RU2495120C1 - Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) - Google Patents
Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2495120C1 RU2495120C1 RU2012108030/10A RU2012108030A RU2495120C1 RU 2495120 C1 RU2495120 C1 RU 2495120C1 RU 2012108030/10 A RU2012108030/10 A RU 2012108030/10A RU 2012108030 A RU2012108030 A RU 2012108030A RU 2495120 C1 RU2495120 C1 RU 2495120C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- omg
- salmon
- cells
- gonads
- Prior art date
Links
Landscapes
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, в частности к получению перевиваемых линий клеток. Постоянная линия клеток получена из ткани гонад радужной форели путем длительного пассирования на среде Игла MEM на солях Эрла с 25 мМ HEPES с 10% эмбриональной сыворотки. Линия может быть использована как тест-культура для выделения, накопления, титрования и изучения вируса инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых (IPNV), вирусной геморрагической септицемии лососевых (VHSV), инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых (IHNV), весенней виремии карпов (SVCV), герпес-вируса карпа кои (KHV), герпес-вируса осетровых (SbSHV). Постоянная линия клеток OMG найдет широкое применение в лабораторных исследованиях по вирусологии и в биотехнологии при производстве вирус-вакцин и диагностикумов. 1 табл.
Description
Предполагаемое изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, в частности, к получению перевиваемых линий клеток, используемых при вирусологических и биотехнологических исследованиях.
Вирусные болезни рыб являются одним из основных сдерживающих факторов развития мировой аквакультуры. В связи с завозом из-за рубежа рыбопосадочного материала и экзотических видов рыб в последние годы в стране значительно обострилась эпизоотическая ситуация по особо опасным и карантинируемым вирусным болезням рыб. Метод культуры клеток позволяет моделировать процессы, происходящие в организме при взаимодействии с различными патогенными факторами, исследовать молекулярный характер инфекционного процесса, изучать репликацию вирусов, их ростовые показатели, с целью получения антигенов для производства вакцин и до сих пор остается «золотым стандартом» в диагностике заболеваний рыб вирусной природы.
В мире известны более 30 линий клеток, полученных из разных органов и тканей радужной форели, и только одна из них RTO, фибробластоподобной морфологии, была получена из ткани яичников [1]. Однако ее чувствительность к вирусам не была определена, таким образом невозможно использовать ее в работах по выделению и изучению вирусов-возбудителей опасных заболеваний рыб.
Известна также линия клеток ICO, полученная из гонад неполовозрелого карпа (Cyprinus carpio), используемая для выделения и культивирования вирусов рыб различных таксономических групп.
Морфологические признаки: линия представлена эпителиоподобными клетками, преимущественно однородными, их форма близка к кубической. Ядра крупные округлые, число ядрышек от 1 до 3, чаще 1. Ядрышки крупные, при окраске по Паппенгейму окружены зоной просветления, цитоплазма гомогенная. Модальный класс - 90 хромосом, с интервалом изменчивости от 71 до 178, величина модального класса 36%.
Культуральные свойства: клетки культивируют в среде Игла 2 MEM с добавлением 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота. Снимают с использованием стандартных растворов трипсина 0,25% и версена 0,02% в соотношении 5:7, с коэффициентом пересева 1:5. Монослой формируется через сутки после посева при посевной концентрации 3×105 кл./см2, при температуре 18-25°С.
Криоконсервация клеток: криозащитная среда следующего состава: ДМСО - 10%, фетальная сыворотка - 30%, среда Игла 2 MEM - 60%. Концентрация клеток при замораживании составляет 1-3 млн. кл./мл.
Линия клеток ICO чувствительна к вирусу весенней виремии карпов, вирусной геморрагической септицемии, инфекционного некроза гемопоэтической ткани, рабдовируса европейского угря, рабдовируса мальков щуки и иридовируса угря [2 прототип]. Однако, данная линия не обладает чувствительностью к вирусам инфекционного некроза поджелудочной железы и герпесвирусу осетровых.
В задачу наших исследований входило - получить перевиваемую линию клеток из гонад половозрелой радужной форели, обладающую высокой чувствительностью к ихтиовирусам различных таксономических групп.
Предложенная линия клеток получена из первично-трипсинизированной ткани гонад половозрелой (3-ая стадия по шкале Киселевича) радужной форели путем длительного пассирования на среде Игла MEM на солях Эрла с 25 мМ HEPES с 10% эмбриональной сыворотки.
Линия клеток гонад радужной форели (Oncorhynchus mykiss) названа авторами OMG и депонирована в Специализированной Коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных (СХЖ РАСХН) под номером 75 в 2010 году.
Предложенная линия обладает следующими свойствами:
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ - постоянная линия радужной форели представляет собой ровный, плотный монослой из клеток эпителиоподобной, полигональной формы, с крупными ядрами округлой или овальной формы с 1-3 ядрышками. Клетки делятся обычным двуполюсным митозом. Кариотип соответствует видовому признаку форели, модальный класс содержит 60 хромосом (2n=60) и составляет 77%.
Видовая идентичность подтверждена кариологическими методами.
КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА - клетки выращивают при температуре - 15-22°С в пристеночных условиях в сосудах различной емкости; ростовой средой является среда Игла MEM на солях Эрла с 25 мМ HEPES с 10% эмбриональной сыворотки без антибиотиков, рН среды 7,4-7,6. Дезагрегацию монослоя при субкультивировании осуществляют смесью трипсина 0,25% и версена 0,02% (4:1), кратность рассева 1:3-6. Посевная концентрация 250-300×103 клеток/мл. Первые сутки после субкультивирования содержат при 20-22°С, для формирования монослоя, через 2 суток монослой переносят на хранение при 15°С. частота пересева 1 раз 2-3 недели.
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ - линия клеток чувствительна к вирусам инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых (IPNV), вирусной геморрагической септицемии лососевых (VHSV), инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых (IHNV), весенней виремии карпов (SVCV), герпесвирусу карпа кои (KHV), герпесвирусу осетровых (SbSHV).
КРИОКОНСЕРВАЦИЯ - криоконсервацию осуществляют по 2-ступечатому методу. Температуру снижают по 1-2°С до -30°С, далее по 3-5°С до -70°С. По достижении -70°С ампулы с клетками помещают в жидкий азот. Криозащитную среду готовят следующим образом: среда культивирования - 50%, сыворотка эмбриональная телячья - 40%, ДМСО - 10%, концентрация - 3-4 млн.кл/мл.
КОНТРОЛЬ НА ПОСТОРОННИЕ КОНТАМИНАНТЫ - при исследовании клеточной линии OMG на наличие бактерий, грибов, микоплазм и латентных вирусов получены отрицательные результаты.
ПРИМЕР: Культуру клеток OMG культивируют на среде Игла MEM на солях Эрла с 25 мМ HEPES с 10% эмбриональной сыворотки без антибиотиков. При пересеве клетки снимают со стекла (пластика) 0,25% раствором трипсина и 0,02% раствором версена (4:1) при температуре 22°С. Монослой формируется на 1-2 сутки культивирования. После образования монослоя культуру заражают вирусом и инкубируют при температуре оптимальной для исследуемого вируса.
Экспериментальные данные по чувствительности клеточной линии OMG к патогенным вирусам рыб приведены в таблице 1.
| Таблица 1 | ||||
| Вирус | Культуры клеток | |||
| OMG | Референтная для данного вируса | |||
| Проявление ЦПД вируса, суток. | Титр вируса ТЦД50/мл | Проявление ЦПД вируса, час. | Проявление ЦПД вируса, час. | |
| инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых (IPNV), | 2 | 109,0 | 3 | RTG-2/108,0 |
| геморрагической септицемии лососевых (VHSV) | 3 | 108,0 | 2 | ЕРС/107,5 |
| инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых (IHNV) | 3 | 108,75 | 3 | ЕРС/107,5 |
| весенней виремии карпов (SVCV) | 5 | 106,6 | 5 | ЕРС/108,0 |
| герпес-карпа кои (KHV) | 2 | 109,0 | 2 | FHM/107,5 |
| герпес-осетровых (SbSHV) | 5 | 106,0 | 5 | WSSK-1/106,0 |
Титры исследованных вирусов в культуре клеток OMG через 5 дней инкубации на порядок выше, чем в референтной для каждого вируса культуре.
Предложенная клеточная линия апробирована с положительным результатом в лаборатории ихтиопатологии ВИЭВ с января 2010 по январь 2012 года для накопления, титрования и изучения вируса инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых (IPNV), вирусной геморрагической септицемии лососевых (VHSV), инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых (IHNV), весенней виремии карпов (SVCV), герпес вируса карпа кои (KHV), герпес вируса осетровых (SbSHV) и для диагностической работы по выявлению этих вирусов при мониторинговых исследованиях.
Постоянная линия клеток OMG найдет широкое применение в лабораторных исследованиях по вирусологии и в биотехнологии при производстве вирус-вакцин и диагностикумов.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Li M.F. A quantitative study of the effects of naturally occurring supplements on the growth of rainbow trout gonadal cells / M.F.Li, J.E.Stewart // Can.J.Microbiol. - 1965. - Vol.11. - p.9-14.
2. Патент №23533650 C12N 5/06 от 27.04.2009.
Claims (1)
- Постоянная линия клеток OMG из гонад радужной форели (Oncorhynchus mykiss), используемая для вирусологических исследований и чувствительная к 6 вирусам разных видов рыб, разводимых в условиях аквакультуры, депонирована в Специализированной Коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под №75.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012108030/10A RU2495120C1 (ru) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012108030/10A RU2495120C1 (ru) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012108030A RU2012108030A (ru) | 2013-09-10 |
| RU2495120C1 true RU2495120C1 (ru) | 2013-10-10 |
Family
ID=49164595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012108030/10A RU2495120C1 (ru) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2495120C1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114196616B (zh) * | 2021-12-21 | 2024-04-09 | 宁波迪尔普生物科技有限公司 | 一种锦鲤鳍组织细胞系及其应用 |
| CN114621913A (zh) * | 2022-03-24 | 2022-06-14 | 甘肃农业大学 | 一种虹鳟鱼肝细胞系的建立方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008220198A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Japan Agengy For Marine-Earth Science & Technology | カサゴ細胞株 |
| RU2348689C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-03-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Постоянная линия клеток sso-2 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri |
| RU2348688C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-03-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Постоянная линия клеток sso-3 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri |
| RU2353650C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-04-27 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Линия клеток ico яичников неполовозрелого карпа (cyprinus carpio) для вирусологических исследований |
-
2012
- 2012-03-05 RU RU2012108030/10A patent/RU2495120C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008220198A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Japan Agengy For Marine-Earth Science & Technology | カサゴ細胞株 |
| RU2348689C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-03-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Постоянная линия клеток sso-2 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri |
| RU2348688C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-03-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Постоянная линия клеток sso-3 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri |
| RU2353650C1 (ru) * | 2007-08-28 | 2009-04-27 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Линия клеток ico яичников неполовозрелого карпа (cyprinus carpio) для вирусологических исследований |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012108030A (ru) | 2013-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104258385B (zh) | Bhk-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用 | |
| CN103667176A (zh) | 鲤疱疹病毒ⅱ型敏感的异育银鲫脑组织细胞系及其建立方法和应用 | |
| CN101979519A (zh) | 一种制备伪狂犬病疫苗的方法 | |
| CN101869702B (zh) | 以悬浮微载体细胞培养系统产制的疫苗及其方法 | |
| CN109837250B (zh) | 羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用 | |
| Komura et al. | Fish cell culture: Establishment of two fibroblast-like cell lines (OL-17 and OL-32) from fins of the medaka, Oryzias latipes | |
| CN105664150B (zh) | 一种鸡新城疫病毒、禽流感病毒和禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
| CN104152403B (zh) | 一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系 | |
| CN110218706A (zh) | 表达h7n9亚型高致病性禽流感病毒ha蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与应用 | |
| Yuan et al. | Establishment of three cell lines from Chinese giant salamander and their sensitivities to the wild-type and recombinant ranavirus | |
| RU2495120C1 (ru) | Постоянная линия клеток omg из гонад радужной форели (oncorhynchus mykiss) | |
| CN105535958B (zh) | 一种鸡新城疫病毒、传染性支气管炎、禽腺病毒三联灭活疫苗 | |
| CN109207422B (zh) | 一种欧洲鳗鲡肾脏细胞系ek及其应用 | |
| CN103977400B (zh) | 一种用细胞系生产鸡马立克氏病活疫苗的方法 | |
| RU2353650C1 (ru) | Линия клеток ico яичников неполовозрелого карпа (cyprinus carpio) для вирусологических исследований | |
| RU2348689C1 (ru) | Постоянная линия клеток sso-2 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri | |
| Wang et al. | Establishment, characterization and virus susceptibility of a kidney-derived cell line from southern flounder, Paralichthys lethostigma Jordan & Gilbert. | |
| Huang et al. | Establishment and characterization of a novel kidney-cell line from orange-spotted grouper, Epinephelus coioides, and its susceptibility to grouper iridovirus | |
| Warren et al. | General characteristics and viral susceptibility of bovine embryonic tissue cultures | |
| CN103571794B (zh) | 一种抑制PUMA功能改善iPS细胞建立功效的方法 | |
| US3616203A (en) | Virus culture and method | |
| US20150376569A1 (en) | Production of avian embryo cells | |
| CN102174577A (zh) | 一种利用慢病毒载体生产转基因水牛的方法 | |
| RU2488632C1 (ru) | ПОСТОЯННАЯ ЛИНИЯ КЛЕТОК ИЗ ПЛАВНИКОВ СИБИРСКОГО ОСЕТРА (Acipenser baeri), ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ РЫБ | |
| RU2506310C1 (ru) | ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ПОРОСЕНКА Sus scrofa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |