BRPI0617407A2 - vÍrus influenza canino, proteÍnas ha, nm, np, m1, ns1, pa, pb1 e pb2, Ácidos nucleicos que as codificam, composiÇÕes contendo as referidas proteÍnas, os referidos vÍrus ou os referidos Ácidos nucleicos, bem como usos - Google Patents

Abstract

VÍRUS INFLUENZA CANINO, PROTEÍNAS HA, NM, NP, Ml, NSI, PA, PBI E PB2, ACIDOS NUCLEICOS QUE AS CODIFICAM, COMPOSIÇÕES CONTENDO AS REFERIDAS PROTEÍNAS, OS REFERIDOS VÍRUS OU OS REFERIDOS ÁCIDOS NUCLEICOS, BEM COMO USOS <D>A presente invenção refere-se a um vírus influenza canino isolado do subtipo H3N8 que compreende uma HA que tem SEQ ID NO: 4 ou uma sequência de aminoácido que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 4, com a condição de que os aminoácidos nas posições 94 e 233 são idênticos a SEQ ID NO: 4; uma composição que compreende um vírus atenuado ou inativado; proteínas HA, NM, NP, Ml, NSI, PA, PB1 e PB2 isola- das ou purificadas e fragmentos das mesmas e composições que compreendem as mesmas ou ácidos nucléicos, opcionalmente como parte de um vetor, que codificam as mesmas; e um método de induzir uma resposta imune ao vírus influenza canino em um animal que compreende administrar ao animal uma composição mencionada acima.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "VÍRUS IN-FLUENZA CANINO, PROTEÍNAS HA, NM, NP, M1, NS1, PA, PB1 E PB2,ÁCIDOS NUCLEICOS QUE AS CODIFICAM, COMPOSIÇÕES CONTENDOAS REFERIDAS PROTEÍNAS, OS REFERIDOS VÍRUS OU OS REFERI-DOS ÁCIDOS NUCLEICOS, BEM COMO USOS".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

Esse pedido de patente reivindica o benefício do Pedido de Pa-tente Provisório U.S. N0 60/727.808, depositado em 18 de outubro de 2005,e do Pedido de Patente de Utilidade U.S. N0 11/539:123, depositado em 5 deoutubro de 2006, cujos conteúdos estão incorporados nesse por referênciaem suas totalidades.CAMPO TÉCNICO DE INVENÇÃO

A presente invenção refere-se aos campos da virologia, biologiamolecular e imunologia. Em particular, a presente invenção refere-se ao ví-rus influenza canino, assim como a composições relacionadas e métodos deuso na indução de uma resposta imune em animais.ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O vírus influenza é um vírus de RNA que pertence a família Or-thomyxoviridae. O RNA viral consiste em oito segmentos independentes, quefacilmente se recombinam entre vírus influenza para produzir novos subtipos.

A nucleoproteína (NP), que é o componente primário do nucleo-capsídeo, é codificada no quinto segmento. A NP e a proteína de matriz sãousadas para classificar o vírus influenza em grupo A, B ou C. Como NP é umaproteína interna, ela não está sujeita a pressão de seleção pelo sistema imunede um hospedeiro. Ela se siga ao RNA, é parte do complexo da transcriptasee está envolvida no transporte nuclear-citoplasmático de RNA viral (vRNA).

A neuraminidase (NM), que rompe a ligação α-ceto que une umácido siálico terminal ao próximo resíduo de açúcar, assim permitindo a libe-ração da progênie viral das células infectadas, é codificada pelo sexto seg-mento. Nove subtipos (N1-N9) dessa enzima foram identificados. Todos ossubtipos têm duas regiões estruturais - uma base e uma cabeça. Todas asproteínas N8 têm 470 aminoácidos, dos quais os primeiros oito são altamen-te conservados. A região seguinte é rica em aminoácidos hidrofóbicos e éconsiderada o domínio transmembrana. Os próximos 51 aminoácidos consti-tuem a região de base e a região da cabeça começa em Cys91. A últimaregião contém o sítio catalítico da enzima. Resíduos de cisteína na região dacabeça e na base tendem a ser altamente conservados. Existem 6-8 supos-tos sítios de N-glicosilação.

Hemaglutinina (HA), que é uma glicoproteína de membrana res-ponsável pela adsorção do vírus na célula hospedeira, é o antígeno principalpara o qual os anticorpos neutralizantes são direcionados. Sua variação an-tigênica é a principal causa de epidemias de influenza. Ela é codificada peloquarto segmento. Dezesseis subtipos diferentes (H1-H16) foram identifica-dos. HA tem um peptídeo de sinal de 16 aminoácidos e dois polipeptídeos(HA1 e HA2) ligados por pontes de dissulfeto. HA1 tem a extremidade aminoterminal, enquanto que HA2 tem a extremidade carboxi terminal. Uma regiãohidrofóbica em HA2 ancora HA à membrana viral. Resíduos de cisteína ten-dem a ser altamente conservados. Há seis supostos sítios de glicosilação,que possibilitam ao vírus mascarar seus sítios antigênicos (Skehel et ai.,PNAS USA 81: 1779 (1984)).

Outras proteínas incluem a matriz (M ou M1 e M2), não estrutu-ral (NS ou NS1 e NS2), PA, PB1 e PB2. A proteína M1 é o componente prin-cipal do vírion que se liga à membrana plasmática das células infectadas pormeio de duas regiões hidrofóbicas na terminação N da proteína, enquantoque M2 é um canal de íon e, portanto, uma proteína de membrana integral.A proteína NS1 é encontrada no núcleo e afeta o transporte, splicing e tra-dução de RNA celular. A proteína NS2 é encontrada no núcleo e no cito-plasma e tem função desconhecida. A proteína PA é uma transcriptase epode ter atividade de protease, enquanto que a proteína PB1 funciona noalongamento da transcrição e a proteína PB2 funciona na ligação do cap detranscrição.

Mundialmente, a influenza é a doença respiratória mais significa-tiva economicamente em seres humanos, porcos, cavalos e aves de criaçãoWright et ai, Orthomyxoviruses. In: Fields Virology. Knipe et ai, eds. Lippin-cott Williams & Wilkins1 Filadélfia, 2001. pp. 1533-1579.). O vírus da influen-za é conhecido por suas alterações genéticas e antigênicas contínuas, queimpedem o controle eficaz do vírus (Wright et al. (2001 ), supra; Webster etal., Microbiol. Rev. 56: 152-179 (1992)). De preocupação particular para aprevenção de epidemias e pandemias é a emergência de um novo subtipodo vírus por rearranjo genético ou transmissão interespécie (Wright et al.(2001), supra).

Recentemente, surtos de influenza ocorreram em espécies, porexemplo, felina e canina, que historicamente não carregam o vírus da influ-enza (Keawcharoen et al., Emerg. Infect. Dis. 10: 2189-2191 (2004); Craw-ford et al., Science 310: 398-485 (October 21, 2005; publicado on-line em 29de Setembro 2005); Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus fromracing greyhounds with fatal hemorrhagic pneumonia. In: Proceedings of the47th Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diag-nosticians, Greensboro, NC, Outubro de 2005. p. 158; e Yoon et al., Emerg.Infect. Dis. 11(12): 1974-1976 (Dezembro de 2005)). Portanto, a variação dehospedeiro do vírus da influenza está se expandindo.

Surtos de doença respiratória em galgos de corrida causadospela infecção com vírus da influenza ocorreram na Flórida em 2004, no lestee oeste de Iowa em abril de 2005 e no Texas em 2005. A doença era carac-terizada por início súbito com febre e tosse, respiração rápida e descarganasal hemorrágica. A morbidade era de quase 100% em ambas as pistas decorrida em lowa, embora a mortalidade fosse menor do que 5%. Apesar deum grande percentual de cães afetados terem se recuperado, muitos su-cumbiram a pneumonia hemorrágica. A administração terapêutica de antibió-ticos de largo espectro reduziu a severidade da doença, mas não pôde con-trolá-la.

Em vista do acima, é um objetivo da presente invenção fornecero vírus da influenza que afeta os caninos. É outro objetivo da presente in-venção fornecer materiais e métodos para induzir uma resposta imune aovírus da influenza em caninos. Esses e outros objetivos e vantagens, assimcomo aspectos adicionais da invenção, se tornarão claros a partir da descri-ção detalhada fornecida aqui.BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece um vírus influenza canino isoladode subtipo H3N8 que compreende uma HA que tem a SEQ ID NO: 4 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 4,com a condição de que os aminoácidos nas posições 94 e 233 sejam idênti-cos a SEQ ID NO: 4. Em particular, a presente invenção fornece um vírusinfluenza canino isolado do subtipo H3N8 depositado na American Type Cul-ture Collection (Manassas, VA) em 29 de junho de 2006, como Depósito de Patente Ne PTA-7694. Conseqüentemente, a presente invenção tambémfornece uma composição que compreende um vírus atenuado assim comouma composição que compreende um vírus inativado.

A presente invenção também fornece proteínas isoladas ou puri-ficadas. Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma HA isoladaou purificada, que (i) tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 ou(ii) é derivada de um vírus influenza e que tem uma seqüência de aminoáci-dos que é mais do que 99% idêntica a de SEQ ID NO: 4 nas posições deaminoácidos 94 e 233 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmentocompreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 94 ou 233 de SEQ ID NO: 4.

Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma NM iso-lada ou purificada, que (i) compreende a seqüência de aminoácidos de SEQID NO: 2 ou (ii) é derivada de um vírus influenza e que compreende umaseqüência de aminoácidos que mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 2, com a condição de que a seqüência de aminoácidos seja idêntica a SEQ IDNO: 2 em aminoácidos nas posições 68 e 134, ou um fragmento de (i) ou (ii),em que o fragmento compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos,pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 68 ou 134 deSEQ ID NO: 2.

Ainda em outra modalidade, a presente invenção fornece umaNP isolada ou purificada, que (i) tem a seqüência de aminoácidos de SEQ IDNO: 6 ou (ii) é derivada de um vírus influenza e que tem uma seqüência deaminoácidos que mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 6, com a condiçãode que a seqüência de aminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 6na posição do aminoácido 402 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que ofragmento compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo me-nos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 402 de SEQ ID NO:6.

Ainda em outra modalidade, a presente invenção fornece umaM1 isolada ou purificada, que (i) tem a seqüência de aminoácidos de SEQ IDNO: 8 ou (ii) é derivada de um vírus influenza e que tem uma seqüência deaminoácidos que mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 8, com a condiçãode que a seqüência de aminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 8na posição do aminoácido 111 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que ofragmento compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo me-nos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 111 de SEQ ID NO:8.

Uma NS1 isolada ou purificada que tem a seqüência de aminoá-cidos de SEQ ID NO: 10 também é fornecida.

Também é fornecida uma proteína PA isolada ou purificada, que(i) tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 ou (ii) é derivada deum vírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que mais doque 98% (ou 99%) idêntica a SEQ ID NO: 12, com a condição de que a se-qüência de aminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 12 na posiçãodos aminoácidos 233, 256, 327 e 561 ou um fragmento de (i) ou (ii), em queo fragmento compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo me-nos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 233, 256, 327 e 561de SEQ ID NO: 12.

Ainda é fornecida uma PB1 isolada ou purificada, que (i) tem aseqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou (ii) é derivada de um vírusinfluenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que mais do que 99%idêntica a SEQ ID NO: 14, com a condição de que a seqüência de aminoáci-dos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 14 na posição de aminoácido 200 e213 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compreende pelomenos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico aoaminoácido na posição 200 ou 213 de SEQ ID NO: 14.

Ainda é fornecida uma PB2 isolada ou purificada, que (i) tem aseqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 ou (ii) é derivada de um vírusinfluenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que mais do que 99%idêntica a SEQ ID NO: 16, com a condição de que a seqüência de aminoáci-dos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 16 nas posições dos aminoácidos107, 221, 292 e 661 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmentocompreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dosquais é idêntico aos aminoácidos nas posições 107, 221, 292 e 661 de SEQID NO: 16.

Em vista do acima, a presente invenção ainda fornece umacomposição que compreende uma proteína acima descrita, tal como HA ouNM ou um fragmento dessas, em uma quantidade suficiente para induziruma resposta imune em um animal e um veículo biologicamente aceitável.

Também em vista do acima, a presente invenção fornece ummétodo para induzir uma resposta imune ao vírus influenza canino em umanimal. O método compreende administrar ao animal a composição quecompreende uma proteína ou um fragmento desta.

Um ácido nucléico isolado ou purificado que codifica a proteínaacima descrita ou um fragmento desta, opcionalmente como parte de umvetor, também é fornecido, assim como uma composição que compreende oácido nucléico isolado ou purificado, que expressa a proteína, tal como HAou NM ou um fragmento destas, em uma quantidade suficiente para induziruma resposta imune em um animal e um veículo biologicamente aceitável.

Conseqüentemente, a presente invenção também fornece outrométodo de induzir uma resposta imune ao vírus influenza canino em um a-nimal. O método compreende administrar ao animal a composição que com-preende um ácido nucléico.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

A Figura 1 é a seqüência de nucleotídeos parcial (SEQ ID NO: 1;vide também GenBank Ac. N9 DQI 46420) da seqüência de domínio codifi-cante (CDS) do gene de NM do subtipo H3N8 de vírus influenza canino. Deacordo com a convenção, a seqüência é apresentada da esquerda para di-reita e de cima para baixo.

A Figura 2 é a seqüência de aminoácidos (SEQ ID NO: 2; videtambém GenBank Ac. Ne DQ146420) codificada por SEQ ID NO: 1. De a-cordo com a convenção, a seqüência é apresentada no formato de uma letrada esquerda para direita e de cima para baixo.

A Figura 3 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ ID NO:3; vide também GenBank Ac. N2 DQ 146419) da CDS do gene de HA do sub-tipo H3N8 de vírus influenza canino.

A Figura 4 é a seqüência de aminoácidos (SEQ ID NO: 4; videtambém GenBank Ac. N5 DQ14619) codificada por SEQ ID NO; 3.

A Figura 5 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ ID NO:5)da CDS do gene de NP do subtipo H3N8 dé vírus influenza canino.

A Figura 6 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ ID NO:6) codificada por SEQ ID NO: 5.

A Figura 7 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ ID NO:7) da CDS do gene da proteína M1 do subtipo H3N8 de vírus influenza cani-no.

A Figura 8 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ ID NO:8) codificada por SEQ ID NO: 7.

A Figura 9 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ ID NO:9) da CDS do gene da proteína NS1 do subtipo H3N8 de vírus influenza ca-nino.

A Figura 10 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ IDNO: 10) codificada por SEQ ID NO: 9.

A Figura 11 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ IDNO: 11) da CDS do gene da proteína PA do subtipo H3N8 de vírus influenzacanino.

A Figura 12 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ IDNO: 12) codificada por SEQ ID NO: 11.

A Figura 13 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ IDNO: 13) da CDS do gene da proteína PB1 do subtipo H3N8 de vírus influen-za canino.

A Figura 14 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ IDNO: 14) codificada por SEQ ID NO: 13.

A Figura 15 é a seqüência de nucleotídeos completa (SEQ IDNO: 15) da CDS do gene da proteína PB2 do subtipo H3N8 de vírus influen-za canino.

A Figura 16 é a seqüência de aminoácidos deduzida (SEQ IDNO: 16) codificada por SEQ ID NO: 15.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção está relacionada com a descoberta de umacepa de vírus infIuenza em caninos. A cepa foi isolada de galgos de corridano leste e oeste de lowa. A cepa foi classificada como um subtipo de H3N8 efoi designada A/canino/lowa/13628/2005. Conseqüentemente, a presenteinvenção fornece um vírus que compreende uma HA que tem a SEQ ID NO:4 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQID NO: 4, com a condição de que os aminoácidos nas posições 94 e 233sejam idênticos a SEQ ID NO: 4. O vírus pode compreender ainda uma NMque compreende a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 ou uma se-qüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 2,com a condição de que os aminoácidos nas posições 68 e 134 sejam idênti-cos a SEQ ID NO: 2. O vírus que compreende a HA mencionada acima, so-zinha ou em combinação com a NM mencionada acima, pode compreenderainda pelo menos um dos seguintes: uma NP que tem a seqüência de ami-noácidos de SEQ ID NO: 6 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais doque 99% idêntica a SEQ ID NO: 6, com a condição de que o aminoácido 402seja idêntico àquele de SEQ ID NO: 6; uma M1 que tem a seqüência de a-minoácidos de SEQ ID NO: 8 ou uma seqüência de aminoácidos que é maisdo que 99% idêntica a SEQ ID NO: 8, com a condição de que o aminoácido111 seja idêntico àquele de SEQ ID NO: 8; uma NS1 que tem a seqüênciade aminoácidos de SEQ ID NO: 10; uma proteína PA que tem a seqüênciade aminoácidos de SEQ ID NO: 12 ou uma seqüência de aminoácidos que émais do que 98% (ou 99%) idêntica a SEQ ID NO: 12, com a condição deque os aminoácidos 233, 256, 327 e 561 sejam idênticos àqueles de SEQ IDNO: 12; uma PB1 que tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQID NO: 14, com a condição de que os aminoácidos 200 e 213 sejam idênti-cos àqueles de SEQ ID NO: 14; e/ou uma PB2 que tem a seqüência de ami-noácidos de SEQ ID NO: 16 ou uma seqüência de aminoácidos que é maisdo que 99% idêntica a SEQ ID NO: 16, com a condição de que os aminoáci-dos 107, 221, 292 e 661 sejam idênticos aos da SEQ ID NO: 16. Em particu-lar, a presente invenção fornece um vírus influenza canino isolado de subtipoH3N8 depositado na American Type Culture Collection 10801 UniversityBlvd., Manassas, VA 21110-2209, EUA em 29 de junho de 2006, como De-pósito de Patente N9 PTA-7694.

O vírus influenza pode ser precipitado por submeter o vírus emmeio aquoso a uma ou mais etapas de insolubilização induzidas pela pre-sença de até 5% em peso de polietileno glicol (PEG) que tem um peso mo-lecular entre 3000 e 20.000 ou outro polímero filamentar linear não carrega-do em uma quantidade equivalente ao poder de solubilização de PEG, sepa-rar uma fração insolubilizada de uma fração não insolubilizada e recuperar ovírus de uma das frações (vide, por exemplo, Patente U.S. Ns 3.989.818).Preferivelmente, a temperatura não excede 35eC, o pH está entre 6 e 9 e aforça iônica do meio aquoso está abaixo do ponto de dessalificação para ovírus. A concentração do vírus no meio aquoso antes da insolubilização cor-responde a um título de hemaglutinação de pelo menos 1 em 32. Partículasvirais agregadas são obtidas, que se acredita que forneçam um melhor efeitoantigênico devido a liberação lenta das partículas virais após vacinação. Se,entretanto, partículas não agregadas ou menos agregadas forem desejadas,elas podem ser dissociadas usando qualquer método adequado, tal como asonicação.

O vírus pode ser atenuado pela passagem em um sistema celu-lar até que o vírus tenha perdido sua habilidade de produzir doença, enquan-to retém totalmente seu caráter imunogênico. Por exemplo, o vírus pode serpassado serialmente em uma cultura de células que se origina de uma es-pécie canina ou outra espécie adequada em uma temperatura de cerca de37QC. A cada passagem, o vírus é coletado de uma cultura e inoculado emum meio contendo nova cultura celular de acordo com os métodos conheci-dos na técnica. Por exemplo, o vírus pode ser coletado de fluidos de culturacelular de tecido e/ou células. Opcionalmente, durante a coleta a cultura ce-lular pode ser sonicada para promover a liberação do vírus. Vide, por exem-plo, Patente U.S. Nos. 5.698.433 e 6.455.298.

Se desejado, uma cepa de influenza pode ser passada pelo me·nos uma vez na cavidade alantóide de ovos embrionados, tais como ovos degalinha, na presença de soro, para se obter vírus resistentes a soro (vide,por exemplo, Patente U.S. N9 3.953.592; Kilbourne et ai, J.Exp. Med. 111:387 (1960); Kilboume, Science 160: 74-75 (abril de 1968); e Laver et ai, Vi-rology 30: 493-501 (1966)). Vacina de influenza de alta potência com baixapirogenicidade e baixa endotoxicidade pode ser obtida pelo tratamento dofluido alantóide concentrado que contem o vírus atenuado seqüencialmentecom acetato de butila e acetato de etila, seguido por evaporação rápida (vi-de, por exemplo, Patente U.S. Ns 4.000.257). Tal vírus pode ser administra-do intranasalmente como uma vacina.

Uma vez inoculado no hospedeiro, o vírus se multiplica em al-guma proporção tal que apenas um pequeno inóculo inicial seja necessário.O vírus deve ser inócuo e a infecção de contatos suscetíveis deve ser man-tida em um mínimo.

Alternativamente, o vírus pode ser inativado pela abolição dareplicação e virulência. Isso pode ser feito por meios químicos ou físicos. Ainativação química pode ser realizada pelo tratamento do vírus com umaenzima, formaldeído, β-propiolactona ou derivados desta, etilenoimina ouderivado desta, um solvente orgânico (por exemplo, hidrocarboneto haloge-nado) e/ou um detergente (por exemplo, Tween®, Triton X®, desoxicolato desódio, sulfobetaína ou sais de cetiltrimetilamônio). Se necessário, composi-ções ativadas quimicamente podem ser neutralizadas. Por exemplo, se for-maldeído é usado para desativar a composição, a composição pode ser neu-tralizada com tio-sulfato. Se necessário, o pH pode subseqüentemente serretornado para um valor de cerca de 7. Alternativamente, o vírus pode serextraído com uma mistura de éter e etanol, as fases aquosa e orgânica po-dem ser separadas e o éter residual pode ser removido da suspensão viralsob pressão reduzida (vide, por exemplo, Patente U.S. N°2 4.431.633). A ina-tivação física pode ser realizada vantajosamente por submeter o vírus a ra-diação rica em energia, tal como luz ultra-violeta, radiação γ ou raios X. Asformas inativadas requerem uma quantidade relativamente alta de inóculo e,portanto uma quantidade correspondentemente grande de material antigêni-co, que tem que ser produzido, testado e distribuído.

Tendo em vista o exposto acima, a presente invenção tambémfornece uma composição que compreende um vírus atenuado ou inativado.O vírus deve estar presente em uma quantidade suficiente para induzir umaresposta imune e, desejavelmente, deve fornecer proteção mediante desafio.Geralmente, um adjuvante, tal como Tween®, Span®, adjuvante completode Freund, saponina, Corynebacterium parvum (Coparvax®), fosfato de a-lumínio, hidróxido de alumínio ou uma mistura desses, é adicionado à com-posição, particularmente se a composição compreender vírus inativados.Hidrolisados de proteínas e/ou aminoácidos podem ser adicionados paraestabilizar a composição (vide, por exemplo, Patente U.S. N° 4.537.769).Alternativamente, a composição pode ser formulada como uma emulsão ó-leo-em-água usando óleos tais como Marcol e/ou Arlacel.

Cepas recombinantes de influenza também podem ser prepara-das, tal como a combinação de uma cepa parental de influenza A, por e-xemplo A2, "superatenuada" (isto é, o número de passagens para atenuaçãoé substancialmente maior do que é normalmente requerido para remover apatogenicidade), com uma cepa de influenza virulento como fornecida aqui(vide, por exemplo, Patente U.S. N° 3.991.179; vide, também, Patente U.S.N° 4.009.258; 4.278.662; 4.318.903; 4.338.296; e 4.693.893). Uma cepa re-combinante preferivelmente tem as características de crescimento de umacepa superatenuada acoplada com propriedades antigênicas, por exemplo,as proteínas HA e NM, da cepa virulenta. A seleção de cepas de vírus influ-enza para formulação de vacina é descrita na Patente U.S. N9 5.162.112.Cepas recombinantes podem ser formuladas como composições para indu-zir uma resposta imune.

Sacarose, monocloreto de arginina, o monoidrato monossódicode ácido glutâmico e hidrolisado de gelatina podem ser usados para estabili-zar uma composição de vírus influenza para armazenamento em um refrige-rador. Vide, por exemplo, Pedido de Patente Publicado U.S. Nq2006/0110406.

Tendo em vista o exposto acima, a presente invenção tambémfornece uma HA isolada ou purificada. A HA tem a seqüência de aminoácidode SEQ ID NO: 4 ou é derivada de um vírus influenza e tem uma seqüênciade aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 4, com acondição de que a seqüência de aminoácidos seja idêntica àquela da SEQID NO: 4 nas posições dos aminoácidos 94 e 233. Um fragmento de HA quecompreende pelo menos nove aminoácidos contíguos (tais como 9, 12, 15,18, 21 ou 24), pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posi-ção 94 ou 233 de SEQ ID NO: 4, também é fornecido.

Uma NM isolada ou purificada também é fornecida. A NM com-preende a seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 2 ou é derivada de umvírus influenza e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que99% idêntica a SEQ ID NO: 2, com a condição de que a seqüência de ami-noácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 2 nas posições dos aminoáci-dos 68 e 134. Um fragmento de NM que compreende pelo menos nove ami-noácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido naposição 68 ou 134 de SEQ ID NO: 2, também é fornecido.

Ainda é fornecida uma NP isolada ou purificada. A NP tem a se-qüência de aminoácido de SEQ ID NO: 6 ou é derivada de um vírus influen-za e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica aSEQ ID NO: 6, com a condição de que a seqüência de aminoácidos sejaidêntica àquela da SEQ ID NO: 6 na posição do aminoácido 402. Um frag-mento de NP que compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos,pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 402 de SEQID NO: 6, também é fornecido.

Ainda é fornecida uma M1 isolada ou purificada. A M1 tem a se-qüência de aminoácido de SEQ ID NO: 8 ou é derivada de um vírus influen-za e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica aSEQ ID NO: 8, com a condição de que a seqüência de aminoácidos sejaidêntica àquela da SEQ ID NO: 8 na posição de aminoácido 111. Um frag-mento de M1 que compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos,pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 111 de SEQID NO: 8, também é fornecido.

Ainda é fornecida uma NS1 isolada ou purificada, que tem a se-qüência de aminoácido de SEQ ID NO: 10.

Uma PA isolada ou purificada também é fornecida. A PA tem aseqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 12 ou é derivada de um vírus in-fluenza e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 98% (ou99%) idêntica a SEQ ID NO: 12, com a condição de que a seqüência de a-minoácidos seja idêntica àquela da SEQ ID NO: 12 nas posições dos amino-ácidos 233, 256, 327 e 561. Um fragmento de PA que compreende pelo me-nos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico aoaminoácido na posição 233, 256, 327 ou 561 de SEQ ID NO: 12, também éfornecido.

Uma PB1 isolada ou purificada também é fornecida. A PB1 tema seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 14 ou é derivada de um vírusinfluenza e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% i-dêntica a SEQ ID NO: 14, com a condição de que a seqüência de aminoáci-dos seja idêntica àquela da SEQ ID NO: 14 nas posições dos aminoácidos200 e 213. Um fragmento de PB1 que compreende pelo menos nove amino-ácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico ao aminoácido na po-sição 200 ou 213 de SEQ ID NO: 14, também é fornecido.

Uma PB2 isolada ou purificada também é fornecida. A PB2 tema seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 16 ou é derivada de um vírus dainfluenza e tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% i-dêntica a SEQ ID NO: 16, com a condição de que a seqüência de aminoáci-dos seja idêntica àquela da SEQ ID NO: 16 nas posições de aminoácido107, 221, 292, e 661. Um fragmento de PB2 que compreende pelo menosnove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico ao amino-ácido na posição 107, 221, 292, ou 661 de SEQ ID NO: 16, também é forne-cido.

As proteínas acima e os fragmentos dessas podem ser purifica-das (acopladas com fragmentação química ou física para gerar fragmentos)ou sintetizadas de acordo com métodos conhecidos na técnica. Vide, porexemplo, Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides 2: 46, AcademicPress, NY (1973), para síntese de proteína em fase sólida, e Schroder et ai,The Peptides, vol. 1, Academic Press, NY (1965), para síntese de proteínaem fase de solução. Sistemas automatizados podem ser usados para reali-zar tais técnicas de acordo com as instruções do fabricante. Quantidadesterapêuticas podem ser produzidas e purificadas recombinantemente.

Alternativamente, proteínas, em particular HA e NM, podem serisoladas por solubilização seletiva, embora deixando partículas subvirais re-siduais que consistem na membrana de lipídio/proteína intacta que encerratodos os outros componentes virais não essenciais. A diferença em tama-nho/densidade das proteínas solubilizadas e das partículas subvirais residu-ais permite a separação com base nas diferenças em propriedades físicaspor gradiente de centrifugação e fracionamento, sedimentação, cromatogra-fia de peneira molecular ou peletização em uma ultracentrífuga. A solubiliza-ção seletiva de HA e NM pode ser obtida pelo tratamento do vírus com umdetergente catiônico (vide, por exemplo, a Patente U.S. N° 4.140.762; a pa-tente 762). O fluido contendo o vírus inteiro obtido da cultura celular podeser tratado com uma enzima de digestão de DNA seguido pela adição de umdetergente catiônico e isolamento de proteínas de antígeno de superfície(vide, por exemplo, a Patente U.S. N° 5.948.410). O fluido pode ser submeti-do a várias etapas de ultracentrifugação ou o vírus pode ser fragmentado napresença de um detergente anfifílico não iônico seguido por filtração pararemover substâncias indesejáveis (vide, por exemplo, a Patente U.S. N°6.048.537). Alternativamente, filtração em membrana e separação químicapodem ser usadas para se obter uma proteína viral (vide, por exemplo, aPatente U.S. Nº 4.327.182). Outros procedimentos estão descritos nas Pa-tente U.S. Nos. 4.064.232 e 4.057.626. Preferivelmente, o vírus é multiplica-do antes do tratamento como exemplificado na patente '762 (col. 2, 11. 10 et seq).

O mapeamento pode ser conduzido para identificar um epitopoindutor de resposta imune de uma proteína viral, isto é "mapeamento de epi-topo". Tal mapeamento envolve a fragmentação de uma proteína em peptí-deos superpostos (tal como peptídeos que compreendem 9, 12, 15, 18, 21 ou 24 aminoácidos). A proteína pode ser fragmentada com uma enzima pro-teolítica. Os peptídeos individuais são então testados quanto a sua habilida-de de se ligar a um anticorpo criado pela proteína nativa ou de induzir ativa-ção de célula T ou célula B. Alternativamente, regiões hidrofílicas da proteí-na podem ser selecionadas, já que resíduos hidrofílicos estão freqüentemen- te sobre a superfície da proteína e, portanto, são acessíveis ao anticorpo. Aanálise cristalográfica por raio X do complexo antígeno-anticorpo tambémpode ser realizada. Motivos potenciais de ligação de âncora de HLA, quesão seqüências de peptídeos que são conhecidas por estarem aptas a seligar a moléculas de MHC, podem ser identificados a partir da seqüência deaminoácidos de uma proteína. Preferivelmente, o epitopo selecionado é umque partilha pouca ou nenhuma identidade de seqüência com seqüênciasamplamente encontradas no animal ao qual uma composição que compre-ende ou expressa um fragmento de proteína será administrada.

Um ácido nucléico isolado ou purificado que codifica uma proteí- na acima descrita ou fragmento dessa, opcionalmente como parte de umvetor, também é fornecido. O ácido nucléico que codifica a HA pode com-preender a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 3 ou um fragmentodessa que codifica pelo menos nove (9, 12, 15, 18, 21 ou 24) aminoácidoscontíguos. Se desejado, uma vacina trivalente baseada em HA pode ser preparada, em que uma das HAs compreende a seqüência de aminoácidosde SEQ ID NO: 4 (vide, por exemplo, Patente U.S. Nos. 5.762.939 e6.245.532; vide, por exemplo, a Patente U.S. Nº 6.740.325 para uma vacinatetravalente). O ácido nucléico que codifica NM pode ter a seqüência de nu-cleotídeos de SEQ ID NO: 1 ou um fragmento dessa que codifica pelo me-nos nove aminoácidos contíguos (vide, por exemplo, Patente U.S. N26.605.457 e Ped. Patente Pub. U.S. Ng 2003/0129197), enquanto que o áci-do nucléico que codifica NP pode ter a seqüência de nucleotídeos de SEQID NO:5 ou um fragmento dessa que codifica pelo menos nove aminoácidoscontíguos, o ácido nucléico que codifica a proteína M1 pode ter a seqüênciade nucleotídeos de SEQ ID NO:7 ou um fragmento dessa que codifica pelomenos nove aminoácidos contíguos, o ácido nucléico que codifica a proteínaNS1 pode ter a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 9, o ácido nucléi-co que codifica PA pode ter a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11ou um fragmento dessa que codifica pelo menos nove aminoácidos contí-guos, o ácido nucléico que codifica PB1 pode ter a seqüência de nucleotí-deos de SEQ ID NO:13 ou um fragmento dessa que codifica pelo menosnove aminoácidos contíguos e o ácido nucléico que codifica PB2 pode ter aseqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 15 ou um fragmento dessa quecodifica pelo menos nove aminoácidos contíguos. Uma pessoa versada natécnica perceberá, entretanto, que devido a degeneração do código genéti-co, há várias outras seqüências de nucleotídeos que podem codificar taisseqüências de aminoácidos.

Os ácidos nucléicos acima, que podem ser DNA ou RNA e frag-mentos desses podem ser sintetizados (vide, por exemplo, OligonucleotideSynthesis, Gait, ed., 1984). Tais moléculas podem incluir nucleotídeos/basesque não ocorrem naturalmente que codificam a seqüência de aminoácidosdesejada. Por exemplo, a base ou açúcar podem ser metilados. Além disso,a estrutura principal da molécula de ácido nucléico pode ser modificado, porexemplo, uma estrutura principal de fosforotioato, metilfosfonato, metilfosfo-rotioato, fosforoditioato e combinações desses.

Alternativamente, vRNA isolado pode ser submetido a transcrip-tase reversa para produzir um híbrido de RNA/DNA, a partir do qual o RNA édigerido e o DNA residual é tratado para produzir um dsDNA que tem umaterminação em alça, que é tratado com uma nuclease fita-simples-específicapara produzir uma cópia bimolecuiar de dupla fita do vRNA (vide, por exem-plo, Patente U.S. N9 4.357.421). Vide, por exemplo, Ped. Patente Pub. U.S.N9 2006/0166321 para o uso de cassetes de transcrição em tandem para apreparação de influenza na ausência de vírus auxiliar.

O ácido nucléico é, opcionalmente, parte de um vetor de DNAque compreende pelo menos um promotor, em cujo caso cada seqüência denucleotídeos está operativamente ligada a um promotor, que pode ser omesmo ou diferente. Além dos promotores, outras seqüências de controle,tais como sinais de terminação e semelhantes, podem ser parte do vetor deDNA.

Por exemplo, o ácido nucléico pode ser introduzido em um vetorde expressão recombinante adequado, tais como aqueles adaptados parabactérias, tais como E. coli e Salmonella typhi, levedura, tais como Saccha-romyces cervisiae ou Pichia pastoris ou fungos filamentosos tal como Asper-gillus nidulans. As bactérias, leveduras e fungos podem ser cultivados emcultura contínua. O polipeptídeo que é produzido durante a cultura pode en-tão ser isolado e purificado. Alternativamente, a molécula de ácido nucléicopode ser introduzida em Poxviridae (por exemplo, vetores baseados em ví-rus da bouba aviária), Herpesviridae (por exemplo, vetores baseados emvírus da pseudo-raiva, vetores baseados no vírus do herpes de peru, vetoresbaseados no vírus do herpes de felinos, vetores baseados no vírus da Iarin-gotraqueíte infecciosa, vetores baseados no vírus do herpes de bovino), A-denoviridae (por exemplo, adenovírus bovino (por exemplo, sorotipo 3), ade-novírus humano (por exemplo, sorotipo 4 ou 7) e adenovírus canino (por e- xemplo, sorotipo 2; CAV2; vide, por exemplo, Patente U.S. N5 6.090.393) ouum vetor de expressão de vírus de inseto, tal como baculovírus recombinan-te (por exemplo, vírus da poliidrose nuclear de Autographa californica(AcNPV)), que, por sua vez, pode ser usado para infectar células SF9 culti-vadas suscetíveis, que são derivadas do inseto Spodotera frugiperda. Outrosvetores virais incluem vírus da vacínia (vide, por exemplo, Patente U.S. N94.722.848), adenovírus, vírus adeno-semelhante, vírus adeno-associado,retrovírus e pox (vide, por exemplo, Hruby, Vet. Parasitol. 29: 281-282(1988); Uiu1 "AIDS Research Reviews," Dekker1 Inc., 1991, 1: 403-416), quepodem ser administrados por uma abrasão da pele ou por injeção, opcio-nalmente como uma formulação lipossomal. Outros vetores incluem o Bacilode Calmette-Guerin (BCG, Stover et ai, Nature 351: 456-460 (1991)), veto-res da toxina do antraz detoxificada e similares. Células de mamíferos, taiscomo células de ovário de hamster chinês (CHO) e até mesmo células deplantas podem ser usadas para expressar o polipeptídeo a partir do constru-to apropriado. O versado na técnica observará que a escolha da célula hos-pedeira afetará a natureza do processamento pós-traducional (por exemplo,glicosilação, enovelamento e similares), que, por sua vez, pode causar im-pacto na imunogenicidade do polipeptídeo e técnicas de purificação subse-qüentes.

A expressão pode ser obtida em qualquer célula hospedeira a-propriada transformada/transfectada com o vetor de expressão. Exemplosde células hospedeiras adequadas incluem, mas não são limitadas àquelasdescritas acima. Assim, a presente invenção também fornece uma célulahospedeira transformada/transfectada com um vetor de expressão.

Sobrenadantes de sistemas hospedeiro/vetor que secretam aproteína ou fragmento dessa no meio de cultura podem ser aplicados a umamatriz de purificação tal como uma coluna de afinidade ou uma coluna detroca de íon. Uma ou mais etapas de HPLC de fase reversa podem ser em-pregadas para purificar mais a proteína recombinante ou fragmento dessa.

A produção de uma proteína ou fragmento dessa como uma pro-teína de fusão pode estabilizar a produção. Isso pode ser obtido pela ligaçãode seqüências de polinucleotídeos que codificam duas ou mais proteínas (oufragmentos dessas) em um vetor de expressão apropriado com ou sem umIigante peptídico. Desejavelmente, as fases de leitura das seqüências depolinucleotídeos estão em fase, tal que uma única proteína de fusão queretém a atividade biológica de cada proteína (ou fragmento dessa) é produ-zida. Um Iigante peptídico de 1 a cerca de 50 aminoácidos pode ser usadopara separar as proteínas resultantes (ou fragmentos dessas) a fim de ga-rantir que cada proteína (ou fragmento dessa) se envolve apropriadamenteem suas estruturas secundária, terciária ou quaternária (vide, por exemplo,Maratea et ai, Gene 49: 39-46 (1985); Murphy et ai, PNAS USA 83: 8258-8262 (1986); Patente U.S. N9 4.935.233; e Patente U.S. Ne 4.751.180). Ahabilidade de adotar uma conformação estendida flexível, a incapacidade deadotar uma estrutura secundária que poderia interagir com aminoácidos fun-cionais em uma ou as proteínas e a ausência de resíduos hidrofóbicos oucarregados que poderiam reagir com uma ou as proteínas são fatores quesão levados em consideração na seleção de um Iigante peptídico. Ligantesnão são necessários quando as terminações das proteínas a serem unidasnão contêm regiões essenciais, tal que as terminações podem ser usadaspara separar domínios funcionais e evitar interferência estérica. Seqüênciasligantes de peptídeo preferidas contêm resíduos de Gli, Asn e Ser. Outrosresíduos neutros próximos, tais como Thr e Ala, também podem ser usados.

Outra(s) seqüência(s) de aminoácidos adicional(ais) podem serselecionadas para aumentar a expressão e/ou imunogenicidade da proteínaou fragmento dessa. Por exemplo, a proteína ou fragmento dessa pode serfundida a cadeia pesada de imunoglobulina G (IgG) ou uma proteína de liga-ção a uma célula apresentadora de antígeno (APC) ou uma proteína de liga-ção a uma célula dendrítica, tal como IL-D, GM-CSF, IL-I , TNF, IL-4, CD40L,CTLA4, CD28, ou Iigante FLT-3. Técnicas, tais como o uso de agentes desi-dratantes, por exemplo, dicicloexilcarbodiimida (DCCI) ou a criação de liga-ções entre grupos sulfidrila, grupos épsilon amino, grupos carboxila e simila-res, podem ser usados. Se desejado, um sítio de clivagem pode ser introdu-zido na proteína de fusão para permitir a separação da proteína (ou frag-mento dessa) da(s) seqüência(s) que não ocorre(m) naturalmente. Exemplosde sítios de clivagem incluem uma seqüência alvo para uma enzima proteolí-tica ou, se a metionina não estiver presente na proteína (ou fragmento des-sa), metionina que por sua vez é clivada pelo brometo de cianogênio. Taismétodos são conhecidos na técnica. A proteína ou fragmento dessa podeser modificada por glicosilação ou outra derivatização (por exemplo, acetila-ção ou carboxilação), também de acordo com métodos conhecidos na técni-ca.A proteína (ou fragmento dessa) pode ser expressa in situ a par-tir de um sistema de expressão adequado. Qualquer construto de DNA, queé eficaz na produção da proteína codificada ou fragmento dessa no ambien-te desejado, pode ser usado para expressar a proteína ou fragmento dessacomo descrito acima.

Alternativamente, a molécula de ácido nucléico pode se compor-tar como um sistema dé expressão eficaz in situ quando injetada em um a-nimal como "DNA nu" (vide, por exemplo, Ulmer et ai., Science 259: 1745-1749 (1993); e Cohen, Science 259: 1691-1692 (1993)). A liberação de DNApode ser facilitada também através do uso de bupivacaína, polímeros e pep-tídeos; alternativamente, complexos catiônicos lipídicos, partículas ou pres-são (vide, por exemplo, Patente U.S. No.5.922.687) podem ser usados.

Exemplos de seqüências de aminoácidos que são pelo menoscerca de ou mais do que 95% idênticas, tal como cerca de 96%, 97%, 98%,ou 99% idênticas a SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, ou 16 incluem seqüên-cias de aminoácidos que contêm uma ou mais substituições, inserções, adi-ções e/ou deleções. A identidade de seqüência pode ser determinada peloalinhamento de seqüências de polipeptídeo e aplicação de algoritmos com-putadorizados disponíveis publicamente, tal como BLASTP (Pearson et ai,PNAS USA 85: 2444-2448 (1988); Pearson, Methods Enzymol. 183: 63-98(1990); e Altschul et ai., Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)). O programaBLASTP está disponível no servidor FTP do National Center for Biotechno-Iogy Information (NCBI) ou NCBI, National Library of Medicine, Edifício 38A,Sala 8N805, Bethesda, MD 20894. Uma vez que as seqüências de polipep-tídeos estejam alinhadas, o número de aminoácidos idênticos sobre as por-ções alinhadas é identificado, o número de aminoácidos idênticos é divididopelo número total de aminoácidos do polipeptídeo de interesse e o resultadoé multiplicado por 100 para determinar o percentual de identidade de se-qüência.

Com relação a isso, uma pessoa versada na técnica observaráque um fragmento de uma dada seqüência de aminoácidos pode ser pelomenos cerca de ou mais do que 95% idêntica, tal como 96%, 97%, 98% ou99% idêntica à seqüência de aminoácidos. Assim, fragmentos são pretendi-dos por ser abrangidos por "uma seqüência de aminoácidos que é pelo me-nos cerca de ou mais do que 95% (ou 96%, 97%, 98% ou 99%) idêntica aSEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, ou 16." Tais fragmentos retêm desejavel-mente a imunogenicidade da proteína de extensão completa. Fragmentosfuncionais podem ser gerados por análise mutacional do ácido nucléico quecodifica a proteína e subseqüente expressão da proteína mutante resultanteou por digestão química/enzimática da proteína em si.

Modificações, tais como substituições, inserções, adições e/oudeleções, podem ser introduzidas no ácido nucléico ou na proteína (ou frag-mento dessa) de acordo com métodos conhecidos na técnica (vide, por e-xemplo, Adelman et ai, DNA 2: 183 (1983), para mutagênese sítio-específica direcionada por oligonucleotídeo). Desejavelmente, a modificaçãonão diminui substancialmente a imunogenicidade do fragmento de proteí-na;ao invés disso, é preferido que a imunogenicidade permaneça substanci-almente à mesma ou aumente em relação a proteína não modificada.

Uma "substituição conservativa" é uma na qual um aminoácido ésubstituído por outro aminoácido que tem propriedades similares, isto é, es-trutura secundária similar e natureza hidropática. Substituições de aminoáci-dos podem ser feitas com base na similaridade em polaridade, carga, solubi-lidade, hidrofobicidade, hidrofilicidade e/ou natureza antipática dos resíduos.Por exemplo, aminoácidos carregados negativamente, tais como ácido as-pártico e ácido glutâmico, podem ser trocados, enquanto que aminoácidoscarregados positivamente, tais como Iisina e arginina, podem ser trocados eaminoácidos com grupos de cabeça polar não-carregados que tem valoresde hidrofilicidade similares podem ser trocados. Com relação a isso, leucina,isoleucina e valina podem ser trocados, glicina e alanina podem ser troca-dos, asparaginase e glutamina podem ser trocados e serina, treonina, fenila-Ianina e tirosina podem ser trocados. Outros grupos de aminoácidos quepodem ser trocados incluem: (1) ala, pro, gli, glu, asp, gln, asn, ser e thr; (2)cys, ser, tir e thr; (3) vai, ile, leu, met, ala e phe; (4) lis, arg e his; e (5) phe,tir, trp, e his.Tendo em vista o exposto acima, uma composição que compre-ende a proteína/ácido nucléico isolado ou purificado ou fragmento de qual-quer um dos anteriores e um veículo biologicamente aceitável também é for-necida. O ácido nucléico ou fragmento desse pode ser parte de um vetor.

Vide, por exemplo, Patente U.S. N9 4.029.763, que está direcionada parauma vacina de influenza que compreende, como um ingrediente ativo, NM ePatente U.S. Nq 4.140.762 que está direcionada para uma vacina de influen-za que compreende como ingredientes ativos, HA e NM. A Patente U.S. Ne4.826.687 descreve a adição do dipeptídeo muramil a uma vacina que.com-preende HA e NM. Se desejado, polipeptídeos que correspondem substan-cialmente aos aminoácidos 148-162, 163-166, e/ou 215-239 de M1 podemser adicionados a uma composição de um polinucleotídeo/ácido nucléico oufragmento desse (vide, por exemplo, Patente U.S. Nos. 5.136.019;5.616.327; e 5.741.493). Qualquer veículo biologicamente aceitável adequa-do pode ser usado na composição. Por exemplo, a(s) proteína(s)/ácido(s)nucléico(s)/fragmento(s) desse(s) podem ser ressuspensos em um diluente,por exemplo, solução de cloreto de sódio 0,9%, que é opcionalmente tampo-nada com, por exemplo, tampão fosfato. Qualquer sacarose que permaneçada purificação do vírus pode ser reduzida por diálise. Diálise em cromatogra-fia em gel pode ser usada para remover qualquer detergente catiônico re-manescente. Preferivelmente, a proteína ou fragmento dessa está presenteem uma quantidade suficiente para induzir uma resposta imune (isto é, celu-lar ou humoral) em um animal. Um veículo freqüentemente selecionado parafármacos e antígenos é poli(d,l-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA). PLGA é umpoliéster biodegradável e pode ser usado para a liberação controlada de an-tígeno (Eldridge et ai, Curr. Topics Micro. Immuno. 146: 59-66 (1989); videtambém Patente U.S. No 6.090.393). A captura de antígenos em microesfe-ras de PLGA de 1-10 μ de diâmetro tem mostrado ter um efeito adjuvantenotável quando administradas oralmente.

Se desejado, um agente conservante ou um agente inativante,tal como formaldeído, pode ser adicionado. Uma quantidade convencionalde agente conservante/inativante é de 1 parte por 10.000 partes.Se desejado, uma ou mais proteínas (ou fragmentos imunogêni-cos dessas), tal como HA descrita acima, podem ser combinadas com pro-teossomos. Vide, por exemplo, Patente U.S. No 6.743.900 e Ped. PatentePub. U.S. Ns 2004/0156867.

A imunogenicidade pode ser melhorada pela inclusão de adju-vantes imunológicos convencionais, tais como hidróxido de alumínio (porexemplo, cerca de 0,2%) ou fosfato de alumínio, alumínio (vide, por exem-plo, Patente U.S. Nos. 6.372.223. 6.635.246. 6.861.244 e 7.052.701 e Ped.Patente Pub. U.S. Nos. 2004/0096464 e 2006/0147468), quitosana (vide, porexemplo, Patente U.S. Nos. 6.136.606 e 6.534.065), alume, tal como na for-ma de hidróxido de alumínio, fosfato de alumínio e oxido de alumínio, óleosminerais (por exemplo, Bayol F® e Marcol 52®), adjuvante completo de Fre-und, adjuvante incompleto de Freund1 dipeptídeo de muramil, monofosforillipídio A, e saponinas incluindo o componente Quil A. A imunogenicidadetambém pode ser melhorada pela adição de uma citocina, tal como uma in-terleucina ou pela conjugação de proteínas ou fragmentos dessas. Preferi-velmente, a proteína ou fragmento dessa é conjugada com um veículo ma·cromolecular, tal como uma proteína (por exemplo, albumina sérica, hemoci-anina do molusco keyhole Iimpet (KLH), imunoglobulina, tiroglobulina e al-bumina do ovo), polissacarídeo (por exemplo, sefarose funcionalizada emlátex, agarose, esferas de celulose e similares), fosfolipídio, aminoácidospoliméricos (por exemplo, ácido poliglutâmico, polilisina e similares) ou co-polímeros de aminoácidos (vide, por exemplo, Patente U.S. Nos. 5.136.019e 5.612.037). Alternativamente, a proteína ou fragmento dessa pode ser en-capsulada com um proteolipossoma ou vesícula lipídica.

A composição, que pode induzir uma resposta imune, pode serpreparada na forma de uma suspensão ou pode ser liofilizada. Se liofilizada,é preferível adicionar um ou mais estabilizadores. Estabilizadores adequa-dos são, por exemplo, sacarose, fosfato, glutamato e albumina (SPGA; Bo-varnick, J. Bacteriol. 59: 509 (1950)), carboidratos (por exemplo, sorbitol,manitol, amido, dextran e glicose), proteínas (por exemplo, albumina e case-ína) ou produtos de degradação desses, agentes que contêm proteínas (porexemplo, soro bovino ou leite desnatado) e tampões (por exemplo, fosfatosde metal alcalino).

Alternativamente, a composição pode ser formulada como umacomposição de liberação controlada. O vírus atenuado/inativado ou vetorrecombinante pode ser microencapsulado com polímeros, tais como policar-bonatos, poliésteres, poliuretanos, poliortoesteres e poliamidas. O polímeroparticular selecionado depende de vários fatores incluindo a reprodutibilida-de da síntese do polímero e microencapsulação, custo de materiais e pro-cesso, perfil toxicológico, necessidades de cinética de liberação variável ecompatibilidade físico-química do polímero e do vírus/vetor.

As composições descritas aqui podem ser usadas sozinhas ouem combinação com outros ingredientes/composições ativas. Exemplos in-cluem composições, que podem induzir uma resposta imune contra cinomo-se canina, hepatite canina infecciosa (CAV-1 e CAV-2), raiva, parainfluenza,coronavírus canino, sarampo, Ieptospirose e Bordetella. Foi descrito que po-lifenóis inibem a infecção por influenza em seres humanos (vide, por exem-plo, Patente U.S. N9 5.173.922; a patente Ό22). Conseqüentemente, a adi-ção de um polifenol, tal como gaiato de epigalocatequina, gaiato de epicate-quina, epigalocatequina, epicatequina, teaflavina livre, monogalato de teafla-vina A, monogalato de teaflavina B e/ou digalato de teaflavina podem serbenéficos (vide a patente '922). Inibidores de NM são descritos na PatenteU.S. N2 5.453.533. O uso de citocinas como imunopotencializadores e a en-capsulação Iipossomal são descritos na Patente U.S. Nq 5.919.480.

A quantidade de ácido nucléico na composição pode variar am-piamente. Por exemplo, a concentração pode variar de menos do que cercade 0,1% até cerca de 20-50% ou mais em peso, geralmente pelo menos cer-ca de 2%. A concentração de proteína na composição também pode variaramplamente. Por exemplo, a concentração pode variar entre menos do quecerca de 0,1% até cerca de 20-50% ou mais em peso, geralmente pelo me-nos cerca de 2%. O volume e a viscosidade do fluido são levados em consi-deração quando se determinar a concentração final.

Conseqüentemente, um método de induzir uma resposta imuneao vírus influenza canino também é fornecido. A suscetibilidade de um ani-mal à infecção pode ser avaliada usando o teste de neutralização por redu-ção em placas (Patente U.S. Ne 4.315.073) ou teste de hemaglutinação. Ométodo compreende administrar ao animal uma composição acima mencio-nada que compreende uma proteína/ácido nucléico isolado ou purificado oufragmento desses. Se a composição compreende um ácido nucléico (oufragmento desse) como parte de um vetor, preferivelmente a proteína (oufragmento dessa) é expressa em uma quantidade suficiente para induziruma resposta imune em um animal. Por exemplo, uma dose única de cercade 9 a cerca de 43 unidades internacionais por kg de peso corporal do ani-mal pode ser administrada. Para mamíferos maiores, uma dose única podecompreender de cerca de 600 a cerca de 3000 unidades internacionais porkg de peso corporal. Para composições de vacina preparadas pelo cultivo devírus na cavidade alantóide de ovos férteis, coleta do vírus e, se desejado,estabilização do vírus coletado com um estabilizante, tal como uma peptonaou sacarose, e então distribuição em frascos de vidro para subseqüente Iiofi-lização, uma unidade de dosagem de vacina eficaz pode conter pelo menos107 EID50 (50% dose infectante de ovo) de vírus. Na última situação, a vaci-na Iiofilizada é reconstituída pela adição de água ou outro diluente farmaceu-ticamente aceitável antes da administração, tal como na forma de um spraynasal ou gotas nasais. Se desejado, a vacina pode ser administrada em du-as dosagens sucessivas em um intervalo de uma semana.

A composição pode ser administrada a filhotes como dose únicana idade de 12 semanas ou repetidamente começando na idade de 6 sema-nas (por exemplo, 6, 9 e 12 semanas) ou semanalmente a partir de 4 sema-nas. A dosagem eficaz e a via de administração são determinadas pela natu-reza da composição, natureza do produto de expressão, LD50 e, se o vetorrecombinante é usado, do nível de expressão do vetor, assim como da raçado cão e sua idade, sexo, peso e condição. Dosagens de produto expressopodem variar de algumas a poucas centenas de microgramas, por exemplo,5-500 μg. Dosagens preferidas de vírus ou vetor recombinante podem variarde cerca de 103 a cerca de 106 pfu. A dose para a cepa viva atenuada podeser de pelo menos cerca de 103TCID50.

As composições podem ser administradas parenteralmente (istoé, por injeção (por exemplo, intradérmica, subcutânea ou intramuscular) oupela via da infecção, nasalmente) ou enteralmente (isto é, por administraçãooral). O uso de um agente gelificante e um muco- ou bioadesivo para intensi-ficar a resposta imune contra uma composição imunogênica administradaintradermicamente está descrito no Ped. Patente Pub. U.S. Nq2005/0255121. Se desejado, a composição para indução de resposta imunepode ser administrada através de água ou xarope de acordo com Chu et ai(Ped. Patente Pub. U.S. N- 2006/0171960, que foi publicado em 3 de agostode 2006). A administração oral é vantajosa à medida que ela evita injeçãointramuscular demorada e trabalhosa que, por sua vez pode criar estressepara o animal e desconforto. O desconforto, por sua vez, pode afetar o de-sempenho de cães de corrida. Alternativamente, a composição que compre-ende um vetor recombinante que expressa pelo menos um epitopo indutorde resposta imune pode ser aplicado diretamente à pele para expressão lo-calizada e indução de resposta imune.

A eficácia da composição, que pode induzir uma resposta imune,pode ser demonstrada pela exposição de filhotes a uma cepa virulenta devírus influenza canino. Cães não tratados devem desenvolver sinais clínicoscaracterísticos de infecção viral por influenza canina enquanto que cães tra-tados não devem.

Os vetores recombinantes e produtos expressos a partir delespodem ser usados para produzir anticorpos, tais como anticorpos policlonais(pAb) e anticorpos monoclonais (mAb), de acordo com métodos conhecidosna técnica (Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988); Harlow & Lane,Using Antibodies: A Laboratory Manual (1998), Cold Spring Harbor Labora-tory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Shepherd & Dean, MonoclonalAntibodies: A Practical Approach1 Oxford University Press, U.S.A. (2000)); eHarris & Adair1 Antibody Therapeutics, CRC Press, Inc., Boca Raton, FL(1997)). Os anticorpos, em particular mAbs, podem ser usados em ensaiosde ligação e kits/testes de diagnóstico para determinar a presença/ausênciade um vírus influenza canino ou se uma resposta imune ao vírus foi ou nãoestimulada. Os anticorpos também podem ser usados para recuperar mate-rial por cromatografia de imunoadsorção.

Anticorpos também podem fornecer imunização passiva. Porexemplo, soros imunes parcialmente purificados de animais hospedeiros oude linhagens celulares de hibridoma podem ser injetados em um animal. Osanticorpos fornecem um efeito terapêutico pela ligação e neutralização devírus de influenza infeccioso.

Uma composição que compreende um anticorpo antiidiotípicoque tem uma imagem interna de um epitopo de uma proteína descrita acima,tal como uma proteína que consiste na seqüência de aminoáçidos SEQ IDNO: 1 ou SEQ ID NO: 3, também é fornecida.

Uma pessoa versada na técnica apreciará que um anticorpo an-tiidiotípico que tem uma imagem interna de um epitopo, tal como aquelesdescritos aqui, pode ser preparado. Vide, por exemplo, Herlyn et ai, Science232: 100-102 (1986)). Métodos de preparação de anticorpos monoclonais epoliclonais antiidiotípicos, que tem a imagem interna do polipeptídeo, estãodescritos na Patente U.S. Nq 5.053.224, por exemplo. Resumidamente, anti-corpos policlonais antiidiotípicos podem ser produzidos por imunizar animaiscom anticorpos monoclonais idiotípicos surgidos contra o polipeptídeo e ras-treados quanto a reatividade com o polipeptídeo e rastrear por anti-soros,que reagem com anticorpos idiotípicos ao polipeptídeo. Anticorpos monoclo-nais (mAbs) também podem ser preparados a partir de tais animais usandotécnicas padronizadas de imortalização de células que secretam anticorposdo animal e rastreamento de culturas com anticorpos idiotípicos em competi-ção com o polipeptídeo. Apesar de mAbs serem preferidos, anticorpos poli-clonais (pAbs), que são preparados em uma variedade de sistemas de ma-míferos, também podem ser usados.

Outro método para indução de uma resposta imune a CIV emum canino também é fornecido. Esse método compreende administrar aocanino uma quantidade eficaz dè uma composição que compreende um an-ticorpo antiidiotípico como descrito acima.

As moléculas de ácido nucléico isoladas ou purificadas ou veto-res que as compreendem podem ser usadas para gerar sondas/iniciadoresde DNA, que podem ser usados para detectar a presença ou ausência de DNA hibridizável ou amplificar DNA, tal como cDNA.

Proteínas marcadas ou fragmentos dessas, assim como ácidosnucléicos marcados ou fragmentos desses, podem ser usados em ensaios.Métodos de ensaio incluem fluoro-imunoensaios (Smith et ai, Ann. Clin. Bio-chem. 18: 253-275 (1981)), radioimunoensaios (RIA), ensaios imunoabsor- ventes ligados à enzima (ELISA) e técnica de imunoensaio multiplicado porenzima (EMIT; vide Enzyme lmmunoassay, Maggio, ed., CRC Press, Inc.,Boca Raton, FL, 1980. pp. 141-150; 234-235,e 242-243). Tais métodos po-dem ser usados para detectar a presença do vírus e para diagnosticar o es-tado de infecção.

O próprio vírus pode ser usado como um vetor. O uso de víruscomo vetores está dentro da técnica.

EXEMPLO

O seguinte exemplo serve para ilustrar a presente invenção. Oexemplo não pretende limitar o escopo da invenção de modo algum. O e- xemplo descreve a identificação e caracterização parcial de um vírus influ-enza canino.

Surtos de doença respiratória aguda, caracterizados por tosse,febre, respiração rápida e descarga nasal hemorrágica, ocorreram entre gal-gos de duas pistas de corrida no leste e oeste de Iowa em abril de 2005. A- pesar de um grande percentual de cães ter se recuperado, muitos sucumbi-ram à pneumonia hemorrágica.

Pulmões de cães afetados exibiram extensa descoloração devermelho a preto avermelhado com firmeza palpável de moderada a acentu-ada e pleurite fibrinosa leve. Seções de pulmão foram caracterizadas por hemorragia intersticial severa à pneumonia broncointersticial. Alteração in-tersticial desigual com espessamento septal alveolar, coágulos de resíduosnos alvéolos e atelectasia associada foram evidentes. Pneumonia broncoin-tersticial piogranulomatosa focalmente extensa com dilatação de vias aéreaspor células degeneradas e resíduos foi observada. Vasculite dispersa e tro-mos vasculares eram aparentes.

Testes microbiológicos para agentes virais e bacterianos con-vencionais não revelaram quaisquer patógenos significativos exceto Strepto-coccus equi subsp. zooepidemicus, que estava presente em tecidos pulmo-nares de todos os animais examinados. Duas das quatro amostras de pul-mão testadas foram positivas para vírus da influenza usando a reação emcadeia da polimerase com transcriptase reversa em tempo real (RT- PCR;Harmon et al., Development of a PCR-based differential test for H1N1 andH3N2 swine influenza viruses. In: Proceedings of the 42nd Annual Meeting ofAmerican Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. San Diego,CA. outubro de 1999. p. 44.). Imunohistoquímica usando anticorpo monoclo-nal (mAb) específico para NP de vírus influenza (Vincent et ai, J. Vet. Diagn.Invest. 9: 191-195 (1997)) também foi positiva dentro de lesões pneumôni-cas virais em ambos os pulmões assim como o teste ELISA de captura deantígeno (Directgen® Flu A, Becton/Dickinson, Sparks, MD) das amostras.Amostras de lavagem broncoalveolar de dois pulmões positivos foram testa-das para o vírus da influenza por PCR.

O isolamento do vírus foi tentado por que a detecção de vírusinfluenza em pulmões de caninos era uma observação inesperada, já queexistia apenas um único relato de infecção por vírus da influenza em caninos(Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus from racing greyhounds withfatal hemorrhagic pneumonia. In: Proceedings of the 47th Annual Meeting ofAmerican Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. Greensboro,NC. Outubro de 2004. p. 158.). Um vírus que era capaz de aglutinar célulassangüíneas vermelhas de galo foi isolado em células de rim canino Madin-Darby (MDCK) a partir do pulmão e fluido de lavagem broncoalveolar de umdos dois animais nos quais o vírus influenza foi detectado por ensaio de i-munohistoquímica (IHC) e PCR. O isolado foi determinado por PCR comosendo o vírus influenza do subtipo H3. O vírus isolado foi subtipado comoH3N8 usando ensaios de inibição de HA e inibição de NM. O isolado de ví-rus foi reconhecido por anti-soros surgidos contra vários vírus influenza H3de eqüino, incluindo Miami ((A/Eq/MI/1/63-H3N8) 640-1280),AK((A/Eq/AK/29759/91 -H3N8) 320-640), e Kentucky ((A/Eq/Kentucky/81-H3N8) 160-320).

O seqüenciamento dos genes de HA e NA de ambos os isoladosrevelou 100% e 99,8% de identidade, respectivamente, entre os dois isola-dos. Filogeneticamente, o gene de HA dos isolados era geneticamente pró-ximo (96-98% de homologia de nucleotídeo) ao gene de HA dos vírus influ-enza H3N8 de eqüino recentes (Macken et ai, The value of a database insurveillance and vaccine selection. In: Options for the. Control of InfluenzaIV. Osterhaus et ai, eds. Elsevier Science, Amsterdam. 2001. pp. 103-106.).O gene de NA dos isolados também mostrou 96-98% de homologia com ogene de NA de vírus influenza H3N8 de eqüino recentes. Já que galgos deduas pistas de corrida diferentes, que estão em áreas geograficamente re-motas em lowa, sucumbiram simultaneamente à doença sem o envolvimentode cavalos doentes, demonstra-se que o isolado do vírus influenza é umacepa adaptada a caninos que pode se perpetuar e disseminar entre cães. S.zooepidemicus, que tem sido implicado na doença respiratória e problemasassociados a septicemia em várias espécies de animais diferentes (Wood etai, J. Clin. Microbiol. 43: 120-126 (2005); e Gillespie et ai, The General Sta-phylococcus and Streptococcus. In: Hagan and Bruner1S Infectious Diseasesof Domestic Animais. Ί- ed. Comstock/Cornell University Press. Ithaca, NY.1981. pp. 164-180)), provavelmente contribuiu para a severidade da doença.

Todas as referências, incluindo publicações, pedidos de patentee patentes, citadas aqui estão incorporadas por referência na mesma exten-são como se cada referência fosse individualmente e especificamente indi-cada por ser incorporada por referência e fossem descritas aqui em sua tota-lidade.

O uso dos termos "um", "uma", "a", "o" e referências similares nocontexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das seguin-tes reivindicações) deve ser considerado como cobrindo tanto a forma nosingular como no plural, a menos que indicado aqui de outra maneira ou cia-ramente contradito pelo contexto. A recitação de faixas de valores pretendemeramente servir como método abreviado de se referir individualmente acada valor separado que cai dentro da média, a menos que indicado de ou-tra maneira, e cada valor separado está incorporado no pedido como se ti-vesse sido individualmente citado aqui. Todos os métodos descritos aquipodem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que indicadoaqui de outra maneira ou a menos que contradito claramente pelo contexto.O uso de qualquer um e de todos os exemplos, ou da linguagem exemplar(por exemplo, "tal como") fornecidos aqui, pretende meramente esclarecermelhor a invenção e não impõe uma limitação ao escopo da invenção a me-nos que reivindicado de outra maneira. Nenhuma linguagem no pedido deveser considerada como indicando qualquer elemento não reivindicado comoessencial para a prática da invenção.

As modalidades preferidas dessa invenção estão descritas aqui,incluindo o melhor modo conhecido pelos inventores de realizar a invenção.Deve ficar compreendido que as modalidades ilustradas são apenas exem-plares e não devem ser tomadas como Iimitantes do escopo da invenção.LISTAGEM DE SEQÜENCIA

<110> DEPOSITANTE: Iowa State University Research Foundatin, Inc.

<120> TÍTULO DA INVENÇÃO: VÍRUS INFLUENZA E COMPOSIÇÕES RELACIONADAS E USO

<130> REFERÊNCIA: 42885-104201

<140> NÚMERO DO PEDIDO ATUAL: PCT/US06/60025

<141> DATADO PEDIDO ATUAL: 2006-10-17

<150> NÚMERO DO PEDIDO PRIORITÁRIO: US 60/727,808

<151> DATA DE DEPÓSITO PRIORITÁRIO: 2005-10-18

<150> NÚMERO DO PEDIDO PRIORITÁRIO: US 11/539,123

<151> DATA DE DEPÓSITO PRIORITÁRIO: 2006-10-05

<160> NÚMERO DESEQ ID NOS: 16

<170> SOFTWARE: Patentln versão 3.3

<210> SEQIDNO 1<211> TAMANHO: 1450<212> TIPO: DNA<213> ORGANISMO: vírus Influenza A<220> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS<222> LOCALIZAÇÃO: (9).. (1418)<400> SEQÜÊNCIA: 1

agtttaaa atg aat cca aat caa aag ata ata gca att gga ttt gca tcaMet Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Ala Ile Gly Phe Ala Ser

1 5 10 ttg ggg ata tta ate att aat gtc att ctc cat gta gtc age att ataLeu Gly Ile Leu Ile Ile Asn Val Ile Leu His Val Val Ser Ile Ile15 20 25 30gta aca gta ctg gtc ctc aat aac aat aga aca gat ctg aac tgc aaaVal Thr Val Leu Val Leu Asn Asn Asn Arg Thr Asp Leu Asn Cys Lys 35 40 45 ggg acg ate ata aga gaa tac aat gaa aca gta aga gta gaa aaa CttGly Thr Ile Ile Axg Glu Tyr Asn Glu Thr Val Arg Val Glu Lys Leu 50 55 60 act caa tgg tat aat acc agt aca att aag tac ata gag aga cct tcaThr Gln Trp Tyr Asn Thr Ser Thr Ile Lys Tyr Ile Glu Arg Pro Ser 65 70 75 aat gaa tac tac atg aat aac act gaa cca Ctt tgt gag gcc caa ggcAsn Glu Tyr Tyr Met Asn Asn Thr Glu Pro Leu Cys Glu Ala Gln Gly80 85 90 ttt gca cca ttt tcc aaa gat aat gga ata cga att ggg tcg aga ggcPhe Ala Pro Phe Ser Lys Asp Asn Gly Ile Arg Ile Gly Ser Arg Gly95 100 105 110cat gtt ttt gtg ata aga gaa cct ttt gta tca tgt tcg ccc tca gaaHis Val Phe Val Ile Arg Glu Pro Phe Val Ser Cys Ser Pro Ser Glu 115 120 125 tgt aga acc ttt ttc ctc aca cag ggc tca tta ctc aat gac aaa catCys Arg Thr Phe Phe Leu Thr Gln Gly Ser Leu Leu Asn Asp Lys His 130 135 140 tct aac ggc aca ata aag gat cga age ccg tat agg act ttg atg agtSer Asn Gly Thr Ile Lys Asp Arg Ser Pro Tyr Arg Thr Leu Met Ser 145 150 155 gtc aaa ata ggg caa tca ccc aat gta tat caa gct agg ttt gaa tcgVal Lys Ile Gly Gln Ser Pro Asn Val Tyr Gln Ala Arg Phe Glu Ser 160 165 170 gtg gca tgg tca gca aca gca tgc cat gat gga aaa aaa tgg atg aca Val Ala Trp Ser Ala Thr Ala Cys His Asp Gly Lys Lys Trp Met Thr 175 180 185 190 gtt gga gtc aca ggg ccc gac aat caa gca att gca gta gtg aac tat Val Gly Val Thr Gly Pro Asp Asn Gln Ala Ile Ala Val Val Asn Tyr 195 200 205 gga ggt gtt ccg gtt gat act att aat tca tgg gca ggg gat att tta Gly Gly Val Pro Val Asp Thr Ile Asn Ser Trp Ala Gly Asp Ue Leu 210 215 220 aga acc caa gaa tca tca tgc acc tgc att aaa gga gac tgt tat tgg Arg Thr Gln Glu Ser Ser Cys Thr Cys Ile Lys Gly Asp Cys Tyr Trp 225 230 235 gta atg act gat gga ccg gca aat agg caa gct aaa tat agg ata ttc Val Met Thr Asp Gly Pro Ala Aen Arg Gln Ala Lys Tyr Arg Ile Phe 240 245 250 aaa gca aaa gat gga aga gta att gga caa act gat ata agt ttc aat Lys Ala Lys Asp Gly Arg Val Ile Gly Gln Thr Asp Ile Ser Phe Asn 255 260 265 270 ggg gga çac ata gag gag tgt tct tgt tac ccc aat gaa ggg aag gtg Gly Gly His Ile Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asn Glu Gly Lys Val 275 280 285 gaa tgc ata tgc agg gac aat tgg act gga aca aat aga cca att ctg Glu Cys Ile Cys Arg Asp Asn Trp Thr Gly Thr Asn Arg Pro Ile Leu 290 295 300 gta ata tct tct gat cta tcg tac aca gtt gga tat ttg tgt gct ggc Val Ile Ser Ser Asp Leu Ser Tyr Thr Val Gly Tyr Leu Cys Ala Gly 305 310 315 att ccc act gac act cct agg gga gag gat agt caa ttc aca ggc tca 1·Ile Pro Thr Asp Thr Pro Arg Gly Glu Asp Ser Gln Phe Thr Gly Ser 320 325 330 tgt aca agt cct ttg gga aat aaa gga tac ggt gta aaa ggc ttc ggg 1·Cys Thr Ser Pro Leu Gly Asn Lys Gly Tyr Gly Val Lys Gly Phe Gly 335 340 345 350 ttt cga caa gga act gac gta tgg gcc gga agg aca att agt agg act 1Phe Arg Gln Gly Thr Asp Val Trp Ala Gly Arg Thr Ile Ser Arg Thr 355 360 365 tca aga tca gga ttc gaa ata ata aaa ate agg aat ggt tgg aca cag 1Ser Arg Ser Gly Phe Glu Ile Ile Lys Ile Arg Asn Gly Trp Thr Gln 370 375 380 aac agt aag gac caa ate agg agg caa gtg att ate gat gac cca aat 1.Asn Ser Lys Asp Gln Ile^ Arg Arg Gln Val Ile Ile Asp Asp Pro Asn 385 390 395 tgg tca gga tat age ggt tct ttc aca ttg ccg gtt gaa ctg aca aaa 1.Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Thr Leu Pro Val Glu Leu Thr Lys 400 405 410 aag gga tgt ttg gtc CCC tgt ttc tgg gtt gaa atg att aga ggt aaa 1.Lys Gly Cys Leu Val Pro Cys Phe Trp Val Glu Met Ile Arg Gly Lys 415 420 425 430 cct gaa gaa aca aca ata tgg acc tct age age tcc att gtg atg tgt 1.Pro Glu Glu Thr Thr Ile Trp Thr Ser Ser Ser Ser Ile Val Met Cys 435 440 445 gga gta gat cat aaa att gcc agt tgg tca tgg cac gat gga gct att 1.Gly Val Asp His Lys Ile Ala Ser Trp Ser Trp His Asp Gly Ala Ile 450 455 460 Ctt ccc ttt gac ate gat aag atg taatttacga aaaaaactcc ttgtttctac 1Leu Pro Phe Asp Ile Asp Lys Met 465 470

ta 1

<210> SEQ ID NO 2

<211> TAMANHO: 470

<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Influenza A vírus

<400> SEQÜÊNCIA: 2Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Ala Ile Gly Phe Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15

Ile Leu Ile Ile Asn Val Ile Leu His Val Val Ser Ile Ile Val Thr 20 25 30

Val Leu Val Leu Asn Asn Asn Arg Thr Asp Leu Asn Cys Lys Gly Thr 35 40 45

Ile Ile Arg Glu Tyr Asn Glu Thr Val Arg Val Glu Lys Leu Thr Gln 50 55 60

Trp Tyr Asn Thr Ser Thr Ile Lys Tyr Ile Glu Arg Pro Ser Asn Glu 65 70 75 80

Tyr Tyr Met Asn Asn Thr Glu Pro Leu Cys Glu Ala Gln Gly Phe Ala 85 90 95

Pro Phe Ser Lys Asp Asn Gly Ile Arg Ile Gly Ser Arg Gly His Val 100 105 110 Phe Val Ile Arg Glu Pro Phe Val Ser Cys Ser Pro Ser Glu Cys Arg 115 120 125

Thr Phe Phe Leu Thr Gln Gly Ser Leu Leu Asn Asp Lys His Ser Asn 130 135 140 Gly Thr Ile Lys Asp Arg Ser Pro Tyr Arg Thr Leu Met Ser Val Lys 145 150 155 160

Ile Gly Gln Ser Pro Asn Val Tyr Gln Ala Arg Phe Glu Ser Val Ala 165 170 175 Trp Ser Ala Thr Ala Cys His Asp Gly Lys Lys Trp Met Thr Val Gly 180 185 190

Val Thr Gly Pro Asp Asn Gln Ala Ile Ala Val Val Asn Tyr Gly Gly 195 200 205

Val Pro Val Asp Thr Ile Asn Ser Trp Ala Gly Asp Ile Leu Arg Thr210 215 220 Gln Glu Ser Ser Cys Thr Cys Ile Lys Gly Asp Cys Tyr Trp Val Met225 230 235 240

Thr Asp Gly Pro Ala Asn Arg Gln Ala Lys Tyr Arg Ile Phe Lys Ala 245 250 255 Lys Asp Gly Arg Val Ile Gly Gln Thr Asp Ile Ser Phe Asn Gly Gly 260 265 270 His Ile Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asn Glu Gly Lys Val Glu Cys275 280 285

Ile Cys Arg Asp Asn Trp Thr Gly Thr Asn Arg Pro Ile Leu Val Ile 290 295 300

Ser Ser Asp Leu Ser Tyr Thr Val Gly Tyr Leu Cys Ala Gly Ile Pro 305 310 315 320 Thr Asp Thr Pro Arg Gly Glu Asp Ser Gln Phe Thr Gly Ser Cys Thr 325 330 335

Ser Pro Leu Gly Asn Lys Gly Tyr Gly Val Lys Gly Phe Gly Phe Arg 340 345 350 Gln Gly Thr Asp Val Trp Ala Gly Arg Thr Ile Ser Arg Thr Ser Arg 355 360 365

Ser Gly Phe Glu Ile Ile Lys Ile Arg Asn Gly Trp Thr Gln Asn Ser 370 375 380

Lys Asp Gln Ile Arg Arg Gln Val Ile Ile Asp Asp Pro Asn Trp Ser 385 390 395 400 Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Thr Leu Pro Val Glu Leu Thr Lys Lys Gly 405 410 415 Cys Leu Val Pro Cys Phe Trp Val Glu Met Ile Arg Gly Lys Pro Glu 420 425 430 Glu Thr Thr Ile Trp Thr Ser Ser Ser Ser Ile Val Met Cys Gly Val 435 440 445

Asp His Lys Ile Ala Ser Trp Ser450 455

Phe Asp Ile Asp Lys Met Trp His Asp Gly Ala Ile Leu Pro465 470 460

<210> SEQ ID 1 NO 3

<211> TAMANHO: 1762

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A Virus

<220> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS

<222> LOCALIZAÇÃO:(30) . . (1724)

<400> SEQÜÊNCIA: 3

agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatc atg aag aca acc att att tta ata Met 1 Lys Thr Thr Ile Ile Leu Ilecta ctg acc cat tgg gcc tac agt 1 caa aac cca ate o agt ggc aat aacLeu Leu Thr His Trp Ala Tyr Ser Gln Asn Pro Ile Ser Gly Asn Asn 10 15 20 a ca gcc aca ctg tgt ctg gga cac cat gca gta gca aat gga aca ttgThr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr Leu25 30 35 40gta aaa aca atg agt gat gat caa att gag gtg aca aat gct aca gaaVal Lys Thr Met Ser Asp Asp Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu 45 50 55 tta gtt cag age att tca atg ggg aaa ata tgc aac aaa tca tat agaLeu Val Gln Ser Ile Ser Met Gly Lys Ile Cys Asn Lys Ser Tyr Arg 60 65 70 att cta gat gga aga aat tgc aca tta ata gat gca atg cta gga gacXle Leu Asp Gly Arg Asn Cys Thr Leu Ile Asp Ala Met Leu Gly Asp 75 80 85 ccc cac tgt gac gcc Ctt cag tat gag agt tgg gac CtC ttt ata gaaPro His Cys Asp Ala Leu Gln Tyr GlU Ser Trp A^p Leu Phe Ile Glu 90 95 100 aga age age gct ttc age aat tgc tac cca tat gac ate cct gac tatArg Ser Ser Ala Phe Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp Tyr105 110 115 120gca tcg ctc cga tcc att gta gca tcc tca gga aca gtt gaa ttc acaAla Ser Leu Arg Ser Ile Val Ala Ser Ser Gly Thr Val Glu Phe Thr 125 130 135 gca gag gga ttc aca tgg aca ggt gta act caa aac gga aga agt ggaAla Glu Gly Phe Thr Trp Thr Gly Val Thr Gln Aan Gly Arg Ser Gly 140 145 150 gcc tgc aaa agg gga tca gcc gat agt ttc ttt age cga ctg aat tggAla Cys Lys Arg Gly Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp 155 160 165 cta aca aaa tet gga age tet tac ccc aca ttg aat gtg aca atg cctLeu Thr Lys Ser Gly Ser Ser Tyr Pro Thr Leu Asn Val Thr Met Pro 170 175 180 aac aat aaa aat ttc gac aag cta tac ate tgg ggg att cat cac ccgAsn Asn Lys Asn Phe Asp Lys Leu Tyr Ile Trp Gly Ile His His Pro185 190 195 200age tca aat caa gag cag aca aaa ttg tac ate caa gaa tca gga cgaSer Ser Asn Gln Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Ile Gln Glu Ser Gly Arg 205 210 215 gta aca gtc tca aca aaa aga agt caa caa aca ata ate CCt aac ateVal Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn Ile 220 225 230 gaa tet aga ccg ttg gtc aga ggt caa tca ggc agg ata age ata tacGlu Ser Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr 235 240 245 tgg acc att gta aaa o et gga gat ate cta atg ata aac agt aat ggcTrp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp Ile Leu Met Ile Asn Ser Asn Gly 250 255 260 aac tta gtt gca ccg cgg gga tat ttt aaa ttg aac aca ggg aaa ageAsn Leu Val Ala Pro Arg Gly Tyr Phe Lys Leu Asn Thr Gly Lys Ser265 270 275 280tet gta atg aga tcc gat gta CCC ata gac att tgt gtg tet gaa tgtSer Val Met Arg Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile Cys Val Ser Glu Cys 285 290 295 att aca cc a aat gga age ate tcc aac gac aag cca ttc caa aat gtgIle Thr Pro Asn Gly Ser Ile Ser Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val 300 305 310 aac aaa gtt aca tat gga aaa tgc ccc aag tat ate agg caa aac actAsn Lys Val Thr Tyr Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Ile Arg Gln Asn Thr315 320

tta aag ctg gcc act ggg atg aggLeu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg 330 335 gga ate ttt gga gca ata gcg ggaGly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly345 350 atg gtt gat ggg tgg tat ggg ttcMet Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe 365 ggg caa gct gca gat cta aag ageGly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser 380 aat gga aag tta aac aga gtg attAsn Gly Lys Leu Asn Arg Val Ile 395 400caa ata gag aag gaa ttc tca gaaGln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu 410 415 gag aaa tat gta gaa gac acc aaaGlu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys425 430 gaa ttg ctg gtg gct cta gaa aatGlu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn 445 gca gaa atg aat aaa tta ttt gagAla Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu 460 aac gca gaa gac atg gga ggt ggaAsn Ala Glu Asp Met Gly Gly Gly 475 480gat aat gca tgc att gaa tca ataAsp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile 490 495 ata tac aga gat gaa gca tta aacIle Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn505 510 gag ttg aaa tca ggc tac aaa gatGlu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp 525 ata tca tgc ttc tta att tgc gttIle Ser Cys Phe Leu Ile Cys Val 540 gct tgc caa aaa ggc aac ate agaAla Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg 555 560

gatagttaaa aacacccttg tttctact

<210> SEQ ID NO 4

<211> TAMANHO: 565

<212> ΤΙΡ0: PRT

<213> ORGANlSMOtinfiuenza A Virus

<400> SEQÜÊNCIA: 4

Met Lys Thr Thr Ile-Ile Leu Ile1 5 Gln Asn Pro Ile Ser Gly Asn Asn 20 His Ala Val Ala Asn Gly Thr Leu 35 40Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu 50 55 Lys Ile Cys Asn Lys Ser Tyr Arg65 70 Leu Ile Asp Ala Met Leu Gly Asp 85 Glu Ser Trp Asp Leu Phe Ile Glu

325

aat gta cc a gaa aag caa acc agaAsn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg 340 ttc ate gaa aac ggc tgg gaa ggaPhe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly 355 360cga tat caa aac tet gaa gga acaArg Tyr Gln Asn Ser Glu Gly Thr 370 375 act caa gca gcc att gac cag attThr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile385 390 gaa aga acc aat gag aaa ttc catGlu Arg Thr Asn Glu Lys Phe His 405 gta gaa gga aga att eag gac ttgVal Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu 420 ata gac cta tgg tcc tac aat gcaIle Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala 435 440caa cat a ca att gac tta aca gatGln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp 450 455 aag act aga cgc cag tta aga gaaLys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu465 470 tgt ttc aag att tac cac aaa tgtCys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys 485 aga aet ggg aca tat gac cat tacArg Thr Gly Thr Tyr Asp His Tyr 500 aac cga ttt cag ate aaa ggt gtaAsn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val 515 520tgg ata ctg tgg att tca ttc gccTrp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala 530 535 gtt cta ttg ggt ttc att atg tggVal Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp545 550 tgc aac att tgc att tgagtaaact Cys Asn Ile Cys Ile 565 Leu Leu Thr His Trp Ala Tyr Ser 10 15 Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His25 30 Val Lys Thr Met Ser Asp Asp Gln 45 Leu Val Gln Ser Ile Ser Met Gly 60 Ile Leu Asp Gly Arg Asn Cys Thr 75 80Pro His Cys Asp Ala Leu Gln Tyr 90 95 Arg Ser Ser Ala Phe Ser Asn Cys100 Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp Tyr 115 120Ser Ser Gly Thr Val Glu Phe Thr 130 135 Val Thr Gln Asn Gly Arg Ser Gly145 150 Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp 165 Pro Thr Leu Asn Val Thr Met Pro 180 Tyr Ile Trp Gly Ile His His Pro 195 200Leu Tyr Ile Gln Glu Ser Gly Arg 210 215 Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn Ile225 230 Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr 245 Ile Leu Met Ile Asn Ser Asn Gly 260 Phe Lys Leu Asn Thr Gly Lys Ser 275 280Ile Asp Ile Cys Val Ser Glu Cys 290 295 Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val305 310 Pro Lys Tyr Ile Arg Gln Asn Thr 325 Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg 340 Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly 355 360Arg Tyr Gln Asn Ser Glu Gly Thr 370 375 Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile385 390 Glu Arg Thr Asn Glu Lys Phe His 405 Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu 420 Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala 435 440Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp 450 455 Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu465 470 Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys 485 Arg Thr Gly Thr Tyr Asp His Tyr 500 Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val 515 520Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala 530 535 Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp545 550 Cys Asn Ile Cys Ile 565 <210> SEQ ID NO 5 <211> TAMANHO: 1585 <212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A Virus<220> CARACTERÍSTICA:

<221> NOME/CHAVE: CDS

105 110

Ala Ser Leu Arg Ser 125 Ile Val AlaAla Glu Gly Phe 140 Thr Trp Thr GlyAla Cys Lys 155 Arg Gly Ser Ala Asp 160Leu Thr 170 Lys Ser Gly Ser Ser 175 TyrAsn Asn Lys Asn Phe Asp Lys Leu185 190 Ser Ser Asn Gln Glu 205 Gln Thr LysVal Thr Val Ser 220 Thr Lys Arg SerGlu Ser Arg 235 Pro Leu Val Arg Gly 240Trp Thr 250 Ile Val Lys Pro Gly 255 AspAsn Leu Val Ala Pro Arg Gly Tyr265 270 Ser Val Met Arg Ser 285 Asp Val ProIle Thr Pro Asn 300 Gly Ser Ile SerAsn Lys Val Thr Tyr Gly Lys Cys 315 320Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg 330 335 Gly Ile Fhe Gly Ala Ile Ala Gly345 350 Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe 365 Gly Gln Ala Ala 380 Asp Leu Lys SerAsn Gly Lys Leu Asn Arg Val Ile 395 400Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu 410 415 Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys425 430 Glu Leu Leu Val Ala 445 Leu Glu AsnAia Glu Met Asn 460 Lys Leu Phe GluAsn Ala Glu Asp Met Gly Gly Gly 475 480Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile 490 495 Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn505 510 Glu Leu Lys Ser Gly 525 Tyr Lys AspIle Ser Cys Phe 540 Leu Ile Cys ValAla Cys Gln 555 Lys Gly Asn Ile Arg 560<222> LOCALIZAÇÃO: (51) . . (1544)<400> SEQÜÊNCIA: 5

cagggagcaa aagcagggta gataatcact cactgagtga catcaaagtc atg gcg

Met Ala η tct caa ggc acc aaa cga tcc tat gaa cag atg gaa act gat ggg gaaSer Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Asp Gly Glu 5 10 15 cgc cag aat gea act gaa ate aga gea tct gtc gga agg atg gtg ggaArg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Arg Met Val Gly 20 25 30 gga ate gga cgg ttt tat gtc cag atg tgt act gag Ctt aaa cta aacGly Ile Gly Arg Phe Tyr Val Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys Leu Asn35 40 45 50gac cat gaa ggg cgg ctg att cag aac age ata aca ata gaa agg atgAsp His Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu Arg Met 55 60 65 gta Ctt tca gea ttc gac gaa aga aga aac aag tat cte gag gag catVal Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu Glu His 70 75 80 CCC agt gct ggg aaa gac cct aag aaa acg gga ggc cc g ata tac agaPro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile Tyr Arg 85 90 95 aga aaa gat ggg aaa tgg atg agg gaa ctc ate ctc cat gat aaa gaaArg Lys Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu His Asp Lys Glu 100 105 110 gaa ate atg aga ate tgg cgt cag gcc aac aat ggt gaa gac gct actGlu Ile Met Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp Ala Thr115 120 125 130gct ggt Ctt act cat atg atg ate tgg cac tcc aat ctc aat gac accAla Gly Leu Thr His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn Asp Thr 135 140 145 aca tac caa aga aca agg gct Ctt gtt cgg act ggg atg gat ccc agaThr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp Pro Arg 150 155 160 atg tgc tct ctg atg caa ggc tca acc ctc cca cgg aga tct gga gccMet Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser Gly Ala 165 170 175 gct ggt gct gea gta aaa ggt gtt gga aca atg gta atg gaa cte ateAla Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu Leu Ile 180 185 190 agg atg ate aaa cgc gga ata aat gat cgg aat ttc tgg aga ggt gaaArg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg Gly Glu 195 200 205 210aat ggt cga aga acc aga att gct tat gaa aga atg tgc aat ate ctcAsn Gly Arg Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn Ile Leu 215 220 225 aaa ggg aaa ttt cag aca gea gea caa cgg gct atg atg gac cag gtgLys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Arg Ala Met Met Asp Gln Val 230 235 240 agg gaa ggc cgc aat cct gga aac gct gag att gag gat ctc att ttcArg Glu Gly Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Ile Glu Asp Leu Ile Phe 245 250 255 ttg gea cga tca gea Ctt att ttg aga gga tca gta gcc cat aaa tcaLeu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His Lys Ser 260 265 270 tgc cta cct gcc tgt gtt tat ggc Ctt gea gta acc agt ggg tat gacCys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val Thr Ser Gly Tyr Asp 275 280 285 290ttt gag aag gaa gga tac tct ctg gtt gga att gat cct ttc aaa ctaPhe Glu Lys Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe Lys Leu 295 300 305 ctc cag aac agt caa att ttc agt cta ate aga cca aaa gaa aac ccaLeu Gln Asn Ser Gln Ile Phe Ser Leu Ile Arg Pro Lys Glu Asn Pro 310 315 320gca cac aaa age cag ttg gtg tgg atg gca tgc cat tct gca gca tttAla Hls Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala Ala Phe 325 330 335 gag gat ctç aga gtt tta aat ttc att aga gga acc aaa gta ate ccaGlu Asp Leu Arg Val Leu Asn Phe Ile Arg Gly Thr Lys Val Ile Pro 340 345 350 aga gga cag tta aca acc aga gga gtt caa att gct tca aat gaa aacArg Gly Gln Leu Thr Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn Glu Asn355 360 365 370atg gag aca ata aat tct age aca Ctt gaa ctg aga age aaa tat tggMet Glu Thr Ile Asn Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Lys Tyr Trp 375 380 385 gca ata agg acc aga age gga gga aac acc agt caa cag aga gca tttAla Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Ser Gln Gln Arg Ala Phe 390 395 400 gca gga cag ata agt gtg caa CCt act ttc tca gta cag aga aat CttAla Gly Gln Ile Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg Asn Leu 405 410 415 ccc ttt gag aga gca acc att atg gct gca ttc act ggt aac act gaaPro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe Thr Gly Asn Thr Glu 420 425 430 ggg agg a ct tcc gac atg aga acg gaa ate ata agg atg atg gaa aatGly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile IIe Arg Met Met Glu Asn435 440 445 450gcc aaa tca gaa gat gtg tct ttc cag ggg cgg gga gtc ttc gag cteAla Lys Ser Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe Glu Leu 455 460 4 65 tcg gac gaa aag gca acg aac ccg ate gtg cct tcc ttt gac atg ageSer Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp Met Ser

470 475 480

aat gaa ggg tct tat ttc ttc gga gac aat gct gag gag ttt gac agtAsn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Phe Asp Ser

485 490 495

taaagaaaaa tacccttgtt tctactaata cgagacgata t<210> SEO ID NO 6<211> TAMANHO: 498<212> TIPO: PRT<213> ORGANISMO: Influenza A Virus<400> SEQÜÊNCIA: 6

Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Asp1 5 10 15 Gly Glu Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Arg Met20 25 30Val Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Val Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys35 40 45 Leu Asn Asp His Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu50 55 60 Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu65 70 75 80GlU His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lya Thr Gly Gly Pro Ile85 90 95 Tyr Arg Arg Lys Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu His Asp100 105 110Lys Glu Glu Ile Met Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp115 120 125 Ala Thr Ala Gly Leu Thr His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn130 135 140 Asp Thr Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp145 150 155 160Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser165 170 175 Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu180 185 190 Leu Ile Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn 205 Phe Trp Arg195 200Gly Glu Asn Gly Arg Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn 210 215 220 Ile Leu Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Arg Ala Met Met Asp225 230 235 240Gln Val Arg Glu Gly Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Ile Glu Asp Leu 245 250 255 Ile Phe Leu Ala 260 Arg Ser Ala Leu Ile 265 Leu Arg Gly Ser Val 270 Ala HisLys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val Thr Ser Gly 275 280 285 Tyr Asp 290 Phe Glu Lys Glu Gly 295 Tyr Ser Leu Val Gly 300 Ile Asp Pro PheLys Leu Leu Gln Asn Ser Gln Ile Phe Ser Leu Ile Arg Pro Lys Glu305 310 315 320Asn Pro Ala His Lys 325 Ser Gln Leu Val Trp 330 Met Ala Cys His Ser 335 AlaAla Phe Glu Asp Leu Arg Val Leu Asn Phe Ile Arg Gly Thr Lys Val 340 345 350 Ile Pro Arg Gly Gln Leu Thr Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn 355 360 365 Glu Asn 370 Met Glu Thr Ile Asn 375 Ser Ser Thr Leu Glu 380 Leu Arg Ser LysTyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Ser Gln Gln Arg 385 390 395 400Ala Phe Ala Gly Gln 405 Ile Ser Val Gln Pro 410 Thr Phe Ser Val Gln 415 ArgAsn Leu Pro Phe 420 Glu Arg Ala Thr Ile 425 Met Ala Ala Phe Thr 430 Gly AsnThr Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met 435 440 445 Glu Asn Ala Lys Ser Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe 450 455 460 Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp 465 470 475 480Met Ser Asn Glu Gly 485 Ser Tyr Phe Phe Gly 490 Asp Asn Ala Glu Glu 495 Phe

Asp Ser<210> SEQ ID NO 7<211> TAMANHO: 1056<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<220> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS

<222> LOCALIZAÇÃO./40) . . (795) '

<400> SEQÜÊNCIA: 7

tattcgtctc agggagcaaa agcaggtaga tatttaaag atg agt ctt cta acc

Met Ser Leu Leu Thr1 5

gag gtc gaa acg tac gtt ctc tet ate gta cca tca ggc ccc ctc aaaGlU Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Val Pro Ser Gly Pro Leu Lys 10 15 20 gcc gag ate gcg cag aga ctt gaa gat gtc ttt gcg gga aag aac accAla Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp Val Phe Ala Gly Lys Asn Thr 25 30 35 gat ctt gag gea ctc atg gaa tgg cta aag aca aga cca ate ctg tcaAsp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr Arg Pro Ile Leu Ser 40 45 50 CCt ctg act aaa ggg att tta gga ttt gta ttc acg ctc acc gtg cccPro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Thr Val Pro 55 60 65 agt gag cga gga ctg cag cgt aga cgc ttt gtc caa aat gcc ctt agtSer Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Val Gln Asn Ala Leu Ser70 75 80 85gga aac gga gat cc a aac aac atg gac aga gea gta aaa ctg tac aggGly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Arg Ala Val Lys Leu Tyr Arg90 95 100 aag Ctt aaa aga gaa ata aca ttc cat gag gca aaa gag gtg gca ctcLys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Glu Ala Lys Glu Val Ala Leu 105 110 115 age tat tcc act ggt gca cta gcc age tgc atg gga ctc ata tac aacSer Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn 120 125 130 aga atg gga act gtt aca acc gaa gtg gca ttt ggc ctg gta tgc gccArg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val Ala Phe Gly Leu Val Cys Ala 135 140 145 aca tgt gaa cag att gct gat tcc cag cat cga tet cac agg cag atgThr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg Ser His Arg Gln Met150 155 160 165gtg aca aca acc aac cca tta ate aga cat gaa aac aga atg gta ttaVal Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu Asn Arg Met Val Leu 170 175 180 gcc agt acc acg gct aaa gcc atg gaa cag atg gca gga tcg agt gagAla Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Met Ala Gly Ser Ser Glu 185 190 195 cag gca gca gag gcc atg gag gtt gct agt agg gct agg cag atg gtaGln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Arg Ala Arg Gln Met Val 200 205 210 cag gca atg aga acc att ggg acc cac cct age tcc agt gcc ggt ttgGln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser Ser Ser Ala Gly Leu 215 220 225 aaa gat gat ctc Ctt gaa aat tta cag gcc tac cag aaa cgg atg ggaLys Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr Gln Lys Arg Met Gly

230 235 240 245

gtg caa atg cag cga ttc aag tgatcctctc gttattgcag caagtatcatVal Gln Met Gln Arg Phe Lys250

tggaatcttg cacttgatat tgtggattct tgatcgtctt ttcttcaaat tcatttatcgtcgccttaaa tacgggttga aaagagggcc ttctacggaa ggagtacctg agtctatgagggaagaatat cggcaggaac agcagaatgc tgtggatgtt gacgatggtc attttgtcaa 1catagagctg gagtaaaaaa ctaccttgtt tctactaata cgagacgata t 1

<210> SEQ ID NO 8<211> TAMANHO: 252<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<400> SEQÜÊNCIA: 8

Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Val Pro1 5 10 15 Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp Val Phe 20 25 30 Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr 35 40 45 Arg Pro 50 Ile Leu Ser Pro Leu Thr 55 Lys Gly Ile Leu 60 Gly Phe Val PheThr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Val65 70 75 80Gln Asn Ala Leu Ser 85 Gly Asn Gly Asp Pro 90 Asn Asn Met Asp Arg 95 AlaVal Lys Leu Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Glu Ala 100 105 110 Lys Glu Val 115 Ala Leu Ser Tyr Ser 120 Thr Gly Ala Leu Ala 125 Ser Cys MetGly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val Ala Phe 130 135 140 Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg145 150 155 160Ser His Arg Gln Met 165 Val Thr Thr Thr Asn 170 Pro Leu Ile Arg His 175 GluAsn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Met 180 185 190 Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Arg195 200 205

Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser

210 215 220

Ser Ser Ala Gly Leu Lys Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr225 230 235 240

Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys245 250

<210> SEQ ID NO 9<211> TAMANHO: 870<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<220> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS<222> LOCALIZAÇÃO: (29) . . (718)<400> SEQÜÊNCIA: 9

ggagcaaaag cagggtgaca aaaacata atg gat tcc aac act gtg tca age

Met Asp Ser Asn Thr Val Ser Ser1 5

ttt cag gta gac tgt ttt ctt tgg cat gtc cgc aaa cga ttc gca gacPhe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp His Val Arg Lys Arg Phe Ala Asp 10 15 20 caa gaa ctg ggt gat gcc cca ttc ctt gac cgg ctt cgc cga gac cagGln Glu Leu Gly Asp Ala Pro Phe Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln25 30 35 40aag tcc cta agg gga aga ggt age act ctt ggt ctg gac ate gaa acaLys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser Thr Leu Gly Leu Asp Ile Glu Thr 45 50 55 gcc act cat gca gga aag cag ata gtg gag cag att ctg gaa aag gaaAla Thr His Ala Gly Lys Gln Ile Val Glu Gln Ile Leu Glu Lys Glu 60 65 70 tca gat gag gca ctt aaa atg acc att gcc tet gtt cct gct tca cgcSer Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr Ile Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg 75 80 85 tac tta act gac atg act ctt gat gag atg tca aga gac tgg ttc atgTyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Asp Glu Met Ser Arg Asp Trp Phe Met 90 95 100 Ct C atg ccc aag caa aaa gta aca ggc tcc cta tgt ata aga atg gacLeu Met Pro Lys Gln Lys Val Thr Gly Ser Leu Cys Ile Arg Met Asp105 110 115 120caa gca ate atg gat aag aac ate ata ctt aaa gca aac ttt agt gtgGln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val 125 130 135 att ttc gaa agg ctg gaa a ca cta ata cta ctt aga gcc ttc acc gaaIle Phe Glu Arg Leu Glu Thr' Leu Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu 140 145 150 gaa gga gca gtc gtt ggc gaa att tca cca tta CCt tet ctt cca ggaGlu Gly Ala Val Val Gly Glu Ile Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly 155 160 165 cat act aat gag gat gtc aaa aat gca att ggg gtc etc ate gga ggaHis Thr Asn Glu Asp Val Lys Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Gly Gly 170 175 180 Ctt aaa tgg aat gat aat acg gtt aga ate tet gaa act cta cag agaLeu Lys Trp Asn Asp Asn Thr Val Arg Ile Ser Glu Thr Leu Gln Arg185 190 195 200ttc gct tgg aga age agt cat gaa áat ggg aga CCt tca ttc cct tcaPhe Ala Trp Arg Ser Ser His Glu Asn Gly Arg Pro Ser Phe Pró Ser 205 210 215 aag cag aaa cga aaa atg gag aga aca att aag cca gaa att Lys Gln Lys Arg Lys Met Glu Arg Thr Ile Lys Pro Glu Ile 220 225 230

tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt gcgacataga ttgaaaaata cagaaaatagttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt acaactattg cttgaagtag aacaagagataagaactttc tcgtttcagc ttatttaatg at<210> SEQ ID NO 10<211> TAMANHO: 230<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<400> SEQÜÊNCIA: 10

Met Asp Ser Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp1 5 10 15 His Val Arg Lys Arg Phe Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Ala Pro Phe 20 25 30 Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser 35 40 45 Thr Leu 50 Gly Leu Asp I Ile Glu 55 Thr Ala Thr His Ala 60 Gly Lys Gln IleVal Glu Gln Ile Leu Glu Lys Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr65 70 75 80Ile Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Asp 85 90 95 Glu Met Ser Arg Asp Trp Phe Met Leu Met Pro Lys Gln Lys Val Thr 100 105 110 Gly Ser Leu 115 Cys Ile Arg Met Asp 120 Gln Ala Ile Met Asp 125 Lys Asn IleIle Leu 130 Lys Ala Asn Phe Ser 135 Val Ile Phe Glu Arg 140 Leu Glu Thr LeuIle Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Val Val Gly Glu Ile145 150 155 160Ser Pro Leu Pro Ser 165 Leu Pro Gly His Thr 170 Asn Glu Asp Val Lys 175 AsnAla Ile Gly Val Leu 180 Ile Gly Gly Leu 185 Lys Trp Asn Asp Asn 190 Thr ValArg Ile Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser His Glu 195 200 205 Asn Gly Arg Pro Ser Phe Pro Ser Lys Gln Lys Arg Lys Met Glu Arg 210 215 220

Thr Ile Lys Pxo Glu Ile225 230

<210> SEQ ID NO 11<211> TAMANHO: 2191<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<22 0> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS<222> LOCALIZAÇÃO* 4) . . (2151)<400> SEQÜÊNCIA: 11

taa atg gaa gac ttt gtg cga cag tgc ttc aat cca atg ate gtc gag Met Glu Asp Phe Val Arg Gln Cys Phe Asn Pro Met Ile Val Glu 1 5 10 15Ctt gcg gaa aag gca atg aaa gaa tat gga gag aac ccg aaa ate gaaLeu Ala Glu Lys Ala Met Lys Glu Tyr Gly Glu Asn Pro Lys Ile Glu 20 25 30 aca aac aaa ttt gca gca ata tgc act cac ttg gaa gtc tgc ttc atgThr Asn Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met 35 40 45 tac tcg gat ttc cac ttt ata aat gaa ctg ggt gag tca gtg gtc ataTyr Ser Asp Phe His Phe Ile Asn Glu Leu Gly Glu Ser Val Val Ile 50 55 60 gag tct ggt gac cca aat gct Ctt ttg aaa cac aga ttt gaa ate attGlu Ser Gly Asp Pro Asn Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile Ile 65 70 75 gag ggg aga gat cga aca atg gca tgg aca gta gta aac age ate tgcGlu Gly Arg Asp Arg Thr Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile Cys80 85 90 95aac acc aca aga gct gaa aaa CCt aaa ttt Ctt cca gat tta tac gacAsn Thr Thr Arg Ala Glu Lys Pro Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp 100 105 110 tat aag gag aac aga ttt gtt gaa att ggt gtg aca agg aga gaa gttTyr Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Ile Gly Val Thr Arg Arg Glu Val 115 120 125cac ata tac tac ctg gag aaa gcc aac aaa ata aag tct gag aaa acaHis Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile Lys Ser Glu Lys Thr130 135 140 cat ate cac att ttc tca ttt aca gga gaa gaa atg gct aca aaa gcgHis Ile His Ile Phe Ser Phe Thr Gly Glu Glu Met Ala Thr Lys Ala145 150 155 gac tat act ctt gat gaa gag agt aga gcc agg ate aag acc aga ctaAsp Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Ser Arg Ala Arg Ile Lys Thr Arg Leu160 165 170 175ttc act ata aga caa gaa atg gcc agt aga ggc ctc tgg gat tcc tttPhe Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp Ser Phe 180 185 190 cgt cag tcc gag aga ggc gaa gag aca att gaa gaa aga ttt gaa ateArg Gln Ser Glu Arg Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe Glu Ile195 200 205 aca gga acg atg cgc aag Ctt gcc aat tac agt ctc cca ceg aac ttcThr Gly Thr Met Arg Lys Leu Ala Asn Tyr Ser Leu Pro Pro Asn Phe210 215 220 tcc age ctt gaa aat ttt .aga gtc tat ata gat gga ttc gaa ceg aacSer Ser Leu Glu Asn Phe Arg Val Tyr Ile Asp Gly Phe Glu Pro Asn225 230 235 ggc tgc att gag agt aag Ctt tct caa atg tcc aaa gaa gta aat gccGly Cys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Gln Met Ser Lys Glu Val Asn Ala240 245 250 255aaa ate gaa cca ttt tca aag aca aca ccc cga cca ctc aaa atg ccaLys Ile Glu Pro Phe Ser Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Lys Met Pro 260 265 270 ggt ggt cca ccc tgc cat cag cga tcc aaa ttc ttg cta atg gat gctGly Gly Pro Pro Cys His Gln Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala275 280 285 ctg aaa ctg age att gag gac cca agt cac gag gga gag ggg ata ccaLeu Lys Leu Ser Ile Glu Asp Pro Ser His Glu Gly Glu Gly Ile Pro290 • 295 300 cta tat gat gca ate aaa tgc atg aaa act ttc ttt gga tgg aaa gagLeu Tyr Asp Ala Ile Lys Cys Met Lys Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu305 310 315 ccc agt att gtt aaa cca cat aaa aag ggt ata aac ceg aac tat ctcPro Ser Ile Val Lys Pro His Lys Lys Gly Ile Asn Pro Asn Tyr Leu320 325 330 335caa act tgg aag caa gta tta gaa gaa ata caa gac Ctt gag aac gaaGln Thr Trp Lys Gln Val Leu Glu Glu Ile Gln Asp Leu Glu Asn Glu 340 345 350 gaa agg acc ccc aag acc aag aat atg aaa aaa aca age caa ttg aaaGlu Arg Thr Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys Thr Ser Gln Leu Lys355 360 365 tgg gca cta ggt gaa aat atg gca cca gag aaa gtg gat ttt gag gatTrp Ala Leu Gly Glu Asn Met Ala Pro Glu Lys Val Asp Phe Glu Asp370 375 380 tgt aaa gac ate aat gat tta aaa caa tat gac agt gat gag cca gaaCys Lys Asp Ile Asn Asp Leu Lys Gln Tyr Asp Ser Asp Glu Pro Glu385 390 395 gca agg tct ctt gca agt tgg att caa agt gag ttc aac aag gct tgtAla Arg Ser Leu Ala Ser Trp Ile Gln Ser Glu Phe Asn Lys Ala Cys400 405 410 415gag ctg aca gat tca age tgg ata gag ctc gat gaa att ggg gag gatGlu Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile Glu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Asp 420 425 430 gtc gcc cca ata gaa tac att gcg age atg agg aga aat tat ttt actVal Ala Pro Ile Glu Tyr Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe Thr435 440 445 gct gag att tcc cat tgt aga gca aca gaa tat ata atg aaa gga gtaAla Glu Ile Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val450 455 460 tac ate aac act gct cta ctc aat gca tcc tgt gct gcg atg gat gaaTyr Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala Ser Cys Ala Ala Met Asp Glu465 470 475 ttt caa tta att ccg atg ata agt aaa tgc agg acc aaa gaa ggg aga 1Phe Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys Cys Arg Thr Lys Glu Gly Arg 480 485 490 4 95 agg aaa aca aat tta tat gga ttc ata ata aag gga agg tcc cat tta Arg Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg Ser His Leu 500 505 510 aga aat gat act gac gtg gtg aac ttt gta agt atg gaa ttt tct CtC Arg Asn Asp Thr Asp Val Val Asn Phe Val Ser Met Glu Phe Ser Leu 515 520 525 act gat cca aga ttt gag cca cac aaa tgg gaa aaa tac tgc gtt cta Thr Asp Pro 530 Arg Phe Glu Pro His 535 Lys Trp Glu Lys Tyr 540 Cys Val Leu gaa att gga gac atg Ctt cta aga act gct gta ggt caa gtg tca aga Glu Ile Gly Asp Met Leu Leu Arg Thr Ala Val Gly Gln Val Ser Arg 545 550 555 CCC ata ttt ttg tat gta agg aca aat gga acc tct aaa att aaa atg Pro Ile Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile Lys Met 560 565 570 575 aaa tgg gga atg gaa atg aga cgc tgc ctc Ctt cag tct ctg caa cag Lys Trp Gly Met Glu 580 Met Arg Arg Cys Leu 585 Leu Gln Ser Leu Gln 590 Gln att gaa age atg ate gaa gct gag tcc tca gtc aaa gaa aag gac atg Ile Glu Ser Met 595 Ile Glu Ala Glu Ser 600 Ser Val Lys Glu Lys 605 Asp Met a cc aaa gaa ttt ttt gag aac aaa tca gag aca tgg cct ata gga gag 1Thr Lys Glu 610 Phe Phe Glu Asn Lys 615 Ser Glu Thr Trp Pro 620 Ile Gly Glu tcc CCC aaa gga gtg gaa gag ggc tca ate ggg aag gtt tgc agg acc 1Ser Pro 625 Lys Gly Val Glu Glu 630 Gly Ser Ile Gly Lys 635 Val Cys Arg Thr tta tta gca aaa tct gtg ttt aac agt tta tat gca tct cca caa ctg 1Leu Leu Ala Lys Ser Val Phe Asn Ser Leu Tyr Ala Ser Pro Gln Leu 640 645 650 655 gaa gga ttt tca gct gaa tct agg aaa tta Ctt ctc att gtt cag gct 2·Glu Gly Phe Ser Ala 660 Glu Ser Arg Lys Leu 665 Leu Leu Ile Val Gln 670 Ala Ctt aga gat gac ctg gaa cct gga acc ttt gat att ggg ggg tta tat 2'Leu Arg Asp Asp Leu Glu Pro Gly Thr Phe Asp Ile Gly Gly Leu Tyr 675 680 685 gaa tca att gag gag tgc ctg att aat gat CCC tgg gtt ttg Ctt aat 2Glu Ser Ile Glu Glu Cys Leu Ile Asn Asp Pro Trp Val Leu Leu Asn 690 695 700 gca tct tgg ttc aac tcc ttc ctc aca cat gca ctg aag tagttgtggc 2Ala Ser 705 Trp Phe Asn Ser Phe 710 Leu Thr Hia Ala Leu 715 Lys

aatgctacta tttgttatcc atactgtcca<210> SEQ ID NO 12<211> TAMANHO: 716<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<400> SEQÜÊNCIA: 12

Met Glu Asp Phe Val Arg Gln Cys Phe Asn Pro Met Ile Val Glu Leu1 5 10 15

Ala Glu Lys Ala Met Lys Glu Tyr Gly Glu Asn Pro Lys Ile Glu Thr

20 25 30

Asn Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met Tyr

35 40 45

Ser Asp Phe His Phe Ile Asn Glu Leu Gly Glu Ser Val Val Ile Glu

50 55 60

Ser Gly Asp Pro Asn Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile Ile Glu65 70 75 80

Gly Arg Asp Arg Thr Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile Cys Asn

85 90 95

Thr Thr Arg Ala Glu Lys Pro Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp Tyr100 105 110 Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Ile Gly Val Thr Arg Arg Glu Val His 115 120 125 Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile Lys Ser Glu Lys Thr His 130 135 140 NIle His Ile Phe Ser Phe Thr Gly Glu Glu Met Ala Thr Lys Ala Asp 145 150 155 160Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Ser Arg Ala Arg Ile Lys Thr Arg Leu Phe 165 170 175 Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp Ser Phe Arg 180 185 190 Gln Ser Glu Arg Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe Glu Ile Thr195 200 205 Gly Thr Met Arg Lys Leu Ala Asn Tyr Ser Leu Pro Pro Asn Phe Ser210 215 220 Ser Leu Glu Asn Phe Arg Val Tyr Ile Asp Gly Phe Glu Pro Asn Gly225 230 235 240Cys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Gln Met Ser Lys Glu Val Asn Ala Lys 245 250 255 Ile Glu Pro Phe Ser Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Lys Met Pro Gly 260 265 270 Gly Pro Pro Cys His Gln Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala Leu275 280 285 Lys Leu Ser Ile Glu Asp Pro Ser His Glu Gly Glu Gly Ile Pro Leu290 295 300 Tyr Asp Ala Ile Lys Cys Met Lys Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu Pro305 310 315 320Ser Ile Val Lys Pro His Lys Lys Gly Ile Asn Pro Asn Tyr Leu Gln 325 330 335 Thr Trp Lys Gln Val Leu Glu Glu Ile Gln Asp Leu Glu Asn Glu Glu 340 345 350 Arg Thr Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys Thr Ser Gln Leu Lys Trp355 360 365 Ala Leu Gly Glu Asn Met Ala Pro Glu Lys Val Asp Phe Glu Asp Cys370 375 380 Lys Asp Ile Asn Asp Leu Lys Gln Tyr Asp Ser Asp Glu Pro Glu Ala385 390 395 400Arg Ser Leu Ala Ser Trp Ile Gln Ser Glu Phe Asn Lys Ala Cys Glu 405 410 415 Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile Glu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Asp Val 420 425 430 Ala Pro Ile Glu Tyr Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe Thr Ala435 440 445 Glu Ile Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val Tyr450 455 460 Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala Ser Cys Ala Ala Met Asp Glu Phe465 470 475 480Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys Cys Arg Thr Lys Glu Gly Arg Arg 485 490 495 Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg Ser His Leu Arg 500 505 510 Asn Asp Thr Asp Val Val Asn Phe Val Ser Met Glu Phe Ser Leu Thr515 520 525 Asp Pro Arg Phe Glu Pro His Lys Trp Glu Lys Tyr Cys Val Leu Glu530 535 540 Ile Gly Asp Met Leu Leu Arg Thr AIa Val Gly Gln Val Ser Arg Pro545 550 555 560Ile Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile Lys Met Lys 565 570 575 Trp Gly Met Glu Met Arg Arg Cys Leu Leu Gln Ser Leu Gln Gln Ile 580 585 590 Glu Ser Met Ile Glu Ala Glu Ser Ser Val Lys Glu Lys Asp Met Thr595 600 605 Lys Glu Phe Phe Glu Asn Lys Ser Glu Thr Trp Pro Ile Gly Glu Ser610 615 620Pro Lys Gly Val Glu Glu Gly Ser Ile Gly Lys Val Cys Arg Thr Leu625 630 635 640Leu Ala Lys Ser Val 645 Phe Asn Ser Leu Tyr Ala 650 Ser Pro Gln Leu 655 GluGly Phe Ser Ala 660 Glu Ser Arg Lys Leu 665 Leu Leu Ile Val Gln 670 Ala LeuArg Asp Asp 675 Leu Glu Pro Gly Thr 680 Phe Asp Ile Gly Gly 685 Leu Tyr GluSer Ile Glu Glu Cys Leu Ile Asn Asp Pro Trp Val Leu Leu Asn Ala 690 695 700 Ser Trp Phe Asn Ser Phe Leu Thr His Ala Leu Lys 705 710 715 SEQ ID NO 13

<211> TAMANHO: 2299

<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO: Influenza A virus

<220> CARACTERÍSTICA:

<221> NOME/CHAVE: CDS

<222> LOCAÇÃO: (22)..(2292)

<220> CARACTERÍSTICA:

<221> NOME/CHAVEmisc_feature

<222> LOCAÇÃO: (547)..(547)

<223> OUTRAS INFORMAÇÕES: Xaa stands for Ala or Val<400> SEQÜÊNCIA: 13

gaaagcaggc aaaccattt :g a atg gat gtc aat ccg act cta Ctt ttc tta Met Asp Val Asn Pro Thr Leu Leu Phe Leu 1 5 10aag gtg cca gcg caa aat gct ata age aca aca ttc cet tat act ggaLys Val Pro Ala Gln Asn Ala Ile Ser Thr Thr Phe Pro Tyr Thr Gly 15 20 25 gat CCt CCC tac agt cat gga aca ggg aca gga tac acc atg gat actAsp Pro Pro Tyr Ser His Gly Thr Gly Thr Gly Tyr Thr Met Asp Thr 30 35 40 gtc aac aga aca cac caa tat tca gaa aaa ggg aaa tgg aca aca aacVal Asn Arg Thr His Gln Tyr Ser Glu Lys Gly Lys Trp Thr Thr Asn 45 50 55 act gag att gga gca cca caa Ctt aat cca ate gat gga cca Ctt cctThr Glu Ile Gly Ala Pro Gln Leu Asn Pro Ile Asp Gly Pro Leu Pro 60 65 70 gaa gac aat gaa cca agt ggg tac gcc caa aca gat tgt gta ttg gaaGlu Asp Asn Glu Pro Ser Gly Tyr Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu75 80 85 90gca atg gct ttc Ctt gaa gaa tcc cat CCC gga ate ttt gaa aat tcgAla Met Ala Phe Leu Glu Glu Ser His Pro Gly Ile Phe Glu Asn Ser 95 100 105 tgt Ctt gaa acg atg gag gtg att cag cag aca aga gtg gac aaa ctaCys Leu Glu Thr Met Glu Val Ile Gln Gln Thr Arg Val Asp Lys Leu 110 115 120 aca ca a ggc cga caa act tat gat tgg acc ttg aat agg aat caa cctThr Gln Gly Arg Gln Thr Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro 125 130 135 gcc gca aca gca Ctt gct aat acg att gaa gta ttc aga tca aat ggtAla Ala Thr Ala Leu Ala Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly 140 145 150 ctg act tcc aat gaa tcg ggg aga ttg atg gac ttc etc aaa gat gtcLeu Thr Ser Asn Glu Ser Gly Arg Leu Met Asp Phe Leu Lys Asp Val155 160 165 170atg gag tcc atg aac aag gag gaa atg gaa ata aca aca cac ttc caaMet Glu Ser Met Asn Lys Glu Glu Met Glu Ile Thr Thr His Phe Gln 175 180 185 cgg aag aga aga gta aga gac aac atg aca aag aga atg ata aca cagArg Lys Arg Arg Val Arg Asp Asn Met Thr Lys Arg Met Ile Thr Gln 190 195 200 aga acc ata 999 aag aaa aaa caa cga tta age aga aag age tat ctaArg Thr Ile Gly Lys Lys Lys Gln Arg Leu Ser Arg Lys Ser Tyr Leu205

ate aga aca ttaIle Arg Thr Leu220

aaa ttg aaa cgaLys Leu Lys Arg235

ttt gta tat tttPhe Val Tyr Phe

gaa caa tca ggaGlu Gln Ser Gly270

gct aat gtc gtcAla Asn Val Val285

tcc ttc acc ateSer Phe Thr Ile300

cca cgc ata ttcPro Arg Ile Phe315

gaa tgg ttc agaGlu Trp Phe Arg

aaa atg gca agaLys Met Ala Arg350

aaa ttg aga actLys Leu Arg Thr365

aaa tat ttc aatLys Tyr Phe Asn380

ctc ctg gtt gacLeu Leu Val Asp395

atg ttc aac atgMet Phe Asn Met

ggc cag agg aaaGly Gln Arg Lys430

tca tcc íjàt gacSer Ser Asp Asp445

ata caa gct ggaIle Gln Ala Gly4 60

ate aac atg ageIle Asn Met Ser475

gaa ttc aca ageGlu Phe Thr Ser

atg gaa cta cecMet Glu Leu Pro510

atg age att ggaMet Ser Ile Gly525

ctc ggt cct gccLeu Gly Pro Ala540

tat cgg tac aca

210acc cta aac acaThr Leu Asn Thr 225 cga gca ate gctArg Ala Ile Ala 240 gtt gaa aca ctaVal Glu Thr Leu255 ttg cca gtt ggcLeu Pro Val Glyaga aaa atg atgArg Lys Met Met 290act ggg gac aatThr Gly Asp Asn 305 ctg gca atg ateLeu Ala Met Ile 320 aat gtt cta ageAsn Val Leu Ser335 ctg ggg aaa ggaLeu Gly Lys Glycaa ata cca gcaGln Ile Pro Ala 370gat tca aca aaaAsp Ser Thr Lys 385 ggg act gct tcaGly Thr Ala Ser 400 ttg age act gtgLeu Ser Thr Val415 tat aca aag accTyr Thr Lys Thrttt gct ttg ataPhe Ala Leu Ile 450gta gac aga ttcVal Asp Arg Phe 4 65 aaa aag aag tccLys Lys Lys Ser 480 ttt ttc tac cggPhe Phe Tyr Arg 495 agt ttt ggg gtt Ser Phe Gly Val gtg aca gtc ateVal Thr Val Ile 530acg gca caa atgThr Ala Gln Met

545

tac cgg tgc cat

atg acc aag gacMet Thr Lys Asp230

acc cca ggg atgThr Pro Gly Met245

gct cga aga ataAla Arg Arg Ile260

ggt aat gag aaaGly Asn Glu Lys275

act aat tcc caaThr Asn Ser Gln

acc aaa tgg aatThr Lys Trp Asn310

aca tac ata actThr Tyr Ile Thr325

att gca ccg attIle Ala Pro Ile340

tat atg ttt gaaTyr Met Phe Glu355

gaa atg cta gcaGlu Met Leu Ala

aag aaa att gaaLys Lys Ile Glu390

ctg agt cct ggcLeu Ser Pro Gly405

ctg ggt gta tccLeu Gly Val Ser420

aca tac tgg tggThr Tyr Trp Trp435

gtg aat gcg cctVal Asn Ala Pro

tat aga act tgcTyr Arg Thr Cys470

tac ata aat agaTyr Ile Asn Arg485

tat ggt ttt gtaTyr Gly Phe Val500

tcc gga ata aatSer Gly Ile Asn515

aaa aac aac atgLys Asn Asn Met

gya ctc caa ctcXaa Leu Gln Leu550

aga ggt gat acc

215

gct gaa aga gggAla Glu Arg Gly

cãg ata aga ggaGln Ile Arg Gly250

tgt gaa aag cttCys Glu Lys Leu265

aag gcc aaa ctgLys Ala Lys Leu280

gac act gaa ctcAsp Thr Glu Leu295

gaa aat cag aacGlu Asn Gln Asn

aga aat cag ccaArg Asn Gln Pro330

atg ttc tca aatMet Phe Ser Asn345

age aaa agt atgSer Lys Ser Met360

age att gac ctaSer Ile Asp Leu375

aag ata cga ccaLys Ile Arg Pro

atg atg atg ggaMet Met Met Gly410

ata tta aac ctgIle Leu Asn Leu425

gat ggt ctg caaAsp Gly Leu Gln440

aat cat gaa ggaAsn His Glu Gly455

aaa ctg gtc gggLys Leu Val Gly

act gga aca ttcThr Gly Thr Phe490

gcc aat ttc ageAla Asn Phe Ser505

gaa tet gca gacGlu Ser Ala Asp520

ata aat aat gatIle Asn Asn Asp535

ttc att aag gatPhe Ile Lys Asp

cag ata caa accTyr Arg Tyr Thr Tyr Arg Cys His Arg Gly Asp Thr Gln Ile Gln Thr 555 560 565 570 aga aga tet ttt gag ttg aag aaa ctg tgg gaa cag act cga tca aag rArg Arg Ser Phe Glu 575 Leu Lys Lys Leu Trp 580 Glu Gln Thr Arg Ser 585 Lys act ggt cta ctg gta tca gat ggg ggt cca aac cta tat aac ate aga 1-Thr Gly Leu Leu Val Ser Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg 590 595 600 aac cta cac ate ccg gaa gtc tgt tta aaa tgg gag cta atg gat gaa 1Asn Leu His 605 Ile Pro Glu Val Cys 610 Leu Lys Trp Glu Leu 615 Met Asp Glu gat tat aag ggg agg cta tgc aat cca ttg aat CCt ttc gtt agt cac 1Asp Tyr 620 Lys Gly Arg Leu Cys 625 Asn Pro Leu Asn Pro 630 Phe Val Ser His aaa gaa att gaa tca gtc aac agt gea gta gta atg CCt gcg eat ggc 1Lys Glu Ile Glu Ser Val Asn Ser Ala Val Val Met Pro Ala His Gly 635 640 645 650 CCt gcc aaa age atg gag tat gat gct gtt gea aca aca cat tet tgg 2>Pro Ala Lys Ser Met 655 Glu Tyr Asp Ala Val 660 Ala Thr Thr His Ser 665 Trp ate CCC aag agg aac cgg tcc ata ttg aac aca age caa agg gga ata 2·Ile Pro. Lys Arg 670 Asn Arg Ser Ile Leu 675 Asn Thr Ser Gln Arg 680 Gly Ile cta gaa gat gag cag atg tat cag aaa tgc tgc aac ctg ttt gaa aaa 2Leu Glu Asp 685 Glu Gln Met Tyr Gln 690 Lys Cys Cys Asn Leu 695 Phe Glu Lys ttc ttc CCC age age tca tac aga aga cca gtc gga att tet agt atg 2Phe Phe 700 Pro Ser Ser Ser Tyr 705 Arg Arg Pro Val Gly 710 Ile Ser Ser Met gtt gag gcc atg gta tcc agg gcc cgc att gat gea cga att gac ttc 2.Val Glu Ala Met Val Ser Arg Ala Arg Ile Asp Ala Arg Ile Asp Phe 715 720 725 730 gaa tet gga cgg ata aag aag gat gag ttc gct gag ate atg aag ate 2.Glu Ser Gly Arg Ile Lys Lys Asp Glu Phe Ala Glu Ile Met Lys Ile 735 740 745 tgt tcc acc att gaa gag etc aga cgg caa aaa tagtgaa 2.Cys Ser Thr Ile Glu Glu Leu Arg Arg Gln Lys 750 755

<210> SEQ ID NO 14<211> TAMANHO: "757<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Influenza A virus<220> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: misc feature<222> LOCALIZAÇÃO^S47T. . (547)<223> OUTRA INFORMAÇÃO: The 'Xaa' at location 547 stands for Ala, or Vai.<400> SEQÜÊNCIA: 14 Met Asp Val Asn Pro Thr Leu Leu Phe Leu Lys Val Pro Ala Gln Asn1 5 10 15 Ala Ile Ser Thr 20 Thr Phe Pro Tyr Thr 25 Gly Asp Pro Pro Tyr 30 Ser HisGly Thr Gly Thr Gly Tyr Thr Met Asp Thr Val Asn Arg Thr His Gln 35 40 45 Tyr Ser 50 Glu Lys Gly Lys Trp 55 Thr Thr Asn Thr Glu 60 Ile Gly Ala ProGln Leu Asn Pro Ile Asp Gly Pro Leu Pro Glu Asp Asn Glu Pro Ser65 70 75 80Gly Tyr Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu Ala Met Ala Phe Leu Glu 85 90 95 Glu Ser His Pro Gly Ile Phe Glu Asn Ser Cys Leu Glu Thr Met Glu 100 105 110 Val Ile Gln 115 Gln Thr Arg Val Asp 120 Lys Leu Thr Gln Gly 125 Arg Gln ThrTyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro Ala Ala Thr Ala Leu Ala 130 135 140Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly Leu Thr Ser Asn Glu Ser145 150 155 160Gly Arg Leu Met Asp Phe Leu Lys Asp Val Met Glu Ser Met Asn Lys 165 170 175 Glu Glu Met Glu Ile Thr Thr His Phe Gln Arg Lys Arg Arg Val Arg 180 185 190 Asp Asn Met Thr Lys Arg Met Ile Thr Gln Arg Thr Ile Gly Lys Lys195 200 205 Lys Gln Arg Leu Ser Arg Lys Ser Tyr Leu Ile Arg Thr Leu Thr Leu210 215 220 Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly Lys Leu Lys Arg Arg Ala 225 230 235 240Ile Ala Thr Pro Gly Mét Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr Phe Val Glu 245 250 255 Thr Leu Ala Arg Arg Ile Cys Glu Lys Leu Glu Gln Ser Gly Leu Pro260 265 270 Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu Ala Asn Val Val Arg Lys275 280 285 Met Met Thr Asn Ser Gln Asp Thr Glu Leu Ser Phe Thr Ile Thr Gly290 295 300 Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Asn Gln Asn Pro Arg Ile Phe Leu Ala305 310 315 320Met Ile Thr Tyr Ile Thr Arg Asn Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val 325 330 335 Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met Ala Arg Leu Gly 340 345 350 Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met Lys Leu Arg Thr Gln Ile355 360 365 Pro Ala Glu Met Leu Ala Ser Ile Asp Leu Lys Tyr Phe Asn Asp Ser370 375 380 Thr Lys Lys Lys Ile Glu Lys Ile Arg Pro Leu Leu Val Asp Giy Thr 385 390 395 400Ala Ser Leu Ser Pro Gly Met Met Met Gly Met Phe Asn Met Leu Ser 405 410 415 Thr Val Leu Gly Val Ser Ile Leu Asn Leu Gly Gln Arg Lys Tyr Thr420 425 430 Lys Thr Thr Tyr Trp Trp Asp Gly Leu Gln Ser Ser Asp Asp Phe Ala435 440 445 Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly Ile Gln Ala Gly Val Asp450 455 4 60 Arg Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Val Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys465 470 475 480Lys Ser Tyr Ile Asn Arg Thr Gly Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe 485 490 «35 Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu Pro Ser Phe500 505 510 Gly Val Ser Gly Ile Asn Glu Ser Ala Asp Met Ser Ile Gly Val Thr515 520 525 Val Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Asp Leu Gly Pro Ala Thr Ala530 535 540 Gln Met Xaa Leu Gln Leu Phe Ile Lys Asp Tyr Arg Tyr Thr Tyr Arg 545 550 555 560Cys His Arg Gly Asp Thr Gln Ile Gln Thr Arg Arg Ser Phe Glu Leu 565 570 575 Lys Lys Leu Trp Glu Gln Thr Arg Ser Lys Thr Gly Leu Leu Val Ser580 585 590 Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg Asn Leu His Ile Pro Glu595 600 605 Val Cys Leu Lys Trp Glu Leu Met Asp Glu Asp Tyr Lys Gly Arg Leu610 615 620 Cys Asn Pro Leu Asn Pro Phe Val Ser His Lys Glu Ile Glu Ser Val625 630 635 640Asn Ser Ala Val Val Met Pro Ala His Gly Pro Ala Lys Ser Met Glu 645 650 655 Tyr Asp Ala Val Ala Thr Thr His Ser Trp Ile Pro Lys Arg Asn Arg660 665 670 Ser Ile Leu 675 Asn Thr Ser Gln Arg 680 Gly Ile Leu Glu Asp 685 Glu Gln MetTyr Gln 690 Lys Cys Cys Asn Leu 695 Phe Glu Lys Phe Phe Pro 700 Ser Ser SerTyr Arg Arg Pro Val Gly Ile Ser Ser Met Val Glu Ala Met Val Ser705 710 715 720Arg Ala Arg Ile Asp Ala Arg Ile Asp Phe Glu Ser Gly Arg Ile Lys 725 730 735 Lys Asp Glu Phe 740 Ala Glu Ile Met Lya 745 Ile Cys Ser Thr Ile 750 Glu GluLeu Arg Arg 755 Gln Lys SEQ ID NO 15

<211> TAMANHO: 2370<212> TIPO: DNA

<213> ORGANISMO· Xnfluenza A virus<22 0> CARACTERÍSTICA:<221> NOME/CHAVE: CDS<222> LOCALIZAÇÃO!42) . . <2318)<400> SEQÜÊNCIA: 15

tattggtctc agggagcgaa agcaggtcaa atatattcaa t atg gag aga ata aaa

Met Glu Arg Ile Lys

gaa ctg aga gat ctg atg tta caa tcc cgc acc 1 cgc gag ata cta 5 acaGlu Leu Arg Asp Leu Met Leu Gln Ser Arg Thr Arg Glu Ile Leu Thr10 15 20 aaa act act gtg gac cac atg gcc ata ate aag aaa tac aca tca ggaLys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys Lys Tyr Thr Ser Gly25 30 35 aga caa gag aag aac CCt gca Ctt agg atg aaa tgg atg atg gca atgArg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys Trp Met Met Ala Met40 45 50 aaa tac cca att aca gca gat aag agg ata atg gag atg att CCt gagLys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Met Glu Met Ile Pro Glu55 60 65 aga aat gaa cag gga caa acc Ctt tgg age aaa acg aac gat gct ggcArg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys Thr Asn Asp Ala Gly70 75 80 85tca gac cgc gta atg gta tca CCt ctg gca gtg aca tgg tgg aat aggSer Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val Thr Trp Trp Asn Arg90 95 100 aat gga cca aca acg aac aca att cat tat ccg aaa gtc tac aaa actAsn Gly Pro Tftr Thr Asn Thr Ile His Tyr Pro Lys Val Tyr Lys Thr105 110 115 tat ttt gaa aag gtt gaa aga ttg aaa cac gga acc ttt ggc ccc gttTyr Phe Glu Lys Val Glu Arg Leu Lys His Gly Thr Phe Gly Pro Val120 125 130 cat ttt agg aat caa gtc aag ata aga cga aga gtt gat gta aac cctHis Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg Val Asp Val Asn Pro135 140 145 ggt cac gcg gac ctc agt gct aaa gaa gca caa gat gtg ate atg gaaGly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln Asp Val Ile Met Glu150 155 160 165gtt gtt ttc cca aat gaa gtg gga gcc aga att cta aca tca gaa tcaVal Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile Leu Thr Ser Glu Ser170 175 180 caa cta aca ata acc aaa gag aaa aag gaa gaa Ctt cag gac tgc aaaGln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu Leu Gln Asp Cys Lys185 190 195 att gct ccc ttg atg gta gca tac atg cta gaa aga gag ttg gtc cgaIle Ala Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu Arg Glu Leu Val Arg200 205 210 aaa aca agg ttc ctc cca gta gta ggc gga aca age agt gta tac attLys Thr Arg Phe Leu Pro Val Vai Gly Gly Thr Ser Ser Val Tyr Ile215 220 225

gaa gtg ttg cat ctg act cag gga aca tgc tgg gag caa atg tac accGlu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp Glu Gln Met Tyr Thr230 235 240 245ccà gga gga gaa gtt aga aac gat gat att gat caa agt tta att attPro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Ile Asp Gln Ser Leu Ile rie250 255 260 gca gcc cgg aac ata gtg aga aga gca aca gta tca gca gat cca ctaAla Ala Arg Aan Xle Val Arg Arg Ala Thr Val Ser Ala Asp Pro Leu265 270 275 gca tcc cta ctg gaa atg tgc cac agt aca cag att ggt gga aca aggAla Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln Ile Gly Gly Thr Arg280 285 290 atg gta gac ate ctt aag cag aac cc a aca gag gaa caa gct gtg gatMet Val Asp Ile Leu Lys Gln Asn Pro Thr Glu Glu Gln Ala Val Asp295 300 305

ata tgc aaa gca gca atg gga ttg aga att age tca tca ttc age tttIle Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser Ser Ser Phe Ser Phe310 315 320 325

ggt gga ttc acc ttc aaa agg aca agt gga tca tca gtc aag aga gaaGly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser Ser Val Lvs Arg Glu330 335 340

gaa gaa atg ctt acg ggc aac ctt caa aca ttg aaa ata aga gtg catGlu Glu Met Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu Lys Ile Arg Val His345 350 355

gag ggc tat gaa gaa ttc aca atg gtc gga aga aga gca aca gcc attGlu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg Arg Ala Thr Ala Ile360 365 370

ate aga aag gca acc aga aga ttg att caa ttg ata gta agt ggg agaIle Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu Ile Val Ser Gly Arg375 380 385

gat gaa caa tca att gct gaa gca ata att gta gcc atg gtg ttt tcgAsp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val Ala Met Val Phe Ser390 395 400 405

caa gaa gat tgc atg ata aaa gca gtt cga ggc gat ttg aac ttt gttGln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly Asp Leu Asn Phe Val410 415 420

aat aga gca aat cag cgt ttg aac ccc atg cat caa ctc ttg agg catAsn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His Gln Leu Leu Arg His425 430 435

ttc caa aaa gat gca aaa gtg ctt ttc caa aat tgg gga att gaa cccPhe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn Trp Gly Ile Glu Pro440 445 450

atc gac aat gta atg ggg atg att gga ata ttg cct gac atg acc ccaIle Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu Pro Asp Met Thr Pro455 460 465

age acc gag atg tca ttg aga gga gtg aga gtc age aaa atg gga gtgSer Thr Glu Met Ser Leu Arg Gly Val Arg Val Ser Lys Met Gly Val470 475 480 485

gat gag tac tcc age act gag aga gtg gtg gtg age att gac cgt tttAsp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val Ser Ile Asp Arg Phe490 495 500

tta aga gtt cgg gat caa agg gga aac ata cta ctg tcc cct gaa gaaLeu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Ile Leu Leu Ser Pro Glu Glu505 510 515

gtc agt gaa aca caa gga acg gaa aag ctg aca ata att tat tcg tcaVal Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr Ile Ile Tyr Ser Ser520 525 530

tca atg atg tgg gag att aat ggt ccc gaa tca gtg ttg gtc aat actSer Met Met Trp Glu Ile Asn Gly Pro Glu Ser Val Leu Val Asn Thr535 540 545

tat caa tgg ate ate aga aac tgg gaa att gta aaa att cag tgg tcaTyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Ile Val Lys Ile Gln Trp Ser550 555 560 565

cag gac ccc aca atg tta tac aat aag ata gaa ttt gaa cca ttc caaGln Asp Pro Thr Met 570 Leu Tyr Asn Lys Ile 575 Glu Phe Glu Pro Phe 580 Gln tcc ctg gtc CCt agg gcc acc aga age caa tac age ggt ttc gta aga 1Ser Leu Val Pro 585 Arg Ala Thr Arg Ser 590 Gln Tyr Ser Gly Phe 595 Val Arg acc ctg ttt cag caa atg cga gat gta Ctt gga aca ttt gat act gct 1Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala 600 605 610 caa ata ata aaa etc ctc CCt ttt gcc gct gct cct ccg gaa cag agt 1Gln Ile 615 Ile Lys Leu Leu Pro 620 Phe Ala Ala Ala Pro 625 Pro Glu Gln Ser agg atg cag ttc tet tet ttg act gtt aat gta aga ggt tcg gga atg 1Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val Asn Val Arg Gly Ser Gly Met 630 635 640 645 agg ata Ctt gta aga ggc aat tcc ccg gtg ttc aac tac aat aaa gtc 2·Arg Ile Leu Val Arg 650 Gly Asn Ser Pro Val 655 Phe Asn Tyr Asn Lys 660 Val a ct aaa agg ctc aca gtc ctc gga aag gat gea ggt gcg Ctt act gag 2'Thr Lys Arg Leu 665 Thr Val Leu Gly Lys 670 Asp Ala Gly Ala Leu 675 Thr Glu gac CCS gat gaa ggt acg gct gga gta gaa tet gct gtt cta aga ggg 2Asp Pro Asp 680 Glu Gly Thr Ala Gly 685 Val Glu Ser Ala Val 690 Leu Arg Gly ttt Ct C att tta ggt aaa gaa aac aag aga tat ggc cca gea cta age 2Phe Leu 695 Ile Leu Gly Lys Glu 700 Asn Lys Arg Tyr Gly 705 Pro Ala Leu Ser ate aat gaa Ctt age aaa Ctt gea aaa ggg gag aaa gcc aat gta cta 2.Ile Asn Glu Leu Ser Lys Leu Ala Lys Gly Glu Lys Ala Asn Val Leu 710 715 720 725 att ggg caa ggg gac gta gtg ttg gta atg aaa cgg aaa cgt gac tet 2.Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys Arg Lys Arg Asp Ser 730 735 740 age ata Ctt act gac age cag aca gcg acc aaa agg att cgg atg gcc 2Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys Arg Ile Arg Met Ala 745 750 755 ate aat tagtgttgaa ttgtttaaaa acgaccttgt ttctactaat acgagaccat at 2.

Ile Asn<210> SEQ ID NO 16<211> TAMANHO: 759<212> TIPO: PRT

<213> ORGANISMO: Xnfluenza A virus<400> SEQÜÊNCIA: 16

Met Glu Arg Ile Lys Glu Leu Arg Asp Leu Met Leu Gln Ser Arg Thr1 5 10 15 _-Arg Glu Ile Leu Thr Lys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys 20 25 30 Lys Tyr Thr Ser Gly Arg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys 35 40 45 Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Met 50 55 60 Glu Met Ile Pro Glu Arg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys65 70 75 80Thr Asn Asp Ala Gly Ser Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val 85 90 95 Thr Trp Trp Asn Arg Asn Gly Pro Thr Thr Asn Thr Ile His Tyr Pro 100 105 110 Lys Val Tyr Lys Thr Tyr Phe Glu Lys Val Glu Arg Leu Lys His Gly 115 120 125 Thr Phe Gly Pro Val His Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg 130 135 140 Val Asp Val Asn Pro Gly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln145 150 155 160Asp Val Ile Met Glu Val Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile 165 170 175 Leu Thr Ser Glu Ser Gln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu180 185 190

Leu Gln Asp Cys Lys Ile Ala Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu195 200 205

Arg Glu Leu Val Arg Lys Thr Arg Phe Leu Pro Val Val Gly Gly Thr210 215 220

Ser Ser Val Tyr Ile Glu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp225 230 235 240

Glu Gln Met Tyr Thr Pro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Ile Asp245 250 255

Gln Ser Leu Ile Ile Ala Ala Arg Asn Ile vai Arg Arg Ala Thr Val260 265 270

Ser Ala Asp Pro Leu Ala Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln275 280 285

Ile Gly Gly Thr Arg Met Val Asp Ile Leu Lys Gln Asn Pro Thr Glu290 295 300

Glu Gln Ala Val Asp Ile Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser305 310 315 320

Ser Ser Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser325 330 335

Ser Val Lys Arg Glu Glu Glu Met Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu340 345 350

Lys Ile Arg Val His Glu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg 355 360 365

Arg Ala Thr Ala Ile Ile Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu370 375 380

Ile Val Ser Gly Arg Asp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val385 390 395 400

Ala Met Val Phe Ser Gln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly 405 410 415

Asp Leu Asn Phe Val Asn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His420 425 430

Gln Leu Leu Arg His Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn435 440 445

Trp Gly Ile Glu Pro Ile Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu450 455 460

Pro Asp Met Thr Pro Ser Thr Glu Met Ser Leu Arg Gly Val Arg Val465 470 475 480

Ser Lys Met Gly Val Asp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val485 490 495

Ser Ile Asp Arg Phe Leu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Ile Leu500 505 510

Leu Ser Pro Glu Glu Val Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr515 520 525

Ile Ile Tyr Ser Ser Ser Met Met Trp Glu Ile Asn Sly Pro Glu Ser530 535 540

Val Leu Val Asn Thr Tyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Ile Val545 550 555 560

Lys Ile Gln Trp Ser Gln Asp Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys Ile Glu565 570 575

Phe Glu Pro Phe Gln Ser Leu Val Pro Arg Ala Thr Arg Ser Gln Tyr580 585 590

Ser Gly Phe Val Arg Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly595 600 605

Thr Phe Asp Thr Ala Gln Ile Ile Lys Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala610 615 620

Pro Pro Glu Gln Ser Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val Asn Val625 630 635 640

Arg Gly Ser Gly Met Arg Ile Leu Val Arg Gly Asn Ser Pro Val Phe645 650 655

Asn Tyr Asn Lys Val Thr Lys Arg Leu Thr Val Leu Gly Lys Asp Ala 660 665 670

Gly Ala Leu Thr Glu Asp Pro Asp Glu Gly Thr Ala Gly Val Glu Ser675 680 685

Ala Val Leu Arg Gly Phe Leu Ile Leu Gly Lys Glu Asn Lys Arg Tyr690 695 700Gly Pro Ala Leu Ser Ile Asn Glu Leu Ser Lys Leu Ala Lys Gly Glu705 710 715 720

Lys Ala Asn Val Leu Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys

725 730 735

Arg Lys Arg Asp Ser Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys

740 745 750

Arg Ile Arg Met Ala Ile Asn755

Claims (40)

1. Vírus influenza canino isolado de subtipo H3N8 caracterizadopelo fato de que compreende uma hemaglutinina (HA) que tem a SEQ IDNO: 4 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica aSEQ ID NO: 4, com a condição de que os aminoácidos nas posições 94 e-233 sejam idênticos a SEQ ID NO: 4.

2. Vírus influenza canino isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que compreende uma neuraminidase (NM) quecompreende a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 ou uma sequên-cia de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 2, com acondição de que os aminoácidos nas posições 68 e 134 sejam idênticos aSEQ ID NO: 2.

3. Vírus influenza canino isolado de acordo com a reivindicação-1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda pelo menos umdos seguintes: uma nucleoproteína (NP) que tem a seqüência de aminoáci-dos de SEQ ID NO: 6 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que-99% idêntica a SEQ ID NO: 6, com a condição de que o aminoácido 402 se-ja idêntico àquele da SEQ ID NO: 6; uma proteína de matriz 1 (M1) que tema seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 ou uma seqüência de amino-ácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 8, com a condição deque o aminoácido 111 seja idêntico àquele da SEQ ID NO: 8; uma proteínanão estrutural 1 (NS1) que tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO:-10; uma proteína PA que tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO:-12 ou uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 98% idêntica aSEQ ID NO: 12, com a condição de que os aminoácidos 233, 256, 327, e-561 sejam idênticos àqueles da SEQ ID NO: 12; uma PB1 que tem a se-qüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou uma seqüência de aminoáci-dos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 14, com a condição deque os aminoácidos 200 e 213 sejam idênticos àqueles da SEQ ID NO: 14;e/ou PB2 que tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 ou umaseqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO:-16, com a condição de que os aminoácidos 107, 221, 292 e 661 sejam idên-ticos àqueles da SEQ ID NO: 16.

4. Vírus influenza canino isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que está atenuado.

5. Composição caracterizada pelo fato de que compreende ovírus influenza canino isolado como definido na reivindicação 4 em umaquantidade suficiente para induzir uma resposta imune.

6. Vírus influenza canino isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que está inativado.

7. Composição caracterizada pelo fato de que compreende ovírus influenza canino isolado como definido na reivindicação 6 em umaquantidade suficiente para induzir uma resposta imune.

8. Vírus influenza canino isolado de subtipo H3N8 caracterizadopelo fato de que está depositado na American Type Culture Collection comoDepósito de Patente N0 PTA-7694.

9. HA isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 ou (ii) é derivada de umvírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que-99% idêntica a SEQ ID NO: 4, com a condição de que a seqüência de ami-noácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 4 nas posições 94 e 233 ouum fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compreende pelo menosnove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico ao amino-ácido 94 ou 233 de SEQ ID NO: 4.

10. Composição caracterizada pelo fato de que compreende aHA isolada ou purificada ou um fragmento da mesma como definidos na rei-vindicação 9 em uma quantidade suficiente para induzir uma resposta imuneem um animal e um veículo biologicamente aceitável.

11. Uso da HA isolada ou purificada como definida na reivindica-ção 9, ou um fragmento da mesma caracterizado pelo fato de que é parapreparar uma composição para induzir uma resposta imune ao vírus influen-za canino.

12. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a HA, ou um fragmento da mesma, como definida na reivin-dicação 9, opcionalmente como parte de um vetor.

13. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 12, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aHA tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 3 ou um fragmento damesma que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

14. Composição caracterizada pelo fato de que compreende oácido nucléico isolado ou purificado como definido na reivindicação 12 ou 13,que expressa HA ou um fragmento da mesma em uma quantidade suficientepara induzir uma resposta imune em um animal e um veículo biologicamenteaceitável.

15. Uso do ácido nucléico isolado ou purificado como definido nareivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que é para a preparar deuma composição para induzir uma resposta imune ao vírus influenza canino.

16. NM isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)compreende a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 ou (ii) é derivadade um vírus influenza e que compreende uma seqüência de aminoácidosque é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 2, com a condição de que aseqüência de aminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 2 nas posi-ções 68 e 134, ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compre-ende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais éidêntico ao aminoácido na posição 68 ou 134 de SEQ ID NO: 2.

17. Composição caracterizada pelo fato de que compreende aNM isolada ou purificada ou um fragmento da mesma como definida na rei-vindicação 16, em uma quantidade suficiente para induzir uma resposta i-mune em um animal e um veículo biologicamente aceitável.

18. Uso da NM isolada ou purificada como definida na reivindi-cação 16 ou um fragmento da mesma, caracterizado pelo fato de que é parapreparar uma composição para induzir uma resposta imune ao vírus influen-za canino.

19. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a NM ou um fragmento da mesma como definida na reivindi-cação 16, opcionalmente como parte de um vetor.

20. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 19, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aNM compreende a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 ou um frag-mento da mesma que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

21. Composição caracterizada pelo fato de que compreende oácido nucléico isolado ou purificado como definido na reivindicação 19 ou 20,que expressa NM ou um fragmento da mesma em uma quantidade suficientepara induzir uma resposta imune, e um veículo biologicamente aceitável.

22. Uso do ácido nucléico isolado ou purificado como definido nareivindicação 19 ou 20 ou um fragmento do mesmo, caracterizado pelo fatode que é para preparar uma composição para induzir uma resposta imuneao vírus influenza canino.

23. NP isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6 ou (ii) é derivada de umvírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 6, com a condição de que a seqüência de ami-noácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 6 na posição de aminoácido 402 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compreende pelomenos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico aoaminoácido na posição 402 de SEQ ID NO: 6.

24. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a NP ou um fragmento da mesma como definida na reivindi-cação 23, opcionalmente como parte de um vetor.

25. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 24, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aNP tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 5 ou um fragmentodessa que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

26. M1 isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 ou (ii) é derivada de umvírus da influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é mais doque 99% idêntica a SEQ ID NO: 8, com a condição de que a seqüência deaminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 8 na posição de aminoáci-do 111, ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compreende pelomenos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais é idêntico aoaminoácido na posição 111 de SEQ ID NO: 8.

27. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a M1 ou um fragmento da mesma como definidos na reivin-dicação 26, opcionalmente como parte de um vetor.

28. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 27, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aM1 tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 7 ou um fragmentodessa que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

29. NS1 isolada ou purificada, caracterizado pelo fato de quetem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

30. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a NS1 como definida na reivindicação 29, opcionalmentecomo parte de um vetor.

31. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 30, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aNS1 tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 9.

32. Proteína PA isolada ou purificada, caracterizada pelo fato deque (i) tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 ou (ii) é derivadade um vírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é maisdo que 98% idêntica a SEQ ID NO: 12, com a condição de que a seqüênciade aminoácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 12 nas posições de a-minoácido 233, 256, 327 e 561 ou um fragmento de (i) ou (ii), em que ofragmento compreende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo me-nos um dos quais é idêntico ao aminoácido na posição 233, 256, 327 e 561de SEQ ID NO: 12.

33. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a PA ou um fragmento da mesma como definidos na reivin-dicação 32, opcionalmente como parte de um vetor.

34. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 33, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aPA tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 ou um fragmento damesma que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

35. PB1 isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 ou (ii) é derivada de umvírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que-99% idêntica a SEQ ID NO: 14, com a condição de que a seqüência de ami-noácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 14 nas posições de aminoáci-do 200 e 213, ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento compreen-de pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais éidêntico ao aminoácido na posição 200 ou 213 de SEQ ID NO: 14.

36. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a PB1 ou um fragmento da mesma como definidos na reivin-dicação 35, opcionalmente como parte de um vetor.

37. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin--15 dicação 36, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aPB1 tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 13 ou um fragmentoda mesma que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.

38. PB2 isolada ou purificada, caracterizada pelo fato de que (i)tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 ou (ii) é derivada de umvírus influenza e que tem uma seqüência de aminoácidos que é mais do que-99% idêntica a SEQ ID NO: 16, com a condição de que a seqüência de ami-noácidos seja idêntica àquela de SEQ ID NO: 16 nas posições de aminoácido-107, 221, 292, e 661, ou um fragmento de (i) ou (ii), em que o fragmento com-preende pelo menos nove aminoácidos contíguos, pelo menos um dos quais éidêntico ao aminoácido na posição 107, 221, 292, ou 661 de SEQ ID NO: 16.

39. Ácido nucléico isolado ou purificado caracterizado pelo fatode que codifica a PB2 ou um fragmento da mesma como definidos na reivin-dicação 38, opcionalmente como parte de um vetor.

40. Ácido nucléico isolado ou purificado de acordo com a reivin-dicação 39, caracterizado pelo fato de que o ácido nucléico que codifica aPB2 tem a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 15 ou um fragmentoda mesma que codifica pelo menos nove aminoácidos contíguos.