 | 森下仁丹株式会社 | 生きた細胞または組織を包含するカプセル |
JP3805727B2 (ja) | 2002-07-11 | 2006-08-09 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 新規乳酸菌株、それを含有する微生物添加剤及び当該添加剤を用いる稲発酵粗飼料の調製方法 |
EP1493806A1 (en) * | 2003-07-02 | 2005-01-05 | Chr. Hansen A/S | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents |
CN1918282A (zh) | 2004-02-23 | 2007-02-21 | 味之素株式会社 | 产高浓度乳链菌肽的乳酸菌及其筛选方法 |
WO2006111561A1 (en) * | 2005-04-21 | 2006-10-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Improved microbial production of anthracyclins |
CN1306025C (zh) * | 2005-05-26 | 2007-03-21 | 沈颜新 | 一种培养基、其制备方法及培养乳酸链球菌素的方法 |
JP4997500B2 (ja) * | 2006-08-25 | 2012-08-08 | 地方独立行政法人北海道立総合研究機構 | 動物用生菌剤、飼料組成物、及びこれらの使用方法 |
JP5470637B2 (ja) * | 2009-07-01 | 2014-04-16 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 発酵飼料中の硝酸態窒素・亜硝酸態窒素を低減する微生物 |
-
2012
- 2012-03-19 EP EP12803868.4A patent/EP2727994B1/en active Active
- 2012-03-19 DK DK12803868.4T patent/DK2727994T3/en active
- 2012-03-19 CN CN201280031729.4A patent/CN103781898B/zh active Active
- 2012-03-19 WO PCT/JP2012/056991 patent/WO2013001862A1/ja active Application Filing
- 2012-03-19 RU RU2014102762/10A patent/RU2598270C2/ru active
- 2012-03-19 JP JP2013522489A patent/JP5931064B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20A (en) * | 1836-08-31 | Saddle-spbitirg | ||
EP0906952A2 (en) * | 1997-09-26 | 1999-04-07 | Medipharm AB | Bacterial strain for use in ensiling of straw fodder |
EP1273237A1 (en) * | 2001-07-02 | 2003-01-08 | CSK Food Enrichment B.V. | Nisin-producing starter cultures for fermented food products |
RU2268299C2 (ru) * | 2004-03-24 | 2006-01-20 | Владимир Шавашович Саян | Способ получения бактериального концентрата для силосования кормов |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
US 20090136624 A1, ;28.05.2009. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2645227C1 (ru) * | 2016-09-30 | 2018-02-19 | Общество с ограниченной ответственностью "Фермлаб" | Новый биоконсервант для силосования кормов и способ его получения |
RU2658978C1 (ru) * | 2017-09-22 | 2018-06-26 | Владимир Львович Темнянский | Комбинированная закваска для переработки растительного сырья с получением кормового белка |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2727994A1 (en) | 2014-05-07 |
CN103781898B (zh) | 2016-03-02 |
EP2727994B1 (en) | 2017-05-10 |
EP2727994A4 (en) | 2015-02-18 |
WO2013001862A1 (ja) | 2013-01-03 |
JP5931064B2 (ja) | 2016-06-08 |
CN103781898A (zh) | 2014-05-07 |
JPWO2013001862A1 (ja) | 2015-02-23 |
DK2727994T3 (en) | 2017-07-17 |
RU2014102762A (ru) | 2015-08-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2598270C2 (ru) | Новая молочнокислая бактерия и способ производства с ее помощью силоса или ферментированного корма | |
KR102273372B1 (ko) | 사일리지 조제용 유산균 및 사일리지 조제용 첨가제 | |
US20220117268A1 (en) | Compositions of hetero- and homofermentative lactic acid bacterial species for dual purpose silage preservation | |
CA2938052C (en) | Rapid acting lactobacillus strains and their use to improve aerobic stability of silage | |
CN102643767B (zh) | 一株植物乳杆菌及其在红薯茎叶发酵和青贮中的应用 | |
NZ525289A (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
AU2002239449A1 (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
US20220174980A1 (en) | Method for Preparing Feed by Bacteria-enzyme Synergistic Fermentation | |
JP5515062B2 (ja) | 新規バクテリオシンを生産する乳酸菌及びそれを用いたサイレージ・発酵tmr飼料の製造方法 | |
JPH078769B2 (ja) | 土壌線虫駆除方法およびそれに用いる線虫駆除組成物 | |
DE60010887T2 (de) | Verwendung von Hefen, die kein Laktat assimilieren zur Verbesserung der aerobenStabilität von Silage | |
JP7062443B2 (ja) | サイレージ調製用乳酸菌製剤 | |
KR102272419B1 (ko) | 페디오코커스 펜토사세우스 kcc-45 및 이를 포함하는 조성물 | |
JP2017537980A (ja) | 乾草防腐剤及び乾草の保存方法 | |
KR20060078894A (ko) | 신규 젖산균 및 이를 이용한 발효주의 제조방법 | |
CN117617373A (zh) | 一种利用贝莱斯芽孢杆菌的饲料青储方法 | |
KR20220138495A (ko) | 락토바실러스 람노서스 kcc-51 균주 및 이를 포함하는 조성물 | |
JP2021090408A (ja) | 新規乳酸菌及びサイレージ調製用乳酸菌製剤、サイレージ調製方法 |