RU2440328C2 - Ненасыщенные жирные гидроксикислоты и их применение в дерматокосметологии - Google Patents
Ненасыщенные жирные гидроксикислоты и их применение в дерматокосметологии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2440328C2 RU2440328C2 RU2008118066/04A RU2008118066A RU2440328C2 RU 2440328 C2 RU2440328 C2 RU 2440328C2 RU 2008118066/04 A RU2008118066/04 A RU 2008118066/04A RU 2008118066 A RU2008118066 A RU 2008118066A RU 2440328 C2 RU2440328 C2 RU 2440328C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- unsaturated fatty
- acid
- hydroxy
- general formula
- skin
- Prior art date
Links
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000002225 anti-radical effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 230000001139 anti-pruritic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- ZVRQKBZSJNBTCW-UHFFFAOYSA-N 15-hydroxypentadec-2-enoic acid Chemical compound OCCCCCCCCCCCCC=CC(O)=O ZVRQKBZSJNBTCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- YSNNTXAJZMWJCI-UHFFFAOYSA-N 16-hydroxyhexadec-2-enoic acid Chemical compound OCCCCCCCCCCCCCC=CC(O)=O YSNNTXAJZMWJCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 claims description 8
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 5
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 claims description 5
- KUPHXIFBKAORGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-iodo-4-methylbenzoic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(O)=O)C(N)=C1I KUPHXIFBKAORGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QHBZHVUGQROELI-UHFFFAOYSA-N Royal Jelly acid Natural products OCCCCCCCC=CC(O)=O QHBZHVUGQROELI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007803 itching Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003908 antipruritic agent Substances 0.000 abstract 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 36
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 34
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 23
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 23
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 19
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 17
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 16
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 16
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 14
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 13
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 13
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 12
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 12
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 11
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 11
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010070503 PAR-2 Receptor Proteins 0.000 description 9
- 102000032628 PAR-2 Receptor Human genes 0.000 description 9
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 9
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 102100022594 ATP-binding cassette sub-family G member 1 Human genes 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 7
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 7
- 108010090314 Member 1 Subfamily G ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 7
- WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N 0.000 description 7
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 6
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 6
- 102400000740 Melanocyte-stimulating hormone alpha Human genes 0.000 description 6
- 101710200814 Melanotropin alpha Proteins 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 6
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 6
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 5
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- -1 hydroxy ester Chemical class 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 5-(methylamino)-2-[[(2S,3R,5R,6S,8R,9R)-3,5,9-trimethyl-2-[(2S)-1-oxo-1-(1H-pyrrol-2-yl)propan-2-yl]-1,7-dioxaspiro[5.5]undecan-8-yl]methyl]-1,3-benzoxazole-4-carboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H](C)[C@H]1O[C@@]2([C@@H](C[C@H]1C)C)O[C@@H]([C@@H](CC2)C)CC=1OC2=CC=C(C(=C2N=1)C(O)=O)NC)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-CYEMHPAKSA-N 0.000 description 4
- FKUPPRZPSYCDRS-UHFFFAOYSA-N Cyclopentadecanolide Chemical compound O=C1CCCCCCCCCCCCCCO1 FKUPPRZPSYCDRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000685660 Homo sapiens Long-chain fatty acid transport protein 4 Proteins 0.000 description 4
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- GEHJBWKLJVFKPS-UHFFFAOYSA-N bromochloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Br GEHJBWKLJVFKPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N calcium ionophore A23187 Natural products N=1C2=C(C(O)=O)C(NC)=CC=C2OC=1CC(C(CC1)C)OC1(C(CC1C)C)OC1C(C)C(=O)C1=CC=CN1 HIYAVKIYRIFSCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 4
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 210000000736 corneocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- DQGSJTVMODPFBK-UHFFFAOYSA-N oxacyclotridecan-2-one Chemical compound O=C1CCCCCCCCCCCO1 DQGSJTVMODPFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 3
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N Dopaquinone Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006546 Horner-Wadsworth-Emmons reaction Methods 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 3
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 3
- AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N L-dopaquinone Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 102100023113 Long-chain fatty acid transport protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 3
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 3
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 3
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- LULAYUGMBFYYEX-UHFFFAOYSA-N metachloroperbenzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 LULAYUGMBFYYEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- BMQUDVTZLXHBSK-UHFFFAOYSA-N 2-fluoro-14-hydroxytetradec-2-enoic acid Chemical compound OCCCCCCCCCCCC=C(F)C(O)=O BMQUDVTZLXHBSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJOVPOOQCSZXMI-UHFFFAOYSA-N 2-fluoro-17-hydroxyheptadec-2-enoic acid Chemical compound C(CCCCCCCO)CCCCCCC=C(C(=O)O)F IJOVPOOQCSZXMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- 101000685655 Homo sapiens Long-chain fatty acid transport protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102100023111 Long-chain fatty acid transport protein 1 Human genes 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100030944 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Human genes 0.000 description 2
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 2
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)aluminum Chemical compound CC(C)C[Al]CC(C)C SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003710 calcium ionophore Substances 0.000 description 2
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- SXOZDDAFVJANJP-UHFFFAOYSA-N cyclodecanone Chemical compound O=C1CCCCCCCCC1 SXOZDDAFVJANJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAUZLFKYYIVGPM-UHFFFAOYSA-N cyclononanone Chemical compound O=C1CCCCCCCC1 BAUZLFKYYIVGPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N cyclopentanone Chemical compound O=C1CCCC1 BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N ethyl 12-[[2-[(2r,3r)-3-[2-[(12-ethoxy-12-oxododecyl)-methylamino]-2-oxoethoxy]butan-2-yl]oxyacetyl]-methylamino]dodecanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCCCCCCCCCN(C)C(=O)CO[C@H](C)[C@@H](C)OCC(=O)N(C)CCCCCCCCCCCC(=O)OCC CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- 102000007236 involucrin Human genes 0.000 description 2
- 108010033564 involucrin Proteins 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- SSGWVMDWLAJFRW-UHFFFAOYSA-N oxacyclotridecan-2-ol Chemical compound OC1CCCCCCCCCCCO1 SSGWVMDWLAJFRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 2
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 2
- 108010058734 transglutaminase 1 Proteins 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 2
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MVOSYKNQRRHGKX-UHFFFAOYSA-N 11-Undecanolactone Chemical compound O=C1CCCCCCCCCCO1 MVOSYKNQRRHGKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNGCDJRRTGXLJA-UHFFFAOYSA-N 2-fluoro-10-hydroxydec-2-enoic acid Chemical class OCCCCCCCC=C(F)C(O)=O HNGCDJRRTGXLJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028281 ABC-type oligopeptide transporter ABCB9 Human genes 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 1
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 1
- 102100028162 ATP-binding cassette sub-family C member 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100028163 ATP-binding cassette sub-family C member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100024643 ATP-binding cassette sub-family D member 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 1
- 208000032484 Accidental exposure to product Diseases 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023109 Bile acyl-CoA synthetase Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100311260 Caenorhabditis elegans sti-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- OUVXYXNWSVIOSJ-UHFFFAOYSA-N Fluo-4 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(F)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OUVXYXNWSVIOSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101000724357 Homo sapiens ABC-type oligopeptide transporter ABCB9 Proteins 0.000 description 1
- 101000986633 Homo sapiens ATP-binding cassette sub-family C member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000986629 Homo sapiens ATP-binding cassette sub-family C member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000685668 Homo sapiens Bile acyl-CoA synthetase Proteins 0.000 description 1
- 101000969812 Homo sapiens Multidrug resistance-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000603877 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 1 group I member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000662049 Homo sapiens Polyubiquitin-C Proteins 0.000 description 1
- 101001098560 Homo sapiens Proteinase-activated receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000685653 Homo sapiens Solute carrier family 27 member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000713170 Homo sapiens Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 1 Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102100027612 Kallikrein-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100023970 Keratin, type I cytoskeletal 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100022905 Keratin, type II cytoskeletal 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010070514 Keratin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065038 Keratin-10 Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001751 Melanocyte-stimulating hormone alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 108010049137 Member 1 Subfamily D ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102100021339 Multidrug resistance-associated protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100037935 Polyubiquitin-C Human genes 0.000 description 1
- 102100027467 Pro-opiomelanocortin Human genes 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 102100037132 Proteinase-activated receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000912235 Rebecca salina Acyl-lipid (7-3)-desaturase Proteins 0.000 description 1
- 101000877236 Siganus canaliculatus Acyl-CoA Delta-4 desaturase Proteins 0.000 description 1
- 206010050637 Skin tightness Diseases 0.000 description 1
- 102100023047 Solute carrier family 27 member 3 Human genes 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 101710131583 Trypsin-10 Proteins 0.000 description 1
- 101710152431 Trypsin-like protease Proteins 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 231100000818 accidental exposure Toxicity 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000037365 barrier function of the epidermis Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001889 chemoattractive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- IIRFCWANHMSDCG-UHFFFAOYSA-N cyclooctanone Chemical compound O=C1CCCCCCC1 IIRFCWANHMSDCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005016 dendritic process Effects 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035614 depigmentation Effects 0.000 description 1
- 239000007854 depigmenting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- XSDVOEIEBUGRQX-RBUKOAKNSA-N dihydroceramide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC=O XSDVOEIEBUGRQX-RBUKOAKNSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000487 effect on differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 201000011486 lichen planus Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 150000002690 malonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001802 melanotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- MEVFDLFNGRSBCV-UHFFFAOYSA-N methyl 2-diethoxyphosphoryl-2-fluoroacetate Chemical compound CCOP(=O)(OCC)C(F)C(=O)OC MEVFDLFNGRSBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 101150087532 mitF gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N n-decene Natural products CCCCCCCCC=C AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007383 nerve stimulation Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000001053 orange pigment Substances 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- ZYDGQQTXLBNSGJ-UHFFFAOYSA-N oxonan-2-one Chemical compound O=C1CCCCCCCO1 ZYDGQQTXLBNSGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002926 oxygen Chemical class 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000589 photocarcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003711 photoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229930000756 phytoceramide Natural products 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000012121 regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- WXBXVVIUZANZAU-CMDGGOBGSA-N trans-2-decenoic acid Chemical compound CCCCCCC\C=C\C(O)=O WXBXVVIUZANZAU-CMDGGOBGSA-N 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- GGUBFICZYGKNTD-UHFFFAOYSA-N triethyl phosphonoacetate Chemical compound CCOC(=O)CP(=O)(OCC)OCC GGUBFICZYGKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 108010047481 uterine luminal fluid proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C59/40—Unsaturated compounds
- C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
- C07C59/56—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing halogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C59/40—Unsaturated compounds
- C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым соединениям - ненасыщенной жирной гидроксикислоте общей формулы (I), где Rn=R1=R=H и 10≤n≤14, за исключением 16-гидрокси-2-гексадеценовой кислоты и 15-гидрокси-2-пентадеценовой кислоты; или где Rn=R=H, R1=F, Cl или Br и 5≤n≤14. Эти ненасыщенные жирные гидроксикислоты пригодны для получения антирадикальной, противовоспалительной, противозудной дерматокосметологической композиции, и/или для лечения расстройств, связанных с кератинизацией и пигментацией, и/или для ускорения заживления ран. Ненасыщенные жирные гидроксикислоты общей формулы (I) также применяются для изготовления дерматокосметологической композиции, для лечения псориаза, зуда и/или атопического дерматита. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 табл.
Description
Предметом настоящего изобретения являются новые ненасыщенные жирные гидроксикислоты и их применение в дерматокосметологии.
Многочисленные ненасыщенные жирные гидроксикислоты хорошо известны и описаны в литературе благодаря их биологическим свойствам и, в частности, благодаря их косметическим и фармакологическим свойствам. Например, основным липидным компонентом маточного молочка пчел является ненасыщенная жирная гидроксикислота, а именно гидрокси-10-2(транс)деценовая кислота (Edward E. Smissman et al., 1964. JOU. 29 3517-3520).
В различных документах современного уровня техники описаны способы получения ненасыщенных жирных гидроксикислот и их сложных эфиров (Lee et al., 1993, J. Org. Chem., vol.58, pages 2918-2919; Hurd et Saunders, 1952, J. Am. Chem. Soc., vol.74, pages 5324-5328; Krishnamurthy et al., 1989, Indian J. Chem. Sect. A, vol.28, pages 288-291; Plettener et al., 1995, J. Chem. Ecol., vol.21, pages 1017-1030).
Более конкретно, настоящее изобретение относится к ненасыщенным жирным гидроксикислотам, соответствующим общей формуле (I):
где Rn=R1=R=Н и 10≤n≤14,
за исключением 16-гидрокси-2-гексадеценовой кислоты и 15-гидрокси-2-пентадеценовой кислоты.
В частных случаях осуществления изобретения предложены ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I), где Rn=R1=R=H и n=10.
Согласно другому аспекту изобретения предложены ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I)
где Rn=R=Н, R1=F, Cl или Br и 5≤n≤14.
В частных случаях осуществления изобретения предложены ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I), где R1=F и n=10 и R1=F и n=8.
Согласно настоящему изобретению производные ненасыщенных жирных гидроксикислот с общей формулой (I), определенной выше, могут быть использованы в качестве активных ингредиентов в сочетании с подходящим наполнителем для получения дерматокосметологических композиций с антирадикальной, противовоспалительной, противозудной активностью, и/или для использования в лечении расстройств, связанных с кератинизацией и пигментацией, и/или для ускорения заживления.
В соответствии с изобретением предложена дерматокосметологическая композиция, имеющая антирадикальную, противовоспалительную, противозудную активность, содержащая ненасыщенную жирную гидроксикислоту общей формулы (I)
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=H и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, в качестве активного ингредиента и дерматологически приемлемый наполнитель.
В одном из вариантов осуществления изобретения предложена дерматокосметологическая композиция, содержащая ненасыщенную жирную гидроксикислоту общей формулы (I), где Rn=R1=R=H и n=10.
Кроме того, предложено применение ненасыщенной жирной гидроксикислоты общей формулы (I)
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Вr, R=H и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, для изготовления дерматокосметологической композиции, обладающей модулирующей активностью на меланогенез, и/или на пигментацию кожи, и/или на кератинизацию кожи, и/или на заживление.
В одном из вариантов осуществления изобретения предложено применение ненасыщенной жирной гидроксикислоты общей формулы (I), определенной выше, для лечения старения кожи и белых или коричневых возрастных пятен.
В другом из вариантов осуществления изобретения предложено применение ненасыщенной жирной гидроксикислоты общей формулы (I), определенной выше, для отбеливания кожи.
Ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I) особенно хорошо подходят для использования в композициях, предназначенных для лечения псориаза, зуда и/или атопического дерматита. Поэтому в одном из вариантов осуществления изобретения предложено применение ненасыщенной жирной гидроксикислоты
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=Н и 5≤n≤14, для изготовления дерматокосметологической композиции для лечения псориаза, зуда и/или атопического дерматита.
Благодаря их антирадикальной активности ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I) также пригодны для предотвращения или ограничения ранних стадий фотоканцерогенеза кожи, и поэтому их можно использовать для профилактики и лечения различных опухолевых заболеваний кожи.
Ненасыщенные жирные гидроксикислоты с общей формулой (I) можно получить:
- посредством проведения реакции Виттига-Хорнера, а именно реакции фосфоната формулы (III):
в которой:
- R1 является таким, как определено выше в формуле (I);
- R2 представляет собой алкильную группу, линейную или разветвленную, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, которая предпочтительно является этильной или метильной группой, причем группы R2 могут образовывать цикл с атомами кислорода групп OR2 и с соседним атомом фосфора; и
- R4 представляет собой алкильную группу, линейную или разветвленную, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и предпочтительно является этильной группой;
- или, если R1=Н, посредством реакции Дебнера-Кневенагеля, а именно реакции производного малоновой кислоты формулы R4OOC-CH2COOR, где R является таким, как определено выше в формуле (I), с лактолом формулы (II):
где Rn и n являются такими же, как определено выше,
с получением сложного гидроксиэфира формулы (IV):
в которой n, R и R1 являются такими же, как определено выше,
и, возможно, если R представляет собой группу R4, определенную выше, реакции сапонификации сложного гидроксиэфира формулы (IV), с получением соответствующего производного гидроксикислоты формулы (I).
Настоящее изобретение будет проиллюстрировано примерами синтеза, приведенными ниже.
Пример 1
Процедура синтеза DHА (деценовой гидроксикислоты)
1. Стадия 1: Получение оксонан-2-она
43,5 г (345 ммоль) циклооктанона растворяют в 430 мл дихлорэтана. Затем к раствору добавляют 170 г (985 ммоль) мета-хлорпербензойной кислоты. Эту среду нагревают до 80°С в течение 48 часов. При комнатной температуре добавляют 400 мл насыщенного раствора Na2S2O5 и NaHCO3 (1/1; объем/объем). Среду энергично перемешивают в течение 18 часов. Органическую фазу отделяют и обрабатывают Kl и Н2O в течение 6 часов. Органическую фазу отделяют и промывают насыщенным раствором Na2S2O3, насыщенным раствором NaCl, затем сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют под вакуумом с получением 36 г неочищенного продукта.
Лактон очищают посредством концентрирования в пентане (60 мл), затем посредством фильтрации осадка мета-хлорбензойной кислоты, выход - 26,6 г (54%).
Полученный лактон представляет собой соединение формулы:
Определение характеристик:
ТСХ (тонкослойная хроматография): Rf=0,3 (гептан/этилацетат 7/3)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,42-1,49 (m, 4Н), 1,65-1,75 (m, 6Н), 2,30 (t, J=5,4 Гц, 2Н), 4,30 (t, J=5,7 Гц, 2Н).
2. Стадия частичного восстановления до лактола
26,6 г (187,2 ммоль) лактона разводят в 210 мл толуола в атмосфере азота. Среду охлаждают до -78°С и добавляют по каплям 156,4 мл (189,1 ммоль) диизобутилалюминия гидрида (Dibal-H) в виде раствора в толуоле с концентрацией 20%, поддерживая температуру, равную -78°С. Смесь перемешивают в течение 2 часов при -78°С. При -78°С добавляют 200 мл насыщенного раствора соли Розена. После 18 часов энергичного перемешивания при комнатной температуре двухфазную смесь фильтруют через целит, затем экстрагируют этилацетатом. Органические фазы промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют под вакуумом с получением 26 г неочищенного продукта (25% которого составляет диольное производное, то есть выход составляет примерно 72%). Поэтому лактол, в котором уравновешены открытая и циклическая формы, используется без дополнительной очистки.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,4 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,34-1,68 (m, 10Н), 2,45 (t, J=5,4 Гц, 2Н), 3,66 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 9,78 (t, J=1,8 Гц, 1Н).
3. Стадия 3: Реакция Виттига-Хорнера
19 г (131,8 ммоль) лактола растворяют в 250 мл этанола. К среде добавляют 31,4 мл (158,1 ммоль) триэтилфосфонацетата в присутствии 27,3 г (197,5 ммоль) карбоната калия. Реакционную среду нагревают до 40°С в течение 18 часов. При комнатной температуре реакционную среду гидролизуют 200 мл дистиллированной воды и экстрагируют этилацетатом. Органические фазы промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют под вакуумом с получением 20 г неочищенного продукта.
Полученный сложный эфир очищают посредством хроматографии с элюированием смесью гептана/этилацетата в соотношении 7/3; получают 15 г продукта (выход 53%).
Полученный сложный эфир является соединением формулы:
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,4 (гептан/этилацетат 7/3)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,24-1,38 (m, 9Н), 1,43-1,50 (m, 2Н), 1,51-1,57 (m, 2Н), 2,15-2,21 (q, 2Н), 3,60-3,64 (t, 2Н), 4,14-4,20 (t, 2Н), 5,77-5,82 (d, J=15,6 Гц, 1Н), 6,91-6,98 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
4. Стадия 4: Реакция сапонификации
0,60 г (2,81 ммоль) сложного гидроксиэфира растворяют в 10 объемах тетрагидрофурана. Медленно добавляют 3,4 мл (6,75 ммоль) 2М раствора гидроксида натрия. Среду нагревают до 65°С в течение 3 часов. По окончании реакции среду гидролизуют посредством добавления 3М раствора хлористоводородной кислоты до получения рН 2. Смесь концентрируют досуха и затем экстрагируют водную фазу этилацетатом. Органические фазы промывают насыщенным раствором NaCl, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют под вакуумом с получением 0,6 г неочищенного продукта.
Ожидаемое производное ненасыщенной гидроксикислоты получают в форме белого твердого вещества посредством перекристаллизации из ацетонитрила на холоде, выход - 0,37 г (71%).
Полученное производное гидроксикислоты является соединением формулы:
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,33-1,37 (m, 6Н), 1,45-1,49 (m, 2Н), 1,55-1,58 (m, 2Н), 2,20-2,25 (q, 2Н), 3,62-3,66 (t, 2Н), 5,79-5,84 (d, J=15,6 Гц, 1Н), 7,03-7,10 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 209 (расчетное значение 186).
Температура плавления: 62,5°С±1°С.
Пример 2
Процедура синтеза α-фторированного производного 10-гидрокси-2-фтордеценовой кислоты: (R1=F, n=6)
Модифицирована только стадия 3: начиная с лактола (0,89 г, 7,7 ммоль), проводят реакцию Виттига-Хорнера в присутствии метилдиэтилфосфонфторацетата (2,1 г, 9,2 ммоль) и карбоната калия (1,6 г, 11,5 ммоль) в этаноле (9 мл) при 40°С. Стадию 4 проводят согласно ранее описанному протоколу. Продукт, полученный после перекристаллизации, имеет форму цис/транс-смеси.
Полученное производное гидроксикислоты является соединением формулы:
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,36-1,62 (m, 20Н), 2,27-2,30 (m, 2Н, цис-форма), 2,50-2,58 (m, 2Н, транс-форма), 3,69 (m, 4Н), 6,05 (dt, J=21,6 Гц, 1 Н, транс-форма) и 6,25 (dt, J=40,8 Гц, 1Н, цис-форма).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 227 (расчетное значение 204).
Пример 3
Процедура синтеза 9-гидрокси-2t-ноненовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к циклопентанону для получения 9-гидрокси-2t-ноненовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,36-1,61 (m, 8Н), 2,22-2,27 (m, 2Н), 3,67 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 5,84 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 195 (расчетное значение 172).
Пример 4
Процедура синтеза 11-гидрокси-2t-ундеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к циклононанону для получения 11-гидрокси-2t-ундеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,33-1,61 (m, 12Н), 2,20-2,28 (m, 2Н), 3,66 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 5,84 (dt, J=15,9 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,9 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 223 (расчетное значение 200).
Пример 5
Процедура синтеза 12-гидрокси-2t-додеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к циклодеканону для получения 12-гидрокси-2t-додеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,35-1,56 (m, 14Н), 2,20-2,27 (m, 2Н), 3,55 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,80 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 6,96 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 237 (расчетное значение 214).
Пример 6
Процедура синтеза 12-гидрокси-2-фтор-2t-додеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA, фторированного в положении 2 (Пример 2), применяется к циклодеканону для получения 12-гидрокси-2-фтор-2-додеценовой кислоты в форме цис/транс-смеси.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,34-1,56 (m, 14Н), 2,24-2,27 (m, 2Н цис-форма) или 2,49-2,54 (m, 2Н транс-структура), 3,55 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,97 (dt, J=21,9 Гц, 1Н транс-структура) или 6,10 (dt, J=55,2 Гц, 1Н, цис-форма).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 255 (расчетное значение 232).
Пример 7
Процедура синтеза 13-гидрокси-2t-тридеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к оксациклододекан-2-ону для получения 13-гидрокси-2t-тридеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,27-1,63 (m, 16Н), 2,21-2,28 (m, 2Н), 3,64 (t, J=3,6 Гц, 2Н), 5,84 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 251 (расчетное значение 228).
Пример 8
Процедура синтеза 14-гидрокси-2t-тетрадеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к оксациклотридекан-2-ону для получения 14-гидрокси-2t-тетрадеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4)
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,29-1,35 (m, 14Н), 1,46-1,61 (m, 4Н), 2,21-2,29 (m, 2Н), 3,66 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,84 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 265 (расчетное значение 242).
Пример 9
Процедура синтеза 14-гидрокси-2-фтор-тетрадеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA, фторированного в положении 2 (Пример 2), применяется к оксациклотридекан-2-ону для получения 14-гидрокси-2-фтор-тетрадеценовой кислоты в форме цис/транс-смеси.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4).
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,29 (m, 28Н), 1,42-1,62 (m, 8Н), 2,27-2,31 (m, 2Н, цис-форма), 2,51-2,56 (m, 2Н, транс-форма), 3,68 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 3,70 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 6,04 (dt, J=21,3 Гц, 1Н, транс-форма), 6,27 (dt, J=33,0 Гц, 1Н, цис-форма).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 283 (расчетное значение 260).
Пример 10
Процедура синтеза 17-гидрокси-2t-гептадеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA применяется к циклопентадеканолиду для получения 17-гидрокси-2t-гептадеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4).
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,27-1,32 (m, 20Н), 1,46-1,61 (m, 4Н), 2,20-2,29 (m, 2Н), 3,67 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,84 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,08 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+307 (расчетное значение 284).
Пример 11
Процедура синтеза 17-гидрокси-2-фтор-гептадеценовой кислоты
Протокол синтеза DHA, фторированного в положении 2 (Пример 2), применяется к циклопентадеканолиду для получения 17-гидрокси-2-фтор-гептадеценовой кислоты в форме цис/транс-смеси.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4).
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,27 (m, 40Н), 1,45-1,62 (m, 8Н), 2,24-2,32 (m, 2Н, цис-форма), 2,50-2,58 (m, 2Н, транс-форма), 3,69 (t, J=6,6 Гц, 4Н), 6,05 (dt, J=21,6 Гц, 1Н, трансформа) и 6,26 (dt, J=40,8 Гц, 1Н, цис-форма).
Масс-спектроскопия: [М-Н]- 301 (расчетное значение 302).
Температура плавления: 77°С±1°С.
Пример 12
Процедура синтеза 18-гидрокси-2t-октадеценовой кислоты: (R1=Н, n=14)
Протокол синтеза DHA применяется к гексациклодеканолиду для получения 18-гидрокси-2t-октадеценовой кислоты.
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4).
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,27-1,65 (m, 26Н), 2,19-2,39 (m, 2Н), 3,67 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,83 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 321 (расчетное значение 298).
Пример 13
Определение характеристик 16-гидрокси-2t-гексадеценовой кислоты
Определение характеристик:
ТСХ: Rf=0,1 (гептан/этилацетат 6/4).
1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): δ 1,27-1,32 (m, 18Н), 1,46-1,61 (m, 4Н), 2,21-2,28 (m, 2Н), 3,66 (t, J=6,6 Гц, 2Н), 5,85 (dt, J=15,6 Гц, 1Н), 7,09 (dt, J=15,6 Гц, 1Н).
Масс-спектроскопия: [M-Na]+ 293 (расчетное значение 270).
Пример реакции Дебнера-Кневенагеля с использованием оксациклотридеканола
1,4 г (7,0 ммоль) оксациклотридеканола (полученного согласно протоколу частичного восстановления лактола) растворяют под потоком азота в 4 объемах пиридина в присутствии 1,09 г (10% моль) малоновой кислоты и 0,11 мл пиперидина. Реакционную смесь нагревают до 80°С в течение 1 часа 30 минут, затем нагревают с дефлегматором в течение 2 часов. При комнатной температуре раствор выливают на 3М раствор HCl (50 мл). Отфильтрованное твердое вещество промывают водой, затем перекристаллизовывают в ацетонитриле (с получением 1,2 г, что соответствует выходу, равному 70%).
Производные ненасыщенных жирных гидроксикислот согласно настоящему изобретению стали объектом многочисленных экспериментов, которые продемонстрировали их достоинства как активных ингредиентов дерматологических и/или косметических композиций.
Исследование антирадикального эффекта на активированных формах кислорода (АФK)
В ходе нормального метаболизма клеток во время эпизодического воздействия на кожу стрессовых агентов или во время патологических изменений кожи образуются химически активные формы кислорода, которые также называют Активированными Формами Кислорода (АФК) (Y.M.W. Janssen et al., 1993). Эти АФК, описанные как очень химически активные метаболиты, играют важную роль во многих процессах, таких как воспаление, старение и опухолевый рост.
АФК считаются «вторичными мессенджерами» во внутриклеточных сигнальных процессах, относящихся к окислительному стрессу, и, следовательно, ранними медиаторами воспаления (A.Van Der Vliet and A.Bast, 1992).
Их избыточная продукция приводит к существенным нарушениям в клетке. Поэтому некоторые клеточные компоненты являются основными мишенями окислительного стресса: могут повреждаться липидные компоненты плазматической мембраны (перекисное окисление липидов), белки (денатурация и деградация) и генетический материал или ДНК (мутации). Клетки способны ограничивать эти окислительные повреждения за счет различных систем антирадикальной защиты (ферментных и неферментных антиоксидантов) (B.P.Yu, 1994; Н.Stelling et al., 1999).
Тем не менее, в определенных условиях АФК образуются в таких количествах, что внутриклеточной антиоксидантной активности недостаточно; поэтому такие АФК становятся факторами, индуцирующими воспалительные нарушения и старение тканей (Y.Miyachi et al., 1986; М.Kress et al., 1995).
Существуют различные химические вещества (например, Н2O2) или физические факторы (например, УФ-А), способные создавать окислительный стресс in vitro. Продуцируемые АФК повреждают различные клеточные мишени (мембраны, ДНК или белки), и это повреждение можно анализировать с использованием широко используемых биохимических методик, таких как анализ субстратов тиобарбитуровой кислоты (TBARS) в случае перекисного окисления липидов или анализ in vitro внутриклеточных АФК с помощью зонда H2DCF-DA.
Мы разработали модель для исследования in vitro окислительного стресса, вызываемого системой Н2O2/железо, поскольку Н2O2 генерирует большое количество внутриклеточных АФК в результате цепной реакции, запускаемой окислением мембранных липидов.
Этот способ основан на использовании флуоресцентного зонда - 6-карбокси-2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина диацетата диацетоксиметилового эфира (H2DCF-DA), который после проникновения в клетку дезацетилируется внутриклеточными эстеразами и образует H2DCF. Этот продукт окисляется внутриклеточными АФК до ярко флуоресцирующего соединения - 2',7'-дихлорфлуоресцеина (DCF) (Suematsu М. Et al., 1996, Free Radicals Practical Approach, Punchard ed., p.83-99).
Материалы и методы, использованные для анализа in vitro внутриклеточных АФК, указаны ниже.
а) Клеточный материал
Фибробластные клетки кожи мыши линии L929.
б) Материал:
- Микропланшет с 96 лунками с плоским основанием.
- Цитофлуориметр Cytofluor II: см. PERCEPTIVE BIOSYSTEMS.
в) Реагенты
Реагенты для культивирования клеток:
- Культуральная среда Игла в модификации Дульбекко (DMEM)
- Фетальная сыворотка телят (ФСТ)
- Фосфатный буфер (PBS) с рН 7
- Трипсин-ЭДТА(1Х)
Флуоресцентный зонд:
- 6-карбокси-2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина диацетата диацетоксиметиловый эфир (РМ. 675,43)
Продукты для стимуляции клеток:
- Перекись водорода (Н2O2) 3%: см. GIFRER (Gifrer Barbezat Laboratory)
- Двойной сульфат аммония и двухвалентного железа (Fe2+)
- Двойной сульфат аммония и трехвалентного железа (Fe3+)
г) Исследованные продукты:
Исследованные концентрации не являются цитотоксичными концентрациями. Цитотоксичность определяли с использованием способа с нейтральным красным после инкубации продукта в течение 3 часов.
Антирадикальным продуктом сравнения является витамин Е или α-токоферол (РМ: 430.7) (SIGMA, см.: Т-1539).
Маточный раствор готовят в концентрации 400 мг/мл в ДМСО и хранят при -20°С. Раствор для предварительной обработки готовят непосредственно перед опытом в концентрации 400 мкг/мл в культуральной среде без фетальной сыворотки телят.
Для оценки производных ненасыщенных жирных гидроксикислот раствор готовят на свежеприготовленной культуральной среде с концентрациями в диапазоне 0,02, 0,2, 2 и 20 нг/мл.
е) Протокол:
Посев клеток:
Клетки-фибробласты линии L929 засевали на микропланшеты с 96 лунками и плоским основанием в 100 мкл DMEM с добавлением 10% фетальной сыворотки телят, затем их инкубировали в течение ночи при 37°С во влажной атмосфере с 5%-ным содержанием СO2.
Контрольный планшет без клеток оценивали по 6 лункам.
Предварительная обработка клеток:
Разведения продуктов, подлежащих испытанию, и молекул сравнения производили с использованием культуральной среды без ФСТ, затем наносили их 7 лунок в количестве 100 мкл на лунку.
Затем клетки инкубировали в течение 3 часов при 37°С во влажной атмосфере, содержавшей 5% СO2.
«Холостые» (естественная флуоресценция клеток), «контрольные» (базальная продукция АФК) и «стимулированные» (продукция АФК после окислительной обработки) покрывали 100 мкл DMEM.
«Контрольные» клетки инкубировали с зондом, но не производили ни предварительной обработки, ни обработки.
«Стимулированные» клетки инкубировали с зондом и производили обработку, но не предварительную обработку.
«Холостые» клетки не подвергали предварительной обработке, не инкубировали с зондом и не обрабатывали.
Инкубация клеток с зондом и окислительным стрессом:
Клетки промывали PBS 1Х в количестве 100 мкл на ячейку. Затем их инкубировали в течение 30 минут при 37°С во влажной атмосфере, содержавшей 5% СO2, с 50 мкл зонда H2DCF-DA в концентрации 5 мкМ.
После 30 минут контакта с зондом клетки инкубировали в течение 30 минут при 37°С во влажной атмосфере, содержавшей 5% СO2, с добавлением 25 мкл Н2O2 в концентрации 800 мкМ и 25 мкл раствора трехвалентного железа и двухвалентного железа в концентрации 8 мМ с получением конечной концентрации Н2O2, равной 200 мкМ, и концентрации трехвалентного и двухвалентного железа, равной 2 мМ.
Затем клетки промывали PBS 1Х в количестве 100 мкл на ячейку, после чего инкубировали их в течение 30 минут при 37°С во влажной атмосфере, содержавшей 5% СO2, со 100 мкл PBS 1Х.
Эта инкубация в течение 1 часа 30 минут при 37°С дает возможность внутриклеточным эстеразам дезацетилировать зонд до H2DCF, который может быть окислен АФК до DCF - флуоресцирующего соединения, образование которого пропорционально содержанию внутриклеточных АФК.
Интенсивность флуоресценции определяют с помощью цитофлуориметра при λвозбуждения=485 нм и λиспускания=530 нм. Она отражает количество образовавшихся внутриклеточных АФК.
Схема протокола опыта:
Расчет % защиты против продукции внутриклеточных АФК.
Приведенное ниже отношение позволяет рассчитать для каждой исследованной концентрации продукта % защиты против продукции внутриклеточных АФК (поскольку интенсивность флуоресценции (ИФ) отражает выделение внутриклеточных АФК).
Значения, приведенные в таблице ниже, представляют собой проценты ингибирования внутриклеточной продукции АФК после экзогенного окислительного стресса по сравнению с «холостыми» клетками (100%) и «стимулированными» клетками (0%).
Средние проценты защиты для 13 молекул, исследованных в 4 концентрациях на клетках линии L929, представлены в Таблице 1 ниже.
Таблица 1 | ||
Анализ защиты против внутриклеточной продукции АФК для 13 молекул, являющихся производными ненасыщенных жирных гидроксикислот: Ингибирование внутриклеточной продукции АФК в процентах. | ||
Витамин Е 400 мкг/мл | 47% |
Соединение формулы I | Дозы | ||||||
n | R | Rn | R1 | 0,02 нг/мл | 0,2 нг/мл | 2 нг/мл | 20 нг/мл |
3 | Н | Н | F | 3 | -3 | -32 | -51 |
3 | Н | Н | H | 21 | 15 | 11 | 14 |
4 | Н | Н | F | 10 | 6 | -4 | -36 |
4 | Н | Н | Н | 17 | 9 | 9 | 0 |
5 | Н | Н | H | 56 | 47 | 46 | 36 |
6 | Н | Н | F | 15 | 4 | 5 | -9 |
6 | Н | Н | H | 33 | |||
9 | Н | Н | Н | 9 | 10 | 6 | -22 |
10 | Н | Н | F | 29 | 16 | 0 | -19 |
10 | Н | Н | H | 11 | 4 | -20 | -34 |
13 | Н | Н | F | 36 | 28 | 14 | -9 |
13 | Н | Н | Н | 3 | 13 | -1 | -10 |
14 | Н | Н | F | 6 | -17 | -26 | -42 |
Предварительная инкубация: 3 часа.
Количество испытаний = 3 для всех соединений.
Количество испытаний = 18 для витамина Е.
In vitro на клеточном уровне экзогенный стресс, вызванный H2O2/Fe2+-Fe3+, способен индуцировать продукцию внутриклеточных АФК, выявляемую с помощью флуоресцентного зонда.
В заключение следует отметить, что нефторированные производные ненасыщенных жирных гидроксикислот к короткими цепями (С9 и С10), по-видимому, особенно эффективны в отношении антирадикальной защиты клеток.
Исследование антирадикального эффекта. Анализ перекисного окисления липидов.
Кроме того, в ходе нормального метаболизма клеток во время случайного воздействия на кожу стрессовых агентов или во время патологических изменений кожи образуются химически активные формы кислорода, которые также называют Свободными Радикалами Кислорода (СРК) (Y.M.W.Janssen et al., 1993). Эти СРК, описанные как очень химически активные метаболиты, играют важную роль во многих процессах, таких как воспаление, старение и опухолевый рост.
СРК считаются «вторичными мессенджерами» во внутриклеточных сигнальных процессах, относящихся к окислительному стрессу, и, следовательно, ранними медиаторами воспаления (A.Van Der Vliet and A.Bast, 1992).
Их избыточная продукция приводит к существенным нарушениям в клетке. Поэтому некоторые клеточные компоненты являются основными мишенями окислительного стресса: могут повреждаться липидные компоненты плазматической мембраны (перекисное окисление липидов), белки (денатурация и деградация) и генетический материал или ДНК (мутации). Клетки способны ограничивать эти окислительные повреждения за счет различных систем антирадикальной защиты (ферментных и неферментных антиоксидантов) (В.Р.Yu, 1994; Н.Stelling et al., 1999).
Тем не менее, в определенных условиях СРК образуются в таких количествах, что внутриклеточной антиоксидантной активности недостаточно; поэтому такие СРК становятся факторами, индуцирующими воспалительные нарушения и старение тканей (Y.Miyachi et al., 1986; М.Kress et al., 1995).
С целью оценки антирадикальной активности различных гидроксилированных производных согласно настоящему изобретению мы проанализировали их способность обеспечивать защиту против нарушений клеточных мембран, вызванных окислительным (химическим) стрессом, по сравнению со стандартным антиоксидантом - витамином Е.
Плазматическая мембрана является основной и первичной мишенью СРК, и, поскольку в ней содержится много липидов, она является местом усиленного перекисного окисления (A.W.Girotti, 1985). Перекиси, образующиеся в ходе этого окисления липидов, также являются очень химически активными и способны разрушать белковый и генетический материал.
Для оценки повреждений мембран мы измеряли перекисное окисление липидов посредством количественного анализа in vitro комплексов, состоящих из продуктов окисления липидов и тиобарбитуровой кислоты. Такие комплексы называются TBARS (субстратами тиобарбитуровой кислоты) и дали анализу название: анализ на TBARS.
Для имитации химического окислительного стресса мы обрабатывали клетки-фибробласты линии L929 комплексом, состоявшим из перекиси водорода (Н2O2) и железа (Fe2+/Fe3+), воспроизводя таким образом реакцию Фентона, являющуюся источником СРК и, в частности, гидроксильного радикала (ОН') (D.A.Vessey et al., 1992):
Н2O2+Fe2+→ОН'+ОН-+Fe3+
Продукты оценивали на клетках-фибробластах мыши линии L929. Клетки проходили предварительную обработку различными концентрациями продуктов в течение 16 часов, а затем их стимулировали комплексом Н2O2- Fe2+/Fe3+ (200 мкМ-1 мМ) в течение 1 часа.
Маточные растворы: 100 мг/мл в этаноле при 4°С.
Конечные растворы: 0,02 нг/мл.
Перекисное окисление мембранных липидов анализировали посредством измерения TBARS (см. Протокол PLN°2 согласно Morliere et al., 1991).
Принцип анализа:
В кислой среде при 95°С образуются комплексы, называемые TBARS (реакционно-способное вещество тиобарбитуровой кислоты), между продуктами окисления липидов (малоновым диальдегидом, или МДА) и тиобарбитуровой кислотой (ТБК), которые можно анализировать по их флуоресценции, путем сравнения со стандартным диапазоном флуоресценции МДА. Результаты анализа TBARS выражают в пмоль/мкг белка. Белки и TBARS анализируют во внутриклеточной среде.
Расчет процента защиты клеточных мембран:
По результатам расчета TBARS в пмоль/мкг белка мы рассчитали эффективность защиты против окисления мембранных липидов для различных продуктов.
Было выполнено четыре независимых эксперимента. В ходе этих экспериментов были оценены различные соединения (анализ не позволял оценивать более 10 молекул одновременно). Соединения, оценивавшиеся несколько раз, были выбраны по результатам, полученным в другом анализе, в котором также измерялась антирадикальная активность (количественный анализ на активированные формы кислорода, АФК).
Использованная в данном эксперименте модель (реакция Фентона) индуцирует значительное перекисное окисление липидов в фибробластах L929. Это массивное выделение гидроксильного радикала ОН' вызывает на клеточном уровне окислительный стресс, в частности на уровне мембран. Однако в этом типе окислительной реакции продукты перекисного окисления липидов находятся в клетках, и поэтому содержание TBARS количественно определяется во внутриклеточной среде.
Витамин Е в дозе 400 мкг/мл снижает перекисное окисление липидов, вызванное комплексом Н2O2-Fe2+/Fe3+, и очень эффективно защищает клеточные мембраны.
В Таблице II представлены результаты 4 экспериментов.
Очевидно, что гидроксилированные производные обладают стабильной и воспроизводимой антиоксидантной активностью. Это относится, в частности, к производным с короткой углеродной цепью.
Таблица II | ||||||
Защита мембранных липидов различными гидроксилированными производными | ||||||
Защита мембранных липидов в % | ||||||
Исследованные молекулы | № эксперимента | Среднее значение | Стандартное отклонение | |||
Вит. Е 400 мкг/мл | 4 | 44,66 | 25,85 | |||
Соединение формулы I | ||||||
n | R | Rn | R1 | |||
6 | Н | Н | Н | 3 | 52,91 | 8,81 |
6 | Н | Н | F | 3 | 40,65 | 16,83 |
4 | Н | Н | F | 3 | 36,54 | 41,69 |
13 | Н | Н | Н | 1 | 22,10 | |
3 | Н | Н | F | 1 | 38,14 | |
13 | Н | Н | F | 3 | 7,39 | 16,23 |
10 | Н | Н | Н | 1 | 27,18 | |
4 | Н | СН3 | Н | 2 | 57,75 | 3,15 |
10 | Н | Н | F | 3 | 13,13 | 13,37 |
14 | Н | Н | F | 1 | 35,30 | |
4 | Н | Н | Н | 2 | 37,88 | 26,28 |
9 | Н | Н | Н | 3 | 8,72 | 48,78 |
3 | Н | Н | Н | 2 | 15,7 | 29,93 |
Модель in vitro, представленная в данном исследовании, отражает последствия воздействия значительного окислительного стресса на основную клеточную мишень, которой является плазматическая мембрана. Поэтому количественный анализ перекисного окисления липидов является хорошим маркером окислительного стресса и обеспечивает возможность оценки антиоксидантного действия активных ингредиентов на гидроксильные радикалы на уровне клеточной мембраны.
Витамин Е, антиоксидантная молекула, обеспечивает возможность подтверждения правильности этой модели и эффективности защиты клеточных мембран против окислительного стресса.
Дифференциация кератиноцитов
Эпидермис участвует в основной функции кожи, которой является устойчивость к влияниям окружающей среды и защита от них. Это многослойный плоский ороговевающий эпителий, который постоянно обновляется. Гомеостаз и регенерация тканей основаны на клетках-кератиноцитах, опорных клетках и растворимых факторах, которые в непосредственной близости от клеток способствуют межклеточным взаимодействиям и взаимодействиям клеток с межклеточным матриксом.
Роговой слой, последняя стадия дифференциации эпидермиса, образуется в результате трех основных процессов: образования кератиновых филаментов, «ороговения» кератиноцитов и образования межклеточного липидного цемента, организованного в виде пластинчатых структур.
Внутри эпидермиса состав и природа липидов варьируют в зависимости от стадии дифференциации, в которой находятся кератиноциты. Так, во время движения базальных слоев клеток к клеткам рогового слоя, наблюдается значительное снижение содержания фосфолипидов, которые в слоях живых клеток отвечают за целостность плазматических мембран; параллельно отмечается повышение содержания нейтральных липидов (свободных жирных кислот и триглицеридов) и стеролов (холестерина), а также очень значительное увеличение содержания сфиголипидов и, в частности, церамидов. На уровне рогового слоя обнаруживается 40-50% сфинголипидов, 20-27% холестерина и 9-26% свободных жирных кислот. Церамиды связаны ковалентными связями с остатками глутаминовой кислоты инволюкрина - предшественника роговой оболочки. Жирные кислоты благодаря своей гидрофобной природе участвуют в регуляции непроницаемости кожи, холестерин участвует в регуляции текучести мембран.
Многочисленные специфические белки рогового слоя (или stratum corneum) (слоя, придающего барьерную функцию эпидермису) образуются на уровне зернистого слоя, состоящего из последних кератиноцитов, обладающих способностью к транскрипции и трансдукции, прежде чем произойдет лизис ядра, сопровождающий ороговение.
Программа дифференциации кератиноцитов основана, главным образом, на эволюции структурных белков, которыми являются кератины и которые способствуют архитектурной целостности эпидермиса. Их экспрессия варьирует в зависимости от степени зрелости эпидермапьных клеток. В супрабазальных слоях появляются основной кератин 1 и кислый кератин 10, так называемые кератины терминальной дифференциации.
Вблизи рогового слоя кератины взаимодействуют с белками с высоким содержанием гистидина с образованием относительно гомогенной смеси, которая заполняет корнеоциты. Эти белки являются производными предшественника, профилагрина, который представляет собой большую молекулу ([MB]>450 кДа), запасы которой хранятся на уровне зернистого слоя. Это белок, N- и С-терминальные домены которого связывают кальций, а его дефосфорилирование и частичный протеолиз приводят к образованию филагрина. Филагрин катализирует образование дисульфидных мостиков между кератиновыми филаментами и способствует их объединению с образованием внутрикорнеоцитарного матрикса. С другой стороны, в результате протеолиза он является источником аминокислот и пептидных производных, которые придают роговому слою определенные влагоудерживающие свойства.
В роговом слое корнеоциты содержат, главным образом, кератиновые филаменты, погруженные в плотный матрикс, который окружен толстой и прочной белковой стенкой: роговой оболочкой. Белки-предшественники этой структуры, находящиеся на внутренней стороне плазматической мембраны, синтезируются кератиноцитами шиповидного слоя, но их сшивки - с участием ферментов трансглутаминаз - образуются в шиповидном и зернистом слоях. Многочисленные белки цитозоля, ассоциированные с мембранной фракцией кератиноцитов или хранящиеся в зернах кератогиалина, участвуют в образовании роговой оболочки. Можно, например, отметить инволюкрин (68 кДа) с высоким содержанием глутамина и лизина.
Непроницаемость рогового слоя обусловлена, главным образом, гидрофобным липидным межклеточным цементом, который связывает друг с другом корнеоциты. Содержание липидов в эпидермисе является конечным результатом липогенеза в кератиноцитах и сальных железах. В нормальном эпидермисе в глубоких слоях преобладает смесь нейтральных и полярных липидов, которая прогрессивно заменяется более неполярным содержимым, включающим церамиды. В этом липогенезе, а значит, и в синтезе церамидов, участвуют многочисленные белки. Среди них обнаружен белок DES2 (сфинголипид- С4-гидроксилаза/дельта-4-десатураза): он обладает активностью гидроксилазы дигидроцерамидов, которая участвует в синтезе фитоцерамидов, а его экспрессия индуцируется процессом дифференциации (Mizutani Y. et al., 2004). Липиды, синтезируемые кератиноцитами, движутся к поверхности кожи в пластинчатых тельцах - кератиносомах. Они секретируются в межклеточные пространства и образуют непрерывные слои, расположенные параллельно клеточным мембранам корнеоцитов. Эта реорганизация липидов, происходящая в ходе дифференциации эпидермиса, подключает некоторое число переносчиков липидов из семейства ABC-транспортеров (аденозинтрифосфат-связывающих кассетных транспортеров). Среди этих транспортеров некоторые обнаруживают экспрессию, индуцируемую в ходе дифференциации кератиноцитов (АВСВ1, АВСС1, АВСС3, АВСС4 и ABCG1), экспрессия других подавляется (АВСВ9 и ABCD1), а третьи не подвергаются никакой регуляции. Роль транспортеров, экспрессия которых индуцируется, была изучена: например, ABCG1 участвует в транслокации холестерина в кератиноциты, находящиеся в процессе дифференциации. Экспрессия некоторых членов другого семейства транспортеров - FATP (белки-транспортеры жирных кислот), таких как FATP1, FATP3, FATP4 и FATP5, индуцируется в ходе дифференциации кератиноцитов. Эти транспортеры участвуют в реорганизации пула нейтральных липидов (Kielar et al., 2003).
Нормальные кератиноциты человека (НКЧ), пролиферируют и дифференцируются in vitro, с образованием стратифицированных слоев, имитирующих базовую организацию кожи. Внеклеточные концентрации кальция, превышающие 0,1 мМ, запускают каскад геномных и негеномных явлений, которые переводят кератиноциты из фазы пролиферации в фазу дифференциации. Дифференциацию кератиноцитов можно оценить посредством анализа экспрессии нескольких маркеров, таких как кератины 1 и 10, трансглутаминаза 1, десатураза DES2, инволюцин, транспортеры FATP4 и ABCG1. Поэтому мы оценивали эффект некоторых гидроксиалкеновых карбоновых кислот в модели с культивированием клеток in vitro.
План исследования можно схематично представить следующим образом: дифференциация НКЧ in vitro и отбор проб для анализа.
Условия культивирования клеток и отбора проб
Нормальные кератиноциты человека (НКЧ) выделяли из эксплантатов кожи. Их культивировали в среде KSFM (Gibco) с низкой концентрацией кальция (0,1 мМ), содержащей 25 мкг/мл ВРЕ (гипофизарного экстракта коров) и 1,5 нг/мл EGF (эпителиального фактора роста). Через двадцать четыре часа после посева индуцировали дифференциацию посредством добавления кальция (конечная концентрация 1,2 мМ). Активные вещества добавляли или не добавляли одновременно с кальцием в концентрациях, равных 100 и 1 мкг/мл, чтобы определить, оказывают ли они усиливающий эффект на дифференциацию. Клетки анализировали через 48 часов после добавления кальция и продуктов.
Экстракция РНК и ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) в реальном времени
Общую РНК экстрагировали из кератиноцитов на холоде.
После обратной транскрипции мРНК в кДНК выполняли ПЦР на планшетах с 96 лунками (прибор для количественной ПЦР iCycler, производства компании BioRad). Экспрессию транскриптов трансглутаминазы, десатуразы (DES2), ABCG1 и FATP4 нормализовали относительно экспрессии стандартных генов (GAPDH, UBC, HPRT). Уровень экспрессии в пробах, обработанных кальцием и активным веществом, сравнивали с уровнем экспрессии в пробах, обработанных только кальцием.
Результаты относительно эффектов продуктов в концентрации 1 мкг/мл приведены в таблицах ниже.
Соединение формулы I | Фактор индукции против контроля (СаСl2 1,2 мМ) | TG1 | DES2 | ABCG1 | FATP4 | |||
n | R | Rn | R1 | Вит. D3 1 мкМ | 1,5 | 2,0 | 2,0 | 1,1 |
3 | Н | Н | F | 1,5 | 1,7 | 1,5 | 1,2 | |
3 | Н | Н | Н | 1,2 | 1,6 | 1,5 | 1,4 | |
4 | Н | Н | F | 1,6 | 2,2 | 2,6 | 1,3 | |
4 | Н | Н | Н | 1,2 | 1,0 | 1,2 | 1,0 | |
5 | Н | Н | Н | 1,5 | 1,8 | 2,7 | 1,0 | |
6 | Н | Н | F | 1,2 | 1,3 | 1,3 | 1,0 | |
6 | Н | Н | Н | 1,1 | 1,7 | 1,9 | 1,2 | |
9 | Н | Н | Н | 1,4 | 1,8 | 1,5 | 1,2 | |
10 | Н | Н | F | 1,4 | 1,6 | 1,4 | 1,0 | |
10 | Н | Н | Н | 1,5 | 2,0 | 1,4 | 1,2 | |
13 | Н | Н | F | 4,2 | 9,0 | 4,8 | 2,2 | |
13 | Н | Н | Н | 1,4 | 3,0 | 3,0 | 1,4 | |
14 | Н | Н | F | 1,7 | 2,8 | 4,0 | 1,0 |
В дозе 1 мкг/мл все продукты оказывали умеренный эффект на экспрессию маркеров дифференциации.
Эффекты продуктов в концентрации 100 мкг/мл
Соединение формулы I | Фактор индукции против контроля (CaCl2 1,2 мМ) | TG1 | DES2 | ABCG1 | FATP4 | |||
n | R | Rn | R1 | Вит. D3 10 мкМ | 8,3 | 11,0 | 3,1 | 1,3 |
3 | H | H | F | 0,9 | 1,9 | 1,2 | 1,2 | |
3 | H | H | H | 2,6 | 2,4 | 4,0 | 1,2 | |
4 | H | H | F | 1,7 | 3,2 | 2,6 | 1,4 | |
4 | H | H | H | 1,7 | 2,2 | 2,5 | 1,4 | |
6 | H | H | F | 7,8 | 10,3 | 6,3 | 1,9 | |
6 | H | H | H | 12,3 | 11,5 | 6,6 | 2,5 | |
9 | Н | Н | Н | 14,8 | 51,7 | 13,8 | 4,5 | |
10 | Н | Н | F | 3,5 | 16,0 | 4,6 | 2,3 | |
10 | Н | Н | Н | 31,4 | 125,8 | 25,5 | 5,9 |
Витамин D3 в концентрации 10 мкМ усиливает экспрессию транскриптов трансглутаминазы 1, DES2 и ABCG1 в 8,3, 11,1 и 3,1 раза, соответственно, по сравнению с контролем, обработанным только кальцием. С другой стороны, экспрессия FATP4 не модулируется в результате обработки витамином D3.
Таким образом, был продемонстрирован стимулирующий эффект производных ненасыщенных жирных гидроксикислот согласно настоящему изобретению на дифференциацию.
Анализ противовоспалительного эффекта на уровне липидных медиаторов воспаления
Кератиноциты - наиболее многочисленные на уровне эпидермиса клетки - в ответ на многочисленные внеклеточные факторы, присутствующие в окружающей их среде, выделяют биологически активные медиаторы, а именно простагландины и лейкотриены, которые играют важную роль в инициации и модулировании кожной воспалительной реакции, а также участвуют в регулировании иммунного ответа. Простагландин PG6KF1-альфа является одним из основных метаболитов, продуцируемых стимулированными кератиноцитами, и представителем модуляторов продукции метаболитов, образующихся в результате метаболизма арахидоновой кислоты по циклооксигеназному пути.
ПРОТОКОЛ:
Суспензию кератиноцитов в культуральной среде DMEM с 10% фетальной сыворотки телят распределяли по планшетам с 6 лунками (1,2·106 клеток/лунку) и инкубировали в течение 16 часов при 37°С в атмосфере, содержавшей 5% СO2. Затем кератиноциты промывали PBS для удаления не сцепленных клеток, после чего воздействовали на них продуктами, подлежащими испытанию, разведенными в DMEM без фетальной сыворотки телят (которая может влиять на результаты количественного анализа).
Концентрация, исследованная в культуре, равна 3 мкг/мл. Она была выбрана после предварительного испытания, посвященного оценке цитотоксичности (с нейтральным красным), и не является цитотоксичной.
Каждая обработка была выполнена на 3 лунках. Клетки предварительно инкубировали в течение 60 минут с продуктами, подлежащими испытанию, после чего добавляли агент, стимулирующий каскад арахидоновой кислоты (ионофор кальция), на 5 часов: ионофор кальция А23187 использовали в концентрации 1 мкМ.
После культивирования в течение 5 часов отбирали культуральную среду из каждой ячейки, центрифугировали ее при 3000 об/мин и хранили при -80°С.
Продукцию простагландина 6KF1α в каждом анализе измеряди с использованием набора для иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA) производства компании EUROMEDEX.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
Результаты выражены в процентах активности по отношению к стимулированному контролю.
Соединение формулы I | % ингибирующей активности исследуемой молекулы на продукцию PG6KF1α | |||
Воспаление | ||||
n | R | Rn | R1 | 3 мкг/мл |
3 | Н | Н | Н | 29 |
4 | Н | Н | F | 30 |
4 | Н | Н | Н | |
4 | Н | СН3 | Н | |
8 | Н | Н | Н | 32 |
8 | Н | Н | F | 44 |
9 | Н | Н | Н | 31 |
10 | Н | Н | F | 18 |
10 | Н | Н | Н | Не активно |
13 | Н | Н | F | 14 |
13 | Н | Н | Н | 25 |
Противовоспалительные свойства: Ингибирование синтеза провоспалительного цитокина IL8
Барьерная функция кожи обеспечивает защиту от факторов окружающей среды, а кератиноциты эпидермиса могут прямо реагировать на широкий спектр раздражителей или аллергенов и принимать активное участие в воспалительных и иммунных процессах, происходящих в коже, в частности за счет продукции провоспалительных цитокинов, медиаторов белковой природы. Среди этих биологически активных молекул первичными цитокинами считаются IL1α (интерлейкин 1α) и TNFα (фактор некроза опухолей α); их выделения достаточно для того, чтобы вызвать воспаление, поскольку они индуцируют молекулы адгезии на уровне эндотелиальных клеток и факторы хемотаксиса, такие как хемокины. Система хемокинов регулирует движение лейкоцитов во время воспалительной реакции и необходима для взаимодействия между врожденным и адаптивным иммунными ответами.
В данном исследовании мы сконцентрировались, в частности, на хемокине - интерлейкине 8, который принимает большое участие в развитии иммунного ответа и основной функцией которого является рекрутинг и активация полинуклеарных нейтрофилов, а именно стимуляция высвобождения ими провоспалительных молекул.
В данном исследовании, выполненном с использованием 96-луночных планшетов, мы оценивали активность гидроксиалкеновых кислот в отношении продукции интерлейкина 8, индуцируемой в кератиноцитах форболовым эфиром РМА и ионофором кальция А23187.
ПРОТОКОЛ:
Суспензию кератиноцитов в KSFM с добавками распределяли по 96-луночным планшетам (3·104 клеток/лунку) и инкубировали в течение 16 часов при 37°С в атмосфере, содержавшей 5% СO2. Затем кератиноциты промывали PBS с целью удаления не сцепленных с лунками клеток, после чего воздействовали на них продуктами, подлежащими исследованию, разведенными в KSFM без добавок (которые могли повлиять на результаты анализа).
Концентрация, исследованная на культуре клеток, была равна 3 мкг/мл. Она была выбрана по результатам предварительного испытания, в котором оценивалась цитотоксичность (с нейтральным красным), и не является цитотоксичной.
Для каждой обработки было использовано 3 лунки. Клетки предварительно инкубировали в течение 60 минут с продуктами, подлежащими исследованию, затем стимулировали; параллельно были проведены отрицательные контроли без стимулирующих веществ: форбола миристата ацетата (РМА) 1 мкМ + ионофора кальция (А23187) 0,1 мкМ.
Инкубация в течение 6 часов при 37°С в атмосфере влажного воздуха, содержавшего 5% СO2.
Культуральную среду из каждой лунки отбирали, центрифугировали при 3000 об/мин и хранили при -80°С.
Анализ на цитокин: IL8 определяли иммуноферментным способом с использованием набора для иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA) производства компании Immunotech.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
Результаты приведены в процентах активности по отношению к стимулированному контролю.
Соединение формулы I | % ингибирующей активности оцениваемых молекул на продукцию PG6KF1α | |||
Воспаление | ||||
n | R | Rn | R1 | 3 мкг/мл |
3 | Н | Н | Н | 50 |
4 | Н | Н | F | Не активно |
4 | Н | Н | Н | 15 |
4 | Н | СН3 | Н | Не активно |
6 | Н | Н | Н | Не определено |
8 | Н | Н | Н | Не активно |
8 | Н | Н | F | Не активно |
9 | Н | Н | Н | 16 |
10 | Н | Н | F | 30 |
10 | Н | Н | Н | 30 |
13 | Н | Н | F | 107 |
13 | Н | Н | Н | 62 |
14 | Н | Н | Н | Не активно |
Соединения согласно настоящему изобретению оценивались в отношении их противовоспалительной активности через влияние на высвобождение интерлейкина 8 кератиноцитами человека (НКЧ), стимулированными сложным эфиром форбола РМА и ионофором кальция А23187.
Было проведено три независимых эксперимента: объединение полученных данных позволило доказать противовоспалительный потенциал следующих двух соединений:
n=13, R=Rn=Н, R1=F
n=13, R=Rn=R1=Н
Для концентрации, в которой оценивалась каждая молекула, и после расчета эффективной 50%-ной дозы наши результаты показывают следующее:
Соединение формулы 1 | % ингибирования при 3 мкг/мл | ED50 | |||
n | R | Rn | R1 | ||
13 | Н | Н | F | 107 | <3 мкг/мл |
13 | Н | Н | Н | 62 | <3 мкг/мл |
Воспаление и зуд: анализ потока кальция после стимуляции PAR2-рецепторов
Рецептор под названием «Активируемый протеазой рецептор-2» (PAR-2) участвует в физиопатологии многих заболеваний, включающих в себя воспалительные реакции.
PAR2 экспрессируется различными типами клеток кожи: кератиноцитами, миоэпителиальными клетками потовых желез, волосяными фолликулами, дендритическими клетками дермы и эндотелиальными клетками собственной пластинки и дермы (Steinhoff et al., 1999; Santulli et al., 1995). Меланоциты не экспрессируют этот рецептор (Seiberg et al., 2000), хотя PAR-2 играет важную роль в пигментации, способствуя переносу меланина из меланоцитов в кератиноциты (Sharlow et al., 2000).
Сериновые протеазы, генерируемые эпидермисом, оказывают хемотактические эффекты, индуцирующие рекрутинг лейкоцитов в коже. Они также участвуют в регуляции гомеостаза, митогенеза и дифференциации эпидермиса и модулируют барьерную функцию кожи. Кроме того, сериновые протеазы участвуют в физиопатологии кожных болезней, связанных с воспалением, иммунной защитой организма, канцерогенезом, фиброзом и стимуляцией нервов.
Предполагается, что влияние сериновых протеаз на физиологические и физиопатологические свойства кожи отчасти связано с PAR-рецепторами. Действительно, рецепторы PAR-2 гиперэкспрессированы в эпидермисе, дерме и сосудах при воспалительных заболеваниях кожи, таких как атопический дерматит, плоский лишай и псориаз (Steinhoff et al., 1999). Также предполагается, что рецепторы PAR-2 играют роль в развитии зуда у пациентов с атопическим дерматитом (Steinhoff et al., 2003).
Активация PAR-2 трипсиноподобной протеазой индуцирует продукцию IL-8 кератиноцитами (НаСаТ) (Hou et al., 1988). Недавно было продемонстрировано, что IL-8, хемоаттрактивный цитокин для лейкоцитов, обеспечивает инфильтрацию нейтрофилов в эпидермис у пациентов с Psoriasis vulgaris (Iwakin et al., 2004).
Внутриклеточная сигнализация с участием PAR-2 рецепторов частично связана с мобилизацией внутри- и внеклеточного кальция.
Поэтому мы решили оценить активность производных гидроксикислот формулы I против рецепторов PAR-2 по их влиянию на входящий поток кальция в клетку, возникающий после специфической стимуляции PAR-2 рецепторов трипсина, присутствующих в кератиноцитах человека линии НаСаТ.
Эта методика основана на использовании этерифицированного флуоресцентного зонда из АМ-группы, поскольку этерификация способствует его проникновению в клетку посредством простой диффузии. Использованным зондом был зонд Fluo-4/АМ. Только у дезэтерифицированной формы, связанной с ионом кальция, можно возбудить флуоресценцию (при длине волны 485 нм), при этом она излучает при длине волны 535 нм.
Ингибирование (в процентах) потока кальция, вызванного трипсином | ||||
% стимуляции | Стандартное отклонение | % ингибирования | ||
Без зонда | 3,82 | 0,79 | - | |
Трипсин 10 нМ | 13,67 | 3,14 | - | |
STI 1 мкМ | 8,39 | 2,85 | 54 | |
R=Rn=H | 0,1 мкг/мл | 13,78 | 0,82 | -1 |
R1=F | 0,3 мкг/мл | 13,06 | 1,47 | 6 |
n=13 | 1 мкг/мл | 12,74 | 1,25 | 9 |
3 мкг/мл | 12,97 | 0,92 | 7 | |
10 мкг/мл | 9,55 | 1,96 | 42 | |
R=Rn-R1=H | 10 мкг/мл | 15,33 | 3,00 | -17 |
n=10 | 30 мкг/мл | 14,10 | 3,42 | -4 |
100 мкг/мл | 9,84 | 3,26 | 39 | |
R=Rn=R1=H | 10 мкг/мл | 14,68 | 2,56 | -10 |
n=14 | 30 мкг/мл | 12,90 | 3,58 | 8 |
100 мкг/мл | 11,37 | 2,62 | 23 |
Стимуляция трипсином
В случае кератиноцитов, происходящих из линии (НаСаТ):
Производные гидроксикислот общей формулы (I), указанные в таблице, приведенной выше, обладали ингибирующей активностью в отношении потока кальция, вызванного трипсином, при концентрации трипсина, равной 10 мкг/мл, и концентрации двух веществ, указанных ниже, равной 100 мкг/мл.
In vitro на клеточном уровне специфическая стимуляция рецепторов PAR-2 трипсином вызывает мобилизацию внутри- и внеклеточного кальция, обнаруживаемую с помощью флуоресцентного зонда.
В использованных нами экспериментальных условиях и в исследованных концентрациях соединения с общей формулой (I), указанные в приведенной выше таблице, достоверно модулировали активность против рецепторов PAR-2.
Эффект производных жирных гидроксикислот на синтез меланина in vitro
Меланоциты - это клетки звездчатой формы, в небольшом количестве присутствующие в базальном слое эпидермиса. Их основная функция состоит в обеспечении меланогенеза - процесса, с помощью которого в специализированных органеллах, меланосомах, синтезируется меланин, который затем транспортируется и распределяется между соседними кератиноцитами через их дендритоподобные отростки. Этот контакт с кератиноцитами приводит к возникновению пигментации кожи - механизму защиты эпидермиса против мутагенных эффектов ультрафиолетовых лучей. Каждый меланоцит связан примерно с тридцатью шестью кератиноцитами, образуя так называемую «эпидермальную единицу меланизации».
Меланогенез состоит из серии ферментативных и спонтанных реакций, предшественником для которых является тирозин. В этом процессе участвуют три основных фермента: тирозиназа, тирозиназо-связанные белки 1 и 2 (TRP1 и TRP2) (1). Тирозиназа катализирует преобразование тирозина в допахинон. После этого возможны два пути синтеза: эумеланогенез и феомеланогенез. Преобразование допахинона в эумеланин осуществляется в серии последовательных окислительных реакций с участием TRP-1 и TRP-2. Эумеланин является коричнево-черным пигментом с низким содержанием серы, и он обеспечивает фотопротекцию. В ходе феомеланогенеза к допахинону присоединяются молекулы с высоким содержанием серы с образованием феомеланина - желто-оранжевого пигмента, обнаруживаемого в коже рыжеволосых людей.
Физиологическим стимулом для синтеза меланина является солнечный свет, который вызывает увеличение количества меланоцитов, неосинтез меланина и морфологические изменения меланоцитов, состоящие в увеличении числа дендритов и ускорении транспорта меланосом в кератиноциты. На молекулярном уровне воздействие солнечного света стимулирует синтез и секрецию альфа-меланоцитстимулирующего гормона. A-MSH увеличивает концентрацию цАМФ в меланоцитах, что активирует фактор транскрипции, Mitf, который, в свою очередь, стимулирует транскрипционную активность генов, кодирующих тирозиназу, TRP-1 и TRP-2.
Известно, что некоторые экзогенные молекулы также оказывают отрицательное регулирующее влияние на меланогенез. Гидрохинон ингибирует синтез меланина, выступая в качестве субстрата для тирозиназы и обращая на себя ее активность.
Нами был проанализирован модулирующий эффект производных ненасыщенных жирных гидроксикислот на меланогенез. Для этого было проведено измерение синтеза меланина посредством колориметрического анализа на линии клеток меланомы мышей: линия B16-F10.
Эффект продуктов был исследован в исходной ситуации и после стимуляции меланогенеза α-MSH с целью определения их депигментирующей способности.
Анализ меланина
Внеклеточная и внутриклеточная концентрации меланина были измерены посредством спектрометрии при длине волны 405 нм согласно протоколу (Anob et al., 1999). Количество пигмента определяли с использованием стандартного набора для определения меланина и анализа с использованием программного обеспечения Microwin (Berthold Biotechnologies). Анализ общего белка был выполнен на пробах внутриклеточного меланина с использованием способа ВСА-Copper при длине волны 540 нм. Набор стандартных растворов был приготовлен с использованием стандартного белка BSA (бычьего сывороточного альбумина).
РЕЗУЛЬТАТЫ
В исходных условиях α-MSH в концентрации 1 мкМ увеличивал продукцию меланина на 100% по сравнению с контрольными клетками.
Этому увеличению концентрации меланина препятствуют депигментирующие агенты, такие как гидрохинон в концентрации 1 мкг/мл или витамин С в концентрации 40 мкг/мл, которые ингибировали действие α-MSH на 60%.
В исходных условиях при концентрации 30 мкг/мл:
- Соединение общей формулы I при n=10, R=Rn=H, R1=F ингибировало синтез меланина на 30-45%, тогда как в присутствии α-MSH то же соединение в концентрации 30 мкг/мл обеспечивало ингибирование на 45-60%.
- Соединение общей формулы I при n=10, R=R1=Rn=H в концентрации 30 мкг/мл обнаруживало меньшую активность, чем предыдущее соединение, а именно ингибирование на 15% в исходных условиях, тогда как в присутствии α-MSH ингибирующий потенциал этого соединения в отношении данного меланотропного вещества был сходным с предыдущим соединением, то есть составлял 45-60%.
В концентрации 10 мкг/мл ингибиторная активность этих двух кислот в отношении индукции меланогенеза α-MSH составляла примерно 35%.
Claims (11)
2. Ненасыщенная жирная гидроксикислота по п.1, где n=10.
4. Ненасыщенная жирная гидроксикислота по п.3, где R1=F, и n=10.
5. Ненасыщенная жирная гидроксикислота по п.3, где R1=F, и n=8.
6. Дерматокосметологическая композиция, имеющая антирадикальную, противовоспалительную, противозудную активность, содержащая ненасыщенную жирную гидроксикислоту общей формулы (I)
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=H, и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, в качестве активного ингредиента и дерматологически приемлемый наполнитель.
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=H, и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, в качестве активного ингредиента и дерматологически приемлемый наполнитель.
7. Дерматокосметологическая композиция по п.6, где в ненасыщенной жирной гидроксикислоте общей формулы (I) Rn=R1=R=H, и n=10.
8. Применение ненасыщенной жирной гидроксикислоты общей формулы (I)
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=H, и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, для изготовления дерматокосметологической композиции, обладающей модулирующей активностью на меланогенез, и/или на пигментацию кожи, и/или на кератинизацию кожи, и/или на заживление.
где Rn=H, R1=H, F, Cl или Br, R=H, и 5≤n≤14, за исключением 10-гидрокси-2-деценовой кислоты, для изготовления дерматокосметологической композиции, обладающей модулирующей активностью на меланогенез, и/или на пигментацию кожи, и/или на кератинизацию кожи, и/или на заживление.
9. Применение по п.8, где указанная ненасыщенная жирная гидроксикислота предназначена для лечения старения кожи и белых или коричневых возрастных пятен.
10. Применение по п.8, где указанная ненасыщенная жирная гидроксикислота предназначена для отбеливания кожи.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0510792A FR2892410B1 (fr) | 2005-10-21 | 2005-10-21 | Nouveaux hydro-acides gras insatures et leur utilisation dermo cosmetologique |
FR0510792 | 2005-10-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008118066A RU2008118066A (ru) | 2009-11-27 |
RU2440328C2 true RU2440328C2 (ru) | 2012-01-20 |
Family
ID=36121419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008118066/04A RU2440328C2 (ru) | 2005-10-21 | 2006-10-20 | Ненасыщенные жирные гидроксикислоты и их применение в дерматокосметологии |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8158811B2 (ru) |
EP (1) | EP1937619B1 (ru) |
JP (1) | JP5615495B2 (ru) |
KR (1) | KR20080069177A (ru) |
CN (1) | CN101291903B (ru) |
AU (1) | AU2006303233B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0617517B8 (ru) |
CA (1) | CA2626635C (ru) |
ES (1) | ES2526201T3 (ru) |
FR (1) | FR2892410B1 (ru) |
HK (1) | HK1118804A1 (ru) |
IL (1) | IL190597A (ru) |
MA (1) | MA29942B1 (ru) |
NO (1) | NO341011B1 (ru) |
NZ (1) | NZ568366A (ru) |
PL (1) | PL1937619T3 (ru) |
PT (1) | PT1937619E (ru) |
RU (1) | RU2440328C2 (ru) |
TN (1) | TNSN08172A1 (ru) |
UA (1) | UA96429C2 (ru) |
WO (1) | WO2007045693A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200804239B (ru) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5235439B2 (ja) * | 2008-02-06 | 2013-07-10 | 丸善製薬株式会社 | HMG−CoA還元酵素産生促進剤 |
FR2947452B1 (fr) * | 2009-07-01 | 2012-04-20 | Fabre Pierre Dermo Cosmetique | L-serine et/ou l-asparagine et/ou l-valine pour prevenir et/ou au traiter des reactions inflammatoires de la peau. |
EP2933271B1 (de) * | 2014-04-15 | 2016-03-23 | Basf Se | Verfahren zur herstellung von wasserlöslichen homo- oder copolymeren umfassend (meth)acrylamid |
US10004711B2 (en) | 2014-05-08 | 2018-06-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Methods and compositions comprising 10-hydroxy-2-decenoic acid |
KR102511934B1 (ko) | 2021-04-27 | 2023-03-21 | 재단법인 아산사회복지재단 | 피부 색소침착의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 |
KR20240055676A (ko) | 2022-10-19 | 2024-04-29 | 재단법인 아산사회복지재단 | 신규 알티라티닙 유도체, 이의 제조방법, 및 이를 유효성분으로 포함하는 피부 색소침착의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE642451A (ru) * | 1963-01-16 | |||
JPS61176510A (ja) | 1985-01-31 | 1986-08-08 | Pola Chem Ind Inc | 美白化粧料 |
JPS63317091A (ja) | 1987-06-18 | 1988-12-26 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ω−ハイドロキシ−トランス−α,β−不飽和脂肪酸の製造法 |
GB9209238D0 (en) * | 1992-04-29 | 1992-06-17 | Unilever Plc | Cosmetic conditioner |
ATE163006T1 (de) * | 1993-06-01 | 1998-02-15 | Ono Pharmaceutical Co | Pentansäurederivate |
JPH10147514A (ja) | 1996-11-19 | 1998-06-02 | Pola Chem Ind Inc | 化粧料 |
FR2783517B1 (fr) * | 1998-09-22 | 2001-02-09 | Oreal | Nouveaux derives de l'acide 10-hyroxy-2-decenoique et utilisation dans une composition destinee a favoriser la desquamation de la peau, et composition le comprenant |
FR2808441B1 (fr) * | 2000-05-04 | 2004-06-18 | Oreal | Utilisation de fibres dans une composition de soin ou de maquillage pour matifier la peau |
FR2829491B1 (fr) * | 2001-09-12 | 2005-09-30 | Diverchim | Procede de preparation des hydroxy-acides gras insatures et de leurs esters, leur utilisation comme agent anti-collagenase |
JP4384981B2 (ja) | 2002-09-06 | 2009-12-16 | 林原 健 | 精製ローヤルゼリー |
US20070129430A1 (en) | 2003-10-07 | 2007-06-07 | Satomi Miyata | Agent for enhancing the production of collagen, their preparation and use |
FR2892411B1 (fr) * | 2005-10-21 | 2009-03-20 | Diverchim Sa | Nouveau procede de preparation d'hydroxy-acides gras insatures |
-
2005
- 2005-10-21 FR FR0510792A patent/FR2892410B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-10-20 ES ES06807453.3T patent/ES2526201T3/es active Active
- 2006-10-20 CA CA2626635A patent/CA2626635C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-20 PT PT68074533T patent/PT1937619E/pt unknown
- 2006-10-20 CN CN200680038864.6A patent/CN101291903B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-20 JP JP2008536062A patent/JP5615495B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-20 WO PCT/EP2006/067641 patent/WO2007045693A1/fr active Application Filing
- 2006-10-20 EP EP06807453.3A patent/EP1937619B1/fr active Active
- 2006-10-20 KR KR1020087010985A patent/KR20080069177A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-10-20 PL PL06807453T patent/PL1937619T3/pl unknown
- 2006-10-20 RU RU2008118066/04A patent/RU2440328C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-10-20 US US12/083,688 patent/US8158811B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-20 NZ NZ568366A patent/NZ568366A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-10-20 UA UAA200806451A patent/UA96429C2/ru unknown
- 2006-10-20 BR BRPI0617517A patent/BRPI0617517B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-10-20 AU AU2006303233A patent/AU2006303233B2/en not_active Ceased
-
2008
- 2008-04-03 IL IL190597A patent/IL190597A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-04-18 TN TNP2008000172A patent/TNSN08172A1/fr unknown
- 2008-05-09 MA MA30916A patent/MA29942B1/fr unknown
- 2008-05-16 ZA ZA200804239A patent/ZA200804239B/xx unknown
- 2008-05-16 NO NO20082246A patent/NO341011B1/no not_active IP Right Cessation
- 2008-11-19 HK HK08112646.5A patent/HK1118804A1/xx not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
DATABASE CAS on STN Registry №20514-63-0, дата введения в * |
DATABASE CAS on STN Registry №55027-39-9, дата введения в * |
DATABASE CAS on STN Registry №66120-17-0, дата введения в * |
DATABASE CAS on STN Registry №68750-26-5, дата введения в * |
DATABASE CAS on STN Registry №86109-28-6, дата введения в * |
HANESSIAN, STEPHEN et al. Synthesis of carbocycles from omega-substituted alpha, beta - unsaturated esters via radical - induced cyclizations. - CANADIAN JOURNAL OF CHEMISTRY, т.65, №8, cc.1859-1865. TAMOTSU FUJISA WA et al. A novel synthesis of royal jelly acids and queens substance by the five carbon homologation using β-Vinyl-β-propiolactone. - Chemistry Letters, т.11, №2, 1982, с.219-220. DATABASE CAS on STN реферат ZHAO, YAHUA Determination of 10-HAD in royal jelly. - Journal Zhongguo Gonggong Weishening, 2004, т.20, №10, с.1168, RN 765-01-5. DATABASE CAS on STN Registry №131532-29-1, дата введения в * |
NISHITANI, KIYOSHI et al. A synthesis of alpha-methylene-gamma-lactones fused to medium and large rings by intramolecular cyclization of formylated allyl halides. - CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, 38(1), 28-35. реферат 57:22826 в CAS on STN статьи Dhekne, V.V.; Ghatge, В.В.; Nayak, U.G.; Chakravarti, K.K.; Bhattacharyya, S.C. «Macrocyclic musk compounds. I. New synthesis of exaltolide, exaltone, and dihydrocivetone.» Journal of the Chemical Society cc.2348-52, 1962. реферат 54:109974 в CAS on STN статьи Nesmeyanov, A.N.; Zakharkin, L.I.; Kost, T.A.; Freidlina, R. Kh. «Synthesis of 15-hydroxypentadecanoic and 16-hydroxy-hexadecanoic acids.» Izvestiya Akademii Nauk SSSR, Seriya Khimicheskaya cc.211-16, 1960. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1937619B1 (fr) | 2014-10-08 |
RU2008118066A (ru) | 2009-11-27 |
BRPI0617517B8 (pt) | 2021-05-25 |
PL1937619T3 (pl) | 2015-04-30 |
CN101291903B (zh) | 2014-09-10 |
PT1937619E (pt) | 2015-01-14 |
IL190597A0 (en) | 2008-11-03 |
BRPI0617517B1 (pt) | 2019-01-22 |
MA29942B1 (fr) | 2008-11-03 |
CN101291903A (zh) | 2008-10-22 |
FR2892410B1 (fr) | 2010-10-15 |
TNSN08172A1 (fr) | 2009-10-30 |
ZA200804239B (en) | 2009-03-25 |
JP5615495B2 (ja) | 2014-10-29 |
FR2892410A1 (fr) | 2007-04-27 |
UA96429C2 (ru) | 2011-11-10 |
AU2006303233A1 (en) | 2007-04-26 |
US8158811B2 (en) | 2012-04-17 |
JP2009512664A (ja) | 2009-03-26 |
EP1937619A1 (fr) | 2008-07-02 |
ES2526201T3 (es) | 2015-01-08 |
US20090238784A1 (en) | 2009-09-24 |
CA2626635C (fr) | 2014-03-18 |
WO2007045693A1 (fr) | 2007-04-26 |
NO20082246L (no) | 2008-06-30 |
NO341011B1 (no) | 2017-08-07 |
BRPI0617517A2 (pt) | 2011-07-26 |
IL190597A (en) | 2011-08-31 |
AU2006303233B2 (en) | 2012-03-15 |
NZ568366A (en) | 2012-02-24 |
CA2626635A1 (fr) | 2007-04-26 |
KR20080069177A (ko) | 2008-07-25 |
HK1118804A1 (en) | 2009-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2440328C2 (ru) | Ненасыщенные жирные гидроксикислоты и их применение в дерматокосметологии | |
WO2010132815A1 (en) | Curcumin analogues as zinc chelators and their uses | |
EA011305B1 (ru) | Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение | |
Lu et al. | Synthesis and biological evaluations of novel apocynin analogues | |
JP5524630B2 (ja) | ドーパオキシダーゼ活性抑制剤及び美白剤 | |
JP2004231658A (ja) | 乾燥肌を処置するための(ジヒドロ)ジャスモン酸誘導体の使用 | |
EP2440551B1 (fr) | Mono esters et bis esters d'acide gras insature sur l'acide ascorbique et leurs utilisations cosmetiques | |
US20100240754A1 (en) | Unsaturated fatty amino acid derivatives and use thereof in dermal cosmetology | |
FR2913685A1 (fr) | Nouveaux derives amino-acides gras insatures et leur utilisation dermo-cosmetologique | |
KR20190053534A (ko) | 이데베논 유도체 화합물 및 이를 포함하는 화장료 조성물 | |
AU2010329841B2 (en) | Derivatives of novel peroxides, method of preparation thereof and use thereof in human medicine as well as in cosmetics for the treatment or prevention of acne | |
KR20240047000A (ko) | 피부 개선용 피부외용제 조성물 | |
MXPA99004350A (en) | Method for treatment of dermatological disorders |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201021 |