CN115836121A - 乳酸菌及其取得方法以及含乳酸菌的饮食品 - Google Patents

乳酸菌及其取得方法以及含乳酸菌的饮食品 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种在低pH且高蔗糖环境下良好生长的乳酸菌。一种乳酸菌，其是以保藏号：NITE BP‑03116(识别编号：WR16‑4)保藏的属于乳杆菌属的种(Lactobacillussp.)。

Description

乳酸菌及其取得方法以及含乳酸菌的饮食品
技术领域
本发明涉及新的乳酸菌及其取得方法以及含有上述乳酸菌的含乳酸菌的饮食品。
背景技术
据称一般的乳酸菌的最佳生长pH区域为pH6～7，酸性区域中的生长极限值为pH4，碱性区域中的生长极限值为pH8。但是，乳酸菌中也存在具有优异的耐酸性、即使在一般的乳酸菌难以生长的苛刻环境下(pH3左右)也能生长的乳酸菌(例如专利文献1、2)。
另外，还存在即使在味噌或酱油等盐浓度高的环境下也能生长的、具有优异的耐盐性的乳酸菌(例如专利文献3、4)。
如上所述，乳酸菌中存在许多即使在苛刻环境下也能生长的乳酸菌，但在本申请人所知范围内，迄今为止尚未有关于在低pH(高酸性)且高蔗糖浓度的苛刻环境下能够良好生长的乳酸菌的存在的报道。
因此，本申请人认为，通过这种乳酸菌的存在，例如能够使植物与糖混合压榨而得到的液体或以该液体为基础的饮料、或者果酱、水果沙司等酸性值和蔗糖浓度高、利用一般的乳酸菌难以发酵的材料容易地发酵，能够提供新的发酵食品或发酵饮料；对于如上所述的在低pH环境且高蔗糖环境下能够良好生长的乳酸菌进行了研究，终于成功取得了在低pH且高蔗糖浓度的苛刻环境下能够良好生长的乳酸菌。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2009-225792号公报
专利文献2：WO2013/001862号公报
专利文献3：日本特开2007-236344号公报
专利文献4：日本特开2018-42557号公报
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于提供一种在低pH且高蔗糖环境下能够良好生长的乳酸菌。
用于解决课题的手段
参照附图对本发明的要点进行说明。
本发明涉及一种乳酸菌，其特征在于，其是以保藏号：NITE BP-03116(识别编号：WR16-4)保藏的属于乳杆菌属的种(Lactobacillus sp.)。
另外，本发明涉及权利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，上述乳酸菌具有序列号1所示的16SrDNA区域的碱基序列。
另外，本发明涉及权利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，其是从植物发酵提取物中取得的。
另外，本发明涉及权利要求2所述的乳酸菌，其特征在于，其是从植物发酵提取物中取得的。
另外，本发明涉及权利要求3所述的乳酸菌，其特征在于，上述植物发酵提取物为萝卜发酵提取物。
另外，本发明涉及权利要求4所述的乳酸菌，其特征在于，上述植物发酵提取物为萝卜发酵提取物。
另外，本发明涉及权利要求5所述的乳酸菌，其特征在于，上述萝卜发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的。
另外，本发明涉及权利要求6所述的乳酸菌，其特征在于，上述萝卜发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的。
另外，本发明涉及权利要求7所述的乳酸菌，其特征在于，上述菌液由酵母菌构成。
另外，本发明涉及权利要求8所述的乳酸菌，其特征在于，上述菌液由酵母菌构成。
另外，本发明涉及权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，上述乳酸菌在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在蔗糖浓度30～60wt％的高浓度蔗糖环境下也增殖。
另外，本发明涉及权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，上述乳酸菌在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在果糖浓度和葡萄糖浓度分别为10～30wt％的果糖·葡萄糖高浓度环境下也增殖。
另外，本发明涉及权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，上述乳酸菌在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在蔗糖浓度30～60wt％的高浓度蔗糖环境下也增殖，进而，在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在果糖浓度和葡萄糖浓度分别为10～30wt％的果糖·葡萄糖高浓度环境下也增殖。
另外，本发明涉及一种乳酸菌的取得方法，其特征在于，向灭菌的液体培养基中加入植物发酵提取物而得到培养液，接着，对该培养液进行富集培养而得到富集培养液，接着，将该富集培养液与灭菌的分离用培养基进行倾注而制成平板培养基，接着，钓取该平板培养基中出现的菌落，取得能够在低pH环境且高浓度蔗糖环境下增殖的乳酸菌。
另外，本发明涉及权利要求14所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，上述植物发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的萝卜发酵提取物。
另外，本发明涉及权利要求15所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，上述菌液由酵母菌构成。
另外，本发明涉及权利要求14～16中任一项所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，上述液体培养基是在混合发酵提取物与野菜-细砂糖混合液的混合物中添加抗生素而成的，上述混合发酵提取物是使用蔬菜发酵提取物和水果发酵提取物中的任一者或两者而得到的，上述野菜-细砂糖混合液是将野草的煮出液与细砂糖混合而得到的。
另外，本发明涉及权利要求17所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，上述抗生素为环己酰亚胺。
另外，本发明涉及一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌。
另外，本发明涉及一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求11所述的乳酸菌。
另外，本发明涉及一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求12所述的乳酸菌。
另外，本发明涉及一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求13所述的乳酸菌。
另外，本发明涉及权利要求19所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，上述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
另外，本发明涉及权利要求20所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，上述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
另外，本发明涉及权利要求21所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，上述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
另外，本发明涉及权利要求22所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，上述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
发明的效果
本发明的乳酸菌在低pH且高蔗糖环境下优势性地生长(增殖)，因此例如能够使植物与糖混合压榨而得到的液体或以该液体为基础的饮料、或者果酱、水果沙司等酸性值和蔗糖浓度高、利用一般的乳酸菌难以发酵的材料容易地发酵，能够提供新的发酵食品或发酵饮料。
附图说明
图1是示出本实施例中的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM 1132T的pH耐性试验结果的图。
图2是示出本实施例中的乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)NBRC12007的pH耐性试验结果的图。
图3是示出本实施例中的肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostoc mesenteroidessubsp.dextranicum)NBRC100495T的pH耐性试验结果的图。
图4是示出本实施例中的WR16-4株的pH耐性试验结果的图。
图5是示出本实施例中的嗜酸乳杆菌JCM 1132T的蔗糖耐性试验结果的图。
图6是示出本实施例中的乳酸乳球菌乳亚种NBRC12007的蔗糖耐性试验结果的图。
图7是示出本实施例中的肠膜明串珠菌葡聚糖亚种NBRC100495T的蔗糖耐性试验结果的图。
图8是示出本实施例中的WR16-4株的蔗糖耐性试验结果的图。
图9是示出本实施例的蔗糖耐性试验中的MRS培养基的组成的表。
图10是示出本实施例的果糖·葡萄糖耐性试验中的MRS培养基的组成的表。
图11是示出本实施例中的WR16-4株的果糖·葡萄糖耐性试验结果的图。
图12是示出本发明的基因数据库(NCBI)中的同源性检索结果的数据一览表。
具体实施方式
基于附图示出本发明的作用来简单地说明认为是优选的本发明的实施方式。
本发明的乳酸菌是属于乳杆菌属的种(Lactobacillus sp.)，以保藏号：NITE BP-03116(识别编号：WR16-4)保藏。
基于由本发明的乳酸菌得到的序列数据(16SrDNA序列)，利用NCBI(NationalCenter for Biotechnology Information，美国国家生物技术信息中心)的基因数据库进行了同源性检索，结果与上述序列同源性最高的为93％(参照图12)，由该结果可以说本发明的乳酸菌是以往未有的新种乳酸菌(属于乳杆菌属的种)。
本发明的乳酸菌具有下述特征：在被认为是一般的乳酸菌的最佳生长环境的pH6～7下难以生长，在低于该pH6～7的pH(例如pH3.5～5.5)的环境下良好地生长。
进而，本发明的乳酸菌具有下述特征：在一般的乳酸菌难以生长的低pH(例如pH5以下)且高蔗糖(例如30wt％以上)环境下也良好地生长。
这样，本发明的乳酸菌由于具有在低pH且高蔗糖环境下优势性地增殖的特征，因此例如能够使植物与糖混合压榨而得到的液体或以该液体为基础的饮料、或者果酱、水果沙司等酸性值和蔗糖浓度高、利用一般的乳酸菌难以发酵的材料容易地发酵。
实施例
基于附图对本发明的具体实施例进行说明。
本实施例的乳酸菌具有序列号1所示的16SrDNA区域的碱基序列，是以保藏号：NITE BP-03116(识别编号：WR16-4)保藏的属于乳杆菌属的种(Lactobacillus sp.)的乳酸菌。
本实施例的乳酸菌的细胞形态为短杆状，另外，在菌落状态下呈白色，生产菌体外多糖(粘性物质)。
以下，对本实施例的乳酸菌(以下称为WR16-4株)进行详细说明。
<关于WR16-4株的菌种>
基于WR16-4株的16SrDNA数据进行了微生物鉴定检查，对WR16-4株的菌种进行了调查。需要说明的是，微生物鉴定检查委托株式会社FASMAC。
微生物鉴定检查的结果，显示出最高同源值的菌种是开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefiri)(ATCC＝35441)(同源值93.14％)。
<关于WR16-4株的新颖性>
基于WR16-4株的16SrDNA数据，利用NCBI的基因数据库进行了同源性检索，对WR16-4株的新颖性进行了调查。
图12是在该同源性检索中与来自样品的序列显示出高同源性的数据的一览表。如该图12所示，与该WR16-4株同源性最高的为93％左右。一般来说，不存在同源值为98.7％以上的种的情况下，判断为新种，因此可以说该WR16-4株是新(新种)的乳酸菌。
<WR16-4株的分离源>
WR16-4株以植物发酵提取物为分离源，具体而言以萝卜发酵提取物为分离源。
作为分离源的萝卜发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的，具体而言，将切断的萝卜和与该萝卜相同量的细砂糖混合，利用酵母菌使其发酵后，进行压榨，使所得到的液体成分进一步发酵、熟化。需要说明的是，作为分离源的植物也可以是萝卜以外的蔬菜。
<WR16-4株的分离方法>
WR16-4株在从上述萝卜发酵提取物中进行分离时，无法利用一般的乳酸菌的分离方法进行分离，可以利用本申请人发现的下述分离方法进行分离。
(1)向湿式灭菌(121℃、15分钟)的液体培养基10ml中加入上述萝卜发酵提取物80μl，在25℃保温6天，得到培养液。
(2)将所得到的培养液80μl加入到上述液体培养基10ml中，再次在25℃保温3～4天，得到培养液。
(3)进行将上述2的处理重复多次(本实施例中为8次)的富集培养，得到富集培养液。
(4)将所得到的富集培养液1ml与湿式灭菌(121℃、15分钟)的分离用培养基15ml进行倾注后，冷却固化，制成平板。
(5)将该平板在25℃下保温10天。
(6)钓取上述平板中出现的菌落，由此得到WR16-4株。
需要说明的是，上述液体培养基是在混合发酵提取物与野草-细砂糖混合液的混合物中添加抗生素而成的，上述混合发酵提取物是使用蔬菜发酵提取物和水果发酵提取物中的任一者或两者而得到的，上述野草-细砂糖混合液是将野草的煮出液与细砂糖混合而得到的，具体而言，是将上述混合发酵提取物、在多种野草类的煮出液中以1：1混合细砂糖而得到的野草-细砂糖混合液、以及1g/L环己酰亚胺溶液以10：90：1混合而成的混合液。
另外，上述分离用培养基是将下表所示的培养基A和培养基B进行湿式灭菌并混合而成的。
表1
Figure GDA0004091706680000071
为了确认通过上述分离方法取得的WR16-4株的特性，使用一般的乳酸菌，通过与它们比较，进行了pH耐性试验和蔗糖耐性试验。
具体而言，作为WR16-4株的比较对象的乳酸菌，使用了属于乳酸菌中广为人知的属的种、与一般的乳酸菌同样地最佳生长pH区域为pH6～7的乳杆菌(Lactobacillus)属的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM 1132T、乳球菌(Lactococcus)属的乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)NBRC12007、明串珠菌(Leuconostoc)属的肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.dextranicum)NBRC100495T这3种乳酸菌。
<各乳酸菌的预培养>
在进行上述2种耐性试验时，对各乳酸菌进行了如下的预培养。
(1)以2倍浓缩调整图9所示的MRS培养基。此时，添加4N氢氧化钠溶液或4N盐酸，由此将WR16-4株用的培养基调整为pH4.5，将比较对象用的培养基调整为pH6.5。
(2)制备4wt％蔗糖溶液或4wt％葡萄糖溶液。
(3)对于上述(1)、(2)，分别利用高压釜进行湿热灭菌(121℃、20分钟)。
(4)将湿热灭菌后的(1)和(2)的溶液冷却后，在无尘工作台内按照1：1(v/v)的方式混合，制备出含2wt％蔗糖的MRS培养基(pH4.5)或含2wt％葡萄糖的MRS培养基(pH6.5)。
(5)WR16-4株使用含2wt％蔗糖的MRS培养基(pH4.5)，比较对象用使用含2wt％葡萄糖的MRS培养基(pH6.5)，在30℃下以24～48小时的厌氧条件进行。
<pH耐性试验>
经预培养的各乳酸菌的pH耐性试验如下进行。
(1)以2倍浓缩调整图9所示的MRS培养基。此时，添加4N氢氧化钠溶液或4N盐酸，由此调整为pH3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5。
(2)制备4wt％蔗糖溶液。
(3)对于上述(1)、(2)，分别利用高压釜进行湿热灭菌(121℃、20分钟)。
(4)将湿热灭菌后的(1)和(2)的溶液冷却后，在无尘工作台内按照1：1(v/v)的方式混合，制备出含2wt％蔗糖的MRS培养基(pH3～6.5)。
(5)对预培养的各乳酸菌株进行离心分离(15,000×g、10分钟)，除去上清后，按照初始浓度为A660nm≒0.05～0.10的方式重悬于(3)中调整的培养基中。
(6)在96孔微板中，按照200μl/孔的方式分别分注到各3孔中(n＝3)，然后在30℃、厌氧条件下进行培养。
(7)使用酶标仪经时地进行浊度测定。
图1～3是示出比较对象用(嗜酸乳杆菌JCM 1132T(图1)、乳酸乳球菌乳亚种NBRC12007(图2)、肠膜明串珠菌葡聚糖亚种NBRC100495T(图3))的乳酸菌的浊度测定结果的图，图4是示出WR16-4株的浊度测定结果的图。
在上述以2wt％蔗糖为碳源的pH耐性试验中，如各乳酸菌的浊度测定结果所示，确认到：比较对象用的乳酸菌在pH5～6.5的接近中性的酸性区域中生长良好，与此相对，WR16-4株在比这些乳酸菌良好生长的区域更靠酸性侧的区域、具体而言在pH3.5～5的低pH区域生长，在与其相比pH更高的接近中性的区域几乎不生长。
<蔗糖耐性试验>
经预培养的各乳酸菌的蔗糖耐性试验如下进行。
(1)将添加有蔗糖的图9所示的MRS培养基调整成蔗糖浓度为5wt％、10wt％、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％、60wt％、70wt％后，分别向其中添加4N盐酸，调整成pH4.5。
(2)对于上述(1)，分别利用高压釜进行湿热灭菌(121℃、20分钟)。
(3)对预培养的各乳酸菌株进行离心分离(15,000×g、10分钟)，除去上清后，按照初始浓度为A660nm≒0.05～0.10的方式重悬于(2)中调整的培养基中。
(4)在96孔微板中，按照200μl/孔的方式分别分注到各3孔中(n＝3)，然后在30℃、厌氧条件下进行培养。
(5)使用酶标仪经时地进行浊度测定。
图5～8是示出比较对象用(嗜酸乳杆菌JCM 1132T(图5)、乳酸乳球菌乳亚种NBRC12007(图6)、肠膜明串珠菌葡聚糖亚种NBRC100495T(图7))的乳酸菌的浊度测定结果的图，图8是示出WR16-4株的浊度测定结果的图。
在上述初始pH4.5的酸性条件下的蔗糖耐性试验中，如各乳酸菌的浊度测定结果所示，比较对象用的乳酸菌的结果是虽然在蔗糖浓度为20wt％以下确认到生长，但其生长状态(增殖率)低，在30wt％以上的高蔗糖环境下几乎不能生长，与此相对，确认到WR16-4株在蔗糖浓度至40wt％左右为止显示出良好的生长状态，即使在60wt％的高蔗糖环境下也生长。
<果糖·葡萄糖耐性试验>
蔗糖是作为单糖的果糖与葡萄糖结合而成的二糖类，WR16-4株如上所述确认到在高蔗糖环境下能够生长，因此认为其在果糖和葡萄糖分别以单糖状态存在的果糖·葡萄糖高浓度环境下可能也与蔗糖的情况同样地能够生长，与上述蔗糖耐性试验同样地，如下进行了果糖·葡萄糖耐性试验。
(1)将分别单独添加有蔗糖、果糖、葡萄糖的糖的图10所示的MRS培养基分别调整成糖浓度为20wt％后，分别向其中添加4N盐酸，调整成pH4.5。
(2)另外，将添加有果糖和葡萄糖的图10所示的MRS培养基调整成果糖、葡萄糖各自的糖浓度为10wt％(合计为20wt％)后，分别向其中添加4N盐酸，调整成pH4.5。
(3)对于上述(1)、(2)，分别利用高压釜进行湿热灭菌(121℃、20分钟)。
(4)对预培养的WR16-4株进行离心分离(15,000×g、10分钟)，除去上清后，按照初始浓度为A660nm≒0.05～0.10的方式重悬于调整的培养基中。
(5)在96孔微板中，按照200μl/孔的方式分别分注到各3孔中(n＝3)，然后在30℃、厌氧条件下进行培养。
(6)使用酶标仪经时地进行浊度测定。
将该初始pH4.5的酸性条件下的果糖·葡萄糖耐性试验中的上述浊度测定的结果示于图11。
如该图11所示，WR16-4株在单独包含果糖、葡萄糖中的任一种的情况下增殖率低(为低生长状态)，但在包含果糖、葡萄糖两者的情况下，与包含蔗糖的情况同样地，增殖率升高(变为高生长状态)，由该结果确认到，WR16-4株不仅具有蔗糖耐性，还具有果糖·葡萄糖耐性。
另外，如上所述，蔗糖是果糖与葡萄糖结合而成的二糖类，因此，认为WR16-4株与蔗糖的情况同样地例如在分别包含30wt％的果糖和葡萄糖(糖浓度的合计为60wt％)的高糖浓度环境下也能充分生长。
<WR16-4株的用途>
WR16-4株能够用于含乳酸菌的饮食品，具体而言能够用于发酵饮食品。
如上所述，WR16-4株是具有在低pH且高蔗糖环境下优势性地增殖的特征的乳酸菌，因此，例如能够使植物与糖混合压榨而得到的液体或以该液体为基础的饮料、或者果酱、水果沙司等酸性值和蔗糖浓度高、利用一般的乳酸菌难以发酵的材料(酸性且高糖浓度提取液)容易地发酵，由此能够使上述提取液中含有有机酸，获得赋予酸味(减轻甜味或赋予清爽感)或防腐(不需要作为添加物的防腐剂)等效果。
另外，WR16-4株是具有在低pH且高果糖·葡萄糖环境下也优势性地增殖的特征的乳酸菌，因此，除上述以外，还能够用于使用了包含果糖和葡萄糖两者的糖(混合了异构化糖、葡萄糖和果糖各自的精制糖的糖等)的饮食品。
另外，以下示出上述酸性且高糖浓度提取液的取得方法的一例。需要说明的是，提取液的取得方法并不限定于此。
(1)将切断的蔬菜或水果与细砂糖以相同比例进行混合，加入菌液，使其发酵。
(2)发酵后，进行压榨并回收液体成分，使该回收液进一步发酵、熟化，得到发酵液A。
(3)在野草的煮出液中加入细砂糖，向所得物中加入发酵液A，使其发酵、熟化，得到发酵液B。
该发酵液A或发酵液B成为酸性且高糖浓度提取液。需要说明的是，该发酵液A和发酵液B被制造为饮料，通过用WR16-4株使其发酵，能够在赋予酸味的同时，在不添加防腐剂的情况下获得防腐效果，能够提供前所未有的饮料。
另外，如上述试验结果所示，WR16-4株具有在一般的乳酸菌的最佳pH环境即pH6～7的环境下几乎不生长的特性，因此，例如在想要利用WR16-4株和其他微生物(例如一般的乳酸菌或酵母等)使蔗糖浓度高且pH为中性附近的材料发酵的情况下，由于WR16-4株在达到最佳pH之前的期间不生长，因此不会阻碍其他微生物的生长。因此，在利用通过多种微生物进行复合发酵的情况下是有用的。
另外，根据上述特性，通过将原材料的pH调整为中性附近，WR16-4株能够以非加热方式停止发酵，对于在无法加热的发酵产品中的利用也是有用的。
需要说明的是，本发明不限于本实施例，各构成要素的具体构成可以适当设计。
保藏号
NITE BP-03116
Figure GDA0004091706680000121
序列表
<110> 独立行政法人国立高等专门学校机构(National Institute of Technology)
株式会社宫东野草研究所(MIYATOU YASOU KENKYUJO CO., LTD)
<120> 乳酸菌及其取得方法以及含乳酸菌的饮食品(Lactic acid bacterium(LAB), method for separating LAB and food or drink using LAB)
<130> TY0304-PCT
<150> JP2020-171989
<151> 2020-10-12
<150> JP2020-214170
<151> 2020-12-23
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1494
<212> DNA
<213> 乳杆菌(Lactobacillus sp.)
<400> 1
cgctggcggc atgcctaata catgcaagtc gaacgaggtt tccttaatga tagttggtgc 60
ttgcatcaat ttgacttaag atctaaccga gtggcgaact ggtgagtaac acgtgggtaa 120
cctgccctga agtaggggat aacatttgga aacaaatgct aataccgtat aacaacataa 180
accacatggt ttatgtttga aagatggctc tgctatcgct tttggatgga cccgcggcgt 240
attagctagt tggtgagata atggctcacc aaggcgatga tacgtagccg acctgagagg 300
gtaatcggcc acattggaac tgagacacgg tccagactcc tacgggaggc agcagtaggg 360
aatctttcac aatggacgaa agtctgatga agcaatgccg cgtgagtgat gaagggtttc 420
ggctcgtaaa gctctgttgt tagagaagaa caggtgtaag agtaactgtt tacatctcga 480
cggtatctaa ccagaaagtc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt 540
ggcaagcgtt gtccggattt attgggcgta aagtgagcgc aggcggtttt ttaagtctaa 600
tgtgaaagcc ttcggcttaa ccgaagaagt gcattggaaa ctaagaaact tgagtgcaga 660
aaaggatagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag 720
tggcgaaggc ggctatctgg tctgttactg acgttgaggc tcgaaagcat gggtagcgaa 780
caggattaga taccctggta gtccatgccg taaacgatga atgctaggtg ttagaggatt 840
tccgtccttt agtgccgcag ctaacgcatt aagcattccg cctggggagt acgaccgcaa 900
ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagtg gtggagcatg tggtttaatt 960
cgatgctacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcttt ctgctagcct aagagattag 1020
gtgttccctt cggggacaga ttgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga 1080
gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttatta tcagttgcca gcattcagtt 1140
gggcactctg gtgagactgc cggtgataaa ccggaggaag gcggggatga cgtctaatca 1200
tcatgcccct tacgacctgg gctacacacg tgctacaatg gacagtacaa agagttgcaa 1260
aaccgcgagg tcaagcaaat cccataaagc tgttctcagt tcggattgca ggctgcaact 1320
cgcctgcatg aagttggaat cactagtaat cgtggatcag aatgccacgg tgaatacgtt 1380
ctcaggcctt gtacataccg cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc aaagccggtg 1440
atgtaaccct tcggggaact agccgtctaa ggtgggacag atgattaggg tgaa 1494

Claims (26)

1.一种乳酸菌，其特征在于，其是以保藏号：NITE BP-03116(识别编号：WR16-4)保藏的属于乳杆菌属的种(Lactobacillus sp.)。
2.如权利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌具有序列号1所示的16SrDNA区域的碱基序列。
3.如权利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，其是从植物发酵提取物中取得的。
4.如权利要求2所述的乳酸菌，其特征在于，其是从植物发酵提取物中取得的。
5.如权利要求3所述的乳酸菌，其特征在于，所述植物发酵提取物为萝卜发酵提取物。
6.如权利要求4所述的乳酸菌，其特征在于，所述植物发酵提取物为萝卜发酵提取物。
7.如权利要求5所述的乳酸菌，其特征在于，所述萝卜发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的。
8.如权利要求6所述的乳酸菌，其特征在于，所述萝卜发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的。
9.如权利要求7所述的乳酸菌，其特征在于，所述菌液由酵母菌构成。
10.如权利要求8所述的乳酸菌，其特征在于，所述菌液由酵母菌构成。
11.如权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，其在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在蔗糖浓度30～60wt％的高浓度蔗糖环境下也增殖。
12.如权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，其在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在果糖浓度和葡萄糖浓度分别为10～30wt％的果糖·葡萄糖高浓度环境下也增殖。
13.如权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌，其特征在于，其在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在蔗糖浓度30～60wt％的高浓度蔗糖环境下也增殖，进而，在pH3.5～5.5的低pH环境下增殖，并且在果糖浓度和葡萄糖浓度分别为10～30wt％的果糖·葡萄糖高浓度环境下也增殖。
14.一种乳酸菌的取得方法，其特征在于，向灭菌的液体培养基中加入植物发酵提取物而得到培养液，接着，对该培养液进行富集培养而得到富集培养液，接着，将该富集培养液与灭菌的分离用培养基进行倾注而制成平板培养基，接着，钓取该平板培养基中出现的菌落，取得能够在低pH环境且高浓度蔗糖环境下增殖的乳酸菌。
15.如权利要求14所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，所述植物发酵提取物是将萝卜、细砂糖和菌液混合并使其发酵而得到的萝卜发酵提取物。
16.如权利要求15所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，所述菌液由酵母菌构成。
17.如权利要求14～16中任一项所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，所述液体培养基是在混合发酵提取物与野菜-细砂糖混合液的混合物中添加抗生素而成的，所述混合发酵提取物是使用蔬菜发酵提取物和水果发酵提取物中的任一者或两者而得到的，所述野菜-细砂糖混合液是将野草的煮出液与细砂糖混合而得到的。
18.如权利要求17所述的乳酸菌的取得方法，其特征在于，所述抗生素为环己酰亚胺。
19.一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求1～10中任一项所述的乳酸菌。
20.一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求11所述的乳酸菌。
21.一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求12所述的乳酸菌。
22.一种含乳酸菌的饮食品，其特征在于，其含有权利要求13所述的乳酸菌。
23.如权利要求19所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，所述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
24.如权利要求20所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，所述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
25.如权利要求21所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，所述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
26.如权利要求22所述的含乳酸菌的饮食品，其特征在于，所述含乳酸菌的饮食品为发酵饮食品。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP5044769B2 (ja) 2006-03-10 2012-10-10 秋田県 乳酸菌ラクトバシラス・サケイ株、飲料製造方法、食品製造方法、漬け床製造方法、製パン改質原料製造方法
AU2008246387B2 (en) * 2007-05-03 2014-06-12 Tobias Olofsson Novel bacteria isolated from fresh honey or the honey producing tract of honey bees
JP2009225792A (ja) 2008-02-29 2009-10-08 Sachiko Tsugeta 新規乳酸菌株とその用途。
WO2013001862A1 (ja) 2011-06-29 2013-01-03 雪印種苗株式会社 新規乳酸菌及びこれを用いるサイレージ又は発酵飼料の調製方法
WO2018047979A1 (ja) 2016-09-12 2018-03-15 イチビキ株式会社 耐塩性乳酸菌、耐塩性乳酸菌の培養方法、及び免疫賦活剤

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