EA011305B1 - Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение - Google Patents

Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение Download PDF

Info

Publication number
EA011305B1
EA011305B1 EA200601288A EA200601288A EA011305B1 EA 011305 B1 EA011305 B1 EA 011305B1 EA 200601288 A EA200601288 A EA 200601288A EA 200601288 A EA200601288 A EA 200601288A EA 011305 B1 EA011305 B1 EA 011305B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
dimethylphenyl
prop
compound
tert
carboxidimethylmethyloxy
Prior art date
Application number
EA200601288A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200601288A1 (ru
Inventor
Карин Комон-Бертран
Жан-Франсуа Дельомель
Original Assignee
Жанфит
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR0400123A external-priority patent/FR2864956B1/fr
Application filed by Жанфит filed Critical Жанфит
Publication of EA200601288A1 publication Critical patent/EA200601288A1/ru
Publication of EA011305B1 publication Critical patent/EA011305B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/10—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/11—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/12—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/22—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/61—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/90—Unsaturated compounds containing keto groups containing singly bound oxygen-containing groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D339/00—Heterocyclic compounds containing rings having two sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D339/02—Five-membered rings
    • C07D339/04—Five-membered rings having the hetero atoms in positions 1 and 2, e.g. lipoic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение касается замещённых производных 13-дифенилпроп-2-ен-1-она соединений, фармацевтических и/или косметических соединений с их содержанием, их применения в терапии и косметике. Оно относится также к способу получения этих производных.

Description

Настоящее изобретение относится к замещённым производным 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, содержащим их фармацевтическим и/или косметическим композициям, их применению в клинической медицине и/или косметологии, в частности в области охраны здоровья людей и животных. Изобретение также относится к способу получения указанных производных.
Уровень техники
Соединения согласно изобретению представляют собой эффективное терапевтическое средство, предназначенное для лечения патологий, вызванных нарушением липидного и/или углеводного метаболизма (гиперлипидемия, диабет, ожирение и пр.), и применимы, в частности, для профилактики или лечения сердечно-сосудистых заболеваний (в частности, ишемические заболевания сердца, церебральная ишемия и периферические артериальные заболевания), дислипидемии, паталогий, вызванных синдромом X, диабета, ожирения, гипертонии, воспалительных заболеваний, кожных заболеваний (псориаз, атопические дерматиты, угри и пр.), астмы, нарушений, связанных с окислительным стрессом, общих старческих явлений, например старение кожи, в частности в косметологии (появление морщин и пр.). Соединения согласно изобретению обладают профилактической активностью с точки зрения нейрозащиты и способны также обеспечивать активную нейрозащиту при острых приступах церебральной ишемии, приводящих к серьёзным осложнениям при сердечно-сосудистых поражениях.
Благодаря одновременному воздействию на несколько факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний соединения согласно изобретению позволяют снизить общий риск сердечно-сосудистой болезни.
Коронарные заболевания, церебральная ишемия и периферические артериальные заболевания представляют собой главные сердечно-сосудистые заболевания по сведениям Международного общества по атеросклерозу (Наппошхеб Сйшса1 СшбеНпек оп Ргеуепйоп о! А1йегобс1егойс Уа8еи1аг И18еа8е, 2003).
Сердечно-сосудистые заболевания являются в настоящее время одной из главных причин смертности взрослого населения в большинстве развитых и в некоторых развивающихся странах. Среди сердечно-сосудистых заболеваний церебрально-сосудистая патология является третьей причиной смертности и первой причиной смертности среди взрослых. Потребность в наличии эффективных стратегий лечения и/или профилактики таких патологий приняла мировой характер.
Дислипидемии (гиперхолостеринемия, гипертриглицеридемия), диабет и гипертония входят в число чётко идентифицируемых факторов риска сердечно-сосудистого заболевания (1А8, 2003). Представляется также, что недостаточная защита липопротеинов от окисления является идентифицируемым фактором риска.
Эпидемиологические исследования показали, что между этими разными факторами имеется относительный синергический эффект. Одновременное присутствие нескольких из них ведёт к драматическому увеличению риска сердечно-сосудистого заболевания. Следовательно, необходимо говорить о глобальном риске (ДоЬа1 Г1зк) сердечно-сосудистых заболеваний. Таким образом, присутствует реальная потребность в продуктах, способных одновременно воздействовать на разные факторы риска и тем самым снижать риск сердечно-сосудистых заболеваний, но одновременно и в изучении каждого нарушения и его последствий, взятых в отдельности (дислипидемии, диабет, гипертония, церебральная ишемия, патологии, связанные с синдромом X, ожирение и пр.).
Авторы изобретения неожиданно нашли, что соединения согласно изобретению являются активаторами РРАК (Регох18оте Рго111ега1ог_Асбуа1еб КесерЮг - рецептор активации пролиферации пероксисом) и поэтому являются эффективным терапевтическим средством.
Действительно хорошо известно, что РРАК участвуют в метаболизме липидов и глюкозы. Активаторы РРАК, например фибраты, позволяют регулировать плазматический холестерин и содержание триглицеридов посредством активации РРАКа (Ноийоп, Ие1ейуе и др., 2001). Лечение с применением фибратов сопровождается повышенным окислением жирных кислот в печени. Также они снижают синтез и экспрессию триглицеридов (81аек апб Аи\\'егх. 1998). Активаторы РРАКа способны также корректировать гипергликемию и содержание инсулина. Кроме того, фибраты снижают массу ткани благодаря механизму, который не зависит от приёма пищи и от экспрессии гена, кодирующего лептин (СиетгеМ111о, Сегуо18 и др., 2000).
Терапевтический эффект агонистов РРАКу широко исследовался при лечении диабета ΙΙ-го типа (8р1еде1таи, 1998). Было показано, что агонисты РРАКу позволяют восстановить чувствительность тканей-мишеней к инсулину, а также снизить плазматический показатель глюкозы, липидов и инсулина как у моделей животных, больных диабетом ΙΙ-го типа, так и у человека (Кат, 2003).
Активация РРАК лигандами также применялась при регулировании экспрессии генов, участвующих в процессах, таких как воспаление, ангиогенез, пролиферация и клеточная дифференциация, апоптоз и активность ίΝΘδ, ММРаке Т1МР. Активация РРАКа в кератиноцитах приводит к прекращению их пролиферации и экспрессии генов, участвующих в клеточной дифференциации (Котцуек, Нап1еу и др., 2000).
Также было доказано, что активация РРАК интерферирует с дифференциацией, созреванием, ми
- 1 011305 грацией и иммуногенностью дентритных клеток, которые являются наиболее производительными антигенными клетками (Сокке1 и др., 2001; №ηείοηί и др., 2002; Апдей и др., 2003).
РРАВ обладают противовоспалительными свойствами, так как они характеризуются отрицательной интерференцией в механизмах транскрипции, обладающими другими факторами транскрипции, такими как ΝΡ-кВ или активаторами транскрипции (8ТАТ) и АР-1 (Эекуегдие аиб \Уа111г 1999). Такие противовоспалительные и противопролиферативные свойства делают РРАК. терапевтическими мишенями при лечении таких заболеваний, как окклюзивные сосудистые заболевания (атеросклероз и др.), церебральная ишемия, гипертония, болезни, связанные с васкуляризацией (разные проявления диабетической ретинопатии и др.), воспалительные заболевания (болезнь Бовеля, псориаз и др.), астма и неопластические заболевания (карциногенез и др.).
Кроме того, соединения согласно изобретению имеют то преимущество, что они являются антиоксидантами.
В самом деле, на долю свободных радикалов приходится очень широкий диапазон патологий, таких как сердечно-сосудистые (атеросклероз и др.), церебральная ишемия, генетические и метаболические нарушения (диабеты и др.), а также инфекционные и дегенеративные заболевания (болезни Альцгеймера, Паркинсона, Приона и др.), офтальмологические заболевания, старение, разные виды аллергии, начало и развитие канцероматозных заболеваний (Ма1ек, Регех-Сошек и др., 1999).
Реакционноспособные окисленные вещества (КО8) являются продуктами нормальной деятельности клетки. КО8 включают гидроксильные радикалы (ОН-), супероксидный анион (О2-), пероксид водорода (Н2О2) и оксид азота (ΝΟ). Эти вещества являются очень лабильными и опасными для биологических функций клеток по причине своей высокой химической активности, вызывая перокисление некоторых ферментов и очень высокую степень окисления протеинов, приводящих к их деградации.
КО8 устраняются с помощью антиоксидантной системы, содержащей ферментативный компонент (супероксид дисмутазу, каталазу, пероксидазу глутатион) и не ферментативный компонент, преимущественно каротиноиды, витамины С и Е (С11дии-8йегк1, Ме1аше6 и др., 2001).
Кроме того, результаты многочисленных исследований ίη νίΐτο и ίη νΐνο свидетельствуют о потенциальном участии окисленных липопротеинов низкой плотности (ЬВЬ) в атеросклерозе. Медленно развивающаяся артеросклерозная бляшка содержит ядро с большим содержанием холестерина, окружённое капсулой из фиброзных тканей. Расщепление бляшки всё больше рассматривается как результат хронических воспалительных изменений в зоне фиброзной капсулы. Медиаторы воспаления, такие как цитокины, оказывают влияние на несколько биологических процессов в фиброзной капсуле бляшки, снижая при этом её сопротивление разрушению.
Воспалительные цитокины в атероматозной бляшке, в частности интерлейкин I, фактор некроза опухоли (ΤΝΡ-α и поверхностный гомолог ΤΝΡα, называемый лигандом СЭ-40), вызывают образование в макрофагах и энзимных клетках гладких мышц, ферментов, способных ослабить внеклеточный матрикс. Разрушение капсулы может служить причиной окклюзивных тромбозов.
Также соединения согласно изобретению являются эффективными терапевтическими средствами при лечении и/или профилактике церебральной ишемии благодаря своим фармакологическим и, в частности, противовоспалительным свойствам.
Первое проявление церебральной ишемии происходит в первые часы и заключается в массивном высвобождении глютамата, ведущем к нейронной деполяризации и отёку клетки. Введение кальция в клетку приводит к митохондриальным нарушениям, способствуя выделению свободных радикалов и индукции ферментов, вызывающих мембранную деградацию нейронов. Введение кальция и образование свободных радикалов активируют в свою очередь некоторые факторы транскрипции, такие как ΝΡ-кВ. Такая активация вызывает воспалительные процессы, такие как индукция протеинов адгезии в эндотелиальной зоне, инфильтрация ишемического очага нейтрофильными гранулоцитами, микроглиальная активация, индукция ферментов, как, например, оксид азота (ΝΟ), синтаза ΙΙ-го типа или циклооксигеназа 11го типа. Эти воспалительные процессы вызывают высвобождение ΝΟ или простаноидов, токсичных для клетки. Совокупность этих процессов приводит к явлению апоптоза, вызывающего необратимые поражения (Э|гпад1. 1айеео1а и др., 1999).
Концепция о профилактической нейрозащите покоится на фундаментальных данных, демонстрирующих резистентность к ишемии, полученных на животных моделях. Были выявлены разные механизмы резистентности к церебральной ишемии, это цитокины, воспалительные пути, свободные радикалы, ΝΟ, АТФ-зависимые каналы калия, аденозин. Следовательно, соединения согласно изобретению обладают преимуществом, заключающемся в их роли в качестве нейрозащитного средства.
Наконец, соединения согласно изобретению представляют собой особый интерес при лечении воспалительных патологий, в частности при лечении астмы. Действительно распространённость аллергических заболеваний, в частности астмы, неуклонно возрастает в промышленно развитых странах, создавая серьёзную проблему в здравоохранении. Каким бы не был исследуемый механизм, заболевания аллергического происхождения имеют, в целом, в своей основе воспалительную реакцию, вызванную дендритными клетками, содержащими антиген. Авторы изобретения показали, что соединения согласно настоящему изобретению интерферируют с дифференциацией и созреванием дендритных клеток и задержива
- 2 011305 ют миграцию этих клеток к вторичным лимфоидным органам. Кроме того, было найдено, что соединения согласно изобретению выполняют роль индукторов пролиферации клеток СЭ4+Т примитивных клеток.
Следовательно, соединения согласно изобретению интерферируют с инициированием иммунной реакции и являются эффективным терапевтическим средством при лечении астмы.
Настоящее изобретение касается новых замещённых производных 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, фармацевтических и/или косметологических соединений с их содержанием, их применения при лечении и/или в косметологии, в частности в области охраны здоровья людей и животных. Также настоящее изобретение касается способа получения производных этих соединений.
Сущность изобретения
Авторы изобретения неожиданно нашли, что соединения согласно изобретению обладают активностью агониста РРАР и противоокислительными свойствами. Следовательно, соединения согласно изобретению могут интерферировать по меньшей мере с двумя сигнальными путями, которые активируются, в частности, при воспалении продукцией цитокинов и продукцией свободных радикалов. Действуя синергическим образом, соединения согласно изобретению выступают в качестве эффективного терапевтического и/или косметологического средства при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, патологий, связанных с синдромом X, дислипидемий, диабета, ожирения, гипертонии, воспалительных заболеваний, дерматологических болезней (псориаз, атопические дерматиты, угри и пр.), астмы, нарушений, вызванных окислительным стрессом, старения в целом, например, старения кожи, в частности, в косметологической области (появление морщин и пр.).
С другой стороны, соединения согласно изобретению способны оказывать профилактическое действие с точки зрения нейрозащиты и, кроме того, обеспечивать активную нейрозащиту на стадии острых приступов церебральной ишемии.
Наконец, соединения согласно изобретению являются эффективным терапевтическим средством для профилактики и/или лечения многих рискованных сердечно-сосудистых нарушений, обусловленных разрегулированием липидного и/или углеводного метаболизма (гиперлипидемия, диабет, ожирение и пр.). Они обеспечивают снижение общего риска.
Настоящее изобретение направлено на создание новых замещённых производных 1,2-дифенилпроп2-ен-1-она, отвечающих улучшенной формуле и обладающих удовлетворительной лечебной эффективностью.
Эта и другие цели достигаются в данном изобретении, объектом которого являются замещённые производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она общей формулой
(О где Х7 означает группу, соответствующую формуле С-Р-. в которой С7 - атом кислорода или серы, К7 - алкильная цепь, охарактеризованная ниже, замещённая заместителем из группы 1 или заместителем из группы 2, К7 при необходимости может быть замещён арильной группой, заместители группы 1 выбирают из группы, включающей карбоксильные группы формулы -СООКа, карбамоильные группы формулы -ί.ΌΝΚ|:Κ или тетразолильной группы, заместители группы 2 выбирают из группы, включающей остаток сульфоновой кислоты (-8О3Н) и сульфонамидные группы формулы -8Ο2ΝΚ|Κ(., где Ка, Кь, Кс являются одинаковыми или различными и означают атом водорода или замещённую или незамещённую алкильную группу, группы Х1, в которых 1=1, 2, 3, 4 или 5, являются одинаковыми или различными и означают атом галогена или тионитрозогруппу или соответствуют формуле (С1-К1)п-С'1-К'1, в которой п может принимать значения 0 или 1,
С, и С'1 являются одинаковыми или различными и означают одинарную связь, атом кислорода или атом серы,
Κ1 и Κ'1 являются одинаковыми или различными и означают алкил, алкенил, арил или гетероцикл,
Κ'1 может также означать атом водорода, группы Х1, где 1=6 или 8, являются одинаковыми или различными и означают атом галогена или соответствуют формуле С1-К'1, при этом С', и Κ'1 имеют вышеуказанные значения,
Х6 и Х8 одновременно не являются атомом водорода,
- 3 011305
X;, где ί=1, 2, 3, 4, 5, 6 или 8, не может означать гетероцикл, непосредственно связанный с ароматическим кольцом 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, за исключением соединений формулы (I), в которых одновременно одна из групп Х1, Х2, Х3, Х4 или Х5 является гидроксильной группой,
О7 - атом кислорода, одна из групп Х6 или Х8 означает атом водорода или галогена, или гидроксил, или алкилоксигруппу, за исключением соединений формулы (I), в которых одновременно группы Х1, Х2 и Х4 означают атом водорода, группы Х6 и Х8 означают О'1В'1, группа Х5 означает тионитрозогруппу или группу О'1В'1, группа Х3 означает галоген или группу О'1В'1, где С1 означает атом кислорода, атом серы или одинарную связь, Я'1 означает насыщенную, линейную, разветвлённую или циклическую, необязательно замещенную галогеном, алкильную группу или атом водорода.
Согласно одному из вариантов выполнения изобретения соединениями формулы (I) являются охарактеризованные выше соединения, за исключением тех из них, в которых одновременно группы Х1, Х2 и Х4 означают атом водорода, одна из групп Х3 или Х4 означает атом водорода или галоген, или алкильную группу, или алкилоксигруппу, или алкилтиогруппу, или гидроксильную группу, или тиольную группу, или тионитрозогруппу.
В предпочтительном варианте изобретение относится к соединениям общей формулы (1а), соответствующим соединениям общей формулы (I), в которой Х1 и Х5 означают атомы водорода.
В другом предпочтительном варианте изобретение относится к соединениям общей формулы ДЬ), соответствующим соединениям общей формулы (I), в которой Х2 и Х4 означают алкильные группы, более предпочтительно, когда Х1 и Х5 означают атомы водорода.
Другим объектом изобретения являются соединения общей формулы Де), которые представляют собой соединения общей формулы (I), в которой Хь Х3 и Х4 означают алкильные группы.
Следующим объектом изобретения являются соединения общей формулы (И), которые представляют собой соединения общей формулы (I), в которой Х1 Х2, Х4 и Х5 означают атомы водорода.
Ещё одним объектом изобретения являются соединения общей формулы (II), которые представляют собой соединения общей формулы (I), в которой Х6 и Х8 означают алкильные группы.
Наиболее предпочтительно, чтобы соединения общей формулы (II) представляли собой соединения формулы (II), в которой Х1 и Х5 означают атомы водорода и в которой Х2 и Х4 являются преимущественно алкильными группами.
Ещё одним объектом изобретения являются соединения общей формулы (II), в которой Хь Х3, Х4, Х6 и Х8 означают алкильные группы.
Объектом изобретения являются также соединения общей формулы (II), в которой Х6 и Х8 означают алкильные группы, Хь Х2, Х4 и Х5 означают атомы водорода.
Согласно отдельному аспекту изобретения соединения формулы (I) являются соединениями, которые охарактеризованы выше, в которых Х3 означает атом водорода или тионитрозогруппу или отвечает формуле (О1 - В1)п-О'1-В'1, приведённой выше, в которой 0'1 означает атом кислорода или атом серы.
Настоящее изобретение включает в себя также оптические и геометрические изомеры, рацематы, таутомеры, соли, гидраты и смеси соединений согласно изобретению.
Настоящее изобретение включает в себя также пролекарства соединений согласно изобретению, которые после приёма пациентом превращаются в соединения согласно изобретению и/или метаболиты соединений согласно изобретению, которые обладают такой же терапевтической активностью, как и соединения согласно изобретению.
Предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, группы О1 или 0'1 означали атом серы, при этом ί может принимать значения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8.
В рамках настоящего изобретения производные согласно изобретению, такие как описанные выше, могут принимать цис- или транс-конформацию.
Согласно настоящему изобретению термин «алкил» означает углеводородный насыщенный, линейный, разветвлённый или циклический, галогенсодержащий или не содержащий галоген радикал преимущественно с 1 до 24, предпочтительно с 1 до 10 атомами углерода, такой как метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, неопентил, н-гексил или циклогексил. Особо предпочтительными являются группы, содержащие один или два атома углерода или содержащие от 2 до 7 атомов углерода. Метильные и этильные группы являются наиболее предпочтительными.
Согласно настоящему изобретению термин «алкенил» означает углеводородный, ненасыщенный, линейный, разветвлённый или циклический, галогенсодержащий или не содержащий галоген радикал, имеющий предпочтительно 1-24, предпочтительно 1-10 атомов углерода.
Согласно настоящему изобретению термин «арил» означает углеводородную, ароматическую груп
- 4 011305 пу, замещенную или незамещенную, в частности замещенную по меньшей мере одним атомом галогена, алкилом, гидроксилом, тиолом, алкилокси-, алкилтио-, оксимом или тионитрозогруппой. Наиболее предпочтительными являются фенильные группы.
Согласно настоящему изобретению термин «гетероцикл» означает циклическую группу, насыщенную или ненасыщенную или ароматическую, содержащую один или несколько гетероатомов, таких как азот, сера и кислород. Они могут быть замещёнными преимущественно по меньшей мере одной алкильной группой, такой как охарактеризованная выше. Наиболее предпочтительными являются гетероциклы, такие как дитиоланы, пиридин, фуран, тиофен и морфолин. Предпочтительно, чтобы гетероциклы, такие как пиперидин и пиперазин, были замещены по меньшей мере одной алкильной группой, такой как охарактеризованная выше.
Термин «тионитрозо» означает нитрозогруппу, связанную с ароматическим кольцом через атом серы.
Термин «алкилокси» означает алкильную цепь, связанную с кольцом атомом кислорода. Алкильная цепь соответствует таковой, которая определена выше.
Термин «алкилтио» означает алкильную цепь, связанную с ароматическим кольцом атомом серы (тиоэфирная связь). Алкильная цепь соответствует таковой, которая определена выше.
Атом галогена означает атом хлора, брома, йода или фтора.
Согласно одному из воплощений изобретения предпочтительными соединениями являются соединения, приведенные ниже с соответствующими формулами:
1-(4-((К,8)-5-[1,2]дитиолан-3-илпентилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-меркапто-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(4-циклогексилэтилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
1-(2,5-дигидрокси-3,4,6-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп2-ен-1-он
1-(2,5-диметокси-3,4,6-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
1-(2,5 -дигидроксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
- 5 011305
1-(4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
1-(4-(пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-(пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(4-((Я,8)-5-[1,2]дитиолан-3-илпентилокси)фенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметокси3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
- 6 011305
1-(4-((Я,8)-5-[1,2] дитиолан-3 -илпентилокси)фенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-
1-(4-метилтиофенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен1-он
1-(4-циклогексилэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-циклогексилэтилоксифенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикаронилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
- 7 011305
1-(4-пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-6утилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен1-он
1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(4-гексилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-
1-(4-гексилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен1-он
1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
- 8 011305
1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
о
1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп2-ен-1-он
1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-метилтиофенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3-фторфенил)проп-2-ен-1 он
- 9 011305
1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
1-(4-фенилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
1-(4-метокси-3-фторфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он:
1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
- 10 011305
1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-
1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил-3-(4-этилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он гидрохлорид
1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-
1-(4-бромфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он
Р о
О
- 11 011305
1-(4-бромфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он
Р о
о
1-(4-метокси-3 -трифторметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
1-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Объектом настоящего изобретения является также способ получения соединений формулы (I).
Данный способ имеет множество преимуществ. Его легко осуществить в промышленном масштабе, он позволяет получать соединения формулы (I) с большим выходом.
Способ согласно изобретению включает взаимодействие в щелочной или кислой среде по меньшей мере одного соединения формулы (А) и по меньшей мере одного соединения формулы (В), где формулами (А) и (В) являются
где Х1 Х2, Х3, Х4, Х5, Х6, Х- и Х8 имеют указанные выше значения, Х7 также может означать гидроксильную или тиольную группу. Условия проведения этой реакции в кислой или щелочной среде известны среднему специалисту и могут варьироваться в широком диапазоне.
Предпочтительно проводить реакцию с использованием обоих соединений в стехиометрическом количестве при температуре окружающей среды (от около 18 до 25°С) и атмосферном давлении.
В щелочной среде реакцию предпочтительно проводить в присутствии сильного основания, такого как гидроксид щелочного металла, например гидроксид натрия, или алкоголят щелочного металла, такого как этилат натрия.
В кислой среде реакцию предпочтительно проводить в присутствии сильной кислоты, такой как соляная.
Схема реакции может иметь следующий вид:
Синтез в щелочной среде может быть проведен в следующих условиях: 1 молярный эквивалент ке- 12 011305 тона (соединение (А)) и 1 молярный эквивалент альдегида (соединение В) растворяют в водно-спиртовом растворе гидроксида натрия с концентрацией, равной 20 молярным эквивалентам. Реакционную массу перемешивают в течение около 18 ч при температуре окружающей среды (18-25°С). Затем реакционную среду подкисляют (для доведения рН до около 2), в частности, соляной кислотой.
Требуемый замещённый 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-он может быть получен осаждением или твёрдой/жидкой экстракцией после выпаривания реакционной среды. Полученный продукт может быть очищен хроматографией на силикагеле или перекристаллизацией.
Синтез в кислой среде может быть проведен в следующих условиях: 1 молярный эквивалент кетона (соединение (А)) и 1 молярный эквивалент альдегида (соединение (В)) растворяют в растворе этанола, насыщенном газообразным хлористым водородом. Реакционную массу перемешивают при температуре окружающей среды в течение около 6 ч, удаляют растворитель, в частности, выпариванием под пониженным давлением. Замещённый 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-он очищают, в частности, хроматографией на силикагеле.
Способ получения соединений формулы (I) позволяет получать соединения, называемые ниже промежуточными. Объектом настоящего изобретения являются также определенные исходные материалы и промежуточные соединения, получаемые в рамках настоящего изобретения.
Промежуточные соединения наиболее предпочтительно выбирают из группы, содержащей 1-(4-(пентилтиоэтилокси)фенил-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
1-(4-((Я,8)-5-[1,2] дитиолан-3 -илпентилокси)фенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 он;
1-(4-метилтиофенил)-3-(4-гидрокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен-1-он; 1-((4-циклогексилэтилокси)фенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
1-((4-циклогексилэтилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-((4-циклогексилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(4-(циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(4-метилтиофенил)-3-(4-гидрокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он;
1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он; 1-(4-феноксифенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
1-(4-метокси-3 -фторфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он; 1-(2,5-диметоксифенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
1-(4-бромфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он;
1-(4-метокси-3 -трифторметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он.
Объектом настоящего изобретения являются, кроме того, соединения общей формулы (I), такие как описанные выше, в качестве лекарственных средств.
Объектом настоящего изобретения является также фармацевтическая и/или косметическая композиция, содержащая, при наличии фармацевтически и/или косметически приемлемого носителя, по меньшей мере одно соединение общей формулы (I), такое как описано выше, при необходимости в ассоциации с другим терапевтически и/или косметически активным началом.
Имеется в виду фармацевтическая и/или косметическая композиция для лечения сердечнососудистых заболеваний, разных видов дислипидемии, паталогий, связанных с синдромом X, диабета, ожирения, гипертензии, воспалительных заболеваний, дерматологических заболеваний (псориаз, атопические дерматиты, угри и пр.), астмы, нарушений, вызванных окислительным стрессом, старения в целом и, например, старения кожи, в частности в области косметологии (появление морщин и пр.).
С другой стороны, фармацевтические и/или косметические композиции согласно изобретению могут оказывать профилактическое действие в виде нейрозащиты, а также они обеспечивают активную нейрозащиту при обострении церебральной ишемии. Наконец, фармацевтическая и/или косметическая композиция является эффективной при профилактике и/или лечении множественных факторов сердечнососудистого риска, обусловленного нарушениями липидного и/или углеводного метаболизма (гиперлипидемия, диабет, ожирение и пр.), при этом достигается общее снижение риска.
Также изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) при получении фармацевтической и/или косметической композиции, предназначенной для осуществления способа профилактики или лечения организма человека или животного.
Изобретение относится также к способу лечения патологий, вызванных метаболизмом липидов и/или углеводов, при этом предусматривается приём пациентом эффективной дозы соединения или фармацевтической композиции, описанных выше.
Предпочтительно, чтобы фармацевтические композиции согласно изобретению содержали одно или несколько инертных веществ или наполнителей, являющихся фармацевтически приемлемыми.
- 13 011305
Можно указать, например, на солевые, физиологические, изотонические, буферные и другие растворы, приемлемые для фармацевтического применения и известные среднему специалисту. Композиции могут содержать одно или несколько веществ или наполнителей, выбранных из диспергаторов, растворителей, стабилизаторов, консервантов и пр. Веществами или наполнителями, используемыми в таких композициях (жидких, и/или инъецируемых, и/или твёрдых), являются, в частности, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, полисорбат 80, маннитол, лактоза, растительные масла, масло акации и пр. Композиции могут быть приготовлены в виде инъецируемых суспензий, гелей, масел, таблеток, свечей, порошков, желатиновых и других капсул и пр., при необходимости посредством фармацевтических форм или с применением устройств, обеспечивающих замедленное выделение. Предпочтительно применять для такого типа композиции такое вещество, как целлюлоза, карбонаты или крахмалы.
Соединения или композиции согласно изобретению могут назначаться для применения разными способами и в разных формах. Так, они могут инъецироваться орально или системно, например внутривенно, внутримышечно, подкожно, чрезкожно, интраартериально и пр. Для инъекций соединения приготовлены, как правило, в виде жидких суспензий, которые могут вводиться, например, посредством шприцов или перфузией. Само собой разумеется, что вводимая доза определяется специалистом с учётом пациента, патологии, способа введения и пр. Как правило, соединения прописываются в дозах, которые могут варьировать от 1 мкг до 2 г за один приём, предпочтительно 0,1 мг - 1 г за один приём. Приём может назначаться ежедневным или, при необходимости, неоднократным в течение дня. С другой стороны, соединения согласно изобретению могут дополнительно содержать другие вещества или активные начала.
Краткое описание фигур
Фиг. 1а, 1Ь, 1с поясняют противоокислительное свойство соединения 2 (Срб 2) согласно изобретению, тестирование которого проводилось при концентрации 10-4 М.
Фиг. 1а - кинетика во время образования диеновых коньюгатов. Ьад-фаза составляет 120 мин в том случае, когда инкубация липопротеинов низкой плотности (ЬПЬ) проводилась с применением одной только меди. Эта продолжительность составила 314 мин в том случае, когда в среде содержится также соединение 2.
Фиг. 1Ь - скорость образования диенов. Она составляет 1,8 нмоля/мин/мг ЬПЬ в присутствии одной только меди, она не превышает 0,1 нмоля/мин/мг ЬПЬ в том случае, когда в среде присутствует соединение 2.
Фиг. 1с - максимальное количество диеновых коньюгатов, образовавшихся во время опыта. Одна только медь вызывает образование 372 нмоля/мг сопряжённых диенов, это количество составляет 35 нмолей/мг в том случае, когда среда также содержит соединение 2, что свидетельствует об уменьшении на 90% количества образовавшихся диеновых коньюгатов.
Фиг. 2а, 2Ь, 2с - противоокислительные свойства соединений 4 (Срб 4), 6 (Срб 6) и 8 (Срб 8) согласно изобретению, тестирование которых проводилось при концентрации 10-4 М.
Фиг. 2 - кинетика образования сопряжённых диенов. Ьад-фаза составляет 122 мин в том случае, когда инкубация ЬПЬ проводится в присутствии только одной меди. Временное значение Ьад-фазы составляет соответственно 401, 205 и 169 мин в присутствии соединений 4, 6 и 8.
Фиг. 2Ь - расчёт скорости образования диенов. Скорость образования сопряжённых диенов в присутствии меди составляет 2,2 нмоля/мин/мг ЬПЬ. Присутствие соединений 4, 6 и 8 вызывает снижение скорости протекания реакции окисления диенов. Она составляет 0,2 нмоля/мин/мг в присутствии соединения 4 и 1,7 нмоля/мин/мг в присутствии соединения 6 или соединения 8. Общее количество образовавшихся диенов (фиг. 2с) составляет 511 нмолей/мг ЬПЬ в присутствии одной только меди. В присутствии соединений 4, 6, 8 это количество достигает 138, 443 и 474 нмоля/мг соответственно.
Фиг. 3 а - противоокислительное свойство соединения 11 (Срб 11) согласно изобретению.
Противоокислительное свойство соединения 11 было выявлено при разных концентрациях, составивших 10-6-3,5х10-5 М.
При отсутствии соединения 11 1ад-фаза составляет 87,2 мин. Начиная с концентрации 10-6 М, отмечается увеличение 1ад-фазы по отношению к контрольной: 1ад-фаза составляет 101,5 мин в присутствии соединения 11 при концентрации 10-6 М. Она возрастает в зависимости от концентрации соединения в среде и достигает наблюдавшегося максимального значения 210 мин при концентрации.
Фиг. 4а, 4Ь, 4с - противоокислительное свойство соединений 19 (Срб 19) и 23 (Срб 23) согласно изобретению, тестирование которых проводилось при концентрации 10-4 М.
Фиг. 4а - кинетика образования сопряжённых диенов. Ьад-фаза длилась 61 мин в присутствии одной только меди. В присутствии соединения 19 1ад-фаза составила 92,5 мин. В присутствии соединения 23 она составила 96,4 мин.
Противоокислительное свойство соединений 19 и 23 проявляется также в снижении скорости образования диенов, а также в уменьшении общего количества образовавшихся диенов.
При отсутствии соединения скорость образования диенов составляет 1,9 нмоля/мин/мг ЬПЬ (фиг. 4Ь). Она составляет соответственно 1,6 и 1,3 нмоля/мин/мг ЬПЬ в присутствии соединений 19 и 23. При
- 14 011305 отсутствии соединения общее количество образовавшихся диенов составляет 370,9 нмоля/мг ЬОЬ (фиг. 4с). Оно составляет соответственно 346,6 и 340,3 нмоля/мг ЬОЬ в присутствии соединений 19 и 23.
Фиг. 5а, 5Ь, 5с - противоокислительное свойство соединений 25 (Срй 25), 27 (Срй 27), 29 (Срй 29) и 31 (Срй 31) согласно изобретению, тестирование которых проводилось при концентрации 10-4 М.
Фиг. 5а - кинетика окисления ЬОЬ в присутствии разных соединений: она возрастает в присутствии разных противоокислительных соединений и составляет 54,9 мин в присутствии соединения 29. Кинетика составляет 87,6 мин в присутствии соединения 25, 124,5 мин в присутствии соединения 31 и достигает 170,8 мин в присутствии соединения 27.
Противоокислительное свойство этих соединений подтверждается скоростью окисления ЬПЬ (фиг. 5Ь), а также замеренным общим количеством образовавшихся диенов (фиг. 5с).
Скорость окисления ЬПЬ составляет 2 нмоля/мин/мг при отсутствии соединений (фиг. 5Ь). Присутствие соединений вызывает снижение скорости окисления. Последняя составляет 1,6 ммоля/мин/мг в присутствии соединения 25 и 1,4 нмоля/мин/мг в присутствии соединения 31. Эта скорость является минимальной в присутствии соединения 27 и составляет 0,8 нмоля/мин/мг.
Общее количество образовавшихся диенов составляет 386 нмолей/мг ЬПЬ при отсутствии соединений (фиг. 5с). Оно составляет 374 нмоля/мг в присутствии соединения 27, 365 нмолей/мг в присутствии соединения 25 и 352 нмоля/мг в присутствии соединения 31.
Фиг. 6а, 6Ь, 6с - противоокислительное свойство соединения 37 (Срй 37) согласно изобретению, тестированного при концентрации 10-4 М.
Фиг. 6 - кинетика окисления ЬПЬ. Присутствие соединения в среде вызывает увеличение 1ад-фазы. Она достигает 106 мин в присутствии соединения 37, в то время как при отсутствии этого соединения она составляет всего лишь 56 мин.
Снижение скорости окисления ЬПЬ и уменьшение количества образовавшихся диенов также свидетельствуют о противоокислительном свойстве тестированного соединения. При отсутствии соединения скорость окисления составляет 2 нмоля/мин/мг ЬПЬ, в присутствии же соединения она достигает 1,8 нмоля/мин/мг ЬПЬ (фиг. 6Ь). При отсутствии соединения общее количество образовавшихся диенов составляет 360,0 нмолей/мг ЬПЬ. В присутствии соединения 37 оно составляет всего лишь 326,9 нмолей/мг ЬПЬ (фиг. 6с).
Фиг. 7а, 7Ь, 7с - противоокислительное свойство соединений 13 (Срй 13), 33 (Срй 33), 41 (Срй 41), 47 (Срй 47) согласно изобретению, тестированных при концентрации 10-4 М.
Фиг. 7а - кинетика окисления ЬПЬ. При отсутствии противоокислительных соединений 1ад-фаза составляет 67,3 мин. Эта фаза возрастает в присутствии разных соединений, она составляет 100 мин в присутствии соединения 41, 126,5 мин в присутствии соединения 47, 148 мин в присутствии соединения 33 и 219 мин в присутствии соединения 13.
Присутствие соединений в среде сказывается также на скорости окисления ЬПЬ и на общем количестве образовавшихся диенов.
Соединения 13 и 33 вызывают значительное снижение скорости окисления диенов (фиг. 7Ь). Скорость окисления диенов составляет 2,5 нмоля/мин/мг ЬПЬ при отсутствии соединений. Она составляет соответственно 1,5 и 1,4 нмоля/мин/мг ЬПЬ в присутствии соединений 13 и 33.
Только соединения 33 и 41 вызывают уменьшение общего количества образовавшихся диенов (фиг. 7с). Общее количество образовавшихся диенов составляет 432,5 нмоля/мг ЬПЬ при отсутствии соединения. Оно составляет 399 нмолей/мг ЬПЬ в присутствии соединения 33 и 403 нмоля/мин/мг ЬПЬ в присутствии соединения 41.
Фиг. 8а, 8Ь, 8с - противоокислительное свойство соединений 17 (Срй 17), 21 (Срй 21), 39 (Срй 39) и 43 (Срй 43) согласно изобретению, тестированных при концентрации 10-4 М.
Кинетика окисления ЬПЬ представлена на фиг. 8а. При отсутствии соединения 1ад-фаза составляет
67.3 мин. Она возрастает в присутствии соединений 17, 39 и 43. В присутствии соединения 43 фаза 1ад составила 97 мин. В присутствии соединения 17 она составляет 148 мин, в присутствии соединения 39 133 мин.
Фиг. 8Ь - скорость окисления ЬПЬ. При отсутствии соединения эта скорость составляет 2,5 нмоля/мин/мг. В присутствии соединения 17 она составляет 1,8 нмоля/мин/мг. В присутствии соединения 39 скорость окисления составляет 1,2 нмоля/мин/мг, в присутствии соединения 43 - 2,2 нмоля/мин/мг.
Фиг. 8с - общее количество диенов, образовавшихся во время окисления. Только соединение 39 вызывает значительное снижение общего количества образовавшихся диенов. Это количество составляет
432.3 нмоля/мин/мг при отсутствии соединения и 371,2 нмоля/мин/мг в присутствии соединения 39.
Удлинение 1ад-фазы образования сопряженных диенов, снижение скорости образования диенов и уменьшение общего количества образовавшихся диенов - вот три параметра, которые свидетельствуют о противоокислительном свойстве соединений согласно изобретению.
Фиг. 9а, 9Ь - оценка агонистических свойств ΡΡΆΚα и ΡΡΆΚγ, присущих соединениям согласно изобретению, посредством системы трансактивации ΡΡΛΡα/ΟηΠ и ΡΡΛΡγΟηΠ в клетках КК13.
Клетки КК13 инкубировали в присутствии соединения 2 при его концентрациях 0,01-10 мкМ в те
- 15 011305 чение 24 ч. Результаты представлены через коэффициент индукции (соотношение между люминисцирующим сигналом, полученным при использовании соединения, и люминисцирующим сигналом, полученным без применения соединения) в зависимости от разных видов лечения. Чем больше коэффициент индукции, тем лучше агонистическое свойство, проявляемое в отношении ΡΡΑΚα и ΡΡΑΚγ.
Результаты, представленные на фиг. 9а, свидетельствуют о факторах индукции соединения 2 в системе трансактивации ΡΡΑΚα/ΟηΙ4. Величины этих факторов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соедннение Лечение Коэффициент индукции
Ср4 2 1 мкМ 8,83
10 мкМ 18,49
Коэффициент индукции, замеренный для соединения 2, является максимальным при дозе 10 мкМ и достигает значения 18,49.
Результаты, представленные на фиг. 9Ь, свидетельствуют о факторах индукции соединения 2 в системе трансактивации ΡΡΑΚγ/0ηΙ4. Величины этих факторов индукции приведены в нижеследующей таб лице:
Соединение Лечение Коэффициент индукции
Г*г*г1 9 0,01 мкМ 1,31
л- 0,03 мкМ 1,18
0,1 мкМ 1,73
0,3 мкМ 4,58
1 мкМ 9,50
3 мкМ 16,64
10 мкМ 31,00
В отношении системы ΡΡΑΚγ/0ηΙ4 следует отметить, что коэффициент индукции изменяется от 1,31 до 31,00, он возрастает с увеличением концентрации соединения 2 в среде.
Фиг. 10а, 10Ь, 11а, 11Ь, 11с, 12а, 12Ь, 13а, 13Ь, 14а, 14Ь, 14с, 15а, 15Ь, 15с, 16а, 17а, 18а, 18Ь - оценка агонистических свойств ΡΡΑΚα, ΡΡΑΚγ и ΡΡΑΚδ, присущих соединениям согласно изобретению, в системе трансактивации ΡΡΑΚα/СаI4, ΡΡΑΚγ/СаI4 и ΡΡΑΚδ/СаI4 в клетках СО8-7.
Клетки СО8-7 инкубировали в присутствии соединений согласно изобретению при их разных концентрациях в течение 24 ч. Результаты представлены через коэффициент индукции (соотношение между люминисцирующим сигналом, полученным с помощью соединения, и люминисцирующим сигналом, полученным без соединения) в зависимости от разных видов обработки.
Фиг. 10а и 10Ь - коэффициенты индукции соединений 4 (Срб 4), 6 (Срб 6) и 8 (Срб 8) согласно изобретению. Представленные на фиг. 10а результаты касаются коэффициентов индукции соединений 4 (Срб 4), 6 (Срб 6) и 8 (Срб 8) в системе трансактивации ΡΡΑΚα/СаI4. Значения этих коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срб4 1 мкМ 1,67
10 мкМ 9,92
1 мкМ 5,48
10 мкМ 7,01
1 мкМ 15,67
10 мкМ 12,66
Максимальный коэффициент индукции, замеренный для соединения 4, составил 9,92 при 10 мкМ. Для соединения 6 (10 мкМ) эта величина составляет 7,01, для соединения 8 (1 мкМ) - 15,67.
Представленные на фиг. 10Ь результаты относятся к коэффициентам индукции соединений 4, 6, 8 в системе трансактивации ΡΡΑΚγ/0ηΙ4. Значения этих коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срб 4 1 мкМ 2,00
10 мкМ 5,82
Срс1 6 1 мкМ 4,12
10 мкМ 6,83
Срб8 1 мкМ 2,13
10 мкМ 2,74
Соединение 4 имеет максимальный коэффициент индукции 5,82 при концентрации 10 мкМ.
Максимальное значение коэффициента индукции для соединения 6 составило 6,83 (10 мкМ) и для соединения 8 - 2,74 (10 мкМ).
Фиг. 11а, 11Ь, 11с - коэффициенты индукции соединения 13 согласно изобретению (Срб 13).
Фиг. 11а - коэффициенты индукции соединения 13 в системе трансактивации ΡΡΑΚα/СаI4. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
- 16 011305
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Ср4 13 0,001 мкМ 1,10
0,003 мкМ 1,58
0,01 мкМ 4,99
0,03 мкМ 10,89
0,1 мкМ 16,87
0,3 мкМ 15,95
1 мкМ 17,05
Максимальная величина составила 17,05 при концентрации 1 мкМ.
Фиг. 11Ь - коэффициенты индукции соединения 13 в системе трансактивации РРАВу/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срс1 13 0,001 мкМ 0,99
0,003 мкМ 1,15
0,01 мкМ 1,67
0,03 мкМ 2,18
0,1 мкМ 3,01
0,3 мкМ 3,66
1 мкМ 4,03
3 мкМ 3,89
Максимальная величина составила 4,03 при концентрации 1 мкМ.
Фиг. 11с - коэффициенты индукции соединения 13 в системе трансактивации РРАВ5/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
СрйЗ 0,01 мкМ 1,50
0,03 мкМ 2,17
0,1 мкМ 3,37
0,3 мкМ 14,00
1 мкМ 28,75
3 мкМ 27,72
Максимальное значение отмечено при концентрации 1 мкМ, оно составило 28,75.
Фиг. 12а, 12Ь - коэффициенты индукции соединения 23 согласно изобретению, (Срй 23).
Фиг. 12а - коэффициенты индукции соединения 23 в системе трансактивации РРАВа/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срс! 23 0,0003 мкМ 0,92
0,001 мкМ 1,11
0,003 мкМ 1,33
0,01 мкМ 2,35
0,03 мкМ 4,22
0,1 мкМ 7,16
0,3 мкМ 8,08
1 мкМ 8,35
3 мкМ 7,15
Максимальное значение составило 8,35, оно было получено, начиная с концентрации 1 мкМ.
Фиг. 12Ь - коэффициенты индукции соединения 23 в системе трансактивации РРАВу/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срй 23 0,0003 мкМ 1,02
0,001 мкМ 1,43
0,003 мкМ 2,86
0,01 мкМ 3,48
0,03 мкМ 5,04
0,1 мкМ 6,17
0,3 мкМ 6,84
1 мкМ 7,24
3 мкМ 6,98
Максимальное значение составило 7,24, оно было получено, начиная с концентрации 1 мкМ.
Фиг. 13 а, 13Ь - коэффициенты индукции соединения согласно изобретению, (Срй 29).
Фиг. 13а - коэффициенты индукции соединения 29 в системе трансактивации РРАВа/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
- 17 011305
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Ср4 29 0,001 мкМ 1,09
0,003 мкМ 1,20
0,01 мкМ 1,49
0,03 мкМ 2,85
0,1 мкМ 6,93
0,3 мкМ 12,51
1 мкМ 15,56
3 мкМ 15,75
Максимальное значение составило 15,75, оно было получено при концентрации 3 мкМ.
Фиг. 13Ь - коэффициенты индукции соединения 29 в системе трансактивации РРАК5/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срб29 0,001 мкМ 1,03
0,003 мкМ 1,07
0,01 мкМ 1,26
0,03 мкМ 1,63
0,1 мкМ 4,07
0,3 мкМ 11,61
1 мкМ 33,78
3 мкМ 60,81
10 мкМ 87,56
Максимальное значение составило 87,56, оно было получено при концентрации 10 мкМ. Фиг. 14а, 14Ь, 14с - коэффициенты индукции соединения 31 согласно изобретению (Срб31).
Фиг. 14а - коэффициенты индукции соединения 31 в системе трансактивации РРАКа/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
СрбЗ! 0,001 мкМ 1,10
0,003 мкМ 1,09
0,01 мкМ 1,23
0,03 мкМ 1,23
0,1 мкМ 1,23
0,3 мкМ 1,73
1 мкМ 1,88
3 мкМ 3,69
10 мкМ 6,03
Максимальное значение составило 6,03, оно было получено при концентрации 10 мкМ.
Фиг. 14Ь - коэффициенты индукции соединения 31 с применением системы трансактивации
РРАЯу/Са14. Значения этих коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срб31 0,001 мкМ 1,44
0,003 мкМ 2,19
0,01 мкМ 3,06
0,03 мкМ 4,87
0,1 мкМ 5,99
0,3 мкМ 6,96
1 мкМ 7,05
3 мкМ 7,79
Максимальное значение составило 7,79, оно было получено при концентрации 3 мкМ.
Фиг. 14с - коэффициенты индукции соединения 31 с применением системы трансактивации
РРАК5/Са14. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
Срб31 0,001 мкМ 1,00
0,003 мкМ 1,05
0,01 мкМ 1,09
0,03 мкМ 1,16
0,1 мкМ 1,35
0,3 мкМ 2,67
1 мкМ 4,12
3 мкМ 10,82
10 мкМ 11,70
- 18 011305
Максимальное значение составляет 11,70, оно было получено при концентрации 10 мкМ. Фиг. 15а, 15Ь, 15с - коэффициенты индукции соединения 33 согласно изобретению (Срб 33).
Фиг. 15а - коэффициенты индукции соединения 33 с применением системы трансактивации РРАВа/Са!4. Значения этих коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
СрбЗЗ 0,001 мкМ 5,23
0,003 мкМ 15,18
0,01 мкМ 19,53
0,03 мкМ 19,71
0,1 мкМ 19,17
0,3 мкМ 20,82
1 мкМ 19,97
Максимальное значение составляет 20,82, оно было получено при концентрации 0,3 мкМ.
Фиг. 15Ь - коэффициенты индукции соединения 33 с применением системы трансактивации РРАВу/Са!4. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
СрбЗЗ 0,001 мкМ 1,18
0,003 мкМ 1,61
0,01 мкМ 2,65
0,03 мкМ 3,54
0,1 мкМ 4,88
0,3 мкМ 5,95
1 мкМ 6,93
3 мкМ 7,99
10 мкМ 6,30
Максимальное значение составляет 7,99, оно было получено при концентрации 3 мкМ.
Фиг. 15с - коэффициенты индукции соединения 33 с применением системы трансактивации РРАВ5/Са!4. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
СрбЗЗ 0,001 мкМ 1,17
0,003 мкМ 1,23
0,01 мкМ 1,87
0,03 мкМ 5,29
0,1 мкМ 15,01
0,3 мкМ 33,89
1 мкМ 74,09
3 мкМ 90,84
Максимальное значение составляет 90,84, оно было получено при концентрации 3 мкМ. Фиг. 16а - коэффициенты индукции соединения 35 согласно изобретению (Срб 35).
На фиг. 16а приведены коэффициенты индукции соединения 35 с применением системы трансактивации РРАВаСа!4. Значения коэффициентов индукции указаны в нижеследующей таблице:
Соединение Обработка Коэффициент индукции
0,003 мкМ 1,41
0,01 мкМ 1,54
0,03 мкМ 2,53
0,1 мкМ 7,47
0,3 мкМ 15,51
1 мкМ 24,33
3 мкМ 23,70
10 мкМ 21,03
Максимальное значение составляет 24,33, оно было получено при концентрации 1 мкМ.
Фиг. 17а - коэффициенты индукции соединения 37 согласно изобретению (Срб 37) с применением системы трансактивации РРАВа/Са14.
Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
- 19 011305
Соединение Обработка Коэффициент индукции
0,01 мкМ 1,54
0,03 мкМ 2,54
0,1 мкМ 7,89
0,3 мкМ 17,25
1 мкМ 19,77
3 мкМ 16,89
Максимальное значение составляет 19,77, оно было получено при концентрации 1 мкМ. Фиг. 18а, 18Ь - коэффициенты индукции соединения 39 согласно изобретению (Ср6 39).
Фиг. 18а - коэффициенты индукции соединения 39 с применением системы трансактивации ΡΡΛΡ(/./0;·ιΙ4. Значения коэф( )ициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение
Обработка Коэффициент индукции
0,001 мкМ 1,08
0,003 мкМ 1,17
0,01 мкМ 3,19
0,03 мкМ 7,69
0,1 мкМ 9,68
0,3 мкМ 10,16
1 мкМ 10,42
3 мкМ 9,96
Максимальное значение составляет 10,42, оно было получено при концентрации 1 мкМ.
Фиг. 18Ь - коэффициенты индукции соединения 39 с применением системы трансактивации
ΡΡΛΡγ/0;·ιΙ4. Значения коэффициентов индукции приведены в нижеследующей таблице:
Соединение
Обработка Коэффициент индукции
0,001 мкМ 0,95
0,003 мкМ 0,96
0,01 мкМ 1,56
0,03 мкМ 3,06
0,1 мкМ 4,08
0,3 мкМ 4,86
1 мкМ 4,78
3 мкМ 4,72
Максимальное значение составляет 4,86, оно было получено при концентрации начиная от 0,3 мкМ.
Представленные на фигурах результаты свидетельствуют о том, что тестированные соединения согласно изобретению обладают свойством лиганда по отношению к ΡΡΆΚα, ΡΡΆΚγ и/или РРЛК5. Также они обеспечивают активацию на уровне транскрипции ядерных рецепторов.
На фиг. 19а, 19Ь, 19с, 196, 20а, 20Ь, 20с, 206 показаны результаты воздействия соединений 2 (Ср6 2), 13 (Ср6 13), 33 (Ср6 33) и 39 (Ср6 39) на метаболизм триглицеридов и холестерин у трансгенных мышей Аро Е2/Е2. С помощью желудочного зонда животным вводили 50 мг соединения в расчёте на 1 кг веса в день в течение 7 суток.
Фиг. 19а, 19Ь - снижение в плазме уровня триглицеридов и холестерина посредством соединения 2.
Фиг. 20а, 20Ь - снижение в плазме уровня триглицеридов и холестерина посредством соединений 13, 33 и 39.
Фиг. 19с, 196 - распределение триглицеридов и холестерина в липочастицах, полученное с помощью эксклюзионной хроматографии и вызванное воздействием соединением 2.
Фиг. 20с, 206 - распределение триглицеридов и холестерина в липочастицах, полученное эксклюзионной хроматографией и вызванное воздействием соединениями 13, 33 и 39.
Было отмечено типичное распределение триглицеридов и холестерина, локализованное, главным образом, в липочастицах крупного размера. Также наблюдалось снижение триглицеридов и холестерина в указанном классе липочастиц, вызванное воздействием разными, применявшимися при тестировании соединениями.
Фиг. 21 - интерференция соединения согласно изобретению с дифференциацией дендритных кле ток.
Соединение 39 (10-6 М) добавляли при ΌΘ дифференциации моноцитов в дендритных клетках. Через 6 суток дифференциации (в присутствии цитокинов СМ-С8Е и 1Ь-4) провели анализ дендритных клеток посредством проточной цитометрии. (—): флуорохром, связанный с АЬ по отношению к контрольному изотопу (в чёрном цвете): Е1ТС - флуоресцирующий изотиоцианат, связанный с АЬ против СО 1а, или РЕ (пикоэритрин), связанный с АЬ против СО 86.
Фиг. 22 - интерференция соединений согласно изобретению с созреванием дендритных клеток, вызванных воздействием ΕΡ8 (липополисахариды).
Эти дендритные клетки инкубировали в течение 4 ч с применением соединений 31, 13 или 39, после
- 20 011305 этого оказывали стимулирующее воздействие посредством ЬР8 в течение 16 ч. Транскрипты ССИ7 и ЕЬС анализировали методом количественного ИТ-РСИ. а цитокин ΤΝΡ-альфа анализировали методом ЕЫ8А.
Фиг. 23 - смешанная лимфоцитарная реакция (МЬЯ). проведённая в присутствии возрастающего количества дентритных клеток после или без воздействия на них соединением 31. инкубированных с применением нативных СЭД+Т клеток в течение 7 суток. Пролиферацию Т-клеток измеряли определением включения бромдезоксиуридина (ВгбИ).
Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения поясняются ниже с помощью примеров. которые приведены в качестве поясняющих и не являющихся ограничивающими.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Синтез соединений согласно изобретению.
Соединения согласно изобретению получают общими методами. описанными ниже.
Описание общих методов синтеза согласно изобретению
Синтез 1.3-дифенилпроп-2-ен-1 -онов
Общий метод 1
Синтез 1.3-дифенилпроп-2-ен-1-онов в кислой среде.
Кетон (1 экв.) и альдегид (1 экв.) растворяют в растворе этанола. насыщенном газообразным хлористым водородом. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч. затем удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении. 1.3-Дифенилпроп~2-ен-1-он очищают хроматографией на силикагеле или перекристаллизацией.
Общий метод 2
Синтез 1.3-дифенилпроп-2-ен-1-онов в присутствии гидроксида натрия.
Кетон (1 экв.) и альдегид (1 экв.) растворяют в водно-спиртовом растворе натрия (20 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температуре. Среду подкисляют до рН 2 соляной кислотой.
1.3-Дифенилпроп-2-ен-1-он получают осаждением или путем экстракции в системе «твёрдый/жидкий» после выпаривания реакционной среды. Полученный продукт очищают хроматографией на силикагеле или перекристаллизацией.
Общий метод 3
Синтез замещенных 1.3-дифенилпроп-2-ен-1-онов в присутствии этилата натрия.
Натрий (1 экв.) растворяют в абсолютном этаноле. Добавляют кетон (1 экв.) и альдегид (1 экв.). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. затем добавляют 2Ν раствор гидроксида натрия (5 экв.). Реакционную массу выдерживают при 100°С в течение 12 ч. Реакционную среду подкисляют добавлением 6Ν водного раствора соляной кислоты. Растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Осадок очищают хроматографией на силикагеле или перекристаллизацией.
О-Алкилирование фенолов или тиофенолов
Общий метод 4
Фенол (1 экв.) или тиофенол (1 экв.) растворяют в ацетонитриле. добавляют галогенсодержащее производное (1-10 экв.) и карбонат калия (5 экв.). Реакционную смесь выдерживают в течение около 10 ч при интенсивном перемешивании с дефлагматором. Соли удаляют фильтрацией. растворитель и избыток реагента удаляются выпариванием при пониженном давлении. полученный продукт очищается хроматографией на силикагеле.
Общий метод 5
Спирт (1 экв.). фенол (1 экв.) и трифенилфосфин растворяют в дихлорметане. Добавляют диизопропилазодикарбоксилат (1 экв.) и реакционную массу выдерживают при перемешивании в течение 12 ч при комнатной температуре.
Реакционную смесь промывают водой. сушат над сульфатом магния и выпаривают при пониженном давлении. Остаток после выпаривания очищают хроматографией на силикагеле.
Кислотный гидролиз сложных трет-бутиловых эфиров
Общая методика 6
Сложный трет-бутиловый эфир (1 экв.) растворяют в дихлорметане. затем добавляют трифторуксусную кислоту (10 экв.). Реакционную массу перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Полученный в результате продукт очищают хроматографией на силикагеле или перекристаллизацией.
Синтез исходных материалов. используемых для синтеза соединений согласно изобретению. Исходный материал 1 4'-(Бромэтилокси)ацетофенон
- 21 011305
Это соединение синтезируют из 4'-гидроксиацетофенона и дибромэтана с помощью описанной выше общей методики 4.
Очистка производится методом хроматографии на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат 9:1).
'Н ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,55(8, 3Н), 3,66(1, 2Н, 1 = 6,50 Гц), 4,35(ΐ, 2Н, 1 = 6,50 Гц), 6,94(й, 2Н, 1 = 7,23 Гц), 7,94(й, 2Н, 1 = 7,23 Гц).
Исходный материал 2
4'-(Пентилтиоэтилокси)ацетофенон
Исходный материал 1 (1 экв.) и пентантиол (1 экв.) растворяют в метаноле в присутствии триэтиламина (2 экв.). Реакционную смесь кипятят в течение 18 ч с дефлегматором, растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Масло экстрагируют этилацетатом, промывают 2Ν водным раствором соляной кислоты. 4'-(Пентилтиоэтилокси)ацетофенон получают после очистки на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат - 9:1).
Ίΐ ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 0,85(т, 3Н), 1,24 - 1,39(т, 4Н), 1,52 - 1,62(т, 2Н), 2,50(8, 3Н), 2,64(1, 2Н, 1 = 7,2 Гц), 2,94(1, 2Н, 1 = 6,8 Гц), 4,14(1, 2Н, 1 = 6,8 Гц), 6,88(й, 2Н, 1 = 8,7 Гц), 7,89(й, 2Н, 1 = 8,7 Гц).
Исходный материал 3
3,5-диметил-4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилоксибензальдегид
ОН
Это соединение синтезируют из 4-гидрокси-3,5-диметилбензальдегида и третбутилбромизобутирата в соответствии с общей методикой 4.
Очистку осуществляют методом хроматографии на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат 8:2).
Ίΐ ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,43(8, 6Н), 1,49(8, 9Н), 2,28(8, 6Н), 7,53(8, 2Н), 9,88(8, 1Н).
Исходный материал 4
4'-Гидрокси-3',5'-диметилацетофенон но.
но.
2,6-Диметилфенол (1 экв.) растворяют в хлорметилене и охлаждают раствор до 0°С, затем добавляют хлорид алюминия (3 экв.) и ацетилбромид (2 экв.). Реакционную массу перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, затем выливают на лёд. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном, органическую фазу промывают водой до нейтральной среды, сушат над сульфатом магния, растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Полученный промежуточный сложный эфир подвергают очистке методом хроматографии на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат - 9:1), затем экстрагируют 2Ν водным раствором гидроксида натрия (2,5 экв.). Смесь перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре и подкисляют разбавленной соляной кислотой. Осадок промывают водой до нейтрального состояния рН промывной воды.
' Н ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,30(8, 6Н), 2,54(8, 3Н), 7,65(8, 2Н).
Исходный материал 5
4'-((К,8)-5-[1,2]дитиолан-3-илпентилокси)ацетофенон
Это соединение синтезируют из 4-гидроксиацетофенона и (К,8)-5-[1,2]дитиолан-3-илпентанола в соответствии с общей методикой 5, описанной выше.
Полученный продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат - 95:5).
Ίΐ ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,42 - 1,62(т, 4Н), 1,62 - 1,75(т, 2Н), 1,75 - 1,89(т, 2Н), 1,89 -1,98(т, 1Н), 2,42 - 2,51 (т, 1Н), 2,56(8, 3Н), 3,08 - 3,21 (т, 2Н), 3,55 - 3,61 (т, 1Н), 4,06(1 2Н, 1 = 6,2 Гц), 6,92(й, 2Н, 1 =
- 22 011305
8,7 Гц), 7,93(0, 2Н, 1 = 8,7 Гц).
Это соединение синтезируют из 4-гидрокси-3,5-диметилбензальдегида и 2-гидрокси-2-фенилэтилацетата в соответствии с описанной выше методикой 5.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 9:1).
'|| ЯМР СЭСГ δ ч./млн: 1,22(1 3Н, 1 = 7,35 Гц), 2,20(8, 6Н), 4,16 - 4,28(т, 2Н), 5,3(8, 1Н), 7,38 7,51(т, 7Н), 9,87(8, 1Н).
Исходный материал 7
4'-(циклогексилэтил)оксиацетофенон
Это соединение синтезируют из 4'-гидроксиацетофенона и 2-циклогексилэтанола в соответствии с описанной выше общей методикой 5.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат) 9:1).
'|| ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 0,90 - 1,80(т, 13Н), 2,56(8, 3Н), 4,07(1, 2Н, 1 = 6,45 Гц), 6,92(0, 2Н, 1 = 8,80 Гц), 7,93(0, 2Н, 1 = 8,80 Гц).
Исходный материал 8
2,6-диметилтиоанизол
Это соединение синтезируют из 2,6-диметилтиофенола и метилйодида в соответствии с описанной выше методикой 4.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 9:1).
'Н ЯМР СОС1; δ ч./млн: 2,28 (8, 3Н), 2,62(8, 6Н), 7,16 (т, 3Н).
Исходный материал 9
3',5'-диметил-4'-метилтиоацетофенон
О
Исходный материал 8 (1 экв.) растворяют в хлорметилене, раствор охлаждают до 0°С, затем добавляют хлорид алюминия (2,5 экв.) и ацетилбромид (2 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 72 ч при комнатной температуре, затем выливают на лёд. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном, органическую фазу промывают водой до нейтральной среды, сушат над сульфатом магния и удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 9 : 1).
'|| ЯМР СОС1; δ ч./млн: 2,23(8, 3Н), 2,54(8, 3Н), 2,56(8, 6Н), 7,63(8, 2Н).
Исходный материал 10
4'-метокси-3',5-диметилацетофенон
Это соединение синтезируют из исходного материала 4 и метилйодида в соответствии с описанной выше методикой 4.
- 23 011305
Сырой продукт, полученный после отфильтровывания карбоната калия и удаления растворителей выпариванием при пониженном давлении используют для синтеза соответствующего промежуточного соединения.
'Н ЯМР СИС13 δ ч./млн: 2,31(8, 6Н), 2,54(8, 3Н), 3,74(8, 3Н), 7,63(8, 2Н).
Исходный материал 11
4'-циклогексилэтилокси-3',5-диметилацетофенон
Это соединение синтезируют из исходного материала 4 и 2-циклогексилэтанола в соответствии с описанной выше общей методикой 5.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 85:15).
Ίΐ ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 0,92 - 1,80(т, 13Н), 2,31(8, 6Н), 2,55(8, 3Н), 3,86(1, 2Н, 1 = 7,05 Гц), 7,63(8, 2Н).
Исходный материал 12
4'-(бромэтилокси)-3',5'-диметилацетофенон
Это соединение синтезируют из исходного материала 4 и дибромэтана в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 85:15).
Ίΐ ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 2,36(8, 6Н), 2,56(8, 3Н), 3,68(1, 2Н, 1 = 6,21 Гц), 4,14(1, 2Н, 1 = 6,21 Гц), 7,65(8, 2Н).
Исходный материал 13
4'-(циклогексилтиоэтилокси)ацетофенон
Это соединение синтезируют из 2,6-диметилтиофенола и гексилбромида в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент:циклогексан).
'Н ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 0,90(1, 3Н, 1 = 6,57 Гц), 1,27 - 1,58(т, 8Н), 2,57(8, 6Н), 2,66(1, 2Н, 1 = 7,11 Гц), 7,12(т, 3Н).
Исходный материал 17
3',5'-диметил-4'-гексилтиоацетофенон
Исходный материал 16 (1 экв.) растворяют в хлорметилене, раствор охлаждают до 0°С, добавляют хлорид алюминия (1 экв.) и ацетилбромид (1 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, затем выливают на лёд. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном, органическую фазу промывают водой до нейтральной среды, сушат над сульфатом магния, затем удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан).
Ίΐ ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 0,87(1, 3Н, 1 = 6,72 Гц), 1,22 - 1,53(т, 8Н), 2,58(8, 3Н), 2,59(8, 6Н), 2,68(1, 2Н,
- 24 011305 = 7,23 Гц), 7,66(к, 2Н).
Исходный материал 12 (1 экв.) и морфолин (0,7 экв.) растворяют в ацетоне и добавляют карбонат калия (1 экв.). Реакционную массу нагревают с обратным холодильником при кипячении в течение 72 ч. Карбонат калия отфильтровывают, растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Маслянистый остаток экстрагируют 1Ν водным раствором соляной кислоты и промывают этилацетатом. Водную фазу подщелачивают (рН 9) добавлением карбоната калия, затем экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, после чего удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении.
'Н ЯМР СИСЬ δ ч./млн: 2,33(8, 6Н), 2,54(8, 3Н), 2,60(1, 4Н, 1 = 4,70 Гц), 2,81(1, 2Н, 1 = 5,76 Гц), 3,76(1, 4Н, 1 = 4,70 Гц), 3,93(1, 2Н, 1 = 5,76 Гц), 7,62(8, 2Н).
Исходный материал 19
3,5-дифтор-4-гидроксибензальдегид
2,6-дифторфенол (1 экв.) и гексаметилентетрамин (2 экв.) растворяют в смеси вода/уксусная кислота (10:90). Реакционную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 18 ч и затем охлаждают до комнатной температуры.
Реакционную смесь экстрагируют дихлорметаном. Органические фазы объединяют и сушат над сульфатом магния. Растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении.
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 7,35(66, 2Н, 1 = 6,57 Гц, 1 = 2,82 Гц), 9,67(8, 1Н).
Исходный материал 20
4'-Метокси-3'-трифторметилацетофенон
4-Метокси-3-фторметилбензонитрил (1 экв.) растворяют в безводном тетрагидрофуране (ТГФ). Добавляют метилхлорид магния в виде раствора в ТГФ (1 экв.). Реакционную массу перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре, затем после добавления дополнительного количества метилхлорида магния (1 экв.) нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 1 ч.
Реакционную массу выливают в 1Ν водный раствор соляной кислоты и экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу нейтрализуют водным раствором бикарбоната калия и промывают водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, затем удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат 9:1).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 2,60(8, 3Н), 3,99(8, 3Н), 7,07(6, 1Н, 1 = 8,79 Гц), 8,14(6, 1Н, 1 = 8,79 Гц, 1=1,77 Гц), 8,19(8, 1Н).
Синтез промежуточных соединений, используемых для синтеза соединений согласно изобретению. Промежуточное соединение 1 1-(4-(Пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходного материала 2 и 4-гидрокси-3,5-диметилбензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 85:15).
- 25 011305 'Н ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 0,91(т, 3Н), 1,33 - 1,42(т, 4Н), 1,59 - 1,67(т, 2Н), 2,29(8, 6Н), 2,64(1, 2Н, 1 = 7,60 Гц), 2,96(1, 2Н, 1 = 6,80 Гц), 4,24(1, 2Н, 1 = 6,80 Гц), 6,97(б, 2Н, 1 = 8,70 Гц), 7,31(8, 2Н), 7,37(б, 1Н, 1 = 15,54 Гц), 7,72(б, 1Н, 1 = 15,54 Гц), 8,03(б, 2Н, 1 = 8,70 Гц).
Промежуточное соединение 2
1-(4-((К,8)-5-[1,2] Дитиолан-3 -илпентилокси)фенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 он
Это соединение синтезируют из исходного материала 5 и 4-гидрокси-3,5-диметилбензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8:2).
'|| ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,45 - 1,65(т, 4Н), 1,65 - 1,77(т, 2Н), 1,77 - 1,87(т, 2Н), 1,87 - 2,0(т, 1Н), 2,30(8, 6Н), 2,43 - 2,51(т, 1Н), 3,09 - 3,22(т, 2Н), 3,56 - 3,62(т, 1Н), 4,04(1, 2Н, 1 = 6,40 Гц), 6,96(б, 2Н, 1 = 8,50 Гц), 7,31(8, 2Н), 7,41 (б, 1Н, 1 = 15,40 Гц), 7,73(б, 1Н, 1 = 15,40 Гц), 8,04(б, 2Н, 1 = 8,50 Гц).
Промежуточное соединение 3
1-(4-Метилтиофенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из 4'-метилтиоацетофенона и 3,5-дибром-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8:2).
Ίΐ ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 2,55(8, 3Н), 6,19(8, 1Н), 7,32(б, 2Н, 1 = 8,70 Гц), 7,41( 1Н, 1 = 15,40 Гц), 7,63(б, 1Н, 1 = 15,40), 7,75(8, 2Н), 7,96(б, 2Н, 1 = 8,70 Гц).
Промежуточное соединение 4
1-(4-(Циклогексилэтилокси)фенил-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из исходного материала 7 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, затем сушат, промывают этанолом, предварительно охлажденным до 0°С, и сушат под вакуумом.
Ίΐ ЯМР СОС1; δ ч./млн: 0,90 - 1,80(т, 13Н), 2,30(8, 6Н), 4,08(1, 2Н, 1 = 6,54 Гц), 6,97(б, 2Н, 1 = 9,00 Гц), 7,30(8, 2Н), 7,42(б, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 7,73(б, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 8,03(б, 2Н, 1 = 9,00 Гц).
Промежуточное соединение 5
1-(4-Метилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из исходного материала 9 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8:2).
Ίΐ ЯМР СОС1; δ ч./млн: 2,28(8, 3Н), 2,30(8, 6Н), 2,64(8, 6Н), 7,32(8, 2Н), 7,36(б, 1Н, 1 = 15,76 Гц), 7,72(8, 2Н), 7,73(б, 1Н, 1 = 15,76 Гц).
- 26 011305
Промежуточное соединение 6
1-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходного материала 10 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают, промывают этанолом, который предварительно охлаждают до 0°С и сушат в вакууме.
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,28 (8, 6Н), 2,35 (8, 6Н), 3,77 (8, 3Н), 7,30 (8, 2Н), 7,35 (б, 1Н, 1 = 15,63), 7,70 (б, 1Н, 1 = 15,63 Гц), 7,72 (8, 2Н).
Промежуточное соединение 7
1-(4-(Циклогексилэтилокси)-3,5-диметилфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из исходного материала 11 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8:2).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 0,94 - 1,05 (т, 2Н), 1,16 - 1,31 (т, 4Н), 1,57 - 1,82 (т, 7Н), 2,30 (8, 6Н), 2,35 (8, 6Н), 3,86 (ί, 2Н, 1 = 7,08 Гц), 7,32 (8, 2Н), 7,38 (б, 1Н, 1 = 15,81 Гц), 7,71 (8, 2Н),7,72(б, 1Н, 1 =15,81 Гц).
Промежуточное соединение 8
1-(4-(Циклогексилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из исходного материала 13 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают и промывают этанолом, предварительно охлаждённым до 0°С.
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,23 - 1,42 (т, 5Н), 1,63 - 1,65 (т, 1Н), 1,79-1,81 (т, 2Н), 2,01 - 2,08 (т, 2Н),
2.29 (8, 6Н), 2,73 - 2,81 (т, 1Н), 2,96 (ί, 2Н, 1 = 7,08 Гц), 4,20 (ί, 2Н, 1 = 7,08 Гц), 6,97 (б, 2Н, 1 = 8,73 Гц),
7.30 (8, 2Н), 7,41 (б, 1Н, 1 = 15,53 Гц), 7,73 (б, 1Н, 1 = 15,53 Гц), 8,04 (б, 2Н, 1 = 8,73 Гц).
Промежуточное соединение 9
1-(2,4,5-Триметилфенил)-3-(4-гидрокси)- 3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из 2',4',5'-триметилацетофенона и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 7:3).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,27 (8, 9Н), 2,29 (8, 3Н), 2,38 (8, 3Н), 7,00 (б, 1Н, 1 = 15,90 Гц), 7,04 (8, 1Н), 7,23 (8, 2Н), 7,27 (8, 1Н), 7,39 (б, 1Н, 1 = 15,90 Гц).
Промежуточное соединение 10
1-(4-(Циклогексилтиоэтилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
- 27 011305
Это соединение синтезируют из исходного материала 14 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент:циклогексан/этилацетат 7:3).
'Н ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,32 (т, 5Н), 1,63 (т, 1Н), 1,79 (т, 2Н), 2,03 (т, 2Н), 2,29 (к, 6Н), 2,37 (к, 6Н), 2,75 (т, 1Н), 2,97 (ΐ, 2Н, I = 7,05 Гц), 3,97 (ΐ, 2Н, I = 7,05 Гц), 7,30 (к, 2Н), 7,37 (ά, 1Н, I = 15,70 Гц), 7,37 (ά, 1Н, I = 15,70 Гц), 7,70 (ά, 1Н, I = 15,70 Гц), 7,71 (к, 2Н).
Промежуточное соединение 11
1-(4-Метилтиофенил)-3 -(4-гидрокси-3-фторфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из 4'-метилтиоацетофенона и 3-фтор-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают и сушат в вакууме.
' Н ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,55 (к, 3Н), 7,04 (ΐ, 1Н, I = 8,37 Гц), 7,30 - 7,42 (т, 5Н), 7,73 (ά, 1Н, I = 15,54 Гц), 7,95 (ά, 2Н, I = 8,40 Гц).
Промежуточное соединение 12
1-(2,3,4,5,6-Пентаметилфенил)-3-(4-гидрокси- 3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из пентаметилацетофенона и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают и очищают рекристаллизацией в этаноле.
'|| ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,09 (к, 6Н), 2,20 (к, 6Н), 2,22 (к, 6Н), 2,26 (к, 3Н), 6,83 (ά, 1Н, I = 16,11 Гц), 7,05 (ά, 1Н, 1= 16,11 Гц), 7,16 (к, 2Н).
Промежуточное соединение 13
1-(4-Феноксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из 4'-феноксиацетофенона и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 7:3).
'|| ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 2,30 (к, 6Н), 7,05 (ά, 2Н, I = 8,67 Гц), 7,1 (ά, 2Н, I = 8,47 Гц), 7,21 (ΐ, 1Н, I =
7,30 Гц), 7,31 (к, 2Н), 7,43 - 7,38 (т, 3Н), 7,75 (ά, 1Н, I = 15,36 Гц), 8,05 (ά, 2Н, I = 8,47 Гц).
Промежуточное соединение 14
1-(4-Метокси-3 -фторфенил)-3-(4-гидрокси- 3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
- 28 011305
Это соединение синтезируют из 4'-метокси-3'-фторацетофенона и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают и промывают гептаном.
'Н ЯМР ГОСТ δ ч./млн: 2,30 (8, 6Н), 3,98 (8, 3Н), 7,04 (1, 1Н, 1 = 8,30 Гц), 7,31 (8, 2Н), 7,35 (ά, 1Н, 1 = 15,69 Гц), 7,74 (ά, 1Н, 1 = 15,69 Гц), 7,79 - 7,87 (т, 2Н).
Промежуточное соединение 15
1-(4-Метокси-3-метилфенил)-3-(4-гидрокси)-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходного материала 15 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт кристаллизуют в реакционной среде, обезвоживают и промывают гептаном.
'Н ЯМР СОС1; δ ч./млн: 2,30 (8, 9Н), 3,92 (8, 3Н), 6,90 (ά, 1Н, 1 = 8,45 Гц), 7,31 (8, 2Н), 7,43 (ά, 1Н, 1 = 15,52 Гц), 7,73 (ά, 1Н, 1 = 15,52 Гц), 7,88 (8, 1Н), 7,93 (ά, 1Н, 1 = 8,45 Гц).
Промежуточное соединение 16
1-(4-Гексилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходного материала 17 и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8:2).
'|| ЯМР ГОСТ δ ч./млн: 0,88 (1, 3Н, 1 = 6,90 Гц), 1,20 - 1,50 (т, 8Н), 2,30 (8, 6Н), 2,63 (8, 6Н), 2,70 (1, 2Н, 1 = 6,9 Гц), 7,32 (8, 2Н), 7,36 (ά, 1Н, 1 = 15,51 Гц), 7,72 (8, 2Н), 7,73(ά, 1Н, 1 = 15,51 Гц).
Промежуточное соединение 17
1-(2,5 - Диметоксифенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из 2',5'-диметоксиацетофенона и 3,5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 7:3).
Ίΐ ЯМР ГОСТ δ ч./млн: 2,27 (8, 6Н), 3,74 (8, 3Н), 3,82 (8, 3Н), 6,93 (ά, 1Н, 1 = 8,73 Гц), 7,02 (άά, 1Н, 1 = 8,73 Гц, 1 = 3,27 Гц), 7,14 (ά, 1Н, 1 = 3,27 Гц), 7,22 (ά, 1Н, 1 = 15,81 Гц), 7,25 (8, 2Н), 7,53 (ά, 1Н, 1 = 15,81 Гц).
Промежуточное соединение 18
1-(4-Бромфенил)-3 -(4-гидрокси- 3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из 4'-бромацетофенона и исходного материала 19 в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Этанол удаляют выпариванием при пониженном давлении, твёрдый остаток промывают абсолюти рованным этанолом.
Ίΐ ЯМР ГОСТ δ ч./млн: 5,97 (8, 1Н), 7,18 (ά, 2Н, 1 = 8,30 Гц), 7,35 (ά, 1Н, 1 = 15,36 Гц), 7,65 (т, 3Н), 7,89 (ά, 2Н, 1 = 8,30 Гц).
- 29 011305
Промежуточное соединение 19
1-(4-Метокси-3 -трифторметилфенил)-3-(4-гидрокси-3.5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходного материала 20 и 3.5-диметил-4-гидроксибензальдегида в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Этанол удаляют выпариванием при пониженном давлении. твёрдый остаток промывают абсолютированным этанолом.
Ή ЯМР диметилсульфоксид б6 ч./млн: 2.22 (8. 6Н). 4.01 (δ. 3Н). 7.41 (б. 1Н. I = 9.00 Гц). 7.52 (8. 2Н). 7.64 (б. 1Н. I = 15.40 Гц). 8.96 (8. 1Н). 7.76 (б. 1Н. I = 15.40 Гц). 8.29 (б. 1Н. I = 1.60 Гц). 8.49 (бб. 1Н. I = 9.00 Гц. I = 1.60 Гц).
Синтез соединений согласно изобретению
Соединение 1
1-(4-пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3.5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 1 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Продукт подвергают хроматографической очистке на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 9:1).
Ή ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 0.91 (ΐ. 3Н. I = 7.10 Гц). 1.37 - 1.69 (т. 21Н). 2.27 (8. 6Н). 2.63 (ΐ. 2Н. I = 7.10 Гц). 2.93 (ΐ. 2Н. I = 7.10 Гц). 4.21 (ΐ. 2Н. I = 7.10 Гц). 6.97 (б. 2Н. I = 8.70 Гц). 7.28 (8. 2Н). 7.44 (б. 1Н. I =
15.81 Гц). 7.70 (б. 1Н. I = 15.81). 8.03 (б. 2Н. I = 8.70 Гц).
Соединение 2
1-(4-пентилтиоэтилокси)фенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3.5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 1 в соответствии с описанной выше общей методикой 6. Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 0.84 - 0.89 (т. 3Н). 1.39 - 1.24 (т. 4Н). 1.39(8. 6Н). 1.50 - 1.57 (т. 2Н). 2.22 (8. 6Н). 2.61 (ΐ. 2Н. I = 7.40 Гц). 2.90 (ΐ. 2Н. I = 6.20 Гц). 4.26 (ΐ. 2Н. I = 6.20 Гц). 7.09 (б. 2Н. I = 8.50 Гц). 7.57 (8. 2Н). 7.59 (б. 1Н. I = 15.40 Гц). 7.83 (б. 1Н. I = 15.40). 8.15 (б. 2Н. I = 8.50 Гц). 12.90 (8. 1Н).
8М (Е8-М8): 483.2(т-1).
Г°С = 85.2-89.8.
Соединение 3
1-(4-гидрокси-3.5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3.5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из исходных материалов 3 и 4 в соответствии с описанной выше общей методикой 1.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 95:5).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1.46 (8. 6Н). 1.53 (8. 9Н). 2.27 (8. 6Н). 2.33 (8. 6Н). 7.28 (8. 2Н). 7.43 (б. 1Н. I =
15.81 Гц). 7.69 (б. 1Н. I = 15.81 Гц). 7.74 (8. 2Н).
- 30 011305
Соединение 4
1-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 3 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/метанол - 98:2).
'Н ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,39 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 2,25 (8, 6Н), 7,33 (8, 2Н), 7,45 (й, 1Н, 1 = 15,5 Гц), 7,69 (й, 1Н, 1 = 15,5 Гц), 7,75 (8, 2Н).
8М(Е8-М8): 381,3(т-1).
Е°С = 199,3-199,8.
Соединение 5
1-(4-((К,8)-5-[1,2] дитиолан-3 -илпентилокси)фенил)-3 -(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5 -диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 2 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: циклогексан/этилацетат - 85:15).
'|| ЯМР СОСТ δ ч./млн: 1,43 (8, 6Н), 1,53 (т, 13Н), 1,65 - 1,75 (т, 2Н), 1,75 - 1,85 (т, 2Н), 1,85 - 1,97 (т, 1Н), 2,28 (8, 6Н), 1,46 - 1,52 (т, 1Н), 3,12 - 3,21 (т, 2Н), 3,58 - 3,63 (т, 1Н), 4,05 (1, 2Н, 1 = 6,21 Гц), 6,97 (й, 2Н, 1 = 8,30 Гц), 7,29 (8, 2Н), 7,45 (й, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 7,70 (й, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 8,03 (й, 2Н, 1 = 8,30 Гц).
Соединение 6
1-(4-((К,8)-5-[1,2] дитиолан-3 -илпентилокси)фенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 5 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/метанол - 98:2).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,56 (т, 10Н), 1,67 - 1,77 (т, 2Н), 1,77 - 1,90 (т, 2Н), 1,90 - 1,97 (т, 1Н),
2,30 (8, 6Н), 2,43 - 2,52 (т, 1Н), 3,11 - 3,22 (т, 2Н), 3,58 - 3,63 (т, 1Н), 4,05 (1, 2Н, 1 = 6,20 Гц), 6,98 (й, 2Н, 1 = 8,80 Гц), 7,31 (8, 2Н), 7,46 (й, 1Н, 1 = 15,80 Гц), 7,71 (й, 1Н, 1 = 15,80 Гц), 8,03 (й, 2Н, 1 = 8,80 Гц).
8М(Е8-М8): 529,1(М+1).
Е°С = 182,7-186,6°С.
Соединение 7
1-(4-метилтиофенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 3 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: циклогексан/этилацетат - 9:1).
- 31 011305
Ή ЯМР СЭС13, δ ч./млн: 1,54 (δ, 9Н), 1,63 (δ, 6Н), 2,56 (8, 3Н), 7,33 (ά, 2Н, 1 = 8,50 Гц), 7,44 (ά, 1Н, 1 = 15,70 Гц), 7,62 (ά, 1Н, 1 = 15,70 Гц), 7,78 (δ, 2Н), 7,96 (ά, 2Н, 1 = 8,50 Гц).
Соединение 8
1-(4-Метилтиофенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 7 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,54 (δ, 6Н), 2,51 (δ, 3Н), 7,41 (ά, 2Н, 1 = 8,5 Гц), 7,64 (ά, 1Н, 1 = 15,4 Гц), 8,04 (ά, 1Н, 1= 15,4 Гц), 8,15 (ά, 2Н, 1 = 8,5 Гц), 8,29 (δ, 2Н), 12,93(δ, 1Н).
8М(Е8-М8): 513,2(т-1).
Соединение 10
1-(4-циклогексилэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 4 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/циклогексан - 7:3).
Ή ЯМР СОС1; δ ч./млн: 0,90 - 1,30 (т, 5Н), 1,50 (т, 16Н), 1,73 (т, 7Н), 2,28 (δ, 6Н), 4,08 (ΐ, 2Н, 1 = 6,54 Гц), 6,97 (ά, 2Н, 1 = 8,70 Гц), 7,29 (δ, 2Н), 7,45 (ά, 1Н, 1 = 15,75 Гц), 7,70 (ά, 1Н, 1 = 15,75 Гц), 8,03 (ά, 2Н, 1 = 8,70 Гц).
Соединение 11
1-(4-Циклогексилэтилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
Это соединение синтезируют из соединения 10 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят осаждением в смеси из дихлорметана и гептана.
Ή ЯМР СОС1; δ ч./млн: 0,90 - 1,30 (т, 5Н), 1,56 (т, 7Н), 1,70 (т, 7Н), 2,30 (δ, 6Н), 4,09 (ΐ, 2Н, 1 = 6,57 Гц), 6,98 (ά, 2Н, 1 = 9,09 Гц), 7,32 (δ, 2Н), 7,4 (ά, 1Н, 1 = 15,60 Гц), 7,71 (ά, 1Н, 1 = 15,60 Гц), 8,04 (ά, 2Н, 1 = 9,09 Гц).
8М(Е8-М8): 465,3(т+1).
Г°С= 134,8-135,3.
Соединение 12
1-(4-Метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
- 32 011305
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 5 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 8:2).
Ίί ЯМР СЭС13, δ ч./млн: 1,50 (8, 6Н), 1,51 (8, 3Н), 1,53 (8, 9Н), 2,28 (8, 6Н), 2,63 (8, 6Н), 7,30 (8, 2Н), 7,39 (6, 1Н, 1 = 15,69 Гц), 7,69 (6, 1Н, 1 = 15,69 Гц), 7,72 (8, 2Н).
Соединение 13
1-(4-Метилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
Это соединение синтезируют из соединения 12 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
'|| ЯМР диметилсульфоксид 66 δ ч./млн: 1,39 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 2,28 (8, 3Н), 2,59 (8, 6Н), 7,56 (8, 2Н), 7,62 (6, 1Н, 1 = 15,37 Гц), 7,79 (6, 1Н, 1 = 15,37 Гц), 7,89 (8, 2Н), 12,95 (8, 1Н).
8М(Е8-М8): 412,9(т+1).
Р°С= 177,0-179,0.
Соединение 14
1-(4-Пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 3 и пропилбромида в соответствии с описанной выше общей методикой 4. При синтезе соединения 15 применяется сырой продукт, полученный после удаления карбоната калия и растворителей выпариванием при пониженном давлении.
'Н ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,09 (1, 3Н, 1 = 7,41 Гц), 1,46 (8, 6Н), 1,58 (8, 9Н), 1,83 (т, 2Н), 2,27 (8, 6Н), 2,35 (8, 6Н), 3,78 (1, 2Н, 1 = 6,09 Гц), 7,29 (8, 2Н), 7,41 (6, 1Н, 1 = 15,32 Гц), 7,68 (6, 1Н, 1 = 15,32 Гц), 7,70 (8, 2Н).
Соединение 15
1-(4-Пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 14 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 95:5).
'|| ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,05 (I, 3Н, 1 = 7,29 Гц), 1,39 (8, 6Н), 1,78 (т, 2Н), 2,23 (8, 6Н), 2,32 (8, 6Н), 3,78 (т, 2Н), 7,56 (8, 2Н), 7,58 (6, 1Н, 1 = 16,26 Гц), 7,80 (6, 1Н, 1 = 16,26 Гц), 7,86 (8, 2Н).
8М (Е8-М8): 424,9 (т+1).
Р°С= 188,5 - 189,7.
Соединение 16
1-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
- 33 011305
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 6 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: циклогексан/этилацетат - 95:5).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,47 (к, 9Н), 1,53 (к, 6Н), 2,29 (к, 6Н), 2,31 (к, 6Н), 3,79 (к, 3Н), 7,30 (к, 2Н), 7,40 (6, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 7,70 (6, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 7,71 (к, 2Н).
Соединение 17
1-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
Это соединение синтезируют из соединения 16 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/метанол - 98 : 2).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,57 (к, 6Н), 2,31 (к, 6Н), 2,38 (к, 6Н), 3,79 (к, 3Н), 7,33 (к, 2Н), 7,43 (6, 1Н, 1 =
15,81 Гц), 7,71 (6, 1Н, 1 = 15,81 Гц), 7,72 (к, 2Н).
8М(Е8-М8): 396,9(т+1).
Е°С = 166,6 - 168,8.
Соединение 18
1-(4-Гексилокси-3,5-диметилфенил)-3 -(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 3 и гексилбромида в соответствии с описанной выше общей методикой 4. При синтезе соединения 19 применяют сырой продукт, полученный после удаления карбоната калия и после удаления растворителей выпариванием при пониженном давлении.
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 0,93 (ΐ, 3Н, 1 = 8,58 Гц), 1,37 (т, 4Н), 1,47 (к, 6Н), 1,53 (т, 11Н), 1,83 (т, 2Н), 2,28 (к, 6Н), 2,36 (к, 6Н), 3,82 (ΐ, 2Н, 1 = 6,54 Гц), 7,29 (к, 2Н), 7,40 (6, 1Н, 1 = 15,57 Гц), 7,70 (6, 1Н, 1 = 15,57 Гц), 7,71 (к, 2Н).
Соединение 19
1-(4-гексилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен1-он
Это соединение синтезируют из соединения 18 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 95:5).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 0,93 (ΐ, 3Н, 1 = 7,02 Гц), 1,37 (т, 4Н), 1,50 (т, 2Н), 1,56 (к, 6Н), 1,83 (т, 2Н),
2,30 (к, 6Н), 2,34 (к, 6Н), 3,82 (ΐ, 2Н, 1 = 6,57 Гц), 7,32 (к, 2Н), 7,42 (6, 1Н, 1 = 15,48 Гц), 7,69 (6, 1Н, 1 = 15,48 Гц), 7,71 (к, 2Н).
8М (Е8-М8): 466,9(т+1).
Е°С=171,0-172,0.
- 34 011305
Соединение 20
1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 7 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 95:5).
Ή ЯМР СБС13 δ ч./млн: 0,94 - 1,53 (т, 28Н), 2,28 (8, 6Н), 2,35 (δ, 6Н), 3,86 (ΐ, 2Н, 1 = 6,75 Гц), 7,29 (8, 2Н), 7,41 (б, 1Н, 1 =15,76 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1 = 15,76 Гц), 7,71 (8, 2Н).
Соединение 21
1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 20 в соответствии с описанной выше общей методикой
6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР СБС13 δ ч./млн: 0,97 - 1,04 (т, 2Н), 1,16 - 1,34 (т, 4Н), 1,56 (8, 6Н), 1,63 - 1,82 (т, 7Н), 2,30 (8, 6Н), 2,35 (8, 6Н), 3,86 (ΐ, 2Н, 1 = 6,60 Гц), 7,32 (8, 2Н), 7,43 (б, 1Н, 1 = 15,81 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1 = 15,81 Гц), 7,71 (8, 2Н).
8М (Е8-М8): 492,9(т+1).
Р°С= 166,4-167,7.
Соединение 22 1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 8 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 7:3).
Ή ЯМР СБС13 δ ч./млн: 1,29 (ΐ, 5Н), 1,46 (8, 6Н), 1,53 (8, 9Н), 1,62 (т, 1Н), 1,80 (т, 2Н), 2,03 (т, 2Н), 2,27 (8, 6Н), 2,75 (т, 1Н), 2,95 (ΐ, 2Н, 1 = 6,81 Гц), 4,20 (ΐ, 2Н, 1 = 6,81 Гц), 6,97 (б, 2Н, 1 = 9,24 Гц), 7,28 (8, 2Н), 7,43 (б, 1Н, 1 =15,78 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1 = 15,78 Гц), 8,03 (б, 2Н, 1 = 9,24 Гц).
Соединение 23
1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 22 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР СБС13 δ ч./млн: 1,27-1,38 (т, 4Н), 1,56 (8, 6Н), 1,63 - 1,66 (т, 2Н), 1,79-1,81 (т, 2Н), 2,01 2,04 (т, 2Н), 2,30 (8, 6Н), 2,76 - 2,77 (т, 1Н), 2,96 (ΐ, 2Н, 1 = 7,08 Гц), 4,21 (ΐ, 2Н, 1 = 7,08 Гц), 6,97 (б, 2Н, 1 = 8,61 Гц), 7,31 (8, 2Н), 7,41 (б, 1Н, 1 = 15,60 Гц), 7,73 (б, 1Н, 1 = 15,60 Гц), 8,04 (б, 2Н, 1 = 8,61 Гц).
- 35 011305
8М(МаММоГ): 496,67(т+1).
Г°С=112,3-114.
Соединение 24
1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 9 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 8:2).
Ή ЯМР СЭСГ δ ч./млн: 1,40 - 1,65 (т, 15Н), 2,22 (8, 6Н), 2,25 (δ, 3Н), 2,28 (δ, 3Н), 2,35 (δ, 3Н), 7,00 (8, 1Н), 7,01 (ά, 1Н, 1 = 15,70 Гц), 7,18 (δ, 2Н), 7,24 (δ, 1Н), 7,35 (ά, 1Н, 1 = 15,70 Гц).
Соединение 25
1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 24 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР ГОСТ δ ч./млн: 1,55 (δ, 6Н), 2,27 (δ, 6Н), 2,27 - 2,30 (т, 6Н), 2,39 (δ, 3Н), 7,05 (δ, 1Н), 7,07 (ά, 1Н, 1 = 15,24 Гц), 7,24 (δ, 2Н), 7,28 (δ, 1Н), 7,4 (ά, 1Н, 1 = 15,78 Гц).
8М(Е8-М8): 381,2(т+1).
Г°С=168,7-173,3.
Соединение 26
1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 10 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 95:5).
Ή ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,27 - 2,04 (т, 10Н), 1,47 (δ, 6Н), 1,53 (δ, 9Н), 2,29 (δ, 6Н), 2,38 (δ, 6Н), 2,75 (т, 1Н), 2,98 (ΐ, 2Н, 1 = 6,84 Гц), 3,98 (ΐ, 2Н, 1 = 6,84 Гц), 7,29 (δ, 2Н), 7,40 (ά, 1Н, 1 = 15,63 Гц), 7,70 (ά, 1Н, 1 = 15,63 Гц), 7,71 (δ, 2Н).
Соединение 27
1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 26 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,26 - 1,42 (т, 5Н), 1,56 (δ, 6Н), 1,62 - 1,64 (т, 1Н), 1,79-1,81 (т, 2Н), 2,03 2,00 (т, 2Н), 2,3 (δ, 6Н), 2,38 (δ, 6Н), 2,71 - 2,78 (т, 1Н), 2,97 (ΐ, 2Н, 1 = 7,00 Гц), 3,98 (ΐ, 2Н, 1 = 7,00 Гц),
- 36 011305
7,32 (8, 2Н), 7,43 (й, 1Н, 1 = 15,78 Гц), 7,7 (й, 1Н, 1 = 15,24 Гц), 7,71 (8,2Н). §М(МЛЬП1-Т0Е): 524,78(т+1).
Е°С=156,0-158,0.
Соединение 28
1-(4-метилтиофенил))-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 11 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 8:2).
' Н ЯМР СЭС13, δ ч./млн: 1,43 (8, 9Н), 1,62 (8, 6Н), 2,53 (8, 3Н), 6,95 (ΐ, 1Н, 1 = 8,07 Гц), 7,32 (й, 2Н, 1 =
8,64 Гц), 7,39 (т, 3Н), 7,72 (й, 1Н, 1 = 15,50 Гц), 7,95 (й, 2Н, 1 = 8,64 Гц).
Соединение 29
1-(4-метилтиофенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из соединения 28 в соответствии с описанной выше общей методикой
6.
Очистку производят осаждением в смеси из дихлорметана и гептана в соотношении 70:30.
'Н ЯМР δ ч./млн: 1,67 (8, 6Н), 2,56 (8, 3Н), 7,09 (ΐ, 1Н, 1 = 8,19 Гц), 7,32 (т, 3Н), 7,43 (т, 2Н),
7,73 (й, 1Н, 1 = 15,24 Гц), 8,73 (й, 2Н, 1 = 8,73 Гц).
8М(Е8-М8): 375,1(т+1).
Е°С=142,2 - 144,6.
Соединение 30
1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 12 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 95:5).
'|| ЯМР δ ч./млн: 1,44 (8, 6Н), 1,53 (8, 9Н), 2,11 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 2,23 (8, 6Н), 2,28 (8, 3Н),
6,84 (й, 1Н, 1 = 16,26 Гц), 7,06 (й, 1Н, 1 = 16,26 Гц), 7,16 (8, 2Н).
Соединение 31
1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из соединения 30 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
'|| ЯМР δ ч./млн: 1,53 (8, 6Н), 2,11 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 2,24 (8, 6Н), 2,28 (8, 3Н), 6,87 (й, 1Н, 1 = 16,20 Гц), 7,08 (й, 1Н, 1 = 16,20 Гц), 7,19 (8, 2Н).
- 37 011305
8М (Е8-М8): 409,1 (т+1).
Е°С=192,8-194,2.
Соединение 32
1-(4-фенилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 13 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 7:3).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,47 (8, 6Н), 1,53 (8, 9Н), 2,28 (8, 6Н), 7,02 (й, 2Н, ί = 8,70 Гц), 7,1 (й, 2Н, ί = 7,92 Гц), 7,21 (ΐ, 1Н, ί = 7,35 Гц), 7,29 (8, 2Н), 7,39 - 7,46 (т, 3Н), 7,73 (й, 1Н, ί = 16,20 Гц), 8,04 (й, 2Н, ί = 8,70 Гц).
Соединение 33
1-(4-фенилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из соединения 32 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
'Н ЯМР диметилсульфоксид й6 δ ч./млн: 1,39 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 7,08 (й, 2Н, I = 8,55 Гц), 7,15 (й, 2Н, ί = 8,01 Гц), 7,25 (ΐ, 1Н, ί = 7,41 Гц), 7,47 (ΐ, 2Н, ί = 7,44 Гц), 7,55 (8, 2Н), 7,62 (й, 1Н, ί = 15,70 Гц), 7,82 (й, 1Н, ί = 15,70 Гц), 8,19 (й, 2Н, ί = 8,55 Гц).
8М (Е8-М8): 430,9(т+1).
Е°С=154,0-156,0.
Соединение 34
1-(4-метокси-3-фторфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 14 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 8:2).
Ή ЯМР СЭС13 δ ч./млн: 1,50 (8, 6Н), 1,53 (8, 9Н), 2,28 (8, 6Н), 3,98 (8, 3Н), 7,04 (ΐ, 1Н, ί = 8,07 Гц), 7,29 (8, 2Н), 7,39 (й, 1Н, ί = 15,70 Гц), 7,73 (й, 1Н, ί = 15,70 Гц), 7,78 - 7,86 (т, 2Н).
Соединение 35
1-(4-метокси-3 -фторфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5 -диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из соединения 34 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
Ή ЯМР диметилсульфоксид й6 δ ч./млн: 1,39 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 3,95 (8, 3Н), 7,31 (ΐ, 1Н, ί = 7,35
- 38 011305
Гц), 7,57 (8, 2Н), 7,60 (б, 1Н, 1 = 15,78 Гц), 7,83 (б, 1Н, 1 = 15,78 Гц), 7,99 - 8,06 (т, 2Н).
8М(Е8-М8): 387,1 (т+1).
Е°С=167,0-169,0.
Соединение 36
1-(4-метокси-3-метилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 15 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Ή ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 1,46 (8, 6Н), 1,52 (8, 9Н), 2,27 (8, 9Н), 3,90 (8, 3Н), 6,88 (б, 1Н, 1 = 8,73 Гц), 7,28 (8, 2Н), 7,45 (б, 1Н, 1 = 16,11 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1 = 16,11 Гц), 7,87 (8, 1Н), 7,92 (бб, 1Н, 1 = 8,73 Гц, 1 =
1,65 Гц).
Соединение 37
1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из соединения 36 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2) с последующей рекристаллизацией в ацетонитриле.
Ή ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 1,39 (8, 6Н), 2,22 (8, 6Н), 2,24 (8, 3Н), 3,90 (8, 3Н), 7,08 (б, 1Н, 1 = 8,55 Гц), 7,56 (8, 2Н), 7,58 (б, 1Н, 1 = 16,71 Гц), 7,82 (б, 1Н, 1 = 15,51 Гц), 7,99 (8, 1Н), 8,06 (б, 1Н, 1 = 8,55 Гц), 12,95 (8, 1Н).
8М(Е8-М8): 383,2(т+1).
Е°С=157,0-159,0.
Соединение 38
1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 16 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 9:1).
Ή ЯМР СЭС1; δ ч./млн: 0,88 (ΐ, 3Н, 1 = 6,84 Гц), 1,25 - 1,62 (т, 8Н), 1,47 (8, 6Н), 1,53 (8, 9Н), 2,29 (8, 6Н), 2,62 (8, 6Н), 2,70 (ΐ, 2Н, 1 = 6,96 Гц), 7,30 (8, 2Н), 7,39 (б, 1Н, 1 = 15,90 Гц), 7,70 (б, 1Н, 1 = 15,51 Гц), 7,71 (8, 2Н).
Соединение 39
1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он
Это соединение синтезируют из соединения 38 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование дихлорметан/метанол - 98:2).
- 39 011305 'Н ЯМР диметилсульфоксид б6 δ ч./млн: 0,84 (т, 3Н), 1,22 - 1,40 (т, 8Н), 2,08 (8, 6Н), 2,22 (δ, 6Н), 2,58 (8, 6Н), 2,73 (ΐ, 2Н, I = 6,90 Гц), 7,57 (8, 2Н), 7,63 (б, 1Н, I = 15,35 Гц), 7,8 (б, 1Н, I = 15,35 Гц), 7,89 (8, 2Н).
8М(Е8-М8): 483,2 (т+1).
Е°С=130,0-132,0.
Соединение 40
1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 17 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 7:3).
'Н ЯМР СОС1; δ ч./млн: 1,45 (8, 6Н), 1,52 (8, 9Н), 2,25 (8, 6Н), 3,81 (8, 3Н), 3,86 (8, 3Н), 6,93 (б, 1Н, I = 9,24 Гц), 7,01 (бб, 1Н, I = 8,82 Гц, I = 2,7 Гц), 7,14 (б, 1Н, I = 2,8 Гц), 7,22 (8, 2Н), 7,26 (б, 1Н, I = 15,60 Гц), 7,52 (б, 1Н, I = 15,60 Гц).
Соединение 41
1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 40 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование: дихлорметан/метанол - 98:2).
'|| ЯМР диметилсульфоксид бе ч./млн: 1,38 (8, 6Н), 2,19 (8, 6Н), 3,75 (8, 3Н), 3,8 (8, 3Н), 7,00 (б, 1Н, I = 2,16 Гц), 7,12 (т, 2Н), 7,26 (б, 1Н, I = 16,2 Гц), 7,37 (б, 1Н, I = 13,5 Гц), 7,4 (8, 2Н).
8М(Е8-М8): 398,3 (т-1).
Е°С=продукт маслянистый.
Соединение 42
Гидрохлорид 1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-этилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-она
Это соединение синтезируют из исходных материалов 18 и 3 в соответствии с описанной выше общей методикой 6. Этанол удаляют выпариванием при пониженном давлении. Соединение 42 получают после растирания в порошок остаточного масла в диэтиловом простом эфире.
'|| ЯМР СОСЪ δ ч./млн: 1,36 (ΐ, 3Н, I = 6,84 Гц), 1,49 (8, 6Н), 2,24 (8, 6Н), 2,38 (8, 6Н), 3,20 (8, 2Н), 3,50 (8, 2Н), 3,73 (б, 2Н, I = 11,04 Гц), 4,03 (б, 2Н, I = 11,04 Гц), 4,30 - 4,45 (т, 6Н), 7,36 (б, 1Н, I = 15,75 Гц), 7,28 (8, 2Н), 7,66 (т, 3Н), 13,39 (8, 1Н, Ν, НС1, ехсРапде Ό20).
Соединение 43
1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он
Соединение 42 растворяют в этаноле и затем добавляют раствор едкого натра 2М. Весь продукт пе- 40 011305 ремешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную среду выливают в воду, водную фазу промывают этилацетатом и нейтрализуют добавкой уксусной кислоты. Водную фазу экстрагируют диэтиловым простым эфиром. Осадок, образовавшийся в этерифицированной фазе, обезвоживают и рекристаллизуют в абсолютированном этаноле.
'Н ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,50 (к, 6Н), 2,28 (к, 6Н), 2,36 (к, 6Н), 2,89 (т, 4Н), 3,06 (ΐ, 2Н, I = 5,46 Гц), 3,87 (т, 4Н), 4,06 (ΐ, 2Н, I = 5,46 Гц), 6,50 (к, 1Н), 7,40 (ά, 1Н, I = 15,78 Гц), 7,27 (к, 2Н), 7,68 (т, 3Н).
8М(МЛЕО!-ТОЕ): 496 (т+1).
Е°С=167-169.
Соединение 44
1-(4-бромфенил))-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 18 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 95:5).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,50 (к, 9Н), 1,57 (к, 6Н), 7,38 (ά, 2Н, I = 8,50 Гц), 7,65 (ά, 1Н, I = 15,78 Гц),
7,66 (т, 3Н), 7,89 (ά, 2Н, I = 8,50 Гц).
Соединение 45
1-(4-бромфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 44 в соответствии с описанной выше общей методикой 6.
Очистку производят перекристаллизацией в диизопропиловом простом эфире.
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,65 (к, 6Н), 7,24 (ά, 2Н, I = 8,50 Гц), 7,41 (ά, 1Н, I = 15,84 Гц), 7,66 (т, 3Н), 7,89 (ά, 2Н, I = 8,50 Гц).
8М (Е8-М8): 425(т+1).
Е°С=142.
Соединение 46
1-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он
Это соединение синтезируют из промежуточного соединения 19 и трет-бутилбромизобутирата в соответствии с описанной выше общей методикой 4.
Очистку производят хроматографией на силикагеле (элюирование циклогексан/этилацетат - 9:1).
'|| ЯМР С1)С1; δ ч./млн: 1,47 (к, 6Н), 1,53 (к, 9Н), 2,29 (к, 6Н), 4,00 (к, 3Н), 7,10 (ά, 1Н, I = 8,65 Гц), 7,30 (к, 2Н), 7,40 (ά, 1Н, I = 15,27 Гц), 7,75 (ά, 1Н), 8,25 (ά, 1Н, I = 8,65 Гц), 8,28 (к, 1Н).
Соединение 47
1-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он
Это соединение синтезируют из соединения 46 в соответствии с описанной выше общей методикой 6. Соединение 47 в чистом виде получают после удаления растворителей выпариванием при пониженном давлении.
- 41 011305 'Н ЯМР диметилсульфоксид б6 δ ч./млн: 1,40 (8, 6Н), 2,23 (8, 6Н), 4,03 (8, 3Н), 7,43 (б, 1Н, 1 = 8,7 Гц), 7,60 (8, 2Н), 7,65 (б, 1Н, 1 = 15,40 Гц), 7,88 (б, 1Н, 1 = 15,40 Гц), 8,31 (8, 1Н), 8,51 (б, 1Н, 1 = 8,70 Гц), 12,80 (8, 1Н).
8М (Е8-М8): 437,3 (т+1).
Р°С=182,5.
Пример 2. Определение противоокислительных свойств соединений согласно изобретению.
Защита липопротеинов низкой плотности от окисления медью.
Тестируемыми соединениями служили соединения согласно изобретению, получение которых описано в приведённых выше примерах.
Окисление липопротеинов низкой плотности вызывает существенное изменение и играет решающую роль в возникновении и развитии атеросклероза (1игдеп8, НоРР и др., 1987). Приводимый ниже протокол позволяет выявить противоокислительные свойства соединений. Если не указано особо, то использованы реактивы фирмы «Сигма» (8ί ОиепНп. Франция).
Липопротеины низкой плотности были приготовлены по методу, описанному Лёбо (ЬеЬеаи, Ригтап и др., 2000).
Растворы из тестируемых соединений были приготовлены в концентрации 10-2 М в бикарбонатном буфере (рН 9) и разбавлены физиологическим раствором с фосфатным буфером (РВ8) с целью обеспечения конечных концентраций от 0,1 до 100 мкМ.
Перед окислением из липопротеинов низкой плотности удалили ЭДТК диализом. После этого окисление протекало при 30°С при добавке 100 мкл раствора Си8О4 16,6 мкМ к 160 мкл липопротеинов низкой плотности (125 мкг протеинов/мл) и 20 мкл раствора тестируемого соединения. Образование диенов, являющихся наблюдаемыми веществами, измеряли по оптической плотности при 232 нм в образцах, обработанных соединениями с медью или без неё. Измерение оптической плотности при 232 нм проводилось каждые 10 мин на протяжении 8 ч с применением термостатируемого спектрофотометра (Тесап и1(га 380). Анализы проводились троекратно. Считается, что соединения обладают противоокислительной активностью в том случае, когда они вызывают задержку лаг-фазы, снижают скорость окисления и количество образовавшихся диенов по отношению к контрольному образцу. Авторы изобретения установили, что соединения согласно изобретению обладают по меньшей мере одним из приведённых выше противоокислительных свойств, что указывает на то, что соединениям согласно изобретению присуще противоокислительное свойство.
Типичные результаты приведены на фиг. 1а, 1Ь, 1с, 2а, 2Ь, 2с, 3а, 4а, 4Ь, 4с, 5а, 5Ь, 5с, 6а, 6Ь, 6с, 7а, 7Ь, 7с, 8а, 8Ь, 8с, на них показаны противоокислительные свойства соединений согласно изобретению.
Пример 3. Измерение противоокислительных свойств соединений согласно изобретению, выполненное на клеточных культурах.
Протокол культивирования.
Клеточные линии, использованные при проведении опытов такого типа, представляют собой нейроны, нейробластомы (человека) или клетки РС12 (крысы). Клетки РС12 готовили из феохромцитомы крысы, охарактеризовали методом Огеепе и Т18сЫег (Огееп апб Т18ск1ег, 1976). Эти клетки регулярно используются при исследованиях нейронной дифференциации, трансдукции сигнала и гибели нейронов. Клетки РС12 культивируют, как описано выше (РагтеШ, Рагк и др., 1996), в среде, полностью состоящей из КРМ1 (1пукгодеп), с добавкой 10% сыворотки лошади и 5% сыворотки эмбриона телёнка.
Также применялись (первичные) культуры эндотелиальных клеток и гладких мышц. Клетки были заказаны на фирме Рготосе11 (Рготосе11 ОтЬН, г. Гейдельберг) и культивировались с соблюдением указаний поставщика.
На клетки воздействовали соединениями в разных дозах, от 5 до 300 мкМ, в течение 1 суток. Затем клетки извлекали и определяли увеличение экспрессии генов-мишеней с помощью количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Измерение тРНК
Из клеток культуры, обработанных и не обработанных соединениями согласно изобретению, была экстрагирована тРНК. Экстракцию проводили с применением реактивов из набора ЛЬ8о1и1е1у ΚΝΑ КТ-РСК т1шргер Κίί (фирма 8РО:адепе, Франция) с соблюдением указаний поставщика. После этого тРНК количественно определяли спектрометрией и количественной ОТ-ПЦР с применением набора Ь-щЫ Сус1ег Ра8ί 8(аг( ΌΝΑ Ма81ег 8уЬг Огееп I кН (Коске) на аппарате Ыдк! Сус1ег 8у8ίет (фирма Коске, Франция). В качестве зондов применялись специфические пары генов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы (СРх) противоокислительных ферментов. В качестве контрольных зондов применялись специфические пары генов β-актина и циклофилина.
Увеличение экспрессии тРНК, измеренное количественной ОТ-ПЦР, и генов противоокислительных ферментов выявляли в разных типах применявшихся клеток в том случае, когда на эти клетки воздействовали соединениями согласно изобретению.
- 42 011305
Контроль окислительного стресса
Измерение окисляющих веществ в культуральных клетках.
Противоокислительные свойства соединений оценивали также посредством флуоресцирующего индикатора, окисление которого сопровождалось появлением флуоресцентного сигнала. Снижение интенсивности излучённого флуоресцентного сигнала измеряли в клетках, на которые воздействовали соединениями согласно изобретению следующим образом: клетки РС12, культивирование которых описано выше (чёрные планшетки с 96 лунками и прозрачными основаниями, фирма Еа1соп), инкубировали с применением возрастающих доз Н2О2 (0,25-1 мМ) в среде без сыворотки в течение 2-24 ч. После инкубации среду удаляли, а клетки инкубировали с раствором дихлордигидрофлуоресцеиндиацетатом (Όί'ΤΌΑ. Мо1еси1аг РгоЬе8, Еидепе, США) 10 мкМ в физиологическом растворе с фосфатным буфером (РВ8) в течение 30 мин при 37°С в атмосфере с содержанием 5% СО2. После этого клетки промывали указанным физиологическим раствором. Степень флуоресценции, испускаемой индикатором окисления, измеряли с помощью флуориметра (Тесап И11га 384) при длине волны возбуждения 495 нм и при длине волны излучения 535 нм. Результаты выражали в процентах защиты по отношению к контрольному окисленному образцу.
Интенсивность флуоресценции была более слабой в клетках, инкубированных совместно с соединениями согласно изобретению, чем в клетках, на которые не воздействовали этими соединениями. Данные результаты показывают, что соединения согласно изобретению способствуют замедлению производства окисляющих веществ в клетках, подверженных окислительному стрессу. Описанные выше противоокислительные свойства оказываются также эффективными и в отношении защиты от радикалов в культуральных клетках.
Измерение уровня перекисного окисления липидов.
Защитное воздействие соединений на перекисное окисление липидов в клеточных культурах (указанных выше клеточных моделях) определяли следующим образом.
Разные клеточные линии и клетки первичной культуры обрабатывали, как было указано выше, после обработки отбирали надосадочную жидкость, клетки лизировали и выделяли для определения концентрации протеинов. Степень переокисления определяли следующим образом.
Перекисное окисление липидов измеряли с помощью тиобарбитуровой кислоты, реагирующей на липопероксидацию альдегидов, такого как малоновый диальдегид. После обработки собирали надосадочную жидкость клеток (900 мкл) и в неё добавляли 90 мкл бутилированного гидрокситолуола (МогЕеге, Моу8ап и др., 1991). В реакционные среды также добавляли 1 мл раствора тиобарбитуровой кислоты 0,375% в 0,25 М соляной кислоты с содержанием 15% трихлоруксусной кислоты. Смесь нагревали до 80°С в течение 15 мин, затем охлаждали на льду и с помощью бутанола экстрагировали органическую фазу. Анализ органической фазы проводился методом спектрофлуориметрии (/ехс=515 нм и /ет=550 нм) с применением спектрофлуориметра 8Ытахи 1501 (Ыитахи Согрогайоп, г. Киото, Япония). ТВАК8 выразили в эквивалентах малонового диальдегида, используя при этом стандарт тетра-этоксипропана. Результаты нормировали по отношению к содержанию протеинов.
Снижение уровня перекисного окисления липидов, отмеченное в клетках, на которые воздействовали соединениями согласно изобретению, подтвердили ранее полученные результаты.
Соединения согласно изобретению обладают оптимальными, присущими им противоокислительными свойствами, которые позволяют замедлить и/или задержать воздействие окислительного стресса. Авторы изобретения также установили, что соединения согласно изобретению способны вызывать экспрессию генов противоокислительных ферментов. Эти особые свойства соединений согласно изобретению позволяют клеткам более эффективно противодействовать окислительному стрессу и, следовательно, они оказываются защищёнными от повреждений, вызываемых свободными радикалами.
Пример 4. Определение активации РРАК рецепторов ш У11го под действием соединений согласно изобретению.
Тестированными соединениями являются соединения, обладающие функцией карбоновой кислоты, получение которых описано в приведённых выше примерах.
Ядерные рецепторы, являющиеся членами подсемейства рецепторов (РРАК), активируемые двумя основными классами фармацевтических соединений, фибратами и глитазонами и широко применяемые в клинике человека при лечении разных форм дислипидемии и диабета, играют важную роль в гомеостазе липидов и углеводов. Последующие экспериментальные данные показывают, что соединения, согласно изобретению, активируют РРАКа, РРАКу и РРАКа ш уйго.
Активация рецепторов РРАК оценивалась т У11го на клеточных линиях эпителиального типа КК13 или СО8-7 измерением транскрипционной активности химер, образованных ДНК доменом связывания транскрипционного фактора Са14 дрожжей и доменом связывания лиганда разных РРАК. Эти последние результаты позднее подтвердились в клеточных линиях, соответствующих следующим протоколам.
Пример касается клеток КК13 и СО8-7.
- 43 011305
Протоколы культивирования
Клетки КК13 были получены от ЕСАСС (Ройоп Οο\νη. Англия). клетки СО8-7 - от АТСС (Атепсап Туре СиЙиге С.о11есбоп). а также были выращены в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла с добавкой 10 об.% сыворотки эмбриона телёнка. 100 ед./мл пенициллина (ШЬ8о. Ра181еу. Англия) и 2 мМ Ь-глутамина (ШЬсо. Ра181еу. Англия). Среду культивирования меняли каждые двое суток. Клетки хранились при 37°С во влажной атмосфере. состоявшей из 5% СО2 и 95% воздуха.
Описание плазмид. применявшихся при трансфекции.
Плазмиды р65Ткр6Ь3. рКЬ-СМУ. р6а14-1РРАЯа. р6а14-йРРАКу. рСа14-11РРАК<5 и р6а14-р описаны Яа8ре. Маб8еп и др. (1999 г.). Конструкты рСа14-тРРАКа. рСа14-НРРАКу. рСа14-11РРАК<5 были получены клонированием в векторе рСа14-р фрагментов ДНК. амплифицированных ПЦР. соответствующих доменам ΌΕΕ ядерных рецепторов РРЕЯа. РРАКу. РРАК5 человека.
Трансфекция
Клетки КК13 были высеяны в культуральные чашки с 24 лунками из расчёта 5х104 клеток/лунка. клетки СО8-7 - на планшетки с 96 лунками из расчёта 5x10 клеток/лунка и подвергались трансфекции в течение 2 ч вместе с репортерной плазмидой р65Ткр6Ь3 (50 нг/лунка). векторами экспрессии р6а14-р. р6а14тРРАКа. рСа14-1РРАКа. рСа14-НРРАКу. рСа14-11РРАК<5 (100 нг/лунка) и вектором контроля эффективности трансфекции рКЬ-СМУ (1 нг/лунка) в соответствии с приведённым выше протоколом (Яа8ре. Маб8еп и др.. 1999). затем инкубировались в течение 36 ч с тестируемыми соединениями. По окончании опыта клетки лизировали (ШЬ8о. Ра181еу. Англия) и определили активность люциферазы с использованием набора для количественного анализа Пиа1-Ьисйега8е™ КероПег А88ау 8у8ΐет (Рготеда. Маб18оп. ^1. США) клеток КК13 и 8ΐеабе С1о\у Ьис|Гега8е (Рготеда) клеток СО8-7 в соответствии с инструкцией поставщика. как указывалось выше. После этого определяли содержание протеинов в клеточных экстрактах с использованием набора для количественного анализа Эю-Каб Рго1ею А88ау (Вю-Яаб. г. Мюнхен. ФРГ) в соответствии с инструкцией поставщика.
Авторы изобретения установили повышение активности люциферазы в клетках. обработанных соединениями согласно изобретению и подвергнутых трансфекции с применением плазмиды рСа141РРАКа. Это свидетельствует о том. что соединения согласно изобретению являются активаторами для РРАКа. Примеры результатов приведены на фиг. 9а. 10а. 11а. 12а. 13а. 14а. 15а. 16а. 17а и 18а. на которых показаны свойства соединений согласно изобретению в качестве активаторов РРАКа.
Авторы изобретения также выявили повышение активности люциферазы в клетках после их обработки соединениями согласно изобретению и подвергшихся трансфекции посредством плазмиды рСа141РРАКу. Это указывает на то. что соединения согласно изобретению являются активаторами для рецепторов РРАКу.
Примеры результатов представлены на фиг. 9Ь. 10Ь. 11Ь. 12Ь. 14Ь. 15Ь и 18Ь.
Авторы изобретения обнаружили повышение активности люциферазы в клетках после воздействия на них соединениями согласно изобретению и после трансфекции посредством плазмиды рСа14-11РРАК<5. Это свидетельствует о том. что соединения согласно изобретению являются активаторами для РРАК5.
Примеры результатов представлены на фиг. 11с. 13Ь. 14с и 15с.
Пример 5. Определение противовоспалительных свойств соединений согласно изобретению.
Воспалительная реакция появляется при многочисленных неврологических нарушениях. таких как множественные склерозы. болезни Альцгеймера и Паркинсона. разные виды церебральной ишемии. и в случае травмирования головного мозга. Более того. воспаление является одним из важных факторов нейроперерождения. При церебральных травмах одной из первых реакций клеток глии является выделение цитокинов и свободных радикалов. Следствием такого выделения цитокинов и свободных радикалов является воспалительная реакция на церебральном уровне. которая может привести к гибели нейронов (КоШтее11. 1997).
Клеточные линии и первичные клетки культивировали как описано выше.
Липополисахарид. бактериальный эндотоксин (Е8с11епс1иа сой 0111 : В4) (81дта. Франция) воспроизводили в дистиллированной воде и хранили при 4°С. На клетки воздействовали липополисахаридом при концентрации 1 мкг/мл в течение 1 суток. Для исключения любого влияния на другие факторы культуральной среды клетки были полностью заменены.
Т№-а представляет собой важный фактор воспалительной реакции на стресс (например. окислительный). Для оценки секреции Т№-а в ответ на стимуляцию возрастающими дозами липополисахарида отбирали стимулированную культуральную среду и определяли количество Т№-а с помощью набора ЕЫ8А-Т№-а (1ттипо1ес11. Франция). Пробы разбавляли в 50 раз для обеспечения адекватности с эталонным набором (С1апд. Ниб8оп и др.. 2000).
Противовоспалительное свойство соединений согласно изобретению определяли следующим образом: полностью заменяли культуральную среду клеток. а клетки инкубировали с использованием тестируемых соединений в течение 2 ч. После этой инкубации в культуральную среду вводили липополисахарид с конечной концентрацией 1 мкг/мл. После 24-часовой инкубации отделяли надосадочную жидкость
- 44 011305 клеток и хранили при -80°С в течение времени, пока не потребовалось воздействовать на неё непосредственно. Клетки лизировали, количество протеинов количественно измеряли с помощью набора количественного анализа Βίο-Кай Рго1еш А88ау (Βίο-Кай, г. Мюнхен, ФРГ) в соответствии с инструкцией поставщика.
Результат измерения снижения секреции ΤΝΕ-α после воздействия тестируемыми соединениями был выражен в пг/мл/мкг протеина и соотнесён в процентном выражении с контрольным образцом. Эти результаты показывают, что соединения согласно изобретению обладают противовоспалительными свойствами.
Пример 6. Определение воздействия на метаболизм липидов ίη νίνο.
Тестируемыми соединениями согласно изобретению были соединения, получение которых описано в приведённых выше примерах.
Фибраты, широко применяемые в клинике человека при лечении разных форм дислипедии, возникают при развитии атеросклероза, являющегося одной из основных причин смертности и инвалидности в западных обществах и являются мощными активаторами ядерного рецептора РРАКа. Последний регулирует экспрессию генов, участвующих в транспортировке (аполипопротеинов, таких как Аро ΑΣ, Аро АП и Аро СШ, мембранных транспортёров, таких как ЕАТ) или катаболизме липидов (АСО, СРТ-Σ или СРТ-П). Воздействие активаторами рецептора РРАКа приводит к снижению циркулирующих количеств холестерина и триглицеридов у людей или грызунов.
Следующие протоколы позволяют выявить снижение количества триглицеридов и циркулирующего холестерина и роль соединений согласно изобретению в профилактике и/или лечении сердечнососудистых заболеваний.
Воздействие на животных
Трансгенных мышей Аро Е2/Е2 выдерживали при цикле освещённость/темнота 12/12 ч при постоянной температуре 20±3°С. По истечении одной недели акклиматизации мышей взвешивали и группировали по 6 мышей таким образом, чтобы достигалось их равномерное распределение по весу тела. Тестируемые соединения суспендировали в карбоксиметилцеллюлозе и вводили животным через желудочный зонд один раз в сутки в течение 7 суток в указанных количествах. Животные имели свободный доступ к воде и пище. По окончании эксперимента животных взвешивали и умертвляли под анестезией. Кровь собирали в присутствии ЭДТК. Плазму получали центрифугированием при скорости 3000 об./мин в течение 20 мин. Были отобраны также пробы печени, которые хранились в замороженном виде в жидком азоте для последующего анализа.
Измерение сывороточных липидов и аполипопротеинов
Концентрацию липидов в плазме сыворотки (общее количество холестерина и свободный холестерин, триглицериды и фосфолипиды) определяли колориметрическим количественным анализом (Воейппдег, г. Мангейм, ФРГ) в соответствии с инструкцией поставщика. Концентрацию аполипопротеинов в плазме сыворотки А!, АП и СШ определяли описанными выше методами (Ка8ре и др., 1999 г., А88е1 6. и др., Ь1р1й8, 1999).
Пример результатов приведён на фиг. 19а, 19Ь, 19с и 19й, на которых показана активность воздействия соединения 2 на метаболизм триглицеридов и холестерина. Пример результатов приведён также и на фиг. 20а, 20Ь, 20с и 20й, на которых показано активное воздействие соединений 13, 33 и 39 на метаболизм триглицеридов и холестерина.
Анализ РНК
Общую РНК отделяли от фрагментов печени путём экстракции смесью из гуанидин тиоцианата фенол/хлороформ в соответствии с описанным выше протоколом (Ка8ре и др., 1999). Количество информационной РНК определяли количественной ОТ-ПЦР с помощью набора ЫдЫ Сус1ег Еа81 81аП ΩΝΛ Ма81ег 8уЬг 6гееп I К11 (НоГГтап-Ба КосЕе, г. Базель, Швейцария) на приборе ЫДИ Сус1ег 8у81ет (НоПтап-Ьа КосЕе, г. Базель, Швейцария). В качестве зондов использовались пары специфичных праймеров генов АСО, Аро СШ и Аро АП. Пары специфичных праймеров генов 36В4, β-актина и циклофилина использовались в виде контрольных зондов. В качестве альтернативы проведён анализ всего количества РНК с использованием №йЕеп В1о1 или Эо1 В1о1 в соответствии с описанным выше протоколом (Ка8ре и др., 1999).
Пример 7. Определение нейрозащитных свойств соединений согласно изобретению на модели церебральной ишемии при реперфузии.
Профилактическая модель
1) Воздействие на животных.
1.1. Животные и введение в них соединений.
В этом эксперименте использовали мышей С57, 6/чёрных (диких). Мышей выдерживали при цикле освещённость/темнота 12/12 ч при температуре 20±3°С. Они имели свободный доступ к воде и пище. Приём пищи и прибавка в весе регистрировались.
Через желудочный зонд животным вводили соединения согласно изобретению или наполнитель (0,5% карбоксицеллюлозу) в течение 14 суток перед образованием ишемии средней артерии головного
- 45 011305 мозга.
1.2. Провокация реперфузией ишемии внутрипросветным перекрытием срединной артерии головного мозга.
Животных анестезировали посредством внутрибрюшной инъекции 300 мг/кг хлоральгидрата. Животным ввели ректальный зонд и поддерживали температуру тела при 37±0,5°С. Артериальное давление измеряли на протяжении всего эксперимента.
Под хирургическим микроскопом вскрыли правую сонную артерию медиальным шейным надрезом. Перевязали крыловидно-нёбную артерию в её начале, затем проводили артериотомию в наружной сонной артерии для введения в неё нейлонового моноволокна. Это волокно осторожно продвигали по общей сонной артерии и затем по внутренней сонной артерии для перекрытия начальной части срединной артерии головного мозга. Через 1 ч волокно извлекали для достижения реперфузии.
2) Измерение объёма инфаркта мозга.
Через 1 сутки после реперфузии животных, ранее обработанных соединениями, а также не обработанных ими, умерщвляли передозировкой пентобарбитала.
Головной мозг быстро замораживали и производили срез. Срезы красили крезиловым фиолетовым. Неокрашенные зоны срезов головного мозга считались поражёнными инфарктом. Измеряли поверхности и определяли объём инфаркта обоих полушарий по формуле (объём инфаркта после коррекции = объёму инфаркта - (объём правого полушария - объём левого полушария)) для компенсации отечности головного мозга.
Анализ срезов головного мозга обработанных животных показал резкое уменьшение объёма инфаркта по отношению к животным, не прошедшим обработку. В том случае, когда соединения согласно изобретению вводятся животным до появления ишемии (профилактический эффект), то они способны обеспечить нейрозащиту.
3) Измерение активности противоокислительных ферментов.
Головной мозг мышей замораживали, размельчали и переводили в состояние порошка, после этого суспендировали в солевом растворе. Производили замеры активности разных ферментов, как это описано разными авторами: супероксиддисмутаза (Нойе ηηά ϋ11ίη§. 1984), глутатионпероксидаза (Радйа ηηά Уа1спНп. 1967), глутатионредуктаза (8роопег, □сШс8 и др., 1981), глутатаион-8-трансфераза (НаЫд ηηά 1акоЬу, 1981), каталаза (АеЬ1, 1984).
Активность указанных выше ферментов возросла в препаратах из мозга животных, прошедших воздействие соединениями согласно изобретению.
Лечебная модель или лечение на фазе обострения
1) Индукция ишемии/реперфузия внутрипросветным перекрытием срединной артерии головного мозга.
В данном эксперименте использовали животных, которые описаны выше.
Животных анестезировали посредством внутрибрюшной инъекции 300 мг/кг хлоральгидрата. Животным вводили ректальный зонд и поддерживали температуру тела 37±0,5°С. Артериальное давление измеряли на протяжении всего эксперимента.
Под хирургическим микроскопом вскрывали правую сонную артерию медиальным шейным надрезом. Перевязывали крыловидно-нёбную артерию в её начале, затем проводили артериотомию в наружной сонной артерии для введения в неё нейлонового моноволокна. Это волокно осторожно продвигали по общей сонной артерии и затем по внутренней сонной артерии для перекрытия начальной части срединной артерии головного мозга. Через 1 ч волокно извлекли для проведения реперфузии.
2) Воздействие на животных.
Животным, претерпевшим предварительную ишемию-реперфузию, вводили орально (через желудочный зонд) дважды в сутки соединения, согласно изобретению в течение 24 или 72 ч.
3) Измерение объёма инфаркта мозга.
Через 24 или 72 ч после реперфузии животных, предварительно обработанных, а также не обработанных соединениями, умертвляли передозировкой пентобарбитала.
Головной мозг быстро замораживали и производили срез. Срезы красили крезиловым фиолетовым. Не окрашенные зоны срезов головного мозга считались поражёнными инфарктом. Измеряли площади поверхностей и определяли объём инфаркта обоих полушарий расчётом по формуле (объём инфаркта после коррекции = объёму инфаркта - (объём правого полушария - объём левого полушария)) для компенсации отечности головного мозга.
В случае лечебного воздействия (на фазе обострения) животные, подвергшиеся воздействию соединениями согласно изобретению, имели меньше повреждений на уровне головного мозга, чем животные, которые этому воздействию не подверглись. Действительно, объём инфаркта снижался в том случае, когда вводились соединения согласно изобретению, одно- или многократно после ишемии-реперфузии.
Пример 8. Определение защитного воздействия соединений согласно изобретению на модели больного атеросклерозом животного.
Благодаря активирующим и противоокислительным свойствам рецептора РРАК соединения соглас
- 46 011305 но изобретению оказывают благотворное влияние на развитие атероматозной бляшки.
1) Воздействие на животных.
Трансгенных животных Аро Е2/Е2, самок в возрасте около 2 месяцев, выдерживали в цикле освещённость/темнота 12/12 ч при постоянной температуре 20±3°С в течение периода акклиматизации и всего времени эксперимента.
После недельного срока акклиматизации мышей взвешивали и объединяли в группы по 8 подобранных мышей таким образом, чтобы их распределение по весу было равномерным.
Животные имели беспрепятственный доступ к воде и пище, в течение двух недель до воздействия на них соединениями их рацион питания был типа \\'е81егп и состоял из 21% жира и 0,15% холестерина.
По истечении указанного периода тестируемые соединения вводились в пищу в указанных количествах. Воздействие длилось 6 недель.
Животных взвешивали и умертвляли под анестезией цервикальным смещением: сердце подвергали перфузии ίη 811и и готовили к последующему гистологическому анализу, в правый желудочек вводили иглу и рассекали аорту в брюшной части; до начала эксперимента отбирали пробы крови, затем каждую неделю и по окончании эксперимента. Кровь объединяли в присутствии ЭДТК. Плазму готовили центрифугированием при скорости 3000 об./мин в течение 20 мин (измеряли количество в плазме холестерина и триглицидов).
2) Выполнение срезов для гистологического исследования.
В течение 10 мин вводили раствор КгеЬ8 Втдег. Ткани фиксировали 4% фактором активации тромбоцитов (РАР) в физиологическом растворе с фосфатным буфером 10 мМ при -4°С в течение ночи. Затем пробы промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером 100 мМ. Сердца помещали в 30% раствор трис-сахарозы на сутки, после этого погружали в орнитинкарбамилтрансферазу (ОСТ) (ткань Теск) на 30 мин в вакууме, затем в форму с содержанием орнитинкарбамилтрансферазы, после этого погружали в изопентан и охлаждали жидким азотом. Пробы хранились при -80°С.
Криогенные срезы толщиной 10 мкм производились от дуги аорты до исчезновения клапанов. Их собирали на пластинки с желатиновым покрытием.
3) Гистологическое исследование.
Пластинки были окрашены раствором среднего каменноугольного масла и гематоксилина с таким расчётом, чтобы можно было отличить среднюю часть от внутренней оболочки кровеносных сосудов. Разные морфогенные параметры определяли с помощью микроскопа О1утри8 и цветной камеры, подключённой к системе анализа изображений Ληη1\·8ί8. Количественная оценка повреждённых поверхностей производилась вручную с использованием пластины графического ввода, подключённой к той же информационной системе.
Общая поверхность атероматозных нарушений выражена в мкМ2 и сравнивалась с контрольной группой. Тестируемые соединения согласно изобретению позволяют существенно уменьшить поверхность патологических изменений и снижают развитие этих изменений.
Пример 9. Влияние соединений согласно изобретению ίη νίΐτο на дифференциацию и созревание дендритных клеток.
Соединение 39 тестировали на дифференциацию дендритных клеток, образовавшихся из моноцитов (с последующим приобретением фенотипа дендритных клеток).
Для этих экспериментов пробы крови были взяты у добровольных доноров (Французское ведомство крови), моноциты отделяли по стандартному протоколу, использующему магнитные шарики с антиί.Ό14 (МШему! В1о1ес). Затем производили дифференциацию выделенных моноцитов и инкубировали их в течение 6 дней в культуральной среде с содержанием смеси из цитокинов СМ-С8Р и 1Ь-4 (20 нг/мл для каждого из цитокинов).
Соединение 39 добавляли при 1=0. Превращение дендритных клеток в фенотип исследовали через экспрессию маркёра СО1а на поверхности клеток. Таким образом, авторы изобретения показали, что соединение 39 влияет в значительной степени на дифференциацию дендритных клеток, исключая почти полностью экспрессию ί.Ό1η на поверхности клеток (фиг. 21). Экспрессия молекулы совместной стимуляции ί.Ό80 также сведена до более низкого уровня, в то время как экспрессия СЭ86 существенно возросла (данные не приведены). Схожие результаты были получены и при тестировании соединений 13 и 31 согласно изобретению. Эти результаты свидетельствуют о том, что соединения согласно изобретению влияют на дифференциацию дендритных клеток и стимулируют приобретение дендритными клетками атипичного фенотипа.
После этого исследовали влияние указанных соединений на созревание дендритных клеток, образованных липополисахаридом. При этих экспериментах на дендритные, произошедшие от моноцитов клетки, полученные в течение 6 дней дифференциации, предварительно воздействовали соединениями согласно изобретению в течение 4 ч, затем их стимулировали липополисахаридом в течение 16 ч. При этом было установлено, что соединения влияют в значительной степени на транскрипцию, вызываемую липополисахаридом рецептора ССВ7 и его лиганда ЕЬС (фиг. 22). На фиг. 22 видно также, что существенно снижена и секреция цитокина при воспалении ΤΝΡ-альфа, вызванном липополисахаридом.
Снижение экспрессии ЕЬС и ССВ7, являющихся ключевыми генами, обеспечивающими подвиж
- 47 011305 ность дендритных клеток, свидетельствует о том, что соединения, согласно изобретению, замедляют миграцию дендритных клеток до вторичных лимфоидных органов и таким образом влияют на инициацию иммунной реакции, вызываемой этими клетками.
Следовательно, авторы изобретения показали, что дендритные клетки, произошедшие из моноцитов и подвергнутые воздействию соединения 31, обладают пониженной способностью вызывать пролиферацию естественных клеток Т Γ.Ό4+ благодаря смешанной реакции лимфоцитов (МЬК) (фиг. 23). Для этого эксперимента инкубировали возросшие количества зрелых дендритных клеток (после воздействия соединением или без него) вместе с постоянным количеством естественных клеток Т ί.Ό4+. произошедших от другого донора. После инкубации в течение 5 суток добавляли на 24 ч бромдиоксиуридин, его внедрение в клетки Т измеряли посредством иммуноферментного твёрдофазного анализа (ЕЫ8А) с использованием антител антибромдиоксиуридина, связанных с хемилюминесцентными метками.
Пример 10. Влияние соединений согласно изобретению ίη νίνο на модель аллергической астмы, вызванной овальбумином у мыши.
Проводилось исследование влияния соединений согласно изобретению в виде анализов ίη νίνο с использованием модели аллергической астмы, спровоцированной овальбумином у мыши.
Для этих экспериментов мышей сенсибилизировали внутрибрюшными инъекциями овальбумина в присутствии гидроксида алюминия в течение 0-10 дней эксперимента. В течение 18-22 дней мыши получали ежедневно 50-200 мг/кг соединений согласно изобретению через желудочный зонд. Было проведено три последовательных введения овальбумина в виде аэрозоля на 20, 21 и 22 день. Соединение вводилось в течение около 1 ч перед каждым распылением. Затем на 24 день мышей умертвляли и собирали промывочную бронхоальвеолярную жидкость для определения компонентов клетки (макрофагов, эозинофилов, лимфоцитов, нейтрофилов) и для измерения цитокинов 1Ь-5, 1Ь-13, ГБ-4.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что соединения согласно настоящему изобретению влияют на дифференциацию и созревание дендритных клеток и ограничивают миграцию этих клеток в направлении к вторичным лимфоидным органам. Кроме того соединения обладают пониженной способностью вызывать пролиферацию естественных клеток Т Γ.Ό4+. Таким образом, соединения согласно изобретению влияют на инициацию иммунной реакции и, следовательно, являются эффективным терапевтическим средством при лечении астмы.
ЛИТЕРАТУРА
АеЬ1, Н. (1984). Саΐа1аδе ίη νίΐτο. Меΐкοάδ Еп7уто1 105: 121- 6.
АидеБ V., Наттаά Н., 8(аек В., Саргоп М., БатЬгесЫ Β.Ν., Тгойеш Р. (2003) Ρе^οx^δοте ргоБГегаΐο^-ас(^νаΐеά гесерЮг датта ίηΗίόίΙδ (ке тгдгайои оГ άеηά^^(^с сеП-δ: сοηδе^иеηсеδ Гог (ке 1ттипе ^еδрοηδе, 1 1ттипо1. 170(10):5295-301.
Аδδеΐ 6., 8(аек В., ^о1ГГ В.Ь., Вайде Е., Май] Ζ., РгисБай 1.С., ^а11οηдеν^11е 1. (1999). ЕГГеСз оГ Ρίηπδ рккМег ηηά Ρίηπδ кο^а^еηδ^δ δееά ок δирр1етеη(а(^οη оп 11рорго1е1п теΐаЬο1^δт ίη (ке гак ^^р^άδ 34(1): 3944.
Скапд, В. С., Ρ. Ниάδοη, еΐ а1. (2000). 1пГ1иепсе оГ пеигснъ оп Брοрο1уδасскаπάе-δΐ^ти1аΐеά р^οάисΐ^οη оГ П11г1с οx^άе ηηά (итог ηес^οδ^δ ГасЮг-а1рка Ьу сгНШгеЛ дПа. Вгат Κ^δ 853(2): 236-44.
^еδνе^дηе, В. ηηά ^. \Уакк (1999). Ρе^οx^δοте р^ο1^Ге^аΐο^-асΐ^νаΐеά гесерЮге: пис1еаг соп(го1 оГ те(аЬоШт. Е^осг Κ^ν 20(5): 649-88.
Окпадк и., СМесо1а, е( а1. (1999). '^(коЬюкду оГ ίδΟκκιηκ δ(^οке: ап ^ηΐед^аΐеά У1е\\·. Τΐηάδ №иго8с1 22(9): 391-7.
РаппеШ, 8. Е., Багк, Ό.8. е( а1. (1996). Шпс οx^άе άе1ауδ (ке άеа(к оГ(горкгс Гасΐο^-άер^^νеά Ρί.Ί2 се1Ш ηηά δутраΐкеΐ^с пеигснъ Ьу а с6МΡ-теά^аΐеά тескнШт. 1 №иго8с1 16(7): 2325-34.
Р1оке, Ь. ηηά Ойтд Р. (1984). 8ире^οx^άе ά^δти(аδе аδδауδ. Ме(йοάδ Еп7уто1 105:93-104.
611дип-8кегк1, Υ., Ме1атеά, Е. е( а1. (2001). Оx^άа(^νе δΐκδδ ^ηάисеά-ηеи^οάедеηе^аΐ^νе ά^δеаδеδ: (ке ηееά Гог аηΐ^οx^άаηΐδ 1ка1 репеШИе (ке Ь1οοά Ьгат Ьатег. №игоркагтасо1оду 40(8): 959-75.
6οδδеΐ, Ρ., СкагЬоптег А.8., Эект^е Ρ., Роп(ате к, 8(аек В., Ρеδΐе1 к, Топпе1 А.В., Тгойеш Р. (2001). Ρе^οx^δοте ргоКГегаЮг-асБуаЮ гесерЮг датта асШаФт аГГес( (ке такгайоп оГ китап тοηοсуΐе-άе^^νеά άеηά^^ΐ^с се^ Еиг I 1ттипо1. 10: 2857- 65.
бгеепе, Ь. А. ηηά ^сккг А. 8. (1976). ЕδΐаЬ1^δктеηΐ оГ а ηο^аά^еηе^д^с с1опа1 1ше оГ га( аά^еηа1 ркеоскготосу(ота сеП-δ ^Ыск ^еδрοηά (о пегуе дго\\1к ГасЮг. Бгос Νη11 Асаά 8с1 И8А 73(7): 2424-8.
Сиегге-МШо, М., 6е^νο^δ, Ρ. е( а1. (2000). Ρе^οx^δοте р^ο1^Ге^аΐο^-асΐ^νаΐеά гесерЮг а1рка асШаФт ппргоуе ш8и1ш δеηδ^ΐ^ν^(у ηηά ^еάисе аά^рοδ^(у. 1 Вю1 Скет 275(22): 16638-42.
НаЫд, ^. Н. ηηά 1акоЬу ^. В. (1981). Аδδауδ Гог ά^ГГе^еηΐ^а(^οη оГ д1и(а(Ыопе 8-ΙηηδΒπ^δ. Ι^Ι^άδ Еп7уто1 77: 398-405.
Ноиг(оп, Ό., □екнуе, Ρ. е( а1. (2001). Оx^ά^ζеά ^'^ηδΗγ 11рорго(ет ηηά ре^οx^δοте-р^ο1^Ге^аΐο^ас(^νаΐеά гесер(ог а1рка άο^η-^еди1аΐе р1аΐе1еΐ-асΐ^νаΐ^ηд-Гасΐο^ гесерЮг еxр^еδδ^οη ίη китап тас^οркадеδ. Вюскет ί 354(Ρΐ 1): 225-32.
1п(егпа(1опа1 Аΐке^οδс1е^οδ^δ 8оае(у На^тοη^ζеά С11шса1 6и^άе1^ηеδ оп Ρ^еνеη(^οη оГ Аΐке^οδс1е^ο(^с Vаδси1а^ ^^δеаδе 2003.
- 48 011305
Шгдепк, 6., НоГГ, Н. Р. с1 а1. (1987). Мо6Шсайоп оГ йитап кегит 1ом 6епкйу 11рорго(с1п Ьу ох16айопсйагас1епха1юп ап6 ра!йорйукю1одюа1 ипрксайопк. Сйет ΡΙπέ Ыр16к 45(2-4): 315-36.
Котиуек, Ь. 6., Нап1еу, К. еΐ а1. (2000). 8йти1айоп оГ ΡΡАВα1рйа ргото1ек ер16егта1 кегайпосу1е 61ГГегепйайоп т У1уо. 1 1пуек1 Эегта1о1 115(3): 353-60.
ЬеЬеаи, 1., Ригтап, С. еΐ а1 (2000). Апйох16ап1 ргорегйек оГ 6Мег1-Ьи1у1йу6гоху1а1е6 £1ауопо16к. Ргее Ва6ю Бю1 Ме6 29(9): 900-12.
Маΐек, 1. М., Ρе^еζ-6οтеζ, С. еΐ а1. (1999). Апйох|6ап1 еηζутек ап6 йитап 61кеакек. С1ш Вюсйет 32(8): 595-603.
Могйеге, Ρ., Моукап, А. еΐ а1. (1991). иУА-т6исе6 Йр16 регох16айоп ш си11иге6 йитап ПЬгоЬ1ак1к. ВюсЫт Вюрйук Ас1а 1084(3): 261-8.
№псюш А., бгипеЬасй Р., 2оЬуи1акк1 А., Оепхйпдег С., Вгиддег ^., Вгоккай Ρ., (2002) Иеп6ййс се11 иптиподетсйу 1к геди1а1е6 Ьу регохкоте ргойГегаЮг-ас11уа1е6 гесерЮг датта, 1 1ттипо1. 169(3):1228-35.
Ρадйа, И. Е. ап6 ^. N. Уа1еп1те (1967). §1и61ек оп 1йе с.|иаптайуе ап6 циаШайуе сйагас1епха1юп оГ егу1йгосу1е д1и!а1йюпе регох16аке, 1 ЬаЬ Сйп Ме6 70(1): 158-69.
Ват V.! (2003). Тйегареийс го1е оГ регохкоте ргойГегаЮг-ас11уа1е6 гесерЮгк т оЬекйу, 61аЬе1ек ап6 тПаттайоп. Ρπΐβ Игид Век. 60: 93-132.
Вакре, Е., Ма6кеп, Ь. еΐ а1. (1999). Мо6и1айоп оГ га( йуег аройроргсИет депе ехргеккюп ап6 кегит йр16 1еуе1к Ьу 1е1га6есу11й1оасе(1с ас16 (ТТА) У1а ΡΡАВα1рйа асйуайоп. 1 Ыр16 Век 40(11): 2099-110.
Во!йие11, N. 1. (1997). СуШктек ап6 аси1е пеиго6едепегайоп. Мо1 Ρкусй^аΐ^у 2(2): 120-1.
8р1еде1тап В. М. (1998) ΡΡАВдатта т тοηοсуΐек: 1екк рат, апу дат? Се11., 93(2): 153-5.
8р1еде1тап В. М. (1998) 'ТОАВ-датта: а61родешс гедикйог ап6 11иахо1|6те6юпе гесерЮг. О|аЬе1ек. 47(4):507-14. Вемем.
8роопег, В. 1., Ией6ек, А. еΐ а1. (1981). Неаΐ к1аЬПИу ап6 ктейс ргорегйек оГ йитап кегит д1и(а(й1опе ге6ис1аке асйуйу т уайоик 61кеаке к1а1ек. Вюсйет Ме6 26(2): 239-48.
8ΐае1к, В. ап6 Аимегх 1. (1998). Веди1айоп оГ аро А-1 депе ехргеккюп Ьу йЬга1ек. А1йегокс1егок1к 137 8ирр1: 819-23.

Claims (17)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Замещённые производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она соединения общей формулы (I) (О где Х7 означает группу, соответствующую формуле 67-В7, в которой 67 - атом кислорода или серы, В7 представляет собой С1-С7алкил, замещённый группой -СООВа, в которой Ва представляет собой водород или С1-С7алкил;
    группы Χι, в которых ί = 1, 2, 3, 4 или 5, одинаковые или разные, означают атом галогена или отвечают, соответственно, формуле (61-В1)п-6'1-В'1, в которой п может принимать значения 0 или 1,
    61 и 6'1, одинаковые или разные, означают простую связь, атом кислорода или атом серы,
    В1 и В'1, одинаковые или разные, означают С1-С7алкил, С2-С7алкенил, арил или гетероцикл, выбранный из группы, состоящей из дитиоланов, пурина, фурана, тиофена, морфолина, пиперидина и пиперазина;
    В'1 может также означать атом водорода, группы Х1, в которых 1=6 или 8, одинаковые или разные, означают атом галогена или соответствуют формуле 6'1-В'1, в которой 6', представляет собой простую связь, О или 8 и
    В'1 представляет собой Н, С1-С7алкил или С2-С7алкенил;
    Χ6 и Χ8 одновременно не являются атомом водорода,
    X;, в которых 1=1, 2, 3, 4, 5, 6 или 8, не может означать гетероцикл, непосредственно связанный с ароматическим циклом 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, за исключением соединений формулы (I), в которых одновременно одна из групп X! Х2, Х3, Х4 или Х5 является гидроксильной группой,
    67 - атом кислорода, одна из групп Х6, Х8 означает атом водорода или галогена или гидроксил или алкилоксигруппу, за исключением соединений формулы (I), в которых одновременно
    - 49 011305 группы Χι, Х2 и Х4 означают одновременно атом водорода, группы Х6 и Х8 означают С'1К'1, группа Х5 означает галоген или группу С'1К'1, группа Х3 означает галоген или группу С'1К'1, в которой С'1 означает атом кислорода, атом серы или простую связь, а К'1 означает насыщенную, линейную или разветвлённую или циклическую, алкильную группу, содержащую галоген или не содержащую его или атом водорода.
  2. 2. Соединения по п.1, где Χι и Х5 означают атомы водорода.
  3. 3. Соединения по п.1 или 2, где Х2 и Х4 означают алкильные группы.
  4. 4. Соединения по п.1, где Х1, Х3 и Х4 означают алкильные группы.
  5. 5. Соединения по п.1, где Х1, Х2, Х4 и Х5 означают атомы водорода.
  6. 6. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где Х6 и Х8 означают алкильные группы.
  7. 7. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где Х1 и Х5 означают атомы водорода.
  8. 8. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где Х2 и Х4 означают алкильные группы.
  9. 9. Соединения по п.1, где Χι, Х3, Х4, Х6 и Х8 означают алкильные группы.
  10. 10. Соединения по п.1, где Х6 и Х8 означают алкильные группы, Х1, Х2, Х4 и Х5 означают атомы водорода.
  11. 11. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где Х3 означает атом галогена или отвечает формуле (С1-К1)п-С'1-К'1, такой как определено в п.1, где С'1 означает атом кислорода или атом серы.
  12. 12. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где по меньшей мере одна из групп С,, С'1 означает атом серы, при этом ί может принимать одно из значений 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8.
  13. 13. Соединения по любому из предыдущих пунктов, где их выбирают из группы соединений, состоящей из
    1-(4-((К,8)-5-[1,2] дитиолан-3 -илпентилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-
    3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-меркапто-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-циклогексилэтилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он;
    1-(2,5-дигидрокси-3,4,6-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп2-ен-1-он;
    1-(2,5-диметокси-3,4,6-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он;
    1-(2,5-дигидроксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-фенилэтилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он;
    1-(4-пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-(пентилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-(К,8)-5-[1,2]дитиолан-3-илпентилокси)фенил-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметокси-
    3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-(К,8)-5-[1,2] дитиолан-3-илпентилокси)фенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метилтиофенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен1-он;
    1-(4-метилтиофенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилэтилоксифенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    - 50 011305
    1-(4-пропилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен1-он;
    1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(4-гексилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-гексилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-
    1- он;
    1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилтиоэтилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он;
    1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-
    2- ен-1-он;
    1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-
    3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилтиоэтилокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метилтиофенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он; 1-(4-метилтиофенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он;
    1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-фенилоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он;
    1-(4-фенилоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-метокси-3-фторфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3-фторфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3-метилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил) проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1он;
    1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он;
    1-(2,5-диметоксифенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    хлоргидрид 1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил-3-(4-этилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5 -диметилфенил)проп-2-ен-1-она;
    1-(3,5-диметил-4-(морфолин-4-илэтилокси)фенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-бромфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-бромфенил)-3 -(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-метокси-3 -трифторметилфенил)-3-(4-трет-бутилоксикарбонилдиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-3-(4-карбоксидиметилметилокси-3,5-диметилфенил)проп-2ен-1-он.
  14. 14. Способ получения соединений формулы (I) по любому из предыдущих пунктов, который включает контактирование в основной или кислой среде по меньшей мере одного соединения формулы (А) по меньшей мере с одним соединением формулы (В), при этом формулами (А) и (В) являются
    - 51 011305 где Х1, Х2, Х3, Х4, Х5, Х6, Х7 и Х8 имеют значения, указанные в любом из предыдущих пунктов.
  15. 15. Промежуточное соединение, которое выбирают из группы, состоящей из 1-(4-(пентилтиоэтилокси)фенил-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-(К,8)-5-[1,2] дитиолан-3-илпентилокси)фенил-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(4-метилтиофенил)-3-(4-гидрокси-3,5-дибромфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-циклогексилэтилокси)фенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он; 1-(4-метилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(4-циклогексилэтилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-циклогексилтиоэтилокси)фенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он; 1-(2,4,5-триметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-(циклогексилтиоэтилокси)-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилтиофенил)проп-2-ен1-он;
    1-(4-метилтиофенил)-3-(4-гидрокси-3 -фторфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(2,3,4,5,6-пентаметилфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-феноксифенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-метокси-3 -фторфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-метокси-3 -метилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-гексилтио-3,5-диметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(2,5-диметоксифенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1 -он;
    1-(4-бромфенил)-3 -(4-гидрокси-3,5-дифторфенил)проп-2-ен-1-он;
    1-(4-метокси-3 -трифторметилфенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)проп-2-ен-1-он.
  16. 16. Фармацевтическая или косметическая композиция, содержащая в фармацевтически приемлемом наполнителе эффективное количество по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), по любому из пп.1-13 при необходимости в ассоциации с другим активным терапевтическим и/или косметическим веществом.
  17. 17. Композиция по п.16 для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, разных форм дислипидемии, патологий, связанных с синдромом Х, диабета, ожирения, гипертонии, воспалительных заболеваний, дерматологических болезней (псориаз, атопические виды дерматита, угри и т.д.), астмы, нарушений, вызванных окислительным стрессом, или для лечения явлений старости в общем и старения кожи в частности.
EA200601288A 2004-01-08 2005-01-07 Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение EA011305B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0400123A FR2864956B1 (fr) 2004-01-08 2004-01-08 Compose derive de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one, preparation et utilisations
FR0409257 2004-09-01
PCT/FR2005/000040 WO2005073184A1 (fr) 2004-01-08 2005-01-07 Composes derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one, preparation et utilisations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200601288A1 EA200601288A1 (ru) 2006-12-29
EA011305B1 true EA011305B1 (ru) 2009-02-27

Family

ID=34828644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200601288A EA011305B1 (ru) 2004-01-08 2005-01-07 Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение

Country Status (11)

Country Link
US (1) US7547729B2 (ru)
EP (1) EP1701938B1 (ru)
JP (1) JP2007517841A (ru)
KR (1) KR20060132903A (ru)
AU (1) AU2005209446A1 (ru)
BR (1) BRPI0506718A (ru)
CA (1) CA2550576A1 (ru)
EA (1) EA011305B1 (ru)
IL (1) IL176515A0 (ru)
NO (1) NO20062824L (ru)
WO (1) WO2005073184A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2841900B1 (fr) * 2002-07-08 2007-03-02 Genfit S A Nouveaux derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one substitues, preparation et utilisations
US7816385B2 (en) * 2002-12-20 2010-10-19 High Point Pharmaceuticals, Llc Dimeric dicarboxylic acid derivatives, their preparation and use
FR2910892A1 (fr) * 2006-12-29 2008-07-04 Genfit Sa Derives de 1,3-diphenylpropane substitues, preparations et utilisations.
FR2910894A1 (fr) * 2006-12-29 2008-07-04 Genfit Sa Derives de 3-phenyl-1-(phenylthienyl)propan-1-one et de 3-phenyl-1-(phenylfuranyl)propan-1-one substitues, preparation et utilisation.
EP2268794B1 (en) * 2008-03-27 2017-09-13 Asterias Biotherapeutics, Inc. Differentiation of primate pluripotent stem cells to hematopoietic lineage cells
ES2681794T3 (es) 2009-11-26 2018-09-17 Genfit Uso de derivados de 1,3-difenilprop-2-en-1-ona para tratar trastornos hepáticos
WO2011080276A1 (en) 2009-12-29 2011-07-07 Genfit Pharmaceutical combinations comprising a dpp-4 inhibitor and a 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivative
EA024343B1 (ru) 2010-05-17 2016-09-30 Женфит Усовершенствованный способ получения производных халкона
DE102011114780A1 (de) * 2011-10-01 2013-04-04 Merck Patent Gmbh Verwendung von Propanol- und Propenolderivaten als Antioxidantien
JP6140729B2 (ja) * 2011-12-28 2017-05-31 ジェンフィットＧｅｎｆｉｔ １，３−ジフェニルプロパン誘導体、その製造および使用
KR101601685B1 (ko) * 2015-08-24 2016-03-09 여명바이오켐 주식회사 항산화 효과가 우수한 택시폴린 유도체 및 이를 함유하는 화장료 조성물
CA3057940A1 (en) * 2017-04-18 2018-10-25 Genfit Combination of elafibranor or derivatives thereof with an anti-nash, anti-fibrotic or anti-cholestatic agent
CN108658908B (zh) 2017-07-31 2019-05-10 广州必贝特医药技术有限公司 1，3-二取代烯酮类化合物及其应用
EP3719010B1 (en) * 2017-11-30 2023-07-26 Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. Aromatic compound, pharmaceutical composition thereof and use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4327365A1 (de) * 1993-08-14 1995-02-16 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Phenolen und Phenolderivaten als Arzneimittel mit fibrinogensenkender Wirkung
EP0659743A1 (en) * 1993-12-27 1995-06-28 Hoechst Aktiengesellschaft Piperidine derivatives as inhibitors of platelet aggregation and their preparation
US5523302A (en) * 1993-11-24 1996-06-04 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Aromatic compounds containing basic and acidic termini useful as fibrinogen receptor antagonists

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3994955A (en) * 1975-01-20 1976-11-30 G. D. Searle & Co. Substituted phenoxydialkylacetic acids and esters
US4190671A (en) * 1977-03-17 1980-02-26 Biorex Laboratories Limited Chalcone derivatives
GB8426424D0 (en) * 1984-10-19 1984-11-28 Biorex Laboratories Ltd Chalcone derivatives
CN1447804A (zh) * 2000-06-20 2003-10-08 阿特罗吉尼克斯公司 1,3－二－(被取代的苯基)－2－丙烯－1－酮及其治疗vcam－1介导的疾病的用途
IL160964A0 (en) 2001-10-11 2004-08-31 Kaneka Corp Peroxisome proliferator activated receptor ligand and process for producing the same
FR2841900B1 (fr) * 2002-07-08 2007-03-02 Genfit S A Nouveaux derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one substitues, preparation et utilisations
FR2841784B1 (fr) * 2002-07-08 2007-03-02 Composition a base de derives de 1,3-diphenylprop-2en-1-one substitues, preparation et utilisations

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4327365A1 (de) * 1993-08-14 1995-02-16 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Phenolen und Phenolderivaten als Arzneimittel mit fibrinogensenkender Wirkung
US5523302A (en) * 1993-11-24 1996-06-04 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Aromatic compounds containing basic and acidic termini useful as fibrinogen receptor antagonists
EP0659743A1 (en) * 1993-12-27 1995-06-28 Hoechst Aktiengesellschaft Piperidine derivatives as inhibitors of platelet aggregation and their preparation

Also Published As

Publication number Publication date
CA2550576A1 (fr) 2005-08-11
EA200601288A1 (ru) 2006-12-29
JP2007517841A (ja) 2007-07-05
IL176515A0 (en) 2006-10-05
EP1701938B1 (fr) 2012-07-25
EP1701938A1 (fr) 2006-09-20
AU2005209446A1 (en) 2005-08-11
US7547729B2 (en) 2009-06-16
US20080058412A1 (en) 2008-03-06
WO2005073184A1 (fr) 2005-08-11
BRPI0506718A (pt) 2007-05-02
NO20062824L (no) 2006-10-05
KR20060132903A (ko) 2006-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011305B1 (ru) Производные 1,3-дифенилпроп-2-ен-1-она, способ их получения и применение
EP1525177B1 (fr) Derives de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one substitues, preparations et utilisations
KR101563370B1 (ko) (치환된 페닐)-프로페날 잔기를 갖는 화합물, 이의 유도체, 생물학적 활성, 및 이의 용도
DE69922703T2 (de) Ureido-thiobuttersäurederivate als ppar-agonisten
JP2005505519A (ja) 細胞保護化合物、薬学的処方物および美容用処方物、ならびに方法
US5663195A (en) Method of preventing bone loss
DE60314420T2 (de) Zusammensetzung auf grundlage substituierter 1,3-diphenylprop-2-en-1-on-derivaten, deren herstellung und verwendungen
RU2237651C2 (ru) Триароматические аналоги витамина d, фармацевтическая и косметическая композиции
AU2002319677A1 (en) Cytoprotective compounds, pharmaceutical and cosmetic formulations, and methods
RU2721283C2 (ru) Замещенные бициклические гетероарильные соединения в качестве агонистов rxr
KR102106365B1 (ko) 게라닐 게라닐 아세톤 유사체 및 이의 용도
CN107074841A (zh) 细胞色素p450抑制剂及其用途
JP2005517014A (ja) 細胞保護性ベンゾフラン誘導体
US5002967A (en) Phenolic thioethers, sulfoxides, and disulfides as inhibitors of 5-lipoxygenase
JP2018516971A (ja) ベータナフトイソフラボン、これを含有する組成物及びその使用
JPWO2008020625A1 (ja) ジベンゾイルメタン系化合物とそれを有効成分とする医薬組成物
FR2864956A1 (fr) Compose derive de 1,3-diphenylprop-2-en-1-one, preparation et utilisations
US20180185325A1 (en) 12H-BENZO[b]XANTHEN-12-ONES, COMPOSITIONS CONTAINING, AND USES OF, SAME
EP2874999B1 (fr) Nouveaux composes inhibiteurs selectifs du cyp26a1 utiles dans des compositions cosmétiques et pharmaceutiques
MXPA06007867A (en) 1,3-diphenylprop-2-en-1-one derivative compounds, preparation method thereof and uses of same
JP2023545918A (ja) Ｓｒｅｂｐの阻害剤としてのｖｄｒサイレントビタミンｄ誘導体およびこの薬学的使用
JP4954988B2 (ja) 脂肪族化合物含有美白剤
JP2010132637A (ja) 炎症関連疾患治療剤用２，４−二重置換−５−アミノカルボニル−１，３−チアゾール誘導体、その製造方法及びそれを有効成分として含有するｓｐｃ受容体活性により誘発される炎症関連疾患の治療剤、外傷後傷跡形成抑制及び傷治癒促進用皮膚外用剤、腫瘍内部の血管新生阻害剤
WO1986007592A1 (en) Ascorbic acid derivatives, process for their preparation, and preparations containing same
JP2002080353A (ja) 発癌プロモーション抑制組成物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): MD RU