RU2424247C2 - Пептид, индуцирующий цитотоксические т-клетки (цтл), способ индукции цтл, антитело, связывающееся с этим пептидом, применение пептида в фармацевтической композиции и для лечения или предупреждения рака, антигенпредставляющая клетка - Google Patents
Пептид, индуцирующий цитотоксические т-клетки (цтл), способ индукции цтл, антитело, связывающееся с этим пептидом, применение пептида в фармацевтической композиции и для лечения или предупреждения рака, антигенпредставляющая клетка Download PDFInfo
- Publication number
- RU2424247C2 RU2424247C2 RU2008126305/04A RU2008126305A RU2424247C2 RU 2424247 C2 RU2424247 C2 RU 2424247C2 RU 2008126305/04 A RU2008126305/04 A RU 2008126305/04A RU 2008126305 A RU2008126305 A RU 2008126305A RU 2424247 C2 RU2424247 C2 RU 2424247C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- cancer
- pharmaceutically acceptable
- antigen
- acceptable salt
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 230
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 80
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 71
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 title claims description 37
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 title abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 102
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 47
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 20
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 15
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims abstract description 12
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 11
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 10
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 5
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 claims description 35
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 claims description 32
- -1 carboxymethylcarbamoyl Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 125000003806 alkyl carbonyl amino group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 5
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical group NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 67
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 52
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 46
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 46
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 46
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 40
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 40
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- 230000008569 process Effects 0.000 description 35
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 22
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 20
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 16
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 14
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 14
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 11
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 11
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 10
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 10
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 7
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 6
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 6
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 6
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 6
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 6
- ROUFCTKIILEETD-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-2-[(5-nitropyridin-2-yl)disulfanyl]pyridine Chemical compound N1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1SSC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=N1 ROUFCTKIILEETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 5
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 5
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 4
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- RMZZTJOADJVCIO-UHFFFAOYSA-N acetic acid;acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N.CC(O)=O RMZZTJOADJVCIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 102000046004 human WT1 Human genes 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 3
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 3
- WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N (3-nitropyridin-2-yl) thiohypochlorite Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1SCl WTKQMHWYSBWUBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHDQAZHYHAOTKR-UHFFFAOYSA-N 3-[[2-carboxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethyl]disulfanyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C(O)=O)CSSCC(C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MHDQAZHYHAOTKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 0 C*C(C(CSSCC(C(O)=O)N)N)=O Chemical compound C*C(C(CSSCC(C(O)=O)N)N)=O 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 3
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 3
- 125000005115 alkyl carbamoyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 125000005117 dialkylcarbamoyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 3
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- OVTLOLNDKQUMRH-QMMMGPOBSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-[(3-nitropyridin-2-yl)disulfanyl]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSSC1=NC=CC=C1[N+]([O-])=O OVTLOLNDKQUMRH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- MHDQAZHYHAOTKR-UWVGGRQHSA-N (2r)-3-[[(2r)-2-carboxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethyl]disulfanyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSSC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MHDQAZHYHAOTKR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 2
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 2
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N cystine group Chemical group C([C@@H](C(=O)O)N)SSC[C@@H](C(=O)O)N LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N quinidine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@H]2[C@@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- QMGVPVSNSZLJIA-FVWCLLPLSA-N strychnine Chemical compound O([C@H]1CC(N([C@H]2[C@H]1[C@H]1C3)C=4C5=CC=CC=4)=O)CC=C1CN1[C@@H]3[C@]25CC1 QMGVPVSNSZLJIA-FVWCLLPLSA-N 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJHKPSBHDQIOD-UHFFFAOYSA-N (2-bromo-7,7-dimethyl-3-oxo-4-bicyclo[2.2.1]heptanyl)methanesulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C(Br)C1C2(C)C XUJHKPSBHDQIOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- ATVFTGTXIUDKIZ-YFKPBYRVSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O ATVFTGTXIUDKIZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- BSGZDDDWQXATDI-BQBZGAKWSA-N (2r)-2-amino-3-[[(2r)-2-carboxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethyl]disulfanyl]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSSC[C@H](N)C(O)=O BSGZDDDWQXATDI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 1
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 description 1
- NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[[4-[2-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)ethyl]benzoyl]amino]-4-methylidenepentanedioic acid Chemical compound C1=CC2=NC(N)=NC(N)=C2C=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(=C)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N (3'as,4r,7'as)-2,2,2',2'-tetramethylspiro[1,3-dioxolane-4,6'-4,7a-dihydro-3ah-[1,3]dioxolo[4,5-c]pyran]-7'-one Chemical compound C([C@@H]1OC(O[C@@H]1C1=O)(C)C)O[C@]21COC(C)(C)O2 IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RQEUFEKYXDPUSK-UHFFFAOYSA-N 1-phenylethylamine Chemical compound CC(N)C1=CC=CC=C1 RQEUFEKYXDPUSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 2-azanyl-3-sulfanyl-propanoic acid Chemical group SCC(N)C(O)=O.SCC(N)C(O)=O YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 5-aminopentanoic acid Chemical compound [NH3+]CCCCC([O-])=O JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000324 Immunoglobulin A1 protease translocator Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- 101001044384 Mus musculus Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMGVPVSNSZLJIA-UHFFFAOYSA-N Nux Vomica Natural products C1C2C3C4N(C=5C6=CC=CC=5)C(=O)CC3OCC=C2CN2C1C46CC2 QMGVPVSNSZLJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical class C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003837 Second Primary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058339 Splenitis Diseases 0.000 description 1
- 241001279009 Strychnos toxifera Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 208000006038 Urogenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 201000007960 WAGR syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- RQBBFKINEJYDOB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;acetonitrile Chemical compound CC#N.CC(O)=O RQBBFKINEJYDOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 208000008303 aniridia Diseases 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- KMPWYEUPVWOPIM-KODHJQJWSA-N cinchonidine Chemical compound C1=CC=C2C([C@H]([C@H]3[N@]4CC[C@H]([C@H](C4)C=C)C3)O)=CC=NC2=C1 KMPWYEUPVWOPIM-KODHJQJWSA-N 0.000 description 1
- KMPWYEUPVWOPIM-UHFFFAOYSA-N cinchonidine Natural products C1=CC=C2C(C(C3N4CCC(C(C4)C=C)C3)O)=CC=NC2=C1 KMPWYEUPVWOPIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-UHFFFAOYSA-N cystine Chemical compound OC(=O)C(N)CSSCC(N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical class CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- AIMCUTZXDCCWFQ-UHFFFAOYSA-N ethanol hydrate Chemical compound O.C(C)O.C(C)O.C(C)O.C(C)O AIMCUTZXDCCWFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002762 monocarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KUVIRDUPAGKTER-UHFFFAOYSA-N n-phenylmethoxyaniline Chemical compound C=1C=CC=CC=1CONC1=CC=CC=C1 KUVIRDUPAGKTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N ornithyl group Chemical group N[C@@H](CCCN)C(=O)O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 229960001404 quinidine Drugs 0.000 description 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 229960005453 strychnine Drugs 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M toluene-4-sulfonate Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O triethanolammonium Chemical class OCC[NH+](CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пептидам, индуцирующим цитотоксические Т-клетки, общей формулы (1), где Х представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток; каждый из Y и Z представляют собой простую связь; R1 представляет собой атом водорода; R2 представляет собой гидроксил; R3 представляет собой водород, амино, C1-6 алкилкарбониламино, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси и амино; R4 представляет собой карбокси или группу формулы (2), где W представляет собой аминокислотный остаток; m равен 1 и n равен целому числу 0-1, при условии, что когда n равен 0, R3 представляет собой водород; их фармацевтически приемлемым солям, и их применению в иммунотерапии рака. 11 н. и 6 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к лечению противораковой вакциной, в особенности, к новому пептиду, применимому в качестве лечебного средства для иммунотерапии рака. В частности, настоящее изобретение относится к производному пептида ракового антигена, полученного из WT1, который обладает активностью по индукции ЦТЛ (CTL) in vivo и применим в качестве противораковой вакцины.
Уровень техники
Клеточно-опосредованный иммунитет, в особенности, цитотоксическими Т-клетками (далее в данном описании называемыми "ЦТЛ") играет существенную роль в отклонении in vivo раковых клеток или клеток, инфицированных вирусами. ЦТЛ узнают на раковой клетке комплекс пептида антигена ("пептида ракового антигена"), образовавшегося из белка ракового антигена, и антигена класса I ГКС (главного комплекса гистосовместимости), который называют "антигеном HLA" в случае человека, и атакуют и убивают клетку.
Вообще известно, что пептид ракового антигена, который связывается с молекулой класса I ГКС, представляет собой пептид из 8-12 аминокислотных остатков, полученный внутриклеточным процессингом белка. Таким образом, вообще, пептид с 8-12 аминокислотными остатками, образовавшийся из белка ракового антигена, может являться кандидатом в пептиды ракового антигена. Когда в пептиде ракового антигена присутствует глутаминовый остаток или цистеиновый остаток, такие аминокислотные остатки, как правило, спонтанно окисляются в воздушной атмосфере. Сообщается, что такое спонтанное окисление снижает аффинность связывания пептида с Т-клеточным рецептором (см. непатентные ссылки 1 и 2).
Опухолевый ген-супрессор WT1 опухоли Вильмса (ген WT1) выделен из хромосомы 11р13 как один из причинных генов опухоли Вильмса на основе анализа синдрома WAGR, который имеет место как осложнение опухоли Вильмса, аниридии, мочеполовых анормальностей, врожденного слабоумия и т.д., и аминокислотная последовательность WT1 достаточно известна (см. непатентную ссылку 3). Ген WT1 экспрессируется с высокой частотой при лейкозе человека, и когда лейкозные клетки обрабатывают антисмысловыми олигомерами WT1, рост клеток ингибируется. Таким образом, полагают, что ген WT1 действует, промотируя рост лейкозных клеток. Более того, ген WT1 также обильно экспресируется при солидных раковых опухолях, таких как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников, и показано, что ген WT1 является новым белком ракового антигена при лейкозе и солидных раковых опухолях (см. непатентные ссылки 4 и 5). Кроме того, идентифицирован пептид ракового антигена с неполной последовательностью белка WT1, который является пептидом ракового антигена дикого типа (см. патентные ссылки 1 и 2).
В частности, WT1235-243 (Cys-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu; SEQ ID NO:1), который представляет собой пептид, перекрывающий позиции 235-243 белка ракового антигена WT1, является пептидом ракового антигена, обладающим активностью по индукции ЦТЛ по HLA-А24-ограниченному типу (см. непатентную ссылку 6 и патентную ссылку 1). Модифицированный пептид (Cys-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu; SEQ ID NO:2, далее в описании он может называться WT1235-243 (2М→Y)), в котором метиониновый остаток в позиции 2 WT1235-243 заменен на тирозиновый остаток, имеет более высокую аффинность связывания в отношении антигена HLA-A24, чем пептид дикого типа (см. патентную ссылку 3). Предвещается разработка как пептида дикого типа WT1235-243, так и модифицированного пептида WT1235-243 (2М→Y) в качестве иммунотерапевтического средства.
Кроме того, известно, что каждый из указанного пептида дикого типа и указанного модифицированного пептида имеет цистеиновый остаток в N-концевом сайте, окисление которого в воздушной атмосфере приводит к димерной связи через сульфидную связь, и указанный димер также может работать как пептид ракового антигена (см. патентную ссылку 4).
Патентная ссылка 1: WO 00/06602.
Патентная ссылка 2: WO 00/18795.
Патентная ссылка 3: WO 02/079253.
Патентная ссылка 4: WO 2004/063217.
Непатентная ссылка 1: Immunity, 6: 273, 1997.
Непатентная ссылка 2: J. Immunol., 160: 2099, 1998.
Непатентная ссылка 3: Cell, 60: 509, 1990.
Непатентная ссылка 4: J. Immunol., 164: 1873-80, 2000.
Непатентная ссылка 5: J. Clin. Immunol., 20: 195-202, 2000.
Непатентная ссылка 6: Clin. Cancer Res., 8: 2626, 2002.
Раскрытие изобретения
Проблема, которую решает изобретение
Проблемой, которую решает настоящее изобретение, является новый пептид, обладающий активностью по индукции ЦТЛ in vivo и применимый в качестве противораковой вакцины в иммунотерапии рака.
Способ решения проблемы
Авторы провели серьезные различные исследования по модификации пептидов ракового антигена WT1235-243 и WT1235-243 (2M→Y), полученных из белка WT1, для того, чтобы получить пептид ракового антигена, обладающий улучшенными физико-химическими свойствами, устойчивостью и биоактивностью. В частности, авторы получили из таких пептидов модифицированные соединения и проверили иммуногенность с использованием трансгенных мышей HLA-A2402/Kb (см. WO 02/47474, далее в данном описании они также могут называться мышами HLA-A24).
В результате достигнут успех в получении пептида с улучшенными физико-химическими свойствами и устойчивостью посредством модификации цистеинового остатка (Cys) в N-концевом сайте WT1235-243 или WT1235-243 (2М→Y), в особенности, модификации тиольной группы цистеинового остатка в N-концевом сайте. Пептид по настоящему изобретению обладает улучшенной иммуногенностью и активностью по индукции ЦТЛ. Т-Клетки, специфически индуцированные пептидом по настоящему изобретению, применимы в качестве лечебного средства для иммунотерапии рака из-за их перекрестного взаимодействия с пептидом дикого типа WT1235-243, который изначально представлен раковыми клетками.
До сих пор было неизвестно, чтобы пептид, в котором модифицирован цистеиновый остаток WT1235-243 или WT1235-243 (2M→Y) как пептида антигена WT1, показывал иммуногенность, достаточную для того, чтобы действовать как раковый антиген. Авторы настоящего изобретения впервые обнаружили, что производное пептида, полученное конденсацией тиольной группы цистеинового остатка в N-концевом сайте с тиольной группой цистеина, глутатиона или тиогликолевой кислоты с образованием дисульфидной связи, можно использовать в качестве эффективного ракового антигена.
Настоящее изобретение осуществлено на основе открытия, описанного выше.
Настоящее изобретение относится к
[1] соединению формулы (1)
где X представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток; каждый из Y и Z выбирают, независимо, из числа простой связи и двухвалентной пептидной группы, состоящей из 1-10 аминокислотных остатков,
R1 представляет собой водород или алкил,
R2 представляет собой гидроксил, амино, алкиламино или диалкиламино,
R3 представляет собой водород, алкил, амино, алкиламино, диалкиламино или замещенный, или незамещенный алкилкарбониламино,
R4 представляет собой водород, алкил, карбокси, карбамоил, алкилкарбамоил, диалкилкарбамоил или группу формулы (2)
где W представляет собой аминокислотный остаток,
m равен 1 или 2, и
n равен целому числу 0-2, при условии, что когда n равен 0, R3 представляет собой водород или алкил,
или его фармацевтически приемлемой соли;
[2] соединению, описаному выше в [1], или его фармацевтически приемлемой соли, где указанный замещенный алкилкарбониламино, представленный R3, представляет собой алкилкарбониламино, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси, амино, алкиламино и диалкиламино;
[3] соединению, описаному выше в [1] или [2], или его фармацевтически приемлемой соли, где
R3 представляет собой водород или группу формулы (3)
где r равен целому числу 1-3, и
R4 представляет собой карбокси или группу формулы (2')
где W' представляет собой глициновый остаток или β-аланиновый остаток;
[4] соединению, описаному выше в [3], или его фармацевтически приемлемой соли,
где R3 представляет собой группу формулы (3')
и R4 представляет собой карбоксиметилкарбамоил;
[5] соединению, описаному выше в [3], или его фармацевтически приемлемой соли,
где R3 представляет собой водород, и R4 представляет собой карбокси;
[6] соединению формулы (1')
где X' представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток,
R1' представляет собой водород или алкил,
R2' представляет собой гидроксил, амино, алкиламино или диалкиламино,
R3' представляет собой амино, алкиламино, диалкиламино или замещенный или незамещенный алкилкарбониламино, и
R4' представляет собой карбокси, карбамоил, алкилкарбамоил, диалкилкарбамоил,
или его фармацевтически приемлемой соли;
[7] антителу, которое специфически связывается с соединением, описанным выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой солью;
[8] антигенпредставляющей клетке, которая представляет комплекс соединения, описанного выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой соли и антигена HLA-A24;
[9] ЦТЛ, индуцированному соединением, описанным выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой солью;
[10] ЦТЛ, описаному выше в [9], который узнает комплекс соединения, описанного выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой соли, и антигена HLA-A24;
[11] ЦТЛ, описаному выше в [9], который узнает комплекс пептида SEQ ID NO:1 и антигена HLA-A24;
[12] фармацевтической композиции, содержащей соединение, описанное выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемую соль, антигенпредставляющие клетки, описанные выше в [8], или ЦТЛ, описанные выше в любом из [9]-[11], вместе с фармацевтически приемлемым носителем;
[13] фармацевтической композиции, описанной выше в [12], которую используют в качестве противораковой вакцины;
[14] применению соединения, описанного выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой соли, антигенпредставляющих клеток, описанных выше в [8], или ЦТЛ, описанных выше в любом из [9]-[11], для получения противораковой вакцины;
[15] лекарственному средству для иммунотерапии рака, содержащему в качестве активного ингредиента соединение, описанное выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемую соль, антигенпредставляющие клетки, описанные выше в [8], или ЦТЛ, описанные выше в любом из [9]-[11]; или
[16] способу лечения или предупреждения рака, включающему введение пациенту, положительному на HLA-A24 и положительному на WT1, нуждающемуся в лечении или предупреждении рака, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения, описанного выше в любом из [1]-[6], или его фармацевтически приемлемой соли, антигенпредставляющих клеток, описанных выше в [8], или ЦТЛ, описанных выше в любом из [9]-[11].
Эффект, производимый настоящим изобретением
Настоящее изобретение относится к новому пептиду, применимому в качестве лекарственного средства для иммунотерапии рака, например раковому антигену, полученному из WT1, который обладает активностью по индукции ЦТЛ in vivo и применим в качестве противораковой вакцины. Пептид по настоящему изобретению, который получают модификацией меркаптогруппы цистеинового остатка, расположенного в N-конце WT1235-243 или WT1235-243 (2М→Y), с сохранением активности как пептида ракового антигена, обладает улучшенными физико-химическими свойствами и устойчивостью, и, таким образом, его можно широко применять для лечения или исследований. В частности, новый пептид по настоящему изобретению обладает преимуществами, такими как удобство в обращении без опасности снижения активности из-за обработки in vitro, проявление устойчивого лечебного эффекта и так далее.
Краткое описание чертежей
Фигура 1 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 1, с использованием трех мышей по отдельности (черные столбики на фигуре). Белые столбики на фигуре показывают результаты, полученные с использованием клеток, не подвергавшихся обработке в импульсном режиме каким-либо пептидом (то же применимо для последующих фигур).
Фигура 2 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 2, с использованием трех мышей по отдельности.
Фигура 3 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 3, с использованием трех мышей по отдельности.
Фигура 4 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 4, с использованием трех мышей по отдельности.
Фигура 5 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 5, с использованием трех мышей по отдельности.
Фигура 6 представляет собой диаграмму, показывающую цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 6, с использованием трех мышей по отдельности.
Фигура 7 представляет собой график, показывающий цитотоксическую активность (специфический лизис), индуцированную пептидом примера 1 в зависимости от дозы. Ось Х показывает дозу на одну отдельную мышь (600 мкг, 200 мкг, 60 мкг и 20 мкг), и ось Y показывает цитотоксическую активность (специфический лизис). Каждую дозу вводят трем мышам, соответственно, и результаты приводят как среднее цитотоксических активностей и среднеквадратическое отклонение (S.D.).
Фигура 8 представляет собой диаграмму, показывающую реактивность пептидспецифических Т-клеток, полученных иммунизацией мышей пептидом примера 1, в отношении клеток, обработанных в импульсном режиме различными пептидами. На фигуре заштрихованные столбики показывают результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме пептидом дикого типа (WT1235-243), черные столбики показывают результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме пептидом соединением примера 1, и незаштрихованные столбики показывают результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме пептидом, полученным из вируса гриппа, соответственно. Кроме того, на фигуре вертикальная ось показывает точки.
Фигура 9 представляет собой диаграмму, показывающую реактивность пептидспецифических Т-клеток, полученных их человеческих РВМС стимуляцией пептидом примера 1, в отношении клеток, обработанных в импульсном режиме различными пептидами. На фигуре столбик "пептид дикого типа" показывает результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме пептидом дикого типа (WT1235-243), столбик "модифицированный пептид" показывает результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме модифицированным пептидом (WT1235-243 (2M→Y)), столбик "пептид примера 1" показывает результаты, полученные с использованием клеток, обработанных в импульсном режиме пептидом соединением примера 1, и столбик "без обработки пептидом в импульсном режиме " показывает результаты, полученные с использованием клеток, необработанных в импульсном режиме каким-либо пептидом, соответственно. Кроме того, на фигуре вертикальная ось показывает количество продуцированного интерферона-γ.
Наилучший способ осуществления изобретения
В описании и на чертежах настоящей заявки используются приведенные далее аббревиатуры аминокислотных остатков.
Ala - аланиновый остаток,
Arg - аргининовый остаток;
Asn - аспарагиновый остаток;
Cys - цистеиновый остаток;
Gln - глутаминовый остаток;
Glu -остаток глутаминовой кислоты;
Gly - глициновый остаток;
His - гистидиновый остаток;
Ile - изолейциновый остаток;
Leu - лейциновый остаток;
Lys - лизиновый остаток;
Met - метиониновый остаток;
Phe - фенилаланиновый остаток;
Pro - пролиновый остаток;
Ser - сериновый остаток;
Thr - треониновый остаток;
Trp - триптофановый остаток;
Tyr - тирозиновый остаток;
Val - валиновый остаток.
Используемый в данном описании термин "аминокислотный остаток" включает природные и неприродные остатки α-аминокислот, β-аминокислот, γ-аминокислот и δ-аминокислот. Например, "аминокислотный остаток" включает остаток природной α-аминокислоты (например, Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val), орнитиновый остаток, гомосериновый остаток, гомоцистеиновый остаток, β-аланин, γ-аминобутановую кислоту или δ-аминопентановую кислоту.
Описанные выше аминокислоты могут представлять собой или L-энантиомеры или D-энантиомеры, когда аминокислота является оптическим изомером, более предпочтителен L-энантиомер.
В описании аминокислотная последовательность пептида описывается согласно обычной форме, когда N-концевой аминокислотный остаток располагается с левой стороны, и С-концевой аминокислотный остаток располагается с правой стороны.
(1) Пептид
В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединению описанной выше формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли.
В формуле (1), предпочтительно, Х представляет собой тирозиновый остаток (Tyr).
В формуле (1) "двухвалентные пептидные группы, состоящие из 1-10 аминокислотных остатков", представленные Y и Z, включают одинаковые или различные двухвалентные пептидные группы, состоящие из 1-10 аминокислотных остатков, без какого-либо ограничения аминокислотной последовательности. Например, указанная двухвалентная пептидная группа, состоящая из 1-10 аминокислотных остатков, включает аминокислотную последовательность, содержащуюся в аминокислотной последовательности человеческого WT1 (Cell, 60: 509, 1990, GenBank, Acc. No. A38080). Например, Y может представлять собой двухвалентную пептидную группу, состоящую из десяти аминокислотных остатков 225-234 человеческого WT1, которая описывается следующим образом: Asn-Leu-Tyr-Gln-Met-Thr-Ser-Gln-Leu-Glu (SEQ ID NO:3), или двухвалентную пептидную группу, имеющую фрагмент SEQ ID NO:3, в котором делегированы 1-9 аминокислотных остатков в N-конце. Кроме того, например, Z может представлять собой двухвалентную пептидную группу, состоящую из десяти аминокислотных остатков 244-253 человеческого WT1, которая описывается следующим образом: Gly-Ala-Thr-Leu-Lys-Gly-Val-Ala-Ala-Gly (SEQ ID NO:4), или двухвалентную пептидную группу, имеющую фрагмент SEQ ID NO:4, в котором делегированы 1-9 аминокислотных остатков в С-конце. Предпочтительно, каждый Y и Z может представлять собой простую связь.
В описании алкильная группа включает, например, линейную или разветвленную алкильную группу с 1-6 атомами углерода. Например, алкильная группа включает метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилэтил, пентил и т.д.
В описании алкиламиногруппа включает, например, линейную или разветвленную алкиламиногруппу с 1-6 атомами углерода. Например, алкиламиногруппа включает метиламино, этиламино, пропиламино, 1-метилэтиламино, бутиламино, 1-метилпропиламиноамино, 2-метилпропиламино, 1,1-диметилэтиламино, пентиламино и т.д.
В описании диалкиламиногруппа включает, например, аминогруппу, замещенную двумя одинаковыми или различными и линейными или разветвленными алкильными группами с 1-6 атомами углерода. Например, диалкиламиногруппа включает диметиламино, диэтиламино, дипропиламино, метилпропиламино, бутилметиламино, метилпентиламино и т.д.
В описании "алкил" в алкилкарбониламиногруппе включает алкильную группу, описанную выше. "Алкил" в алкилкарбамоильной группе включает те же алкильные группы, что и описанная выше алкиламиногруппа. "Алкил" в диалкилкарбамоильной группе включает те же алкильные группы, что и описанная выше диалкиламиногруппа, когда два алкила могут быть одинаковыми или различными.
Каждый из R1 и R2, предпочтительно, представляет собой атом водорода.
Когда R3 представляет собой замещенную алкилкарбониламиногруппу, заместитель алкилкарбониламиногруппы включает, например, карбокси, гидрокси, амино, алкиламино и диалкиламино, где указанная алкилкарбониламиногруппа может быть замещена одинаковыми или различными 1-4, предпочтительно, 1-2, заместителями.
Аминокислотный остаток, представленный W в формуле (2), может включать, предпочтительно, глициновый остаток (Gly).
Пептид по настоящему изобретению включает, например, соединения приведенных далее формул (4)-(9).
Пептиды по настоящему изобретению можно получить согласно способу, описанному в описании в примерах, или способу, обычно используемому в синтезе пептидов. Примерами таких способов получения являются способы, описанные в литературе, в том числе, в "Peptide Synthesis", Interscience, New York, 1966; "The Proteins", Vol.2, Academic Press Inc., New York, 1976; "Pepuchido-Gosei", Maruzen Co. Ltd., 1975; "Pepuchido-Gosei-no-Kiso-to-Jikenn", Maruzen Co. Ltd., 1985; и "Iyakuhin-no-Kaihatu, Zoku, vol.14, Pepuchido-Gosei", Hirokawa Shoten, 1991. Пример способа получения пептида по настоящему изобретению включает способ получения пептида согласно методу с Fmoc или методу с Вос с помощью твердофазного синтезатора или способ получения пептида последовательной конденсацией Вос-аминокислоты или Z-аминокислоты согласно способу жидкофазного синтеза, где Fmoc представляет собой 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу, Boc представляет собой трет-бутоксикарбонильную группу, и Z представляет собой бензилоксикарбонильную группу, соответственно.
Функциональную группу промежуточного соединения в синтезе соединения по настоящему изобретению, такую как амино, карбоксильная и меркаптогруппа, можно защитить подходящей защитной группой и из защищенного соединения защитную группу можно удалить с использованием обычного метода введения/удаления защитной группы, если требуется. Подходящие защитные группы и способы введения и удаления защитной группы подробно описаны, например, в Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition (John Wiley & Sons, Inc., 1990).
В частности, примером способа получения соединения по настоящему изобретению является способ, описанный следующей реакционной схемой
где в указанных формулах X, Y, Z, R1, R2, R3, R4, m и n имеют соответствующие значения, указанные выше. Каждый из R и R' представляет собой, независимо, атом водорода или защитную группу для меркаптогруппы.
Примеры указанной защитной группы для меркаптогруппы включают, например, ацетоамидометил или тритил.
Соединение формулы (1) можно получить окислением соединения формулы (1-1) и соединения формулы (1-2) в инретном растворителе.
Окисление можно осуществить традиционным способом, обычно применяемым в синтезе пептидов для образования дисульфидной связи. Например, дисульфидную связь можно образовать, смешивая два промежуточных соединения, содержащих меркаптогруппу, в подходящем растворителе и окисляя их. Можно использовать обычный способ окисления, такой как окисление на воздухе и окисление иодом. Растворителем может являться вода, уксусная кислота, метанол, хлороформ, ДМФА или ДМСО или их смесь. Реакция окисления иногда дает смесь симметричных и асимметричных дисульфидных соединений. Нужное асимметричное дисульфидное соединение можно получить очисткой смеси, такой как очистка с использованием различных видов хроматографии, очистка методом перекристаллизации и т.п.
С другой стороны, промежуточное соединение, содержащее активированную меркаптогруппу, смешивают с другим промежуточным соединением, содержащим меркаптогруппу, с образованием селективной дисульфидной связи. Примеры промежуточных соединений, содержащих активированную меркаптогруппу, включают, например, соединение, содержащее меркаптогруппу, связанную с группой Npys (3-нитро-2-пиридинсульфенильная группа).
С другой стороны, после смешивания одного из промежуточных соединений, содержащих активированную меркаптогруппу, с, например, 2,2'-дитиобис(5-нитропиридином) для активации меркаптогруппы к полученной смеси добавляют другое промежуточное соединение для образования селективной дисульфидной связи (Tetrahedron Letters, Vol.37, No.9, p.1347-1350).
Соединение формулы (1-1) можно получить согласно твердофазному или жидкофазному методу синтеза пептидов, которые хорошо известны специалистам в данной области техники.
Кроме того, в случае, когда соединение формулы (1-1) представляет собой соединение, алкилированное по N-концу, в качестве N-концевой аминокислоты можно использовать N-алкиламинокислоту или N,N-диалкиламинокислоту которые, при необходимости, могут быть защищены защитными группами. N-Алкиламинокислота или N,N-диалкиламинокислота может быть коммерчески доступна или получена согласно способу, хорошо известному специалистам в данной области техники, в котором, например, исходное вещество аминокислоту или защищенную аминокислоту вводят во взаимодействие с алкилгалогенидом в присутствии основания. Например, N-концевую аминогруппу можно соответствующим образом алкилировать взаимодействием аминокислоты, которая содержит защитную трет-бутоксикарбонильную группу, с алкилгалогенидом в присутствии основания, такого как гидрид натрия, как поясняется на приведенной далее реакционной схеме 2.
[Реакционная схема 2]
В указанных формулах каждый из X, Y, Z, R1, R2, R3, R4, m и R имеет значения, указанные выше, Hal представляет собой атом брома или атом иода, и Prot представляет собой защитную группу.
Далее, в случае, когда соединение представляет собой соединение, алкилированное или алкиламидированное по С-концу, в качестве С-концевого аминокислотного остатка исходного вещества можно использовать амидированную или алкиламидированную аминокислоту.
Соединение по настоящему изобретению или соединения, промежуточные при его синтезе, можно очистить согласно способу, хорошо известному специалистам в данной области техники. Например, очистку можно осуществить посредством различных видов хроматографии (например, колоночной хроматографией на силикагеле, ионообменной колоночной хроматографией, гель-фильтрацией или хроматографией с обращенной фазой) или перекристаллизации. Растворителями для перекристаллизации могут являться, например, спирты, такие как метанол, этанол и 2-пропанол, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, сложные эфиры, такие как этилацетат, ароматические углеводороды, такие как бензол и толуол, кетоны, такие как ацетон, углеводороды, такие как гексан, апротонные растворители, такие как диметилформамид и ацетонитрил, вода или смешанные растворители из их числа. Другим способом, используемым для очистки, может являться способ, описанный в томе 1 Jikkenkagakukoza (edited by Chemical Society of Japan, Maruzen).
В случае, когда соединение по настоящему изобретению имеет один или несколько асимметричных центров, для его получения согласно обычному способу можно использовать вещество (аминокислоту), имеющее асимметричный центр. Кроме того, можно осуществить расщепление на оптические изомеры на соответствующей стадии процесса получения для того, чтобы улучшить оптическую чистоту соединения по настоящему изобретению. Например, расщепление на оптические изомеры можно осуществить согласно способу диастереомеров, при котором соединение или промежуточное соединение по настоящему изобретению смешивают с оптически активной кислотой (например, монокарбоновой кислотой, такой как миндальная кислота, N-бензилоксианилин и молочная кислота, дикарбоновой кислотой, такой как винная кислота, о-диизопропилиденвинная кислота и яблочная кислота, или сульфоновой кислотой, такой как камфорсульфоновая кислота и бромкамфорсульфоновая кислота) в инертном растворителе (например, спиртовых растворителях, таких как метанол, этанол и 2-пропанол, простых эфирах, таких как диэтиловый эфир, сложных эфирах, таких как этилацетат, углеводородных растворителях, таких как толуол, апротонных растворителях, таких как ацетонитрил, или смешанных растворителях из их числа) для получения солевой формы. В случае, когда соединение или промежуточное соединение по настоящему изобретению содержит кислотную функциональную группу, такую как карбоксигруппа, расщепление на оптические изомеры можно осуществить, получая соль с оптически активным амином (например, органическим амином, таким как α-фенетиламин, хинин, хинидин, цинхонидин, цинхонин и стрихнин).
Реакцию образования соли можно проводить при температуре, колеблющейся от комнатной температуры до температуры кипения растворителя. В целях улучшения оптической чистоты предпочтительно, чтобы температура повышалась до примерно температуры кипения растворителя. Выход можно улучшить, если потребуется, охлаждением смеси, когда выпавшую в осадок соль извлекают фильтрацией.
Оптически активные кислоту или амин соответственно используют в количестве от примерно 0,5 до примерно 2,0 эквивалентов на субстрат, предпочтительно, в количестве примерно 1 эквивалента на субстрат. Если требуется, кристаллическое вещество можно перекристаллизовать из инертного растворителя (например, спиртов, таких как метанол, этанол и 2-пропанол, простых эфиров, таких как диэтиловый эфир, сложных эфиров, таких как этилацетат, углеводородов, таких как толуол, апротонных растворителей, таких как ацетонитрил, или смешанных растворителей из их числа) и получить высокочистую оптически активную соль. Кроме того, при необходимости, оптически расщепленную соль можно обработать кислотой или основанием согласно обычному способу для того, чтобы получить соединение в свободной форме.
Фармацевтически приемлемая соль включает соль присоединения кислоты и соль присоединения основания. Например, соль присоединения кислоты включает соль с неорганической кислотой, такую как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, гидроиодид, нитрат и фосфат, и соль с органической кислотой, такую как цитрат, оксалат, ацетат, формиат, пропионат, бензоат, трифторацетат, малеат, тартрат, метансульфонат, бензолсульфонат и пара-толуолсульфонат. Соль присоединения основания включает соль с неорганическим основанием, такую как натриевая соль, калиевая соль, кальциевая соль, магниевая соль и аммониевая соль, соль с органическим основанием, такую как соль триэтиламмония, соль триэтаноламмония, соль пиридиния и соль диизопропиламмония, а также соль аминокислоты, такой как аминокислота щелочного или кислотного характера, включая аргинин, аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту.
Кроме того, настоящее изобретение относится к сольвату пептида, представленного формулой (1), или его фармацевтически приемлемой соли, включая гидрат или сольват этанола. Кроме того, настоящее изобретение относится к любым возможным стереоизомерам, в том числе, любым диастереомерам и энантиомерам, соединения, представленного формулой (1), и любым его кристаллическим формам.
В ходе получения пептида, включающего стадии конденсации оптически активной α-аминокислоты, удаления различного рода защитных групп или высвобождения пептида из смолы, как правило, образуются побочные продукты, в том числе, пептид с делецией аминокислот, пептид, разрушенный гидролизом, окислением или подобным образом, и пептид с эпимеризованной аминокислотой. В лабораторном масштабе для удаления таких примесей можно использовать сочетание различных способов хроматографии (например, колоночной хроматографии на силикагеле, ионообменной колоночной хроматографии, гель-фильтрации или хроматографии с обращенной фазой) с тем, чтобы получить пептид высокой степени чистоты. Однако в промышленном масштабе трудно получить пептид высокой степени чистоты для целей предоставления его как лекарственного средства.
Пептид по настоящему изобретению имеет физико-химические свойства, которые дают возможность крупномасштабного получения фармацевтических средств в массе. В частности, пептид по настоящему изобретению имеет такие свойства, как высокая растворимость, высокая устойчивость в растворе или отсутствие склонности к превращению в гель при конденсации, так что пептид высокой чистоты можно легко получить как фармацевтическое средство в массе даже в крупном масштабе посредством очистки с использованием колоночной хроматогрфии, такой как хроматография с обращенной фазой.
Пептид по настоящему изобретению применим для активного ингредиента, входящего в индуктор ЦТЛ или противораковую вакцину для иммунотерапии рака. Пептид по настоящему изобретению обладает высокой иммуногенностью и высокой иктивностью индукции ЦТЛ, как видно из примеров, приведенных в данном описании. ЦТЛ, индуцированные пептидом по настоящему изобретению, могут неожиданно узнавать пептид дикого типа WT1, изначально содержащийся в раковых клетках. Таким образом, пептид по настоящему изобретению применим в лекарственном средстве для лечения или предупреждения (включая предупреждение рецидива) онкозаболевания, при котором экспрессируется ген WT1, такого как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников.
(2) Антитела по настоящему изобретению
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с пептидом, представленным формулой (1), или его фармацевтически приемлемой солью (далее такие антитела могут называться "антителами по изобретению"). Антитела по изобретению не ограничиваются специфическим антителом и могут представлять собой поликлональные антитела или моноклональные антитела, полученные с использованием пептида по настоящему изобретению в качестве иммуногена.
Антитела по настоящему изобретению не ограничиваются каким-либо антителом до тех пор, пока они специфически связываются с пептидами по изобретению, и конкретные примеры включают антитела, которые специфически связываются с пептидами, представленными одной из формул (4)-(9), описанных выше.
Способы получения антител уже хорошо известны, и антитела по настоящему изобретению можно получить согласно обычным способам (Current protocols in Molecular Biology, edit. Ausubel et al. (1987), Publish. John Wiley and Sons, Section 11.12-11.13; Antibodies, A Laboratory Manual, Lane H.D. et al., ed., Cold Spring Harber Laboratory Press Publisher, New York, 1989).
Конкретно антитела можно получить с использованием пептидов по настоящему изобретению (например, соединения, представленного одной из формул (4)-(9)) в качестве иммуногена для иммунизации животного, не являющегося человеком, такого как кролик, с последующим получением антител из сыворотки иммунизированного животного обычным образом. С другой стороны, моноклональные антитела можно получить иммунизацией животного, не являющегося человеком, такого как мышь, соединением по настоящему изобретению, например, соединением, представленным одной из формул (4)-(9), и получая гибридомы из спленоцитов, полученных от животного, и клеток миеломы посредством слияния клеток, с последующим получением антител из гибридом (Current protocols in Molecular Biology, edit. Ausubel et al. (1987), Publish. John Wiley and Sons, Section 11.4-11.11).
Антитела, направленные против соединений по изобретению, можно получить способом, когда иммунологическую реакцию усиливают с использованием разнообразных адъювантов, подходящих для реципиента. Примеры адъювантов включают адъювант Фрейнда, неорганические гели, такие как гель гидроксида алюминия, поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин, полиол плюроник, полианионные соединения, пептиды, масляные эмульсии, гемоцианин моллюска морское блюдечко и динитрофенол, и адъюванты от человека, такие как БЦЖ (бацилла Кальметта-Герена) и Corynebacterium parvum.
Как описано выше, антитела, которые узнают соединение по настоящему изобретению, а также антитела, которые нейтрализуют активность соединения, можно легко получить соответственно иммунизацией животного соединениями по настоящему изобретению обычным образом. Такие антитела можно использовать в аффинной хроматографии, иммунологической диагностике и т.п. Иммунологическую диагностику можно соответственно выбрать из числа иммуноблоттинга, радиоиммуноанализа (РИА), иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA), флуоресцентного или люминисцентного анализа и т.п. Иммунологическая диагностика применима для диагностики онкозаболеваний, при которых экспрессируется ген WT1, таких как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников.
(3) Антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к антигенпредставляющим клеткам, на которых представлен комплекс между соединением по настоящему изобретению и антигеном HLA-A24.
Примеры, описанные далее, показывают, что введение соединений по настоящему изобретению индуцирует ЦТЛ. Иными словами, антигенпредставляющие клетки, на которых представлен комплекс между соединением по настоящему изобретению и антигеном HLA-A24, образуются в мононуклеарных клетках периферической крови и затем индуцируются ЦТЛ, которые специфически узнают клетки, представляющие такой комплекс. Такие антигенпредставляющие клетки, на которых представлен комплекс между антигеном HLA-A24 и соединением по настоящему изобретению, применимы в клеточной терапии (DC-терапии), как описано в данном описании далее.
Антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению не ограничиваются определенными клетками до тех пор, пока они представляют на своей поверхности комплекс между соединением по настоящему изобретению и антигеном HLA-A24. Конкретно такие клетки включают, например, антигенпредставляющие клетки дендритных клеток, на которых представлен комплекс между соединением, представленным любой из формул (4)-(9), и антигеном HLA-A24.
Антигенпредставляющие клетки, используемые в клеточной терапии (DC-терапии), можно получить путем выделения клеток с антигенпредставляющей способностью из организма онкобольного и воздействия в импульсном режиме на полученные клетки ех vivo соединения по настоящему изобретению, так что клетки представляют на своей поверхности комплекс между соединением по настоящему изобретению и антигеном HLA-A24. В данном контексте "клетка с антигенпредставляющей способностью" не ограничивается определенной клеткой до тех пор, пока она является клеткой, экспрессирующей на поверхности антиген HLA-A24, которая имеет способность представлять соединение по настоящему изобретению, и предпочтительным примером являются дендритные клетки, которые, как полагают, имеют особенно высокую антигенпредставляющую способность.
Антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению можно получить, например, путем выделения клеток с антигенпредставляющей способностью из организма онкобольного, воздействия в импульсном режиме на клетки ех vivo соединения по изобретению (например, соединения любой из формул (4)-(9)) и получения комплекса между антигеном HLA-A24 и соединением по настоящему изобретению (Cancer Immunol. Immunother., 46: 82, 1998; J. Immunol., 158: 1796, 1997; Cancer Res., 59: 1184, 1999). Когда используют дендритные клетки, антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению можно получить, например, путем выделения лимфоцитов из периферической крови онкобольного с использованием способа с фиколлом, удаления неадгезивных клеток, инкубации адгезивных клеток в присутствии GM-CSF и IL-4 для индукции дендритных клеток и воздействия в импульсном режиме на полученные дендритные клетки соединения по настоящему изобретению.
Антигенпредставляющие клетки, полученные так, как описано выше, применимы в качестве активного ингредиента, включенного в индуктор ЦТЛ или противораковую вакцину для клеточной терапии (CD-терапии), как описано в данном описании далее.
(4) ЦТЛ по настоящему изобретению
Пептиды по настоящему изобретению получают из человеческого WT1, и они обладают активностью по индукции ЦТЛ (иммуногенностью), ограниченной HLA-A24. В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к ЦТЛ, индуцированным пептидом по настоящему изобретению.
Примеры, описанные далее, показывают, что введение пептидов по настоящему изобретению, индуцирует ЦТЛ. Иными словами, антигенпредставляющие клетки, на которых представлен комплекс между соединением по настоящему изобретению и антигеном НLА-А24,образуются в мононуклеарных клетках периферической крови, и затем индуцируются ЦТЛ, которые специфически узнают клетки, представляющие такой комплекс. Такие ЦТЛ, индуцированные пептидом по настоящему изобретению, применимы в адоптивной иммунотерапии, как описано в данном описании далее.
ЦТЛ по настоящему изобретению не ограничиваются определенными ЦТЛ до тех пор, пока они индуцируются пептидом по настоящему изобретению, и, в частности, включают ЦТЛ, узнающие комплекс между соединением, представленным любой из формул (4)-(9), и антигеном HLA-A24, и ЦТЛ, узнающие комплекс между пептидом дикого типа (WT235-243: SEQ ID NO:1) и антигеном HLA-A24.
ЦТЛ, используемые в адоптивной иммунотерапии, можно получить, например, выделением периферических лимфоцитов из организма пациента и стимулируя полученные периферические лимфоциты in vitro соединением по настоящему изобретению (например, соединением, представленным любой из формул (4)-(9)) (Journal of Experimental Medicine, 1999, 190: 1669).
ЦТЛ по настоящему изобретению, полученные так, как описано выше, применимы качестве активного ингредиента в противораковой вакцине для адаптивной иммунотерапии.
Фармацевтические композиции, применимые в качестве противораковых вакцин
Соединения по настоящему изобретению, антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению и ЦТЛ по настоящему изобретению, описанные выше в разделах (1)-(4), можно использовать в качестве активного ингредиента, включенного в индуктор ЦТЛ, иначе говоря, противораковую вакцину, в композиции в форме, подходящей для таких соответствующих веществ, которые описаны ниже.
1) Противораковые вакцины, содержащие в качестве активного ингредиента соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль
Соединение по настоящему изобретению обладает активностью по индукции ЦТЛ. ЦТЛ, индуцированные соединением по настоящему изобретению, могут разрушать раковые образования через свою цитотоксическую активность и продуцирование лимфокинов. Таким образом, соединения по настоящему изобретению можно использовать в качестве активного ингредиента, включенного в противораковую вакцину для лечения или предупреждения онкозаболеваний. В воплощении изобретение относится к противораковой вакцине, включающей в качестве эффективного ингредиента соединения по изобретению (фармацевтической композиции, применимой в качестве противораковой вакцины). Когда противораковую вакцину по изобретению вводят больному раком, положительному на HLA-A24 и положительному на WT1, соединение (например, представленное любой из формул (4)-(9)) представляется антигену HLA-A24 антигенпредставляющих клеток, и затем ЦТЛ, специфические для представленного комплекса, содержащего антиген HLA-A24, эффективно пролиферируют и разрушают раковые клетки. Таким путем достигается лечение или предупреждение онкозаболеваний. Противораковые вакцины по изобретению можно использовать для лечения или предупреждения онкозаболеваний, которые сопровождаются повышенным уровнем экспрессии гена WT1, в том числе, онкозаболеваний крови, таких как лейкоз, миелодиспластического синдрома, множественной миеломы и злокачественной лимфомы, и солидных онкозаболеваний, таких как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак печени, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников. В такой связи в другом воплощении изобретение относится к способу лечения или предупреждения рака, который включает введение эффективного количества противораковой вакцины по настоящему изобретению больному раком, положительному на HLA-A24 и положительному на WT1.
Противораковая вакцина, включающая соединение по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента, может включать в качестве активного ингредиента или один пептид ракового антигена, иначе говоря, эпитоп ЦТЛ (например, соединение, представленное любой из формул (4)-(9)), или эпитопный пептид, соединенный с другим пептидом ракового антигена (эпитоп ЦТЛ), или хелперный эпитоп. Недавно показано, что эпитопный пептид, соединенный с несколькими эпитопами ЦТЛ (пептидами антигенов), обладает эффективной активностью по индукции ЦТЛ in vivo. Например, в Journal of Immunology, 1998, 161: 3186-3194, описывается, что примерно 30-мерный эпитопный пептид, с которым линейно соединены эпитопы ЦТЛ, HLA-A2, -A3, -А11, ограниченные В53 (пептиды антигенов), образовавшиеся из белка ракового антигена PSA, индуцируют in vivo ЦТЛ, специфические для соответствующего эпитопа ЦТЛ. Также показано, что эпитопный пептид, в котором эпитоп ЦТЛ и хелперный эпитоп соединены линейно, эффективно индуцируют ЦТЛ. Когда пептид по изобретению вводят в форме таких эпитопных пептидов, пептид внедряется в антигенпредставляющие клетки и затем подвергается внутриклеточному разложению с образованием соответствующих пептидов антигенов, которые связываются с антигеном HLA с образованием комплексов. Комплексы компактно представлены на клеточной поверхности антигенпредставляющих клеток, и затем ЦТЛ, специфические для комплексов, эффективно пролиферируют in vivo и разрушают раковые клетки. Таким путем достигается лечение или предупреждение онкозаболеваний.
Противораковые вакцины, содержащие в качестве активного ингредиента пептид по настоящему изобретению, также можно вводить вместе с фармацевтически приемлемым носителем, таким как подходящий адъювант, или в определенной лекарственной форме, для того, чтобы эффективно восстановить клеточный иммунитет. Для такой цели применимы адъюванты, описанные в литературе (Clin. Microbiol. Rev., 7: 277-289, 1994), которые включают конкретно компоненты бактериального происхождения, GM-CSF, цитокины, такие как интерлейкин-2, интерлейкин-7, интерлейкин-12 и т.п., компоненты растительного происхождения, компоненты, присходящие от морских организмов, неорганические гели, такие как гидроксид алюминия, поверхностно-активные вещества, такие как лизолейцин и полоил плюроник, полианионные соединения, пептиды и масляные эмульсии (эмульсионные композиции). Компоненты бактериального происхождения включают липид А, монофосфориллипид А, который является производным липида А, убитые бактерии (например, микобактерии, такие как БЦЖ), белки или полинуклеотиды бактериального происхождения, неполный адъювант Фрейнда, полный адъювант Фрейнда, компоненты клеточных стенок (например, БЦЖ-CWS), димиколат трегалозы (TDM) и т.п. Возможны также липосомные композиции, композиции из частиц, в которых ингредиент связан с гранулами диаметром в несколькоо мкм, или композиции, в которых ингредиент присоединен в липидам.
Введения можно достичь, например, интрадермальной, подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекцией. Хотя доза соединения по настоящему изобретению в композициях может изменяться в зависимости от заболевания, от которого лечат, возраста и массы пациента и т.п., типично вводят 0,0001-1000 мг, предпочтительно, 0,001-1000 мг, предпочтительнее, 0, 1 мг - 10 мг соединения по изобретению, каждые несколько дней и до каждых нескольких месяцев.
2) Противораковые вакцины, содержащие в качестве активного ингредиента антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению
Настоящее изобретение относится к противораковой вакцине, содержащей в качестве активного ингредиента антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению.
В последнее время появились сообщения о клеточной терапии (DC-терапии), при которой лимфоциты выделяют из периферической крови больного раком, и дендритные клетки, индуцированные из лимфоцитов, обрабатывают in vitro в импульсном режиме пептидом антигена или подобным средством для получения антигенпредставляющих клеток, которые затем возвращают пациенту подкожной инъекцией или подобным способом (Cancer Immunol. Immunother., 46: 82, 1988; J. Immunol., 158: p1796, 1997; Cancer Res., 59: p1184, 1999; Cancer Res., 56: p5672, 1996; J. Immunol., 161: p5607, 1998; J. Exp. Med., 184: p465, 1996). Таким образом, антигенпредставляющие клетки по настоящему изобретению можно использовать в качестве активного ингредиента в противораковой вакцине в клеточной терапии.
Противораковая вакцина, включающая в качестве активного ингредиента антигенпредставляющие клетки по изобретению, предпочтительно, содержит физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), среду или подобное для устойчивого сохранения антигенпредставляющих клеток. Вакцину можно вводить, например, внутривенно, подкожно или интрадермально. Примерами доз являются дозы, описанные в вышеуказанной литературе.
Путем повторного введения противораковой вакцины в организм пациента у пациентов эффективно индуцируются специфические ЦТЛ, положительные на HLA-A24 и положителные на WT1, так что достигается лечение или предупреждение онкозаболеваний. Противораковую вакцину, включающую в качестве активного ингредиента антигенпредставляющие клетки по изобретению, можно использовать для лечения или предупреждения онкозаболеваний, при которых повышается уровень экспрессии гена WT1, включая онкозаболевания крови, такие как лейкоз, миелодиспластический синдром, множественная миелома и злокачественная лимфома, и солидные онкозаболевания, такие как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак печени, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников.
3) Противораковые вакцины, содержащие в качестве активного ингредиента ЦТЛ по настоящему изобретению
Настоящее изобретение относится к противораковой вакцине, включающей в качестве активного ингредиента ЦТЛ по настоящему изобретению (фармацевтической композиции, применимой в качестве противораковой вакцины). ЦТЛ по настоящему изобретению применимы в адоптивной иммунотерапии, как описано в данном описании далее.
В случае меланомы отмечено, что адоптивная иммунотерапия приводит к лечебному эффекту, когда опухолевые инфильтрирующие Т-клетки, выделенные из организма самого/самой пациента/пациентки, культивируют ex vivo в больших количествах и затем возвращают в организм пациента/пациентки (J. Natl. Cancer. Inst, 86: 1159, 1994). Подобным образом, при меланоме мышей подавление метастазирования наблюдали при стимуляции in vitro спленоцитов пептидом ракового антигена TRP-2, пролиферации посредством этого ЦТЛ, специфических для пептида ракового антигена, и введении указанных ЦТЛ мыши с пересаженной меланомой (J. Ехр. Med., 185: 453, 1997). Такой результат получен при пролиферации in vitro ЦТЛ, которые специфически узнают комплекс между антигеном HLA и пептидом ракового антигена на антигенпредставляющих клетках. Соответственно, полагают, что способ лечения онкозаболеваний, который включает стимуляцию in vitro лимфоцитов периферической крови от пациента с использованием соединения по настоящему изобретению для пролиферации опухолеспецифических ЦТЛ in vitro и последующее возвращение ЦТЛ в организм пациента, является применимым. Таким образом, ЦТЛ по изобретению можно использовать в качестве активного ингредиента в противораковой вакцине, применимой в адоптивной иммунотерапии.
Противораковая вакцина, включающая в качестве активного ингредиента ЦТЛ по изобретению, предпочтительно, содержит физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), среду или подобное для устойчивого сохранения ЦТЛ. Вакцину можно вводить, например, внутривенно, подкожно или интрадермально. Примерами доз являются дозы, описанные в вышеуказанной литературе.
Путем повторного введения противораковой вакцины в организм пациента у пациентов усиливается цитотоксическое действие ЦТЛ на раковые клетки у пациента, положительного на HLA-A24 и положительного на WT1, и раковые клетки разрушаются, так что достигается лечение онкозаболеваний. Противораковую вакцину, включающую в качестве активного ингредиента ЦТЛ по настоящему изобретению, можно использовать для лечения или предупреждения онкозаболеваний, которые включают повышенный уровень экспрессии гена WT1. Примеры онкозаболеваний включают онкозаболевания крови, такие как лейкоз, миелодиспластический синдром, множественная миелома и злокачественная лимфома, и солидные онкозаболевания, такие как рак желудка, рак толстой кишки, рак легких, рак молочной железы, эмбриональный рак, рак печени, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, цервикальный рак и рак яичников.
Далее настоящее изобретение поясняется приведенными примерами, но ни в каком отношении указанными примерами не ограничивается.
В последующих примерах соединение примера 2, соединение примера 4 и соединение примера 6 являются производными WT1235-243 (SEQ ID NO:1) и соответствуют производному WT1235-243, модифицированному цистином, глутатионом и тиогликолевой кислотой, соответственно. Кроме того, соединение примера 1, соединение примера 3 и соединение примера 5 являются производными WT1235-243 (2М→Y) (SEQ ID NO:2), модифицированному цистином, глутатионом и тиогликолевой кислотой, соответственно.
Примеры
В примерах используются приведенные далее аббревиатуры.
Boc - трет-бутоксикарбонил
Npys - 3-нитро-2-пиридинсульфенил
трет-Bu - трет-бутил
Trt - трифенилметил
Fmoc - 9-флуоренилметилоксикарбонил
ДМФА - диметилформамид
НОВТ - N-гидроксибензотриазол
DIPCI - диизопропилкарбодиимид
Пример 1
Синтез пептида формулы (4)
Пептид (1,5 г), полученный в препаративном примере 1, описанном ниже, и Вос-Cys(Npys)-OH (600 мг) смешивают в диметилсульфоксиде (20 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут. К реакционной смеси добавляют ацетонитрил (600 мл), смесь перемешивают на льду и полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией. Твердое вещество на фильтре промывают ацетонитрилом и диэтиловым эфиром с последующей сушкой при пониженном давлении и получают пептид (1,65 г), в котором Boc-Cys-OH связан дисульфидной связью. Полученный пептид (0,53 г) растворяют в трифторуксусной кислоте (5 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. После выпаривания трифторуксусной кислоты при пониженном давлении остаток растворяют в смешанном растворителе ацетонитрил-уксусная кислота-вода (10/10/90) (110 мл) и затем осуществляют очистку с использованием ВЭЖХ.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 3 см × L 25 см, 10 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - СН3СН/0,1% ТФК;
скорость потока 20 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 5% элюентом 2. Затем 5% элюент 2 пропускают в течение 10 минут, затем пропускают 10% элюент 2 в течение 15 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают со скоростью 0,1%/мин. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид (300 мг).
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1292, [М+1]+ (теоретическая величина = 1291,5).
Пример 2
Синтез пептида формулы (5)
Нужный пептид (104 мг) получают взаимодействием пептида (500 мг), полученного в препаративном примере 2, описанном ниже, с Boc-Cys(Npys)-OH (200 мг) с последующими удалением Вос-гуппы в трифторуксусной кислоте и очисткой методом ВЭЖХ способом, подобным способу в примере 1.
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1260, [М+1]+ (теоретическая величина = 1259,5).
Пример 3
Синтез пептида формулы (8)
Пептид (240 мг), полученный в препаративном примере 1, и 2,2'-дитиобис(5-нитропиридин) (60 мг) смешивают в диметилсульфоксиде (6 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют восстановленный глутатион (120 мг) и затем смесь перемешивают при 30°С в течение 1 часа. После добавления к реакционной смеси еще восстановленного глутатиона (60 мг) и диметилсульфоксида (4 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 минут к реакционной смеси добавляют ацетонитрил (200 мл), затем полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении, и получают сырой пептид (440 мг). Полученный сырой пептид растворяют в смеси (110 мл) ацетонитрил-уксусная кислота и вода (10/10/90) и затем осуществляют очистку с использованием ВЭЖХ.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 3 см × L 25 см, 10 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - СН3СN/0,1% ТФК;
скорость потока 20 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2. Затем 10% элюент 2 пропускают в течение 10 минут, пропускают 17% элюент 2 в течение 15 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают со скоростью 0,05%/мин. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид (107 мг).
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1477, [М+1]+ (теоретическая величина = 1477,5).
Пример 4
Синтез пептида формулы (9)
Пептид (120 мг), полученный в препаративном примере 2, и 2,2'-дитиобис(5-нитропиридин) (30 мг) смешивают в диметилсульфоксиде (3 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют восстановленный глутатион (30 мг), затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут и затем к реакционной смеси добавляют еще воду (1 мл) и восстановленный глутатион (30 мг) с последующим перемешиванием в течение 20 минут. После добавления к реакционной смеси ацетонитрила (100 мл) полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении и получают сырой пептид (160 мг). Полученный сырой пептид растворяют в смеси (55 мл) ацетонитрил-уксусная кислота-вода (5/5/45) и затем осуществляют очистку с использованием ВЭЖХ.
Насос типа LC-6A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 2 см × L 25 см, 10 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - СН3СН/0,1% ТФК;
скорость потока 10 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2. Затем 10% элюент 2 пропускают в течение 10 минут, пропускают 17% элюент 2 в течение 15 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают со скоростью 0,05%/мин. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид (18 мг).
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1445, [М+1]+ (теоретическая величина = 1445,5).
Пример 5
Синтез пептида формулы (6)
Пептид (240 мг), полученный в препаративном примере 1, и 2,2'-дитиобис(5-нитропиридин) (60 мг) смешивают в диметилсульфоксиде (6 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют тиогликолят натрия (100 мг) и затем смесь перемешивают при 30°С в течение 30 минут, затем к реакционной смеси добавляют еще тиогликолят натрия (50 мг), диметилсульфоксид (4 мл) и воду (2 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 минут. После добавления к реакционной смеси ацетонитрила (200 мл) полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении и получают сырой пептид (305 мг). Полученный сырой пептид растворяют в смеси (330 мл) ацетонитрил-уксусная кислота-вода (30/30/270) с последующей фильтрацией и затем полученный фильтрат очищают с использованием ВЭЖХ.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 3 см × L 25 см, 10 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - CH3CN/0,1% ТФК;
скорость потока 20 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2. Затем 10% элюент 2 пропускают в течение 10 минут, пропускают 20% элюент 2 в течение 15 минут, пропускают 23% элюент 2 в течение 15 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают со скоростью 0,05%/мин. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид (15 мг).
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1263, [М+1]+ (теоретическая величина = 1262,5).
Пример 6
Синтез пептида формулы (7)
Пептид (240 мг), полученный в препаративном примере 2, и 2,2'-дитиобис(5-нитропиридин) (60 мг) смешивают в диметилсульфоксиде (6 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют тиогликолят натрия (50 мг) и затем смесь перемешивают при 30°С в течение 30 минут. Кроме того, после добавления к реакционной смеси еще тиогликолята натрия (50 мг) с последующим перемешиванием при 30°С в течение 1 часа к реакционной смеси добавляют ацетонитрил (200 мл). Полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией и сушат при пониженном давлении, и получают сырой пептид (194 мг). Полученный сырой пептид растворяют в смеси (120 мл) ацетонитрил-уксусная кислота-вода (10/20/90) с последующей фильтрацией и затем полученный фильтрат очищают с использованием ВЭЖХ.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 3 см × L 25 см, 10 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - CH3CN/0,1% ТФК;
скорость потока 20 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2. Затем 10% элюент 2 пропускают в течение 10 минут, пропускают 18% элюент 2 в течение 15 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают со скоростью 0,1%/мин. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид (30 мг).
Масс-спектрометрия: ЖХ-ESI/MC, m/z=1230, [М+1]+ (теоретическая величина = 1230,4).
Пример 7
Синтез пептида формулы (4)
1. Синтез смолы с пептидом, содержащим защитные группы (Boc-Cys(Boc-Cys-ОН)-Tyr(трет-Bu)-Thr(трет-Bu)-Trp(Вос)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола)
Resin - смола
Смолу Fmoc-Leu-Alko-смола (где Alko представляет собой п-алкоксибензиловый спирт) (10 г) (0,74 ммоль/г, Watanabe Chemical Industries, Ltd.) загружают в реактор (500 мл, твердофазный синтезатор типа АСТ90, Advanced ChemTech) и промывают один раз ДМФА или подобным растворителем (процесс 1). Затем смолу обрабатывают 25% пиперидином (3 минуты × 1 и 15 минут × 1) для отщепления групп Fmoc (процесс 2) и снова промывают ДМФА или подобным растворителем (процесс 6) для удаления пиперидина. В реактор добавляют раствор Fmoc-Asn(Trt)-OH (13,25 г) и НОВТ (1-гидроксибензотриазол) (3,4 г) в NMP (N-метилпирролидинон) (200 мл). После добавления DIPCI (N,N'-диизопропилкарбодиимид) (3,42 мл) смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 60 минут (процесс 3). Затем смолу промывают NMP (процесс 4) и снова проводят реакцию сочетания с использованием Fmoc-Asn(Trt)-OH (13,25 г), НОВТ (3,4 г) и DIPCI (3,42 мл) (процесс 3). После промывки смолы (процесс 6) ее перемешивают в 25% Ас2О (уксусный ангидрид) в течение 3 минут × 1 и в течение 15 минут × 2 для блокировки непрореагировавших аминогрупп (процесс 5). Смолу промывают (процесс 6), затем удаляют защитные группы (процесс 2) и осуществляют промывку (процесс 6) и получают продукт H-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Проводят реакцию сочетания с использованием Fmoc-Met-OH (8,25 г), Fmoc-Gln(Trt)-OH (13,56 г), Fmoc-Asn(Trt)-OH (13,25 г), Fmoc-Trp(Boc)-OH (11,69 г), Fmoc-Thr(трет-Bu)-ОН (8,82 г), Fmoc-Tyr(трет-Bu)-ОН (10,2 г) и (Boc-Cys-OH)2 (19,56 г) подобным образом при условии, что сочетание повторяют три раза в случае затруднения при сочетании. После конденсации размещенного в N-конце (Boc-Cys-OH)2 (N,N'-трет-бутоксикарбонилцистин) проводят промывку (процесс 6) с последующей двукратной промывкой диэтиловым эфиром (200 мл), затем проводят сушку при пониженном давлении и получают продукт Boc-Cys(Boc-Cys-OH)-Tyr(Tpeт-Bu)-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола (пептидная смола формулы (10)) (22,87 г). Вышеперечисленные процессы синтеза суммированы в следующей таблице.
Таблица 1 | |||
Процессы синтеза | |||
Процесс | Реагент | Число обработок | Время (мин) |
1) Промывка | ДМФА | 200 мл × 3 | 0,3 |
МеОН | 200 мл × 1 | 0,3 | |
ДМФА | 200 мл × 3 | 0,3 | |
2) Удаление защитных групп | 25% пиперидин / ДМФА | 200 мл | 3,0 |
200 мл | 15,0 | ||
3) Сочетание | Аминозащищенная аминокислота (3 экв. для каждого) 60 × 1 | ||
НОВТ (3 экв.), DIPCI (3 экв.) / NMP 200 мл | |||
4) Промывка | NMP | 200 мл × 2 | 0,3 |
5) Блокировка | 25% уксусный ангидрид / ДМФА | 200 мл | 3,0 |
200 мл | 15,0 | ||
6) Промывка | ДМФА | 200 мл × 5 | 0,3 |
МеОН | 200 мл × 1 | 0,3 | |
ДМФА | 200 мл × 5 | 0,3 |
2. Удаление защитных групп из пептидной смолы, содержащей защитные группы
Смесь (200 мл) трифторуксусная кислота/этандиол/Н2О/триизопропилсилан (94/2,5/2,5/1) добавляют к содержащей защитные группы пептидной смоле Boc-Cys(Boc-Cys-OH)-Tyr(Tpeт-Bu)-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола (22,87 г), полученной согласно описанному выше способу, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. После фильтрации продукта реакции фильтрат добавляют к диэтиловому эфиру (400 мл) при охлаждении на льду. Полученное выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией с использованием стеклянного фильтра и затем промывают диэтиловым эфиром и сушат при пониженном давлении, и получают сырой пептид (8,27 г).
3. Очистка сырого пептида
Полученный сырой пептид (2,76 г) растворяют в смешанном растворителе из 20% водного раствора уксусного ангидрида (1400 мл) и ацетонитрила (35 мл) и полученные нерастворимые вещества удаляют фильтрацией. Полученный раствор сырого пептида очищают с использованием жидкостной хроматографии с обращенной фазой.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 5 см × L 50 см, 15-30 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - CH3CN/0,1% ТФК;
скорость потока 60 мл/мин;
детекция УФ 280 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2. Затем 10% элюент 2 пропускают в течение 30 минут и затем концентрацию элюента 2 повышают до 34% в течение 120 минут. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид H-Cys(H-Cys-OH)-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu-OH (пептид формулы (4)) (0,91 г).
Пример испытаний 1
(Иммунизация мыши (1))
Иммуногенность каждого пептида антигена, полученного в примерах 1-6, оценивают с использованием трансгенных мышей HLA-A2402/Kb (см. WO 02/47474, и далее в данном описании мыши могут называться мышами HLA-A24). При иммунизации каждым пептидом для оценки иммуногенности используют трех мышей.
Фармацевтическую композицию, содержащую каждый такой синтетический пептид, получают следующим образом. Каждый синтетический пептид примеров 1-3, 5, 6 растворяют в ДМСО до 40 мг/мл. Затем раствор (32,5 мкл) смешивают с водой для инъекций (540 мкл). Затем полученный раствор (550 мкл) смешивают с неполным адъювантом Фрейнда (700 мкл) (Montanide ISA51) с использованием стеклянного шприца и получают эмульсию воды в масле. Пептид примера 4 растворяют в ДМСО до 50 мг/мл и также в ДМСО растворяют синтетический хелперный пептид (FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE, SEQ ID NO:5) до 20 мг/мл. Затем по 30 мкл растворов обоих пептидов смешивают в воде для инъекций (540 мкл), после чего все смешивают с эквивалентным количеством неполного адъюванта Фрейнда (IFA) и получают эмульсию воды в масле.
Полученный препарат (200 мкл) инъецируют трансгенной мыше HLA-A2402/Kb интрадермально в основание хвоста для иммунизации. Через 7-8 дней после начала эксперимента извлекают селезенку и помещают на матированную часть предметного стекла, и собирают и получают спленопиты. Часть спленоцитов, подвергшихся гемолизу буфером АСК (0,15 М NH4Cl, 10 мМ КНСО3, 0,1 мМ ЭДТК, рН 7,2-7,4), обрабатывают в течение 1 часа в импульсном режиме пептидом антигена, используемым при иммунизации (100 мкг/мл), и высевают в 24-луночный планшет (7×106 клеток/лунку). Одновременно добавляют спленоциты, не подвергавшиеся обработке в импульсном режиме каким-либо пептидом (7×105 клеток/лунку), стимулируют in vitro и культивируют при 37°С в течение 5-6 дней. Стимуляцию in vitro осуществляют в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FCS, 10 мМ HEPES, 20 мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, 1 мМ заменимых аминокислот MEM, 1% витамина MEM и 55 мкМ 2-меркаптоэтанола. Через 5-6 дней после начала рестимуляции проводят испытание на цитотоксическую активность согласно обычному способу. Клетки EL4-A2402/Kb, полученные трансформацией клеток EL-4 (DAINIPPON PHARMACEUTICAL CO., LTD., каталожный №06-039) экспрессирующим вектором, кодирующим HLA-A2402/Kb, и клетки EL4-A2402/Kb, обработанные в импульсном режиме пептидом антигена WT1235-243 или WT1235-243 (2М→Y), используют в качестве клеток-мишеней (Т). Конкретно, клетки, обработанные в импульсном режиме WT1235-243 (2М→Y), используют для оценки пептидов примеров 1, 3 и 5, а клетки, обработанные в импульсном режиме WT1235-243, используют для оценки пептидов примеров 2, 4 и 6. Указанные клетки метят 51Cr (1,85 МБк/106 клеток) и обрабатывают пептидом в импульсном режиме при 100 мкг/мл в течение часа (мечение осуществляют в течение 2 часов и пептид добавляют через 1 час после инициации мечения). Проводят анализ на высвобождение 51Cr (J. Immunol, 159: 4753, 1997) для определения цитотоксической активности культивированных in vitro спленоцитов (Е) в отношении клеток-мишеней (Т). В данном анализе отношение Е/Т составляет 80.
Результаты показаны на фигурах 1-7. Фигуры 1-6 соответствуют цитотоксическим активностям пептидов примеров 1-6, соответственно. На фигурах вертикальная ось показывает цитотоксическую активность (специфический лизис), и горизонтальная ось показывает результаты для каждой из трех мышей по отдельности. Кроме того, на фигуре 7 показаны результаты в зависимости от дозы для соединения примера 1. На фигуре вертикальная ось показывает цитотоксическую активность (специфический лизис), и горизонтальная ось показывает отдельные вводимые дозы (600 мкг, 200 мкг, 60 мкг и 20 мкг). На фигуре цитотоксическая активность показана как среднее и среднеквадратическое отклонение (S.D.), при использовании трех мышей для каждой дозы. Как ясно видно из фигур, обнаруживается, что все синтетические пептиды обладают активностью по индукции ЦТЛ, иначе говоря, иммуногенностью.
Пример испытаний 2
(Иммунизация мыши (2))
Пептид примера 1 растворяют в ДМСО до 40 мкг/мл. Затем раствор (32,5 мкл) смешивают с водой для инъекций (540 мкл). Затем полученный раствор (550 мкл) смешивают с неполным адъювантом Фрейнда (700 мкл) (Montanide ISA51 (зарегистрированный товарный знак)) (SEPPIC, Inc., Париж, Франция) с использованием стеклянного шприца, и получают эмульсию воды в масле.
Полученный препарат (200 мкл) инъецируют трансгенной мыше HLA-A2402/Kb интрадермально в основание хвоста для иммунизации. Через 7 дней после начала эксперимента извлекают селезенку и получают спленоциты обычным способом (WO 02/47474). Затем проводят испытания с использованием набора мышиного IFN-гамма ELISPOT (для ферментного точечного анализа) (Fujisawa, каталожный № BD-551083). Испытание проводят согласно инструкциям, прилагаемым к набору. Спленоциты высевают в количестве 5×105 клеток-лунку и добавляют среду для культивирования, содержащую пептид примера 1, пептид дикого типа (WT1235-243) или пептид, полученный из вируса гриппа (ASNENMETM, пептид для отрицательного контроля, который не связывается с HLA-A24), в конечной концентрации 10-6 М, и затем проводят инкубацию с использованием инкубатора с СО2 при 37°С в течение 18 часов.
Согласно прилагаемым инструкциям планшет промывают и детектируют ряд пятен с использованием системы KS Elispot Research System (Carl Zeiss). Метод Elispot известен как альтернатива испытанию на цитотоксическую активность (J. Immunological Methods, 1995, 181, 45-54). Результаты показаны на фигуре 8. В результате обнаружено, что пептид примера 1 может индуцировать HLA-А24-специфический клеточно-опосредованный иммунитет, который перекресно реагирует с пептидом дикого типа.
Пример испытаний 3
(Испытание с использованием человеческих РВМС)
У здоровых положительных на HLA-A24 субъектов берут периферическую кровь (50 мл) с использованием гепаринизированной вакуумной пипетки для взятия крови. Кровь, разбавленную в два раза PBS (-), доливают к фиколл-паку (Amersham Biosciences), количество которого составляет половину от количества крови, и затем центрифугируют в течение 20 минут при 2000 об/мин. Слой клеток, содержащий мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), собирают, добавляют к ним 3-4-кратное количество PBS (-) и затем центрифугируют в течение 10 минут при 1800 об/мин. Клеточный осадок дважды промывают PBS (-) и собирают РВМС.
РВМС суспендируют в среде для культивирования лимфоцитов (RPMI1640: AIM V=1:1, NEAA, 10% FCS) и выращивают в колбе для культивирования в течение двух часов и собирают неадгезивные клетки. С использованием набора для выделения CD8+ Т-клеток II (Miltenyi Biotec) среди неадгезивных клеток собирают Т-клетки, положительные на CD8. Адгезивные клетки выращивают в среде для культивирования лимфоцитов, содержащей GM-CSF (1000 Е/мл) и IL-4 (1000 Е/мл) в течение 7 суток. Плавающие клетки собирают как фракцию антигенпредставляющих клеток, содержащую дендритные клетки (DC). Собранные клетки замораживают для сохранения до тех пор, пока их не используют для экспериментов.
Фракцию DC, полученную так, как описано выше, обрабатывают в импульсном режиме пептидом примера 1 (50 мкг/мл) инкубацией клеток с пептидом в течение одного часа в среде AIM-V, содержащей митомицин (50 мкг/мл). После промывки средой три раза добавляют еще пептид примера 1 (50 мкг/мл) для обработки в импульсном режиме и получают антигенпредставляющие клетки. В день 0 антигенпредставляющие клетки, обработанные пептидом в импульсном режиме, добавляют к Т-клеткам, положительным на CD8, для проведения первой стимуляции, и клетки начинают культивировать в среде для культивирования лимфоцитов, содержащей IL-7 (10 нг/мл), с использованием 24-луночного планшета. В день 7 Т-клетки собирают и после их промывки проводят пептидную стимуляцию с использованием антигенпредставляющих клеток, обработанных пептидом в импульсном режиме, подобно первой стимуляции. На следующий день (день 8) добавляют IL-2 так, чтобы концентрация составляла 50 Е/мл. В день 14 Т-клетки собирают и проводят третью стимуляцию подобно первой или второй стимуляции. На следующий день (день 15) добавляют IL-2 так, чтобы концентрация составляла 50 Е/мл. В день 21 Т-клетки собирают и замораживают для сохранения.
В день 21 1×105 Т-клеток добавляют к 2×104 клеткам VA13/A2402, экспрессирующим HLA-A2402, подвергавшимися или не подвергавшимися обработке в импульсном режиме каждым из пептидов (пептидом дикого типа (WT1235-243), модифицированным пептидом (WT1235-243 (2М→Y)) или пептидом примера 1), и через 18 часов собирают супернатант для определения количества IFN-γ с использованием ELISA.
Результаты по пептидспецифической реактивности Т-клеток, стимулированных синтетическим пептидом примера 1, приводятся на фигуре 9. Стимулированные пептидом примера 1 Т-клетки не взаимодействуют с клетками, неподвергавшимися обработке в импульсном режиме, но они в достаточной степени взаимодействуют с клетками, подвергавшимися обработке в импульсном режиме пептидом примера 1. Таким образом, обнаружено, что Т-клетки, специфические для пептида, взаимодействуют с клетками, обработанными в импульсном режиме пептидом дикого типа (WT1235-243), а также клетками, обработанными в импульсном режиме модифицированным пептидом (WT1235-243 (2M→Y)).
Препаративный пример 1
1. Синтез пептидной смолы, содержащей защитные группы (H-Cys(Trt)-Tyr(Tpeт-Bu)-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола)
Смолу Fmoc-Leu-Alko-смола (где Alko представляет собой п-алкоксибензиловый спирт) (10 г) (0,82 ммоль/г, Watanabe Chemical Industries, Ltd.) загружают в реактор (500 мл, твердофазный синтезатор типа АСТ90, Advanced ChemTech) и промывают один раз ДМФА или подобным растворителем (процесс 1). Затем смолу обрабатывают 25% Pip (пиперидин) (3 минуты × 1 и 15 минут × 1) для отщепления групп Fmoc (процесс 2) и снова промывают ДМФА или подобным растворителем (процесс 1) для удаления Pip. В реактор добавляют раствор Fmoc-Asn(Trt)-OH (24,46 г) и НОВТ (1-гидроксибензотриазол) (6,28 г) в NMP (N-метилпирролидинон) (200 мл). После добавления DIPCI (N,N'-диизопропилкарбодиимид) (6,3 мл) смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут (процесс 3). Через тридцать минут смолу промывают NMP (процесс 4), и снова один раз подвергают реакции сочетания с использованием Fmoc-Asn(Trt)-OH (24,46 г), НОВТ (6,28 г) и DIPCI (6,3 мл) (процесс 5) для синтеза смолы Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Затем полученную смолу превращают в H-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола, отщепляя защитные группы в процессе 2. После промывки (процесс 1) последовательно добавляют 15,23 г Fmoc-Met-OH, 25,04 г Fmoc-Gln(Trt)-OH, 24,46 г Fmoc-Asn(Trt)-OH, 21,59 г Fmoc-Trp(Boc)-OH, 16,3 г Fmoc-Thr(трет-Bu)-ОН, 18,84 г Fmoc-Tyr(трет-Bu)-ОН и 24,01 г Fmoc-Cys(Trt)-OH для проведения реакции сочетания (процесс 3). В реакции сочетания с использованием Fmoc-Thr(Tper-Bu)-OH реакцию повторяют три раза и полученную смолу промывают ДМФА и обрабатывают 25% Ac2O (уксусный ангидрид) (15 минут × 2) для блокировки непрореагировавших аминогрупп. После конденсации размещенного в N-конце Fmoc-Cys(Trt)-OH проводят удаление защитной группы (процесс 2) и промывку (процесс 6), и получают продукт H-Cys(Trt)-Tyr(Tpeт-Bu)-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Вышеперечисленные процессы синтеза суммированы в следующей таблице.
Таблица 2 | |||
Процессы синтеза | |||
Процесс | Реагент | Число обработок | Время (мин) |
1) Промывка | ДМФА | 200 мл × 6 | 0,3 |
МеОН | 200 мл × 1 | 0,3 | |
ДМФА | 200 мл × 3 | 0,3 | |
2) Удаление защитных групп | 25% пиперидин / ДМФА | 200 мл | 3,0 |
200 мл | 15,0 | ||
3) Сочетание | Аминозащищенная аминокислота (5 экв. для каждого) 30 × 1 | ||
НОВТ (5 экв.) DIPCI (5 экв.)/NMP 200 мл | |||
4) Промывка | NMP | 200 мл × 2 | 0,3 |
5) Сочетание | Аминозащищенная аминокислота (5 экв. для каждого) 30 × 1 | ||
НОВТ (5 экв.) DIPCI (5 экв.)/NMP 200 мл | |||
6) Промывка | ДМФА | 200 мл × 5 | 0,3 |
МеОН | 200 мл × 1 | 0,3 | |
ДМФА | 200 мл × 2 | 0,3 |
2. Удаление защитных групп из пептидной смолы, содержащей защитные группы
Смешанный раствор трифторуксусная кислота/этандиол/H2O/триизопропилсилан (94/2,5/2,5/1) (100 мл) добавляют к содержащей защитные группы пептидной смоле (Н-Cys(Trt)-Tyr(Tpeт-Bu)-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола) (10,0 г), полученной так, как описано выше, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь добавляют к трет-бутилметиловому эфиру (625 мл) при охлаждении на льду, полученную смесь перемешивают в течение 15 минут и затем фильтруют с использованием стеклянного фильтра, и получают нерастворимые вещества. После промывки остатка на фильтре трет-бутилметиловым эфиром (примерно 100 мл) пять раз остаток на фильтре экстрагируют 6 М водным раствором гидрохлорида гуанидина (1 л) и получают раствор сырого пептида.
3. Очистка сырого пептида
Полученный раствор сырого пептида очищают с использованием жидкостной хроматографии с обращенной фазой.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 5 см × L 50 см, 15-30 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - CH3CN/0,1% ТФК;
скорость потока 60 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2, и выдерживают на водяной бане при 50°С. После пропускания 10% элюента 2 в течение 30 минут концентрацию элюента 2 повышают до 20% в течение 40 минут и затем повышают до 40% в течение 360 минут. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид H-Cys-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu-OH (SEQ ID NO:2) (1,50 г).
- Анализ аминокислот
Гидролиз: 1% фенола / 6 N соляная кислота, 110°С, 10 часов.
Метод анализа нингидринный.
Asx: 1,96(2); Thr: 1,05(1); Glx: 1,06(1); Met: 1,05(1); *Leu: (1); Tyr: 0,87(1).
*) Leu = стандартная аминокислота. Теоретическая величина описана в ().
- Анализ массы: ЖХ-ESI-MC m/z=1173 [М+1]+ (теоретическая величина = 1172,5).
- Анализ аминокислотной последовательности. Потверждается последовательность аминокислотных остатков от Tyr в позиции 2 от N-конца до Leu в С-конце.
Препаративный пример 2
1. Синтез содержащей защитные группы пептидной смолы (H-Cys(Trt)-Met-Thr(Tpeт-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола)
Смолу Fmoc-Leu-Alko-смола (где Alko представляет собой п-алкоксибензиловый спирт) (10 г) (0,81 ммоль/г, Watanabe Chemical Industries, Ltd.) загружают в реактор (500 мл, твердофазный синтезатор типа АСТ90, Advanced ChemTech) и промывают один раз ДМФА или подобным растворителем (процесс 1). Затем смолу обрабатывают 25% Pip (пиперидин) (3 минуты × 1 и 15 минут × 1) для отщепления групп Fmoc (процесс 2) и снова промывают ДМФА или подобным растворителем (процесс 1) для удаления Pip. В реактор добавляют раствор Fmoc-Asn(Trt)-OH (24,17 г) и НОВТ (1-гидроксибензотриазол) (6,2 г) в NMP (N-метилпирролидинон) (200 мл). После добавления DIPCI (N,N'-диизопропилкарбодиимид) (6,2 мл) смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут (процесс 3). Через тридцать минут смолу промывают NMP (процесс 4) и снова один раз подвергают реакции сочетания с использованием Fmoc-Asn(Trt)-OH (24,17 г), НОВТ (6,2 г) и DIPCI (6,2 мл) (процесс 5) для синтеза смолы Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Затем полученную смолу превращают в H-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Затем полученную смолу превращают в H-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола, удаляя защитные группы в процессе 2. После промывки (процесс 1) последовательно добавляют 15,05 г Fmoc-Met-OH, 24,73 г Fmoc-Gln(Trt)-OH, 24,17 г Fmoc-Asn(Trt)-OH, 21,33 г Fmoc-Trp(Boc)-OH, 16,1 г Fmoc-Thr(трет-Bu)-OH, 15,05 г Fmoc-Met-OH и 23,72 г Fmoc-Cys(Trt)-ОН для проведения реакции сочетания (процесс 3). В реакции сочетания с использованием Fmoc-Thr(трет-Bu)-OH реакцию повторяют три раза и полученную смолу промывают ДМФА и обрабатывают 25% Ac2O (уксусный ангидрид) (15 минут × 2) для блокировки непрореагировавших аминогрупп. После конденсации размещенного в N-конце Fmoc-Cys(Trt)-OH проводят удаление защитной группы (процесс 2) и промывку (процесс 6) и получают продукт H-Cys(Trt)-Met-Thr(трет-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола. Вышеперечисленные процессы синтеза суммируют так же, как описано в таблице в препаративном примере 1.
2. Удаление защитных групп из пептидной смолы, содержащей защитные группы
Смесь трифторуксусная кислота/этандиол/Н2О/триизопропилсилан (94/2,5/2,5/1) (130 мл) добавляют к содержащей защитные группы пептидной смоле (H-Cys(Trt)-Met-Thr(TpeT-Bu)-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Met-Asn(Trt)-Leu-Alko-смола) (13,0 г), полученной так, как описано выше, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь добавляют к диэтиловому эфиру (800 мл) при охлаждении на льду и полученную смесь перемешивают в течение 15 минут и затем фильтруют с использованием стеклянного фильтра, и получают нерастворимые вещества. После промывки остатка на фильтре диэтиловым эфиром (примерно 100 мл) пять раз остаток на фильтре экстрагируют 6 М водным раствором гидрохлорида гуанидина (1,3 л) и получают раствор сырого пептида.
3. Очистка сырого пептида
Полученный раствор сырого пептида очищают с использованием жидкостной хроматографии с обращенной фазой.
Насос типа LC-8A (SHIMADZU CORPORATION);
колонка YMC ODS-A, Ф 5 см × L 50 см, 15-30 мкм;
элюент 1 - H2O/0,1% ТФК;
элюент 2 - СН3СН/0,1% ТФК;
скорость потока 60 мл/мин;
детекция УФ 220 нм.
Раствор неочищенного пептида загружают в колонку, уравновешенную 10% элюентом 2, и выдерживают на водяной бане при 50°С. После пропускания 10% элюента 2 в течение 30 минут концентрацию элюента 2 повышают до 20% в течение 40 минут и затем повышают до 40% в течение 360 минут. Фракции, содержащие нужный продукт, собирают, ацетонитрил выпаривают при пониженном давлении с последующей лиофилизацией и получают нужный пептид H-Cys-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu-OH (SEQ ID NO:1) (2,32 г).
- Анализ аминокислот
Гидролиз: 4 N метансульфоновая кислота, 110°С, 17 часов.
Метод анализа нингидринный.
Asx: 1,87(2); Thr: 0,93(1); Glx: 0,95(1); Met: 1,72(2); *Leu: (1); Trp: 0,80(1).
*) Leu = стандартная аминокислота. Теоретическая величина описана в ().
- Анализ массы: ЖХ-ESI-MC m/z=1141 [М+1]+ (теоретическая величина = 1140,5).
- Анализ аминокислотной последовательности. Подтверждается последовательность аминокислотных остатков от Met в позиции 2 от N-конца до Leu в С-конце.
5. Промышленная применимость
Пептиды по настоящему изобретению применимы в качестве активного ингредиента, включенного в лекарственное средство для иммунотерапии рака.
Перечень последовательностей в исходном тексте
SEQ ID NO:1 - производное пептида
SEQ ID NO:2 - производное пептида
SEQ ID NO:3 - производное пептида
SEQ ID NO:4 - производное пептида
SEQ ID NO:5 - хелперный синтетический пептид.
Claims (17)
1. Соединение формулы (1)
где X представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток;
каждый из Y и Z независимо представляют собой простую связь;
R1 представляет собой водород;
R2 представляет собой гидроксил;
R3 представляет собой водород, амино, C1-6 алкилкарбониламино, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси и амино;
R4 представляет собой карбокси или группу формулы (2)
где W представляет собой аминокислотный остаток;
m равен 1 и
n равен целому числу 0-1, при условии, что, когда n равен 0, R3 представляет собой водород;
или его фармацевтически приемлемая соль.
где X представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток;
каждый из Y и Z независимо представляют собой простую связь;
R1 представляет собой водород;
R2 представляет собой гидроксил;
R3 представляет собой водород, амино, C1-6 алкилкарбониламино, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси и амино;
R4 представляет собой карбокси или группу формулы (2)
где W представляет собой аминокислотный остаток;
m равен 1 и
n равен целому числу 0-1, при условии, что, когда n равен 0, R3 представляет собой водород;
или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по п.2 или его фармацевтически приемлемая соль,
где R3 представляет собой водород, и R4 представляет собой карбокси.
где R3 представляет собой водород, и R4 представляет собой карбокси.
5. Соединение формулы (1')
где X' представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток,
R1' представляет собой водород;
R2' представляет собой гидроксил;
R3' представляет собой амино, C1-6 алкилкарбониламино, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси и амино; и
R4' представляет собой карбокси;
или его фармацевтически приемлемая соль.
где X' представляет собой тирозиновый остаток или метиониновый остаток,
R1' представляет собой водород;
R2' представляет собой гидроксил;
R3' представляет собой амино, C1-6 алкилкарбониламино, замещенный 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из карбокси и амино; и
R4' представляет собой карбокси;
или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Антитело, которое специфически связывается с соединением по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой солью.
9. Антигенпредставляющая клетка, которая представляет комплекс соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли и антигена HLA-A24.
10. Способ индукции ЦТЛ соединением по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой солью.
11. Способ по п.10, в котором ЦТЛ узнает комплекс соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли и антигена HLA-A24.
12. Способ по п.10, в котором ЦТЛ узнает комплекс пептида SEQ ID NO: 1 и антигена HLA-A24.
13. Фармацевтическая композиция для индукции ЦТЛ in vivo, включающая эффективное количество соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль или антигенпредставляющие клетки по п.9 вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
14. Фармацевтическая композиция по п.13, которую используют в качестве противораковой вакцины.
15. Применение соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли или антигенпредставляющих клеток по п.9 для получения противораковой вакцины.
16. Лекарственное средство для иммунотерапии рака, включающее в качестве активного ингредиента эффективное количество соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль или антигенпредставляющие клетки по п.9.
17. Способ лечения или предупреждения рака, включающий введение пациенту, положительному на HLA-A24 и положительному на WT1, нуждающемуся в лечении или предупреждении рака, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли, или антигенпредставляющих клеток по п.9.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005346577 | 2005-11-30 | ||
JP2005-346577 | 2005-11-30 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008126305A RU2008126305A (ru) | 2010-01-10 |
RU2424247C2 true RU2424247C2 (ru) | 2011-07-20 |
Family
ID=38092236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008126305/04A RU2424247C2 (ru) | 2005-11-30 | 2006-11-29 | Пептид, индуцирующий цитотоксические т-клетки (цтл), способ индукции цтл, антитело, связывающееся с этим пептидом, применение пептида в фармацевтической композиции и для лечения или предупреждения рака, антигенпредставляющая клетка |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7939627B2 (ru) |
EP (1) | EP1961761B1 (ru) |
JP (4) | JP4394724B2 (ru) |
KR (1) | KR101385805B1 (ru) |
CN (2) | CN105315347A (ru) |
AU (1) | AU2006319892B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0619255B8 (ru) |
CA (1) | CA2631292C (ru) |
DE (1) | DE602006017880D1 (ru) |
DK (1) | DK1961761T3 (ru) |
ES (1) | ES2352855T3 (ru) |
HK (2) | HK1122819A1 (ru) |
PL (1) | PL1961761T3 (ru) |
PT (1) | PT1961761E (ru) |
RU (1) | RU2424247C2 (ru) |
SI (1) | SI1961761T1 (ru) |
TW (1) | TWI372152B (ru) |
WO (1) | WO2007063903A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2644677C2 (ru) * | 2012-12-13 | 2018-02-13 | Рупрехт-Карлс-Университэт Гейдельберг | Мсн-специфичные пептиды со смещенной рамкой считывания (псрс) для предотвращения и лечения рака |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100513563C (zh) | 2003-11-05 | 2009-07-15 | 株式会社国际癌症免疫研究所 | Wt1衍生的hla-dr-结合抗原肽 |
EP2565201B1 (en) | 2005-10-17 | 2014-11-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same |
JP4394724B2 (ja) | 2005-11-30 | 2010-01-06 | 株式会社癌免疫研究所 | 新規ペプチド化合物 |
EP3834836A1 (en) | 2006-04-10 | 2021-06-16 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and uses thereof |
DK2119778T3 (en) | 2007-02-27 | 2016-01-25 | Int Inst Cancer Immunology Inc | A process for the activation of the helper T cell, and composition for use in this process |
JP2011016751A (ja) * | 2009-07-08 | 2011-01-27 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 光学活性3−アミノピペリジン−1−カルボキシレート化合物の製造方法およびその製造方法に用いられる中間体 |
EP2552478B1 (en) | 2010-03-31 | 2016-12-21 | Stabilitech Ltd. | Excipients for stabilising viral particles |
GB2499480A (en) | 2010-03-31 | 2013-08-21 | Stabilitech Ltd | Method for preserving alum adjuvants and alum-adjuvanted vaccines |
JP5960120B2 (ja) | 2010-03-31 | 2016-08-02 | スタビリテック リミテッド | ウイルス粒子の安定化 |
KR20140009168A (ko) | 2010-10-05 | 2014-01-22 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 헬퍼 t 세포의 활성화 방법 |
GB201117233D0 (en) | 2011-10-05 | 2011-11-16 | Stabilitech Ltd | Stabilisation of polypeptides |
US9539299B2 (en) * | 2011-10-27 | 2017-01-10 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Combination therapy with WT1 peptide vaccine and temozolomide |
CA2861206C (en) | 2012-01-13 | 2021-07-06 | Richard J. O'reilly | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
EP2868325B1 (en) | 2012-07-02 | 2017-11-01 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Transdermal cancer antigen peptide preparation |
MX2015007745A (es) | 2012-12-17 | 2015-12-15 | Otsuka Pharma Co Ltd | Metodo para activar la celula t auxiliar. |
US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
CN105377291B (zh) | 2013-01-15 | 2019-04-02 | 纪念斯隆凯特林癌症中心 | 免疫原性wt-1肽和其使用方法 |
CN103961702B (zh) | 2013-02-05 | 2019-04-09 | 日东电工株式会社 | 粘膜给予用wt1肽癌症疫苗组合物 |
US10071051B2 (en) | 2013-02-05 | 2018-09-11 | Nitto Denko Corporation | WT1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration |
CA2841014A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-05 | Nitto Denko Corporation | Tape preparation of wt1 peptide cancer vaccine for transdermal administration |
KR20140100419A (ko) | 2013-02-05 | 2014-08-14 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | 경피 투여용 wt1 펩티드 암 백신 조성물 |
MX2015011257A (es) * | 2013-03-08 | 2015-11-16 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | Peptido novedoso que tiene 5 epitopos de linfocitos t citotoxicos enlazados. |
US9663563B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-05-30 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Aqueous liquid composition |
CN105308063B (zh) * | 2013-03-29 | 2019-11-08 | 大日本住友制药株式会社 | Wt1抗原肽缀合物疫苗 |
WO2014157704A1 (ja) | 2013-03-29 | 2014-10-02 | 大日本住友製薬株式会社 | Erap1によるトリミング機能をきっかけとしたコンジュゲートワクチン |
MY179119A (en) | 2013-10-21 | 2020-10-28 | Taiho Pharmaceutical Co Ltd | Novel peptide having 4 linked ctl epitopes |
GB201406569D0 (en) | 2014-04-11 | 2014-05-28 | Stabilitech Ltd | Vaccine compositions |
CN106687129B (zh) | 2014-09-27 | 2021-07-20 | 大日本住友制药株式会社 | 注射用药物组合物 |
JP6671141B2 (ja) * | 2014-10-21 | 2020-03-25 | 大日本住友製薬株式会社 | 懸濁液剤 |
JP6699013B2 (ja) * | 2014-12-25 | 2020-05-27 | 国立大学法人三重大学 | Wt1由来ペプチド認識抗体 |
EP3549957A4 (en) | 2016-11-30 | 2020-08-05 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | WT1-HELPER PEPTIDE AND COMBINATION OF THE SAYING PEPTIDE AND A CANCER ANTIGEN PEPTIDE CONJUGATE |
JPWO2018181648A1 (ja) | 2017-03-30 | 2020-02-13 | 大日本住友製薬株式会社 | Wt1癌抗原ペプチドおよびこれを含むペプチドコンジュゲート体 |
GB2562241B (en) | 2017-05-08 | 2022-04-06 | Stabilitech Biopharma Ltd | Vaccine compositions |
MX2021003660A (es) | 2018-09-28 | 2021-05-28 | Sumitomo Pharma Co Ltd | Composicion inyectable. |
TW202027777A (zh) | 2018-10-05 | 2020-08-01 | 日商癌免疫研究所股份有限公司 | 良性腫瘤之預防或治療藥 |
US20220144889A1 (en) * | 2019-02-13 | 2022-05-12 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Hemiasterlin Derivative Having Cysteine Residue |
WO2020204172A1 (ja) | 2019-04-05 | 2020-10-08 | 大日本住友製薬株式会社 | 水溶性アジュバント |
AU2020255935A1 (en) | 2019-04-05 | 2021-12-02 | Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Water soluble adjuvant and composition containing same |
EP4151227A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-03-22 | Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Pharmaceutical composition for treating cancer |
JPWO2023017836A1 (ru) | 2021-08-12 | 2023-02-16 |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5858358A (en) * | 1992-04-07 | 1999-01-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
US6297041B1 (en) * | 1992-03-11 | 2001-10-02 | Institute Of Virology, Slovak Academy Of Sciences | MN gene and protein |
US6309642B1 (en) * | 1997-04-28 | 2001-10-30 | The Research And Development Institute, Inc. | Peptides which mimic candida carbohydrate epitopes and their use in a vaccine |
US5858682A (en) * | 1996-08-02 | 1999-01-12 | Pharmingen | E2A/pbx1 fusion protein specific monoclonal antibodies |
JP4422903B2 (ja) * | 1998-07-31 | 2010-03-03 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌抑制遺伝子wt1の産物に基づく癌抗原 |
AU6407899A (en) | 1998-09-30 | 2000-04-17 | Corixa Corporation | Compositions and methods for wt1 specific immunotherapy |
GB9823897D0 (en) | 1998-11-02 | 1998-12-30 | Imp College Innovations Ltd | Immunotherapeutic methods and molecules |
US7534605B2 (en) * | 1999-06-08 | 2009-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | CD44 polypeptides, polynucleotides encoding same, antibodies directed thereagainst and method of using same for diagnosing and treating inflammatory diseases |
US20040097703A1 (en) | 2001-03-22 | 2004-05-20 | Haruo Sugiyama | Wt1 modified peptide |
RU2322451C2 (ru) * | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
WO2003028757A1 (fr) | 2001-09-28 | 2003-04-10 | Haruo Sugiyama | Nouvelle methode pour induire des lymphocytes t specifiques d'antigenes |
JPWO2003028758A1 (ja) * | 2001-09-28 | 2005-01-13 | 治夫 杉山 | 抗原特異的t細胞の誘導方法 |
JP4365784B2 (ja) * | 2002-06-12 | 2009-11-18 | 株式会社癌免疫研究所 | Hla−a24拘束性癌抗原ペプチド |
WO2004024175A1 (ja) | 2002-09-12 | 2004-03-25 | Haruo Sugiyama | 癌抗原ペプチド製剤 |
AU2003264514A1 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Wt1 substitution peptides |
WO2004063924A2 (en) * | 2003-01-13 | 2004-07-29 | Sierra Wireless, Inc. | Host extensible wireless application interface |
KR101399678B1 (ko) * | 2003-01-15 | 2014-05-27 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 이량체화 펩티드 |
KR101292971B1 (ko) * | 2003-06-27 | 2013-08-12 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | Wt1 백신 적응 환자의 선택 방법 |
CN100513563C (zh) | 2003-11-05 | 2009-07-15 | 株式会社国际癌症免疫研究所 | Wt1衍生的hla-dr-结合抗原肽 |
EP1703887A4 (en) * | 2003-12-31 | 2009-10-21 | Univ Rochester | IMMUNOGENIC POLYPEPTIDES AND CONJUGATES THAT CAN INDUCE ANTIBODIES AGAINST PATHOGENIC AGENTS AND USES THEREOF |
US7622119B2 (en) | 2004-03-31 | 2009-11-24 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Cancer antigen peptides derived from WT1 |
US7241580B2 (en) * | 2004-06-08 | 2007-07-10 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Immunoaffinity chromatography using epitope tags to polyol-responsive monoclonal antibodies |
JP4394724B2 (ja) * | 2005-11-30 | 2010-01-06 | 株式会社癌免疫研究所 | 新規ペプチド化合物 |
-
2006
- 2006-11-29 JP JP2007547975A patent/JP4394724B2/ja active Active
- 2006-11-29 KR KR1020087015751A patent/KR101385805B1/ko active IP Right Grant
- 2006-11-29 AU AU2006319892A patent/AU2006319892B2/en active Active
- 2006-11-29 PT PT06833631T patent/PT1961761E/pt unknown
- 2006-11-29 CA CA2631292A patent/CA2631292C/en active Active
- 2006-11-29 ES ES06833631T patent/ES2352855T3/es active Active
- 2006-11-29 DK DK06833631.2T patent/DK1961761T3/da active
- 2006-11-29 BR BRPI0619255A patent/BRPI0619255B8/pt active IP Right Grant
- 2006-11-29 US US12/095,418 patent/US7939627B2/en active Active
- 2006-11-29 WO PCT/JP2006/323827 patent/WO2007063903A1/ja active Application Filing
- 2006-11-29 CN CN201510909871.XA patent/CN105315347A/zh active Pending
- 2006-11-29 EP EP06833631A patent/EP1961761B1/en active Active
- 2006-11-29 CN CNA2006800519144A patent/CN101336249A/zh active Pending
- 2006-11-29 RU RU2008126305/04A patent/RU2424247C2/ru active
- 2006-11-29 SI SI200630824T patent/SI1961761T1/sl unknown
- 2006-11-29 PL PL06833631T patent/PL1961761T3/pl unknown
- 2006-11-29 DE DE602006017880T patent/DE602006017880D1/de active Active
- 2006-11-30 TW TW095144507A patent/TWI372152B/zh active
-
2008
- 2008-12-19 HK HK08113820.1A patent/HK1122819A1/xx unknown
-
2009
- 2009-08-31 JP JP2009200003A patent/JP5049323B2/ja active Active
-
2011
- 2011-03-22 US US13/053,996 patent/US8575308B2/en active Active
-
2012
- 2012-03-29 JP JP2012077513A patent/JP5597668B2/ja active Active
-
2013
- 2013-09-10 US US14/022,413 patent/US9273148B2/en active Active
-
2014
- 2014-01-31 JP JP2014017168A patent/JP5800928B2/ja active Active
-
2016
- 2016-02-26 US US15/054,805 patent/US9765114B2/en active Active
- 2016-08-02 HK HK16109195.6A patent/HK1221230A1/zh unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2644677C2 (ru) * | 2012-12-13 | 2018-02-13 | Рупрехт-Карлс-Университэт Гейдельберг | Мсн-специфичные пептиды со смещенной рамкой считывания (псрс) для предотвращения и лечения рака |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2424247C2 (ru) | Пептид, индуцирующий цитотоксические т-клетки (цтл), способ индукции цтл, антитело, связывающееся с этим пептидом, применение пептида в фармацевтической композиции и для лечения или предупреждения рака, антигенпредставляющая клетка | |
RU2668560C2 (ru) | Конъюгированная вакцина на основе пептида антигена wt1 | |
EP1548028B1 (en) | Substituted type peptides of wt1 | |
KR20120054644A (ko) | 이량체화 펩티드 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20160606 |