RU2577994C1 - Реутерин-вырабатывающие lactobacillus brevis - Google Patents
Реутерин-вырабатывающие lactobacillus brevis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2577994C1 RU2577994C1 RU2014126389/10A RU2014126389A RU2577994C1 RU 2577994 C1 RU2577994 C1 RU 2577994C1 RU 2014126389/10 A RU2014126389/10 A RU 2014126389/10A RU 2014126389 A RU2014126389 A RU 2014126389A RU 2577994 C1 RU2577994 C1 RU 2577994C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- reuterin
- pylori
- brevis
- lactobacillus brevis
- Prior art date
Links
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 title claims abstract description 53
- AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxypropionaldehyde Chemical compound OCCC=O AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 30
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims abstract description 6
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 108010025885 Glycerol dehydratase Proteins 0.000 description 8
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 7
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 5
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241001167795 Escherichia coli OP50 Species 0.000 description 4
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 108010082340 Arginine deiminase Proteins 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 2
- 241001468197 Lactobacillus collinoides Species 0.000 description 2
- 241000186685 Lactobacillus hilgardii Species 0.000 description 2
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 2
- 206010030216 Oesophagitis Diseases 0.000 description 2
- 108010065027 Propanediol Dehydratase Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 208000006881 esophagitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 201000011587 gastric lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012340 reverse transcriptase PCR Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- -1 D-melibiosis Chemical compound 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015137 Eructation Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101000650817 Homo sapiens Semaphorin-4D Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000186842 Lactobacillus coryniformis Species 0.000 description 1
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 description 1
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000699684 Meriones unguiculatus Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 241000341511 Nematodes Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M Potassium gluconate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 1
- 102100027744 Semaphorin-4D Human genes 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- 208000027687 belching Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- JUPQTSLXMOCDHR-UHFFFAOYSA-N benzene-1,4-diol;bis(4-fluorophenyl)methanone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1.C1=CC(F)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 JUPQTSLXMOCDHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 206010016766 flatulence Diseases 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 208000024798 heartburn Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004224 potassium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960003189 potassium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013926 potassium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N silicon carbide Chemical compound [Si+]#[C-] HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 101150080234 vacA gene Proteins 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/121—Brevis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/24—Lactobacillus brevis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к реутерин-вырабатывающему штамму Lactobacillus brevis и его использованию. Предложен способный накапливать реутерин штамм Lactobacillus brevis CNCM I-4431. Реутерин получают путем культивирования указанного штамма в присутствии глицерина и его выделения. Культуру или нейтрализованную суспензию указанного штамма используют в составе композиции молочного продукта для ингибирования роста Helicobacter pylori. Предложенные штамм в качестве лекарственного средства и композиция могут быть использованы для лечения или предотвращения инфекции H. pylori. Группа изобретений обеспечивает ингибирование роста H. pylori. 6 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к вырабатывающим реутерин штаммам Lactobacillus brevis (L. brevis) и к их применению, в частности, для лечения или предотвращения инфекции Helicobacter pylori (H. pylori) и развивающихся вследствие этой инфекции болезней.
Реутерин (3-гидроксипропиональдегид, 3-ГПА) является противомикробным соединением, которое, как считалось изначально, вырабатывается рядом штаммов Lactobacillus reuteri (L. reuteri) при культивировании в анаэробных условиях в присутствии глицерина (TALARICO & DOBROGOSZ, Antimicrob Agents Chemother, 33, 674-9, 1989). Превращение глицерина в реутерин катализируется кобаламин-зависимой глицерин-дегидратазой (Gld; EC 4.2.1.30), которая состоит из трех субъединиц (C, D и E или α, β и γ, соответственно). Существование глицерин-дегидратазного (ГДГ) метаболического пути было обнаружено и в других видах молочнокислых бактерий, таких как Lactobacillus collinoides, Lactobacillus brevis и Lactobacillus hilgardii. Во всех этих видах наличие данного пути меняется от штамма к штамму и зависит от присутствия гена, кодирующего глицерин-дегидратазу или диол-дегидратазу (CADIEUX et al, Appl Environ Microbiol, 74, 4645-9, 2008; SAUVAGEOT et al, FEMS Microbiology Letters, 209, 69-74, 2002; CLAISSE и LONVAUD-FUNEL, Journal of Food Protection, 64, 833-837, 2001). В большей части бактерий, способных усваивать глицерин через ГДГ путь, реутерин в норме является промежуточным соединением метаболизма, которое затем внутриклеточно восстанавливается до 1,3-пропандиола, (1,3-ПД), который выделяется во внеклеточную среду. Только несколько штаммов, обладающих глицерин- или диол-дегидратазой, способны накапливать реутерин в среде для культивирования. Большая часть таких реутерин-накапливающих штаммов принадлежат к виду L. reuteri. Однако было обнаружено, что накапливать реутерин внеклеточно, как правило, в меньшем количестве, чем L. reuteri, способны и некоторые штаммы других видов кисломолочных бактерий: Lactobacillus coryniformis (MARTIN et al, Int J Food Microbiol, 104, 267-77, 2005), Lactobacillus collinoides (GARAI-IBABE et al, International Journal of Food Microbiology 121, 253-261, 2008; SAUVAGEOT et al, International Journal of Food Microbiology, 55, 167-170, 2000) и Lactobacillus hilgardii (PASTERIS and STRASSER DE SAAD, J. Agric. Food Chem., 57 (9), 3853-3858, 2009). Совсем недавно было обнаружено, что один из штаммов Lactobacillus brevis и один из штаммов Lactobacillus pentosus способны накапливать реутерин внеклеточным образом (в 10 раз в меньшей концентрации, однако, чем L. reuteri) (BAUER et al, International Journal of Food Microbiology, 137, 28-31, 2010).
Реутерин обладает широким спектром противомикробного воздействия в отношении потенциально вредоносных микроорганизмов. Реутерин может ингибировать рост дрожжей, грибков, простейших и различных вредоносных бактерий при концентрации, в четыре-пять раз меньшей, чем необходимая для ингибирования роста молочнокислых бактерий концентрация. Ввиду данной избирательной противомикробной активности реутерина, которая позволяет уничтожать ряд патогенных микроорганизмов, не причиняя при этом вреда полезным молочнокислым бактериям кишечной микрофлоры, было предложено применять его для лечения различных нарушений, связанных с пищеварительной системой.
Некоторые штаммы L. reuteri рассматривали как потенциальные пробиотики, в частности, ввиду их защитного действия в отношении патогенов, таких как Salmonella enterica, Escherichia coli, Clostridium difficile и Helicobacter pylori (CLEUSIX et al, BMC Microbiol, 71012007; SPINLER et al, Anaerobe, 14, 166-71, 2008; FRANCAVILLA et al., Helicobacter, 13, 127-34, 2008; PCT WO 2004/031368). Такое действие связывали, по крайней мере частично, с выработкой реутерина.
Среди патогенных микроорганизмов желудочно-кишечного тракта Helicobacter pylori в последние годы вызывает все больший интерес с исследовательской точки зрения. Это грамотрицательные спиралевидные бактерии, которые населяют слизистую оболочку кишечника более чем 50% населения мира. Несмотря на то, что у большинства людей инфекция H. pylori является бессимптомной, хотя в их кишечном эпителии присутствуют признаки воспаления, тем не менее, заболевания развиваются у 15-20% зараженных H. pylori людей. H. pylori является главным фактором заболеваний двенадцатиперстной кишки, хронического активного гастрита, атрофии, метаплазии, дисплазии, рака желудка и лимфомы ткани слизистых оболочек желудка (ТСОЖ) (см. обзор FOX & WANG, J Clin Invest, 117, 60-9, 2007; POLK & PEEK, Nat Rev Cancer, 10, 403-14).
Стандартное лечение пациентов, зараженных H. pylori, включает применение двух антибиотиков и ИПН (ингибитора протонового насоса), т.е. так называемой тройной терапии. Однако уровень эрадикации H. pylori после тройной терапии снижается вследствие устойчивости к антибиотикам или малой восприимчивости. Кроме того, несмотря на ряд исследований, на данный момент на рынке все еще нет эффективной вакцины.
Применение пробиотиков было предложено в качестве альтернативы тройной терапии для лечения или предотвращения инфекции H. pylori. Как указано выше, такие пробиотики включают, в частности, L. reuteri, в частности, вследствие их противомикробных свойств. Некоторые штаммы других молочнокислых бактерий были предложены как потенциально полезные для борьбы с инфекцией H. pylori. Например, SIMOVA et al. (J Appl Microbiol, 106, 692-701, 2009) описывают штамм Lactobacillus delbrueckii (BB18), который вырабатывает ингибирующий пептид (бактериоцин), который оказывает сильное блокирующее воздействие на H. pylori. LINSALATA et al. (Helicobacter, 9, 165-72, 2004) исследуют эффекты отдельного штамма L. brevis (CD2) с высокой активностью аргининовой дезиминазы, влияющей на выживаемость H. pylori в слизистой желудка человека. Они показали снижение количества H. pylori внутри желудка и предположили, что оно может быть связано с повышенной активностью аргининовых дезиминаз, что приводит к снижению аргинина у H. pylori и тормозит их рост и пролиферацию.
Авторы изобретения выделили штамм Lactobacillus brevis, который обладает способностью вырабатывать реутерин и накапливать его в достаточном количестве для проявления противомикробной активности в отношении широкого спектра штаммов H. pylori.
Штамм "способный накапливать реутерин" или "реутерин-накапливающий" штамм, согласно настоящему документу, является штаммом, который способен вырабатывать реутерин и внеклеточно выделять его.
Таким образом, объектом по настоящему изобретению является такой штамм L. brevis, который был депонирован согласно будапештскому соглашению с НККМ (Национальная Коллекция Культур Микроорганизмов, 25, ул. Docteur Roux, Париж) 3 февраля 2011 года, под номером CNCM I-4431.
Помимо способности вырабатывать и накапливать реутерин, этот штамм также обладает следующими характеристиками:
- Морфология: палочкообразные бактерии с однородной окраской, группирующиеся в небольшие цепочки;
- Метаболизм: гетероферментативный;
- Ферментация следующих сахаров (результаты получены с использованием стрипа Api 50 CH и среды API MRS при 37°C за 48 часов): L-арабиноза, D-рибоза, D-ксилоза, D-глюкоза, D-фруктоза, D-мальтоза, D-мелибиоза, калия глюконат, калий 5-цетоглюконат.
Настоящее изобретение также охватывает реутерин-накапливающие штаммы L. brevis, которые были получены вследствие мутагенеза или генетических трансформаций штамма CNCM I-4431, в случае если они сохраняют противомикробные свойства и способность вырабатывать реутерин, присущие родительскому штамму. Это могут быть штаммы, в которых один или несколько эндогенных генов штамма CNCM I-4431 были подвергнуты мутации, например, чтобы изменить их метаболические особенности (например, способность данного штамма метаболизировать сахара, его устойчивость к внутрикишечному транспорту, его устойчивость к кислотности или последующему окислению среды). Это также могут быть штаммы, которые получились в результате генетической трансформации штамма CNCM 1-443 одним или несколькими представляющими интерес генами, что позволит, например, данному штамму приобрести дополнительные физиологические характеристики или вырабатывать белки с терапевтическими или вакцинальными свойствами, которые нужны в ходе лечения с помощью данного штамма.
Эти штаммы можно получать из штамма CNCM I-4431 с помощью общепринятых способов случайного или сайт-специфического мутагенеза и генетической трансформации молочнокислых бактерий, например так, как описано в статье GURY et al. (Arch Microbiol., 182, 337-45, 2004) или VELEZ et al. (Appl Environ Microbiol., 73, 3595-3604, 2007), или с помощью метода, известного как "геномная перетасовка" (PATNAIK et al. Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002; WANG Y. et al, J Biotechnol., 129, 510-15, 2007).
Объектом по настоящему изобретению также является способ получения реутерин-накапливающего штамма Lactobacillus brevis, включающий этап мутагенеза или генетической трансформации штамма CNCM I-4431.
Штамм L. brevis по изобретению можно использовать для получения реутерина. Таким образом, другим объектом по настоящему изобретению является способ для получения реутерина, включающий стадии:
- культивирование штамма L. brevis, предпочтительно, штамма CNCM I-4431, по изобретению указанным выше способом, в присутствии глицерина и
- выделение реутерина, выработанного культурой.
Объектом по настоящему изобретению также является композиция, включающая штамм L. brevis по изобретению, предпочтительно штамм CNCM I-4431.
В композиции по изобретению указанный штамм можно использовать в форме целых, предпочтительно живых бактерий.
Композиции по изобретению может быть представлена в любой подходящей для введения форме, в частности, в форме для перорального введения. Такие формы включают, в том числе, твердые, полутвердые, жидкие формы и порошки. Жидкие композиции, как правило, являются предпочтительными, вследствие простоты введения, например, в виде напитков.
Композиция может содержать по меньшей мере 105 КОЕ, предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ на г сухого веса штамма L. brevis по изобретению.
Композиция может дополнительно содержать другие штаммы бактерий, в частности, пробиотические штамм (штаммы), такие как штаммы Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus или Lactococcus.
Композиция может, как правило, содержать от 105 до 1013 колониеобразующих единиц (КОЕ), предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ, более предпочтительно по меньшей мере 107 КОЕ, еще более предпочтительно по меньшей мере 108 КОЕ и наиболее предпочтительно по меньшей мере 109 КОЕ на 1 г сухого веса композиции штамма L. brevis по изобретению. В случае жидкой композиции, это соответствует, как правило, от 104 до 1012 колониеобразующих единицам (КОЕ), предпочтительно по меньшей мере 105 КОЕ, более предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ, еще более предпочтительно по меньшей мере 107 КОЕ и наиболее предпочтительно по меньшей мере 109 КОЕ/мл.
Композиция может быть питательной композицией, в том числе пищевым продуктом, пищевой добавкой или функциональным пищевым продуктом. "Пищевая добавка" подразумевает продукт на основе таких соединений, которые, как правило, используются для получения продуктов питания, но при этом находятся в форме таблеток, порошков, капсул, настоек или в любой другой форме, как правило, не связанной с питанием, и которые оказывают положительное воздействие на здоровье человека. "Функциональный пищевой продукт" является таким пищевым продуктом, который также оказывает положительное воздействие на здоровье человека. В частности, пищевые добавки и функциональные пищевые продукты могут оказывать защищающий или лечащий физиологический эффект в отношении заболеваний, в том числе в отношении хронических заболеваний.
Питательные композиции по изобретению также включают детское питание, детскую молочную смесь для питания с рождения или для питания с полугода. Предпочтительно, настоящая композиция является биологически активной добавкой или фармацевтическим препаратом, питательной добавкой или продуктом лечебного питания.
Композиция может быть молочным продуктом, предпочтительно, ферментированным молочным продуктом. Ферментированный продукт может быть представлен в форме жидкости, или он может быть представлен в форме сухого порошка, полученного путем высушивания ферментированной жидкости. Примеры молочных продуктов включают кисломолочные продукты и/или ферментированную молочную сыворотку в сквашенной, смешанной или питьевой форме, сыр и йогурт.
Ферментированный продукт также может быть ферментированным растительным продуктом, таким как ферментированная соя, злаки и/или фрукты в сквашенной, смешанной или питьевой форме.
В предпочтительном варианте осуществления ферментированный продукт является свежим продуктом. Свежий продукт, не прошедший этапов сильной термической обработки, обладает тем преимуществом, что бактериальные штаммы в нем представлены в живом виде.
Объектом по настоящему изобретению также является штамм L. brevis по изобретению, предпочтительно штамм CNCM I-4431, или композиция по изобретению, подходящий для применения в качестве лекарственного средства. Штамм L. brevis и композиции по изобретению являются особенно подходящими для лечения или предотвращения инфекции H. pylori.
Объектом по настоящему изобретению также является применение штамма L. brevis по изобретению, предпочтительно штамма CNCM I-4431, или композиции по изобретению в качестве лекарственного средства или для получения лекарственного средства, предпочтительно лекарственного средства для лечения или предотвращения инфекции H. pylori.
Объектом по настоящему изобретению также является способ лечения или предотвращения инфекции H. pylori у нуждающегося в этом пациента указанным способом, включающим введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества штамма L. brevis по изобретению, предпочтительно штамма CNCM I-4431, или композиции по изобретению.
Настоящее изобретение также охватывает способ для получения лекарственного средства, предпочтительно лекарственного средства для лечения или предотвращения инфекции H. pylori, указанным способом, согласно которому указанный выше штамм L. brevis, предпочтительно штамм CNCM I-4431, помещается по меньшей мере в один фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или эксципиент.
Способы диагностики инфекции H. pylori известны в данной области. В качестве примера, диагностику инфекции H. pylori можно проводить с помощью теста на антитела в крови, теста на антигены в кале или мочевинного дыхательного теста. Также ее можно проводить путем биопсии при эндоскопии, за которой следует уреазный тест, гистологический анализ или культивирование микробов.
Симптомы или заболевания, связанные с инфекцией H. pylori, включают, в частности, боли в желудке, изжогу, кислотный рефлюкс, боли в животе, срыгивание, рвоту, отрыжку, метеоризм, тошноту, эзофагит, гастрит, в том числе хронический активный гастрит, язвенные заболевания желудка, атрофию, метаплазию, дисплазию, рак желудка и лимфому ткани слизистой оболочки желудка (ТСОЖ).
Настоящее изобретение станет более ясным из дальнейшего описания, в котором будут перечислены примеры, демонстрирующие противомикробные иммуномодулирующие и противоинфекционные свойства штамма CNCM I-4431, а также описаны приведенные фигуры.
На Фиг. 1 представлен результат проведения ПЦР для штамма Lactobacillus brevis на последовательность gldC. Верхняя полоска на 728 п.н. представляет ожидаемый продукт с использованием генно-специфических праймеров на gldC. Нижняя полоска на 201 п.н. представляет ожидаемый продукт с использованием генно-специфических праймеров на 16S рРНК (положительный контроль ПЦР); Smart: DNA SMART Ladder (Eurogentec); C+: результаты ПЦР, полученные для контрольной ДНК из gldC-положительного штамма Lactobacillus reuteri ATCC 55730; I-4431: результаты ПЦР, полученные для ДНК штамма L. brevis CNCM I-4431; L. brevis 80: результаты ПЦР, полученные для ДНК штамма L. brevis 80 C-: результаты ПЦР, полученные для контрольной ДНК gldC-отрицательного штамма Streptococcus thermophilics; H20: результаты ПЦР, полученные для стерильной воды.
На Фиг. 2 представлен количественный анализ H. pylori (штамма NTCTC 11637) в C. elegans после поглощения H. pylori в отдельности (черная полоска), поглощения H. pylori и штамма L. brevis I-4431, выращенного в среде MRS (темно-серая полоска), поглощения H. pylori и штамма L. brevis I-4431, выращенного в среде MRS в присутствии глицерина (белая полоска) и поглощения H. pylori и среды MRS с глицерином.
Пример 1: Ингибирование роста штаммов H. Pylori in vitro с помощью штамма L. Brevis CNCM I-4431
Материалы и способы
Штаммы Lactobacillus brevis:
- L. brevis CNCM I-4431
- L. brevis 80: стандартный штамм L. brevis
Штаммы Helicobacter pylori:
Использовали три референтных штамма H. pylori, а также пять клинических изолятов.
Референтные штаммы:
- 26695: описан в TOMBS et al. (Nature 388, 539-547, 1997);
- HPAG1: описан в OH et al. (Proc Natl Acad Sci USA., 103, 9999-10004, 2006);
- TN2GF4: получен в Японии от пациента с язвой желудка и адаптирован к монгольской песчанке (штамм описан в WATANABE, et al. Gastroenterol 1998; том 115, стр. 642-648)
Клинические изоляты:
- CR113 и CR114: штаммы получены при биопсии людей с предраковыми повреждениями желудка
- Axcan 342 и Axcan 374: штаммы получены от пациента с гастритом и от пациента с эзофагитом, соответственно; пациенты проходили клиническое исследование на четырехкратную терапию для эрадикации H. pylori (MALFERTHEINER et al, Lancet, 377, 905-913, 2011).
- GC3C: штамм получен от пациента с раком желудка.
Способ:
Штаммы L. brevis выращивали в среде MRS (pH 6,2) в течение 17 часов. Бактериальные суспензии нейтрализовали до pH 6,8 раствором KOH.
Штаммы H. pylori выращивали в течение 48 часов в среде Brucella до получения мутности, эквивалентной стандарту Mac Farland 4. Бактериальные суспензии распределяли по поверхности плашек Mueller Hinton Agar с добавлением 10% (об./об.) овечьей крови, обогащенной 1% (об./об.) добавкой Polyvitex (Biomerieux), и в такой же среде в присутствии глицерина до конечной концентрации 100 мМ для обеспечения выработки реутерина.
На поверхность плашек помещали стерильные бумажные диски. Затем 5 нейтрализованных суспензий L. brevis наносили на каждый бумажный диск. Плашки инкубировали при 37°C в микроаэрофильных атмосферных условиях (газовый распределитель Ruskin Microaerophilic, конечные условия 5% О2, 10% CO2, и 85% N2) в течение от 72 часов до 96 часов.
Чтобы проанализировать воздействие суспензии L. brevis на рост штамма H. pylori, измеряли ширину колец ингибирования роста вокруг бумажных дисков.
Результаты
Результаты представлены ниже в Таблице 1.
| Таблица 1 | ||||||||
| 26695 | HPAG1 | TN2GF4 | CR113 | CR114 | Axcan 342 | Axcan 374 | GC3C | |
| L. brevis CNCM I-4431Кольцо ингибирования роста в мм | 30 | 30 | 15 | 15 | 10 | 30 | 11 | 30 |
| L. brevis CNCM I-4431 Кольцо ингибирования роста в мм (без глицерина) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| L. brevis 80 Кольцо ингибирования роста в мм | 0 | 0 | 0 | 15 | 0 | 0 | 0 | 40 |
| L. brevis 80 Кольцо ингибирования роста в мм (без глицерина) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Данные результаты демонстрируют то, что в то время как L. brevis 80 оказывает ингибирующее воздействие только на два исследуемых штамма H. pylori, L. brevis I-4431 ингибирует рост восьми из восьми штаммов исследуемых H. pylori. Эти ингибирующие свойства, видимо, связаны с накоплением реутерина, поскольку они наблюдаются только в тех культурах L. brevis, которые выращивали в присутствии глицерина.
Пример 2: ПЦР скрининг гена gldC
Материалы и способы
Наличие у L. brevis CNCM I-4431 гена, кодирующего большую субъединицу глицерин-дегидратазы (GldC), фермента, ответственного за выработку реутерина, исследовали с помощью следующего способа, описанного CADIEUX et al. (2008, ссылка приведена выше).
В кратком изложении, из каждого исследуемого штамма выделяли тотальную ДНК.
В качестве положительного контроля (C+) использовали реутерин-вырабатывающий штамм L. reuterii ATCC 55730. В качестве отрицательного контроля (C-) использовали штамм не вырабатывающего реутерин вида (Streptococcus thermophilus).
Амплификацию фрагмента гена, кодирующего большую субъединицу Gld (gldC), проводили с помощью следующих вырожденных праймеров:
GDCRev: GCRGCYTTSATATCTKSAACCAT (SEQ ID NO: 1) и GDCFor: GCMTAYGCWGAAACCATTTCAGTTTA (SEQ ID NO: 2), оба описаны у CADIEUX et al. Ожидаемый размер амплифицированного фрагмента составлял 728 п.н.
В качестве положительного контроля ПЦР, во всех образцах также амплифицировали фрагмент 16S рРНК с помощью следующих эубактериальных праймеров:
16SFor: ACTCCTACGGGAGGCAGCAG (SEQ ID NO: 3) и
16SRev: GTATTACCGCGGCTGCTGGCAC (SEQ ID NO: 4), оба также описаны CADIEUX et al.
Ожидаемый размер амплифицированного фрагмента 16S рРНК составлял 201 п.н.
Результаты
Результаты анализа ПЦР показаны на Фиг. 1. Штаммы L. brevis CNCM I-4431, L. brevis 80 и (C+) реутерин-вырабатывающий штамм L. reuterii ATCC 55730 оказались положительными в отношении ожидаемого 728-п.н. продукта. Таким образом, штамм L. brevis CNCM I-4431 имеет ген gldC, позволяющий ему вырабатывать реутерин.
Пример 3: Влияние L. Brevis CNCM I-4431 на инфекцию H. Pylori на модели C. elegans
Культивирование L. brevis и H. pylori
Штамм L. brevis CNCM I-4431 выращивали в среде MRS так, как это описано в Примере 1.
Штамм NCTC11637 (ATCC 43504T) H. pylori выращивали в среде BHI (Oxoid), содержащей 5% (об./об.) лошадиной крови (Oxoid).
Супернатанты отделяли от клеток посредством центрифугирования и нейтрализовали NaOH (1M). Затем супернатанты фильтровали (0,22 мкм) и добавляли к клеточному осадку.
В случае культур H. pylori, среду BHI, содержащую лошадиную кровь (Oxoid), удаляли посредством центрифугирования, после чего клетки промывали физиологическим раствором.
В плашки NG Agar, которые применяли для анализа инфекции C. elegans, добавляли по 100 мкл смесей, содержащих культуры LAB с оптической плотностью, составляющей 2,22 (включая клетки и супернатант) и соответствующие клетки штамма H. pylori (оптическая плотность 0,022). В контрольном эксперименте, в котором нематод не кормили LAB, клетки H. pylori ресуспендировали в физиологическом растворе и помещали на плашки.
Анализ инфекции C. elegans
Анализ инфекции проводили со штаммом C. elegans дикого типа (N2). Для заражения нематод использовали штамм H. pylori NCTC 11637. Эксперимент был начат с молодыми взрослыми особями одного возраста (трехдневные нематоды), которых последовательно переносили в разные условия культивирования:
- Среда NG + E. coli OP50 (контроль).
- Среда NG + E. coli OP50 + 100 мкл среды для культивирования LAB (контроль для среды культивирования).
- Среда NG + E. coli OP50 + 100 (H. pylori NCTC 11637T + LAB).
Нематод инкубировали при 25°C в течение 8 суток, перенося их на новые плашки каждые двое суток. Результат выживаемости по популяциям записывали для каждых условий среды.
После инкубационного периода брали образцы из 15 нематод на каждое условие и отмывали их буфером M9, содержащем 0,1% Triton X-100. Нематод затем раздробили с помощью 0,4 г гранул карбида кремния в вортексе.
ДНК зараженных нематод выделяли с помощью коммерческого набора "High Pure PCR Template Preparation Kit" (Roche), затем осаждали и отмывали чистым этиловым спиртом и 5M ацетатом калия. Для выявления наличия H. pylori использовали разведенные образцы ДНК и проводили обратно-траскриптазную ПЦР.
Обратно-транскриптазная ПЦР
Праймеры, которые использовали в данном исследовании, были предназначены для гена vacA (NAYAK & ROSE, J Appl Microbiol, 103, 1931-41, 2007). Они назывались HpylF (5′ CAA TAG CAA TCA AGT GGC TTT G 3′, SEQ ID NO: 5) и HpylR (5′ GCG CGC TTC CAC ATT AGC 3′; SEQ ID NO: 6). Их специфичность заранее проверяли in silico с помощью онлайн-инструмента BLAST и in vitro с помощью кПЦР со штаммами вида H. pylori, разными пробиотическими штаммами и E. coli OP50, которые использовали для кормления C. elegans (см. предыдущий обзор по оптимизации). Использовали мастер-микс "SYBR® Green PCR Master Mix" (Applied Biosystems) и термоциклер StepOne Real-Time (Applied Biosystems). Ниже в Таблице 2 указаны оптимальные условия для проведения кПЦР для H. pylori.
| Таблица 2 | |
| Реактивная смесь | |
| Мастер-микс 2x | 1x |
| Прямой праймер: | 325 нМ |
| Обратный праймер: | 325 нМ |
| Термическое циклирование | |
| Стадия выдержки | 50°C 2 мин |
| 95°C | 10 мин |
| Стадия циклирования (x40) | 95°C 15 сек |
| 60°C | 1 мин |
Для построения стандартной кривой ДНК проводили качественный анализ ДНК H. pylori с помощью спектрофотометрии (A260). Число соответствующих геномов рассчитывали следующим способом:
- Число геномов = ДНК (г) × НК/мм
- Размер генома H. pylori = 1,6 м.п.н.
- НК = 6,023×1023
- Число геномов = ДНК (г) × 6,023 × 1023/1,6 × 106 × 2 × 309
Стандартную кривую строили с использованием четырех десятикратных разведений ДНК.
Результаты, полученные со штаммом I-4431, который выращивали на среде MRS или на среде MRS + глицерин, показаны на Фиг. 2. Эти результаты демонстрируют то, что штамм CNCM I-4431 снижает количество H. pylori NCTC 111637Т в C. elegans. Уменьшение инфекции более значительно в том случае, когда штамм I-4431 выращивали на среде MRS + глицерин, что указывает на то, что, по меньшей мере, часть противоинфекционного воздействия является результатом выработки реутерина.
Claims (8)
1. Реутерин-накапливающий штамм Lactobacillus brevis, представляющий собой штамм Lactobacillus brevis CNCM I-4431.
2. Применение штамма Lactobacillus brevis по п.1 для выработки реутерина.
3. Композиция молочного продукта для ингибирования роста Helicobacter pylori, содержащая культуру штамма Lactobacillus по п.1 или нейтрализованную суспензию штамма Lactobacillus по п.1.
4. Композиция по п.3, которая характеризуется тем, что содержит по меньшей мере 105 КОЕ, предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ указанного штамма Lactobacillus brevis на грамм сухого веса.
5. Композиция по любому из пп.3 или 4, которая характеризуется тем, что является питательной композицией.
6. Применение штамма Lactobacillus brevis по п.1 в качестве лекарственного средства для лечения или предотвращения инфекции H. pylori.
7. Применение композиции по любому из пп.3-5 для лечения или предотвращения инфекции H. pylori.
8. Способ получения реутерина, включающий стадии:
- культивирования штамма Lactobacillus brevis по п.1 в присутствии глицерина и
- выделение реутерина, выработанного культурой.
- культивирования штамма Lactobacillus brevis по п.1 в присутствии глицерина и
- выделение реутерина, выработанного культурой.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/IB2011/055391 WO2013079992A1 (en) | 2011-11-30 | 2011-11-30 | Reuterin-producing lactobacillus brevis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2577994C1 true RU2577994C1 (ru) | 2016-03-20 |
Family
ID=45390136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014126389/10A RU2577994C1 (ru) | 2011-11-30 | 2011-11-30 | Реутерин-вырабатывающие lactobacillus brevis |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9387229B2 (ru) |
| EP (1) | EP2785878B1 (ru) |
| JP (1) | JP5868519B2 (ru) |
| CN (1) | CN104053766B (ru) |
| AR (1) | AR089034A1 (ru) |
| BR (1) | BR112014012887A2 (ru) |
| ES (1) | ES2611028T3 (ru) |
| MX (1) | MX349944B (ru) |
| PL (1) | PL2785878T3 (ru) |
| RU (1) | RU2577994C1 (ru) |
| WO (1) | WO2013079992A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107739747B (zh) * | 2017-09-27 | 2020-06-02 | 浙江工商大学 | 一种利用罗伊氏乳杆菌与醋杆菌共发酵高密度生产罗伊特林素的方法 |
| KR102101692B1 (ko) * | 2018-03-05 | 2020-04-20 | 주식회사 엠디헬스케어 | 락토바실러스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도 |
| CN108741090A (zh) * | 2018-08-28 | 2018-11-06 | 安徽谷益生物科技有限公司 | 一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌功能性食品 |
| CN114032230B (zh) * | 2021-12-29 | 2023-07-04 | 安徽省农业科学院农业工程研究所 | 一种细菌甘油脱水酶突变体Gt9及其表达菌株的构建和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988008452A1 (en) * | 1987-05-01 | 1988-11-03 | Probiologics International, Inc. | Antibiotic reuterin |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4021951B2 (ja) * | 1996-03-01 | 2007-12-12 | わかもと製薬株式会社 | 乳酸菌を有効成分とする抗胃炎剤、抗潰瘍剤および醗酵食品 |
| IT1306716B1 (it) * | 1999-06-21 | 2001-10-02 | Mendes S U R L | Associazione di batteri lattici e suo uso per la prevenzione e/o iltrattamento terapeutico di infezioni e di stati infiammatori. |
| US7105336B2 (en) * | 2002-10-07 | 2006-09-12 | Biogaia Ab | Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation caused by Helicobacter |
| JP2005278414A (ja) * | 2004-03-26 | 2005-10-13 | Nippon Shokubai Co Ltd | １，３−プロパンジオール及び３−ヒドロキシプロピオン酸を製造する方法 |
| JP2005304362A (ja) * | 2004-04-20 | 2005-11-04 | Nippon Shokubai Co Ltd | １，３−プロパンジオール及び／又は３−ヒドロキシプロピオン酸を製造する方法 |
| EP1731604A4 (en) * | 2004-03-26 | 2007-04-04 | Nippon Catalytic Chem Ind | PROCESS FOR THE PREPARATION OF 1,3-PROPANEL AND / OR 3-HYDROXYPROPIONIC ACID |
| JP2007082476A (ja) * | 2005-09-22 | 2007-04-05 | Nippon Shokubai Co Ltd | グリセリンから３−ヒドロキシプロピオン酸を製造する方法 |
| US20080254011A1 (en) * | 2007-04-11 | 2008-10-16 | Peter Rothschild | Use of selected lactic acid bacteria for reducing atherosclerosis |
| JP2010183858A (ja) * | 2009-02-10 | 2010-08-26 | Nippon Shokubai Co Ltd | 遺伝子組み換え微生物及びこれを用いた３−ヒドロキシプロピオン酸の製造方法 |
-
2011
- 2011-11-30 PL PL11799493T patent/PL2785878T3/pl unknown
- 2011-11-30 WO PCT/IB2011/055391 patent/WO2013079992A1/en active Application Filing
- 2011-11-30 CN CN201180075190.8A patent/CN104053766B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-11-30 ES ES11799493.9T patent/ES2611028T3/es active Active
- 2011-11-30 BR BR112014012887-1A patent/BR112014012887A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-11-30 MX MX2014006556A patent/MX349944B/es active IP Right Grant
- 2011-11-30 JP JP2014543986A patent/JP5868519B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-11-30 US US14/361,565 patent/US9387229B2/en active Active
- 2011-11-30 EP EP11799493.9A patent/EP2785878B1/en not_active Not-in-force
- 2011-11-30 RU RU2014126389/10A patent/RU2577994C1/ru not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-11-29 AR ARP120104491A patent/AR089034A1/es unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988008452A1 (en) * | 1987-05-01 | 1988-11-03 | Probiologics International, Inc. | Antibiotic reuterin |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BAUER R. ET AL. Influence of environmental parameters on production of the acrolein precursor 3-hydroxypropionaldehyde by Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 and its accumulation by wine lactobacilli. // Int J Food Microbiol. 2010;137(1):28-31. * |
| ШЕНДЕРОВ Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том III: Пробиотики и функциональное питание. - М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998, с. 84-85. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104053766A (zh) | 2014-09-17 |
| JP5868519B2 (ja) | 2016-02-24 |
| MX349944B (es) | 2017-08-21 |
| BR112014012887A2 (pt) | 2020-10-20 |
| JP2015500016A (ja) | 2015-01-05 |
| AR089034A1 (es) | 2014-07-23 |
| WO2013079992A1 (en) | 2013-06-06 |
| ES2611028T3 (es) | 2017-05-04 |
| US20140341855A1 (en) | 2014-11-20 |
| MX2014006556A (es) | 2014-10-24 |
| US9387229B2 (en) | 2016-07-12 |
| PL2785878T3 (pl) | 2017-04-28 |
| EP2785878B1 (en) | 2016-08-31 |
| CN104053766B (zh) | 2016-05-04 |
| EP2785878A1 (en) | 2014-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101618391B1 (ko) | 높은 옥살산 분해능을 갖는 유산균 | |
| US20080102061A1 (en) | Use hydrolyzed medium containing microorganisms medicinally | |
| TWI241912B (en) | Novel Acid-and bile salt-resistant Lactobacillus isolates having the ability to lower and assimilate cholesterol | |
| CN106999523A (zh) | 黄金奇异果组合物及其制备和使用方法 | |
| EP3018199B1 (en) | Composition containing bacterium belonging to genus lactobacillus | |
| KR20200027855A (ko) | 장내 항염증 및 균총 개선 활성을 갖는 락토바실러스 람노서스 균주 | |
| EP3808357A1 (en) | Composition and uses thereof | |
| RU2577994C1 (ru) | Реутерин-вырабатывающие lactobacillus brevis | |
| CN114468306B (zh) | 凝结芽孢杆菌bc99在制备缓解结肠炎制品或免疫调节制品方面的用途 | |
| Kumar et al. | Bifidobacteria for life betterment | |
| WO2020203792A1 (ja) | 骨格筋遅筋化用組成物 | |
| TWI705135B (zh) | 抗齲齒劑及抗齲齒用組成物 | |
| KR102491640B1 (ko) | 치아우식증 유발균을 억제하는 활성을 갖는 와이셀라 시바리아 균주 및 그 용도 | |
| RU2584600C2 (ru) | ШТАММ L.bulgaricus, СПОСОБНЫЙ ИНГИБИРОВАТЬ АДГЕЗИЮ ШТАММОВ Н.pylori К ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМ КЛЕТКАМ | |
| JP6338206B2 (ja) | 抗ヘリコバクター・ハイルマニー剤 | |
| KR20200128887A (ko) | 위장관 운동 장애 질환 개선, 치료 또는 예방용 김치 유산균 조성물 | |
| US20210315808A1 (en) | Bacillus subtilis containing composition for teatement of gastrointestinal irregulairty | |
| JP6482045B2 (ja) | 抗ヘリコバクター・ハイルマニー剤 | |
| CN117794557A (zh) | 后生元 | |
| TW202335676A (zh) | 腸管免疫賦活劑及IgA產生促進劑 | |
| US20190125810A1 (en) | Bacillus subtilis containing composition for teatement of gastrointestinal irregulairty | |
| WO2019145476A1 (en) | Composition comprising new lactobacillus salivarius strains and method for the prevention and treatment of otitis and upper respiratory infections | |
| Pachenari | An investigation of the potential of selected strains of Bifidobacterium to colonise the gastrointestinal tract of mice |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201201 |