RU2410427C2 - Вирус собачьего гриппа, композиции, содержащие этот вирус, и способы их применения - Google Patents
Вирус собачьего гриппа, композиции, содержащие этот вирус, и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2410427C2 RU2410427C2 RU2008119438/10A RU2008119438A RU2410427C2 RU 2410427 C2 RU2410427 C2 RU 2410427C2 RU 2008119438/10 A RU2008119438/10 A RU 2008119438/10A RU 2008119438 A RU2008119438 A RU 2008119438A RU 2410427 C2 RU2410427 C2 RU 2410427C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- sequence
- protein
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims abstract description 72
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 241000282465 Canis Species 0.000 title claims abstract description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 128
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 126
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 82
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 205
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 39
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 39
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 39
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 29
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 28
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 23
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 22
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 22
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 15
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 claims description 14
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 claims description 14
- 101710102873 Polymerase basic protein 2 Proteins 0.000 claims description 9
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 9
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 claims description 6
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037516 Protein polybromo-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710085035 RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 claims description 6
- 241000252869 H3N8 subtype Species 0.000 claims description 2
- 108700032552 influenza virus INS1 Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 24
- 101710199771 Matrix protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 108700010900 influenza virus proteins Proteins 0.000 claims 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 abstract description 25
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 115
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 107
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 93
- 238000000034 method Methods 0.000 description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 9
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 101150069409 CDS gene Proteins 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 5
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- -1 cetyltrimethylammonium salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150080862 NA gene Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000120569 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Species 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 description 2
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 1
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 1
- LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N (-)-epicatechin-3-O-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=CC=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N 0.000 description 1
- OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N 0.000 description 1
- FMGRPEQSMWQKHM-QTNFYWBSSA-N (2s)-2-aminopentanedioic acid;sodium;hydrate Chemical compound O.[Na].OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O FMGRPEQSMWQKHM-QTNFYWBSSA-N 0.000 description 1
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSPQCTGGIANIJZ-UHFFFAOYSA-N 2-[[(3,4-dimethoxyphenyl)-oxomethyl]amino]-4,5,6,7-tetrahydro-1-benzothiophene-3-carboxamide Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)NC1=C(C(N)=O)C(CCCC2)=C2S1 FSPQCTGGIANIJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 4511-42-6 Chemical compound C[C@@H]1OC(=O)[C@H](C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000321096 Adenoides Species 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N Arginine hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 206010003598 Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150104494 CAV1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 description 1
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N ECG Natural products C=1C=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000004467 Infectious Canine Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N Isotheaflavin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C1=C2)=CC(O)=C(O)C1=C(O)C(=O)C=C2C1C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000773 L-serino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241001502481 Meleagrid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N Phlegmanol A-acetat Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(=CC1=2)C=C(O)C(=O)C1=C(O)C(O)=CC=2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 description 1
- 101710151245 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N Theaflavin Natural products C1=CC(C2C(CC3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C(O)C(=O)C2=C1C(C1OC3=CC(O)=CC(O)=C3CC1O)=CC(O)=C2O UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N [(2r)-2-[(3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)C1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N 0.000 description 1
- KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N [(2r,3r)-5,7-dihydroxy-2-[3,4,5-trihydroxy-6-oxo-1-[(2r,3r)-3,5,7-trihydroxy-3,4-dihydro-2h-chromen-2-yl]benzo[7]annulen-8-yl]-3,4-dihydro-2h-chromen-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(O)C=C2O[C@@H]1C1=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=C(C2=C1)[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 210000002534 adenoid Anatomy 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940124691 antibody therapeutics Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000000227 bioadhesive Substances 0.000 description 1
- 229920000229 biodegradable polyester Polymers 0.000 description 1
- 239000004622 biodegradable polyester Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- BOKOVLFWCAFYHP-UHFFFAOYSA-N dihydroxy-methoxy-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound COP(O)(O)=S BOKOVLFWCAFYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000007689 endotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 description 1
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 108010064513 influenza virus polymerase basic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003725 proteoliposome Substances 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000010907 stover Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N sulfurothioic S-acid Chemical compound OS(O)(=O)=S DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N theaflavin Chemical compound C1=C2C([C@H]3OC4=CC(O)=CC(O)=C4C[C@H]3O)=CC(O)=C(O)C2=C(O)C(=O)C=C1[C@@H]1[C@H](O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N 0.000 description 1
- 229940026509 theaflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000014620 theaflavin Nutrition 0.000 description 1
- FJYGFTHLNNSVPY-BBXLVSEPSA-N theaflavin digallate Chemical compound C1=C([C@@H]2[C@@H](CC3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)C=C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(=O)C2=C1C([C@H]1OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]1O)=CC(O)=C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 FJYGFTHLNNSVPY-BBXLVSEPSA-N 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 231100000583 toxicological profile Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241000701366 unidentified nuclear polyhedrosis viruses Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000009421 viral pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/16162—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, а именно к выделенному вирусу собачьего гриппа подтипа H3N8, содержащему белок НА. Также описана композиция, содержащая аттенюированный или инактивированный вирус и выделенные или очищенные белки, НА, NM, NP, M1, NS1, PA, PB1 и РВ2 и их фрагменты. Изобретение может быть использовано в области ветеринарии, а именно предоставление вируса гриппа, вызывающего инфекции у собак. 8 н. и 8 з.п. ф-лы, 16 ил.
Description
Перекрестная ссылка на родственные патентные заявки
В настоящей патентной заявке испрашивается преимущество предварительной заявки на патент США № 60/727808, поданной 18 октября 2005, и патентной заявки США на изобретение № 11/539123, поданной 5 октября 2006, содержание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области вирусологии, молекулярной биологии и иммунологии. В частности, настоящее изобретение относится к вирусу собачьего гриппа, а также к композициям, содержащим этот вирус, и к способу его использования для индуцирования иммунного ответа у животных.
Предшествующий уровень техники
Вирус гриппа представляет собой РНК-вирус, принадлежащий семейству Orthomyxoviridae. Вирусная РНК состоит из восьми независимых сегментов, которые легко рекомбинируют с сегментами других вирусов гриппа с образованием новых подтипов.
Нуклеопротеин (NP), который является главным компонентом нуклеокапсида, кодируется пятым сегментом. NP и матриксный белок используются для классификации вируса гриппа на группы A, B или C. Поскольку NP является внутренним белком, то он не подвергается давлению отбора иммунной системой хозяина. Этот белок связывается с РНК, является частью транскриптазного комплекса и участвует в ядерно-цитоплазматическом транспорте транспорта вирусной РНК (вРНК).
Нейраминидаза (NM), которая расщепляет α-кето-связь, соединяющую концевую сиаловую кислоту с последующим сахарным остатком и, тем самым, способствует высвобождению вирусного потомства из инфицированных клеток, кодируется шестым сегментом. Были идентифицированы девять подтипов (N1-N9) этого фермента. Все белки этих подтипов имеют две структурных области - “стебель” и “головку”. Все белки N8 имеют 470 аминокислот, из которых первые восемь аминокислот являются в высокой степени консервативными. Следующая область богата гидрофобными аминокислотами и считается, что она представляет собой трансмембранный домен. Следующая 51 аминокислота составляет область “стебля”, а область “головки” начинается с аминокислоты Cys91. Последняя область содержит каталитический участок фермента. Цистеиновые остатки в области “головки” и “стебля” в массе своей высококонсервативны. В этом белке также присутствует 6-8 предполагаемых сайтов N-гликозилирования.
Гемаглютинин (НA), являющийся мембранным гликопротеином, ответственным за адсорбцию вируса в клетку-хозяина, представляет собой главный антиген, против которого направлены нейтрализующие антитела. Главной причиной возникновения эпидемий гриппа является разнообразие антигенных свойств вирусов гриппа. Гемаглютинин кодируется четвертым сегментом. Было идентифицировано шестнадцать различных подтипов (H1-H16) этого белка. HA имеет сигнальный пептид, состоящий из 16 аминокислот, и два полипептида (HAl и HA2), связанные дисульфидными мостиками. HAl имеет амино-конец, а HA2 имеет карбоксильный конец. Молекула HA заякоривается на вирусной мембране гидрофобной областью в HA2. Цистеиновые остатки в массе своей являются высококонсервативными. Имеются также шесть предполагаемых сайтов гликозилирования, которые позволяют вирусу маскировать свои антигенные сайты (Skehel et al., PNAS USA 81: 1779 (1984)).
Другие белки включают матриксные белки (M или Ml и M2), неструктурные белки (NS или NSl и NS2), и белки PA, PBl и PB2. Белок Ml представляет собой главный компонент вириона, который связывается с плазматической мембраной инфицированных клеток посредством двух гидрофобных областей, присутствующих у N-конца белка, а M2 представляет собой ионный канал, то есть интегральный мембранный белок. Белок NSl присутствует в ядре и влияет на клеточный транспорт РНК, сплайсинг и трансляцию. Белок NS2 присутствует в ядре и цитоплазме, но его функция остается неизвестной. Белок PA представляет собой транскриптазу и может обладать протеазной активностью; белок PBl участвует в элогнации транскрипта; а белок PB2 связывается с кэпированными нуклеотидами в процесс транскрипции.
Вообще говоря, грипп представляет собой респираторное заболевание, поражающее человека, свиней, лошадей и домашнюю птицу, и лечение этого заболевания связано с огромными материальными затратами (Wright et al., Orthomyxoviruses. In: Fields Virology. Knipe et al., eds. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2001. pp.1533-1579). Вирус гриппа известен своей продолжающейся генетической и антигенной вариабельностью, что является серьезным препятствием на пути эффективной борьбы с указанной вирусной инфекцией (Wright et al. (2001), см. выше; Webster et al., Microbiol. Rev. 56: 152-179 (1992)). Что касается предупреждения эпидемий и пандемий, то главной проблемой является появление новых подтипов этого вируса, обусловленное его генетической рекомбинацией или межвидовой передачей (Wright et al. (2001), см. выше).
Недавно были зарегистрированы вспышки гриппа у животных таких видов, как, например, кошки и собаки, то есть тех, которые ранее не являлись носителями вируса гриппа (Keawcharoen et al., Emerg. Infect. Dis. 10: 2189-2191 (2004); Crawford et al., Science 310: 398-485 (October 21, 2005; published online September 29, 2005); Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus from racing greyhounds with fatal hemorrhagic pneumonia. Tn: Proceedings of the. 47th Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians, Greensboro, NC, October 2005. p.158; and Yoon et al., Emerg. Infect. Dis. 11(12): 1974-1976 (December 2005)). Поэтому круг хозяев вируса гриппа постоянно расширяется.
Вспышки респираторного заболевания у охотничьих гончих собак породы грейхаунд, вызываемые вирусом гриппа, были зарегистрированы во Флориде в 2004, в восточной и западной Айове в апреле 2005 и в Техасе в 2005. Это заболевание характеризуется быстрым повышением температуры и кашлем, учащенным дыханием и носовыми кровотечениями. Заболеваемость собак, находящихся на огороженных территориях беговых дорожек в Айове, составляла почти 100%, хотя смертность от этого заболевания составляла менее чем 5%. При том что большой процент заболевших собак выздоравливал, многие из них погибали от геморрагической пневмонии. Терапевтическое введение антибиотиков широкого спектра приводило к снижению тяжести заболевания, но не могло обеспечить его полное излечение.
В соответствии с этим, целью настоящего изобретения является предоставление вируса гриппа, вызывающего инфекции у собак. Другой целью настоящего изобретения является предоставление материалов и способов индуцирования иммунного ответа против вируса гриппа у собак. Эти и другие цели и преимущества, а также дополнительные отличительные признаки настоящего изобретения будут более очевидны из нижеследующего подробного описания изобретения.
Описание сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенному вирусу собачьего гриппа подтипа H3N8, содержащему белок HA, имеющий ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ SEQ ID NO:4 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что аминокислоты в положениях 94 и 233 идентичны аминокислотам SEQ ID NO:4. В частности, настоящее изобретение относится к выделенному вирусу собачьего гриппа подтипа H3N8, депонированному в Американской коллекции типовых культур (Manassas, VA) 29 июня 2006, в качестве патентного депозита № PTA-7694. В соответствии с этим, настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей аттенюированный вирус, а также к композиции, содержащей инактивированный вирус.
Настоящее изобретение также относится к выделенным или очищенным белкам. В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку HA, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:4 в положениях аминокислот 94 и 233, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положениях 94 или 233 последовательности SEQ ID NO:4.
В другом своем варианте, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку NM, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:2, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:4 в положениях аминокислот 68 и 134, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 68 или 134 последовательности SEQ ID NO:2.
В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку NР, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:6, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:6 в положении аминокислоты 402, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 402 последовательности SEQ ID NO:6.
В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку M1, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:8, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:8 в положении аминокислоты 111, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 111 последовательности SEQ ID NO:8.
Настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку NSl, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку РА, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 98% (или 99%) идентичную последовательности SEQ ID NO:12, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:12 в положении аминокислот 233, 256, 327 и 561, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положениях 233, 256, 327 или 561 последовательности SEQ ID NO:12.
Настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку РВ1, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:14, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:14 в положениях аминокислот 200 и 213, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 200 или 213 последовательности SEQ ID NO:14.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку РВ2, который (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:16, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:16 в положениях аминокислот 107, 221, 292 или 661, или к фрагменту белка по п.п.(i) или (ii), где указанный фрагмент содержит, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положениях 107, 221, 292 или 661 последовательности SEQ ID NO:16.
В соответствии с вышеуказанным, настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей вышеописанный белок, такой как HA или NM, или его фрагмент в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа у животного, и биологически приемлемый носитель.
В соответствии с вышеуказанным, настоящее изобретение также относится к способу индуцирования иммунного ответа против вируса собачьего гриппа у животного. Этот способ включает введение указанному животному композиции, содержащей белок или его фрагмент.
Настоящее изобретение также относится к выделенной или очищенной нуклеиновой кислоте, кодирующей вышеописанный белок или его фрагмент и являющейся, но необязательно, частью вектора, а также к композиции, содержащей указанную выделенную или очищенную нуклеиновую кислоту, экспрессирующую белок, такой как НА или NМ, или его фрагмент в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа у животного, и биологически приемлемый носитель.
В соответствии с этим, настоящее изобретение также относится к другому способу индуцирования иммунного ответа против вируса собачьего гриппа у животного. Этот способ включает введение указанному животному композиции, содержащей нуклеиновую кислоту.
Краткое описание графического материала
На фиг.1 представлена неполная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:1; см. также GenBank регистрационный № DQ146420) кодирующей генной последовательности домена (CDS) белка NM вируса собачьего гриппа подтипа H3N8. В соответствии с общепринятым соглашением эта последовательность представлена в направлении слева направо и сверху вниз.
На фиг.2 представлена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:2; см. также GenBank регистрационный № DQ146420), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:1. В соответствии с общепринятым соглашением эта последовательность представлена однобуквенными кодами в направлении слева направо и сверху вниз.
На фиг.3 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:3; см. также GenBank регистрационный № DQ146419) CDS-гена белка HA вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.4 представлена аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:4; см. также GenBank регистрационный № DQ146419), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:3.
На фиг.5 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:5) CDS-гена белка NP вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.6 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:6), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:5.
На фиг.7 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:7) CDS-гена белка М1 вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.8 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:8), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:7.
На фиг.9 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:9) CDS-гена белка NS1 вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.10 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:10), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:9.
На фиг.11 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:11) CDS-гена белка РА вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.12 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:12), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:11.
На фиг.13 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:13) CDS-гена белка РВ1 вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.14 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:14), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:13.
На фиг.15 представлена полноразмерная нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO:15) CDS-гена белка РВ2 вируса собачьего гриппа подтипа H3N8.
На фиг.16 представлена выведенная аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:16), кодируемая последовательностью SEQ ID NO:15.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение основано на обнаружении штамма вируса собачьего гриппа. Этот штамм был выделен у собак породы грейхаунд в восточной и западной Айове. Этот штамм был классифицирован как подтип H3N8 и обозначен A/canine/Iowa/13628/2005. В соответствии с этим, настоящее изобретение относится к вирусу, содержащему белок HA, имеющий SEQ ID NO:4 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что аминокислоты в положениях 94 и 233 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:4. Такой вирус может также включать белок NМ, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:2, при условии, что указанные аминокислоты в положениях 68 и 134 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:2. Этот вирус, содержащий вышеупомянутый белок НА, отдельно или в комбинации с вышеупомянутым белком NM, может также содержать, по меньшей мере, один из нижеследующих белков, таких как белок NP, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:6, при условии, что аминокислота в положении 402 идентична аминокислоте в данном положении последовательности в SEQ ID NO:6; белок Ml, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:8, при условии, что аминокислота в положении 111 идентична аминокислоте в данном положении последовательности SEQ ID NO:8; белок NSl, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10; белок PA, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 98% (или 99%) идентична последовательности SEQ ID NO:12, при условии, что аминокислоты в положениях 233, 256, 327 и 561 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ BD NO:12; белок PBl, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:14, при условии, что аминокислоты в положениях 200 и 213 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:14; и/или белок PB2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:16, при условии, что аминокислоты в положениях 107, 221, 292, и 661 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:16. В частности, настоящее изобретение относится к выделенному вирусу собачьего гриппа подтипа H3N8, депонированному в Американской коллекции типовых культур (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209) США, 29 июня 2006, в качестве патентного депозита № PTA-7694. Вирус гриппа может быть осажден путем проведения одной или нескольких стадий снижения растворимости в водной среде, проводимых в присутствии 5 мас.% полиэтиленгликоля (ПЭГ), имеющего молекулярную массу 3000-20000, или другого линейного волокнистого незаряженного полимера в количестве, эквивалентном солюбилизирующей способности ПЭГ; отделения нерастворимой фракции от растворимой фракции, и выделения вируса из одной из этих фракций (см., например, патент США № 3989818). При этом предпочтительно, чтобы температура не превышала 35°С, pH составлял в пределах от 6 до 9, а ионная сила водной среды была ниже точки высаливания для вируса. Концентрация вируса в водной среде до придания ему нерастворимости соответствует титру гемаглютинации, составляющему, по меньшей мере, 1:32. Были получены агрегированные вирусные частицы, которые обладали лучшим антигенным действием, что, очевидно, обусловлено медленным высвобождением вирусных частиц после вакцинации. Однако, если необходимо получить неагрегированные или менее агрегированные частицы, то они могут быть подвергнуты диссоциации любым подходящим методом, таким как обработка ультразвуком.
Этот вирус может быть аттенюирован путем его пропускания через клеточную систему до тех пор, пока он не утратит свою способность индуцировать заболевание, но будет полностью сохранять свои иммуногенные свойства. Так, например, этот вирус может быть подвергнут серийному разведению в культуре клеток, выделенных у собак или у других подходящих животных, при температуре примерно 37°С. После каждого пассажа вирус собирают из одной культуры и инокулируют в среду, содержащую свежую клеточную культуру, в соответствии с методами, известными специалистам. Так, например, вирус может быть собран из жидкой тканевой клеточной культуры и/или клеток. Во время сбора клеточная культура может быть, но необязательно, подвергнута обработке ультразвуком для стимуляции высвобождения вируса. См., например, патенты США №№ 5698433 и 6455298.
Если это необходимо, то штамм вируса гриппа может быть, по меньшей мере, один раз пассирован в аллантоисный мешочек оплодотворенных яиц, таких как куриные яйца, в присутствии сыворотки с получением вируса, резистентного к воздействию сыворотки (см., например, патент США № 3953592; Kilboume et al., J. Exp. Med. Il 1: 387 (1960); Kilboume, Science 160: 74-75 (April 1968); и Laver et al., Virology 30: 493-501 (1966)). Высокоэффективная вакцина против гриппа, обладающая низкой пирогенностью и низкой эндотоксичностью, может быть получена путем последовательной обработки концентрированной аллантоисной жидкости, содержащей аттенюированный вирус, бутилацетатом и этилацетатом, с последующим быстрым выпариванием (см., например, патент США № 4000257). Такой вирус может быть введен интраназально в качестве вакцины.
После инокуляции хозяину этот вирус начинает размножаться до определенного уровня, а поэтому для заражения требуется лишь небольшое количества исходного инокулята. Этот вирус должен быть безвредным, а поэтому инфицирование этим вирусом при его контакте с восприимчивым организмом должно быть минимальным.
Альтернативно, этот вирус может быть инактивирован путем блокирования его репликации и вирулентности. Это может быть достигнуто химическими или физическими методами. Химическая инактивация может быть осуществлена путем обработки этого вируса ферментом, формальдегидом, β-пропиолактоном или его производным, этиленимином или его производным, органическим растворителем (например, галогенированным углеводородом) и/или детергентом (например, твином®, тритоном Х®, дезоксихолатом натрия, сульфобетаином или солями цетилтриметиламмония). Если это необходимо, то химически активированные композиции могут быть нейтрализованы. Так, например, если для дезактивации композиции используется формальдегид, то такая композиция может быть нейтрализована тиосульфатом. Затем, если это необходимо, рН может быть доведен до значения примерно 7. Альтернативно, этот вирус может быть экстрагирован смесью эфира и этанола, водные и органические фазы могут быть разделены, и остаточный эфир может быть удален из вирусной суспензии при пониженном давлении (см., например, патент США № 4431633). Физическая инактивация может быть преимущественно осуществлена путем облучения вируса излучением высокой энергии, таким как ультрафиолетовое излучение, γ-излучение или рентгеновское излучение. Для заражения инактивированными формами требуются относительно большие количества инокулята, а следовательно, и большие количества антигенного материала, который должен быть получен, протестирован и классифицирован.
В соответствии с вышеуказанным, настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей аттенюированный или инактивированный вирус. Этот вирус должен присутствовать в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа, и желательно обеспечивать защиту от заражения. Обычно, в такую композицию, особенно, если она содержит инактивированный вирус, добавляют адъювант, такой как твин®, спан®, полный адъювант Фрейнда, сапонин, бактерия Corynebacterium parvum (Coparvax®), фосфат алюминия, гидроксид алюминия или их смесь. Для стабилизации композиции в нее могут быть добавлены гидролизаты белка и/или аминокислоты (см., например, патент США № 4537769). Альтернативно, указанная композиция может быть приготовлена в виде эмульсии “масло в воде” с использованием масел, таких как Marcol и/или Arlacel.
Могут быть также получены рекомбинантные штаммы вируса гриппа, такие как штаммы, продуцированные комбинацией “сверх-аттенюированного” родительского штамма (то есть штамма, для аттенюирования которого необходимо значительное большее число пассажей, чем это обычно требуется для устранения патогенности) вируса гриппа A, например A2, с вирулентным штаммом вируса гриппа, описанного в настоящей заявке (см., например, патент США № 3991179; см. также патенты США №№ 4009258; 4278662; 4318903; 4338296 и 4693893). Рекомбинантный штамм, предпочтительно, обладает такой же способностью к росту, как
сверхаттенюированный штамм, и, при этом, он обладает антигенными свойствами вирулентного штамма, например имеет белки HA и NM. Отбор штаммов вируса гриппа для получения вакцины описан в патенте США № 5162112. Рекомбинантные штаммы могут быть получены в виде композиций для индуцирования иммунного ответа.
Для стабилизации композиции вируса гриппа, которая позволяла бы хранить эту композицию в холодильнике, могут быть использованы сахароза, моногидрохлорид аргининa, мононатрийгидрат глутаминовой кислоты и гидролизат желатина. См., например, публикацию заявки на патент США № 2006/0110406.
В соответствии с вышеуказанным, настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку HA. Белок HA имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, либо он происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:4 в положениях аминокислот 94 или 233. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка НА, содержащему, по меньшей мере, девять (например, 9, 12, 15, 18, 21 или 24) смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 94 или 233 последовательности SEQ ID NO:4.
Настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку NМ. Белок NМ имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:2, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:2 в положениях аминокислот 68 и 134. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка NМ, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 68 или 134 последовательности SEQ ID NO:2.
Настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку NР. Белок NР имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:6, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:6 в положении аминокислоты 402. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка NР, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 402 последовательности SEQ ID NO:6.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку М1. Белок М1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:8, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:8 в положении аминокислоты 111. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка М1, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 111 последовательности SEQ ID NO:8.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к выделенному или очищенному белку NSl, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку РА. Белок РА имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 98% (или 99%) идентична последовательности SEQ ID NO:12, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:12 в положениях аминокислот 233, 256, 327 и 561. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка РА, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положениях 233, 256, 327 или 561 последовательности SEQ ID NO:12.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку РВ1. Белок РВ1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 14, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:14 в положениях аминокислот 200 и 213. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка РВ1, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 200 или 213 последовательности SEQ ID NO:14.
Кроме того, настоящее изобретение относится к выделенному или очищенному белку РВ2. Белок РВ2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, либо происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:16, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:16 в положениях аминокислот 107, 221, 292 и 661. Настоящее изобретение также относится к фрагменту белка РВ2, содержащему, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положениях 107, 221, 292 или 661 последовательности SEQ ID NO:16.
Вышеуказанные белки и их фрагменты могут быть очищены (в комбинации с химической или физической фрагментацией для получения фрагментов) или синтезированы методами, известными специалистам. См., например, Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides 2: 46, Academic Press, NY (1973), для твердофазного синтеза белков, и Schroder et al., The Peptides, vol.1, Academic Press, NY (1965), для синтеза белков в жидкой фазе. Эти методы могут быть осуществлены в соответствии с инструкциями производителей с использованием автоматизированных систем. Указанные белки и фрагменты могут быть продуцированы и выделены в терапевтических количествах рекомбинантными методами.
Альтернативно, белки, а в частности HA и NM, могут быть выделены путем селективной солюбилизации с сохранением остаточных субвирусных частиц, состоящих из интактной липидной/белковой мембраны, включающей все другие, не играющие важной роли вирусные компоненты. Различия в размерах/плотности солюбилизированных белков и остаточных субвирусных частиц позволяют дифференцировать эти частицы по различию их физических свойств методом градиентного центрифугирования и фракционирования, седиментации, хроматографии на молекулярных ситах или осаждения на ультрацентрифуге. Селективная солюбилизация белков HA и NM может быть осуществлена путем обработки вируса катионогенным детергентом (см., например, патент США № 4140762; патент '762). Жидкость, содержащая интактный вирус и полученная от клеточной культуры, может быть обработана ДНК-гидролизующим ферментом путем добавления катионогенного детергента и выделения поверхностных белков антигена (см., например, патент США № 5948410). Эта жидкость может быть подвергнута центрифугированию в несколько стадий, либо вирус может быть фрагментирован в присутствии амфифильного неионогенного детергента с последующей фильтрацией для удаления нежелательных веществ (см., например, патент США № 6048537). Альтернативно, для получения вирусного белка может быть проведена фильтрация на мембранном фильтре и химический гидролиз (см., например, патент США № 4327182). Другие процедуры описаны в патентах США №№ 4064232 и 4057626. Перед обработкой вирус предпочтительно размножить, как описано в патенте '762 (столбец 2, 11.10 и т.д.).
Для идентификации эпитопа вирусного белка, индуцирующего иммунный ответ, может быть проведено картирование, то есть “эпитопное картирование”. Такое картирование включает фрагментацию белка с получением перекрывающихся пептидов (таких как пептиды, содержащие 9, 12, 15, 18, 21 или 24 аминокислоты). Белок может быть фрагментирован протеолитическим ферментом. Затем отдельные пептиды тестируют на их способность связываться с антителом, вырабатываемым нативным белком, или индуцировать активацию Т-клеток или В-клеток. Альтернативно, могут быть отобраны гидрофильные области белка, поскольку гидрофильные остатки часто находятся на поверхности белка, а поэтому они доступны для антитела. Может быть также проведен рентгеновский кристаллографический анализ комплекса “антиген-антитело”. Потенциальные мотивы, связывающиеся с HLA-якорем и представляющие собой пептидные последовательности, которые, как известно, могут связываться с молекулами MHC, могут быть идентифицированы из аминокислотной последовательности белка. Выбранным эпитопом, предпочтительно, является эпитоп, последовательность которого имеет очень небольшое сходство или почти не имеет сходства с последовательностями, широко распространенными у животных, которым вводят композицию, содержащую или экспрессирующую фрагмент белка.
Настоящее изобретение также относится к выделенной или очищенной нуклеиновой кислоте, кодирующей вышеописанный белок или фрагмент и являющейся, но необязательно, частью вектора. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок HA, может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять (9, 12, 15, 18, 21 или 24) смежных аминокислот. Если это необходимо, то может быть получена трехвалентная вакцина на основе белка НА, в которой один из белков HA содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 (см., например, патенты США №№ 5762939 и 6245532; см., например, патент США № 6740325, в котором описана трехвалентная вакцина). Нуклеиновая кислота, кодирующая белок NM, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот (см., например, патент США № 6605457 и публикацию заявки на патент США 2003/0129197); нуклеиновая кислота, кодирующая белок NP может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:5 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот; нуклеиновая кислота, кодирующая белок М1, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:7 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот; нуклеиновая кислота, кодирующая белок NS1, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:9; нуклеиновая кислота, кодирующая белок PА, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:11 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот; нуклеиновая кислота, кодирующая белок PВ1, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:13 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот; а нуклеиновая кислота, кодирующая белок PВ2, может иметь нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:15 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот. Однако для среднего специалиста в данной области очевидно, что из-за вырожденности генетического кода может присутствовать множество других нуклеотидных последовательностей, кодирующих указанные аминокислотные последовательности.
Могут быть синтезированы вышеуказанные нуклеиновые кислоты, которые представляют собой ДНК или РНК и их фрагменты (см., например, Oligonucleotide Synthesis, Gait, ed., 1984). Такие молекулы могут включать неприродные нуклеотиды/основания, кодирующие нужную аминокислотную последовательность. Так, например, эти основания или сахар могут быть метилированы. Кроме того, может быть модифицирован остов молекулы нуклеиновой кислоты, например, фосфортиоатный, метилфосфонатный, метилфосфортиоатный, фосфордитиоатный остов и их комбинации.
Альтернативно, выделенная в РНК может быть обработана обратной транскриптазой с получением гибрида РНК/ДНК, от которого может быть отщеплена РНК, а оставшаяся ДНК может быть обработана с получением дцДНК, имеющей концевую шпилечную структуру, которую обрабатывают нуклеазой, специфичной для одноцепочечной ДНК, в результате чего может быть получена бимолекулярная двухцепочечная копия вирусной РНК (вРНК) (см., например, патент США № 4357421). См., например, публикацию заявки на патент США № 2006/0166321, где описано применение тандемных транскрипционных кластеров для получения вируса гриппа в отсутствии вируса-помощника.
Нуклеиновая кислота является, но необязательно, частью ДНК-вектора, содержащего, по меньшей мере, один промотор, где каждая нуклеотидная последовательность функционально присоединена к промотору и где такие нуклеотидные последовательности могут быть одинаковыми или различными. Помимо промоторов частью ДНК-вектора могут быть и другие регуляторные последовательности, такие как стоп-сигналы и т.п.
Так, например, нуклеиновая кислота может быть введена в подходящий рекомбинантный экспрессионный вектор, такой как вектор, адаптированный для бактерий, таких как E.coli и Salmonella typhi; дрожжей, таких как Saccharomyces cervisiae или Pichia pastoris, или нитчатых грибов, таких как Aspergillus nidulans. Бактерии, дрожжи или грибы могут быть культивированы в непрерывной культуре. Затем полипептид, продуцированный в процессе культивирования, может быть выделен и очищен. Альтернативно, молекула нуклеиновой кислоты может быть введена в Poxviridae (например, в векторы на основе вируса оспы домашней птицы), Herpesviridae (например, в векторы на основе вируса псевдобешенства; в векторы на основе вируса герпеса индеек, в векторы на основе вируса герпеса кошек; в векторы на основе вируса инфекционного ларинготрахеита; и в векторы на основе вируса коровьего герпеса), Adenoviridae (например, в коровий аденовирус (например, вирус серотипа 3), человеческий аденовирус (например, вирус серотипа 4 или 7) и собачий аденовирус (например, вирус серотипа 2; CAV2; см., например, патент США No. 6090393), или в экспрессионный вектор на основе вируса насекомых, такой как рекомбинантный бакуловирус (например, вирус ядерного полиэдроза Autographa californica (AcNPV)), который, в свою очередь, может быть использован для инфицирования восприимчивых культивированных клеток SF9, происходящих от насекомых рода Spodotera frugiperda. Другими вирусными векторами являются вирус коровьей оспы (см., например, патент США № 4722848), аденовирус, аденоподобный вирус, аденоассоциированный вирус, ретровирус и поксвирус (см., например, Hruby, Vet. Parasitol. 29: 281-282 (1988); Uiu, "AIDS Research Reviews," Dekker, Inc., 1991, 1: 403-416), которые могут быть введены путем скарификации кожи или инъекции или, необязательно, в виде липосомной композиции. Другими векторами являются бацилла Кальметта-Герена (BCG; Stover et al, Nature 351: 456-460 (1991)), векторы на основе инактивированного токсина сибирской язвы и т.п. Для экспрессии полипептида в соответствующей конструкции могут быть использованы клетки млекопитающего, такие как клетки яичника китайского хомячка (CHO), и даже клетки растений. Для среднего специалиста в данной области очевидно, что выбор клетки-хозяина зависит от природы посттрансляционного процессинга (например, гликозилирования, укладки и т.п.), который, в свою очередь, может влиять на иммуногенность полипептида и последующие процедуры очистки.
Экспрессия может быть осуществлена в любой подходящей клетке-хозяине, трансформированной/трансфецированной экспрессионным вектором. Примерами подходящих клеток-хозяев являются, но не ограничиваются ими, клетки, описанные выше. Так, например, настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, трансформированной/трансфецированной экспрессионным вектором.
Супернатанты от систем хозяин/вектор, которые секретируют белок или его фрагмент в культуральную среду, могут быть нанесены на матрицу для очистки, такую как аффинная колонка или ионообменная колонка. Для дополнительной очистки рекомбинантного белка или его фрагмента могут быть проведены одна или несколько стадий обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для стабилизации продукта белок или его фрагмент могут быть получены в виде гибридного белка. Это может быть осуществлено путем лигирования полинуклеотидных последовательностей, кодирующих два или более белка (или их фрагментов), с соответствующим экспрессионным вектором с использованием или без использования пептидного линкера. При этом желательно, чтобы рамки считывания полинуклеотидных последовательностей находились в одной и той же фазе, то есть чтобы продуцировался один гибридный белок, сохраняющий биологическую активность каждого из белков-компонентов (или их фрагментов) данного гибрида. Для разделения полученных белков (или их фрагментов) может быть использован пептидный линкер, содержащий от 1 до около 50 аминокислот и обеспечивающий правильную укладку каждого белка (или их фрагмента) в его нативную вторичную, третичную и четвертичную структуры (см., например, Maratea et al., Gene 49: 39-46 (1985); Murphy et al., PNAS USA 83: 8258-8262 (1986); патент США № 4935233; и патент США № 4751180). Критерием при выборе пептидного линкера могут служить такие факторы, как способность принимать гибкую удлиненную конформацию, неспособность образовывать вторичную структуру, которая может взаимодействовать с функциональными аминокислотами на одном или двух белках, и отсутствие гидрофобных или заряженных остатков, которые могут реагировать с одним или двумя белками. В использовании линкеров нет необходимости, если концы указанных присоединяемых белков не содержат главных областей, то есть если эти концы могут быть использованы для разделения функциональных доменов и для предупреждения стерических препятствий. Предпочтительные пептидные линкерные последовательности содержат остатки Gly, Asn и Ser. Могут быть также использованы и другие почти нейтральные остатки, такие как Thr и Ala.
Для усиления экспрессии и/или повышения иммуногенности белка или его фрагмента могут быть выбраны и другие дополнительные аминокислотные последовательности. Так, например, белок или его фрагмент может быть присоединен к тяжелой цепи иммуноглобулина G (IgG) или к белку, связывающемуся с антиген-презентирующей клеткой (AПК), или к белку, связывающемуся с дендритными клетками, такому как лиганд IL-D, GM-CSF, IL-1, TNF, IL-4, CD40L, CTLA4, CD28 или FLT-3. Могут быть применены методы, такие как метод с применением дегидратирующих агентов, например, дициклогексилкарбодиимида (DCCI), или создание связей между сульфгидрильными группами, эпсилон-аминогруппами, карбоксильными группами и т.п. Если это необходимо, то для отделения белка (или его фрагмента) от неприродной(ых) последовательности(ей) в гибридный белок может быть введен рестрикционный сайт. Примером рестрикционных сайтов является последовательность-мишень для протеолитического фермента или метионин, если он отсутствует в белке (или в его фрагменте), поскольку метионин, в свою очередь, отщепляется бромцианом. Такие методы известны специалистам. Белок или его фрагмент может быть модифицирован посредством гликозилирования или другими методами дериватизации (например, посредством ацетилирования или карбоксилирования), которые также хорошо известны специалистам.
Белок (или его фрагмент) может быть экспрессирован in situ из подходящей экспрессионной системы. Для экспрессии белка или его фрагмента, описанных выше, может быть использована любая ДНК-конструкция, которая является эффективной для продуцирования кодируемого белка или его фрагмента в подходящих условиях.
Альтернативно, молекула нуклеиновой кислоты, при ее введении животному в виде “оголенной ДНК”, может функционировать как эффективная экспрессионная система in situ (см., например, Ulmer et al., Science 259: 1745-1749 (1993); и Cohen, Science 259: 1691-1692 (1993)). Доставка ДНК может быть также улучшена с использованием бупивикаина, полимеров и пептидов; и альтернативно, для этих целей могут быть использованы катионные липидные комплексы, частицы, или может быть приложено давление (см., например, патент США № 5922687).
Примерами аминокислотных последовательностей, которые, по меньшей мере, или примерно более чем на 95%, а именно, по меньшей мере, или примерно более чем на 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательностям SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 или 16, являются аминокислотные последовательности, содержащие одну или несколько замен, инсерций, добавлений и/или делеций. Идентичность последовательностей может быть определена путем выравнивания полипептидных последовательностей и их сравнения с помощью общедоступных компьютерных алгоритмов, таких как BLASTP (Pearson et al., PNAS USA 85: 2444-2448 (1988); Pearson, Methods Enzymol. 183: 63-98 (1990); и Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)). Программное обеспечение BLASTP имеется на сервере FTP Национального Центра Биотехнологической Информации (NCBI) или NCBI, Национальной Медицинской Библиотеки (National Library of Medicine, Building 38A, Room 8NSO5, Bethesda, MD 20894). Для определения процента идентичности последовательностей, после выравнивания полипептидных последовательностей, определяют число идентичных аминокислот по всем выравниваемым участкам, а затем число идентичных аминокислот делят на общее число аминокислот представляющего интерес полипептида, и результат умножают на 100.
В соответствии с этим, для среднего специалиста в данной области очевидно, что фрагмент данной аминокислотной последовательности может быть, по меньшей мере, примерно или более чем на 95%, а именно на 96%, 97%, 98% или 99% идентичен указанной аминокислотной последовательности. Таким образом, можно сказать, что эти фрагменты охватывают “аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, примерно или более чем на 95% (96%, 97%, 98%, или 99%) идентична последовательностям SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 или 16”. При этом желательно, чтобы такие фрагменты сохраняли иммуногенность полноразмерного белка. Функциональные фрагменты могут быть получены путем анализа на мутации нуклеиновой кислоты, кодирующей данный белок, и последующей экспрессии полученного мутантного белка, или путем химического/ферментативного гидролиза самого белка.
Модификации, такие как замены, инсерции, добавления и/или делеции могут быть введены в нуклеиновую кислоту или белок (или его фрагмент) методами, известными специалистам (см., например, Adelman et al., DNA 2: 183 (1983), где описан олигонуклеотид-направленный сайт-специфический мутагенез). При этом желательно, чтобы такая модификация, по существу, не снижала иммуногенность фрагмента белка; а предпочтительно, чтобы его иммуногенность, в основном, сохранялась на том же уровне, или превышала иммуногенность немодифицированного белка.
Термин “консервативная замена” означает замену одной аминокислоты на другую аминокислоту, обладающую аналогичными свойствами, то есть имеющую аналогичную вторичную структуру и гидропатическую природу. Аминокислотные замены могут быть сделаны на основе сходства полярностей, зарядов, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфипатической природы остатков. Так, например, взаимозаменяемыми могут быть отрицательно заряженные аминокислоты, такие как аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота, или положительно заряженные аминокислоты, такие как лизин и аргинин; либо аминокислоты, входящие в группу аминокислот с незаряженными полярными головными группами и имеющие аналогичную гидрофильность. В соответствии с этим, взаимозаменяемыми могут быть такие аминокислоты, как лейцин, изолейцин и валин; либо такие аминокислоты, как глицин и аланин; либо такие аминокислоты, как аспарагин и глутамин; либо такие аминокислоты, как серин, треонин, фенилаланин и тирозин. Другими группами аминокислот, в пределах которых аминокислоты могут быть взаимозаменяемыми, являются: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser и thr; (2) cys, ser, tyr и thr; (3) val, ile, leu, met, ala и phe; (4) lys, arg и his; и (5) phe, tyr, trp и his.
Исходя из вышеуказанного, настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей выделенный или очищенный белок/нуклеиновую кислоту или фрагмент указанного белка или нуклеиновой кислоты, и биологически приемлемый носитель. Нуклеиновая кислота или ее фрагмент могут быть частью вектора. См., например, патент США № 4029763, в котором описана вакцина против гриппа, содержащая белок NM в качестве активного ингредиента, и патент США № 4140762, в котором описана вакцина против гриппа, содержащая белки НА и NM в качестве активных ингредиентов. В патенте США № 4826687 описано добавление мурамил-дипептида в вакцину, содержащую белки HA и NM. При желании, в композицию, состоящую из белка/нуклеиновой кислоты или их фрагментов, могут быть добавлены полипептиды, в основном, соответствующие аминокислотам 148-162, 163-166 и/или 215-239 белка Ml (см., например, патенты США №№ 5136019; 5616327 и 5741493). В данной композиции может быть использован любой подходящий биологически приемлемый носитель. Так, например, белок(белки)/нуклеиновая(ые) кислота(ы)/их фрагменты могут быть ресуспендированы в разбавителе, например в 0,9% растворе хлорида натрия, необязательно забуференном, например, фосфатным буфером. Любое количество сахарозы, оставшейся после очистки вируса, может быть удалено путем диализа. Для удаления всех остаточных катионогенных детергентов могут быть проведены диализ или гель-хроматография. Белок или его фрагмент, предпочтительно, присутствуют в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа (то есть, клеточного или гуморального) у животного. Наиболее часто используемым носителем для фармацевтических средств и антигенов является сополимер D,L-лактида и гликолида (PLGA). PLGA представляет собой биологически разлагаемый полиэфир, который может быть использован для регулируемого высвобождения антигена (Eldridge et al., Curr. Topics Micro. Immune 146: 59-66 (1989); см. также патент США № 6090393). Было показано, что включение антигенов в микросферы PLGA диаметром 1-10 микрон дает превосходный адъювантный эффект при их пероральном введении.
При желании может быть добавлен консервант или инактивирующий агент, такой как формальдегид. Обычно количество консерванта/инактивирующего агента составляет 1 часть на 10000 частей.
При желании, один или несколько белков (или их иммуногенных фрагментов), таких как вышеописанный белок HA, могут быть объединены с протеосомами. См., например, патент США № 6743900 и публикацию заявки на патент США № 2004/0156867.
Иммуногенность может быть повышена путем введения стандартных иммунологических адъювантов, таких как гидроксид алюминия (например, около 0,2%) или фосфат алюминия, алюминий (см., например, патенты США №№ 6372223, 6635246, 6861244 и 7052701 и публикации заявок на патенты США №№ 2004/0096464 и 2006/0147468), хитозан (см., например, патенты США №№ 6136606 и 6534065), квасцы, например, в виде гидроксида алюминия, фосфата алюминия или оксида алюминия, минеральные масла (например, Bayol F® и Marcol 52®), полный адъювант Фрейнда, неполный адъювант Фрейнда, мурамил-дипептид, монофосфориллипид А и сапонины, включая компонент Quil A. Иммуногенность может быть также повышена путем добавления цитокина, такого как интерлейкин, или путем конъюгирования белков или их фрагментов. Белок или его фрагмент предпочтительно конъюгируют с макромолекулярным носителем, таким как белок (например, сывороточный альбумин, гемоцианин лимфы улитки, иммуноглобулин, тироглобулин и овальбумин), полисахарид (например, функционализированная латексом сефароза, агароза, целлюлозные сферы и т.п.), фосфолипид, полимерные аминокислоты (например, полиглутаминовая кислота, полилизин и т.п.) или сополимеры аминокислот (см., например, патенты США №№ 5136019 и 5612037). Альтернативно, белок или его фрагмент могут быть заключены в протеолипосому или липидную везикулу.
Композиция, которая может индуцировать иммунный ответ, может быть получена в виде суспензии, либо она может быть лиофилизована. В случае лиофилизации предпочтительно добавлять один или несколько стабилизаторов. Подходящими стабилизаторами являются, например, сахароза, фосфат, глутамат и альбумин (SPGA; Bovarnick, J. Bacterid. 59: 509 (1950)), углеводы (например, сорбит, маннит, крахмал, декстран и глюкоза), белки (например, альбумин и казеин) или продукты их разложения, белок-содержащие вещества (например, бычья сыворотка или сепарированное молоко) и буферы (например, фосфаты щелочных металлов).
Альтернативно, может быть изготовлена композиция с регулируемым высвобождением. Аттенюированный/инактивированный вирус или рекомбинантный вектор могут быть микрокапсулированы в полимеры, такие как поликарбонаты, полиэфиры, полиуретаны, полиортоэфиры и полиамиды. Выбор конкретного полимера зависит от ряда факторов, включая воспроизводимость синтеза полимеров и микрокапсуляции; стоимость материалов и производственные затраты; токсикологический профиль; требования, предъявляемые к кинетике изменения высвобождения; и физико-химическая совместимость полимера и вируса/вектора.
Описанные здесь композиции могут быть использованы отдельно или в комбинации с другими активными ингредиентами/композициями. Примерами являются композиции, которые могут индуцировать иммунный ответ против чумы собак; инфекционного собачьего гепатита (CAV-1 и CAV-2); бешенства; парагриппа; заболевания, вызываемого собачьим коронавирусом; кори; лептоспироза; и заболевания, вызываемого Bordetella. Ранее было описано, что полифенолы ингибируют развитие гриппа у человека (см., например, патент США № 5173922; патент '922). А поэтому добавление полифенола, такого как галлат эпигаллокатехина, галлат эпикатехина, эпигаллокатехин, эпикатехин, свободный теафлавин, моногаллат теафлавина A, моногаллат теафлавина B и/или дигаллат теафлавина, может давать благоприятный эффект (см. патент '922). Ингибиторы белка NM описаны в патенте США № 5453533. Использование цитокинов в качестве иммуностимуляторов и инкапсуляция в липосомы описаны в патенте США № 5919480.
Количество нуклеиновой кислоты в композиции может широко варьироваться. Так, например, ее концентрация может составлять примерно от менее чем 0,1 мас.% до 20-50 мас.% или более, а обычно, по меньшей мере, примерно 2 мас.%. Концентрация белка в композиции также может широко варьироваться. Так, например, такая концентрация может составлять примерно от менее чем 0,1 мас.% до 20-50 мас.% или более, а обычно, по меньшей мере, примерно 2 мас.%. При определении конечной концентрации следует учитывать объем и вязкость жидкости.
В соответствии с этим, настоящее изобретение также относится к способу индуцирования иммунного ответа против вируса собачьего гриппа у животного. Восприимчивость животного к инфекции может быть оценена с помощью теста на подавление бляшкообразования (патент США № 4315073) или теста на гемаглютинацию. Указанный способ включает введение животному вышеописанной композиции, содержащей выделенные или очищенные белок/нуклеиновую кислоту или их фрагмент. Если композиция содержит нуклеиновую кислоту (или ее фрагмент) как часть вектора, то белок (или его фрагмент), предпочтительно, экспрессируется в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа у животного. Так, например, может быть введена разовая доза, содержащая примерно 9-43 МЕ (международных единиц) на килограмм массы тела животного. Для более крупных млекопитающих разовая доза может содержать примерно 600-3000 МЕ на килограмм массы тела животного. В случае вакцинных композиций, полученных путем культивирования вируса в аллантоисном мешочке оплодотворенных яиц, с последующим сбором вируса и, если это необходимо, стабилизацией собранного вируса с использованием такого стабилизатора, как пептон или сахароза, а также с последующим распределением этого вируса по стеклянным сосудам для лиофилизации, разовая эффективная доза вакцины может содержать вирус в концентрации EID50, равной, по меньшей мере, 107 (доза, вызывающая инфицирование 50% куриных эмбрионов). В последнем случае лиофилизованную вакцинную композицию, до ее введения, разводят водой или другим фармацевтически приемлемым разбавителем и получают вакцину в форме назального спрея или капель в нос. При желании, могут быть введены две дозы такой вакцины с интервалом в одну неделю.
Указанная композиция может быть введена щенкам в возрасте 12 недель в виде разовой дозы, либо она может быть введена щенкам периодически, начиная с возраста 6 недель (например, через 6, 9 и 12 недель), или еженедельно, начиная с возраста 4 недели. Эффективную дозу и способ ее введения назначают в зависимости от природы композиции, природы продукта экспрессии, LD50, а при использовании рекомбинантного вектора в зависимости от уровня экспрессии вектора, а также от породы собак, их возраста, пола, массы тела и состояния здоровья. Дозы экспрессированного продукта могут варьироваться от нескольких микрограммов до нескольких сотен микрограммов, например от 5 до 500 мкг. Предпочтительные дозы вируса или рекомбинантного вектора могут составлять примерно от 103 до 106 б.о.е. Доза TCID50 “живого” аттенюированного штамма может составлять, по меньшей мере, примерно 103.
Указанные композиции могут быть введены парентерально (то есть путем инъекции (например, внутрикожной, подкожной и внутримышечной)) или путем инфицирования, например, интраназально или вовнутрь кишечника (например, перорально). Использование гелеобразующего вещества и муко- или биоадгезива в целях усиления иммунного ответа против внутрикожно вводимой иммуногенной композиции описано в публикации заявки на патент США № 2005/0255121. При желании, композиция для индуцирования иммунного ответа может быть введена с питьевой водой или с сиропом, как описано Chu et al. (заявка на патент США № 2006/0171960, опубликованная 3 августа 2006). Пероральное введение является предпочтительным, поскольку оно позволяет избежать необходимости длительного и трудоемкого введения внутримышечных инъекций, которые, в свою очередь, могут вызывать у животного состояние стресса и дискомфорта. Кроме того, такое состояние дискомфорта может влиять на рабочие качества собак породы гончих. Альтернативно, композиция, содержащая рекомбинантный вектор, экспрессирующий, по меньшей мере, один эпитоп, индуцирующий иммунный ответ, может быть нанесена непосредственно на кожу в целях осуществления локализованной экспрессии и индуцирования иммунного ответа.
Эффективность композиции, способной индуцировать иммунный ответ, может быть продемонстрирована путем инфицирования щенков посредством их обработки вирулентным штаммом вируса собачьего гриппа. У необработанных собак должны развиваться клинические признаки, характерные для инфекций, вызываемых вирусом собачьего гриппа, тогда как у обработанных собак такие признаки должны отсутствовать.
Рекомбинантные векторы и продукты их экспрессии могут быть использованы для продуцирования антител, таких как поликлональные антитела (pAb) и моноклональные антитела (mAb), в соответствии с методами, известными специалистам (Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988); Harlow and Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual (1998), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Shepherd and Dean, Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Press, U.S.A. (2000); и Harris and Adair, Antibody Therapeutics, CRC Press, Inc., Boca Raton, FL (1997)). Антитела, в частности mAb, могут быть использованы в анализах на связывание и в диагностических наборах/тестах для анализа на присутствие/отсутствие антигена вируса собачьего гриппа, либо на стимуляцию или отсутствие стимуляции иммунной реакции в ответ на воздействие вируса. Указанные антитела могут быть также использованы для выделения материала путем иммуноадсорбционной хроматографии.
Антитела могут быть использованы для пассивной иммунизации. Так, например, животному могут быть инъецированы неполностью очищенная иммунная сыворотка, взятая у животных-хозяев, или антитела, полученные из гибридомных клеточных линий. Эти антитела будут продуцировать терапевтический эффект посредством связывания и нейтрализации инфекционного вируса гриппа.
Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей антиидиотипическое антитело, имеющее “внутренний образ” эпитопа вышеописанного белка, такого как белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3.
Для среднего специалиста в данной области очевидно, что может быть получено антиидиотипическое антитело, несущее “внутренний образ” эпитопа, такого как эпитоп, описанный в настоящей заявке. См., например, Herlyn et al., Science 232: 100-102 (1986). Методы получения моноклональных и поликлональных антиидиотипических антител, которые несут “внутренний образ” полипептида, описаны, например, в патенте США № 5053224. Вкраце, поликлональные антиидиотипические антитела могут быть продуцированы путем иммунизации животных моноклональными идиотипическими антителами, вырабатываемыми против данного полипептида и скринированными на их реактивность с данным полипептидом, и последующего скрининга на антисыворотку, которая реагирует с идиотипическими антителами к полипептиду. Моноклональные антитела (mAb) могут быть также получены от животных стандартными методами иммортализации антитело-секретирующих клеток животного и скрининга культур с использованием идиотипических антител на их конкурентное связывание с данным полипептидом. Хотя mAb являются предпочтительными, однако могут быть также использованы и поликлональные антитела (pAbs), которые могут быть получены в различных системах млекопитающих.
Настоящее изобретение также относится к способу индуцирования иммунного ответа против CIV у собак. Этот способ включает введение собакам эффективного количества композиции, содержащей вышеописанное антиидиотипическое антитело.
Выделенные или очищенные молекулы нуклеиновой кислоты или векторы, содержащие эти молекулы, могут быть использованы для генерирования ДНК в целях получения зондов/праймеров, которые могут быть использованы для детектирования присутствия или отсутствия гибридизуемой ДНК или для амплификации ДНК, такой как кДНК.
В анализах могут быть использованы меченые белки или их фрагменты, а также меченые нуклеиновые кислоты или их фрагменты. Такими методами анализа являются флуоресцентные иммуноанализы (Smith et al., Ann. Clin. Biochem. 18: 253-275 (1981)), радиоиммуноанализы (РИА), твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и иммуноанализ с ферментативным усилением (EMIT; см. Enzyme Immunoassay, Maggio, ed., CRC Press, Inc., Boca Raton, FL, 1980. pp. 141-150; 234-235, and 242-243). Эти методы могут быть использованы для детектирования присутствия вируса и для диагностики инфекционного состояния.
В качестве вектора может быть использован и сам вирус. Использование вирусов в качестве вектора известно специалистам.
Пример
Нижеследующий пример служит для иллюстрации настоящего изобретения. Этот пример не должен рассматриваться как ограничение объема настоящего изобретения. В данном примере описана идентификация и частичная характеризация вируса собачьего гриппа.
Вспышки острого респираторного заболевания, характеризующегося кашлем, высокой температурой, учащенным дыханием и носовыми кровотечениями, наблюдались в апреле 2005 у собак породы грейхаунд, находившихся в двух различных питомниках на территориях собачьих бегов в восточной и западной Айове. Среди заболевших собак был большой процент выздоровевших, однако многие из них погибли от геморрагической пневмонии.
Легкие пораженных инфекцией собак приобретали интенсивный цвет от красного до черно-красного, имели уплотнения от умеренных до явно пальпируемых, а также обнаруживали фиброзный плеврит. Срезы легких обнаруживали картину от тяжелой геморрагической интерстициальной пневмонии до бронхоинтерстициальной пневмонии. Наблюдались очаговые интерстициальные изменения с утолщением альвеолярной перегородки, образованием сгустков дебриса в альвеолах и ассоциированным с ними ателектазом. Наблюдалась очаговая экстенсивно пиогрануломатозная бронхоинстициальная пневмония с расширением дыхательных путей за счет разрушенных клеток и дебриса. Обнаруживались также рассеянный васкулит и сосудистые тромбы.
Микробиологический тест на стандартные вирусные и бактериальные агенты не выявил каких-либо явных патогенов, за исключением Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, которые присутствовали в легочной ткани у всех обследованных животных. Два из четырех протестированных образцов легких были позитивными на вирус гриппа, на что указывала полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой, проводимая в режиме реального времени (ОТ-ПЦР; Harmon et al., Development of a PCR-based differential test for HI Nl и H3N2 swine influenza viruses. In: Proceedings of the 42nd Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. San Diego, CA. October 1999, p.44). Иммуногистохимический анализ тест-образцов, проводимый с использованием моноклонального антитела (mAb), специфичного к белку NP вируса гриппа (Vincent et al., J. Vet. Diagn. Invest. 9: 191-195 (1997)), также дал положительный результат на поражение обоих легких вирусной пневмонией, на что указывал ELISA-анализ, проводимый методом “антигенной ловушки” (DirectgenTM Flu A, Becton/Dickinson, Sparks, MD). Образцы бронхоальвеолярного лаважа, полученные от двух легких, протестированных с помощью ПЦР, были позитивными на вирус гриппа.
Была предпринята попытка выделения вируса, поскольку обнаружение вируса гриппа в легких собак было неожиданным, так как имеется лишь одно сообщение об обнаружении вируса инфекционного гриппа у собак (Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus from racing greyhounds with fatal hemorrhagic pneumonia. In: Proceedings of the 47th Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. Greensboro, NC. October 2004. p.158). Вирус, способный агглютинировать петушиные эритроциты, был выделен из клеток легких и бронхоальвеолярной жидкости одного из двух животных, у которого с помощью иммуногистохимического анализа (ИГХ) и ПЦР был обнаружен вирус гриппа, и введен в клетки почек собак Madin-Darby (MDCK). С помощью ПЦР было определено, что этот изолят вируса гриппа имеет подтип H3. С помощью анализов на ингибирование белка HA и белка NM было установлено, что этот вирусный изолят имеет подтип Н3N8. Указанный вирусный изолят распознавался антисывороткой против различных вирусов лошадиного гриппа H3, включая вирус Майями ((A/Eq/MI/l/63-H3N8) 640-1280), AK((A/Eq/AK/29759/91-H3N8) 320-640) и вирус Кентуки ((A/Eq/Kentucky/81-H3N8) 160-320).
Секвенирование генов HA и NA обоих изолятов выявило 100% и 99,8% идентичность между этими изолятами, соответственно. Филогенетический анализ показал, что ген НА данных изолятов имел генетическое сходство (96-98%-ную гомологию нуклеотидов) с недавно обнаруженным геном HA вирусов лошадиного гриппа H3N8 (Macken et al., The value of a database in surveillance и vaccine selection. In: Options for the Control of Influenza IV. Osterhaus et al., eds. Elsevier Science, Amsterdam. 2001, pp.103-106). Было также показано, что ген NA изолятов также имеет 96-98% гомологию с недавно обнаруженным геном NA вирусов лошадиного гриппа H3N8. Поскольку собаки породы грейхаунд, содержавшиеся в двух различных питомниках на географически удаленных территориях собачьих бегов в штате Айова, одновременно погибли от болезни, а находившиеся там лошади не были поражены этой болезнью, то это означает, что изолят вируса гриппа представляет собой адаптированный штамм собачьего вируса, который может присутствовать в организме в течение всей жизни и передаваться другим собакам. За тяжесть этого заболевания, вероятно, ответственен микроорганизм S. zooepidemicus, который вызывает респираторное заболевание и септические осложнения у различных животных многих видов (Wood et al., J. Clin. Microbiol. 43: 120-126 (2005); and Gillespie et al., The General Staphylococcus and Streptococcus. In: Hagan and Burner's Infectious Diseases of Domestic Animals. 7th ed. Comstock/Cornell University Press. Ithaca, NY. 1981, pp.164-180).
Все ссылки на литературу, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитируемые в настоящей заявке, во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки так, как если бы каждый из указанных документов был отдельно введен в настоящее описание посредством ссылки. При употреблении артиклей “а”, “an” и “the” и аналогичных языковых объектов (референтов), соотносимых с данным существительным, подразумевается, что существительные, используемые в контексте настоящего изобретения (в частности, в нижеследующей формуле изобретения), могут присутствовать как в единственном числе, так и во множественном числе, если это не оговорено особо, и если это явно не противоречит контексту изобретения. Если вместо отдельных величин приводятся интервалы величин, то это продиктовано лишь желанием ускорить перечисление отдельных конкретных величин, входящих в данный интервал, если это не оговорено особо, и каждая такая величина вводится в настоящее изобретение так, как если бы она была указана отдельно. Все описанные здесь методы могут быть осуществлены в любом нужном порядке, если это не оговорено особо, или если это не противоречит контексту настоящего изобретения. Каждый пример или все примеры, или используемые здесь иллюстративные термины (например, “такой как”) приводятся лишь для лучшего понимания изобретения, и не ограничивают его объема, который определен в нижеследующей формуле изобретения. Однако термины, употребляемые в настоящем описании, не должны быть истолкованы как указание на какой-либо незаявленный элемент, который может иметь важное значение для осуществления изобретения.
В настоящей заявке описаны предпочтительные варианты осуществления изобретения, включая наилучший способ его реализации, известный авторам настоящего изобретения. При этом следует отметить, что проиллюстрированные варианты приводятся лишь в целях иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничение изобретения.
Claims (17)
1. Выделенный вирус собачьего гриппа подтипа H3N8, включающий гемаглютинин (НА), имеющий последовательность SEQ ID NO:4 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что аминокислоты в положениях 94 и 233 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:4, для применения в композиции в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа.
2. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.1, который включает нейраминидазу (NM), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:2, при условии, что аминокислоты в положениях 68 и 134 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:2.
3. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.1 или 2, который также включает, по меньшей мере, один из нижеследующих белков: нуклеопротеин (NP), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:6, при условии, что аминокислота в положении 402 идентична аминокислоте в данном положении последовательности SEQ ID NO:6; белок матрикса 1 (M1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:8, при условии, что аминокислота в положении 111 идентична аминокислоте в данном положении последовательности SEQ ID NO:8; неструктурный белок 1 (NS1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10; белок PA, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 98% идентична последовательности SEQ ID NO:12, при условии, что аминокислоты в положениях 233, 256, 327 и 561 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:12; белок РВ1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:14, при условии, что аминокислоты в положениях 200 и 213 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:14; и/или белок РВ2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16 или аминокислотную последовательность, которая более чем на 99% идентична последовательности SEQ ID NO:16, при условии, что аминокислоты в положениях 107, 221, 292, и 661 идентичны аминокислотам в данных положениях последовательности SEQ ID NO:16.
4. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.1, который является аттенюированным.
5. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.4, включенный в композицию в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа.
6. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.1, который является инактивированным.
7. Выделенный вирус собачьего гриппа по п.6, включенный в композицию в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа.
8. Выделенный вирус собачьего гриппа подтипа H3N8, депонированный в Американской коллекции типовых культур (АТСС) в качестве патентного депозита № РТА-7694, для применения в композиции в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа.
9. Выделенный или очищенный белок гемаглютинин (НА) вируса собачьего гриппа по п.1 для применения в композиции в количестве, достаточном для индуцированния иммунного ответа, где указанный НА (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или (ii) происходит от вируса гриппа и имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:4, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:4 в положениях аминокислот 94 и 233; или фрагмент указанного белка по (i) или по (ii), где указанный фрагмент включает, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 94 или 233 последовательности SEQ ID NO:4.
10. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота, кодирующая белок НА или его фрагмент по п.9, необязательно являющаяся частью вектора.
11. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота по п.10, где указанная нуклеиновая кислота, кодирующая белок НА, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот.
12. Выделенный или очищенный белок M1 вируса собачьего гриппа по п.1 для применения в композиции в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа, где указанный M1 (i) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 или (ii) происходит от вируса гриппа и который имеет аминокислотную последовательность, более чем на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO:8, при условии, что указанная аминокислотная последовательность идентична последовательности SEQ ID NO:8 в положении 111; или фрагмент указанного белка по (i) или по (ii), где указанный фрагмент включает, по меньшей мере, девять смежных аминокислот, из которых, по меньшей мере, одна аминокислота идентична аминокислоте, присутствующей в положении 111 последовательности SEQ ID NO:8.
13. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота, кодирующая белок M1 или его фрагмент по п.12, необязательно являющаяся частью вектора.
14. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота по п.13, где указанная нуклеиновая кислота, кодирующая белок M1, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:7 или ее фрагмент, кодирующий, по меньшей мере, девять смежных аминокислот.
15. Выделенный или очищенный белок NS1 вируса собачьего гриппа по п.1 для применения в композиции в количестве, достаточном для индуцирования иммунного ответа, где указанный NS1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.
16. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота, кодирующая белок NS1 по п.15, необязательно являющаяся частью вектора.
17. Выделенная или очищенная нуклеиновая кислота по п.16, где указанная нуклеиновая кислота, кодирующая белок NS1, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:9.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US72780805P | 2005-10-18 | 2005-10-18 | |
US60/727,808 | 2005-10-18 | ||
US11/539,123 | 2006-10-05 | ||
US11/539,123 US7468187B2 (en) | 2005-10-18 | 2006-10-05 | Canine influenza virus and related compositions and methods of use |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008119438A RU2008119438A (ru) | 2009-11-27 |
RU2410427C2 true RU2410427C2 (ru) | 2011-01-27 |
Family
ID=37906978
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008119438/10A RU2410427C2 (ru) | 2005-10-18 | 2006-10-17 | Вирус собачьего гриппа, композиции, содержащие этот вирус, и способы их применения |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7468187B2 (ru) |
EP (1) | EP1933866B1 (ru) |
JP (1) | JP5042230B2 (ru) |
KR (1) | KR101412897B1 (ru) |
AR (1) | AR056133A1 (ru) |
AT (1) | ATE491468T1 (ru) |
AU (1) | AU2006304895B2 (ru) |
CA (1) | CA2626452C (ru) |
DE (1) | DE602006018970D1 (ru) |
HK (1) | HK1112846A1 (ru) |
NO (1) | NO342145B1 (ru) |
NZ (1) | NZ567017A (ru) |
RS (1) | RS53723B1 (ru) |
RU (1) | RU2410427C2 (ru) |
WO (1) | WO2007048086A2 (ru) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11865172B2 (en) | 2005-04-21 | 2024-01-09 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
US7959929B2 (en) | 2005-04-21 | 2011-06-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
WO2006116082A1 (en) * | 2005-04-21 | 2006-11-02 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
ME00485B (me) * | 2005-10-07 | 2011-10-10 | Zoetis Services Llc | VAKCINE l METODE LIJEČENJA INFLUENCE KOD CANINA |
AU2013205112C1 (en) * | 2005-10-19 | 2015-12-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Influenza viruses able to infect canids, uses thereof |
WO2007047728A2 (en) * | 2005-10-20 | 2007-04-26 | Wyeth | Compositions and methods for the treatment of canine influenza virus disease |
US7682619B2 (en) * | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
ES2744126T3 (es) | 2006-10-25 | 2020-02-21 | Intervet Int Bv | Vacuna contra la gripe felina y método de uso |
CA2826058C (en) | 2011-02-04 | 2017-06-06 | Zoetis Llc | Compositions for canine respiratory disease complex |
PL2670432T3 (pl) | 2011-02-04 | 2021-10-11 | Zoetis Services Llc | Kompozycje immunogenne Bordetella bronchiseptica |
BR122019023542B1 (pt) | 2011-03-14 | 2022-02-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc | Composição imunogênica compreendendo uma ou mais cepas de vírus da rinite equina b (erbv) inativado e seu método de preparação |
KR101484588B1 (ko) * | 2012-10-24 | 2015-01-20 | 대한민국 | 개 인플루엔자 vlp 백신의 제조방법 |
US10080792B2 (en) | 2013-09-23 | 2018-09-25 | Engen Bio, Inc. | Influenza vaccine and therapy |
CN104436157A (zh) | 2013-09-23 | 2015-03-25 | 恩金生物有限公司 | 流感疫苗和治疗 |
BR112021000435A2 (pt) * | 2018-07-10 | 2021-04-06 | Seqirus Pty Ltd | Remoção de aglomerados |
JP7340290B2 (ja) * | 2021-05-21 | 2023-09-07 | 大輔 島岡 | 抗エンベロープウイルス中性洗浄剤、消毒剤組成物、及びエンベロープウイルスの不活性化方法 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4009258A (en) | 1972-09-25 | 1977-02-22 | The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Influenza vaccine containing a recombinant, antigenically hybridized virus and method of using the same |
GB1488800A (en) | 1973-11-29 | 1977-10-12 | Wellcome Found | Influenza vaccines |
US4140762A (en) | 1974-01-14 | 1979-02-20 | Sandoz Ltd. | Influenza sub-unit vaccine |
US4029763A (en) | 1974-08-05 | 1977-06-14 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Influenza vaccine containing purified neuraminidase antigen and method of using the same |
US4318903A (en) | 1978-07-12 | 1982-03-09 | Smithkline-Rit | Live influenza virus vaccine and the preparation thereof |
US4338296A (en) | 1979-10-16 | 1982-07-06 | Smithkline-Rit | Influenza virus and process of producing a vaccine therefrom |
US4278662A (en) | 1979-10-16 | 1981-07-14 | Smith Kline - Rit | Attenuated influenza type A virus vaccine |
GB8300467D0 (en) | 1983-01-08 | 1983-02-09 | Wellcome Found | Equine influenza |
JPH0688911B2 (ja) | 1985-06-06 | 1994-11-09 | 国立予防衛生研究所長 | インフルエンザワクチン及びその製造方法 |
GB8703696D0 (en) | 1987-02-18 | 1987-03-25 | Oxford J S | Influenza vaccine |
US5136019A (en) | 1989-05-24 | 1992-08-04 | Sri International | Synthetic peptides for diagnosis and prevention of influenza virus infection and their use |
US5741493A (en) | 1991-01-24 | 1998-04-21 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Vaccine composition against influenza, with synergic effects, containing influenza virus core as an additive |
EP0590055B1 (en) | 1991-06-19 | 1997-12-03 | New York Medical College | M-protein peptides of influenza virus as antiviral agents |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
ES2370937T3 (es) | 1993-09-13 | 2011-12-23 | Protein Sciences Corporation | Un método para producir vacunas antigripales polivalentes a base de hemaglutinina. |
BR9506484A (pt) | 1994-01-11 | 1997-10-07 | Vlaams Interuniv Inst Biotech | Neuraminidase recombinate seu vetor processo para sua manufatura e uso como vacina contra influenza |
US6482414B1 (en) | 1998-08-13 | 2002-11-19 | The University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Cold-adapted equine influenza viruses |
US6177082B1 (en) | 1998-08-13 | 2001-01-23 | The University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Cold-adapted equine influenza viruses |
IL127331A0 (en) | 1998-11-30 | 1999-09-22 | Yeda Res & Dev | Peptide-based vaccine for influenza |
US20050089533A1 (en) * | 2003-01-29 | 2005-04-28 | Joseph Frantz | Canine vaccines against Bordetella bronchiseptica |
WO2006116082A1 (en) | 2005-04-21 | 2006-11-02 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
US7959929B2 (en) * | 2005-04-21 | 2011-06-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
US7384642B2 (en) * | 2005-08-25 | 2008-06-10 | Merial Limited | Canine influenza vaccines |
ME00485B (me) * | 2005-10-07 | 2011-10-10 | Zoetis Services Llc | VAKCINE l METODE LIJEČENJA INFLUENCE KOD CANINA |
-
2006
- 2006-10-05 US US11/539,123 patent/US7468187B2/en active Active
- 2006-10-17 RU RU2008119438/10A patent/RU2410427C2/ru active
- 2006-10-17 EP EP06827896A patent/EP1933866B1/en active Active
- 2006-10-17 AT AT06827896T patent/ATE491468T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-10-17 CA CA2626452A patent/CA2626452C/en active Active
- 2006-10-17 JP JP2008536626A patent/JP5042230B2/ja active Active
- 2006-10-17 RS RS20080174A patent/RS53723B1/en unknown
- 2006-10-17 AU AU2006304895A patent/AU2006304895B2/en active Active
- 2006-10-17 WO PCT/US2006/060025 patent/WO2007048086A2/en active Application Filing
- 2006-10-17 NZ NZ567017A patent/NZ567017A/en unknown
- 2006-10-17 KR KR1020087008658A patent/KR101412897B1/ko active IP Right Grant
- 2006-10-17 DE DE602006018970T patent/DE602006018970D1/de active Active
- 2006-10-17 AR ARP060104532A patent/AR056133A1/es not_active Application Discontinuation
-
2008
- 2008-05-07 NO NO20082149A patent/NO342145B1/no unknown
- 2008-07-17 HK HK08107923.9A patent/HK1112846A1/xx unknown
- 2008-09-15 US US12/210,837 patent/US7842295B2/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-11-29 US US13/688,990 patent/USRE44916E1/en active Active
-
2013
- 2013-11-08 US US14/075,618 patent/USRE45564E1/en active Active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PEEK SIMON F ET AL: "ACUTE RESPIRATORY DISTRESS SYNDROME AND FATAL INTERSTITIAL PNEUMONIA ASSOCIATED WITH EQUINE INFLUENZA IN A NEONATAL FOAL" JOURNAL OF VETERINARY INTERNAL MEDICINE, LIPPINCOTT, PHILADELPHIA, US, VOL.18, NO.1, JANUARY 2004, PAGES 132-134. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101412897B1 (ko) | 2014-06-27 |
RS20080174A (en) | 2009-07-15 |
EP1933866B1 (en) | 2010-12-15 |
EP1933866A2 (en) | 2008-06-25 |
AU2006304895B2 (en) | 2013-04-11 |
NO342145B1 (no) | 2018-04-03 |
US20070098742A1 (en) | 2007-05-03 |
RS53723B1 (en) | 2015-06-30 |
RU2008119438A (ru) | 2009-11-27 |
AR056133A1 (es) | 2007-09-19 |
DE602006018970D1 (de) | 2011-01-27 |
JP5042230B2 (ja) | 2012-10-03 |
HK1112846A1 (en) | 2008-09-19 |
US7468187B2 (en) | 2008-12-23 |
ATE491468T1 (de) | 2011-01-15 |
CA2626452A1 (en) | 2007-04-26 |
WO2007048086A3 (en) | 2007-10-04 |
WO2007048086A9 (en) | 2007-07-19 |
JP2009511080A (ja) | 2009-03-19 |
AU2006304895A1 (en) | 2007-04-26 |
USRE45564E1 (en) | 2015-06-16 |
NO20082149L (no) | 2008-07-16 |
US20090035325A1 (en) | 2009-02-05 |
CA2626452C (en) | 2018-09-04 |
NZ567017A (en) | 2010-12-24 |
KR20080046706A (ko) | 2008-05-27 |
BRPI0617407A2 (pt) | 2011-07-26 |
US7842295B2 (en) | 2010-11-30 |
USRE44916E1 (en) | 2014-05-27 |
WO2007048086A2 (en) | 2007-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2410427C2 (ru) | Вирус собачьего гриппа, композиции, содержащие этот вирус, и способы их применения | |
KR101153929B1 (ko) | 기능성 인플루엔자 바이러스 유사입자 | |
RU2390351C2 (ru) | Вакцина против вируса гриппа для введения через слизистую и способ предотвращения гриппа | |
JP5442442B2 (ja) | 新規h5タンパク質、それらをコードする核酸分子およびベクター、ならびにそれらの医薬的使用 | |
KR20150138184A (ko) | 호흡기 세포 융합 바이러스 및 인플루엔자를 위한 조합 백신 | |
WO2007053446A2 (en) | Use of vaccines for the treatment/ prevention of the transmission of influenza pathogens between species | |
RU2734118C2 (ru) | Рекомбинантные вирусоподобные частицы (vlp) с использованием протеина группового антигена (gag) вируса бычьего иммунодефицита | |
MX2014001754A (es) | Vacunas contra influenza h5. | |
JP7491600B2 (ja) | ユニバーサルインフルエンザワクチン | |
KR20120131725A (ko) | 고병원성 조류인플루엔자 a h5n1 바이러스 유사입자 및 이를 이용한 가금용 백신 | |
KR101908905B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스의 h9 및 h5의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 | |
Stepanova et al. | Amino acid substitutions N123D and N149D in hemagglutinin molecule enhance immunigenicity of live attenuated influenza H7N9 vaccine strain in experiment | |
ES2355332T3 (es) | Virus de la influencia canina y composiciones relacionadas y métodos de uso. | |
KR101753978B1 (ko) | 고병원성 조류 인플루엔자(h5n1) 및 뉴캣슬병 바이러스 융합 바이러스 유사 입자 백신 및 이를 이용한 백신 | |
US20230055468A1 (en) | Broadly reactive viral antigens as immunogens, compositions and methods of use thereof | |
US20240100148A1 (en) | Broadly reactive viral antigens as immunogens, compositions and methods of use thereof | |
KR102098585B1 (ko) | 교차 면역원성을 갖는 h2 아형 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 | |
TWI390038B (zh) | 流感病毒重組ha似病毒顆粒及其疫苗組成物 | |
BRPI0617407B1 (pt) | Vírus influenza canino inativado, composição compreendendo o referido vírus inativado e uso da referida composição | |
MX2008005193A (en) | Use of vaccines for the treatment/ prevention of the transmission of influenza pathogens between species |