RU2375375C2 - Гуманизированное анти-cd4 антитело с иммунодепрессивными свойствами - Google Patents

Гуманизированное анти-cd4 антитело с иммунодепрессивными свойствами Download PDF

Info

Publication number
RU2375375C2
RU2375375C2 RU2005132389/13A RU2005132389A RU2375375C2 RU 2375375 C2 RU2375375 C2 RU 2375375C2 RU 2005132389/13 A RU2005132389/13 A RU 2005132389/13A RU 2005132389 A RU2005132389 A RU 2005132389A RU 2375375 C2 RU2375375 C2 RU 2375375C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antibody
cells
seq
humanized
fragment
Prior art date
Application number
RU2005132389/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2005132389A (ru
Inventor
Жон ВИЖДЕН (FR)
Жон ВИЖДЕН
Хельмут ЙОНУЛАЙТ (DE)
Хельмут ЙОНУЛАЙТ
Original Assignee
Биотест Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Биотест Аг filed Critical Биотест Аг
Publication of RU2005132389A publication Critical patent/RU2005132389A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2375375C2 publication Critical patent/RU2375375C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Описано гуманизированное антитело к CD4 или его фрагмент, способное активировать регуляторные CD25+CD4+Т-клетки, которое включает гипервариабельные участки (CDRs) из моноклонального антитела мыши к CD4 B-F5. Предложена лекарственная композиция для предупреждения и/или лечения иммунных нарушений, в состав которой входит описанное антитело или его фрагмент в эффективном количестве. Раскрыт способ лечения субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту предложенной композиции. Описанное антитело способно активировать регуляторные CD25+ CD4+ Т-клетки и может быть использовано для приготовления иммунодепрессивных композиций. 10 н. и 6 з.п. ф-лы, 9 ил., 4 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к гуманизированному антителу к CD4 и его применению в качестве иммуномодулирующего средства.
Аутоиммунные заболевания, а также реакция отторжения трансплантата являются следствием патологического иммунного ответа на тканевые антигены - аутоантигены в первом случае и аллоантигены трансплантата во втором.
Аутоиммунные заболевания включают, например, ревматоидный артрит, диабет типа I, рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, атопический дерматит и т.д.
Стандартные схемы лечения таких иммунных нарушений предусматривают применение иммунодепрессивных препаратов. Однако эти препараты индуцируют общую иммунодепрессию, что вызывает подавление не только вредных, но и полезных для организма функций иммунной системы. Вследствие этого возникают побочные эффекты, например оппортунистические инфекции (инфекции, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами).
В качестве альтернативного метода лечения предлагается использовать иммунодепрессивные моноклональные антитела (мкАТ) к находящимся на клеточной поверхности молекулам, которые или способствуют удалению специфических субпопуляций лимфоцитов (элиминирующие антитела), или подавляют функционирование поверхностных молекул-мишеней без уничтожения клеток, на поверхности которых они находятся (неэлиминирующие антитела).
Согласно общепринятому мнению CD4+ Т-клетки играют главную роль в инициации и поддержании аутоиммунных реакций. Соответственно предлагается использовать мкАТ к молекулам на поверхности CD4+ Т-клеток, в частности анти-CD4 мкАТ, в качестве иммунодепрессантов. Хотя возможные преимущества этого похода подтверждаются многочисленными клиническими исследованиями, они также поставили несколько вопросов, решение которых сделало бы анти-CD4 мкАТ более пригодными для использования в клинической практике.
Например, антитела B-F5 (IgG1 мыши к CD4 человека) испытывали при различных аутоиммунных заболеваниях:
- несколько открытых испытаний, проведенных на больных, страдающих ревматоидным артритом, свидетельствовали о положительном клиническом эффекте B-F5 в суточной дозе не менее 20 мг (Racadot и др., Clin. Exp. Rheumatol. 10 (4), 1992, c.365-374; Wending и др., Clin. Rheumatol. 11 (4), 1992, c.542-547). Однако плацебо-контролируемые испытания с применением суточной дозы 20 мг, вводившейся в течение 10 дней, не продемонстрировали значительного улучшения (Wending и др., J.Rheumatol. 25 (8), 1998, c.1457-1461);
- при псориазе наблюдали улучшение состояния после лечения B-F5 в дозе от 0,2 до 0,8 мг/кг/день в течение 7 или 8 дней (Morel и др., J.Autoimmun. 5 (4), 1992, c.465-477);
- у больных рассеянным склерозом (PC), имеющим рецидивирующее (ремиттирующее) течение, после 10-дневного курса лечения наблюдали некоторые положительные эффекты: у некоторых из этих больных в течение 6 месяцев после проведенной терапии отсутствовали рецидивы заболевания (Racadot и др., J Autoimmunol. 6 (6), 1993, c.771-786); сходные эффекты наблюдали Rumbach и др. (Mult. Scler. 1 (4), 1996, c.207-212);
- при тяжелых формах болезни Крона никакого заметного улучшения не наблюдалось у больных, получавших B-F5 в дозе 0,5 мг/кг/день в течение 7 дней подряд или в дозе 0,5 мг/кг/день в первый день (день 0) и 1 мг/кг/день в дни с 1-го по 6-й (Canva-Delcambre и др., Aliment. Pharmacol. Ther. 10 (5), 1996, c.721-727);
- сообщалось о модификации биологических параметров, указывающих на действие B-F5 in vivo, при использовании B-F5 в суточной дозе 30 мг для профилактики отторжения трансплантата. Однако также сообщалось, что биодоступность B-F5 была недостаточна, чтобы признать целесообразным его применение для профилактики отторжения трансплантата (Dantal и др., Transplantation 27; 62 (10), 1996, c.1502-1506).
Из вышеприведенных примеров следует, что главной проблемой является то, что для достижения клинического эффекта необходимо вводить большие дозы мкАТ. Это может быть обусловлено, помимо всего прочего, недостаточной доступностью мкАТ для лимфоцитов в тканях-мишенях. Применение более больших доз может быть связано с избыточным действием на лимфоциты крови, вызывающим нежелательные побочные эффекты.
Еще одним недостатком лечения больных людей моноклональными антителами является то, что обычно такие антитела секретируются клетками мыши, и они вызывают у человека иммунный ответ. Это не только снижает эффективность проводимого лечения и, более того, даже эффективность любого лечения мышиными антителами, которое человек мог бы получить в будущем, но также повышает риск возникновения анафилаксии.
В принципе, этот недостаток может быть преодолен за счет использования гуманизированных антител - гибридных молекул, полученных путем введения гипервариабельных участков (CDR, от англ. complementarity determining region) моноклонального тела мыши, обусловливающих специфичность связывания антигена, в каркасные участки (FR, от англ. framework regions) молекулы иммуноглобулина человека. Целью гуманизации является получение рекомбинантного антитела, обладающего антигенсвязывающими свойствами моноклонального антитела мыши, из которого получены последовательности CDR, но намного менее иммуногенного для человека.
В некоторых случаях для переноса антигенсвязывающих свойств (включая не только специфичность, но также сродство к антигену) бывает достаточно замены CDR человека на CDR мыши в каркасных участках молекулы иммуноглобулина человека. Однако во многих антителах некоторые из аминокислотных остатков, находящихся в каркасной области иммуноглобулина, играют важную роль в процессе связывания антигена, потому что они или прямо контактируют с антигеном в комплексе антиген-антитело, или влияют на конформацию CDR и таким образом на их связывание с антигеном.
Таким образом, в большинстве случаев также необходимо производить замены одного или нескольких остатков в каркасной области иммуноглобулина человека на соответствующие остатки каркасной области мышиного антитела. Поскольку для предотвращения иммунных реакций на мышиный компонент антитела важно минимизировать количество замещенных остатков, проблема заключается в том, чтобы определить, какой или какие именно аминокислотные остатки важны для сохранения антигенсвязывающих свойств антитела. Для определения наиболее благоприятных сайтов замещения предлагаются различные методы, которые, исходя из общих принципов, могут быть полезны на первых этапах гуманизации антител, но при этом окончательные результаты для разных антител сильно варьируют. Таким образом, для конкретного антитела очень трудно предсказать, какие замены дадут желаемый результат.
Тем не менее, авторы изобретения предприняли попытки гуманизировать В-F5 антитела мыши и добились успеха в получении гуманизированных B-F5 (здесь и далее именуемых hB-F5), обладающих такими же CD4-связывающими свойствами, как и исходные мышиные B-F5.
Кроме того, неожиданно оказалось, что оптимальное иммунодепрессивное действие in vivo hB-F5 проявляет при гораздо меньших дозах, чем применявшиеся ранее дозы исходных B-F5 и дозы других моноклональных антител к CD4, которые применяются в настоящее время.
Фактически, hB-F5 обеспечивали эффективную иммунодепрессию, которая выражалась в положительном клиническом эффекте у больных с ревматоидным артритом после 10-дневного курса в дозе до 1 мг/день, но предпочтительно по схеме 5 мг через день.
В настоящем изобретении предлагается гуманизированное антитело (hB-F5), полученное из мкАТ B-F5 мыши, которое содержит вариабельные (V) домены, характеризующиеся следующими полипептидными последовательностями:
- V домен тяжелой Н-цепи:
EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:1)
- V домен легкой L-цепи:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:2).
Как правило, антитело hB-F5 настоящего изобретения также содержит константную область иммуноглобулина человека (Fc). Эта константная область может быть выбрана из группы, включающей константные домены иммуноглобулинов любого класса, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и любого изотипа, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Предпочтительно константные области выбирают среди константных доменов IgG, в частности IgG1.
Настоящее изобретение также относится к любому фрагменту антитела hB-F5, содержащему его вариабельные области, в частности фрагментам Fab, Fab', F(ab)'2, Fv и одноцепочечному антителу scFv.
Настоящее изобретение также относится к полинуклеотидам, выбранным из группы, включающей:
- полинуклеотид, кодирующий полипептид SEQ ID NO:1;
- полинуклеотид, кодирующий полипептид SEQ ID NO:2.
Предпочтительно вышеупомянутый полинуклеотид выбирают из группы, включающей:
- полинуклеотид последовательности SEQ ID NO:3;
- полинуклеотид последовательности SEQ ID NO:4.
Предлагаемые в настоящем изобретении полинуклеотиды могут быть легко получены с использованием хорошо известных методов технологии рекомбинантных ДНК и/или химического синтеза ДНК.
Можно произвести слияние полинуклеотида, кодирующего вариабельный домен Н- или L-цепи антитела hB-F5, с полинуклеотидом, кодирующим константную область Н- или L-цепи иммуноглобулина человека, с целью экспрессии полученных таким образом полноразмерных Н- и L-цепей; также может быть добавлена последовательность, кодирующая секреторный сигнальный пептид. Эти рекомбинантные полинуклеотиды также являются частью настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также относится к векторам экспрессии, в которых предлагаемый в настоящем изобретении полинуклеотид связан с соответствующей регулирующей последовательностью, обеспечивающей регуляцию его транскрипции и трансляции в выбранной клетке-хозяине, и к рекомбинантным векторам, включающим полинуклеотид или вектор экспрессии настоящего изобретения.
Эти рекомбинантные молекулы ДНК могут быть получены и введены в клетку-хозяина хорошо известными методами технологии рекомбинантных ДНК и генной инженерии.
Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, трансформированной предлагаемым в настоящем изобретении полинуклеотидом.
В рамках настоящего изобретения в качестве клеток-хозяев могут быть использованы прокариотические и эукариотические клетки. Из пригодных для этой цели эукариотических клеток можно упомянуть такие, например, как растительные клетки, дрожжевые клетки, например Saccharomyces, клетки насекомых, такие как Drosophila или Spodoptera, и клетки млекопитающих, такие как HeLa, СНО, 3Т3, С127, ВНК, COS и др.
Конструирование векторов экспрессии настоящего изобретения и трансформация клеток-хозяев могут быть произведены с помощью стандартных методов молекулярной биологии.
Антитело hB-F5 настоящего изобретения может быть получено путем культивирования клеток-хозяев, несущих вектор экспрессии, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую вышеупомянутое антитело, в условиях, подходящих для его экспрессии, и выделение названного антитела из культуры клеток-хозяев.
Настоящее изобретение также относится к лекарственной композиции на основе антитела hB-F5 настоящего изобретения или его фрагмента, как определено выше.
Предпочтительно вышеупомянутая композиция представляет собой композицию для парентерального введения, составленную таким образом, чтобы можно было вводить hB-F5 в дозе от 0,1 до 10 мг, предпочтительно от 1 до 5 мг.
Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению антитела hB-F5 настоящего изобретения или его фрагмента для приготовления иммунодепрессивной композиции. Вышеупомянутая иммунодепрессивная композиция полезна, в частности, для лечения или профилактики таких патологических состояний, как отторжение трансплантата, реакция трансплантат против хозяина или реакция хозяин против трансплантата, или аутоиммунных заболеваний, включая такие, например, как миокардит, сахарный диабет, псориаз, красная волчанка, болезнь Крона, рассеянный склероз, ревматоидный артрит и др.
Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что hB-F5 способно активировать определенную субпопуляцию CD4 Т-клеток, а именно CD4+ CD25+ клеток.
Регуляторные CD4+CD25+ Т-клетки (Treg клетки) составляют 5-10% периферических CD4+ Т-клеток. Они были впервые описаны в 1995 г. Sakaguchi и др. (J. Immunol. 155, 1995, c.1151-1164) как регуляторные клетки у мышей. При активации эти клетки способны подавлять активацию и пролиферацию как CD4+, так и CD8+ Т-клеток. Позднее CD4+CD25+ Т-супрессоры также были обнаружены у людей (Jonuleit и др., J. Exp. Med. 193, 2001, c.1285-1294; Levings и др., J. Exp. Med. 193, 2001, 1295-1302; Dieckmann и др., J. Exp. Med. 193, 2001, 1303-1310). В печати появились многочисленные статьи, описывающие иммуносупрессорную роль этих клеток на моделях различных аутоиммунных заболеваний и в системах in vitro (см., напр., обзор Shevach, опубликованный в J. Exp. Med. 193 (11), 2001, c.41-46). Также было показано, что CD4+ CD25+ Treg клетки, активированные ex vivo, эффективно предотвращают развитие болезни трансплантат против хозяина (Taylor и др., Blood 99, 2002, c.3493-3499; Cohen и др., J. Exp. Med. 196, 2002, c.401-406; Hoffmann и др., J. Exp. Med. 196, 2002, c.389-399). Таким образом, создание средств активации CD4+CD25+ Treg клеток представляет большой интерес.
Настоящее изобретение также относится к применению антитела hB-F5 настоящего изобретения или исходного антитела B-F5 для активации регуляторных CD25+CD4+ Т-клеток in vitro.
Предпочтительно антитело hB-F5 настоящего изобретения добавляют к регуляторным CD25+CD4+ Т-клеткам в концентрации от 1 до 10 мкг/мл.
Настоящее изобретение будет проиллюстрировано следующими дополнительными описаниями, а именно примерами, иллюстрирующими свойства антитела hB-F5 настоящего изобретения. Однако следует понимать, что эти примеры даны только в целях иллюстрации, но настоящее изобретение никоим образом этим не ограничивается.
Пример 1: КОНСТРУИРОВАНИЕ ГУМАНИЗИРОВАННЫХ B-F5
План "гуманизации" VH и Vκ B-F5
Последовательности ДНК, кодирующие VH и Vκ B-F5 антител мыши, представлены на фиг.1 и фиг.2 соответственно, и под идентификаторами последовательностей SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6. Человеческие VH и Vκ, к которым "привиты" мышиные CDR, были выбраны в результате поиска в базах данных человеческого VH, который был бы в максимальной степени гомологичен исходным VH и Vκ мышиного B-F5. Область VH человеческого антитела (М26; инвентарный номер A36006) отличалась наиболее высокой гомологией с VH антитела B-F5. Область Vκ другого человеческого антитела (FK-001; Nakatani и др., Biotechnology 7, 1989, c.805-810) имела наиболее высокую гомологию с Vκ B-F5.
Были сконструированы два типа Vκ, отличающиеся тем, что в одном случае четвертым остатком был лейцин, а в другом метионин; соответственно они были обозначены L4L и L4M. Два сконструированных типа VH отличались тем, что в одном случае в положении 37 был лейцин, а в другом валин, и соответственно были обозначены H37L и H37V. Выравнивание полипептидных последовательностей B-F5, FK-001, L4L и L4M представлено на фиг.3. На фиг.4 изображены полипептидные последовательности B-F5, М26, H37L и H37V. В рамки заключены остатки FR, которые, как ранее сообщалось, играют важную роль в упаковке CDR (Chothia и др., Nature 342, 1989, с.877; Foote и др., J. Mol. Biol.224, 1992, c.487).
Путем создания разных комбинаций этих VH и Vκ были сконструированы четыре варианта V областей.
Экспрессия гуманизированных B-F5
Последующие этапы получения гуманизированных B-F5 соответствовали изложенным в патенте US №5886152 для гуманизированных антител В-В10.
Вкратце, плазмиды для экспрессии Н-цепи (гуманизированная область VH, слитая с константной областью цепи γ-1 иммуноглобулина человека) (Takahashi и др., Cell 29, 1982, c.671-679)) и L-цепи (гуманизированная область Vκ, слитая с константной областью κ-цепи FK-001) гуманизированного B-F5 конструировали отдельно. В этих плазмидах экспрессия гуманизированного B-F5 управляется паромотором/энхансером гена человеческих моноклональных IgM (FK-001). На фиг.5 и 6 соответственно показаны фрагменты плазмид, кодирующих области VH и Vκ гуманизированного B-F5. Последовательности, кодирующие вариабельную область V, подчеркнуты, а над нуклеотидной последовательностью указаны соответствующие полипептидные последовательности. Обе плазмиды и pSV2neo одновременно трансфицировали в клетки мышиной миеломы Sp2/0 (ATCC CRL-1581), используя LipofectinТМ Трансфицированные клетки гибридомы, продуцирующие человеческий IgG (трансфектомы), отбирали методом ELISA с использованием антител против IgG человека (γ цепь) и антител против κ-цепи Ig человека.
Пример 2
ХАРАКТЕРИСТИКА РАЗНЫХ ВАРИАНТОВ ГУМАНИЗИРОВАННЫХ В-F5
Оценка сродства связывания с CD4
Культуральные супернатанты трансфектом, продуцирующим четыре варианта hB-F5, собирали и концентрировали. С помощью аффинной хроматографии на Sepharose с протеином А из культуральных супернатантов выделяли очищенные антитела различных видов, которые характеризовали по сродству связывания с CD4, используя конкурентный метод ELISA для измерения их подавляющей активности в отношении связывания меченых биотином mB-F5 с солюбилизированными CD4, покрывающими поверхность лунок микротитрационных планшет. Время инкубации составляло 2 ч при 37°С и ночь при 4°С.
Относительная связывающая активность разных вариантов hB-F5 (за 100% принимается связывающая активность mB-F5) представлена в Таблице I ниже.
Таблица I
Антитело Температура (°С) Относительная связывающая активность (% от активности mB-F5)
H37L/L4L 4 80
  37 30
H37L/L4M 4 80
  37 30
H37V/L4L 4 10-20
  37 10
H37V/L4M 4 10-20
  37 10
Как следует из представленных в Таблице I результатов, 37-й остаток последовательности VH - лейцин - играет решающую роль в поддержании способности hB-F5 связываться с CD4, так как сродство связывания с CD4 снижается в четыре раза при замене 37Leu на 37Val. Напротив, 4-й остаток последовательности Vκ оказался не таким важным для связывания с CD4. Поскольку с помощью молекулярного моделирования не удалось четко продемонстрировать структурные различия между 37Leu и 37Val в VH, преимущество H37L над H37V в связывании с CD4 было неожиданным.
Для оценки биологической активности in vitro были выбраны H37L/L4L и H37L/L4M.
Исследование биологической активности гуманизированных B-F5 in vitro
Проводили оценку биологической активности in vitro мышиных B-F5 и гуманизированных B-F5 (H37L/L4M IgG1 и H37L/L4L IgG1). Также были протестированы гуманизированные B-F5 изотипа IgG2 (H37L/L4M IgG2 и H37L/L4L IgG2).
Биологическую активность in vitro mB-F5 и четырех типов hB-F5 оценивали с использованием мононуклеаров периферической крови (МПК) здоровых доноров. МПК активировали конканавалином А (2,5 мкг/мл в течение 3 дней) или очищенным белковым производным (PPD, от англ. Purified Protein Derivative) (10 мкг/мл в течение 4 дней) в присутствии мышиных B-F5 или hB-F5; пролиферативный ответ МПК отслеживали по включению 3H-тимидина.
Результаты представлены на фиг.7 и 8. B-F5 антитела мыши и hB-F5 умеренно подавляли ConA-индуцированную пролиферацию, но отмечались различия в активности между разными видами антител и/или между антителами разных доноров (фиг.7). Также мышиные антитела и hB-F5 были способны подавлять антиген-специфическую пролиферацию МПК, индуцированную PPD (фиг.8).
hB-F5 изотипа IgG1 подавляли PPD-индуцированную пролиферацию более эффективно (подавление достигало 70%, фиг.7 и 8), чем mB-F5. Антитела изотипа IgG1 были более эффективны, чем антитела изотипа IgG2, ингибирующая активность которых была практически равна активности mB-F5. H37L/L4M изотипа IgG1 были более эффективны, чем H37L/L4L изотипа IgG1. H37L/L4M и H37L/L4L изотипа IgG2 обладали практически одинаковой ингибирующей активностью. Ингибирующая активность разных B-F5 в отношении PPD-индуцированной пролиферации МПК была следующей: H37L/L4M IgG1>H37L/L4L IgG1>H37L/L4M IgG2 = H37L/L4L IgG2 = mB-F5.
С учетом биологической активности in vitro и меньшего количества мышиных аминокислот, для дальнейших исследований были выбраны H37L/L4M IgG1.
Пример 3
ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТА hB-F5 У ПАЦИЕНТОВ С РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ (РА)
Эффект hB-F5 (H37L/L4M IgG1) оценивали на пациентах с РА.
Испытание проводили в следующих условиях:
Каждый пациент в течение 10 дней получал лечение, состоявшее в пяти инъекциях 5 мг hB-F5 (инъекции делали через день).
Результаты по трем разным пациентам представлены в Таблицах II-IV ниже:
Пациент 1 (Таблица II)
Диагноз: ревматоидный артрит, активность 2
ревматоидный фактор: 2; стадия: 2
пол: ж; возраст: 65; начало заболевания: 1965
дополнительная терапия: диклофенак по 150 мг в день
Таблица II
Клинические данные До лечения Во время лечения (дни) После
2 4 6 8 10 4 недели
Оценка болезненности суставов (0-10) 4,5 2 2 1,5 3 2,2 3,5
Утренняя скованность (мин) 360 0 0 90 90 120 20
Оценка тяжести состояния (1-5) врач 3 3 3 2,5 3 3 3
пациент 3 3 3 3 3 3 3
Количество распухших суставов 6 6 4 3 2 2 7
Количество болезненных суставов 25 12 6 7 13 13 23
Индекс опухания (0-30) 8 6 4   2 3 9
Сила рук правая 17 15 20 22 12 20 15
левая 10 10 10 15 12 19 12
Функциональный статус (0-10) 7,7 4 2,3 2 2,3 3,1 3
Оценка эффектов лечения врач   3 3 4 3 5 2
пациент   3 3 4 3 5 2
Скорость оседания эритроцитов 35         34 25
С-реактивный белок 4,0         2 2,5
Пациент 2 (Таблица III)
Диагноз: ревматоидный артрит, активность 3
ревматоидный фактор: 2; стадия: 2
пол: ж; возраст: 48; начало заболевания: 2000
Дополнительная терапия: диклофенак по 150 мг в день
Таблица III
Клинические данные До лечения Во время лечения (дни) После
2 4 6 8 10 4 нед.
Оценка болезненности суставов (0-10) 8,2   8,2 5 2,9 2,2 0,6
Утренняя скованность (мин) 240   120 120 60 20 10
Оценка тяжести состояния (1-5) врач 4   3 3 3 3 2
пациент 4   4 3 3 3 2
Количество распухших суставов 13   12 11 11 5 5
Количество болезненных суставов 22   22 16 15 13 7
Индекс опухания (0-30) 15   14 12 11 5 5
Сила рук правая 30   30 28 34 36 40
левая 22   20 18 18 22 28
Функциональный статус (0-10) 8,7   5,1 2,2 2,2 1,1 0,7
Клинические данные До лечения Во время лечения (дни) После
2 4 6 8 10 4нед.
Оценка эффектов лечения врач     2 4 4 4/5 5
пациент     2 2 3 4/5 5
Скорость оседания эритроцитов 35         38 35
С-реактивный белок 1.2         0,2 0,8
Пациент 3 (Таблица IV)
Диагноз: ревматоидный артрит, активность 3
ревматоидный фактор: 3; стадия: 2
пол: ж; возраст: 49; начало заболевания: 1989
Дополнительная терапия: диклофенак по 150 мг в день
Таблица IV
Клинические данные Перед лечением Во время лечения (дни) После лечения
2 4 6 8 10 1 2 недели
Оценка боли в суставах (0-10) 7,9 7,6 7,6 7,2 5,0 3,0 1,5 1,3
Утренняя скованность (мин) 360 0 0 0 0 0 0  
Тяжесть состояния (1-5) врач 4 3 3 3 3 3 2 2
пациент 5 4 4 3   3 2 2
Количество опухших суставов 10 7 7 6 5 5 5 5
Количество болезненных суставов 30 24 24 15 11 11 10 9
Индекс опухания (0-30) 15 12 12 9 7 7 6  
Сила рук правая 24 30 30 36 48 48 50 50
левая 24 30 30 38 40 34 40 42
Функциональный статус (0-10) 8,5 7,2 5,2 0 0 0 0 0
Оценка эффектов лечения врач   3 3 3   5 5 5
пациент   3 4/3 4 4 5 5 5
Скорость оседания эритроцитов 61   53 42 45     41
С-реактивный белок 8       3,7     3,3
Пример 4
АКТИВАЦИЯ CD4+CD25+ Treg КЛЕТОК АНТИТЕЛОМ hB-F5
Выделение Т-клеток
1) Регуляторные Т-клетки (Treg)
- CD25+ клетки выделяли методом иммуномагнитной сепарации с использованием CD25 микросфер;
- для удаления нежелательных клеточных популяций проводили негативную селекцию с использованием CD14/CD8/CD19 Dynabeads® (реагент фирмы DYNAL);
- элиминацию CD5RA+ клеток проводили с использованием CD45RA мкАТ + мышиные антитела Dynabeads®; чистота выделенной фракции: >95% CD4+CD25+ Treg
2) Эффекторные клетки
- CD4+Т-клетки выделяли с использованием CD4 Dynabeads®
- элиминацию CD45RO+ клеток проводили с использованием CD45RO+ мкАТ + мышиные антитела Dynabeads; чистота выделенной фракции: >98% CD4/CD45RA+, CD25- Т-эффекторы
3) Тест-система
CD25+ Tregs донора А сокультивировали в течение 2 дней с сингенными МПК, из которых удалена популяция CD2 лимфоцитов, без добавления каких-либо дополнительных факторов (отрицательный контроль = отсутствие активации = отсутствие супрессии) или в присутствии 0,5 мкг/мл анти-CD3 (ОКТ-3=положительный контроль = полная активация Treg клеток), или в присутствии 5 или 30 мкг/мл hB-F5.
Затем клетки тщательно промывали, выделяли фракцию CD25+Treg клеток и подвергали их воздействию γ-излучения (3000 рад).
4) Тест на супрессорную активность
После предварительного культивирования CD25+Treg клетки (preCD25) в течение 4 дней сокультивировали со свежевыделенными CD4+ Т-эффекторами (1:1) донора Б в присутствии антиген-презентирующих клеток (АРС, от англ. antigen-presenting cells) (МПК, истощенные по CD2) донора А (сингенны рrеТ-клеткам = дополнительная активация отсутствует, аллогенны Т-эффекторам = аллогенная реакция смешанной популяции лимфоцитов). Далее клетки инкубировали 16 ч с 3Н-тимидином и оценивали уровень пролиферации эффекторных Т-клеток. Результаты представлены на фиг.9.
Подпись к фиг.9:
- отрицательный контроль (активация отсутствует) = preCD25;
- 0,5 мкг/мл ОКТ-3 (положительный контроль, полная активация)== preCD25;
- 5 мкг/мл hB-F5 (Тест-1) = preCD25-CD4;
- 30 мкг/мл hB-F5 (Тест-2) = preCD25-CD4.
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003

Claims (16)

1. Гуманизированное антитело к CD4, способное активировать регуляторные CD4+ CD25+ Т-клетки, где гуманизированное антитело к CD4 включает гипервариабельные участки (CDRs) из моноклонального антитела мыши к CD4 B-F5 и необязательно содержащее изменения в последовательности, при которых сохраняется специфичность антитела и/или его аффинность.
2. Гуманизированное антитело к CD4 по п.1, где указанное гуманизированное антитело содержит V домены, характеризующиеся следующими полипептидными последовательностями:
- V домен тяжелой (Н) цепи:
EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKSENYGANYAESVRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:1)
- V домен легкой (L) цепи:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASILESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:2).
3. Гуманизированное антитело по п.2, которое является hB-F5 антителом.
4. Фрагмент антитела, охарактеризованного в любом из пп.1-3, который способен активировать регуляторные CD4+ CD25+ Т-клетки.
5. Фрагмент антитела по п.4, который способен активировать регуляторные CD4+ CD25+ Т-клетки, где указанный фрагмент содержит V домены SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.
6. Полинуклеотид, кодирующий SEQ ID NO:1, которая является V доменом Н-цепи hB-F5.
7. Полинуклеотид по п.6, представленный в SEQ ID NO:3.
8. Полинуклеотид, кодирующий SEQ ID NO:2, которая является V доменом L-цепи hB-F5.
9. Полинуклеотид по п.8, представленный в SEQ ID NO:4.
10. Лекарственная композиция для предупреждения и/или лечения иммунных нарушений, в состав которой входит гуманизированное антитело по любому из пп.1-3; или фрагмент по п.4 или 5 в эффективном количестве.
11. Применение гуманизированного антитела по любому из пп.1-3; или фрагмента по п.4 или 5 для приготовления иммунодепрессивной композиции.
12. Применение гуманизированного антитела по любому из пп.1-3; или фрагмента по п.4 или 5 для приготовления композиции для лечения или профилактики отторжения трансплантата, реакции трансплантат против хозяина или хозяин против трансплантата.
13. Применение гуманизированного антитела по любому из пп.1-3; или фрагмента по п.4 или 5 для приготовления композиции для лечения и профилактики аутоиммунных заболеваний.
14. Применение по п.13, где аутоиммунным заболеванием является миокардит, сахарный диабет, псориаз, красная волчанка, болезнь Крона, рассеянный склероз, ревматоидный артрит.
15. Применение гуманизированного антитела по любому из пп.1-3 для активации регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток in vitro.
16. Способ лечения субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтической композиции по п.10.
RU2005132389/13A 2003-03-21 2004-03-19 Гуманизированное анти-cd4 антитело с иммунодепрессивными свойствами RU2375375C2 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP03290725.5 2003-03-21
EP03290725 2003-03-21
EP03290942A EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2003-04-16 Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
EP03290942.6 2003-04-16

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2005132389A RU2005132389A (ru) 2006-06-27
RU2375375C2 true RU2375375C2 (ru) 2009-12-10

Family

ID=32826809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2005132389/13A RU2375375C2 (ru) 2003-03-21 2004-03-19 Гуманизированное анти-cd4 антитело с иммунодепрессивными свойствами

Country Status (21)

Country Link
US (6) US7452981B2 (ru)
EP (4) EP1460088A1 (ru)
JP (1) JP4491454B2 (ru)
KR (2) KR20130042654A (ru)
AT (2) ATE520716T1 (ru)
AU (1) AU2004222089B2 (ru)
CA (1) CA2519620C (ru)
CY (2) CY1109390T1 (ru)
DE (1) DE602004021702D1 (ru)
DK (2) DK1654286T3 (ru)
ES (1) ES2327523T3 (ru)
HK (2) HK1132278A1 (ru)
IL (2) IL169657A (ru)
MX (1) MXPA05009953A (ru)
NZ (1) NZ541523A (ru)
PL (2) PL2070948T3 (ru)
PT (2) PT1654286E (ru)
RU (1) RU2375375C2 (ru)
SG (1) SG159392A1 (ru)
SI (2) SI1654286T1 (ru)
WO (1) WO2004083247A1 (ru)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1460088A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2007014420A1 (en) * 2005-08-02 2007-02-08 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Method for identifying regulatory t cells
TW200817438A (en) * 2006-08-17 2008-04-16 Hoffmann La Roche A conjugate of an antibody against CCR5 and an antifusogenic peptide
US8557533B2 (en) 2007-02-01 2013-10-15 Helmut Jonuleit Screening method for the identification of agents capable of activating CD4+CD25+ regulatory T-cells through interactions with the HIV-1 GP120 binding site on CD4
US20090143288A1 (en) * 2007-03-13 2009-06-04 Roche Palo Alto Llc Peptide-complement conjugates
AR067584A1 (es) 2007-07-20 2009-10-14 Hoffmann La Roche Un conjugado de un anticuerpo contra la cd4 y peptidos antifusogenicos
PT2592148T (pt) * 2007-10-12 2018-11-12 Hoffmann La Roche Expressão proteica de múltiplos ácidos nucleicos
JP5795167B2 (ja) 2008-03-13 2015-10-14 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
SG190627A1 (en) 2008-03-13 2013-06-28 Biotest Ag Agent for treating disease
CN102027017A (zh) * 2008-03-13 2011-04-20 生物测试股份公司 一种治疗疾病的试剂
AU2009282413B2 (en) 2008-08-11 2014-07-17 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric alkanoate conjugates
KR20110061630A (ko) * 2008-09-29 2011-06-09 바이오테스트 아게 질병 치료용 조성물
GB0920944D0 (en) * 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
WO2012088422A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds
US10894087B2 (en) 2010-12-22 2021-01-19 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds
US20140088021A1 (en) 2011-05-27 2014-03-27 Nektar Therapeutics Water-Soluble Polymer-Linked Binding Moiety and Drug Compounds
US20150118229A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Abbvie Inc. Jak1 selective inhibitor and uses thereof
US20170165364A1 (en) * 2014-02-21 2017-06-15 Idac Theranostics, Inc. Therapeutic agent for solid cancer
CN113699116A (zh) 2014-12-10 2021-11-26 明尼苏达大学董事会 用于治疗疾病的遗传修饰的细胞、组织和器官
EP3362455A1 (en) 2015-10-16 2018-08-22 AbbVie Inc. PROCESSES FOR THE PREPARATION OF (3S,4R)-3-ETHYL-4-(3H-IMIDAZO[1,2-a]PYRROLO[2,3-e]-PYRAZIN-8-YL)-N-(2,2,2-TRIFLUOROETHYL)PYRROLIDINE-1-CARBOXAMIDE AND SOLID STATE FORMS THEREOF
US11512092B2 (en) 2015-10-16 2022-11-29 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11773106B2 (en) 2015-10-16 2023-10-03 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11365198B2 (en) 2015-10-16 2022-06-21 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11524964B2 (en) 2015-10-16 2022-12-13 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US10550126B2 (en) 2015-10-16 2020-02-04 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-A]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
KR20200005596A (ko) 2017-05-12 2020-01-15 크리스퍼 테라퓨틱스 아게 세포를 엔지니어링하기 위한 물질 및 방법, 및 면역-종양학에서의 그의 용도
EP3790629A1 (en) 2018-05-11 2021-03-17 CRISPR Therapeutics AG Methods and compositions for treating cancer
MX2021013359A (es) 2019-04-30 2022-01-31 Crispr Therapeutics Ag Terapia de celulas alogénicas de neoplasias malignas de células b usando células t modificadas genéticamente dirigidas a cd19.
TW202321457A (zh) 2021-08-04 2023-06-01 美商薩那生物科技公司 靶向ｃｄ４之病毒載體之用途
WO2023114949A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and systems of particle production
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
WO2024064838A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT90657B (pt) 1988-05-27 1995-03-01 Ortho Pharma Corp Processo para a preparacao de peptidos que bloqueiam a ligacao de hiv-1 a proteina cd4 receptora
JPH0768273B2 (ja) 1988-12-02 1995-07-26 カルピス食品工業株式会社 抗ｈｉｖペプチド
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) * 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
WO1990013562A1 (en) 1989-05-02 1990-11-15 Genelabs Incorporated Chemically modified cd4 peptide fragments having anti-retroviral properties
US5690933A (en) * 1989-05-31 1997-11-25 Glaxo Wellcome Inc. Monoclonal antibodies for inducing tolerance
GB8912497D0 (en) 1989-05-31 1989-07-19 Cobbold Stephen P Monoclonal antibodies
US20020099179A1 (en) * 1989-12-21 2002-07-25 Linda K. Jolliffe Cdr-grafted antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
HUT60768A (en) 1990-03-16 1992-10-28 Sandoz Ag Process for producing cd25 fixing molecules
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
DE69126301T2 (de) * 1990-11-27 1998-01-02 Biogen Inc Hiv-induzierte synzytien blockierender anti-cd-4-antikörper
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6136310A (en) 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5777085A (en) * 1991-12-20 1998-07-07 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with GPIIB/IIIA
IL101769A (en) 1992-05-03 2007-02-11 Yeda Res & Dev Modulation of TNF receptor action
WO1994008619A1 (en) 1992-10-08 1994-04-28 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
PT614984E (pt) * 1993-03-05 2001-12-28 Bayer Ag Anticorpos humanos anti-tnf
EP0631783A1 (en) 1993-06-03 1995-01-04 Mitsubishi Chemical Corporation Antiviral combinations of 2',3'-di-deoxyribonucleosides with 6-benzyl-1-ethoxymethyl-5-substituted uracil derivatives
JPH09510952A (ja) 1993-10-06 1997-11-04 ザ ケネディー インスティチュート オブ リューマトロジー 自己免疫疾患および炎症性疾患の治療
US20020068057A1 (en) * 1994-03-10 2002-06-06 Marc Feldmann Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
JPH11505251A (ja) 1995-05-18 1999-05-18 オーソ・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン 非枯渇性抗ｃｄ４抗体の使用による免疫寛容の誘導
CN103275221B (zh) 1996-02-09 2016-08-17 艾伯维生物技术有限公司 结合人TNFα的人抗体
US20010056066A1 (en) * 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
WO1998014211A1 (en) 1996-10-01 1998-04-09 Celltech Therapeutics Limited Pharmaceutical products containing protein-tyrosine kinase inhibitors and anti-cd4 antibodies
US6037454A (en) 1996-11-27 2000-03-14 Genentech, Inc. Humanized anti-CD11a antibodies
DE19722888A1 (de) * 1997-05-28 1998-12-03 Thomas Prof Dr Huenig Human-CD28 spezifische monoklonale Antikörper zur antigenunspezifischen Aktivierung von T-Lymphozyten
AU3633000A (en) 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
EP1194167B1 (en) * 1999-06-09 2009-08-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
AU6941000A (en) 1999-08-27 2001-03-26 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The Polypeptides that bind hiv gp120 and related nucleic acids, antibodies, compositions, and methods of use
US7304127B2 (en) 1999-08-27 2007-12-04 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Polypeptides that bind HIV gp120 and related nucleic acids, antibodies, compositions, and methods of use
EP1289554A4 (en) * 2000-06-02 2004-05-26 Univ Minnesota IMMUNOTHERAPEUTIC PROCESS FOR PREVENTING REJECTION OF ISLAND CELLS
MXPA03002262A (es) 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
DE10050935A1 (de) * 2000-10-11 2002-05-02 Tegenero Gmbh Verwendung CD28 spezifischer monoklonaler Antikörper zur Stimulation von Blutzellen, welche kein CD28 tragen
AP2003002828A0 (en) 2001-01-16 2003-09-30 Vascular Therapies Llc Implantable device containing resorbable matrix material and anti-proliferative drugs for preventing or treating failure of hemodialysis vascular access and other vascular grafts.
WO2002072759A2 (en) * 2001-03-07 2002-09-19 Children's Medical Center Corporation Method to screen peptide display libraries using minicell display
EP1241249A1 (en) * 2001-03-12 2002-09-18 Gerold Schuler CD4+CD25+regulatory T cells from human blood
KR100861466B1 (ko) 2001-04-24 2008-10-02 메르크 파텐트 게엠베하 항혈관형성제 및 ＴＮＦα를 이용한 병용 요법
US7541443B2 (en) 2001-06-14 2009-06-02 Tolerrx, Inc. Anti-CD4 antibodies
GB2376466A (en) 2001-06-14 2002-12-18 Mark Frewin TRX1 antibody
EP2345424A1 (en) 2001-06-14 2011-07-20 Tolerx, Inc CD4-specific antibody TRX1 and uses therefor
AU2002357427A1 (en) * 2001-12-04 2003-06-17 Tegenero Ag Peptide or protein containing a c'-d loop of the cd28 receptor family
DE10212108A1 (de) * 2002-03-13 2003-10-02 Tegenero Ag Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung
DE10230223A1 (de) * 2002-07-04 2004-01-22 Tegenero Ag Mikropartikel mit CD28-spezifischen monoklonalen Antikörpern
WO2004024097A2 (en) 2002-09-16 2004-03-25 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US7388079B2 (en) 2002-11-27 2008-06-17 The Regents Of The University Of California Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor
US7501494B2 (en) * 2003-01-15 2009-03-10 United Biomedical, Inc. Designed deimmunized monoclonal antibodies for protection against HIV exposure and treatment of HIV infection
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
ZA200507805B (en) * 2003-04-09 2006-12-27 Genentech Inc Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a TNF-alpha inhibitor
GB0314461D0 (en) 2003-06-20 2003-07-23 Isis Innovation Suppression of transplant rejection
EP1658308A1 (en) 2003-08-25 2006-05-24 Pieris ProteoLab AG Muteins of a bilin-binding protein with affinity for a given target
EP1600164A3 (de) 2003-09-22 2006-05-17 TeGenero AG Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer Pharmazeutischen Zusammensetzung mit dosisabhängiger Wirkung
DE10352900A1 (de) 2003-11-11 2005-06-16 Tegenero Ag Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von B-CLL
EP2497496A3 (en) * 2005-07-11 2013-02-20 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
SG190627A1 (en) 2008-03-13 2013-06-28 Biotest Ag Agent for treating disease
JP5795167B2 (ja) 2008-03-13 2015-10-14 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
CN102027017A (zh) * 2008-03-13 2011-04-20 生物测试股份公司 一种治疗疾病的试剂
KR20110061630A (ko) 2008-09-29 2011-06-09 바이오테스트 아게 질병 치료용 조성물
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Е.RACADOT ЕТ AL: "Immunological follow-up of 17 patients with rheumatoid arthritis treated in vivo with an anti-T CD4+monoclonal antibody (B-F5)" CLINICAL AND EXPERIMENTAL RHEUMATOLOGY vol 10 no 4 July 1992 p.365-374. *

Also Published As

Publication number Publication date
HK1088337A1 (en) 2006-11-03
SG159392A1 (en) 2010-03-30
SI1654286T1 (sl) 2009-12-31
EP2070948B1 (en) 2011-08-17
US8440806B2 (en) 2013-05-14
ATE434626T1 (de) 2009-07-15
DE602004021702D1 (de) 2009-08-06
CY1109390T1 (el) 2014-07-02
NZ541523A (en) 2007-07-27
AU2004222089A1 (en) 2004-09-30
AU2004222089B2 (en) 2010-12-02
IL212949A (en) 2016-06-30
SI2070948T1 (sl) 2011-12-30
US8685651B2 (en) 2014-04-01
HK1132278A1 (en) 2010-02-19
DK1654286T3 (da) 2009-08-31
ES2327523T3 (es) 2009-10-30
US20090208497A1 (en) 2009-08-20
EP1654286A1 (en) 2006-05-10
US8586715B2 (en) 2013-11-19
JP4491454B2 (ja) 2010-06-30
CY1112044T1 (el) 2015-11-04
KR101276596B1 (ko) 2013-06-21
US20090208496A1 (en) 2009-08-20
IL212949A0 (en) 2011-07-31
IL169657A (en) 2011-06-30
EP2332991A2 (en) 2011-06-15
EP2332991A3 (en) 2012-12-19
US8673304B2 (en) 2014-03-18
RU2005132389A (ru) 2006-06-27
PL1654286T3 (pl) 2009-12-31
WO2004083247A1 (en) 2004-09-30
US20090104190A1 (en) 2009-04-23
KR20050111748A (ko) 2005-11-28
CA2519620C (en) 2015-02-03
US20060051346A1 (en) 2006-03-09
ATE520716T1 (de) 2011-09-15
US20140220008A1 (en) 2014-08-07
PT2070948E (pt) 2011-09-05
KR20130042654A (ko) 2013-04-26
PT1654286E (pt) 2009-08-28
MXPA05009953A (es) 2006-03-09
JP2007525156A (ja) 2007-09-06
EP2070948A1 (en) 2009-06-17
EP1654286B1 (en) 2009-06-24
PL2070948T3 (pl) 2012-03-30
EP1460088A1 (en) 2004-09-22
US9758581B2 (en) 2017-09-12
DK2070948T3 (da) 2011-09-12
US7452981B2 (en) 2008-11-18
US20100291676A1 (en) 2010-11-18
EP2332991B1 (en) 2017-04-19
CA2519620A1 (en) 2004-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2375375C2 (ru) Гуманизированное анти-cd4 антитело с иммунодепрессивными свойствами
US9334325B2 (en) Method for treating psoriasis
AU2009224690B2 (en) Agent for treating disease
WO2009124815A1 (en) Agent for treating disease
AU2004207839B2 (en) Compositions and methods of tolerizing a primate to an antigen
ES2369982T3 (es) Anticuerpo anti-cd4 humanizado con propiedades inmunosupresoras.
AU2008229990A1 (en) Cd4-specific antibody trx1 and uses therefor

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200320